Коррекция нарушений иммунитета и гемостаза биополимерами из морских гидробионтов (экспериментальные и клинические аспекты)

Кузнецова, Татьяна Алексеевна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Коррекция нарушений иммунитета и гемостаза биополимерами из морских гидробионтов (экспериментальные и клинические аспекты)

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Коррекция нарушений иммунитета и гемостаза биополимерами из морских гидробионтов (экспериментальные и клинические аспекты) - тема автореферата по медицине

Кузнецова, Татьяна Алексеевна Москва 2009 г.

Ученая степень: доктора медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Коррекция нарушений иммунитета и гемостаза биополимерами из морских гидробионтов (экспериментальные и клинические аспекты)

На правах рукогшсгг

Кузнецова Татьяна Алексеевна

КОРРЕКЦИЯ НАРУШЕНИЙ ИММУНИТЕТА И ГЕМОСТАЗА

БИОПОЛИМЕРАМИ ИЗ МОРСКИХ ГИДРОБИОНТОВ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ АСПЕКТ*,!)

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва ^

2009 \ ^ ^ "

003459365

Работа выполнена в ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, г, Владивосток

Рг.учные консультанты: академик РАМН,

доктор медицинских наук заслуженный деятель науки РФ

Беседнова Наталия Николаевна

доктор медицинских наук, профессор

Макаров Владимир Александрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Пинегин Борис Владимирович

доктор медицинских наук, профессор

Авдеева Жанна Ильдаровна Семенова Ирина Борисовна

доктор медицинских наук

Ведущая организация: ФГУН «Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора РФ

Защита состоится «19» февраля 2009 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 001.035.01 в ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН по адресу: 105064, г. Москва, пер. М. Казенный, д. 5 а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН Автореферат разослан «_»_ 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, кандидат биологических наук

Яковлева

Ирина Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Внимание исследователей в последние десятилетия привлекает такой аспект действия иммуномодуляторов, как влияние на систему гемостаза. Работами ряда авторов показано, что в организме функционирует единая клеточно-гуморальная система защиты, включающая факторы врожденного и приобретенного иммунитета и гемостаз. Установлены иммунные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и при патологии, которые свидетельствуют о высокой сопряженности реакций иммунитета и гемостаза, составляющих единую защитную систему организма (Кузник Б.И. с соавт., 1984-2008; Витковский Ю.А. с соавт., 1997-2007; Патеюк A.B. с соавт., 2003-2006; Seghatchian M.J., Samama М.М., 1996). Показано, что кооперация систем иммунитета и гемостаза осуществляется лимфоцитами, моноцитами и макрофагами, нейтрофилами, клетками эндотелия, тромбоцитами, системой комплемента, эйкозаноидами, цитокинами и другими медиаторами иммунного и воспалительного ответа (Кузник Б.И. с соавт., 1989-2008; Витковский Ю.А. с соавт., 1997-2007; Мап-tovani А. et al., 1997; Levi М. et al., 1999-2003). С учетом того, что цитокины осуществляют связь между всеми системами организма (иммунной, нервной, эндокринной, кроветворной и др.) и служат для их вовлечения в регуляцию единой защитной реакции организма, доказана регуляторная роль цитокинов (TNFa, IL-1, IL-6, IL-8, CSF и др.) в отношении системы гемостаза. Так, установлено, что провоспалительные цитокины опосредуют дефекты в процессах коагуляции и фибринолиза вследствие усиления экспрессии на эндотелиальных клетках, моноцитах, макрофагах тканевого фактора (TF), которому принадлежит центральная роль в процессах свертывания крови (Витковский Ю.А. с соавт., 1997, 2001; Giesen Р. L. et al., 1996; Mantovani А., et al., 1997; Levi M. et al., 2003). В регуляции системы гемостаза показана немаловажная роль противовоспалительных цитокинов (IL-4 и IL-10), которые, напротив, способствуют торможению экспрессии TF и вызывают гипокоагуляцшо (Витковский Ю.А. с соавт., 1999,2001).

Закономерным следствием таких взаимосвязей является тот факт, что нарушения в системе иммунитета при различных заболеваниях (как соматических, так и инфекционных) сопровождаются патологическими сдвигами в системе гемостаза, а нормализация показателей иммунитета при лечении таких больных с применением иммунокорректоров сопровождается восстановлением показателей свертывающей системы крови. Так, получены убедительные доказательства участия иммунной системы в развитии ДВС-синдрома и других нарушений гемостаза (Кузник Б.И. с соавт., 1989-2008; Levi M. et al., 2003; Jaimes F., de la Rosa G., 2006). Установлено, что изменения показателей систем иммунитета и гемостаза носят содружественный фазовый характер при острых и хронических воспалительных процессах бактериальной этиологии, бронхиальной астме (Емельянова А.Н., 2000; Туев A.B., Мишланов В.Ю., 2001; Романова С.Б, 2002), септических состояниях и эндотоксиновом шоке (Витковский Ю.А., 1997; Абдулаев P.A. с соавт., 2001; Кузник В.И. с соавт., 2002; Цепелев B.JI., 2003; Levi M. et al., 2003), сахарном диабете (Ключерева H.H., 2005; Кузник Б.И. с соавт., 2007), онкологических заболеваниях (Белокриницкая Т.Е., 2003), инфекционных заболеваниях (Мурзабаева Р.Т., Малиновская В.В., 2004; Латышева И.Б., 2006; Коннова Ю.А., 2007).

Таким образом, тесные взаимосвязи между системами иммунитета и гемостаза присущи всем физиологическим и патологическим процессам, а наличие взаимосвязей этих систем предопределяет возможность использования им-муномодуяяторов для коррекции нарушений гемостаза. В связи с этим актуальным является поиск биологически активных веществ (БАВ), воздействующих одновременно как на систему иммунитета, так и на систему гемостаза, что, по-существу, является новым подходом к лечению заболеваний, протекающих с подобными нарушениями.

В этом аспекте привлекают внимание биополимеры (БАВ) из морских гидробионтов, полученные в ТИБОХ ДВО РАН и ФГУП TTfflPO-центре, в частности, фуковданы (сульфатированные полисахариды), выделенные из бурых водорослей Охотского моря Fucus evanescens, Laminaria cicharioides, Laminaria

japónica, u тинростим (комплекс пептидов), полученный из оптическпх ганглиев кальмаров промысловых видов. Наш выбор обусловлен тем, что при наличии сырьевой базы и экологически чистых и экономичных технологий производства, эти биополимеры выделены методами, приоритетность которых защищена патентами РФ, имеют уникальную структуру, обладают широким спектром биологической активности, т.е. имеют потенциальные возможности лекарственных препаратов. Кроме того, тинростим входит в состав биологически-активной добавки к пище (БАД «Тинростим-СТ») и широко используется в клинической практике. Однако не решенными оставались вопросы, касающиеся эффектов фукоиданов на гуморальные и клеточные факторы иммунитета при пероральном введении, что является важным для конструирования БАД к пище и таблетированной лекарственной формы, а также проблема исследования им-муномодулирующей активности фукоиданов из разных видов бурых водорослей и различных модификаций фукоиданов для отбора образца с оптимальными показателями. Не изученными до настоящего времени оставались механизмы антикоагулянтного действия этих биополимеров и их влияние на систему фиб-ринолиза, в том числе при введении per os. Также не апробировалось ранее применение этих биополимеров при различных проявлениях «эндотоксиновой агрессии» в экспериментальных и клинических условиях для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза, в частности, при хронической обструктивной болезни легких и моделировании зндотоксинемии.

Цель работы:

Изучение механизмов иммуномодулирующего и антикоагулянтного действия биополимеров из морских гидробионтов (фукоиданов из бурых водорослей Охотского моря F. evanescens, L. cichorioides, L. japónica и тинростима -комплекса пептидов из оптических ганглиев кальмаров промысловых видов), экспериментальное обоснование возможности разработки лекарственных препаратов и биологически активных добавок к пище на их основе для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительное исследование иммуномодулирующей активности фукоиданов из разных видов бурых водорослей Дальнего Востока для отбора образца с оптимальными показателями.

2. Установить механизмы антикоагулянтного действия фукоидана из F. evanescens.

3. На модели эндотоксинемии оценить возможность применения фукоидана из F. evanescens для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза в эксперименте.

4. Изучить механизмы антикоагулянтного действия тинростима.

5. Исследовать возможность применения тинростима в качестве средства сопровождения базисной терапии больных хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ) для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза.

6. Разработать новые БАД к пище на основе фукоиданов из бурых водорослей Охотского моря F. evanescens и L. japónica.

Научная новизна и теоретическая значимость работы

Теоретическая значимость работы заключается в выявлении механизмов действия фукоидана и тинростима на систему гемостаза. Установлено, что фу-коидан оказывает как прямое, так и опосредованное (с участием гуморальных и клеточных факторов иммунитета) действие на систему гемостаза и фибриноли-за. Фукоидан действует на факторы внутреннего и внешнего путей свертывания, а также на конечный этап свертывания и демонстрирует ингибиторную активность в отношении тромбина (фактора Па) и фактора Ха. Антикоагулянтная активность фукоидана связана с плазменным антитромбином III, который превращается из медленно действующего в быстродействующий ингибитор тромбина. Влияние фукоидана на систему фибринолиза осуществляется путем активации эндогенной фибринолитической системы крови и связано с повышением потенциальной активности плазминовой системы. Тинростим оказывает опосредованное влияние на систему гемостаза и фибринолиза, проявляя регуля-торный эффект на факторы гуморального и клеточного иммунитета. Одним из

механизмов этого является восстановление баланса цитокинов, а именно снл-женне продукции цитокинов (TNFa, IL-la, IL-6), обладающих прокоагулянтыой активностью, приводящее к коррекции нарушений гемостаза, купированию явлений ДВС-синдрома.

Впервые показано, что иммуномодулируюхцие эффекты фукоидана при пероралъном применении аналогичны таковым при парентеральном.

Получены новые данные о зависимости биологической активности фу-коиданов от их структурных особенностей, расширяющие теоретические представления о закономерностях взаимосвязей структура-функция.

Впервые показано, что фукоидан, выделенный из бурой водоросли Охотского моря F. evanescens, обладает схожей с гепарином антикоагулянтной активностью при действии как in vitro, так и in vivo.

Впервые показано, что фукоидан способствует повышению выживаемости и продолжительности жизни, коррекции показателей иммунитета и гемостаза, а также снижению степени микроциркуляторных нарушений и вторичных дистрофически-деструктивных изменений в паренхиматозных органах животных при экспериментальной эндотоксинемии.

Впервые показано, что тинростим при включении в комплексную терапию больных хронической обструктивной болезнью легких нормализует показатели систем иммунитета и гемостаза.

Практическая значимость работы

Разработаны и утверждены ТУ и ТИ на новые БАД к пище на основе фу-коиданов из F. evanescens и L. japónica', БАД «Фуколам®» разрешен МЗ РФ к производству, реализации и применению на территории Российской Федерации и выпускается компанией ООО «Биополимеры».

Экспериментально обоснована возможность разработки новых лекарственных препаратов на основе фукоидана из F. evanescens для коррекции нарушений в системах иммунитета и гемостаза.

На организменном уровне (in vivo) показано защитное действие фукоидана при ЛПС-индуцированной эндотоксинемии, что открывает перспективы его использования в клинической практике.

Показана целесообразность применения тинростима в составе БАД «Тин-ростим-СТ» для коррекции нарушений иммунной системы и системы гемостаза у больных ХОБЛ и рекомендовано его включение в качестве средства сопровождения базисной терапии этой категории пациентов.

Материалы диссертации были использованы при подготовке:

• Методических рекомендаций «Применение биологически активной добавки к пище «Тинростим-СГ» в комплексном лечении больных ХОБЛ (хронической обструктивной болезнью легких) для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза» Авторы: Кузнецова Т.А., Киняйкин М.Ф., Петраковская В.А., Суханова Г.И., Эпштейн Л.М. Утверждены Департаментом здравоохранения Администрации Приморского края. Владивосток. - 2007

• Патента РФ «Средство, обладающее антикоагулянтным и иммунотропным действием» (№2247574 от 20.03.05. Авторы: Шевченко Н.М., Звягинцева Т.Н., Исаков В.В., Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С., Беседнова H.H., Момот А.П., Мамаев А.Н. Заявитель и патентообладатель: Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН. Per. № заявки 2002135524/15. Заявл. 20.07.04. Опубл. 20.03.05. Бюлл. № 7)

• Патента РФ «Способ получения фукоидана то ламинарии» (№2302429 от 07.10.2007. Авторы: Врищ Э.А., Ковалев H.H., Эпштейн Л.М., Якущ Е.В., Бе-седнова H.H., Артюков A.A., Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С. Заявитель и патентообладатель: Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйствен-ный центр. Федеральное унитарное предприятие. Per. № заявки 2005132687/13. Заявл. 2005.10.24 Опубл. 2007.07.10. Бюлл. № 19)

тентообладатель: ГУ институт клинической и экспериментальной лимфоло-гии СО РАМН. Per. № заявки 2006107349/15. Заявл. 09.03.2006. Опубл. 27.07.2008. Бюлл. № 21)

• Патента РФ "Биологически активный продукт из бурой водоросли, биологически активная добавка к пище, безалкогольный напиток, парфюмерно-косметическое средство" (№2315487 от 27.01.2008. Авторы: Шевченко Н.М., Имбс Т.Н., Звягинцева Т.Н., Кусайкин М.И., Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С., Беседнова H.H., Гафуров Ю.М., Рассказов В.А., Таран В.Н. Заявитель и патентообладатель: Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН. Per. № заявки 2006115454/13 Заявлено 04.05.2006. Опубл. 27.01.2008. Бюлл. №3)

• Научно-технической документации (ТИ и ТУ 9284-065-02698170-2005, инструкция по применению) на БАД «Фуколам» на основе фукоидана из бурой водоросли F. evanescens Охотского моря. Центром гигиенической сертификации пищевой продукции при Институте питания РАМН проведены соответствующие исследования и экспертиза представленных документов (заключение ГУ НИИ питания РАМН № 72/Э-6736/6-05 от 20.10.05), санитарно-эпидемиологическое заключение №77.99.13.003.Т.000155.01.06 от 30.01.06; получено свидетельство Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека о государственной регистрации (№ 77.99.23.3.У.739.1.06 от 30.01.06)

• Научно-технической документации (ТУ 9283-298-00472012-06) на БАД к пище «Нуклеидан» на основе фукоидана из бурой водоросли L. japónica и нук-леатина. Центром гигиенической сертификации пищевой продукции при Институте питания РАМН проведены соответствующие исследования и экспертиза представленных документов (санитарно-эпидемиологическое заключение №77.99.13.003.Т.001626.08.06 от 22.08.2006 г.; свидетельство Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека о государственной регистрации № 77.99.23.3.У.8933.8.06 от 23.08.2006 г.)

Апробация материалов диссертации

Основные положения диссертации были представлены на Российской научной конференции «Новые биомедицинские технологии с использованием биологически активных добавок» (Владивосток, 1998); Межрегиональной научно-практической конференции с Международным участием «Вакцинопрофи-лактика: проблемы настоящего и будущего» (Владивосток, 2000); Русско-японском международном медицинском симпозиуме (Благовещенск, 2000); Тихоокеанской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2001); 1-ом Международном конгрессе «Биотехнология - состояние и перспективы развития» (Москва, 2002); Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование» (Анталия, 2003); Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование» (Таиланд, 2004); I Всероссийской конференции по иммунотерапии с международным участием «Физиология иммунной системы» (Сочи, 2003); Региональной научной конференции «Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии» (Владивосток, 2004); II и III Международных научно-практических конференциях «Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки» (Архангельск, 2005 и Владивосток, 2008); II Дальневосточном конгрессе «Человек и лекарство» (Владивосток, 2005); 4-ой Конференции по экспериментальной и трансплантационной онкологии (Красная Гора, Словения, 2006); Международной конференции «Ге-мореология в микро- и макроциркуляции» (Ярославль, 2005); I Сибирском съезде лимфологов с международным участием «Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии» (Новосибирск, 2006); II Региональной научной конференции «Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии» (Владивосток, 2006); Объединенном иммунологическом Форуме (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации. Основные положения и результаты работы отражены в 40 научных работах, в том числе: 1 статья - в международной печати, 12 - в жур-

налах, рекомендованных ВАК для публикации материалов докторских диссертаций, 20 - статей и тезисов, опубликованных в материалах Всесоюзных, Всероссийских и международных конференций и симпозиумов, а также в 4 патентах на изобретение и 1 методических рекомендациях.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 316 страницах машинописи и состоит из введения, главы «Материалы и методы», 5 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, рекомендаций для внедрения результатов исследования в медицинскую науку и практическое здравоохранение, библиографического списка использованной литературы, включающего 569 источников, из них 322 отечественных, 247 зарубежных. Работа иллюстрирована 41 таблицей и 28 рисунками.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Исследуемые биополимеры - сульфатированные полисахариды фукои-даны и пептидный комплекс тинростим — эффективно регулируют состояние систем иммунитета и гемостаза и могут служить основой для разработки БАД к пище и лекарственных препаратов.

2. Иммуномодулирующие эффекты фукоидана из бурой водоросли F. evanescens при введении per os сравнимы с таковыми при его парентеральном введении. Фукоидан стимулирует реакции гуморального и клеточного иммунитета, функциональную активность нейтрофилов in vivo и in vitro, проявляет свойства модулятора продукции цитокинов in vitro.

3. Фукоидан из F. evanescens оказывает как прямое, так и опосредованное влияние на систему коагуляционного гемостаза и фибринолиза, демонстрирует ингибиторную активность в отношении фактора Иа и фактора Ха. Антикоагу-лянтная активность фукоидана связана с плазменным антитромбином III.

паренхиматозных органах животных, предотвращает развитие ДВС-синдрома или ослабляет его течение, что обусловлено его регулирующим влиянием на системы иммунитета и гемостаза.

5. Тинростим не оказывает прямого влияния на факторы свертывания крови и систему фибринолиза (in vitro), но проявляет антикоагулянтное действие и активирующее влияние на систему фибринолиза при многократном парентеральном введении в организм, что способствует купированию явлений гиперкоагуляции при эндотоксинемии, индуцированной введением летальной дозы ЛПС.

6. Выявлены корреляционные связи между изменениями показателей иммунитета и гемостаза у больных ХОБЛ, что свидетельствует о сопряженности нарушений в этих системах.

7. Применение тинростима в составе БАД к пище «Тинростим-СТ» на фоне базисной терапии больных ХОБЛ приводит к коррекции показателей клеточного и гуморального иммунитета (повышению содержания CD3+-, CD4+-лимфоцитов, усилению фагоцитарной активности нейтрофилов крови, снижению содержания ЦИК, повышению уровня компонентов комплемента, снижению концентрации провоспалительпых цитокинов в сыворотке крови) и к положительной динамике ряда показателей системы гемостаза (снижению интенсивности гиперкоагуляции и увеличению фибринолитической активности крови).

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы и методы исследования

Экспериментальные исследования проведены на базе лаборатории иммунологии ГУ НИИЭМ СО РАМН. Отдельные разделы работы выполнены в комплексе с лабораторией патологии и фармакологии гемостаза Гематологического Научного Центра РАМН (г. Москва), кафедрой пропедевтики внутренних болезней ГОУ Алтайского Государственного Медицинского Университета (г. Барнаул), кафедрой госпитальной терапии ГОУ ВПО Владивостокского Государственного Медицинского Университета, лабораторией патоморфологии и

электронной микроскопии ГУ НИИЭМ СО РАМН, лабораторией биологически активных добавок и фармпрепаратов Тихоокеанского рыбохозяйственного научного центра (ФГУП ТИНРО-центр). Все экспериментальные и клинические исследования проведены с разрешения Комитета по биомедицинской этике ГУ НИИЭМ СО РАМН (протокол №5/1 от 05.10.2004).

Исследуемые биополимеры морских гидробионтов

Выделение, изучение химического состава и структуры биополимеров из морских гидробионтов проведены в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН (фукоиданы) и Тихоокеанском рыбохозяйственном научном центре (тинростим) с применением современных методов исследования.

1. Фукоидан из бурой водоросли Охотского моря F. evanescerts представляет собой 1-»3;1-»4-а-Ь-фукан, молекулярная масса (м.м.) 20-40 кДа, моноса-харидный состав представлен фукозой, галактозой, ксилозой, глюкозой в соотношении 71:9:10:8, соотношение фукозы и сульфатного остатка - 1: 0,9 (Звягинцева Т.Н. с соавт., 1999; Шевченко Н.М., 2001).

2. Фукоидан из бурой водоросли L. cichorioides представляет собой полностью сульфатированный по С-2 и по С-4 (1-»3)-а-Ь-фукан (Fuc-100%), имеет интервал молекулярных масс 40-80 кДа, соотношение SO42": Fue составляет 1,8:1,0 (Звягинцева Т.Н. с соавт., 1999).

3. Фукоидан из бурой водоросли L. japónica является l->3-oc-L-фуканом, сульфатированным в основном по 4 положению остатков фукозы (м.м. 30-40 кДа), отличается высоким содержанием галактозы. Моносахарид-ный состав фукоидана представлен кроме фукозы, галактозой, маннозой, ксилозой и глюкозой (Fue: Gal: Man: Xyl: Glc в соотношении - 70 : 15 : 8 : 4 : 3) (Звягинцева Т.Н. с соавт., 1999).

Метод выделения фукоиданов - экстракция полисахаридов 0,1N соляной кислотой при комнатной температуре и водой при 50-60°С, разделение ламина-ранов и фукоиданов и последующее их фракционирование с помощью гидрофобной хроматографии (Патент РФ №2135518; Патент РФ № 2240816).

4. Фукоидан из F. evanescens освобождали от недиализуемых полифенолов (ОСВ) по методу (Урванцева A.M. с соавт., 2004).

5. Дееульфатирование фукоидана из F. evanescens (ДС) проводили по методу (Chizhov А.О. et al., 1999).

6. Тинростим - комплекс пептидов, выделенных из оптических ганглиев кальмаров промысловых видов (Berritiuthis magister, Todarodes pacificus, Om-mastrephis bartrami). Препарат состоит на 84% из низкомолекулярных пептидов с м.м. от 1 до 12,5 кДа и на 16% - из свободных аминокислот, представленных, в основном, аспарагиновой и глутаминовой кислотами и лизином, около 10 % составляет таурин. Метод выделения - экстракция водорастворимых пептидов в слабокислых растворах с последующим извлечением их с использованием ступенчатой ультрафильтрации, позволяющей разделять и концентрировать пептидные компоненты в зависимости от их молекулярной массы (Патент РФ №2222337). На основе тинростима получена биологически активная добавка к пище «Тинростим-СТ» (Патент РФ №2105504). БАД «Тинростим-СТ» разрешен МЗ РФ к производству, реализации и применению на территории Российской Федерации (регистрационное удостоверение №77.99.04.928.Б.000663.08.03 от 29.08.2003).

7. Липополисахарид (ЛПС) - выделен из штамма 598 IB сероварианта Yersinia pseudotuberculosis по методу (Westphal О., Jann К., 1965) в ТИБОХ ДВО РАН. Структурные характеристики ЛПС (в %): моносахариды-41,38; бе-лок-3,1; нуклеиновые кислоты-1,69; гептоза-3,26; КДО (2-кето-З-дезоксиоктоновая кислота)-3,56; ДДГ (3,6-дидезоксисахара)-1,6; гексозамины-11,65.

Лабораторные животные

Экспериментальные исследования выполнены на 6 собаках, 490 мышах -гибридах (CBAxC57BL/6) Fj массой 18-20 г, 485 мышах линии BALB/c массой 20-25 г, 660 неинбредных мышах массой 18-20 г, 75 крысах-самцах Wistar массой 350-400 г, полученных из питомника РАМН "Столбовая", находившихся на стандартной диете в боксярованных помещениях с соблюдением всех пра-

вил и международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных работах (European Convention for the Protection of Vertebrate Animais used for Expérimental and Other Scientific Puiposes. Strasbourg, 1986). Разброс животных в группе по массе тела не превышал ± 10%. Животные контрольных и опытных групп одного пола, возраста, получены из питомника одновременно. Выведение животных из опыта осуществляли с использованием эфирного наркоза.

Микроорганизмы

В работе был использован непатогенный штамм Staphylococcus aureus №598 (музей культур микроорганизмов ГУ ГИСК им. J1.A. Тарасевича), который выращивали на мясо-пептонном агаре при температуре 37° С в течение 24 час, смывали 0,85% раствором NaCl и готовили взвесь микроорганизмов по оптическому стандарту мутности (ГУ ГИСК им. Л. А. Тарасевича).

Клинический материал

Клинические и лабораторные данные исследованы у 108 больных с диагнозом ХОБЛ со средне-тяжелым и тяжелым течением (2-3 стадия) заболевания в стадии обострения, находившихся на лечении в отделения пульмонологии Краевой клинической больницы. Средний возраст больных составил 67,3±2,4 года. Всех включенных в обследование больных рандомизировали методом случайной выборки на однородные, сопоставимые по возрасту и клинической картине группы. Формирование групп испытуемых проводили с учетом принципов доказательной медицины. Постановку диагноза и оценку степени тяжести осуществляли на основании изучения анамнеза, общеклинических, функциональных и лабораторных методов обследования. Показаниями для включения больных в исследование являлось наличие ХОБЛ в стадии обострения. Для иммунологических исследований использовали лимфоциты периферической крови больных, забор крови проводили в равных условиях (утром, натощак). Для гемостазиологических исследований использовали цитратную плазму больных, из которой получали бедную тромбоцитами плазму.

Основную группу составили больные, которые помимо базисного курса лечения принимали тинростим два раза в сутки в течение 15 дней. Группа сравнения представлена пациентами, которые получали аналогичный курс терапии без тинростима (базисная терапия в соответствии с регламентом GOLD, 2003). Обследование больных проводили до лечения и по окончании курса лечения. У каждого больного получали добровольное информированное согласие на выполнение запланированного обследования. Также обследовали группу практически здоровых лиц (25 доноров Краевой станции переливания крови), не имеющих хронической бронхолегочной патологии и аллергических заболеваний (среднее значение нормы). В комплекс лабораторного обследования больных помимо общеклинических методов и показателей клинической эффективности тинростима включали оценку параметров иммунной системы 1 и 2 уровней. У больных также исследовали показатели коагулограммы, свидетельствующие о состоянии плазменного звена гемостаза, определяли маркеры тром-бинемии, содержание естественных антикоагулянтов, фибрин о лита ческу ю активность крови и уровень фибриногена.

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью пакета программ Microsoft «Excel» 11, «Геостат» (Смолин В.А., 2007), «Био-стат» (версия 4.03). Использовали следующие методы статистического анализа: проверка нормальности распределения количественных признаков при малом числе наблюдений с использованием W-критерия Шапиро-Уилка, основанная на регрессии порядковых статистик, проверка равенства генеральных дисперсий с применением F-критерия Фишера. Оценка значимости различий при нормальном распределении проводилась с использованием t-критерия Стьюдента (для независимых выборок и для попарно-связанных вариационных рядов). При ненормальном распределении количественных признаков - использовали непараметрический W-критерий Вилкоксона (для сравнения показателей до и после лечения), непараметрический Q-критерий Данна (для сравнения показателей с контрольной группой). При неправильном распределении исследуемой выборки или малом числе наблюдений использовали непараметрические критерии:

медиану, процентиль (%). Наличие взаимосвязей показателей оценивали с использованием коэффициента корреляции Пирсона (при нормальном распределении) или в случае ненормального распределения - непараметрического коэффициента ранговой корреляции Спирмена (г). Оценку зависимости «доза-эффект» производили методом регрессионного анализа. Показатели уравнении регрессии оценивали методом аппроксимации, значимость коэффициентов уравнения регрессии оценивали по t-критерию Стьюдента.

Выборочные параметры, приводимые в таблицах, имеют следующие обозначения: средняя арифметическая (М), средняя ошибка средней арифметической (т), медиана (Me), процентиль (%), объем анализируемой подгруппы (п), коэффициент корреляции (г), достигнутый уровень значимости (р), отношение межгрупповой и внутригругаювой дисперсии (F). Критическое значение уровня значимости принималось равным 5% (р<0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Иммуномодулпрующая активность фукопданов, выделенных из разных видов бурых водорослей

Сравнительное исследование иммуномодулирующей активности фукои-данов проводили по их влиянию на факторы врожденного и приобретенного иммунитета в тестах, являющихся базовыми при оценке иммуномодулирующе-го действия БАВ (Хаитов P.M. с соавт., 1997). Влияние фукоиданов из F. eva-nescens (I), L. cichorioides (П) и L. japónica (Ш) на гуморальный иммунный ответ в отношении тимусзависимого корпускулярного антигена - ЭБ при условии их парентерального введения в индуктивную фазу антителообразования в оптимальной дозе 5 мг/кг, установленной в серии предварительных экспериментов, исследовали путем определения количества АОК в суспензии клеток селезенки и титров антител (ГА и ГЛ) в сыворотках крови мышей линии (CBAxC57BL/6)Fj. В результате было установлено, что все исследуемые фу-коиданы оказывают умеренное стимулирующее влияние на процесс антитело-образования к ЭБ, что выражалось в статистически значимом по сравнению с

контролем (0,85% NaCI) увеличении числа АОК в селезенке и титров сывороточных антител (ГА и ГЛ).

Влияние фукоиданов на клеточный иммунный ответ оценивали по интенсивности реакции ГЗТ к ЭБ при условии парентерального введения фукоиданов в тех же дозах за сутки до иммунизации ЭБ (на стадии сенсибилизации животных). Были выявлены значимые по сравнению с контролем различия показателей реакции ГЗТ под влиянием фукоиданов (I, II и III). Под действием фукои-дана I процент прироста массы лапки составил 32,4+1,6, р=0,001, ИС=1,56; фу-коидана II - 31,8 ± 3,1, р=0,013, ИС=1,54 и фукоидана III - 36,6±2,5, р=0,000, ИС=1,77 по сравнению с 20,7±2,2 в контрольной группе. Статистически значимых различий в эффектах 3-х исследуемых фукоиданов на реакцию ГЗТ не выявлено.

При введении мышам исследуемых фукоиданов in vivo установлено их стимулирующее действие на фагоцитарные процессы, о чем свидетельствует увеличение количества нейтрофильных лейкоцитов (Нф), участвующих в фагоцитозе, и их способность к поглощению культуры S. aureus. Так, под влиянием фукоиданов (I, П, III) индексы стимуляции показателей фагоцитоза находились в границах от 1,29 до 1,37 в отношении фагоцитарного показателя (ФП) и от 1,35 до 1,47 в отношении фагоцитарного числа (ФЧ) (различия с контролем статистически значимы). При этих же условиях введения фукоиданы значимо усиливали способность Нф к спонтанной продукции свободных радикалов, их стимулирующее влияние демонстрируют И С показателей спонтанного HCT - теста, составляющие от 1,5 до 1,67.

При сравнительном исследовании эффекта фукоиданов (I, П, III) in vitro на бактерицидную активность Нф по данным HCT-теста также установлено их стимулирующее влияние, свидетельствующее о прямом мембранотропном действии. Статистически значимые различия по отношению к контролю выявлены под влиянием фукоиданов I, II и Ш в конечной концентрации 50 и 100 мкг/мл. Наибольшую активность в этом тесте проявил фукоидан III из L. japónica, при

действии которого в концентрации 100 мкг/мл выявлен максимальный индекс стимуляции показателей НСТ-теста, равный 2,9 (р=0,000).

Представленные результаты свидетельствуют, что фукоиданы из трех видов водорослей оказывают стимулирующее влияние на факторы врожденного и приобретенного иммунитета. Несмотря на различия в структурных характеристиках (в м.м., степени сульфатирования, моносахаридном составе), количественные различия в основных проявлениях иммуномодулирующей активности разными фукоиданами (за исключением отдельных показателей, касающихся активности фукоидана из L. japónica, которые были выше, чем у двух остальных) не являются статистически значимыми. Это открывает перспективы использования исследованных фукоиданов в медицинской практике в качестве иммуномодулирующих средств. По нашему мнению, приоритет для практического использования имеет фукоидан, выделенный из водоросли F. evanescens, что обусловлено ее обширным ареалом на Дальнем Востоке России, высоким содержанием (выходом) фукозосодержащих полисахаридов (15-20%) и рядом структурных преимуществ.

Учитывая сведения литературы о том, что биологическая активность фукоиданов возрастает с увеличением содержания сульфатов (Boisson-Vidal С. et al., 2000), а также тот факт, что природные фукоиданы содержат примесь «не-диализуемых» полифенолов, которые также являются биологически активными соединениями (Nakamura T. et al., 1996; Nagayama К. et al., 2002), изучено влияние степени сульфатирования фукоидана из F. evanescens и присутствия в нем полифенолов на иммуномодулирующие свойства, в частности, по их действию на показатели функциональной активности Нф in vitro, как модельного теста. Следует отметить, что фукоидан из F. evanescens содержит наибольшее количество полифенолов (до 10%) по сравнению с двумя остальными фукоиданами. С этой целью исследован препарат частично десульфатированного (ДС) и полиостью освобожденного от полифенолов (ОСВ) фукоидана из F. evanescens.

При исследовании in vitro показателей адгезивной активности Нф выявлено, что наибольший эффект оказывали модифицированные образцы в конеч-

ной концентрации 100 мкг/мл. Стимулирующая активность фукоидана ОСВ в этой концентрации по показателям адгезии Нф к пластику была статистически значимо выше (128б,7± 155,0 ODxlO3) по сравнению с таковой фукоидана ИСХ (860.7±28,4 ODxlO'3), ИС=1,5, р=0,022 (рис. 1).

1300 1400 1200 1000 30 О 600 400 200 0

1 мкг/мл 10 мкг/мл 100 мкг/мл

lo исх а осв ■ дс|

Рис. 1. Влияние модифицированных образцов фукоидана из F. evanescens на адгезивную активность Нф in vitro. Примечание: показатели активности М+т; р-значимость различий показателей активности групп ОСВ и ДС по сравнению с ИСХ; использован параметрический t-критерий С'тьюдента для независимых выборок; п=6; (*р<0,05) -различия статистически значимы по отношению к показателям группы ИСХ. По оси абсцисс: концентрация фукоидана; по оси ординат: показатели адгезии (ODxlO"3).

При сравнении активности образцов ИСХ и ДС, наоборот, выявлены более низкие значения в обоих тестах в отношении последнего. Наиболее показательными являются значения адгезивной активности Нф под влиянием фукоидана ДС в диапазоне исследованных концентраций (1-100 мкг/мл), которые статистически значимо отличаются от таковых у фукоидана ИСХ (рис. 1). В отношении показателей бактерицидной активности Нф под влиянием модифицированных образцов сохранялась тенденция, отмеченная выше; более высокие значения под влиянием фукоидана ОСВ и более низкие под влиянием фукоидана ДС по сравнению с образцом ИСХ.

Полученные результаты демонстрируют, что десульфатирование фукои-данов приводит к снижению показателей функциональной (адгезивной) активности Нф in vitro, а освобождение фукоидана от полифенолов - к повышению исследованных показателей, что может свидетельствовать об экранирующем

эффекте полифенолов для проявления мембранотропной активности фукоида-на. Последнее имеет особое значение, поскольку освобождение фукоидана от полифенолов, приводящее к осветлению препарата, которое производится с коммерческой целью (поскольку у светлого порошка лучший товарный вид и лучшая растворимость) и с научной целью (только светлый порошок фукоидана может быть использован в качестве субстрата для ферментов фукоиданаз, применяемых для исследования структуры фукоиданов), не снижает, а несколько усиливает его биологическую активность.

Исследована токсичность и иммуномодулирующая активность фукоидана из F. evanescens при пероральном способе введения в сравнении с парентеральным, что важно для конструирования таблетированной лекарственной формы или БАД. При оценке острой токсичности установлено, что фукоидан не токсичен в исследуемом диапазоне доз от 5 до 250 мг/кг при парентеральном введении и при условии применения per os. При исследовании эффекта продолжительного (в течение 4-х недель) введения фукоидана мышам в оптимальных дозах: 5 мг/кг внутрибрюшинно (в/б) или 50 мг/кг перорально все животные оставались живыми, существенных изменений в поведении и двигательной активности не отмечалось. При оценке иммуномодулирующего действия фукоидана установлено, что как парентеральное (в дозе 5 мг/кг), так и перораль-ное (в дозе 50 мг/кг в течение 10 дней) введение фукоидана в индуктивную фазу антителогенеза приводило к статистически значимому увеличению абсолютного количество АОК в селезенке, а также титров сывороточных ГА и ГЛ. При этих же способах введения фукоидана на стадии сенсибилизации мышей ЭБ выявлено статистически значимое усиление интенсивности реакции ГЗТ (табл. 2).

Исследование функциональной активности Нф /и vivo выявило сопоставимые по И С, не различающиеся статистически в зависимости от способа введения фукоидана результаты, отражающие показатели микробицидной активности (в спонтанном НСТ-тесте) и адгезивной активности Нф (табл. 3).

Таблица 2

Влияние фукоидана из Р. еустевсет на гуморальные и клеточные факторы им-

мунитета мышей (СВАхС57ВЬ/6)р1 в зависимости от способа введения

Способ введения фукоидана АОК к ЭБ Антитела к ЭБ гзт

ГА ГЛ

АОК на селезенку ИС Iog2 ИС log2 ИС % прироста веса лапки ИС

Парентерально 40468±3850 68484+6740* /7=0,004 п=6 1,69 7,32±0.28 8,8±0,29* р = 0,004 л=6 1,20 5,22±0,30 6,88±0,35* р = 0,005 и=6 1,32 20.7 ± 2,2 32,4 ±1,6* р=0,001 и=7 1,57

Peros 33840+2878 60754±4591* /т=0,000 п=8 1,80 6,50+0.31 8,27±0,26* р=0,000 «=8 1,27 5.50±0,32 7,15+0,24 р=0,000 и=8 1,3 20.7+ 2,2 28,4±1,1 р=0,009 и=7 1,37

Примечание: здесь и в табл. 3 - в числителе - показатели в контрольных группах, в знаменателе - показатели в опытных группах (М+т); ИС - индекс стимуляции - рассчитан как отношение показателей в опытной группе по сравнению с контрольной; р - значимость различий показателей по сравнению с контрольными значениями, использован параметрический /критерий Стыодента для независимых выборок; *р<0,05 - различия статистически значимы.

Таблица 3

Влияние фукоидана из Р. ехапевсет на функциональную активность нейтро-

филов мышей ш vivo в зависимости от способа введения

Показатель Группа животных

Контроль Фукоидан peros И С Фукоидан парентерально ИС

ФП (%) 61,5±2,5 и=6 80,3+3,4* р=0,001 п-6 1,30 79,3+3,8* /7=0,003 п=6 1,23

ФЧ (усл.ед.) 3,7+0,14 и=6 4,2±0,23* /7=0,05 п=6 1,13 4,4±0,2* />=0,015 «=6 1,19

НСТ-тест (СЮхЮ"5) 84,2±3,8 п=6 125,4±4,8* /7=0,000 и=6 1,49 115,7+2,7* р=0,000 и=6 1,37

Адгезия на пластик (количество клеток) 1200000+74000 я=9 2460000+96000* /7=0,005 п=6 2,05 1938400±5600* /7=0,02 72=9 1,62

В связи с важнейшей ролью цитокинов как медиаторов реакций врожденного и приобретенного иммунитета, исследовано влияние фукоидана из F. evanescens на продукцию цитокинов в культуре интактных и стимулированных митогеном (ФГА) клеток крови (в системе in vitro). С учетом того факта, что продукция цитокинов у разных доноров значительно различается по интенсивности (Ким К.Ф. с соавт., 2002), нами были выделены группы доноров с исходно низким (или средним) и исходно высоким уровнем продукции цитокинов. При исследовании продукции цитокинов, вырабатываемых преимущественно мононуклеарными фагоцитами (TNFa, IL-la, IL-8), установлено, что у доноров с исходно низким уровнем их продукции под влиянием фукоидана наблюдается интенсивная стимуляция выработки TNFa, IL-la и IL-8 (р<0,05) (рис. 2А). Аналогичные результаты были получены при исследовании стимулированной ФГА продукции TNFa, IL-la, IL-8 у доноров с исходно сниженными или нормальными показателями уровня цитокинов (рис. 2В). В отношении цитокинов, вырабатываемых преимущественно Thl (IL-2 и IFNy) и Th2 (IL-4), также наблюдалось статистически значимое стимулирующее влияние фукоидана на их продукцию у доноров с исходно низкими показателями. Так, фукоидан увеличивает продукцию IL-2 в культуре интактных (опыт - 677±51 пг/мл, контроль -395±44 пг/мл, р=0,001) и стимулированных митогеном клеток крови (опыт -812±45 пг/мл, контроль - 563±22 пг/мл, р=0,000) (рис. 2А, 2В).

У доноров с высоким уровнем TNFa под влиянием фукоидана, напротив, наблюдалось снижение его продукции (722±113 пг/мл в опыте, 1147±115, в контроле, р=0,002). Исследование у доноров этой группы стимулированной ФГА продукции цитокинов, вырабатываемых Thl (IL-2 и IFNy) и Th2 (IL-4), подтверждает описанные выше результаты о модулирующем влиянии фукоидана (рис. 3).

А В

Рис. 2. Влияние фукоидана на спонтанную (А) и стимулированную ФГА (В) продукцию цитокинов в культурах цельной крови с исходно низкими показателями. По оси абсцисс: 1- уровень цитокинов интактных клеток (контроль), 2- уровень цитокинов под влиянием фукоидана (опыт). По оси ординат: концентрация цитокинов (пг/мл).

Рис. 3. Влияние фукоидана на стимулированную ФГА продукцию цитокинов в культурах цельной крови с исходно высокими показателями. По оси абсцисс: 1-уровень цитокинов интактных клеток; 2- уровень цитокинов под влиянием фукоидана. По оси ординат: концентрация цитокинов (пг/мл).

Полученные результаты свидетельствуют, что фукондан из К е\>апезсет оказывает регулирующее влияние на продукцию цитокинов, вырабатываемых преимущественно мононуклеарными фагоцитами, ТЫ, ТЬ2 как интактными,

так и стимулированными ФГА. Модулирующее влияние фукоидана зависит от исходного уровня тестируемого цитокина, при этом исходно низкая продукция цитокинов усиливается, исходно высокая снижается.

Таким образом, фукоидан из F. evanescens в широком диапазоне доз не токсичен для мышей, оказывает стимулирующее влияние на факторы гуморального и клеточного иммунитета, функциональную активность Нф in vivo и in vitro, проявляет свойства модулятора продукции цитокинов in vitro. Имму-номодулирующие эффекты фукоидана при введении per os были сравнимы с таковыми при его парентеральном введении. Полученные результаты характеризуют фукоидан из F. evanescens как эффективный иммуномодулятор, оказывающий стимулирующее воздействие на факторы врожденного и приобретенного иммунитета.

Антикоагулянтная и фпбрпнолитическая активность фукоиданов Исследование механизмов антикоагулянтного действия фукоиданов из F. evanescens и L. cichorioides проводилось в базовых коагуляционных тестах in vitro и in vivo. Установлено, что оба фукоидана эффективно пролонгировали показатели АПТВ- и ТВ-тестов и в меньшей мере показатели ПВ-теста. Статистически значимые различия в эффектах фукоиданов I и II in vitro выявлены в отношении отдельных показателей и лишь под влиянием больших (] ООО мкг/мл) концентраций препаратов.

При исследовании взаимосвязи антикоагулянтного эффекта фукоидана I и его концентрации методом регрессионного анализа выявлена зависимость, выражающаяся уравнением линейной регрессии. На рис. 4 представлены эмпирические данные и аппроксимирующие кривые зависимости «доза-эффект», где значения R2 (0,94; 0,95 и 0,96) отражают близость значений линии трендов к фактическим данным в АПТВ-, ТВ- и ПВ- тестах соответственно. В отношении фукоидана II выявлена аналогичная зависимость (рис. 4). Аналогичным дозо-зависимым эффектом обладает, как известно, и гепарин (Mourao P.F., 2004). В наших экспериментах индексы пролонгирования (ИС) времени свертывания под влиянием фукоиданов и гепарина были сопоставимы.

Пролонгирование показателей АГГГВ и ПВ тестов свидетельствует об эффективном влиянии фукоиданов I и II на механизмы внутреннего и в меньшей степени - внешнего - путей свертывания. Значительное возрастание ТВ, характеризующего конечный этап свертывания или превращение фибриногена в фибрин под воздействием тромбина, свидетельствует о влиянии фукоидана на этот процесс и предполагает его воздействие на тромбин.

* ж ♦ у «-248,вх + 1306,2 * " 0,9304

у--95,7* 4-530.9 """"•^ч,» Иг - 0,651

---

у ■ -7,1х ♦ 58,7 R* -0.9598

кемцвнтрвция (мкг/мл)

|——» - АГТГВ - » - ТВ * ГТВ Линейный (АПГ6) ■ Линейный (ТВ? —Линейный (ПБ) ) ^

Рис. 4. Аппроксимирующие кривые зависимости между антикоагулянтной активностью и концентрацией фукоидана I (А) или II (В) in vitro в АПТВ-, ТВ- и ПВ- тестах. По оси абсцисс: концентрация фукоидана (мкг/мл); по оси ординат: время свертывания плазмы (сек); примечание: сплошные линии - аппроксимирующие кривые; линии с маркерами - эмпирические данные; R2 - надежность линии тренда или величина достоверности аппроксимации.

Однократное парентеральное (внутрибрюшинное) введение фукоиданов мышам линии BALB/c приводило к гипокоагуляции (о чем свидетельствует удлинение времени свертывания в базовых коагуляционных тестах), более выраженной по интенсивности и продолжительности у фукоидана П. Аналогичные

результаты, подтверждающие более выраженный эффект фукоидана И, выявлены при исследовании антикоагулянтной (удельной антитромбиновои (alla) и удельной активности против фактора Ха (аХа) активности плазмы крыс при внутривенном введении фукоиданов (рис. 5). Увеличение кратности введения фукоидана (до 10 дней) вызывало более выраженную гипокоагуляцию по сравнению с однократной. Гипокоагуляционные изменения наблюдались также при многократном (30 дней) пероральном введении животным фукоидана (рис. 6).

5 3,5

i з

Ё f 2,5

g И 1.5

S 1

g 0,5

= 0

—♦ -I аХа —■ - I alla - h -llaXa- • -Il alla

Рис. 5. Антикоагулянткая активность плазмы крыс после внутривенного введения фукоиданов, выделенных из F. evanescens (I) и L. cichorioides (II). По оси абсцисс: время после введения фукоидана (мин,); по оси ординат: показатели активности плазмы (ЕД/мл).

При анализе специфических антикоагулянтных активностей фукоиданов (удельной антитромбиновой (alla) активности и удельной активности против фактора Ха (аХа) активности), были установлены следующие показатели инги-бигорной активности по отношению к тромбину (фактору Па): от 22±7 до 29±6 ЕД/мг для фукоидана из F. evanescens (Г) и от 43±8 до 49±8 ЕД/мг для фукоидана из L. cichorioides (II), по отношению к активированному фактору X (Ха): от 28±7 до 66±10 ЕД/мг для I и от 31±8 до 83±7 ЕД/мг для II. Отношение аХа/аПа составило 1,3-2,3 для I и 0,7-1,7 для II, что является показателем терапевтического эффекта и свидетельствует о перспективности практического применения исследуемых фукоиданов в качестве антикоагулянтных и анти-

Время после введения (мин.)

тромботических средств. Полученные в этих тестах результаты свидетельствуют, что исследуемые нами фукоиданы являются потенциальными антикоагулянтами прямого типа действия и демонстрируют ингибиторную активность в отношении тромбина (фактора Па) и фактора Ха.

О)

S X га ш

ь а.

о к

О. Ш

Рис. 6. Влияние фукоидана из F. evanescens на систему гемостаза у мышей BALB/c в зависимости от кратности и способа введения. По оси ординат: время свертывания плазмы (сек.).

Изучение возможности прямого антитромбинового действия фукоидана из F. evanescens или способности тормозить самосборку фибрин - мономера проводили путем оценки его влияния на свертывание очищенного препарата фибриногена тромбином. При анализе полученных результатов установлено отсутствие антикоагулянтного эффекта под влиянием фукоидана в диапазоне концентраций от 1 до 1000 мкг/мл, что характерно и для внесения в такую тест-систему гепарина. Это позволило нам предположить, что прямым антитромби-новым действием фукоидан не обладает, а его антикоагулянтное действие обусловлено активацией антитромбина III, т.е., как и гепарин, фукоидан не является прямым ингибитором тромбина, а действует опосредованно. Для проверки данного предположения предпринято исследование антикоагулянтного действия фукоидана в присутствии антитромбина III и без него с использованием

@ АПТВ STB

контроль

1-кратно 110-кратно парентерально

10-кратно (30-кратно перорально

тест-системы с хромогениым субстратом, специфичным по отношению к тромбину. Сравнительные данные по оценке антикоагулянтного действия фукоида-на и гепарина в этих тестах показали, что оптическая плотность в смеси фукои-дана (в концентрации 100 мкг/мл), тромбина и хромогенного субстрата, не содержащей антитромбина III, составляет 0,444+0,06, т. е. близка к оптической плотности в контроле (0,455+0,03), где вместо фукоидана вносили буферный раствор. Близкие к контролю значения оптической плотности были обнаружены в смеси тромбина, хромогенного субстрата и гепарина (0,468±0,05), т.е., показатели поглощения в пробах под влиянием фукоидана и гепарина являются сопоставимыми. Это свидетельствует об отсутствии самостоятельного (без AT III) антикоагулянтного действия фукоидана. Снижение оптической плотности (в сравнении с контролем) смеси фукоидана, тромбина, хромогенного субстрата и AT III было сопоставимым с таким же снижением в смеси гепарина, тромбина, хромогенного субстрата и AT III, различия между этими показателями не являются статистически значимыми (р>0,05). Очевидно, что это снижение обусловлено инактивацией тромбина антикоагулянтом (фукоиданом либо гепарином) в присутствии AT П1. Полученные результаты свидетельствуют, что анти-коагулянтная активность фукоидана из F. evanescens связана с плазменным AT III - важнейшим физиологическим антикоагулянтом, который инактивирует тромбин и другие факторы свертывания (ХПа, Xla, Xa, 1Ха). Фукоидан, как и гепарин, превращает AT III из медленно действующего в быстродействующий ингибитор тромбина.

Изучено влияние фукоидана из F. evanescens на систему фибринолиза in vitro и in vivo. В экспериментах in vitro установлено, что фукоидан в диапазоне исследуемых концентраций (10-1000 мкг/мл) способствовал возрастанию (р<0,05) потенциальной активности плазминовой системы. При парентеральном введении фукоидана установлено снижение времени спонтанного эуглобули-нового лизиса, что свидетельствует об активации системы фибринолиза и связано с повышением плазминового потенциала. С увеличением кратности введения фукоидана наблюдалась более интенсивная активация фибринолиза по

сравнению с контролем (р<0,05). Усиление фибринолиза является важной характеристикой фукоидана как потенциального средства с тромболитической активностью.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что фукоидан из F. evancscens обладает схожей с гепарином антикоагулянтной активностью при действии как in vitro, так и in vivo, реализуемой при участии антитромбина 1П и обусловленной ингибированием тромбина (фактора Па) и фактора Ха, а также оказывает влияние на систему фибринолиза, которое осуществляется путем активации эндогенной фибринолитической системы крови. В связи с этим фукоидан имеет большие перспективы клинического применения в качестве антикоагулянтного и тромболитического средства.

Применение фукоидана из F. evaitescens для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза на модели эндотоксинемни

Актуальной проблемой лечения больных с эндотоксинемией является поиск препаратов для снижения негативного влияния эндотоксина на организм и повышения резистентности организма к токсическому воздействию ЛПС. Выявленные нами иммуностимулирующая и антикоагулянтная активности фукоидана из F. evanescens позволили апробировать его применение по лечебной и профилактической схемам при экспериментальной эндотоксинемни. Последняя служит моделью для изучения механизмов воспаления и патологии гемостаза, а также моделью эндотоксинового шока и сепсиса (Fink М.Р., Heard S.O., 1990; Deitch Е.А., 1998). Эндотоксинемию индуцировали у мышей линии BALB/c ли-пополисахаридом (ЛПС) из Y. pseudotuberculosis, что обусловлено нашим интересом к исследованию роли этого ЛПС в иммунопатогенезе псевдотуберкулезной инфекции, в частности, к нарушениям в системе гемостаза. Защитный эффект фукоидана при разных схемах его введения оценивали по проценту выживаемости и средней продолжительности жизни (СПЖ) мышей, получивших ЛПС в дозе 6,25±0,5 мг/кг (LDioo). Установлено, что при профилактическом (10-кратном парентеральном) введении фукоидана выживаемость составила 18,9±1,2%, а СПЖ возрастала до 52,8±4,3 час. по сравнению с 27,1±2,2 час. при

введении ЛПС (р=0,01); профилактическое пероральное введение фукоидана (в течение 21 суток) обеспечивало 24,4±4,3% выживаемости при СПЖ 57,6±3,6 час. (р=0,02) (рис. 7).

Рис. 7. Динамика выживаемости мышей при экспериментальной ЛПС-индуцированной эндотоксинемии под влиянием фукоидана. По оси абсцисс - время после введения мышам ЛПС (час.); по оси ординат - показатели выживаемости (%).

Проникая в системный кровоток, ЛПС инициирует комплекс патологических процессов, включающих нарушения гуморального и клеточного иммунитета, развитие ДВС-синдрома и другие сдвиги, что связано с прямыми или опосредованными эффектами цитокинов, продукция которых активированными ЛПС клетками макроорганизма значительно возрастает (Levi М. et al., 19972001; Pernerstorfer Т. et al., 1999; Kerr R. et al., 2001). При исследовании динамики провоспалительных цитокинов в сыворотке крови мышей BALB/c при эндотоксинемии, индуцированной летальной дозой ЛПС, через 2 часа после его введения выявлено значительное повышение по сравнению с интактными животными концентрации TNFa и IL-la. Через 4 часа концентрация этих цитокинов снижалась и к 24 часам приближалась к показателям группы интактного контроля. Динамика IL-6 имела иную закономерность, приобретая максимальные показатели через 8 часов с последующим снижением, при этом его концентрация также значительно превышала таковые значения в группе интактных

животных (р=0,000) (рис. 8). Введение фукоидана по профилактическим схемам (парентерально либо перорально) способствовало статистически значимому снижению концентрации ТОТа и (Ь-1а через 2-4 часа, а 1Ь-6 через 8-24 часа после введения ЛПС (рис. 8).

А В

Рис. 8. Динамика уровня TNFa (А) и IL-6 (В) в сыворотке крови мышей BALB/c. По оси абсцисс - время после введения мышам ЛПС (час.); по оси ординат - концентрация цитокинов в сыворотке крови (пг/мл); *- различия статистически значимы (р<0,05); (светлые столбики - эндотоксинемкя (ЛПС); темные столбики - то же под влиянием фукоидана).

В связи с тем, что нейтрофилы являются основной эндотоксинсвязываю-щей популяцией клеток крови, участвуют в процессах иммобилизации, транспорта и выведения ЛПС из организма, а также в патогенезе эндотоксининдуци-рованного повреждения органов и тканей (Лиходед В.Г. с соавт., 1996; Wheeler М. et а!., 2000), была исследована функциональная активность Нф перитонеаль-ной полости мышей с экспериментальной эндотоксинемией под влиянием фукоидана. Установлено, что через 3 часа после введения летальной дозы ЛПС наблюдалось значительное угнетение показателей функциональной активности Нф по сравнению с группой интактного контроля (р=0,000). Под влиянием однократного введения фукоидана показатели адгезивной и бактерицидной активности Нф на фоне вызванной ЛПС депрессии, возрастали: абсолютное количество прилипших к пластику клеток составило 596700153200 против 365100±29200 при введении ЛПС (р=0,002), а показатели спонтанного НСТ-теста составили 43,5+5,1 ODxlO"' против 23,5+4,2 ODxlO"1 (р=0,01), но остава-

лись значительно ниже таковых в группе интактных животных. При 10-кратном введении фукоидана показатели адгезивной активности восстанавливались в большей степени, чем при однократном (рис. 9).

I я Контроль а Л ПС ■ Фукоидан +ЛПС ш Фукоидан 'Ю-кр+ЛПО т ФукоаданН

Рис. 9. Влияние фукоидана на функциональную активность Нф перитонеальной полости мышей при экспериментальной эндотоксинемии

Результаты исследования показателей системы гемостаза при ЛПС-I индуцированной эндотоксинемии (I) свидетельствуют о развитии выраженной гиперкоагуляции на ранних этапах (2-4 часа после введения ЛПС), что проявлялось увеличением общего коагулянтного потенциала плазмы и выражалось в сокращении по сравнению с исходным времени свертывания крови в базовых коагуляционных тестах, а также угнетением процессов фибринолиза (табл. 4).

Эти признаки характерны для начальной стадии ДВС-синдрома (Levi М. et al., 2003; Pawlinski R. et al., 2004). Введение животным фукоидана по лечебной схеме (в течение 3-х дней после инъекции ЛПС) (II) способствовало купированию явлений гиперкоагуляции (по данным АПТВ- и ТВ-тестов), а также активации ФА крови, что, вероятно, связано с наличием у фукоидана антикоагу-лянтной и фибринолитической активности. Однако восстановления показателей свертывания крови до уровня интактного контроля (IV) не наблюдалось. При профилактическом введении фукоидана (в течение 10 дней до введения ЛПС) (III) выявлены гипокоагуляционные сдвиги, выражающиеся в удлинении времени свертывания крови по сравнению с контролем (р<0,05). Эти процессы сопровождались активацией ФА (р<0,05) и восстановлением уровня ФГ (р<0,05), которые приближались к уровню контроля (табл. 4).

Таблица 4

Влияние фукоидана на систему гемостаза через 4 часа после ЛПС-индуцированной эндотоксинемии

Показатели гемостаза (М±ш) Группа животных

ЛПС (I) ЛПС+фукоидан (лечебная схема) (II) ЛПС+фукоидан (профилактическая схема) (III) Контроль (0,85%NaCl) (IV)

АПТВ (сек.) 25,0±2,0 38,5+1,9* р(П -1)<0,05 p(II - IV)<0,05 75,6+6,5* р(П1 — Г)<0,05 р(Ш - IV)<0,05 47,4±2,6* p(IV-1)<0,05

ПВ (сек.) 11,6±0,9 14,0±0,8 р(П -1)>0,05 pai-!V)>0,05 23,2+2,4* р(1П -1)<0,05 p(III-IV)>0,05 16,8+2,6 p(IV-I)>0,05

ТВ (сек.) 12,8±0,4 15,7+1,0* р(П -1)<0,05 Pai-iv)<o,o5 67,8+4,7* р(Ш -1)<0,05 р(1П -1 V)<0,05 18,6+0,6* p(IV-1)<0,05

ФА (мин.) 533±28 430+29* р(1Г -1)<0,05 p(II-IV)<0,05 350±30* р(П1-1)<0,05 р(Ш — IV)>0,05 310+32* p(IV-1)<0,05

ФГ (Г/л) 6,1±0,4 4,8+0,2* р(П-1)<0,05 p(II-IV)>0,05 4,4±0,2* р(ПГ -1)<0,05 р(П1 - IV)>0,05 4,1 ±0,25* p(IV-1)<0,05

Примечание: показатели гемостаза Ме±т; р - значимость различий при сравнивании показателей в разных группах; *- различия статистически значимы по отношению к I группе (р<0,05); использован непараметрический О-кригерий Данна.

Учитывая тот факт, что при эндотоксинемии развиваются нарушения микроциркуляции, гипоксия и выраженная дисфункция органов и систем организма, формируется полиорганная недостаточность (ПОН), исследовано влияние фукоидана на состояние внутренних органов и микроциркуляторного русла мышей. Данные патоморфологического исследования органов-мишеней (печени, почек, легких) мышей при ЛПС-индуцированной эндотоксинемии свидетельствуют о развитии гемоциркуляторных нарушений с наличием микротромбов, «сладж-феномена» эритроцитов в сосудах микроциркуляторного русла, повышенной проницаемости и деструкции эндотелия сосудов, а также дистро-фически-некробиотических изменений клеток паренхиматозных органов, что относится к морфологическим признакам ДВС-синдрома.

Под влиянием фукоидана клинико-морфологические проявления эндотоксинемии, вызванной введением мышам ЛПС, были менее выражены. При этом

профилактическое применение фукоидана было более эффективным при его парентеральном введении по сравнению с пероральным. Введение фукоидана способствовало снижению степени микроциркуляторных нарушений и вторичных дистрофически-деструктивных изменений в печени, почках, легких, т.е., фукоидан оказывает нормализующее влияние на состояние паренхиматозных органов мышей при эндотоксинемии. Тем не менее, на фоне его применения наблюдались остаточные признаки ДВС-синдрома.

Таким образом, фукоидан способен эффективно регулировать состояние систем иммунитета и гемостаза при экспериментальной эндотоксинемии.

Антпкоагулянтная н фибринолитическая активность тинростима

Механизмы иммуномодулирующего действия пептидного комплекса тинростима достаточно хорошо изучены (Беседнова H.H., Эпштейн Л.М., 2004; Запорожец Т.С., 2006), в то же время его влияние на систему гемостаза до па-стоящего времени оставалось не исследованным. При изучении показателей свертывания крови в базовых коагуляционных тестах in vitro установлено, что тинростим в диапазоне концентраций 0,01 - 100 мкг/мл не проявлял антикоагу-лянтного действия и не оказывал существенного влияния на потенциальную активность плазминовой системы. Под влиянием тинростима в высоких концентрациях (500-1000 мкг/мл) показатели свертывания в АПТВ-, ПВ- и ТВ-тестах возрастали в 1,2 - 1,3 раза (р<0,05). При исследовании показателей гемостаза in vivo тинростим вводили мышам BALB/c внутрибрюшинно 1- кратно, либо 10-кратно. Изменений в системе гемостаза через 15 мин после 1-кратного введения тинростима не выявлено. Десятикратное введение этого препарата приводило к удлинению по отношению к контролю времени свертывания в АПТВ-тесте (в 1,5 раза, р<0,05)), ПВ-тесте (в 1,2 раза, р<0,05), и ТВ-тесте (в 1,6 раза, р<0,05), т.е. тинростим вызывает гипокоагуляционные сдвиги при многократном парентеральном введении экспериментальным животным. При многократном введении тинростима также наблюдалось снижение времени лизиса сгустка (р<0,05) и возрастание потенциальной активности плазминовой системы (р<0,05).

В отношении тинростима также, как и в отношении фукоидана, изучена возможность применения для коррекции нарушений гемостаза на модели эндо-токсинемии, индуцированной ЛПС псевдотуберкулезного микроба у мышей ВАЬВ/с. При введении тинростима по лечебной схеме статистически значимых изменений показателей коагуляционного гемостаза не выявлено. Профилактическое 10-кратное введение тинростима способствовало восстановлению показателей АПТВ- (р<0,05), ПВ- (р<0,05) и ТВ- (р<0,05) тестов, а также значений ФА (р<0,05). Отмеченные показатели под влиянием тинростима приближались к уровню контроля (рис. 10). Полученные результаты свидетельствуют, что профилактическое применение тинростима способствует снижению интенсивности гиперкоагуляционных изменений при экспериментальной эндотоксине-мии (купированию явлений гиперкоагуляции). Т.е., тинростим, подобно фукои-дану, способен предотвращать развитие ДВС-синдрома или ослаблять его течение в условиях экспериментальной ЛПС-индуцированной эндотоксинемии.

СЗЗАПТВ г—1 ТВ —ФА

Рис. 10. Влияние тинростима на систему гемостаза через 4 часа после ЛПС-индуцированной эндотоксинемии. По оси ординат: слева - показатели времени свертывания в АПТВ- и ТВ- тестах (сек.) (столбики), справа - показатели ФА (час.) (линия); по оси абсцисс: 1 - группа животных, получивших ЛПС; 2 - группа животных, получивших тинростим по профилактической схеме и ЛПС; 3 - контрольная группа (0,85% NaCl); *р<0,05 -различия статистически значимы по отношению к 1 группе; использован непараметрический Q-критерий Данна.

Таким образом, тинростим в рабочих концентрациях in vitro не оказывает прямого влияния на факторы свертывания крови и систему фибринолиза. При

многократном парентеральном введении тинростима экспериментальным животным наблюдаются гипокоагуляционные сдвиги и активирующее влияние на систему фибринолиза.

Учитывая результаты о проявлении тинростимом антикоагулянтной активности при многократном парентеральном введении в макроорганизм, а также полученные ранее данные о регулирующем воздействии на факторы гуморального и клеточного иммунитета, на функции нервной системы (Гажа А.К. с соавт., 1999; Беседнова Н.Н., Эпштейн JI.M., 2004; Запорожец Т.С., 2006) можно предполагать, что действие тинростима на систему гемостаза намного сложнее, чем у антикоагулянтов прямого действия, и реализуется с участием иммунной и нейро-эндокринной систем. С этим, по-видимому, связано выявленное нами снижение интенсивности гиперкоагуляционных изменений при экспериментальной эндотоксинемии.

Результаты выполненных исследований открывают важный аспект имму-нопатогенеза псевдотуберкулезной инфекции - роль ЛПС У. pseudotuberculosis при нарушениях в системе гемостаза и возможность коррекции этих нарушений. При псевдотуберкулезе также, как и при других бактериальных инфекциях, эндотоксинемия является пусковым фактором нарушений гемостаза (Зубиц-кий П.К. с соавт., 1986; Полякова A.M. с соавт., 2000). Мы проследили специфические особенности патогенеза псевдотуберкулезной инфекции, касающиеся нарушений в системе гемостаза при введении ЛПС (эндотоксина) и установили, что изменения показателей системы гемостаза носили фазный характер в соответствии со стадиями развития ДВС-синдрома. Также с учетом этих стадий нами проведено патогистологическое исследование органов-мишеней (легких, печени, почек, сердца) в динамике. Выявленная нами патоморфологическая картина эндотоксинемии, индуцированной ЛПС Y. pseudotuberculosis у животных, свидетельствует о повышенной проницаемости и деструкции эндотелия сосудов микроциркуляторного русла, очаговых дистрофически-некробиотических изменениях клеток паренхиматозных органов, нарастающих пропорционально длительности патологического процесса. Эти изменения обу-

словлены расстройством микроциркуляции и развитием вторичных, связанных с нарушением кровообращения, повреждений органов (ПОН), а возможно, и первичных повреждений за счет прямого токсического воздействия ЛПС.

Способность фукопдана корригировать нарушения иммунитета и гемостаза при эндотоксинемии, индуцированной ЛПС К pseudotuberculosis, что подтверждено данными патоморфологического исследования, делает перспективной возможность его применения в комплексе лечения и профилактики (в экстремальных ситуациях) псевдотуберкулезной инфекции. Аналогичным образом реализовались эффекты тинростима при моделировании эндотоксинемии. Применение тинростима в комплексном лечении больных ХОБЛ Широкое распространение во всем мире хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), хронического медленно прогрессирующего заболевания, характеризующегося необратимой или частично обратимой обструкцией бронхиального дерева, позволяет отнести проблему ее лечения и профилактики к числу наиболее актуальных. В частности, поиск и разработка новых препаратов, усиливающих эффективность патогенетической терапии при ХОБЛ, являются необходимым направлением современной медицины (Чучалин А.Г., 2000; Кокосов А.Н., 2002; Зарембо И.А., 2006). В клинической практике имеют место многочисленные примеры применения полипептидов природного и синтетического происхождения не только в качестве корректоров нарушений в системе иммунитета, но и в системе гемостаза при различных заболеваниях. Мы также поставили задачей применение полипептида тинростима в качестве средства сопровождения базисной терапии 108 больных с диагнозом ХОБЛ со средне-тяжелым и тяжелым течением заболевания в стадии обострения для коррекции нарушений в этих системах.

Результаты исследования состояния иммунной системы больных ХОБЛ до лечения свидетельствуют о нарушении клеточных и гуморальных механизмов иммунитета, т.е. о наличии признаков вторичной иммунологической недостаточности, что патогенетически обосновывает применение иммунокоррек-торов. Включение тинростима в курс лечения больных свидетельствует о по-

вышении по сравнению с исходным относительного содержания С03*- лимфоцитов (р=0,01). Собственный эффект тинростима (ЭТ) в отношении СОЗ+-лимфоцитов составил 11,8%. У больных, принимавших тинростим, также увеличивалось содержание СБ4+-лимфоцитов, р=0,01 (показатель ЭТ составил 21,1%), и отмечена тенденция к увеличению СБ8+ - лимфоцитов, р=0,08 (ЭТ составил 15,3%). Выраженное стимулирующее влияние тинростима отмечено в отношении показателей фагоцитарной активности Нф. Так, по окончании лечения значения ФП и ФЧ у пациентов, принимавших иммуномодулятор, статистически значимо возрастали по сравнению с исходными, ЭТ составил 18,1% и 25,6% соответственно.

Исследование уровня сывороточных иммуноглобулинов у больных после лечения с применением тинростима свидетельствует о нормализации / повышении концентрации 1§А (р=0,03) и снижении (р=0,05) при отсутствии положительной динамики уровня этих иммуноглобулинов в контрольной группе больных. Уровень ЦИК в сыворотке крови больных снижался по сравнению с исходным в обеих группах больных, при этом показатели ЦИК после лечения приближались к показателям нормы только у больных, получавших тинростим. У больных, получавших в курсе лечения тинростим, выявлено повышение содержания СЗ-, С4- и С5- компонентов комплемента по сравнению с исходным, что приводило к нормализации этих показателей к концу курса лечения.

Выявленное нами снижение содержания Т-клеточных субпопуляций лимфоцитов (как хелперов, так и супрессоров) влечет за собой нарушения регу-ляторных взаимоотношений иммунокомпетентных клеток, а, следовательно, и продукции цитокинов. Исходный уровень про- (ТКТа, 1Ь-1а, 1Ь-6) и противовоспалительных (ГЬ-4) цитокинов у больных ХОБЛ существенно (5-10-кратно) превышал средние показатели нормы. Динамика цитокинов под влиянием тинростима приобретала следующий характер: снижался уровень ЮТа (52,9±5,4 пг/мл до и 30,8±4,67 пг/мл после лечения; р<0,05 ) и уровень IЬ-6 (103,4±26,25 пг/мл до и 67,5±25,9 после лечения; р<0,05). Эффекта тинростима на содержание противовоспалительных цитокинов (1Ь-4,1Ь-10) не наблюдалось. В группе

больных с базисной терапией в процессе лечения уровень про- (Т№а, 1Ь-1а, 1Ь-6) и противовоспалительных цитокинов (ГЬ-4,1Ь-10) статистически значимо не изменялся.

Подтверждением отмеченных нарушений у больных ХОБЛ служат индексы ТЫБа/1Ь-10 и 1РКу/1Ь-4, свидетельствующие о соотношении оппозитных пулов цитокинов (про- и противовоспалительных), а также об уровне ТЫ /ТЬ2 дихотомии (Медуницын Н.В., 1999; Ройт А. с соавт., 2000). До лечения первый индекс был повышен (3,0 против 0,75 у здоровых лиц), а второй существенно снижен (0,19 против 3,2) по сравнению с контролем, что свидетельствует о ци-токиновом дисбалансе (с превалированием провоспалительных цитокинов) и недостаточной выраженности функциональной активности ТЫ- лимфоцитов у больных ХОБЛ. Индекс ТОТаЛЬ-Ю в группе больных, получавших тинростим, к концу лечения снижался, тогда как у больных контрольной группы оставался на высоком уровне (3,4), что свидетельствует о сохранении дисбаланса цитокинов. Индекс 1Б1\ту/ИЛ-4 в обеих группах оставался значительно ниже этого показателя у здоровых лиц.

Из числа обследованных больных ХОБЛ (68 человек) нарушения в системе гемостаза, характерные для латентного ДВС-синдрома, были выявлены в 57% случаев. Именно эти больные учитывались с целью оценки влияния тинро-стима на систему гемостаза. Так, до лечения у этих больных показатели орто-фенантролинового теста (ФТ), являющегося наиболее информативным и стандартизованным показателем течения диссеминированного внутрисосудистого свертывания, выявляющим циркуляцию в крови активного тромбина и растворимых фибрин-мономерных комплексов, значительно превышали таковые у здоровых лиц (20,1±2,4 мг/% у больных и 3,38±0,39 мг/% у здоровых; р=0,000). Кроме того, у больных наблюдалось снижение вдвое фибринолитического потенциала крови (ФА) (6,89±0,59% и 14,0±2,1% соответственно, р=0,000), что является прогностически неблагоприятным признаком для больных, так как способствует отложению избытка фибрина, являющегося матрицей для фиб-робластов, и ведет к формированию фиброза. Выявленные нами особенности

изменений в системе гемостаза при ХОБЛ характерны для латентного ДВС-синдрома и требуют коррекции или специфического лечения с помощью препаратов, улучшающих реологические свойства крови (антикоагулянтов).

Исследование показателей системы гемостаза у больных, принимавших тинростим (основная группа), показало, что значения ФТ снижались до 14,4± 2,2 мг/% при выписке (р<0,02), а ФА, напротив, возрастала до 10,7±1,6 % (р<0,05). Этим показателям соответствуют максимальные значения ЭТ (28% и 26% соответственно). В процессе лечения у больных группы сравнения положительной динамики показателей ФТ и ФА не выявлено, что свидетельствует о недостаточной эффективности проводимой терапии. Полученные нами данные (снижение показателей ФТ, как маркера тромбинемии и внутрисосудистого свертывания крови, а также возрастание показателей ФА) свидетельствуют о том, что тинростим приводит к частичному купированию латентного ДВС-синдрома и увеличению фибринолитического потенциала крови. Последнее в определенной степени способствует предотвращению отложения на стенках сосудов избытка фибрина, а, следовательно, и купированию процессов фибрози-рования и обструкции в бронхиальном дереве.

В связи с тем, что иммунным механизмам принадлежит особая роль в регуляции системы гемостаза, в ряде работ показано, что нарушения в иммунной системе коррелируют с таковыми в системе гемостаза при различных заболеваниях (Кузиик В.И. с соавт., 2002; Цыбиков H.H. с соавт., 2003; Цепелев В.Л., 2003). Нами проведено исследование подобных взаимосвязей у больных ХОБЛ. В частности, проведен корреляционный анализ между исходными (до лечения) показателями Т-клеточного звена иммунитета (относительным содержанием CD3+-, CD4+-, CD8+-лимфоцитов), цитокинового статуса (уровень IL-la, TNFa, IL-6 в сыворотке крови) и показателями системы гемостаза (ФТ и ФА), характерными для латентного ДВС-синдрома. При расчете коэффициента ранговой корреляции Спирмена (г) показателей иммунитета и гемостаза были выявлены корреляционные взаимосвязи в отношении таких показателей иммунной системы, как относительное содержание CD3+-, CD4+- лимфоцитов, а также уровень

1Ь-1а, ТТЧРа, 1Ь-б в сыворотке крови с показателями системы гемостаза ФТ и ФА. Установлена прямая значимая тесная связь уровня ЮТа с ФТ (г=0,816; р=0,006), умеренная связь уровня 1Ь-6 с ФТ (г=0,676; р=0,004 ) и обратная слабая связь между содержанием СБЗ+- лимфоцитов и показателями ФТ (-0,234; р=0,017). Взаимосвязи уровня цитокинов в сыворотке крови с ФА у больных представляли обратную умеренную корреляцию с уровнем ЮТа (г=-0,489; р=0,05) и с уровнем 1Ь-6 (г=-0,416; р=0,04). Кроме того выявлена умеренная прямая корреляционная связь между содержанием СВЗ+-лимфоцитов и показателями ФА (г=0,423; р=0,024). Для остальных показателей корреляционных взаимосвязей не обнаружено, либо они имели статистически незначимый характер.

Таким образом, мы показали, что нарушения в системе иммунитета (Т-клеточного и гуморального звена) сопровождаются патологическими сдвигами в системе гемостаза (ФТ и ФА) и наоборот. Полученные корреляционные взаимосвязи свидетельствуют о сопряженности нарушений в системах иммунитета и гемостаза у обследованных больных ХОБЛ.

Результаты исследований, представленные в данном разделе работы, показали целесообразность включения иммуномодулятора полипептидной природы тинростима в составе БАД «Тинростим-СТ» в качестве средства сопровождения базисной терапии больных ХОБЛ с целью повышения эффективности патогенетической терапии. При лечении с применением тинростима наблюдалось более выраженное по сравнению с базисной терапией улучшение клинико-функциональных и лабораторных показателей: уменьшение проявления основных симптомов болезни (кашля и одышки), значимое улучшение вентиляционной функции легких (увеличение показателей ОФВ0, коррекция ряда показателей иммунного статуса и гемостаза больных ХОБЛ. Критерием эффективности применения тинростима служил также показатель собственного эффекта тинростима (ЭТ). Эти данные свидетельствуют об иммуномодулирующей и противовоспалительной активности тинростима, его нормализующем влиянии на систему гемостаза (частичное купирование латентного ДВС-синдрома и увели-

чение фибринолитического потенциала крови), что в свою очередь снижает риск прогрессирования ХОБЛ (бронхообструкции), приводит к стабилизации течения заболевания, более быстрому купированию обострений.

Результаты проведенных экспериментальных и клинических исследований позволили разработать гипотетические схемы механизмов действия фукои-дана и тинростима на систему гемостаза (рис. 11 А и В).

Проведенные нами исследования с учетом задачи по отбору среди полученных фукоиданов образца с оптимальными показателями, включающими оценку сырьевых запасов, способа выделения, структурных характеристик, показали, что наиболее перспективным для практического использования является фукоидан из водоросли F, evanescens. Этот биополимер обладает иммуномо-дудирующими, цитокининдуцирующими, антикоагулянтными свойствами. При этом, фукоидан был эффективен в проявлении иммуномодулирующей активности при парентеральном и при пероральном введении. Антикоагулянтный эффект фукоидана сопоставим с таковым у гепарина, выявлен специфический антагонист (сульфат протамина), что обеспечивает возможность нейтрализации антикоагулянтной активности фукоидана. Экологически чистые и экономичные технологии производства, низкая токсичность для организма, хорошая растворимость, большая свобода дозирования, возможность как парентерального, так и перорального способа введения в организм открывают перспективы для конструирования лекарственной формы на основе фукоидана. Источник получения фукоидана - морские водоросли - выгодно отличают его от гепарина -сульфатированного полисахарида животного происхождения, использование которого в клинике сопряжено с риском прионовой контаминации. Первым шагом, предпринятым нами в этом направлении, является разработка БАД к пище «Фуколам®» на основе фукоидана из бурой водоросли F. evanescens и БАД к пище «Нуклеидан» на основе фукоидана из L. japónica.

Рис. 11. Гипотетическая схема механизмов действия фукоидана (А) и тинро-стима (В) на систему гемостаза.

ВЫВОДЫ

1. Новые оригинальные сульфатированные полисахариды фукоиданы из бурых водорослей Тихого океана (F. evanescens, L. cichorioides, L. japónica) и полипептид из нервной ткани кальмара тинростим эффективно регулируют состояние систем иммунитета и гемостаза и могут служить основой для разработки БАД к пище и лекарственных препаратов.

2. Фукоиданы из бурых водорослей F. evanescens, L. cichorioides и L. japónica оказывают стимулирующее влияние на факторы врожденного и приобретенного иммунитета. Количественные различия в проявлениях иммуномо-дулирующей активности разными фукоиданами не являются статистически значимыми по преобладающему большинству показателей. Интенсивность стимуляции зависит от структурных особенностей фукоиданов. Приоритет для практического использования имеет фуковдан из водоросли F. evanescens в связи с рядом структурных преимуществ и обширным ареалом водоросли на Дальнем Востоке России.

3. Фукоидан из водоросли F. evanescens не токсичен в широком диапазоне доз, стимулирует реакции гуморального и клеточного иммунитета in vivo и in vitro, проявляет свойства модулятора продукции цитокинов in vitro. Имму-номодулирующие эффекты фукоидана при введении per os сравнимы с таковыми при парентеральном введении. Десульфатирование фукоидана из водоросли F. evanescens приводит к снижению, а освобождение от полифенолов — к повышению показателей функциональной активности нейтрофилов in vitro, что важно для практического использования.

4. Фукоидан из F. evanescens действует на систему коагуляционного гемостаза и фибринолиза как прямо, так и опосредованно, проявляя ингибитор-ную активность в отношении тромбина (фактора Па) и фактора Ха. Соотношение aXa/alla активностей составляет 1,3 - 2,3, что является показателем терапевтического эффекта.

Механизм антикоагулянтной активности фукоидана связан с плазменным антитромбином III: фукоидан превращает антшромбин П1 из медленно действующего в быстродействующий ингибитор тромбина.

Влияние фукоидана на систему фибринолиза осуществляется путем активации эндогенной фибринолитической системы и связано с повышением потенциальной активности плазминовой системы.

5. Фукоидан из F. evanescens повышает резистентность мышей к токсическому действию ЛПС псевдотуберкулезного микроба, восстанавливает функциональную активность нейтрофилов, ингибирует повышенный уровень про-воспалительных цитокинов (TNFa, IL-la, IL-6), снижает степень микроцирку-ляторных нарушений и вторичных дистрофически-деструктивных изменений в паренхиматозных органах животных.

Парентеральное и пероральное введение фукоидана при экспериментальной эндотоксинемии оказывает корригирующее влияние на показатели системы гемостаза, предотвращая развитие или снижая интенсивность течения ДВС-синдрома.

6. Тинростим не оказывает прямого влияния на факторы свертывания крови и систему фибринолиза (ш vitró), но проявляет активность при многократном парентеральном введении в организм {in vivo), оказывая антикоагу-лянтный эффект и активирующее влияние на систему фибринолиза.

Профилактическое многократное введение тинростима способствует купированию явлений гиперкоагуляции при эндотоксинемии, индуцированной введением летальной дозы ЛПС.

7. У больных ХОБЛ выявлены признаки вторичной иммунной недостаточности (нарушение клеточных и гуморальных механизмов врожденного и приобретенного иммунитета), латентного ДВС-синдрома (повышение уровня активного тромбина и растворимых фибрин-мономерных комплексов, снижение фибринолитического потенциала крови).

8. Методом корреляционного анализа выявлена прямая тесная связь уровня TNFa и умеренная связь уровня IL-6, а также обратная связь между со-

держанием СОЗ+- лимфоцитов и показателями ортофенантролинового теста; обратная умеренная связь уровня ЮТа и 1Ь-6 с показателями фибринолитиче-ской активности, что свидетельствует о сопряженности нарушений в системах иммунитета и гемостаза у обследованных больных ХОБЛ и обосновывает целесообразность применения иммуномодуляторов, оказывающих влияние на обе системы.

9. Применение БАД «Тинростим-СТ» на фоне базисной терапии больных ХОБЛ приводит к коррекции показателей клеточного и гуморального иммунитета (повышению содержания СБЗ+-, СБ4+- лимфоцитов, усилению фагоцитарной активности нейтрофилов крови, снижению содержания циркулирующих иммунных комплексов, повышению уровня компонентов комплемента, снижению концентрации провоспалительных цитокинов в сыворотке крови).

10. БАД «Тинростим-СТ» индуцирует положительную динамику показателей системы гемостаза у больных ХОБЛ: снижение интенсивности гиперкоагуляции и увеличение фибринолитической активности крови, что способствует снижению интенсивности латентного ДВС-сиццрома.

11. Иммуномодулирующие свойства и нормализующее влияние на систему гемостаза позволяют рекомендовать применение БАД «Тинростим-СТ» как средство вспомогательной терапии больных ХОБЛ.

Рекомендации для внедрения результатов исследования:

- в науку

При разработке новых БАД к пище и лекарственных препаратов рекомендуется учитывать результаты экспериментальных исследований по комплексной оценке действия фукоидана из Р. ечсчшсет на систему иммунитета и гемостаза.

Рекомендуется освобождение фукоидана от полифенолов с целью осветления препарата, что не снижает, а усиливает его биологическую активность и приводит к достижению научной цели (только светлый порошок фукоидана может быть использован в качестве субстрата для ферментов фукоиданаз, применяемых для исследования структуры фукоиданов) и к решению коммерческой задачи (у светлого порошка лучший товарный вид и лучшая растворимость).

- в медицинскую практику

Рекомендуется использовать БАД «Тинростим-СТ» как средство сопровождения базисной терапии больных ХОБЛ для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза по 1 таблетке, содержащей 1 мг действующего вещества, 2 раза в день до еды утром и вечером, курс приема 15 дней (методические рекомендации «Применение биологически активной добавки к пище «Тинростим-СТ» в комплексном лечении больных ХОБЛ (хронической обструктивной болезнью легких) для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза» (Авторы: Т.А. Кузнецова, М.Ф. Киняйкин, В.А. Петраковская, Г.И. Суханова, Л.М. Эп-штейн). Утверждены Департаментом здравоохранения Администрации Приморского края. Владивосток. - 2007).

При лечении псевдотуберкулезной инфекции рекомендуется учитывать роль ЛПС К рзеийоШЪегсгйот в нарушениях в системе гемостаза и возможность коррекции этих нарушений включением в лечебный комплекс фукоидана и тинростима.

Широкий спектр биологических свойств, ресурсная обеспеченность, патентная защищенность являются основой для разработки лекарственных форм на основе фукоиданов.

- в учебный процесс

Рекомендуется использовать в учебном процессе медицинских ВУЗов, на курсах ФПК новые данные о механизмах действия на систему гемостаза фукоидана и тинростима.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С, Иванушко Л. А., Оводова Р.Г. Использование бпоглпкаиов из морских беспозвоночных для неспецифического снижения токсического действия липо-полисахарчда псевдотуберкулезного микроба // Материалы Российской науч. конференции «Новые биомед. техцол. с использованием биол. активных добавок»: тез. докл. - Владивосток, 1998,-С. 81-83.

2. Запорожец Т.С., Киселева С.М., Кузнецова Т.А., Иванушко ДА., Эпштейн Л.М. Применение пептидов с иммунокорригирующими свойствами в комплексном лечении больных с онкопатологией // Материалы Российской науч. конференции «Новые биомед. технол. с использованием биол. активных добавок»: тез. докл.- Владивосток, 1998,- С. 164-168.

3. Кузнецова Т.А., Суханова Г.И., Яковец Л.И., Эпштейн Л.М. Применение тннростнма в комплексной терашш бронхиальной астмы // Тихоокеанскгш медицинский журнал.- 1999-№3,- С. 90.

4. Кузнецова ТА., Мусифулина В.А., Эпштейн Л.М. Применение тинростима как иммуно-корректора при лечении хронического бронхита // Материалы межрег. науч.-пракг. конференции с межд. участием «Вакцинопрофилакгика: проблемы настоящего и будущего»: тез. докл.- Владивосток, 2000.- С. 54-55.

5. Киняйкин М.Ф., Беседнова Н.Н., Кузнецова Т.А., Яковец Л.М., Мусифулина В.А. Динамика изменений гемостаза у больных с броцхообструкшвным синдромом в процессе лечения с применением тинростима // Материалы русско-японского международного мед. симпозиума: тез. докл.- Благовещенск, 2000,- С. 511-512.

6. Кузнецова Т.А., Логвиненко А.А., Тимченко Н Ф., Эпштейн Л.М., Беседноза Н.Н. Использование иммуномодуляторов из морских беспозвоночных для снижения токсического действия термостабцльного токсина и липополисахарида Yersinia pseudotuberculosis на макроор-ганнзм // Антибиотики и химиотерапия,- 2001. - Т. 46. - №7. - С. 11-13.

7. Иванова Л.И., Кузнецова Т.А., Аксенов А.С., Эпштейн Л.М. Оценка действия тинростима на ряд показателей системы иммунитета у больных бронхиальной астмой // Материалы Тихоокеанской научно-практ. конференции с межд. участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профил. и клинич мед.»: тез. докл.- Владивосток, 2001. - С. 94.

8. Петраковская В.А., Кузнецова Т.А., Тетерина А.А. Применение иммунокорректора тинростима в комплексном лечении больных хроническим обструкшвным бронхитом И Материалы Тихоокеанской научно-практ. конференции с межд. участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профил и клин, мед.»: тез. докл. - Владивосток, 2001. - С. 103.

9. Кузнецова Т.А., Суханова Г.И., Иванова Л.И., Петраковская В.А., Эпштейн Л.М., Беседнова Н.Н. Применение тинростима в качестве иммунокорректора у больных с бронхообструк-тивным синдромом // Здоровье. Экология. Наука,- 2001. - №4. - С. 38-41.

10. Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С., Момот А.П., Мамаев А.Н., Звягинцева Т Н. Антккоагу-лянтная и антиадгезивная активность фукоидана из бурой водоросли Охотского моря II Материалы 1-ого Межд. конгресса "Биотехнология - состояние и перспективы развития": тез. докл. - Москва, 2002,- С. 80-81.

11. Запорожец Т.С., Макаренкова И.Д., Гажа А.К., Кузнецова Т.А., Молчанова В.И., Звягинцева Т.Н., Беседнова Н.Н., Эпштейн Л.М. Активация эффекторных функций нейтрофилов биополимерами морских гидробионтов // Медицинская иммунология. - 2003. - Т.5. - № 1-2. -С. 149-156.

12. Кузнецова Т.А., Беседнова Н.Н., Мамаев А.Н., Момот А.П., Шевченко Н.Н., Звягинцева Т.Н. Антцкоагулянтная активность фукоидана из бурой водоросли Охотского моря Fucus evanescens // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2003, - Т.136. - № 11. -С. 53-39.

13 Кузнецова Т.А., Суханова Г.И., Киняйкин М.Ф., Петраковская ВА., Эпштейн JI.M. Влшнне тннростима на уровень провоспалительных цнтокинов у больных хроническим об-структивным бронхитом // Материалы I Всероссийской конференции по иммунотерапии с межд. участием "Физиология иммунной системы". - Сочи, 2003: Тез докл. - International Journal on Immunorehabilitation. 2003. - Vol. 5. - №2. - P. 316.

14. Кузнецова T.A., Беседнова H.H., Баркаган З.С., Момот А.П., Мамаев А.Н., Шевченко H.H., Звягинцева Т.Н. Ангикоагулянтная активность фукоидана из бурой водоросли Охотского моря Fucus evanescens // Тромбоз, гемостаз, реология - 2003. - № 4,- С. 36-39.

15. Кузнецова Т.А., Петраковская В.А., Киняйкин М.Ф., Суханова Г.И., Беседнова H.H., Эпштейн JIM. Коррекция нарушений иммунитета и гемостаза при хроническом обструктивном бронхите пептидным иммуномодулятором тинростимом // Материалы межд. науч.-практ. конференции "Здоровье и образование". - Ангалия, 2003.- Пермь, 2003. - С. 163-166.

16. Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С., Беседнова H.H., Шевченко Н.М., Звягинцева Т.Н., Мамаев А Н., Момот А.П. Иммуностимулирующая и ангикоагулянтная активность фукоидана из бурой водоросли Охотского моря Fucus evanescens // Антибиотики и химиотерапия,-2003.- Т.48,- № 4.- С. 11-13.

17. Кузнецова ТА., Шевченко Н.М., Звягинцева Т Н., Горшкова Р.П. Влияние фукоидана го бурой водоросли Fucus evanescens на показатели гемостаза при моделировании ДВС-синдрома // Материалы Региональной научной конференции "Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии": тез. докл. - Владивосток, 2004. - С. 80.

18. Кузнецова Т.А., Шевченко Н.М., Звягинцева Т.Н., Беседнова H.H. Биологическая активность фукоиданов из бурых водорослей и перспективы их применения в медицине // Антибиотики и химиотерапия. - 2004. - Т.49. - № 5.- С. 24-30.

19. Ермак И.М., Давыдова В.Н., Горбач В.И., Бердышев Е.Л., Кузнецова Т.А., Иванушко Л.А., Гажа А.К., Смолина Т.П., Запорожец Т.С., Соловьева Т.Ф. Модификация биологических свойств липополисахарида при образовании им комплекса с хитозаном // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2004,- Т. 137. - № 4. - С. 430-433.

20. Кузнецова Т.А., Иванова Л.И., Киняйкин М.Ф., Суханова Г.И., Беседнова H.H., Эшггтейн Л.М. Применение пептидного иммуномодулятора тинростима для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза у больных бронхиальной астмой // Материалы Межд- науч.-практ. конференции "Здоровье и образование". - Таиланд, 2004.- Пермь, 2004. - С. 72-78.

21. Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С., Смолина Т.П., Шевченко Н.М., Звягинцева Т.Н. Биологические свойства фукоидана из бурой водоросли Fucus evanescens, перспективные для разработки БАД // Материалы II Межд. научно-практ. конф. "Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки". Архангельск, 2005: Изд-во ВНИИРО, 2005. - С. 305-308.

22. Кузнецова Т.А., Киняйкин М.Ф., Петраковская В.А., Буякова Е.Д., Семеновых Л.Г., Суханова Г.И., Беседнова H.H., Эпштейн Л.М. Коррекция нарушений иммунитета и гемостаза при хронических обструктивных болезнях легких пептидным иммуномодулятором тинростимом // Материалы II Дальневосточного конгресса "Человек и лекарство": тез. докл. - Владивосток, 2005. - Бюлл. ВСНЦ СО РАМН, 2005. - №4 (42). - С. 79.

23. Кузнецова Т.А., Суханова Г.И., Киняйкин М.Ф., Петраковская В.А., Иванова Л.И., Беседнова H.H., Эпштейн Л.М. Применение пептидного иммуномодулятора тинростима для коррекции нарушений в системе гемостаза у больных с хроническими обструктивными болезнями легких//Дальневосточный медицинский журнал. -2005 -№3. - С. 109-112.

24. Дрозд H.H., Толстенков A.C., Мигаль И., Киютина М., Банникова Г.Е., Макаров В.А., Варламов В.П., Кузнецова Т.А., Беседнова H.H., Звягинцева Т.Н. Фармакодинамические параметры антикоагулянтов на основе сульфатированных полисахаридов го морских водорослей // Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов. Приложение №3. - 2005,- С. 32-33.

25. Шевченко Н.М., Федорова В.Я., Звягинцева Т.Н., Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С., Беседнова H.H. Сравнительное исследование состава, структуры и биологической активности полисахаридов бурых водорослей Дальнего Востока России // Материалы II Межд. научно-

практ. конференции "Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки". Архангельск, 2005.- Изд-во ВНИИРО, 2005,- С. 386-389.

26. Дрозд H.H., Толстенков A.C., Кнкшша М., Банникова Г.Е., Макаров В.А., Варламов В.П., Кузнецова Т.А., Беседнова H.H., Звягинцева Т.Н. Связь между молекулярной массой н аши-коагулянтной активностью сульфатировашшх полисахаридов из морских водорослей // Материалы Межд. конференции "Гемореология в мпкро- и макроциркуляции": тез. докл. -Ярославль, 2005. - С. 103.

27. Кузнецова Т.А., Кузнецов Е.А., Мотанова Л.Н., Эпштейн Л.М. Применение тинростпма в комплексном лечении инфильтративного туберкулеза легких у подростков // Материалы II Дальневосточного конгресса "Человек н лекарство": мат. конф.- Владивосток, 2005,- Бюлл. ВСНЦ СО РАМН, 2005. - №4 (42). - С. 46-48.

28. Рачковская Л.Н, Бгатова Н.П., Беседнова H.H., Кузнецова Т.А., Звягинцева Т.Н. Биологические свойства энтеросорбента нового поколения с фуковданом в условиях ожогобой травмы // Материалы I Сибирского съезда лимфологов с международным участием "Проблемы экспериментальной, клинической п профилакшческой лимфолопш": тез. докл. - Новосибирск, 2006. - С. 292-294.

29. Запорожец Т.С., Кузнецова Т.А., Смолина Т.П., Шевченко Н.М, Звягинцева Т.Н, Беседнова H.H. Иммунотропные и антикоагулянтные свойства фукоидана m бурой водоросли Fucus evanescens: перспективы применения в медицине // Журнал микробиологии, эиидемноло-гиц и иммунобиологии. - 2006. - №3. - С. 54-58.

30. Павлинич С.Н., Тимченко Н.Ф., Кузнецова Т.А., Эпштейн Л.М., Каленик Т.К. Влияние низкомолекулярной ДНК из молок лососевых рыб в составе напитков на характер течения инфекционного процесса при псевдотуберкулезе // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2006. - № 3.- С. 71-73.

31. Кузнецова Т.А., Беседнова H.H., Урванцева А.М., Бакунина И.Ю., Звягинцева Т.Н., Дрозд Н.Н, Макаров В.А. Сравншельное исследование биологической активности фукоиданов из бурых водорослей // Вестник ДВО РАН.- 2006,- Т. 130. - №6. - С. 105-110.

32. Крохмаль Т.С., Агафонова И.Г., Кузнецова Т.А., Звягинцева Т.Н. Гепатопротекторные свойства фукоидана, выделенного из бурой водоросли Fucus evanescens // Материалы II региональной научной конференции "Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии": тез. дога,- Владивосток, 2006,- С. 117.

33. Дрозд H.H., Толстенков A.C., Мигаль И., Киютина М., Банникова Г.Е, Макаров В.А., Варламов В П, Кузнецова Т.А., Беседнова H.H., Шевченко Н.М., Звягинцева Т.Н. Фармахо-динамические параметры антикоагулянтов на основе сульфатированных полисахаридов из морских водорослей // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2006. - Т. 142. -№11.-С. 537-540

34. Korolenko Т.А., Alexeenko T.V., Sanaeva S. Y., Venediktova A.A., Kogan G., Besednova N.N., Kuznetsova T.A., Zvyaginzeva T.N., Kaledin V.l. Effect of immunomodulator biological response modifiers on murine tumor and metastases // Materials of 4th Conference on Experimental and Translational Oncology: book of abstracts. Kranjska gora, Slovenia. - 2006. - P. 88.

35. Кузнецова Т.А., Киняйкин М.Ф., Буякова Е.Д., Семеновых Л.Г., Суханова Г.И., Беседнова H.H., Эпштейн Л.М. Динамика гуморальных факторов естественной резистентности у больных хроническими обструктивными болезнями легких под влиянием иммунокоррекции // Цитокины и воспаление,- 2007.- Т.6. - №4. - С. 59-63.

36. Алексеенко Т.В., Жанаева С.Я., Бенедиктова A.A., Звягинцева Т.Н., Кузнецова Т.А., Беседнова H.H., Короленко Т.А. Противоопухолевая и аншметастатическая активность суль-фатированного полисахарида фукоидана, выделенного из бурой водоросли Охотского моря Fucus evanescens II Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2007. - Т. 143. -№6. - С. 675-677.

37. Кузнецова Т.А., Иванушко Л.А., Беседнова H.H.. Звягинцева Т.Н., Соловьева Т.Ф. Эф-фектвность БАВ из морских гидробионтов при экспериментальной эндотоксинемии // Российский иммунологический журнал,- 2008. - Т.2 (11). - №2-3. - С. 269.

38. Кузнецова, Т.А. Влияние комплекса иммуноактивных пептидов (тинростима) на систему гемостаза / Т.А. Кузнецова // Материалы Ш Межд. научно-пракг. конференции "Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки": тез. докл. -Владивосток: ТИНРО-Центр, 2008,- С. 341-342.

39. Кузнецова Т.А., Пивненко Т.Н., Эпштейн Л.М., Беседнова Н.Н. Влияние комплекса иммуноактивных пептидов - тинростима - на активность протеолитических ферментов // Известия ТИНРО,- 2008,- Т. 154. - С. 372-378.

40. Kusaykin M., Bakunina I., Sova V., Ermakova S., Kuznetsova T., Besednova N., Zaporozhets T. and Zvyagintseva T. Structure, biological activity and enzymatic transfonnation of fiicoidans from the brown seaweeds //Biotechnology Journal. - 2008. - Vol. 3. - P. 904-915.

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АОК - антителообразующие клетки

АГГГВ - активированное парциальное тромбопластиновое время

AT III - антитромбин III

аХа активность - активность против фактора свертывания крови Ха

alla активность - активность против фактора свертывания крови Па

БАД - биологически активная добавка к пище

ГА - гемагглютинины

ГЛ - гемолизины

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ДВС-синдром - синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови

ЛИС - липополисахарид

Лф - лимфоциты

М.м. - молекулярная масса

нет - нитросиний тетразолий

Нф - нейтрофид

Мф - макрофаг

пв - иротромбиновое время

ион - полиорганная недостаточность

РФМК - растворимые фибрин-мономерные комплексы

СПЖ - средняя продолжительность жизни

ТВ - тромбиновое время

ФА - фибринолитическая активность

ФГ - фибриноген

ФИ - фагоцитарный показатель

ФЧ - фагоцитарное число

ФТ - орто-фенантролиновый тест

ХОБЛ - хроническая обструктивная болезнь легких

ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы

ЭБ - эритроциты барана

CD - cell differentiation antigen - антигены кластеров дифференцировки клеток

CSF - colonystimulation factor - колониестимулирующий фактор

IFN - interferon - интерферон

IL - interleukin - интерлейкин

Ig - immunoglobulin - иммуноглобулин

Thl, 2 - T-hclper-1,2- субпопуляции CD4+ Т-лимфоцитов (хелперов)

TNFa - tumor necrosis factor - фактор некроза опухолей

TF - tissue factor - тканевой фактор

Подписано в печать 08.12.2008 г. Формат 60x90/16. 2 уч.-изд. л. Тираж 100 экз. Заказ № 107. Отпечатано в типографии издательского центра ФГУП «ТИНРО-Центр» г. Владивосток, ул. Западная, 10

Оглавление диссертации Кузнецова, Татьяна Алексеевна :: 2009 :: Москва

Введение.

Обзор литературы

Глава I. БАВ природного происхождения (полисахариды и пептиды) -корректоры нарушений иммунитета и гемостаза.

1.1. Взаимосвязи системы иммунитета и гемостаза.

1.2. Коррекция нарушений в системе иммунитета и гемостаза полисахаридами природного происхождения.

1.3. Коррекции нарушений в системе иммунитета и гемостаза пептидами природного происхождения.

1.4. Применение пептидов и полисахаридов при сепсисе и эндотоксиновом шоке.

1.5. Применение пептидов и полисахаридов при ХОБЛ.

Глава II. Биологическая активность фукоиданов и перспективы их применения в клинике.

Собственные исследования

Глава III. Материалы и методы.

Глава IV. Иммуномодулирующая активность фукоиданов, выделенных из разных видов бурых водорослей.

4.1 .Влияние фукоиданов из Fucus evanescens, Laminaria cichorioides и Laminaria japónica на факторы врожденного и приобретенного иммунитета

4.1.1. Влияние фукоиданов на гуморальный иммунный ответ.

4.1.2. Влияние фукоиданов на клеточный иммунный ответ.

4.1.3. Влияние фукоиданов на функциональную активность нейтрофилов.

4.2. Иммуномодулирующая активность фукоидана из F. evanescens и его модифицированных образцов.

4.3. Иммуномодулирующая активность фукоидана из F. evanescens в сравнении с гепарином.

4.4. Иммуномодулирующая и противовоспалительная активность фукоидана из F. evanescens при разных способах введения.

4.5. Влияние фукоидана из F. evanescens на продукцию цитокинов.Л

Глава V. Антикоагулянтная и фибринолитическая активность фукоиданов

5.1. Механизмы антикоагуляной активности фукоиданов из F. evanescens и L. cichorioides.

5.1.1. Влияние фукоиданов на систему свертывания крови in vitro и in vivo в базовых коагуляционных тестах.

5.1.2. Ингибиторная активность фукоиданов по отношению к тромбину (фактору Па) и к фактору Ха.

5.1.3. Способность фукоиданов к комплексообразованию с протамина сульфатом.

5.2. Влияние фукоидана из F. evanescens на систему фибринолиза in vitro и in vivo.

Глава VI. Применение фукоидана из F. evanescens для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза на модели эндотоксинемии.

6.1. Влияние фукоидана на выживаемость животных.

6.2. Влияние фукоидана на функциональную активность нейтрофилов.

6.3. Влияние фукоидана на продукцию цитокинов.

6.4. Влияние фукоидана на систему гемостаза.

6.5. Влияние фукоидана на состояние внутренних органов и микроциркуляторного русла.

Глава VII. Антикоагулянтная и фибринолитическая активность тинростима

7.1. Влияние тинростима на систему свертывания крови по внутреннему и внешнему пути in vitro и in vivo.

7.2. Влияние тинростима на систему фибринолиза in vitro и in vivo.

7.3. Влияние тинростима на активность протеолитических ферментов трипсина и химотрипсина.

7.4. Применение тинростима для коррекции нарушений гемостаза на модели эндотоксинемии.

Глава VIII. Применение тинростима в комплексном лечении больных ХОБЛ

8.1. Показатели клеточного и гуморального иммунитета у больных ХОБЛ.

8.2. Показатели плазменного звена гемостаза у больных ХОБЛ.

8.3. Клиническая эффективность тинростима в комплексном лечении больных ХОБЛ.

8.4. Взаимосвязь показателей иммунитета и гемостаза у больных

ХОБЛ.

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Кузнецова, Татьяна Алексеевна, автореферат

Актуальность проблемы

Внимание исследователей в последние десятилетия привлекает такой аспект действия иммуномодуляторов, как влияние на систему гемостаза. Работами ряда авторов было показано, что в организме функционирует единая клеточно-гуморальная система защиты, включающая факторы врожденного и приобретенного иммунитета и гемостаз. Установлены иммунные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и при патологии, которые свидетельствуют о высокой сопряженности реакций иммунитета и гемостаза, составляющих единую защитную систему организма [43, 57, 142, 143, 144, 182, 220, 527]. В частности, показано, что реализация иммунного ответа сопровождается обязательным повышением гемокоагуляционного потенциала организма вследствие активации иммунокомпетентных клеток и клеток эндотелия. Установлено, что тимус у млекопитающих и сумка Фабрициуса у птиц являются не только центральными органами иммунитета, но и принимают участие в регуляции функций системы гемостаза посредством продукции гуморальных субстанций (тимозин, тимулин, тимопоэтин, бурсилин, цитокины) [43, 44, 45, 57, 87, 143, 144, 221]. Дальнейшее изучение механизмов этой взаимосвязи подтвердило, что кооперация систем иммунитета и гемостаза осуществляется лимфоцитами, моноцитами и макрофагами, нейтрофилами, клетками эндотелия, тромбоцитами, системой комплемента, эйкозаноидами, цитокинами и другими медиаторами иммунного и воспалительного ответа [57, 87, 142, 144, 316, 456, 470, 527]. С учетом того, что цитокины осуществляют связь между всеми системами организма (иммунной, нервной, эндокринной, кроветворной и др.) и служат для их вовлечения в регуляцию единой защитной реакции организма, доказана регуляторная роль цитокинов (ТЫРа, 1Ь-1, 1Ь-6, 1Ь-8, СБР и др.) в отношении системы гемостаза. Так, установлено, что провоспалительные цитокины (ТЫРа, 1Ь-1а и 1Ь-1р, 1Ь-6, 1Ь-8) опосредуют дефекты в процессах коагуляции и фибринолиза. Механизм действия провоспалительных цитокинов заключается в том, что они способствуют экспрессии на эндотелиальных клетках, моноцитах и макрофагах тканевого фактора (TF), которому принадлежит центральная роль в процессах свертывания крови, что в свою очередь приводит к усилению прокоагулянтной активности. Эти цитокины также обусловливают снижение активности физиологических антикоагулянтов и торможение фибринолиза за счет уменьшения секреции активатора плазминогена и увеличения концентрации его ингибитора [57, 59, 329, 353, 354, 470, 505, 527]. В регуляции системы гемостаза показана немаловажная роль противовоспалительных цитокинов (IL-4 и IL-10), которые, напротив, способствуют торможению экспрессии TF и вызывают гипокоагуляцию [52, 58, 440].

О существовании единой клеточно-гуморальной системы защиты организма свидетельствует также общность антигенов HLA, кодирующих состояние иммунитета и гемостаза. Так, показаны тесные взаимосвязи между антигенами HLA и системами иммунитета и гемостаза, которые, как правило, имеют отношение к заболеваниям, сопровождающимся развитием иммунной недостаточности [7, 236, 269]. Подтверждением взаимосвязей служит тот факт, что как первичные, так и вторичные иммунодефицитные состояния проявляются клинически не только в виде инфекций, но и часто сочетаются с гемостатическими расстройствами (например, синдром Вискотта-Олдрича) [304].

Установлено, что изменения показателей систем иммунитета и гемостаза носят содружественный фазовый характер при острых и хронических воспалительных процессах бактериальной этиологии, Б А [45, 51, 89, 243, 272], септических состояниях и эндотоксиновом шоке (хирургический сепсис, сепсис новорожденных, перитониты, термические травмы и др. виды сепсиса) [25, 51, 43, 57, 277, 287, 445], токсических гепатитах [54, 56], сахарном диабете [46, 47], онкологических заболеваниях [25], инфекционных заболеваниях [79, 132, 183, 145].

Таким образом, тесные взаимосвязи между системами иммунитета и гемостаза присущи всем физиологическим и патологическим процессам, а наличие взаимосвязей этих систем предопределяет возможность использования иммуномодуляторов для коррекции нарушений гемостаза. В связи с этим актуальным является поиск биологически активных веществ (БАВ), воздействующих одновременно как на систему иммунитета, так и на систему гемостаза, что, по-существу, является новым подходом к лечению заболеваний, протекающих с подобными нарушениями.

В этом аспекте привлекают внимание биополимеры (БАВ) из морских гидробионтов, полученные в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН и Тихоокеанском научном рыбохозяйственном центре, в частности, фукоиданы (сульфатированные полисахариды), выделенные из бурых водорослей Охотского моря Fucus evanescens, Laminaria cichorioides, Laminaria japónica, и тинростим (комплекс пептидов), полученный из оптических ганглиев кальмаров промысловых видов. Наш выбор обусловлен тем, что при наличии сырьевой базы и экологически чистых и экономичных технологий производства, эти биополимеры (как фукоиданы, так и тинростим) выделены методами, приоритетность которых защищена патентами РФ, имеют уникальную структуру, обладают широким спектром биологической активности, т.е. имеют потенциальные возможности лекарственных препаратов. Кроме того, тинростим входит в состав БАД к пище («Тинростим-СТ») и широко используется в клинической практике [27, 78, 82, 122, 184, 225]. Однако, нерешенными оставались вопросы, касающиеся эффектов фукоиданов на гуморальные и клеточные факторы иммунитета при пероральном введении, что является важным для конструирования БАД к пище и таблетированной лекарственной формы, а также проблема исследования иммуномодулирующей активности фукоиданов из разных видов бурых водорослей и различных модификаций фукоиданов для отбора образца с оптимальными показателями. Не изученными до настоящего времени оставались механизмы антикоагулянтного действия этих биополимеров и их влияние на систему фибринолиза, в том числе при введении per os. Также не апробировалось ранее применение этих биополимеров при различных проявлениях «эндотоксиновой агрессии» в экспериментальных и клинических условиях для коррекции нарушений иммунитета и гемостазагв частности, при ХОБЛ и-моделировании эндотоксинемии.

Цель работы:

Изучение механизмов иммуномодулирующего и антикоагулянтного действия биополимеров из морских гидробионтов (фукоиданов из бурых водорослей Охотского моря F. evanescens, L. cichorioides, L. japónica и тинростима — комплекса пептидов из оптических ганглиев кальмаров промысловых видов), экспериментальное обоснование возможности разработки лекарственных препаратов и биологически активных добавок к пище на их основе для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза.

Задачи исследования:

2. Установить механизмы антикоагулянтного действия фукоидана из F. evanescens.

4. Изучить механизмы антикоагулянтного действия тинростима.

5. Исследовать возможность применения тинростима в качестве средства сопровождения базисной терапии больных хронической обструктивной болезнью легких для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза.

6. Разработать новые БАД к пище на основе фукоиданов из бурых водорослей Охотского моря F. evanescens и L. japónica.

Научная новизна и теоретическая значимость работы

Теоретическая значимость работы заключается в выявлении механизмов действия фукоидана и тинростима на систему гемостаза. Установлено,.„что фукоидан оказывает, как прямое, так и опосредованное (с участием гуморальных и клеточных факторов иммунитета) действие на систему гемостаза и фибринолиза. Фукоидан действует на факторы внутреннего, и внешнего путей свертывания, а также на конечный этап свертывания и демонстрирует ингибиторную активность в отношении тромбина (фактора Па) и фактора Ха. Антикоагулянтная активность фукоидана связана с плазменным антитромбином III, который превращается из медленно действующего в быстродействующий ингибитор тромбина. Влияние фукоидана на систему фибринолиза осуществляется путем активации эндогенной фибринолитической системы крови и связано с повышением потенциальной активности плазминовой системы. Тинростим оказывает опосредованное влияние на систему гемостаза и фибринолиза, проявляя регуляторный эффект на факторы гуморального и клеточного иммунитета. Одним из механизмов этого является восстановление баланса цитокинов, а именно снижение продукции цитокинов (TNFa, IL-la, IL-6), обладающих прокоагулянтной активностью, приводящее к коррекции нарушений гемостаза, купированию явлений ДВС-синдрома.

Впервые показано, что иммуномодулирующие эффекты фукоидана при пероральном применении аналогичны таковым при парентеральном.

Получены новые данные о зависимости биологической активности фукоиданов от их структурных особенностей, расширяющие теоретические представления о закономерностях взаимосвязей структура-функция.

Впервые показано, что фукоидан способствует повышению выживаемости и продолжительности жизни, коррекции показателей иммунитета и гемостаза, а также снижению степени микроциркуляторных нарушений и вторичных дистрофически-деструктивных изменений в паренхиматозных органах животных — при экспериментальной эндотоксинемии.

Впервые показано, что тинростим при включении в комплексную терапию больных ХОБЛ нормализует показатели систем иммунитета и гемостаза.

Практическая значимость работы

Разработаны и утверждены ТУ и ТИ на новые БАД к пище на основе фукоиданов из F. evanescens и L. japónica; БАД Фуколам®» разрешен МЗ РФ к производству, реализации и применению на территории Российской Федерации и выпускается компанией ООО «Биополимеры».

Показана целесообразность применения тинростима в составе БАД «Тинростим-СТ» для коррекции нарушений иммунной системы и системы гемостаза у больных ХОБЛ и рекомендовано его включение в качестве средства сопровождения базисной терапии этой категории пациентов.

Материалы диссертации были использованы при подготовке:

• Методических рекомендаций «Применение биологически активной добавки к пище «Тинростим-СТ» в комплексном лечении больных ХОБЛ (хронической обструктивной болезнью легких) для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза» (Авторы: Кузнецова Т.А., Киняйкин М.Ф., Петраковская В.А., Суханова Г.И., Эпштейн Л.М.). Утверждены Департаментом здравоохранения Администрации Приморского края. Владивосток. - 2007.

• Патента РФ «Средство, обладающее антикоагулянтным и иммунотропным действием» (№ 2247574"от"20.03~.05тАвторы: Шевченко Н.Мг, Звягинцева - — Т.Н., Исаков В.В., Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С., Беседнова H.H., Момот А.П., Мамаев А.Н. Заявитель и патентообладатель: Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН. Per. № заявки 2002135524/15. Заявл. 20.07.04. Опубл. 20.03.05. Бюлл. № 7)

• Патента РФ «Способ получения фукоидана из ламинарии» (№2302429 от 07.10.2007. Авторы: Врищ Э.А., Ковалев H.H., Эпштейн Л.М., Якуш Е.В., Беседнова H.H., Артюков A.A., Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С. Заявитель и патентообладатель: Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр. Федеральное унитарное предприятие. Per. № заявки 2005132687/13. Заявл. 2005.10.24. Опубл. 2007.07.10. Бюлл. № 19)

• Патента РФ «Пористый сорбент с гепатопротекторными свойствами» (№ 2329864 от 04.12.2007. Авторы: Коненков В.И., Любарский М.С., Рачковская Л.Н., Бгатова Н.П., Беседнова H.H., Бородин Ю.И., Кузнецова Т.А., Шевченко Н.М., Кусайкин М.И., Имбс Т.И., Звягинцева Т.Н., Таран В.Н. Заявитель и патентообладатель: ГУ институт клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН. Per. № заявки 2006107349/15. Заявл. 09.03.2006. Опубл. 27.07.2008. Бюлл. № 21)

Патента РФ "Биологически активный продукт из бурой водоросли, биологически активная добавка к пище, безалкогольный напиток, парфюмерно-косметическое средство" (№2315487 от 27.01.2008. Авторы: Шевченко Н.М., Имбс Т.И., Звягинцева Т.Н., Кусайкин М.И., Кузнецова Т.А., Запорожец Т.С., Беседнова H.H., Гафуров Ю.М., Рассказов В.А., Таран В.Н. Заявитель и патентообладатель: Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН. Per. № заявки 2006115454/13 Заявл. 04.05.2006. Опубл. 27.01. 2008. Бюлл. № 3)

Научно-технической документации (ТИ и ТУ 9284-065-02698170-2005, инструкция по применению) на БАД «Фуколам» на основе фукоидана из бурой водоросли F. evanescens Охотского моря. Центром гигиенической сертификации пищевой продукции при Институте питания РАМН проведены соответствующие" исследования и экспертиза представленных документов (заключение ГУ НИИ питания РАМН № 72/Э-673 6/6-05 от 20.10.05), санитарно-эпидемиологическое заключение

77.99.13.003 .Т.000155.01.06 от 30.01.06; получено свидетельство Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека о государственной регистрации (№ 77.99.23.3.У.739.1.06 от 30.01.06)

Научно-технической документации (ТУ 9283-298-00472012-06) на БАД к пище «Нуклеидан» на основе фукоидана из бурой водоросли L. japónica и нуклеатина. Центром гигиенической сертификации пищевой продукции при Институте питания РАМН проведены соответствующие исследования и экспертиза представленных документов (санитарно-эпидемиологическое заключение №77.99.13.003 .Т.001626.08.06 от 22.08.2006 г.; свидетельство Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека о государственной регистрации № 77.99.23.3.У.8933.8.06 от 23.08.2006 г.)

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Исследуемые биополимеры — сульфатированные полисахариды фукоидаиы и пептидный комплекс тинростим - эффективно регулируют состояние систем иммунитета и гемостаза и могут служить основой для разработки БАД к пище и лекарственных препаратов.

3. Фукоидан из F. evanescens оказывает как прямое, так и опосредованное влияние на систему коагуляционного гемостаза и фибринолиза, демонстрирует ингибиторную активность в отношении тромбина (фактора Па) и фактора Ха. Антикоагулянтная активность фукоидана связана с плазменным антитромбином III.— - -

4. Введение фукоидана из F. evanescens обеспечивает повышение резистентности мышей к токсическому действию ЛПС псевдотуберкулезного микроба при экспериментальной эндотоксинемии. Фукоидан способствует коррекции показателей врожденного иммунитета, снижению степени микроциркуляторных нарушений и вторичных дистрофически-деструктивных изменений в паренхиматозных органах животных, предотвращает развитие ДВС-синдрома или ослабляет его течение, что обусловлено его регулирующим влиянием на системы иммунитета и гемостаза.

7. Применение тинростима в составе БАД к пище «Тинростим-СТ» на фоне базисной терапии больных ХОБЛ приводит к коррекции показателей клеточного и гуморального иммунитета (повышению содержания СОЗ+-, СП4+- лимфоцитов, усилению фагоцитарной активности нейтрофилов крови, снижению содержания ЦИК, повышению уровня компонентов комплемента, снижению концентрации провоспалительных цитокинов в сыворотке крови) и к положительной динамике ряда показателей системы гемостаза (снижению интенсивности гиперкоагуляции и увеличению фибринолитической активности крови).

Апробация работы

Основные положения диссертации были представлены на Российской научной конференции «Новые биомедицинские технологии с использованием биологически активных добавок» (Владивосток, 1998); Межрегиональной научно-практической конференции с Международным участием «Вакцинопрофилактика: проблемы настоящего и будущего» (Владивосток, 2000); Русско-японском международном медицинском симпозиуме (Благовещенск, 2000); Тихоокеанской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины» (Владивосток, 2001); 1-ом Международном конгрессе «Биотехнология — состояние и перспективы развития» (Москва, 2002); Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование» (Анталия, 2003); Региональной научной конференции «Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии» (Владивосток, 2004); Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование» (Таиланд, 2004); I Всероссийской конференции по иммунотерапии с международным участием «Физиология иммунной системы» (Сочи, 2003); II и III Международных научно-практических конференциях «Морские прибрежные экосистемы: водоросли, беспозвоночные и продукты их переработки» (Архангельск, 2005 и Владивосток, 2008); II Дальневосточном конгрессе «Человек и лекарство» (Владивосток, 2005); 4-ой Конференции по экспериментальной и трансплантационной онкологии (Красная Гора, Словения, 2006); Международной конференции «Гемореология в микро- и макроциркуляции» (Ярославль, 2005); I Сибирском съезде лимфологов с международным участием «Проблемы экспериментальной, клинической и профилактической лимфологии» (Новосибирск, 2006); II Региональной научной конференции «Исследования в области физико-химической биологии и биотехнологии» (Владивосток, 2006); Объединенном иммунологическом Форуме (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации. Основные положения и результаты работы отражены в 40 научных работах, в том числе: 1 статья - в международной печати, 12 - в журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов докторских диссертаций, 20 - статей и тезисов, опубликованных в материалах Всесоюзных, Всероссийских и международных конференций и симпозиумов, а также в 4 патентах на изобретение и 1 методических рекомендациях.

Заключение диссертационного исследования на тему "Коррекция нарушений иммунитета и гемостаза биополимерами из морских гидробионтов (экспериментальные и клинические аспекты)"

ВЫВОДЫ

1. Новые оригинальные сульфатированные полисахариды фукоиданы из бурых водорослей Тихого океана (Fevanescens, L. cichorioides, L. japónica) и полипептид из нервной ткани кальмара тинростим эффективно регулируют состояние систем иммунитета и гемостаза и могут служить основой для разработки БАД к пище и лекарственных препаратов.

2. Фукоиданы из бурых водорослей F. evanescens, L. cichorioides и L. japónica оказывают стимулирующее влияние на факторы врожденного и приобретенного иммунитета. Количественные различия в проявлениях иммуномодулирующей активности разными фукоиданами не являются статистически значимыми по преобладающему большинству показателей. Интенсивность стимуляции зависит от структурных особенностей фукоиданов. Приоритет для практического использования имеет фукоидан из водоросли F. evanescens в связи с рядом структурных преимуществ и обширным ареалом водоросли на Дальнем Востоке России.

3. Фукоидан из водоросли F. evanescens не токсичен в широком диапазоне доз, стимулирует реакции гуморального и клеточного иммунитета in vivo и in vitro, проявляет свойства модулятора продукции цитокинов in vitro. Иммуномодулирующие эффекты фукоидана при введении per os сравнимы с таковыми при парентеральном введении. Десульфатирование фукоидана из водоросли F. evanescens приводит к снижению, а освобождение от полифенолов - к повышению показателей функциональной активности нейтрофилов in vitro, что важно для практического использования.

4. Фукоидан из F. evanescens действует на систему коагуляционного гемостаза и фибринолиза как прямо, так и опосредованно, проявляя ингибиторную активность в отношении тромбина (фактора Па) и фактора Ха. Соотношение aXa/alla активностей составляет 1,3-2,3, что является показателем терапевтического эффекта.

Механизм антикоагулянтной активности фукоидана связан с плазменным антитромбином III: фукоидан превращает антитромбин III из медленнодействующего в быстродействующий ингибитор тромбина.

5. Фукоидан из F. evanescens повышает резистентность мышей к токсическому действию ЛПС псевдотуберкулезного микроба, восстанавливает функциональную активность нейтрофилов, ингибирует повышенный уровень провоспалительных цитокинов (TNFa, IL-la, IL-6), снижает степень микроциркуляторных нарушений и вторичных дистрофически-деструктивных изменений в паренхиматозных органах животных.

6. Тинростим не оказывает прямого влияния на факторы свертывания крови и систему фибринолиза (in vitro), но проявляет активность при многократном парентеральном введении в организм (in vivo), оказывая антикоагулянтный эффект и активирующее влияние на систему фибринолиза.

8. Методом корреляционного анализа выявлена прямая тесная связь уровня Т№а и умеренная связь уровня 1Ь-6, а также обратная связь между содержанием СБЗ+- лимфоцитов и показателями ортофенантролинового теста; обратная умеренная связь уровня ТЫБа и 1Ь-6 с показателями фибринолитической активности, что свидетельствует о сопряженности нарушений в системах иммунитета и гемостаза у обследованных больных ХОБЛ и обосновывает целесообразность применения иммуномодуляторов, оказывающих влияние на обе системы.

9. Применение БАД «Тинростим-СТ» на фоне базисной терапии больных ХОБЛ приводит к коррекции показателей клеточного и гуморального иммунитета (повышению содержания СОЗ+-, СЭ4+-лимфоцитов, усилению фагоцитарной активности нейтрофилов крови, снижению содержания циркулирующих иммунных комплексов, повышению уровня компонентов комплемента, снижению концентрации провоспалительных цитокинов в сыворотке крови).

Рекомендации для внедрения результатов исследования:

- в науку

При разработке новых БАД к пище и лекарственных препаратов рекомендуется учитывать результаты экспериментальных исследований по комплексной оценке действия фукоидана из F. evanescens на систему иммунитета и гемостаза.

- в медицинскую практику

Рекомендуется использовать БАД «Тинростим-СТ» как средство сопровождения базисной терапии больных ХОБЛ (хронической обструктивной болезнью легких) для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза по 1 таблетке, содержащей 1 мг действующего вещества 2 раза в день до еды утром и вечером в комплексе с базисной терапией, курс приема 15 дней (методические рекомендации «Применение биологически активной добавки к пище «Тинростим-СТ» в комплексном лечении больных ХОБЛ (хронической обструктивной болезнью легких) для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза» (Авторы: Т.А. Кузнецова, М.Ф. Киняйкин, В.А. Петраковская, Г.И. Суханова, Л.М. Эпштейн). Утверждены Департаментом здравоохранения Администрации Приморского края. Владивосток.- 2007).

При лечении псевдотуберкулезной инфекции рекомендуется учитывать роль ЛПС Y. pseudotuberculosis в нарушениях в системе гемостаза и возможность коррекции этих нарушений включением в лечебный комплекс фукоидана и тинростима.

Широкий спектр биологических свойств, ресурсная обеспеченность, патентная защищенность являются основой для разработки лекарственных форм на основе фукоиданов. - в учебный процесс

Рекомендуется использовать в учебном процессе медицинских ВУЗов, а также на курсах ФГЖ новые данные о механизмах действия на систему гемостаза фукоидана и тинростима. г

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время актуальным является поиск новых высокоэффективных, малотоксичных БАВ из доступных природных источников с целью расширения арсенала лекарственных препаратов. Особое внимание в качестве источника БАВ привлекает Мировой океан. Неослабевающий интерес вызывают соединения полисахаридной природы, в частности сульфатированные ПС - фукоиданы, выделенные из бурых водорослей. Фукоиданы характеризуются разнообразными фармакологическими свойствами, полезными с точки зрения практического использования [116, 352, 393]. В ряду биополимеров природного происхождения выделяются также иммуноактивные пептиды (цитомедины), в частности, выделенные из морских беспозвоночных, к которым относится полипептидный комплекс из оптических ганглиев кальмара - тинростим. Цитомединам принадлежит важнейшая роль в регуляции функций гомеостаза организма. Их характеризует полифункциональность, быстрый ответ организма на введение, высокая активность и отсутствие побочных эффектов [143, 144, 172, 181,287].

Известно, что иммунитет тесно связан с системой гемостаза и неспецифической резистентностью, которые вместе составляют единую клеточно-гуморальную защитную систему организма [56, 57, 143, 144, 223]. Наличие этих взаимосвязей предопределяет поиск препаратов, воздействующих одновременно как на систему иммунитета, так и на систему гемостаза, что, по-существу, является новым подходом к лечению заболеваний, протекающих с нарушениями в этих системах.

В этом аспекте и в соответствии с поставленной целью, нами изучены механизмы иммуномодулирующего и антикоагулянтного действия ярких представителей БАВ природного происхождения - фукоиданов из разных видов бурых водорослей и тинростима, разработаны БАД к пище на основе фукоиданов, дано экспериментальное обоснование возможности получения лекарственных средств для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза.

Прежде всего, нами проведено сравнительное исследование иммуномодулирующей активности фукоиданов из 3-х видов бурых водорослей (F. evanescens, L. cichorioides и L. japónica) и установлено, что все исследуемые образцы обладают иммуномодулирующим действием, усиливая гуморальные и клеточные факторы иммунитета, а также оказывают стимулирующее влияние на показатели функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов. При этом, значимых различий в проявлениях иммуномодулирующей активности разными фукоиданами нами не выявлено.

Структурный анализ исследуемых фукоиданов свидетельствует, что они различаются между собой молекулярными массами, строением главной цепи и степенью сульфатирования. М.м. изучаемых фукоиданов находится в пределах 20-80 кДа, как и у большинства биологически активных фукоиданов. Наименьшей м.м. обладает фукоидан из F. evanescens, представляющий собой линейный полимер, состоящий из чередующихся (1—>3)- и (1—Несвязанных остатков фукозы, сульфатированных, в основном, по С-2. Этот фукоидан, а также фукоидан из L. japónica имеют среднюю степень сульфатирования. Наибольшую степень сульфатирования имеет фукоидан из L. cichorioides, представляющий собой полностью сульфатированный по С-2 и по С-4 (1—>3)-а-Ь-фукан. Основным структурным компонентом фукоиданов из F. evanescens и L. cichorioides является фукоза (90% и 100% соответственно). Фукоидан из L. japónica является (1—>3)-а-Ь-фуканом, сульфатированным в основном по 4 положению остатков фукозы, содержание которой составляет 70%, и отличается высоким содержанием галактозы (15%) [308, 556]. Несмотря на различия в химической структуре фукоиданов, мы не выявили статистически значимой разницы в проявлениях их иммуномодулирующей активности за исключением отдельных показателей. Иными словами, эти различия не являются существенными для проявления иммуномодулирующей активности. Исследованные нами сульфатированные полисахариды из трех видов бурых водорослей оказывают стимулирующее влияние на факторы врожденного и приобретенного иммунитета, что открывает перспективы их практического использования в медицинской практике в качестве иммуномодулирующих средств.

В то же время при исследовании антикоагулянтных свойств фукоиданов в экспериментах in vitro и in vivo мы отметили, что сила и длительность антикоагулянтного эффекта фукоидана из L. cichorioides была выше по сравнению с таковой у фукоидана из F. evanescens. Следовательно, отмеченные нами структурные особенности фукоиданов оказывают влияние на их антикоагулянтную активность.

В ряде работ приводятся неоднозначные материалы, касающиеся взаимосвязи между антикоагулянтной активностью и структурой фукоиданов из различных источников. В частности, выявлена зависимость от молекулярной массы [490, 489, 493, 530, 548], содержания сульфатов [449, 489, 491, 514, 539], моносахаридного состава и структуры ПС-цепей [490, 491, 492, 501, 530, 539], соотношения сульфаты / общие остаточные сахара [493]. Т.е., для проявления антикоагулянтных свойств важными являются величина м.м., количество и расположение сульфатных групп, а также моносахаридный состав.

Выявленные нами биологические эффекты, вероятно, обусловлены общими структурными характеристиками фукоиданов. Можно предположить, что во всех исследуемых нами фукоиданах присутствует «активный» центр, открытие которого является перспективой будущего. Незначительные количественные различия в проявлениях активности связаны с индивидуальными структурными особенностями фукоиданов, в частности, с наличием «минорных» моносахаридных компонентов.

Полученные результаты предполагают дальнейшее исследование взаимосвязи между структурой и функцией фукоиданов.

По нашему мнению, приоритет для практического использования имеет фукоидан, выделенный из F. evanescens, что обусловлено следующими обстоятельствами.

Бурая водоросль F. evanescens имеет обширный ареал и относится к числу наиболее массовых представителей бурых водорослей российского Дальнего Востока. Этот вид водорослей растет на мелководье, легко доступен и встречается вдоль всего побережья Курильских островов и Камчатки, а также в Приморском крае и на Сахалине [314].

Известно, что разные виды бурых водорослей значительно различаются по содержанию и составу фукоиданов. Наиболее богатым их источником являются представители порядка Fucales [556]. Выход (содержание) фукоидана из бурой водоросли F. evanescens составляет 15 — 20%, из L. cichorioides — около 10 %, из L. japónica - 3% [308, 556].

Таким образом, использование водоросли F. evanescens как источника фукоидана может быть наиболее перспективным, что обусловлено ее обширным ареалом на Дальнем Востоке России, а также высоким содержанием фукозосодержащих полисахаридов. Отсутствие в ее составе ламинарана значительно упрощает процедуру выделения и стандартизации фукоидана. Фукоидан из F. evanescens имеет небольшую молекулярную массу и среднюю степень сульфатирования, в его составе кроме фукозы, как основной структурной единицы, присутствуют в минорных количествах и другие моносахаридные остатки.

Хорошая растворимость фукоидана из F. evanescens (даже при высокой концентрации) в воде и кислых растворах вследствие низкой молекулярной массы и отсутствия примесных протеинов [308] вкупе с отсутствием токсических свойств открывают перспективы разработки лекарственной формы - иммуномодулятора и антикоагулянта растительного происхождения.

С целью более глубокого изучения зависимости биологической активности фукоидана из F. evanescens от его структурных особенностей, изложенных выше, мы исследовали его десульфатированный и освобожденный от полифенолов образцы. Следует отметить, что фукоидан из F. evanescens содержит наибольшее количество полифенолов (до 10%) по сравнению с двумя остальными фукоиданами.

Наши результаты показали, что под влиянием десульфатированного образца фукоидана адгезивная активность Нф была выражена в меньшей степени по сравнению с исходным фукоиданом из F. evanescens. По-видимому, это объясняется разной степенью сульфатирования этих образцов, а также различным типом гликозидных связей в них. Освобожденный же от полифенолов фукоидан из F. evanescens оказывал наибольший эффект на адгезивную активность нейтрофилов in vitro по сравнению с исходным, что может свидетельствовать об экранирующем эффекте полифенолов для проявления мембранотропной активности фукоидана. В то же время известно, что недиализуемые полифенольные соединения, главным образом высокомолекулярные флоротаннины, которые в виде примеси содержат фукоиданы, сами являются биологически активными веществами. Наиболее известны антиоксидантная и бактерицидная активность полифенолов [338, 347]. В связи со способностью избирательно инактивировать действие ингибиторов плазмина - а2-макроглобулина и аг-антиплазмина, полифенолы бурых водорослей рассматривают как потенциальные препараты для лечения тромбозов [536], а также как перспективные для лечения ревматизма, атеросклероза, рака, воспалительных и аллергических процессов [436]. Таким образом, освобождение фукоидана от полифенолов, приводящее к осветлению препарата, производимое с коммерческой целью (поскольку у светлого порошка лучший товарный вид и лучшая растворимость) и с научной целью (только светлый порошок фукоидана может быть использован в качестве субстрата для ферментов фукоиданаз, применяемых для исследования структуры фукоиданов) не снижает, а несколько усиливает его биологическую активность.

Далее наше исследование было посвящено детальному изучению иммуномодулирующей активности фукоидана из F. evanescens. Прежде всего была изучена иммуномодулирующая активность фукоидана из У7. еуапеясет в сравнении с гепарином с целью исследования возможности использования фукоидана как альтернативы гепарину. Таковую возможность отмечают ряд авторов [352, 474, 485]. Как отмечено в обзоре литературы, помимо антикоагулянтной активности гепарин обладает иммуномодулирующим, противовоспалительным, спазмолитическим, антигистаминным и другими положительными эффектами [165, 407, 411, 424, 450, 518]. С другой стороны, его применение может сопровождаться побочным действием (кровотечение как следствие тромбоцитопении, тромбоз, остеопороз, иммуносупрессивные эффекты, аллергические реакции и др.) [331, 408, 416, 417, 476, 508].

Сравнительное исследование сульфатированных полисахаридов (фукоидана и гепарина) было проведено в параллельных экспериментах. Было установлено, что фукоидан в широком диапазоне доз стимулирует гуморальный иммунный ответ и функциональную активность Нф. Гепарин в низких дозах оказывал стимулирующий эффект на гуморальные факторы иммунитета, а в высоких - депрессивный эффект на обе эти функции. Последнее согласуется с результатами по индуцированию иммунодефицита в системе нейтрофильных гранулоцитов путем внутрибрюшинного введения гепарина в дозах 100-200 мг/кг [191].

Таким образом, фукоидан в широком диапазоне доз обладает иммуностимулирующей активностью. В отличие от гепарина, показавшего иммунодепрессивные свойства в условиях нашего эксперимента при его применении в высоких дозах, фукоидан в аналогичных дозах не оказывал угнетающего действия на иммунную систему. Наличие у фукоидана иммуностимулирующей активности в широком диапазоне доз является его преимуществом по сравнению с гепарином, поскольку расширяет область применения фукоидана в клинической практике не только как антикоагулянтного, но и как иммуномодулирующего средства.

Следует отметить, что низкая доза гепарина, использованная в эксперименте (5 мг/кг, что соответствует 700 Ед/кг), сопоставима с дозой, вводимой людям с лечебной целью, а выявленный нами иммунодепрессивный эффект высокой дозы (100 мг/кг или 15000 Ед/кг) возможен при длительной гепаринотерапии неотложных состояний.

При исследовании различных БАВ немаловажное значение имеет эффективность разных способов их введения в организм. Как показали результаты наших экспериментов, фукоидан из Р. ечапезсет был эффективен в проявлении иммуномодулирующей и противовоспалительной активности при парентеральном и при пероральном введении. Как известно, оба этих способа введения приводят к системному распределению вводимого вещества (в нашем случае фукоидана) в кровяном русле [66].

Парентеральные (подкожный, внутрикожный, внутримышечный, внутривенный) способы введения БАВ и лекарственных препаратов имеют как ряд существенных преимуществ, так и недостатков. К последним относится возможность местных воспалительных и аллергических реакций, гнойно-септических осложнений, болезненность, психологическая непривлекательность, затраты на расходный материал [67]. Пероральный способ введения в организм БАВ является самым простым, адекватным и психологически привлекательным [66]. Однако при пероральном способе имеет место влияние многочисленных факторов и физиологических особенностей желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) на вводимое вещество и процесс его поступления во внутреннюю среду организма, доставку к соответствующим органам и тканям. Прежде всего, это неблагоприятное влияние ферментов ЖКТ, условий среды (рН), биологически активных продуктов обмена и жизнедеятельности микроорганизмов, а также зависимость процессов всасывания от молекулярной структуры и природы БАВ. Все эти факторы являются эволюционно выработанным приспособлением организма, обеспечивающим барьерную функцию ЖКТ на пути проникновения в организм чужеродных веществ [66]. Разработка пероральной формы препарата, требует выяснения роли всех вышеперечисленных неблагоприятных факторов в отношении конкретного БАВ.

Известно, что вещества полисахаридной природы и их комплексы при введении в ЖКТ сохраняют свою специфичность [67], откуда следует, что ЖЕСТ не является непреодолимым препятствием для проникновения биомолекул различной химической природы без потери своей биологической специфичности. В проникновении в кровь биомолекул основную роль играет всасывание, которое является функцией, основанной на активной деятельности слизистой оболочки.

Фукоиданы - высокомолекулярные соединения. Ранее считалось, что они действуют в кишечнике подобно пищевым волокнам -высокомолекулярным структурам, не способным проникать в кровь. В дальнейшем было показано, что фукоиданы, ламинараны, альгинаты бурых водорослей относятся к растворимым пищевым волокнам. Исследования последних лет показали, что в тонком кишечнике всасываются не только мономеры, но и высокомолекулярные соединения (поли- и олигосахариды; гликозаминогликаны) [70, 155]. В работе F. Hong et al. [477] показано, что высокомолекулярные ПС при пероральном введении поглощаются гастроинтестинальными макрофагами, мигрирующими в лимфоидные органы (селезенку, лимфоузлы, костный мозг). В макрофагах ПС расщепляются на малые растворимые биологически активные фрагменты (3 кДа) и секретируются во внеклеточное пространство. Эти фрагменты могут связываться с рецепторами на мембранах иммунокомпетентных клеток, опосредуя эффекты, аналогичные таковым при парентеральном введении высокомолекулярных ПС [477, 498]. Поскольку способность к поглощению ПС макрофагами неспецифична, можно допустить подобный механизм деградации исследуемого нами фукоидана при пероральном введении.

Рассматривая пути деградации фукоидана в организме, можно провести аналогию с процессами всасывания гепарина. Способы назначения обычного гепарина — подкожный и внутривенный. Гепарин также, как и другие гликозаминогликаны, довольно хорошо всасывается в желудке и кишечнике. Однако, в процессе всасывания гепарина при его контакте со слизистой оболочкой ЖЕСТ происходит частичное десульфатирование значительной части принятой внутрь дозы препарата. В результате этого снижается его антикоагулянтная и антитромботическая активность. Кроме того, десульфатированный гепарин утрачивает сродство к мембранам эндотелиальных клеток и большая его часть остается в кровяном русле, захватывается печенью, где разрушается под действием гепариназы и частично выводится почками в неизмененном или деполимеризованном виде, т.е. значительно ускоряется его элиминация из организма. [424]. Возможно, аналогичные процессы имеют место и в отношении фукоиданов. Однако, по данным ряда авторов, эффекты фукоиданов в отношении иммунной системы при введении per os сохранялись [393, 442, 509, 522, 523]. Исследованный нами фукоидан был эффективен в проявлении иммуномодулирующей, а также антикоагулянтной активности при различных способах его введения в макроорганизм, хотя для достижения эффекта, аналогичного таковому при парентеральном введении, необходимо было длительное (10-30-кратное) пероральное введение фукоидана.

В пользу применения фукоиданов per os свидетельствуют данные о том, что фукоиданы, ламинараны, альгинаты и другие высокомолекулярные соединения при пероральном поступлении оказывают полезный эффект на кишечную микрофлору, на процессы переваривания и всасывания в кишечнике, усваиваемость липидов и снижают риск развития рака [522, 523, 540, 541].

В связи с отмеченными обстоятельствами, дополнительным преимуществом исследованных нами фукоиданов по сравнению с гепарином является их эффективность не только при парентеральном введении, но и при приеме per os. При этом, открывается уникальная возможность использования фукоиданов в качестве компонентов пищевых продуктов и обычного гепарина - подкожный и внутривенный. Гепарин также, как и другие гликозаминогликаны, довольно хорошо всасывается в желудке и кишечнике. Однако, в процессе всасывания гепарина при его контакте со слизистой оболочкой ЖКТ происходит частичное десульфатирование значительной части принятой внутрь дозы препарата. В результате этого снижается его антикоагулянтная и антитромботическая активность. Кроме того, десульфатированный гепарин утрачивает сродство к мембранам эндотелиальных клеток и большая его часть остается в кровяном русле, захватывается печенью, где разрушается под действием гепариназы и частично выводится почками в неизмененном или деполимеризованном виде, т.е. значительно ускоряется его элиминация из организма. [424]. Возможно, аналогичные процессы имеют место и в отношении фукоиданов. Однако, по данным ряда авторов, эффекты фукоиданов в отношении иммунной системы при введении per os сохранялись [393, 442, 509, 522, 523]. Исследованный нами фукоидан был эффективен в проявлении иммуномодулирующей, а также антикоагулянтной активности при различных способах его введения в макроорганизм, хотя для достижения эффекта, аналогичного таковому при парентеральном введении, необходимо было длительное (10-30-кратное) пероральное введение фукоидана.

Результаты наших исследований позволяют также судить о некоторых механизмах иммуномодулирующей активности фукоидана из F. evanescens. Так, мы показали, что фукоидан усиливает гуморальный иммунный ответ, оказывая воздействие как на индуктивную, так и на продуктивную фазы антителогенеза. Эти результаты могут быть обусловлены возможным влиянием фукоидана как на процессы активации клеток, участвующих в антителообразовании, включая антигенпредставляющие клетки и Т-хелперы, так и на дифференцировку В-лимфоцитов в зрелые антителопродуценты. Усиление интенсивности реакции клеточного иммунитета (ГЗТ) при введении фукоидана до сенсибилизации свидетельствует о его стимулирующем влиянии на процесс образования (или пролиферацию) клона антигенспецифических Т-лимфоцитов, а применение фукоидана перед разрешающей дозой антигена указывает на способность лимфоцитов при повторной встрече с антигеном усиливать продукцию провоспалительных цитокинов.

Исследуемый нами фукоидан при воздействии in vitro и при введении in vivo значительно усиливает способность Нф к адгезии на пластик, что является признаком активации клеток, а также стимулирует процессы поглощения патогенных микроорганизмов и уничтожения их в Нф. Стимулирующий эффект при воздействии фукоидана in vitro свидетельствует о его прямом мембранотропном действии на клетки. При введении фукоидана in vivo стимулирующий эффект на Нф может быть обусловлен влиянием ряда других факторов, опосредующих активацию, в частности провоспалительных цитокинов.

Нами показано также, что фукоидан как при парентеральном, так и при пероральном введении оказывает влияние на индуцированную каррагинаном воспалительную реакцию, которое заключается в угнетении экссудативной фазы воспаления.

О способности фукоиданов блокировать воспаление при попадании в системный кровоток имеется ряд сообщений [267, 324, 482, 567]. В механизме противовоспалительного действия имеет место способность фукоиданов связываться с Р- и L-селектинами, препятствуя взаимодействию Лф и Нф с эндотелием сосудов [267, 567], либо со специфическими рецепторами, участвующими в передаче сигнала к клеткам [361]. С учетом этого, можно предположить, что фукоидан из F. evanescens при парентеральном и пероральном введении взаимодействует с селектинами эндотелия сосудов и препятствует адгезии Нф к эндотелию сосудов, что может быть одним из механизмов противовоспалительного эффекта и в нашем случае требует экспериментального доказательства.

В то же время в ряде исследований показаны провоспалительные свойства фукоиданов, проявление которых зависит от источника получения, структурных особенностей и способа введения биополимера [42, 190, 441, 510]. В пользу провоспалительных потенций фукоиданов свидетельствуют работы [366, 411, 430], в которых показана способность фукоиданов к индукции синтеза, преимущественно, провоспалительных цитокинов. Что касается способа введения, провоспалительный эффект фукоидана скорее всего реализуется в области его введения в макроорганизм, что и наблюдали авторы ряда работ [42, 510].

Изученный нами фукоидан из F. evanescens индуцирует синтез провоспалительных цитокинов (TNFa, IL-la, IL-8) в системе in vitro, а также стимулирует фагоцитарную активность Нф и продукцию активных форм кислорода, что свидетельствует о его провоспалительных свойствах и обеспечивает возможность его применения с целью повышения антиинфекционной резистентности. В частности, применение фукоидана на ранних этапах воспаления или инфекционного процесса может способствовать активации и миграции Нф в очаг воспаления, активации Мф и NK, усилению фагоцитоза и продукции супероксидных радикалов фагоцитирующими клетками, пролиферации лимфоцитов и другим провоспалительным эффектам.

При исследовании цитокининдуцирующей активности нами показано, что фукоидан оказывает стимулирующее влияние на продукцию цитокинов, вырабатываемых как Thl (IL-2 и IFNy), так и Th2 (IL-4) (интактными и стимулированными митогеном). IL-2 и IFNy - основные маркеры субпопуляции Thl, запускающие функциональные каскады иммунной .системы, включая активацию Т- и В- клеток, NK- клеток и макрофагов [255, 280, 320]. Увеличение продукции этих цитокинов под влиянием фукоидана может обуславливать его роль в отмеченных процессах и, в частности, установленное нами усиление реакции ГЗТ. Стимулирующий эффект фукоидана на продукцию IL-4, вырабатываемого преимущественно Th2, ответственными за реакции гуморального иммунитета, может служить одним из механизмов усиления иммунного ответа на введение модельного антигена (ЭБ) под влиянием фукоидана.

Продукты секреции субпопуляций Thl и Th2, как известно, негативно влияют на активацию противоположного клона [255, 320]. В полученных нами результатах, касающихся стимулирующего влияния фукоидана на продукцию цитокинов, вырабатываемых как Thl, так и Th2, мы не усматриваем противоречия. На деле, эффекты in vitro не всегда соответствуют таковым in vivo. Разнообразие эффектов in vivo зависит от многочисленных условий, в т.ч. экспериментальных, и не исключает одновременной продукции цитокинов, являющихся антагонистами [55, 284]. Следует также учитывать, что у человека вариант активации Т-хелперов с преимущественным участием Thl или Th2 усложняется за счет существования Т-хелперных клонов, секретирующих одновременно IL-2, IL-4 и IFNy и некоторые другие сочетания цитокинов. Клоны Thl и Th2 у человека, четко различающиеся по синтезу маркерных цитокинов, удается получить лишь при дополнительных воздействиях активирующих агентов [255, 320].

В подтверждение этого, нами показано, что введение фукоидана in vivo не сопровождается побочными нежелательными эффектами, характерными для парентерального введения различных цитокинов, а их уровень (у мышей) находится в границах физиологической нормы. Можно предполагать, что в основе действия фукоидана лежат общие механизмы, обеспечивающие синтез как про-, так и противовоспалительных цитокинов, например, ограничение избыточной их продукции с участием регуляторных ауто-, пара-, эндокринных и других механизмов [128, 255, 280].

Исследование цитокининдуцирующей способности фукоидана из F. evanescens in vitro показало также зависимость этого процесса от исходного уровня исследуемого цитокина. В действии фукоидана на покоящиеся (нестимулированные) клетки преобладает иммунорегуляторный эффект: исходно низкая продукция цитокинов усиливается, исходно высокая ослабляется. Стимулированные митогеном клетки отвечают снижением продукции цитокинов в культурах клеток крови с высоким уровенем цитокина после стимуляции и увеличением продукции при низких" и средних концентрациях цитокинов.

В целом, полученные нами результаты характеризуют фукоидан из F. evanescens как эффективный иммуномодулятор, оказывающий стимулирующее воздействие на факторы врожденного и приобретенного иммунитета. При этом, индексы стимуляции показателей гуморального и клеточного иммунитета, фагоцитарной и бактерицидной активности Нф при парентеральном введении фукоидана были сравнимы с таковыми при введении per os.

При исследовании влияния фукоиданов из F. evanescens и L. cichorioides на систему гемостаза в базовых коагуляционных тестах (АПТВ-, ТВ- и ПВ-) in vitro мы выявили дозозависимое удлинение времени свертывания плазмы, что свидетельствует об эффективном влиянии этих фукоиданов на механизмы внутреннего и внешнего путей свертывания, а также на конечный этап свертывания.

Аналогичные нашим данные были получены при исследовании антикоагулянтного действия in vitro фукоидана из бурой водоросли Ecklonia cava: авторы наблюдали значительное (в десятки раз) удлинение времени свертывания в АПТВ- и ТВ-тестах и не более, чем в 1,5-4 раза — в ПВ-тесте. По данным авторов, механизм действия фукоидана из Е. cava заключается в ингибировании активности сериновых протеаз, а именно факторов II (протромбина), X (фактора Стюарта) и YII (проконвертина), т.е. факторов внешнего пути свертывания [334]. Следует отметить, что фукоидан из Е. cava имеет незначительные структурные отличия (в составе и процентном содержании моносахаров) по сравнению с исследуемыми нами фукоиданами.

Нами выявлена зависимость антикоагулянтного эффекта от условий введения фукоиданов in vivo: фукоидан оказывает антикоагулянтный эффект при парентеральном и длительном (30-кратном) пероральном введении животным, а с увеличением дозы и кратности введения фукоидана развивается более глубокая гипокоагуляция, что подтверждается данными литературы [460, 461, 563].

При исследовании механизмов антикоагулянтного действия фукоиданов нами установлено, что в системе in vitro фукоиданы из F. evanescens и L. cichorioides демонстрируют ингибиторную активность в отношении тромбина (фактора IIa) и фактора Ха. Отношение aXa/alla составило 1,3-2,3 для фукоидана из F. evanescens и 0,7-1,7 для фукоидана из L. cichorioides, что является показателем терапевтического эффекта.

Такие характеристики, как удельная alla и аХа активности важны при поиске альтернативных антикоагулянтов прямого типа, в частности антитромботических средств, в связи с ростом числа заболеваний, осложненных тромбозами. В этом плане также важен выявленный нами антикоагулянтный эффект фукоиданов при длительном введении per os, поскольку пероральная форма препарата дает возможность осуществлять длительную профилактику первичных и вторичных тромбозов в амбулаторных условиях у больных с высоким риском тромбообразования. Исследованные нами фукоиданы приводили к снижению alla- и аХа-активностей сразу после внутривенного введения, т.е. демонстрировали незамедлительный эффект, как и большинство известных антикоагулянтов прямого действия (гепарин, фраксипарин) [9, 550].

Мы установили, что антикоагулянтная активность фукоидана из F. evanescens связана с плазменным антитромбином III - важнейшим физиологическим антикоагулянтом, который инактивирует тромбин и почти все другие факторы свертывания (ХПа, Xla, Xa, 1Ха). По своей природе это белок, выполняющий роль основного плазменного кофактора гепарина, под влиянием которого трансформируется из прогрессивного антикоагулянта в ингибитор немедленного действия [20]. Мы показали, что фукоидан из F. evanescens, как и гепарин, превращает антитромбин III из медленно действующего в быстродействующий ингибитор тромбина. В реализации антикоагулянтной активности некоторых фукоиданов AT III не участвует [108, 264, 339, 539], а, например, нативный фукоидан из U. pinnatifida не оказывает воздействия на фактор Ха [339], другие фукоиданы (из L. angustata, P. canalicidata) напрямую ингибируют активность тромбина и активируют AT III [340, 449, 489].

Важной для практического использования является выявленная нами способность фукоиданов создавать комплексы с известным для гепаринов антидотом - сульфатом протамина, что обеспечивает возможность нейтрализации их антикоагулянтного эффекта, потребность в которой возникает при длительном лечении антикоагулянтными препаратами.

Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют, что фукоидан из F. evanescens обладает схожей с гепарином антикоагулянтной активностью при действии как in vitro, так и in vivo, реализуемой при участии антитромбина III и обусловленной ингибированием тромбина (фактора IIa) и фактора Ха. В этом состоит отличие изучаемого нами фукоидана от ряда фукоиданов из других источников или выделенных иными методами.

Под влиянием фукоидана из F. evanescens мы установили активацию системы фибринолиза in vitro и in vivo, что может быть связано с повышением плазминового потенциала. Возможно, фукоидан активирует стрептокиназу, что приводит к усилению генерации плазмина. Учитывая, что активация фибринолиза соответствует увеличению активности и количества плазминогена - неактивного предшественника плазмина (фермента, расщепляющего фибрин и ФГ), а также тот факт, что активация плазминогена в свою очередь осуществляется тканевым активатором плазминогена (t-PA) [20], можно думать, что фукоидан из F. evanescens оказывает влияние на последний. Эти предположения сделаны на основании полученных нами результатов по уменьшению времени спонтанного эуглобулинового лизиса и возрастанию уровня основного компонента фибринолитической системы — плазминогена под влиянием фукоидана.

При многократном введении фукоидана мы отмечали тенденцию к снижению уровня ФГ. Как известно, фибринолитическая активность (ФА) зависит от концентрации фибриногена (ФГ): торможение ФА обусловлено повышением уровня ФГ и снижением концентрации плазминогена и его ингибитора и наоборот [20, 64, 141].

Наши результаты об активирующем влиянии фукоидана из F. evanescens на систему фибринолиза согласуются с данными ряда авторов, которые отмечают, что фукоиданы эффективнее гепарина усиливали фибринолиз, потенцируя тканевой (t-PA) и урокиназный (и-РА) активаторы плазминогена in vitro [378, 381, 385]. Эти авторы считают, что механизм такого эффекта заключается в том, что фукоидан связывается с плазминогеном, индуцируя структурные изменения чувствительности последнего к действию активаторов плазминогена. Способность фукоиданов усиливать фибринолиз и оказывать влияние на функцию клеток эндотелия отличает их от гепарина и также свидетельствует в пользу использования фукоиданов как альтернативы гепарину [474 ].

Выявленные нами иммуностимулирующая и антикоагулянтная активность фукоидана из Р. емапехсет позволили апробировать его применение по лечебной и профилактической схемам при экспериментальной эндотоксинемии.

В комплексе мероприятий по лечению и профилактике септических состояний, включающем этиотропные, противошоковые, детоксицирующие препараты, немаловажное место занимает восстановление нарушений в системе гемостаза с применением антикоагулянтов и дезагрегантов, а также иммуномодуляторов для купирования явлений иммунной недостаточности. Мы исследовали возможность применения фукоидана из бурой водоросли Р. еуапеБсет для коррекции нарушений иммунитета и гемостаза на модели эндотоксинемии.

Ответной реакцией организма на массивное поступление в кровяное русло токсинов возбудителей инфекции и продуктов распада поврежденных тканей является инфекционно-токсический или эндотоксиновый шок. Наибольший клинический интерес связан с влиянием эндотоксина на основные защитные системы организма (факторы врожденного и приобретенного иммунитета, каскад ферментов комплемента, систему гемостаза). Инициирующим звеном патогенеза эндотоксинового шока является поступление в системный кровоток эндотоксина, основным структурным компонентом которого является ЛПС, и развитие эндотоксиновой агрессии. Это дает начало сложному каскаду патологических процессов: развитию системной воспалительной реакции, ДВС-синдрома, полиорганной недостаточности, формированию вторичного иммунодефицита и другим осложнениям [93, 222, 245, 318, 409, 425, 456]. Обязательным патогенетическим компонентом эндотоксинового шока является ДВС-синдром, в основе которого лежит ЛПС - индуцированная активация системы свертывания крови и тромбоцитарного звена гемостаза [222, 296, 456].

Все вышеперечисленные патологические процессы при эндотоксинемии связаны с прямыми или опосредованными эффектами цитокинов, продукция которых активированными ЛПС клетками макроорганизма значительно возрастает [245, 260, 425, 456, 505]. В условиях нашего эксперимента после введения ЛПС мышам была выявлена гиперпродукция провоспалительных цитокинов (TNFa, IL-la, IL-6). При этом максимальный уровень TNFa и IL-la в сыворотке крови регистрировался через 2-4 часа, а IL-6 - через 8 часов после введения ЛПС.

Аналогичные результаты описаны и другими авторами при моделировании эндотоксинемии путем введения коммерческих ЛПС (из Е. coli) животным или волонтерам [242, 329, 391, 414, 440, 454, 519].

В ранние сроки после введения животным летальной дозы ЛПС мы наблюдали начальную стадию ДВС-синдрома с явлениями гиперкоагуляции, о чем свидетельствует удлинение временных параметров свертывания крови, пик которых наблюдался через 3-4 часа. На активацию процессов свертывания крови при введении ЛПС из Е. coli указывают и другие исследователи [329, 414, 519]. Длительную фазу гиперкоагуляции при введении больших доз холерного эндотоксина наблюдал также Белов Л.Г. [23]. По наблюдениям ряда авторов повышенную свертываемость крови можно диагностировать лишь в начальной стадии эндотоксикоза, а в поздней и при эндотоксиновом шоке система гемостаза находится в состоянии выраженной гипокоагуляции вплоть до полного отсутствия свертывания крови [199, 276]. Вместе с тем, вышеупомянутый автор [23] отмечает, что изменения активности фибринолитической системы при холерной интоксикации липополисахаридом были незначительны и характеризовались угнетением.

Мы наблюдали увеличение времени лизиса сгустка на начальных этапах эндотоксинемии, что свидетельствует о депрессии фибринолиза (ФА) и, по мнению ряда авторов, считается признаком предтромбоза, который также отражает состояние гиперкоагуляции или способствует его развитию

20, 64]. Это может быть обусловлено чрезмерной активацией антикоагулянтных механизмов, обеспечивающих помимо блокады прокоагулянтных факторов ингибирование системы фибринолиза. В динамике исследования состояния фибринолитической системы мы выявили тенденцию к ее активации через 8 часов после введения ЛПС. По данным ряда авторов [180, 228, 516] характерной особенностью эндотоксинемии является активация протеолитических систем, в частности фибринолитической. В работе P.E. Dekkers et al. [516] показано, что активация системы фибринолиза при эндотоксикозе осуществляется вследствие освобождения моноцитами урокиназного активатора плазминогена. Следует учитывать, что состояние фибринолитической системы зависит от дозы эндотоксина, стадии эндотоксинемии и других экспериментальных условий, что отмечается в ряде работ [23, 180, 199, 276].

Мы не наблюдали выраженного потребления ФГ через 2-4 часа после введения ЛПС, характерного для начальной фазы ДВС-синдрома в клинике ряда патологических состояний. Более того, его уровень к 4 часам возрастал, что отмечается и рядом других исследователей на ранних сроках после введения эндотоксина в экспериментальных условиях [111, 329]. На ранних этапах эндотоксинемии у больных, по некоторым данным, наблюдалась гиперфибриногенемия, что рассматривается в качестве маркера эндотоксинемии, развивающейся как следствие септических осложнений [33, 180].

Увеличение содержания ФГ, являющегося одним из белков острой фазы, вероятно, объясняется тем, что в первые часы после введения ЛПС не усиливалось его расходование, но к 8-24 часам уровень ФГ снижался вследствие усиленного потребления факторов свертывания. Обычно у больных в гиперкоагуляционную фазу ДВС-синдрома наблюдаются такие признаки, как снижение уровня ФГ, тромбоцитов, протромбина, хотя они выражены нерезко. Возможно, это связано с тем, что длительность фазы гиперкоагуляции при остром ДВС-синдроме непродолжительна (от нескольких минут) и при исследовании системы гемостаза может не улавливаться. Однако, при хроническом течении ДВС-синдрома эта фаза может длиться от нескольких часов до нескольких дней [179].

Признаки активации системы свертывания (гиперкоагуляция), депрессия в системе фибринолиза наблюдаются у больных с тромбозами, с предтромботическими состояниями, у страдающих геморрагическим васкулитом, сепсисом, токсикозами беременности, при атеросклерозе, при онкопатологии и др. [18, 19, 157, 367]. Гемокоагуляционные нарушения выявлены у больных различными бактериальными инфекциями. Так, ярко выраженную фазу гиперкоагуляции у больных с пищевыми токсикоинфекциями, госпитализированных в первые 12 часов от начала заболевания, проявляющуюся укорочением временных параметров тромбоэластограммы, отмечает А.М. Полякова с соавт. [189].

Именно на этапе гиперкоагуляции необходимо применение антикоагулянтных препаратов, что доказано в ряде экспериментальных работ. Так, введение антикоагулянтов гепарина, лепирудина, гирудина, анкрода при экспериментальной эндотоксинемии приводило к заметному снижению признаков активации системы свертывания, вызванного ЛПС [389, 414, 454,519].

При сопоставлении динамики показателей свертывания и уровня сывороточных цитокинов (TNFa и IL-la) у мышей, получивших ЛПС, мы отметили, что усиление продукции этих цитокинов предшествовало нарастанию гиперкоагуляции. Эти результаты согласуются с положением о центральной роли провоспалительных цитокинов (в частности их избыточной продукции) в процессах гиперкоагуляции и ингибирования фибринолиза при сепсисе и эндотоксиновом шоке [414, 447, 456, 470, 505]. В последующем (к концу первых суток) после введения ЛПС, мы наблюдали увеличение времени свертывания крови, активацию ФА и снижение уровня ФГ, что свидетельствует о развитии гипокоагуляционных изменений в результате потребления факторов свертывания крови. Концентрация TNFa и

IL-la к этому сроку значительно снижалась. Уровень IL-6 возрастал к 8 часам, однако к 24 час наблюдалось значительное снижение уровня всех исследуемых провоспалительных цитокинов, что свидетельствует об ослаблении к этому сроку цитокинового каскада, индуцированного ЛПС.

Сепсис по своей патогенетической сути является проявлением иммунной несостоятельности организма. Патологический процесс, инициированный первичным очагом инфекции, в силу неадекватности защитных сил организма (прежде всего систем естественной резистентности) проявляется генерализованной диссеминацией возбудителя в условиях нарастающей общей иммунодепрессии [130, 201, 256, 425, 531].

Свидетельством иммунных нарушений при введении летальной дозы ЛПС является выявленное нами угнетение функциональной активности Нф. Нейтрофильные лейкоциты — основная эндотоксинсвязывающая популяция клеток крови. Проникая в системный кровоток, ЛПС способствует перераспределению Нф из циркуляторного русла на периферию, что обусловлено способностью ЛПС повышать адгезивную активность Нф уже в первые минуты эндотоксиновой агрессии. После связывания с клетками, ЛПС снижает возможность Нф реагировать на различные антигенные стимулы и угнетает их бактерицидную активность по отношению к бактериальным агентам. Таким образом, при высоком уровне эндотоксина в крови развивается депрессия антибактериальной резистентности макроорганизма [154, 224, 318]. Z.Y. Sheng et al. [531] также выявили снижение бактерицидной функции Нф при сепсисе, которое авторы считают следствием цитокинового взрыва. Депрессию нейтрофильного фагоцитоза и гуморального иммунитета при ОРВИ отмечает В.А. Анохин [6]. В условиях эксперимента после введения животным ЛПС S. typhi. Б.С. Нагоев с соавт. [4] наблюдали угнетение компонентов микробицидности Нф, оцениваемых по уровню катионного белка, миелопероксидазы, показателей НСТ-теста. С учетом этих данных можно отметить, что состояние Нф зависит от дозы ЛПС и стадии эндотоксинемии. Мы отмечали угнетение функциональной активности Нф через 4 часа после введения ЛПС (на высоте цитокинового взрыва и на пике гиперкоагуляции).

Под влиянием фукоидана из Р. еуапеБсет мы наблюдали ингибирование повышенного уровня провоспалительных цитокинов (ТМ^а, 1Ь-1а, 1Ь-6), что является особенно важным в механизмах действия фукоидана, поскольку терапевтическая стратегия при лечении сепсиса и эндотоксинового шока направлена против элементов гипервоспалительного каскада, в частности, против этих цитокинов.

Введение животным фукоидана по лечебной схеме приводило к ослаблению процессов гиперкоагуляции, что, вероятно, связано с антикоагулянтной активностью фукоидана (наблюдалось частичное восстановление показателей свертывания крови), однако, эти показатели не достигали уровня контроля. Слабая выраженность эффекта фукоидана в этом случае, вероятно, связана с невозможностью прерывания цитокинового каскада, индуцированного ЛПС.

При многократном профилактическом введении нормализующее влияние фукоидана на показатели свертывания крови было выражено в большей степени, при этом также наблюдалось частичное восстановление показателей ФА и уровня ФГ. При этой схеме применения фукоидан проявлял способность предотвращать развитие ДВС-синдрома или ослаблять его течение в силу его влияния на комплекс систем макроорганизма, в том числе на иммунную.

Способность исследуемого фукоидана к купированию явлений гиперкоагуляции и восстановлению показателей ФА (признаков начальной фазы ДВС-синдрома) связана с наличием у фукоидана антикоагулянтной и фибринолитической активности: фукоидан существенно снижает активацию прокоагулянтного звена системы гемостаза, что обусловлено наличием у него выраженной анти-Па- и анти-Ха-активности, и поддерживает защитную функцию фибринолитической системы, что способствует предупреждению тромбо-геморрагических осложнений.

Под действием фукоидана нами наблюдалось ослабление депрессивного влияния ЛПС на функциональную активность Нф, что связано с выявленным нами стимулирующим влиянием фукоидана на эти клетки, участвующие в реализации механизмов врожденного иммунитета.

Ингибирование повышенного уровня провоспалительных цитокинов (TNFa, IL-la, IL-6) под влиянием фукоидана наряду с его иммуностимулирующей и антикоагулянтной активностью способствует сглаживанию клинических проявлений эндотоксикоза, снижению явлений гиперкоагуляции и других признаков ДВС-синдрома, индуцированного ЛПС, а в итоге способствует повышению резистентности мышей к токсическому действию ЛПС: мы наблюдали повышение процента выживаемости (до 1924%) и средней продолжительности жизни (вдвое) при 100 % смертности животных, получивших летальную дозу ЛПС.

Установленная нами патогистологическая картина эндотоксинемии также характеризуется признаками ДВС-синдрома (агрегацией эритроцитов и тромбоцитов, наличием фибриноидного некроза стенок микрососудов, очаговыми дистрофическими изменениями в органах-мишенях, относящихся при эндотоксинемии к «шоковым»: легких, печени, почках) и соответствует описанной ранее при введении летальной дозы ЛПС (эндотоксинов) грамотрицательных бактерий [17, 111, 114].

Как известно, эндотоксины улавливаются клетками РЭС (главным образом печени) и с кровотоком попадают в сердце и легкие. Этот механизм считается одним из главных, способствующих переходу шока в необратимую фазу, частично, в связи с развитием необратимого коллапса периферических сосудов. Печень, как основной детоксицирующий орган, претерпевает ряд функциональных и структурных изменений под влиянием эндотоксинов. Эндотоксины повреждают клеточные мембраны, нарушают транспорт ионов, индуцируют образование продуктов свободнорадикального окисления, индуцируют апоптоз гепатоцитов [17,21, 133,499].

Важной мишенью цитопатогенного действия эндотоксинов являются легкие. Основная причина дисфункции легких - повреждение эндотелия. В значительной степени это повреждение является результатом активации нейтрофилов, адгезирующих к эндотелиальной поверхности и освобождающих медиаторы воспаления. На этом фоне легко развиваются реологические нарушения, микроэмболизация легочных капилляров [245, 246, 148, 535].

Патоморфологическое исследование органов мышей при ЛПС-индуцированной эндотоксинемии позволило подтвердить выявленный нами фазный характер изменения показателей системы гемостаза в соответствии со стадиями развития ДВС-синдрома.

Так, согласно наших наблюдений, первые часы после введения ЛПС соответствуют стадии гиперкоагуляции и агрегации форменных элементов крови. Выявленными нами лабораторными признаками этой стадии являются укорочение времени свертывания крови, повышение уровня фибриногена. Морфологически эта стадия характеризуется внутрисосудистой агрегацией тромбоцитов, эритроцитов и развитием сладж-феномена (необратимой агрегации эритроцитов), образованием нитей и тяжей фибрина.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Кузнецова, Татьяна Алексеевна

1. Абелев, Г.И. Взаимодействие врожденного и приобретенного иммунитета в защите организма от инфекции / Г.И. Абелев // Соросовский образовательный журн. 1998. - №2. - С. 53-58.

2. Абелев, Г. И. Воспаление / Г.И. Абелев // Соросовский образовательный журн. 1996. - № 10. - С. 28-32.

3. Азматова, Н.К. Молекулярные и клеточные механизмы действия иммуномодуляторов микробного происхождения на функциональную активность эффекторов врожденного иммунитета: Автореф дис. . д-ра мед. наук / Н.К. Азматова. М., 2006. - 48 с.

4. Активность гранулоцитов при экспериментальных эндотоксемиях / Б.С. Нагоев, А.П. Хохлов, М.Х. Турьянов и др. // Бюлл. эксп. биол. и мед.- 2000, прилож. 3. С. 27-29.

5. Анисимов, А.Ю. Иммунотерапия Ронколейкином® в комплексном лечении больных абдоминальным сепсисом / А.Ю. Анисимов // Пособие для врачей .Казань, 2004. 28 с.

6. Анохин, В.А. Патогенетическое значение эндотоксемии и изменений активности антиэндотоксиновой защиты при ОРВИ у детей: Автореф дис. . д-ра мед. наук / В.А. Анохин.- M: РМА, 1994.- 48 с.

7. Анохова, Л.И. Использование Ронколейкина у родильниц с эндометритом / Л.И. Анохова, Э.Д. Загородная // Сб. науч. трудов: Цитомедины, цитокины и антигены главного комплекса гистосовместимости (HLA). Чита, 1998. - С. 32.

8. Антикоагулянтная и стимулирующая липолиз активность полисахаридов из бурых морских водорослей / М.Я. Розкин, М.Н. Левина, B.C. Ефимов, А.И. Усов // Фармакол. и токсикол. 1991. - Т. 54. - № 5. - С. 40-42.

9. Антикоагулянтная активность сульфатированных полисахаридов / H.H. Дрозд, Г.Е. Банникова, В.А. Макаров, В.П. Варламов // Эксп. и клин, фармакол. 2006. - Т. 69, № 6 . - С. 51-62.

10. Антикоагулянтная активность синтетических производных пептидов / H.H. Дрозд, A.C. Толстенков, В.А. Макаров и др. // Бюлл. эксп. биол. и мед.-2008. Т. 145. - № 1. - С. 57-60.

11. Антонов, Н.С. Хронические обструктивные заболевания: распространенность, диагностика, лечение и профилактика: Автореф дис. . д-ра мед. наук / Н.С. Антонов. М., 2002.- 46 с.

12. Арабе, Х.Р. Иммунологические аспекты изменений при позднему гестоз1 в беременных и пути их коррекции с помощью системной ензимотерапи: Автореф. дис. канд. мед. наук: / X. Р. Арабе .- Харьков, 2000. 20 с.

13. A.c. СССР № 1836954, МКИ5 А61 К 35/28. Т 4877893/14. Способ получения иммуномодулирующих пептидов / Н.С. Мотавкина, В.Б. Туркутюков, Т.К. Каленик. - заявл.: 1990.10.26; опубл.: 1993.08.30. - Бюлл. №32.

14. Ахметова, Б.Х. Клинико-иммунологические показатели хронической обструктивной болезни легких / Б.Х. Ахметова // М-лы 6-ой межд. конф. Ставрополь: Изд-во Северо-Кавк. гос. тех университета, 2004. Т.1. - С. 117.

15. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин.- Л., 1962. 234 с.

16. Балтина, Л.А. Мурамилпептиды / Л.А. Балтина, Г.А. Толстиков. -Екатеринбург, 1998. 345 с.

17. Бардахчьян, Э.А. Структурно-функциональные изменения печени и мозга при эндотоксиновом шоке (ультраструктурное исследование) / Э.А. Бардахчьян, Н.Г. Харланова // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1997. - № 1. - С. 17-21.

18. Баркаган, З.С. Патогенез, диагностика и принципы терапии ДВС-синдрома / З.С. Баркаган // Materia medica. 1997. - №1. - С. 5-14.

19. Баркаган, З.С. Геморрагические заболевания и синдромы / З.С. Баркаган.-М.: Медицина, 1988. 528 с.

20. Баркаган, З.С. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза / З.С. Баркаган, А.П. Момот.- М.: Ньюдиамед, 2001. 296 с.

21. Барштейн, Ю.А. Взаимосвязь структурной перестройки эндотелия микрососудов печени с изменениями в клетках Купфера и гепатоцитах при развитии грамотрицательной инфекции / Ю.А. Барштейн, Ю.В. Персидский, М.И. Грутман // Арх. патол. 1990. - №12.- С. 33-38.

22. Башкина, O.A. Клинико-иммунологический мониторинг и цитокинотерапия у детей с рецидивированием респираторных заболеваний: Автореф дис. . д-ра мед. наук / O.A. Башкина.- М., 2006. 50 с.

23. Белов, Л.Г. Патогенез функциональных и метаболических расстройств при холерной интоксикации и вакцинации: Автореф. дис. д-ра мед. наук / Л.Г. Белов. Саратов, 1994. - 33 с.

24. Белокриницкая, Т.Е. Взаимосвязь систем иммуногенеза, гемостаза и эритрона у беременных с анемиями: Автореф дис. . канд. мед. наук / Т.Е. Белокриницкая. Омск, 1990.- 23 с.

25. Белокриницкая Т.Е. Роль цитокинов в патогенезе нарушений иммунитета и гемостаза у больных с тяжелыми дисплазиями и раком шейки матки / Т.Е. Белокриницкая // Вопр. онкологии.- 2003. Т49. - №1. - С 51-54.

26. Беседнова, H.H. Иммуноактивные пептиды из гидробионтов и наземных животных / H.H. Беседнова, Л.М. Эпштейн. Владивосток: ТИНРО-центр, 2004. - 248 с.

27. Беседнова, H.H. Биологически активная добавка к пище тинростим (в помощь практическому врачу). / H.H. Беседнова, Л.М. Эпштейн. -Владивосток: ТИНРО-Центр, 2003. 47 с.

28. Беседнова, H.H. Экспериментальное и клинико-иммунологическое изучение псевдотуберкулезной инфекции: Дис. . д-ра мед. наук / H.H. Беседнова. М., 1979.- 296 с.

29. Бокерия, JI.A. Лекции по кардиологии / Под ред. Л.А. Бокерия, Е.З. Голуховой. М.: Изд-во НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН, 2001. - Т.1.- 246 с.

30. Боидареико, В.М. Определение эндотоксина грамотрицательных бактерий в крови человека / В.М. Бондаренко, В.Г. Лиходед, М.Ю. Яковлев // Журн. микробиол. 2002. - №2. - С. 83-89.

31. Браунвальд, Е. Справочник Харрисона по внутренним болезням / Е. Браунвальд. С-Пб: Питер, 1999. - 976 с.

32. Будажабон Г.Б. Взаимосвязи иммунитета и гемостаза в клинике: Автореф. дис. . д-ра мед. наук / Г.Б. Будажабон.- Л., 1988. 40 с.

33. Будогов, P.C. Повышение уровня оксида азота и гиперфибриногенемия в патогенезе комбинированных радиационно-термических поражений / P.C. Будогов, Л.П. Ульянова, С.Я. Проскуряков // Цитокины и воспаление, 2006. -Т.5. №1. - С. 53-55.

34. Булава, Г.В. Оценка эффективности иммуномодуляторов при лечении больных с гнойно-септическими послеоперационными осложнениями / Г.В. Булава, В.П. Никулина // Хирургия. 1996. - №2.- С. 104-107.

35. Бунин, Ю.А. Применение низкомолекулярных гепаринов в лечении и профилактике сердечно-сосудистых заболеваний / Ю.А. Бунин // Трудный пациент. 2006. - Т. 4, № 1. - С. 17-21.

36. Бунятян, К.А. Вторичная иммунная недостаточность у хирургических больных: рациональная диагностика и коррекция: Автореф дис. . д-ра мед. наук / К.А. Бунятян. М., 2007. - 50 с.

37. Бэлк, Р. Патофизиология септического шока // Сб. статей: Актуальные проблемы анестезиологии и реаниматологии. Освежающий курс лекций. / Под ред. Э.В. Недашковского. Архангельск - Тромсё, 1995. - С. 140-145.

38. Васильев, С.А. Терапия острого синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови / С.А. Васильев, А.И. Воробьев, В.М. Городецкий // Materia Medica.- 1997. № 1. - С. 23-36.

39. Векслер, И.Г. Сравнительная оценка влияния некоторых биологически активных полисахаридов на иммунную систему организма / И.Г. Векслер // Химия и биология иммуномодуляторов. Рига: Зинатне, 1985. - С. 167-187.

40. Бенедиктова, М.Г. Применение тактивина и имунофана при лечении больных аденокарциномой эндометрия / М.Г. Бенедиктова // Бюлл. эксп. и клин, фармакол. 2001. - №5. - С. 46-49.

41. Влияние фукоидана на клетки перитонеального экссудата при внутрибрюшинном введении беспородным белым мышам / Д.В. Незговоров, JI.K. Добродеева, Е.В. Мокроусова и др. // Мед. иммунол. 2004. - Т.6. - № 3-5.-С. 242-243.

42. Влияние тималина на иммунитет, гемостаз и уровень провоспалительных и противовоспалительных цитокинов при ожоговой болезни / Б.И. Кузник, Ю.А. Витковский, В.А. Сазоненко и др. // Гематол. и трансфузиол.- 2002. -Т.47. №1. - С. 17-21.

43. Влияние иммуномодулирующей терапии на течение острых и хронических заболеваний легких у взрослых и детей / Б.И. Кузник, Ю.А. Витковский, И.Н. Гаймоленко и др. // Мед. иммунол. 2003. - Т.5, №3-4. - С. 301.

44. Влияние тималина на иммунитет и гемостаз больных с абсцессами легких / Б.И. Кузник, Г.Б. Будажабон, С.Д. Даренская, И.Д. Лиханов // Тромбоз, гемостаз и реология. 2002. - №3(11). - С. 29-32.

45. Влияние тимомиметика вилона на состояние свертывающей системы крови и фибринолиза у больных сахарным диабетом 1 типа разного возраста / Б.И. Кузник, Л.Р. Колесниченко, H.H. Ключерева и др. // Успехи геронтол.-2006.-вып. 19.-С. 107-115.

46. Влияние вилона, эпиталона и эпиталамина на иммунитет и гемостаз при сахарном диабете первого типа / H.H. Ключерева, JI.P. Колесниченко, Ц.Б. Хамаева и др. // Аллергол. и иммунол. 2005. - Т.6. - №2. - С. 183.

47. Влияние совместного введения гепарина и сернокислого эфира хитозана на функцию гемостаза / H.H. Дрозд, В.А. Макаров, Г.В. Башков и др. // Эксп. и клин, фармакол. 1996. - Т. 59. - №1. - С. 30-34.

48. Влияние гликопина на состояние местного иммунитета у больных хроническим бронхитом / О.П. Артемова, А.П. Борисова, Б.В. Пинегин и др. // Иммунология. 1996. - №6. - С. 62-65.

49. Влияние тималина, эпиталамина и вилона на иммунитет и гемостаз у больных с перитонитом и парапроктитом / P.A. Абдулаев, Х.Р. Абдуллаев, Ю.А. Витковский и др. // Int. J. Immunoreh. 2001. - Vol. 3. - №1. - С. 100.

50. Влияние интерлейкинов 4 и 10 на систему гемостаза in vitro / Ю.А. Витковский, Б.И. Кузник, Д.А. Еделов, A.B. Солпов // Иммунология. 2001.-№1. - С. 43-46.

51. Влияние каррагинана на неспецифическую резистентность мышей к ЛПС-индуцированной эндотоксемии / Э.И. Хасина, М.Н. Сгребнева, И.М. Ермак, В.В. Малеев // Журн. микробиол. 2007. - №2. - С. 57-60.

52. Влияние комплекса пептидов на состояние гемостаза и пероксидации в условиях интоксикации тетрахлорметаном / И.Н. Звягольская, A.B. Катрушов, В.К. Пархоменко и др. // Сб. науч. трудов Регуляторные пептиды в норме и патологии. Чита, 1987.- С. 102.

53. Влияние тимических пептидов на синтез и внутриклеточное содержание некоторых цитокинов / К.Ф. Ким, C.B. Климова, В.А. Дьяконова и др. // Иммунология. 2002. - №5. - С. 274-279.

54. Витковский, Ю.А. Влияние полипептидов печени на иммунитет, гемостаз и неспецифическую резистентность организма в эксперименте: Автореф. дисс. канд. мед. наук. / Ю.А. Витковский. М., 1990. - 16. с.

55. Витковский, Ю.А. Роль цитокинов в регуляции системы гемостаза: Автореф. дисс. д-ра мед. наук / Ю.А. Витковский. Чита, 1997. - 318 с.

56. Витковский, Ю.А. Блокировка интерлейкинов 4 и 10 изменяет гемостатические свойства лимфоцитов // Ю.А. Витковский, В.И. Кузник, A.B. Солпов // Иммунология. 1999. - №5. - С. 20-23.

57. Витковский, Ю.А. Влияние интерлейкина 1 на свертываемость крови и фибринолиз / Ю.А. Витковский, В.И. Кузник // Гематол и трансфузиол. -1999. №2. - С. 27- 30.

58. Витковский, Ю.А. Влияние интерлейкина-lß и 8 на секрецию Т- и В-лимфоцитами прокоагулянтов, антикоагулянтов и фибринолитических агентов / Ю.А. Витковский, В.И. Кузник, A.B. Солпов // Иммунология. -2001.-№6.-С. 52-54.

59. Внуков, В.А. Получение и сравнительная характеристика тимозина морских млекопитающих: Автореф дис. . канд. мед. наук / В.А. Внуков. -М., 1987. 16 с.

60. Возможности сулодексида в лечении сепсиса / Н.А.Кузнецов, Г.В.Родман, Т.И. Шалаева, Т.В. Дынжинова // Сб. м-лов YI всеармейской межд. конф. Инфекции в хирургии мирного и военного времени.- М., 2006. С. 15-16.

61. Воробьев, А.И. Руководство по гематологии / А.И. Воробьев. М.: Ньюдиамед, 2005. - Изд. 3. - Т.З. - 416 с.

62. Воробьёв, A.A. Прионные инфекции: важнейшие медицинские и ветеринарные аспекты / A.A. Воробьёв, В.В. Макаров // Вестник РАМН. -1997. -№ 6. -С. 3-11.

63. Воробьев, A.A. Физиологические пути введения антигенов и других биологически активных веществ / A.A. Воробьев // Иммунология. 2002. -№3. - С. 138-142.

64. Воробьев, A.A. Массовые способы иммунизации / A.A. Воробьев, В.А. Лебединский. М., 1977. - 253 с.

65. Воробьев, П.А. Плазмаферез в интенсивной терапии: Автореф дис. . д-ра мед. наук / П.А. Воробьев. М.: 1997. - 48 с.

66. Воронкова, О.О. Состояние системы провоспалительных цитокинов и неспецифических маркеров воспаления у больных ХОБЛ и динамика их на фоне лечения бронхолитическими средствами: Автореф дис. . канд. мед. наук / О. О. Воронкова. М., 2006. - 20 с.

67. Всасывание и секреция в тонкой кишке / И.А. Морозов, Ю.А. Лысиков, Питран Б.В. и др. М., 1988. - 117 С.

68. Выделение очищенного фукоидана из природного комплекса с полифенолами и его характеристика / A.M. Урванцева, И.Ю. Бакунина, Н.Ю. Ким и др. // Химия раст. сырья. 2004. - № 3. - С. 15-24.

69. Гавриленко, И.С. Действие тималина на систему циклических нуклеотидов в селезенке мышей / И.С. Гавриленко, М.Х. Хавинсон, М.Г. Морозов // Бюлл. эксп. биол. мед. 1982. - Т.93. - № 4. - С. 39-40.

70. Гажа, А.К. Иммуноактивный пептид из оптических ганглиев кальмара: Автореф. дис.канд. мед. наук / А.К. Гажа. Владивосток, 1994. - 24 с.

71. Галалу, В.В. Иммунологическая реактивность у больных хроническим бронхитом / В.В. Галалу, С.Н. Черных // Клин. мед. 1996. - Т. 64. - №12. - С. 73-76.

72. Гельцер, Б.И. Система цитокинов и болезни органов дыхания / Б.И. Гельцер, Е.В. Просекова. Владивосток: Дальнаука, 2005. - 256 с.

73. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / Пер с англ. Ю.А. Данилова.- М.: Практика, 1998. 459 с.

74. Гитун, Т.В. Инфаркт миокарда. Диагностика, профилактика и методы лечения / Т.В. Гитун. Изд.: Центрполиграф, 2004. - 160 с.

75. Гомзякова, И.Т. Изменение показателей реактивности организма при тяжелом и осложненном течении вторичных пневмоний и влияние тинростима на отклонения в иммунном статусе: Автореф дис. . канд. мед. наук / И.Т. Гомзякова. Владивосток, 1998. - 23 с.

76. Городин, В.Н. Взаимосвязь изменений в системе гемостаза и иммунитета при лептоспирозе // Актуальные проблемы гемостаза в клинической практике: М-лы II научно-практ. конф. Краснодар, 2005. - С. 35-36.

77. Горышина, E.H. Сравнительная гистология тканей внутренней среды с основами иммунологии / E.H. Горышина, О.Ю. Чага. JL, 1990. - 22 с.

78. Гриневич, Ю.А. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных / Ю.А. Гриневич, А.Н. Алферов // Лаб. дело. 1981.- №8. С. 493-496.

79. Грицюк, Т.Л. Иммунные нарушения и их коррекция у онкологических больных с послеоперационными осложнениями хирургических вмешательств: Автореф дис. . канд. мед. наук / Т.Л. Грицюк. Владивосток, 2006. - 20 с.

80. Турина, C.B. Влияние дрожжевых полисахаридов на некоторые компоненты иммунной системы в эксперименте: Автореф. дис. канд. биол. наук / Л.С. Турина. Л., 1988. 19 с.

81. Демидов, C.B. Влияние тималина на систему циклических нуклеотидов и обмен Са2+ в Т-лимфоцитах сенсибилизированных животных / C.B. Демидов // Иммунология и аллергия Киев, 1990 - Вып. 24 - С. 116-119.

82. Диксон, М. Ферменты / Диксон М., Уэбб Р. М.: Мир. 1982. Т. 2. - 520 с.

83. Дубинина, В.В. Состояние общей и местной защиты и оценка эффективности иммунокоррекции при пневмонии и хроническойобструктивной болезни легких у мужчин: Автореф дис. . канд. мед. наук / В.В. Дубинина. Владивосток, 2005. - 23 с.

84. Еделев, Д.А. Влияние интерлейкинов 4 и 10 на свертываемость крови и фибринолиз / Д.А. Еделев, Ю.А. Витковский, В.И. Кузник // Тромбоз, гемостаз и реология. 2002. - №3 (11). - С. 33-34.

85. Елинов, Н.П. Некоторые микробные полисахариды и их применение / Н.П. Елинов // Усп. микробиол. 1982. - № 7. - С. 158-177.

86. Емельянова, А.Н. Влияние биорегулирующей терапии на состояние иммунитета и гемостаза при рожистом воспалении: Автореф дис. . канд. мед. наук / А.Н. Емельянова. Чита, 2000. - 20 с.

87. Ермак, И.М. Взаимодействие бактериальных липополисахаридов с белками и полисахаридами. Модификация физиологической активности липополисахаридов: Автореф дис. . д-ра хим. наук / И.М. Ермак. -Владивосток, 2006. 48 с.

88. Ермолаев, Е.Д. Основные проблемы технологии комплексной переработки тимуса млекопитающих / Е.Д. Ермолаев, Р.А. Лудрика // Биологически активные вещества гидробионтов. Владивосток, 1988. - С. 6465.

89. Ермольева, З.В. Стимуляция неспецифической резистентности организма и бактериальные полисахариды / З.В. Ермольева, Г.Е. Вайсберг. М.: Медицина, 1976. - 182 с.

90. Еськов, А.П. Механизм повреждающего действия бактериального эндотоксина / А.П. Еськов, Р.И. Каюмов, А.Е. Соколов. // Сб. статей: Энтеросорбция как метод предовращения эндотоксиновой агрессии. Изд. 2. -М.: 2004. С. 19-23.

91. Жоголев, К.Д. Экспериментально лабораторное изучение иммуномодулирующих свойств препаратов хитина и хитозана / К.Д. Жоголев, В.Ю. Никитин // Иммунология. - 1998. - № 6. - С. 53-54.

92. Загородняя, Э.Д. Патогенез, терапия, профилактика гестоза. Автореф дис. . д-ра мед. наук / Э.Д. Загородняя. М., 1992. - 49 с.

93. Зайцев, В.М. Прикладная медицинская статистика / В.М. Зайцев, В.Г. Лифляндский, В.И. Маринкин. СПб: Изд-во Фолиант, 2003. - 432 с.

94. Запорожец, Т.С. Клеточные и молекулярные механизмы иммуномодулирующего действия биополимеров морских гидробионтов: Дис. . д-ра мед. наук / Т.С. Запорожец. Владивосток, 2006. - 350 с.

95. Зарембо, И.А. Хроническая обструктивная болезнь легких: распространенность и смертность / И.А. Зарембо // Аллергология. 2006. -№1. - С. 39-43.

96. Звягинцева, Т.Н. Структура и иммунотропное действие l,3;l,6-ß-D-глюканов / Т.Н. Звягинцева, H.H. Беседнова, Л.А. Елякова. Владивосток: Дальнаука, 2002. - 160 с.

97. Земсков, В.М. Иммуномодуляторы в терапии легочной патологии / В.М. Земсков, A.B. Караулов, A.M. Земсков. М.: Изд-во Кубань, 1995. - 320 с.

98. Зербино, Д.Д. Диссеминированное внутрисосудистое свертывание крови / Д.Д. Зербино, Л.Л. Лукасевич. М.: Медицина, 1989. - 256 с.

99. Зорин, H.A. Биоспецифический электрофорез новый метод изучения гликозаминогликанов / H.A. Зорин, O.A. Себелева // Вопр. мед. химии -1986. - Т. 32, № 2. - С. 134-137.

100. Зуев, В.А. Прионы новый класс возбудителей инфекционных заболеваний / В.А. Зуев // Антибиотики и химиотер. - 1999.- № 10.- С. 33-38.

101. Иванов, Д.О. Клинико-лабораторные варианты течения сепсиса новорожденных: Автореф дис. . д-ра мед. наук / Д.О. Иванов. СПб, 2002. -49 с.

102. Игонин, A.A. Сепсис: молекулярные механизмы системного воспаления в качестве модели для изучения перспективных терапевтических мишеней / A.A. Игонин, В.Г. Кукес, М.А. Пальцев // Молекул, медицина, 2004. №2. -С. 3-12.

103. Изменение цитокинового баланса при развитии и утяжелении системной воспалительной реакции у больных с хирургической инфекцией / A.A.

104. Останин, О.Ю. Леплина, М.А. Тихонова и др. // Мед. иммунология. 2003 Т.5.-№3-4.-0.438-439.

105. Изучение возможности снижения адзивной активности биополимерами природного происхождения / И.Д. Макаренкова, Т.С. Запорожец, H.H. Беседнова и др. // Антибиотики и химиотер. 1999. - Т.44. - № 3. - С. 11-14.

106. Изучение механизма антикоагулянтного действия фукоиданов / М.Я. Розкин, М.Н Левина, Н.С. Каменева и др. // Фармакол. и токсикол. 1989. - Т. 52.- №3,- С. 48-51.

107. Изучение иммуномодулирующей активности нового пептидного соединения бестима / Н.В. Пигарева, A.C. Симбирцев, A.A. Колобов и др. // Иммунология. 2000. - № 1.-С. 33-35.

108. Изучение влияния Бестима (CSV-07) на дифференцировку Т-лимфоцитов у мышей / A.B. Петров, Н.В. Пигарева, А.Ю. Котов и др. // Цитокины и воспаление. 2007. - №1. - С. 27-32.

109. Изучение действия TNF-связывающего белка вируса натуральной оспы на развитие ЛПС-индуцированного эндотоксического шока // И.П. Гилева, Е.М. Малкова, Т.С. Непомнящих и др. // Цитокины и воспаление. 2006. Т. 5. -№ 1.-С. 44-49.

110. Иммунокорригирующее лечение при инфекциях вопросы стратегии / В.П. Кузнецов, Е.В. Маркелова, Н.В. Колесеникова и др. В кн.: Успехи клинической иммунологии и аллергологии. Т.2. Под ред. A.B. Караулова. -М., 2001.-С. 199-230.

111. Иммунокорригирующая терапия фукоиданом при вторичных иммунодефицитах / Д.В. Незговоров, Е.Б. Корниенко, Л.С. Щеголева, Л.К. Добродеева// Мед. иммунология. 2005. - Т.7 - № 2-3. - С. 150.

112. Исачкова, Л.М. Псевдотуберкулез (пато- и морфогенез): Дис. . д-ра мед. наук / Л.М. Исачкова. М., 1990. - 392 с.

113. Исследование эффектов ганглиина в органотипической культуре гиппокампа крыс / А.К. Гажа, Т.М. Панкова, Н.С. Сорокина и др. // Бюлл. СО РАМН. 1999. - №1. - С. 79-83.

114. Использование БАД «Тинростим» в комплексной терапии дисбактериоза кишечника у детей с аллергодерматозами / Е.А. Стукун, H.H. Беседнова, Г.И. Цивкина, И.П. Кольцов // Тихоокеанский мед. журн. 1999. - № 3. - С.67-69.

115. Казьянин, A.B. Иммунотропные эффекты молокина / A.B. Казьянин, В.В. Юшков // Журн. микробиол. 1998. - №2. - С. 97-99.

116. Калинина, Е.П. Определение тяжести течения хронической обструктивной болезни легких по уровню секреции TNFa и IL-8 / Е.П. Калинина, Е.Г. Исаченко // Аллергология. 2005. - № 3. - С. 27-29.

117. Калюжная, М.В. Особенности механизма действия миелопептидов, обладающих противоопухолевой активностью: Автореф дис. . канд. биол. наук / М.В. Калюжная. М., 2006. - 18 с.

118. Каминская, Т.О. Состояние системы гемостаза у больных с хроническими заболеваниями легких / Т.О. Каминская, Б.А. Серебряная, JI.B. Казакова // Пробл. туб. 1991. - №8. - С. 5-8.

119. Карпинская, Ю.Ю. Факторы местной защиты органов дыхания при хроническом бронхите и его преморбидных формах: Автореф. дис. . канд. мед. наук/ Ю.Ю. Карпинская. Владивосток, 1997. - 24 с.

120. Кашкина, М.А. Влияние дрожжевых полисахаридов на иммунологическую реактивность организма: Автореф. дис. . канд. биол. наук / М.А. Кашкина. Л., 1974. 17 с.

121. Клиническая иммунология и аллергология: В 3-х т. / Л. Йегер, Г. Амброзиус, Р. Байер и др. / Под ред. Л. Йегера; пер. с нем. Под ред. Р.В. Петрова. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1990. - Т.1.- 526 с.

122. Ключерева, H.H. Патогенетическое обоснование применения вилона при сахарном диабете первого типа: Автореф дис. . канд. мед. наук / H.H. Ключерева. Чита, 2005. - 21 с.

123. Козлова, Л.И. Хронические обструктивные заболевания легких и ишемическая болезнь сердца: некоторые аспекты функциональной диагностики / Л.И. Козлова//Пульмонология. 2001. - №2. - С. 9-12.

124. Козлов, В.К. Иммунопатогенез и цитокинотерапия хирургического сепсиса: Автореф дис. . д-ра мед. наук / В.К. Козлов. М., 2002. - 48 с.

125. Козлов, В.А. Некоторые аспекты проблемы цитокинов / В.А. Козлов // Цитокины и воспаление. 2002.- Т.1. - №1. - С. 5-8.

126. Козлов, В.К. Патогенетическая иммуноориентирванная терапия при тяжёлой хирургической патологии / В.К. Козлов, В.Ф. Лебедев, А.Д. Толстой // Цитокины и воспаление. 2002. - Т. 1. - № 2. - С. 45.

127. Козлов, В.К. Дисфункция иммунной системы в патогенезе сепсиса: возможности диагностики / Козлов В.К. // Цитокины и воспаление. 2006.-Т.5. - №2. - С. 15-29.

128. Кокосов, А.Н. Распространенность и социальное значение хронической обструктивной болезни легких / А.Н. Кокосов В кн.: Хронический бронхит и обструктивная болезнь легких. - СПб: Лань, 2002. - С. 80-81.

129. Коннова Ю.А. Патогенетические механизмы интоксикационного синдрома при острых кишечных инфекциях и методы его коррекции: Автореф дис. . канд. мед. наук / Ю.А. Коннова. М., 2007. - 23 с.

130. Короткевич, Т.В. Особенности изменения содержания холестерина в липопротеидах крови и в печени у крыс при повреждении печени различного генеза/ Т.В. Короткевич // Белорусский мед. журн.-2005. №3(13). - С. 32-35.

131. Костюченко, А.Л. Ронколейкин®: иммунокоррекция в лечении сепсиса / А.Л. Костюченко.- СПб: изд-во СПб ГУ, 2000. 11 с.

132. Косякова, Н.И. Дисбаланс продукции цитокинов у больных тяжелым хирургическим сепсисом / Н.И. Косякова, С.В. Прохоренко, И.Р. Прохоренко // Иммунология. 2005. - №5. - С. 319-322.

133. Коэн, Д. Современные подходы к лечению сепсиса: есть ли новые надежды? / Д. Коэн // Клинич. микр. и антимикробная терапия. 2002.- №4. -С. 300-312.

134. Крашутский, В.В. ДВС-синдром в клинической практике / В.В. Крашутский // Клин. мед. 1998. - № 3. - С. 8-14.

135. Крупянко, Р.И. Возможности использования векторного метода представления ферментативных реакций в анализе данных ингибирования ферментов / Р.И. Крупянко // Прикладная биохимия и микробиол. 1996. - Т. 32.- № 1.с. 155-164.

136. Кудряшова, О.Ю. Прямые ингибиторы тромбина в терапии острых коронарных синдромов / О.Ю. Кудряшова Электронный ресурс.: Режим доступа: http://www.medicus.ru/cardiology/spec/ 02.2002/html. Загл. с экрана.

137. Кузнецова, Т.А. Иммуногенные и иммуномодулирующие свойства липополисахарида псевдотуберкулезного микроба: Дис. . канд. мед. наук: / Т.А. Кузнецова. Владивосток, 1987. - 178 с.

138. Кузник, Б.И. Физиология и патология системы крови / Б.И. Кузник. -Чита, 2004. 336 с.

139. Кузник, Б.И. Аутоиммунные механизмы регуляции системы гемостаза / Б.И. Кузник, H.H. Цыбиков // Сиб. онкологич. журн. 2005. - №1(13). - С. 8895.

140. Кузник, Б.И. Цитомедины (25-летний опыт экспериментальных и клинических исследований) / Б.И. Кузник, В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон. -СПб: Наука, 1998.-310 с.

141. Кузник, Б.И. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма / Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цыбиков H.H. М.: Медицина, 1989. - 320 С.

142. Латышева, И.Б. Влияние Ронколейкина® на состояние иммунитета и гемостаза у больных вирусным гепатитом А: Автореф дис. . канд. мед. наук / И.Б. Латышева. Чита, 2006. - 22 с.

143. Лебедев, К.А. Иммунология в клинической практике / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина М.: Наука, 1990. - 223 с.

144. Лебедев, В.В. Иммунологические и патогенетические аспекты терапии инфекционных больных регуляторными пептидами / В.В. Лебедев, В.И. Покровский // Эпид. и инф. болезни. 1999. - № 2. - С. 52-56.

145. Лейдерман, И.Н. Синдром полиорганной недостаточности (ПОН). Метаболические основы / И.Н. Лейдерман // Вестник интенсивной терапии. -1999.-№2.-С. 8-13.

146. Лейкинферон и новая тактика лечения оппортунистических инфекций /

147. B.П. Кузнецов, Д.Л. Беляев, Е.В. Маркелова и др. // Оппортунистические инфекции: проблемы и перспективы Омск: Омская медицинская академия, 2002.-С. 15-18.

148. Леонов, В.П. Применение статистики в статьях и диссертациях по медицине и биологии. Часть I. Описание методов статистического анализа в статьях и диссертациях / В.П. Леонов, П.В. Ижевский // Межд. журнал мед. практики. 1998, вып. 4. - С. 7-12.

149. Лечение ХОБЛ. Клинические рекомендации. М: ГЕОТАР Медиа, 2004. - 16 с.

150. Ликов, В.Ф. Особенности развития иммунологических нарушений при неспецифических воспалительных заболеваниях легких и ишемической болезни сердца и их коррекция: Автореф дис. . д-ра мед. наук / В.Ф. Ликов. М., 2005. - 50 с.

151. Лиходед, В.Г. Роль эндотоксина грамотрицательных бактерий в инфекционной и неинфекционной патологии / В.Г. Лиходед, Н.Д. Ющук, М.Ю. Яковлев //Архив патол. 1996. - №2. - с. 8-13.

152. Лоенко, Ю.Н. Биологическая активность и механизм действия биополимеров из морских организмов: Дис. . д-ра биол. наук / Лоенко Ю.Н. Владивосток, 1999. - 211 с.

153. Лукашин, Б.П. Роль гепарина в повышении неспецифической резистентности организма / Б.П. Лукашин // Пат. физиол. и эксп. терапия.-1982.-№5.-С. 81-87.

154. Лычев, В.Г. Диагностика и лечение диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови / В.Г. Лычев Н.Новгород, 1998.-191с.

155. Макаревич, А.Э. Реакция системы гемостаза у больных в ходе прогрессирования хронического бронхита / А.Э. Макаревич, H.H. Гомолко, С.С. Кисель // Пульмонология. 1992, №1. - С. 34-39.

156. Макаревич, А.Э. Иммунологические нарушения при хроническом бронхите / А.Э. Макаревич, И.П. Данилов, П.П. Мурзенок // Клин, мед.- 1990. -Т.68.-№10.-С. 44-47.

157. Макаров, В.А. Хиторин новый антикоагулянт прямого действия / В.А. Макаров // Клин. лаб. диагн. - 1997.- №5.- С. 34-37.

158. Макаров, В.А. Гемостаз и реология крови / В.А. Макаров, H.A. Горбунова. М.: Триада-фарм, 2003. - 104 с.

159. Макаров, В.А. Применение гепаринов в клинической практике / В.А. Макаров, Т.Б. Кондратьева Электронный ресурс.: Режим доступа: http://www.rmi.ru/main.htm / rmj/16/ пЗ/ 4.htm Загл. с экрана.

160. Максимова, О.П. Влияние тималина на течение острого гнойного перитонита у детей / О.П. Максимова, Г.Б. Будажабон, Б.И. Кузник // Вестн. хирургии им. И.И. Грекова. 1987. - Т. 138. - №3. - С. 111-112.

161. Маркелова, Е.В. Система цитокинов у больных с острыми повреждениями легких и клинико-иммунологическое обоснование терапии лейкинфероном: Дис. . д-ра мед. наук / Е.В. Маркелова. Владивосток, 2000. - 338 с.

162. Маслаков, Д.А. Биологическая активность некоторых полисахаридов и их применение в клинике / Д.А. Маслаков, К.А. Эйсмонт. Минск: Беларусь, 1977.- 128 с.

163. Медуницын, Н.В. Медиаторы иммунного ответа / Н.В. Медуницын // Rus. J. Immunol. 1999. - V.4- Suppl.l. - P. 43-46.

164. Меркулов, Г.А. Курс патогистологической техники / Г.А. Меркулов.- JL: Медицина, 1969. 424 с.

165. Местная иммунотерапия в клинической практике / И.В. Ярема, В.В. Евдокимов, Б.М. Уртаев и др. // Аллергол. и иммунол, 2001. Т2. - №1,- С. 125-136.

166. Место антиагрегантной терапии в комплексном лечении бронхиальной астмы у детей i P.M. Ларюшкина, Т.Г. Глазова, А.И. Рывкин, Ю.А. Линькова // Тез. докл. 13 Национального конгресса по болезням органов дыхания. — СПб. 2003. - С. 27.

167. Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств / Р.В. Петров, P.M. Хаитов, В.М. Манько и др.- М., Фармакологический комитет, 1984. 69 С.

168. Механизмы воздействия фукоидана на комплемент человека / Л.В. Галебская, Е.В. Рюмина, Т.А. Богомаз, М.Е. Преображенская // Биомед. химия. 2003. - 49. - №6. - С. 542-547.

169. Механизмы биорегуляции / Г.М. Яковлев, Е.С. Новиков, В.Х. Хавинсон и др. СПб: Наука, 1992. - 40 с.

170. Михайлова, A.A. Регуляторные пептиды костного мозга иммуномодуляторы нового поколения / A.A. Михайлова // Аллергол. и иммунол. 2001. - Т.2. - №.1. - С. 46-52.

171. Михайлов, И.В. Регуляторные пептиды в норме и патологии (Цитомедины) / И.В. Михайлов. Чита, 1991.- 39 с.

172. Михайлова, Л.П. Сравнительная характеристика цитокинового профиля и морфологических проявлений гранулематозного воспаления у мышей

173. BALB/c и C57BL/6 / Л.П.Михайлова, О.В.Макарова // Иммунология. 2005. -Т.26. - №2. - С. 95-98.

174. Михайлова, A.A. Миелопептиды-новая группа регуляторных пептидов /

175. A.A. Михайлова // Иммунология. 1999. - №4. - С. 14-17.

176. Михайлова, A.A. Физиологические основы иммунорегуляторного действия эндогенных пептидных медиаторов / A.A. Михайлова // Аллергология и иммунология. 2007. - Т.8. - №2. - С. 186-187.

177. Моисеева, Г.Ф. Иммуностимулирующие полисахариды высших растений / Г.Ф. Моисеева // Фармация. 1992. - №3. - С. 9-84.

178. Момот, А.П. Патология гемостаза. Принципы и алгоритмы клинико-лабораторной диагностики / А.П.Момот. СПб: ФормаТ, 2006. - 208 с.

179. Морозова, Т.В. Особенности нарушений гемостаза у больных с дифтерийной токсемией: Автореф дис. . канд. мед. наук / Т.В. Морозова. СПб, 2007. 21 с.

180. Морозов, В.Г. Пептидные тимомиметики / В.Г. Морозов, В.Х.~Хавинсон,

181. B.В. Малинин СПб: Наука. - 2000. - 158 с.

182. Морозов, В.Г. Пептидные биорегуляторы (25-летний опыт экспериментального и клинического изучения / В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон В.Х. СПб: Наука, 1996. - 74 с.

183. Мурзабаева, Р.Т. Взаимосвязь системы гемостаза, интерферона и иммунитета при геморрагической лихорадке с почечным синдромом / Р.Т. Мурзабаева, В.В. Малиновская //Эпид. и инфекц. болезни. 2004. - №5. - С. 32-35.

184. Мымрикова, Е.Г. Пневмония у лиц с факторами риска: клинико-иммунологические особенности и возможности иммунокорригирующей терапии: Дис. . канд. мед. наук / Е.Г. Мымрикова. Владивосток, 2003. - 138 с.

185. Мягков, И.И. Хронический бронхит / И.И. Мягков, П.С. Назаров. Киев: Здоров"я, 1991.- 160 с.

186. Назаров, П.Г. Комплемент и реактанты острой фазы воспаления в процессах неспецифической резистентности и иммунорегуляции / П.Г. Назаров // Rus J. Immunol. 1999. -V.4, suppl.l. - P. 79-84.

187. Назаров, П.Г. Новые функции цитокинов / П.Г. Назаров // Иммунология. 1998.-№6.- С. 19.

188. Назарова, И.В. Влияние полисахаридов из морских водорослей и трав на систему комплемента: Дис. . канд. мед. наук / И.В. Назарова. -Владивосток, 1999. 131 с.

189. Нарушения системы гемостаза у больных инфекционными болезнями / A.M. Полякова, A.B. Кравченко, О.С. Астрина и др. // Эпидемиология и инфекц. болезни. 1999. - №2. - С. 57-59.

190. Незговоров, Д.В. Физиологические механизмы иммунного гомеостаза под влиянием фукоидана: Автореф дис. . канд. биол. наук / Д.В. Незговоров. Архангельск, 2005. - 18 с.

191. Нестерова, И.В. Иммуномодулирующие эффекты ликопида при экспериментальной депрессии нейтрофильных гранул оцитов / И.В. Нестерова, Н.В. Колесникова, Г.А. Чудилова // Иммунология. 1999. - № 6. -С. 60-61.

192. Нестерова, И.В. Бестим в коррекции дисфункций нейтрофильных гранулоцитов пациентов с хроническим осложненным панкреатитом в эксперименте in vitro / И.В. Нестерова, И.Н. Швыдченко, И.В. Фесенко // Цитокины и воспаление. 2006. - Т. 5, № 2. - С. 42-46.

193. Новикова, В.М. Координация систем регуляции в антигенстимулированных клетках / В.М. Новикова // Иммунология. 1995. -№ 1.- С. 7-10.

194. Новый метод определения антитромбина III и его диагностическое значение / З.С. Баркаган, А.П. Момот, А.Н. Мамаев и др. // Клин. лаб. диагностика. №7. - 2004. - С. 18-21.

195. Облучинская, Е.Д. Совершенствование способа получения экстракта из шрота фукусовых водорослей / Е.Д. Облучинская, С.А. Минина // Химикофарм. журн. 2004. - № 6. - С. 36-39.

196. Опыт применения препарата лейкинферон в комплексной терапии синдрома бронхообструкции / О.В. Бондарь, Ю.И. Демидов, К.А. Зыков и др. // Int. J. Immunoreh. 2001. - Vol. 3. - №1. - С. 11.

197. Основы иммунокоррекции / Д.К. Новиков, В.И. Новикова, Ю.Н. Деркач, П.Д. Новиков. Витебск, 1998.- 106 с.

198. Особенности нарушений системы гемостаза у больных пожилого возраста, страдающих хроническими воспалительными заболеваниями легких / Я.А. Дзюблик, H.A. Морозова, Т.В. Яхница, и др. // Укр. пульмонологический журнал. 2002. - №4. - С. 58-61.

199. Особенности цитопатогенного действия токсинов возбудителей особо опасных инфекций / В.Ф. Киричук, Н.П. Чеснокова, Е.В. Понукалина, Л.Г. Белов // Материалы конф. СПб., 1995. - С. 35-36.

200. Особенности клинико-иммунологического действия Ликопида при некоторых хронических заболеваниях ЛОР-органов / C.B. Филатова, A.B. Симонова, М.Е. Артемьев, Н.М. Голубева // Иммунология. 2001. - № 2. - С. 37-42.

201. Останин, A.A. Иммунопатогенетические аспекты и цитокинотерапия хирургических инфекций: Автореф дис. . д-ра мед. наук / A.A. Останин.,-С-Пб., 1999. 44 с.

202. Останин, A.A. Ронколейкин в иммунопрофилактике постхирургических инфекций. Пособие для врачей. / A.A. Останин, Е.Р. Черных. — СПб., 2005 -25 с.

203. Отечественный иммуномодулятор нового поколения ликопид в комплексном лечении и профилактике инфекционных осложнений в хирургической практике / Л.И. Винницкий, К.А. Бунатян, Б.В. Пинегин и др. // Вестник РАМН. 1997. - № 11. - С. 46-48.

204. Павлов, Е.Е. Роль тималина в комплексном лечении бронхиальной астмы / Е.Е. Павлов // Геронтол. аспекты пептидной регуляции функций организма. СПб.: Наука. - 1996. - С. 63-65.

205. Панченко, Е.П. Тромбозы в кардиологии. Механизмы развития и возможности терапии / Е.П. Панченко, А.Б. Добровольский М.: Спорт и культура. - 1999. - 464 с.

206. Папаян, Л.П. Д-Димер в клинической практике: Пособие для врачей / Л.П. Папаян, Е.С. Князева / Под редакцией H.H. Петрищева. М.: 000 Инсайт полиграфик, 2002. - 20 с.

207. Пат. Российская Федерация.- № 2222337, МКИ С1 7 А61К35/30, А61К35/60, A23L1/333. Способ получения иммуностимулятора / Л.М.Эпштейн, Г.А.Боровская, Н.Н.Ковалев и др.; заявитель и патентообладатель Тихоокеанский рыбохозяйственный научный центр

208. ТИНРО-центр)- № 2002117863/13; заяв. 2004.07.03; опубл.2004.01.27, Бюлл. №3. 3 е.: ил.

209. Пат. Российская Федерация. №2122812 (13) С1 (51) 6 A23L1/337, А61К35/80. Натуральный продукт питания на основе морских водорослей /

210. B.Н. Егоров, Т.А. Егорова. Заявитель и патентообладатель Общество с ограниченной ответственностью «Университетская инновационная компания Литораль».- Заявл.: 1997.08.26; опубл.: 1998.12.10.

211. Патеюк, A.B. Сравнительное действие тималина и бурсилина на иммунитет и гемостаз у неонатально гипофизэктомированных цыплят / A.B. Патеюк, Б.И. Кузник // Иммунология. 2003. - №4. - С. 216-218.

212. Патеюк, А.В Гипофиз, иммунитет и гемостаз / A.B. Патеюк. Б.И. Кузник, М.А. Джулай. Чита: Поиск, 2003. - 129 с.

213. Патеюк, A.B. Роль пептидных факторов гипофиза, тимуса и сумки Фабрициуса в регуляции иммунитета и гемостаза: Автореф дис. . д-ра мед. наук / A.B. Патеюк. Чита, 2004. - 43 с.

214. Патогенетические механизмы и клинические аспекты действия термостабильного эндотоксина кишечной микрофлоры / В.А. Таболин, М.Ю. Яковлев, А.Я. Ильина и др. // Русский мед. журнал. 2003. - Т. 11. - №3. - С. 55-60.

215. Пептидные механизмы регуляции иммунитета и гемостаза / Б.И. Кузник, A.B. Патеюк, М.А. Джулай и др. // Аллергол. и иммунол. 2005. - Т.6. - №21. C. 160-161.

216. Пермяков, Н.К. Эндотоксин и система полиморфноядерного лейкоцита / Н.К. Пермяков, М.Ю. Яковлев, В.Н. Галанкин // Архив патологии. 1989. -№5.-С. 3-11.

217. Применение тинростима в комплексном лечении герпетической инфекции / В.Н. Суховей, А.К. Гажа, Е.В. Завадская и др. // Тихоокеанский мед. журн. 1999. - № 3. - С.92-93.

218. Принципы патогенетической терапии септического шока / С.В. Грачев, Г.А. Якунин, В.В. Новочадов, И.Ф. Ярошенко // Клин. лаб. диагностика. -1992.-№5.-С. 6-10.

219. Покровский, В.М. Физиология человека / Под ред. В.М. Покровского, Г.Ф. Коротько. М.: Медицина, 2003. - изд. 2. перераб., доп. - 656 с.

220. Полисахариды водорослей. 53. Бурая водоросль Laminaria saccharina. Laminaria, как источник фукоидана / А.И. Усов, Г.П. Смирнова, М.И. Билан, А.С. Шашков // Биоорганическая химия. 1998. - Т. 24. - С. 437-445.

221. Полякова, А.М. Роль тромбоцитарного звена гемостаза в генезе гемокоагуляционных нарушений у больных бактериальными инфекциями: Автореф дис. . д-ра мед. наук / А.М. Полякова. М., 2000. - 45 с.

222. Прохорова, М.П. Диагностика и лечение бронхообструктивного синдрома у детей, вызванного Clamudia pneumoniae / М.П. Прохорова, Н.Г. Бычкова // Иммунология и аллергология. 2001. - №1. - С. 71-72.

223. Псевдотуберкулез / И.А. Шурыгина, М.В. Чеснокова, В.Т. Климов и др.-Новосибирск: Наука, 2003. 320 с.

224. Пути коррекции иммунной недостаточности на разных стадиях ожоговой болезни с целью профилактики и лечения сепсиса / И.П. Назаров,

225. А.А. Попов, Б.В. Протопопов, Ж.Н. Кокоулина // Анестезиология и реаниматология. 1999. - №1. - С. 63-68.

226. Пушкарева, Т.В. Экспериментальное обоснование клинического применения тинростима при псевдотуберкулезной инфекции: Дис. . канд. мед. наук / Т.В. Пушкарева. Владивосток, 2004. - 155 с.

227. Рахматов, А.Б. Витилиго: Современные концепции патогенеза и лечения / А.Б. Рахматов, Д.Р. Хошимов // Укр. журнал дерматологии, венерологии, косметологии.- 2003. №4. - С. 53-57.

228. Ребенок, Ж.А. Септические заболевания сепсис: лечение / Ж.А. Ребенок // Терап. архив. - 2005. - Т.77, №11. - С. 41-44.

229. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростоф, Д. Мейк. М.: Мир, 2000. -378 с.

230. Ройтман, Е.В. Применение современных средств лекарственной тромбопрофилактики / Е.В. Ройтман Е.В. // Лечебное дело. 2005. - №2. - С. 42-45.

231. Роль макрофагов в патогенезе токсического синдрома, вызванного введением эндотоксина / М.Т. Абидов, М.В. Нелюбов, А.П. Хохлов и др. // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2000, прилож 3. - С. 20-21.

232. Романова, С.Б. Оптимизация диагностики и лечения бронхиальной астмы с позиций клинической иммунологии и гемостаза: Автореф дис. . канд. мед. наук / С.Б. Романова. Самара, 2002. - 20 с.

233. Руднов, В.А. Сепсис: современный взгляд на проблему / В.А. Руднов // Клиническая антимикр. терапия. Т 1 и 2. - 2000. - С. 4-10.

234. Руднов, В.А. Пути оптимизации диагностики, прогноза и интенсивной терапии сепсиса с органной дисфункцией: Автореф дис. . канд. мед. наук / В.А. Руднов. Екатеринбург, 1995. - 18 с.

235. Рябиченко, Е.В. Молекулярные аспекты повреждающего действия бактериальных липополисахаридов / Е.В. Рябиченко, В.М. Бондаренко, Л.Г. Веткова // Журн. микробиол. 2004. - №3. - С. 98-105.

236. Сандлер, Н.Б. Гормоны тимуса серых китов и перспективы их использования в медицине: Дис. . канд. мед. наук / Н.Б. Сандлер. -Владивосток, 1987. 350 с.

237. Сенникова, Ю.А. Сравнительная клинико-иммунологическая эффективность применения иммуностимуляторов в лечении больных хроническим бронхитом / Ю.А. Сенникова, B.C. Ширинский // Иммунология. 1996. -№ 4. - С. 44-47.

238. Сепсис в начале XXI века: классификация, клинико-диагностическая концепция и лечение / Методические рекомендации под ред. B.C. Савельева, М,- 2004.- 32 с.

239. Сепсис у онкологических больных в раннем послеоперационном периоде: взгляд клинициста / И.В. Нехаев, С.П. Свиридова, О.Г. Мазурина и др. // Инфекции и антимикр. терапия. 2003. - Т.5. - №1. - С. 18-21.

240. Славянская, Т.А. Особенности иммунореабилитации больных с нарушенной функцией иммунной системы: Автореф дис. . д-ра мед. наук / Т.А. Славянская. М., 1999. - 47 с.

241. Смирнова, B.C. Иммунодефицитные состояния / B.C. Смирнова, М.С. Фрейдлин. СПб.: Фолиант, 2000. - 561 с.

242. Силич, E.B. Мониторинг иммунологических и биохимических маркеров воспаления у больных нозокомиальными пневмониями в отделении интенсивной терапии: Автореф дис. . канд. мед. наук / Е.В. Силич.-Владивосток, 2002. 24 с.

243. Симбирцев, A.C. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма / A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление. - 2002. - Т.1. - №1. - С. 9-17.

244. Симбирцев, A.C. Толл-белки: специфические рецепторы неспецифического иммунитета / A.C. Симбирцев // Иммунология. 2005. -№6. - С. 368-377.

245. Сингур, O.A. Цитокиновое обеспечение фагоцитарной защиты и ее коррекция, микробиологические особенности хронической гонореи у мужчин: Автореф дис. . канд мед наук / O.A. Сингур. Владивосток, 2003. -22 с.

246. Смирнов, М.Н. Ронколейкин®. Интерлейкин-2 человека рекомбинантный дрожжевой / М.Н. Смирнов. СПб., 1998. - 45 с.

247. Смолин, В.А. Математическое моделирование в геологии и геофизике (статистика) / В.А.Смолин. Владивосток, 2007. - 230 с.

248. Современные аспекты патогенеза эндотоксинового шока / И.М. Салахов,

249. A.И. Ипатов, Ю.В. Конев, М.Ю. Яковлев // Усп. совр. биол. 1998. - Т. 118, вып. 1. - С. 33-48.

250. Сомов, Г.П. Дальневосточная скарлатиноподобная лихорадка / Г.П. Сомов. М.: Медицина, 1979. - 184 с.

251. Сонина, JI.H. Сравнительная активность полисахаридов при экспериментальном поражении печени: Автореф дис. . канд. биол. наук / JI.H. Сонина. Владивосток, 2007. - 24 с.

252. Специфическая и неспецифическая иммунокоррекция / A.M. Земсков,

253. B.М. Земсков, В.И. Золоедов и др. // Успехи совр. биол. 1997 - Вып. 3.- Т. 117.-С. 261-268.

254. Сравнительное исследование антикоагулянтной активности сульфатированных полисахаридов бурых морских водорослей / М.Я. Розкин, М.Н. Левина, B.C. Ефимов, А.И. Усов // Фармакол. и токсикол. 1988. - № 4. - С. 63-68.

255. Сравнительное изучение иммуномодулирующих свойств хитозана и его производных / Л.А. Иванушко, Т.Ф. Соловьева, Т.С. Запорожец и др. // Мед. иммунология. 2007. - Т.9. - № 4-5. - С. 397-404.

256. Суворов, А.П. Система гемостаза, иммунного статуса и ферментов протеолиза у больных атопическим дерматитом в процессе КВЧ-терапии / А.П. Суворов, В.Ф. Киричук, О.В. Тарасова // Вестник дерматологии и венерологии, 1998. № 6. - С. 16-19.

257. Сульфатироваанные полисахариды как ингиборы рецепторной активности Р-селектина и Р-селектинзависимого воспаления / А.В. Семенов, А.В. Мазуров, М.Е. Преображенская и др. // Вопросы мед. химии. 1997. - Т. 44, вып. 2. - С. 135-144.

258. Струков, А.И. Патологическая анатомия: Учебник. 4-е изд., стереотипное / А.И. Струков, В.В. Серов - М.: Медицина, 1995. - С. 520-525.

259. Тарбаева, Д.А. Взаимосвязь параметров иммунитета и гемостаза с HLA-фенотипом / Д.А. Тарбаева, Д.Ц. Нимаева // Аллергол и иммунол. 2005. -Т.6, №2. - С. 163.

260. Токсины Yersinia pseudotuberculosis / Н.Ф.Тимченко, Е.П. Недашковская, Л.С. Долматова, Л.М. Сомова-Исачкова. Владивосток, 2004. - 256 с.

261. Тринус, Ф.П. Фармакологическая регуляция воспаления / Ф.П. Тринус, Б.М. Клебанов, И.М. Гондта. Киев, 1987. - 144 С.

262. Туев, А.В. Бронхиальная астма (иммунитет, гемостаз, лечение) / А.В. Туев, В.Ю. Мишланов. Пермь: Звезда. - 2001. - 220 с.

263. Федосеев, Г.Б. Механизмы обструкции бронхов / Г.Б. Федосеев. М.: Медицинское информационное агенство. - 1995. - 336 с.

264. Физико химические свойства, физиологическая активность и применение альгинатов — полисахаридов бурых водорослей / Ю.С.

265. Хотимченко, B.B. Ковалёв, O.B. Савченко, O.A. Зиганшина // Биол. моря. -2001.-Т. 27(3).-С. 151-162.

266. Физиология системы гемостаза / В.П. Балуда, М.В. Балуда, И.И. Деянов, И.К. Тлепшуков. М.: 1995. - 243 с.

267. Физиологические механизмы развития экстремальных состояний / Е.В. Понукалина, Н.П. Чеснокова, В.Ф. Киричук, А.К. Адамов // Материалы науч.- практ. конф., поев. 100-летию образования противочумной службы России. Саратов. - 1997. - Т.2. - С. 101-102.

268. Филиппова, J1.A. Взаимосвязь показателей гемостаза и иммунитета при интенсивной терапии сепсиса / JI.A. Филиппова, Н.Ю. Келина // Материалы докладов V Всерос. съезда анестезиологов и реаниматологов. Москва, 1996.-Т. 2.-е.- 111.

269. Фрейдлин, И.С. Иммунные комплексы и цитокины / И.С. Фрейдлин, С.А. Кузнецова//Мед. иммунология. 1999. - Т.1. - №1-2. - С.27-36.

270. Фрейдлин, И.С. Клетки иммунной системы / И.С. Фрейдлин, A.A. Тотолян. СПб.: Наука, 1999. - 64 с.

271. Фрейдлин И.С. Паракринные и аутокринные механизмы цитокиновой иммунорегуляции / И.С. Фрейдлин // Иммунология. 2001. - № 5. - С. 4-8.

272. Фрейдлин, И.С. Иммунная система и ее дефекты / И.С. Фрейдлин. -СПб: Полисан, 1998. 110 с.

273. Хаитов. P.M. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2001. -№4. - С. 4-6.

274. Хаитов, P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, Х.И. Истамов.- М.: ВНИРО. 219 с.

275. Хаитов, P.M. Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / P.M. Хаитов, Б.В.Пинегин // Аллергология и иммунология. -2000.-Т.1.-№2.-С. 14-18.

276. Хаитов, P.M. Отечественные иммунотропные лекарственные средства последнего поколения и стратегия их применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин, Т.М. Андронова // Леч. врач. 1998. - № 4. - С. 46-51.

277. Харланов, A.B. Влияние хитозана с различной степенью ацетилирования на антителообразование у мышей / A.B. Харланов // Мед. иммунология. -2005. Т.7. - №2-3 - С. 329-332.

278. Цепелев, B.JT. Механизмы действия регуляторных пептидов при иммунодефицитных состояниях и воспалении: Автореф. дис. . д-ра. мед. наук / B.JT. Цепелев. Чита, 2003. - 41с.

279. Цитокиновая терапия при травме и посттравматических гнойно-септических осложнениях / A.M. Попович, A.C. Симбирцев, А.Г. Соловьёв, М.Н. Смирнов // Мед. иммунология. 2000. Т. 2, № 2. - С. 231.

280. Цитокиновый баланс в патогенезе системного воспалительного ответа: новая мишень иммунотерапевтических воздействий при лечении сепсиса / Е.Р. Черных, О.Ю. Леплина, М.А. Тихонова и др. // Мед. иммунол. 2001. -Т.3.-№3.-С. 415-429.

281. Цыбенова, Б.Ц. Применение иммуномодулятора тималина при лечении хронических заболеваний легких у детей / Б.Ц. Цыбенова // Бюлл. Восточно-Сиб. науч. центра СО РАМН. 2005. - №4. - С. 139.

282. Цыбиков, H.H. Иммунные механизмы регуляции гемостаза / H.H. Цыбиков, Б.И. Кузник // Пробл. гемотол. и переливания крови. 1986. - №2. -С. 23-28.

283. Цыбиков, Н.Н Материалы по взаимосвязи иммуногенеза и гемостаза в эксперименте: Автореф дис. . д-ра мед. наук / H.H. Цыбиков. Л., 1983. - 40 с.

284. Цыбиков, H.H. Выявление аутоантител к факторам свертывания крови реакцией пассивной гемагглютинации и иммуноферментным (ELISA) методом / H.H. Цыбиков, М.П. Рудник, Б.И. Кузник // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1985. - №4. - С. 487-469.

285. Цыган, В.Н. Хитозан как компонент парафармацевтиков в иммуноориентированной терапии / В.Н. Цыган, К.Д. Жоголев, В.Ю. Никитин // Концептуальные вопросы питания населения и военнослужащих. — СПб., 2001.-Т.2-С. 37-43.

286. Чалый, Г.А. Ингибиторы протеаз как иммуностимуляторы при остром панкреатите и стафилококковой инфекции в эксперименте / Г.А. Чалый, Л.Г. Прокопенко, H.A. Латыш // Журн. микробиол. 1993. - № 1. - С. 62-65.

287. Черствой, Е.Д. Синдром диссеминированного внутрисосудистого свертывания при эндотоксиновом шоке / Е.Д. Черствой, В.А. Сятковский, Д.Г. Григорьев // Архив патол. 1990. - Т.52, №9. - С. 51-56.

288. Чиркунов, A.B. Влияние тималина, тимогена и вилона на некоторые показатели иммунитета и гемостаза: Автореф дис. . канд. мед. наук / A.B. Чиркунов. Чита, 2000. - 22 с.

289. Чувиров, Д.Г. Клинико-иммунологическая эффективность применения ликопида у детей с повторными инфекциями верхних дыхательных путей / Д.Г. Чувиров, М.Н. Ярцев // Иммунология. 2000. - №2. - С.48-50.

290. Чучалин, А.Г. Клинические рекомендации по лечению хронической обструктивной болезни легких / А.Г. Чучалин. МЗ РФ., М., 2002. - 66 с.

291. Чучалин, А.Г. Глобальная стратегия диагностики, лечения и профилактики хронической обструктивной болезни легких (пересмотр 2003) / Пер с англ.: Под ред. А.Г. Чучалина М.: Атмосфера, 2003. - 96 с.

292. Чучалин, А.Г. Хронические обструктивные болезни легких / А.Г. Чучалин А.Г. М.: Бином; СПб.: Невский диалект, 1998. - 512 с.

293. Чучалин, А.Г. Иммунокоррекция в пульмонологии / А.Г. Чучалин, В.Я. Арион, Н.Г. Евсеев и др. М: Медицина, 1989. - 256 с.

294. Шабалов, Н.П.Основы перинатологии / Н.П. Шабалов. М., 2004.- 640 с.

295. Шанина, Н.Ю. Клиническая эффективность и влияние на аутоиммунные процессы энтеросгеля при эндотоксикозах различного генеза: Автореф дис. . канд. мед. наук / Н.Ю. Шанина Волгоград, 2000. - 22 с.

296. Швыдченко, И.Н. Стресс-индуцированные дисфункции в системе нейтрофильных гранулоцитов и их коррекция миелопептидами (экспериментальное исследование): Автореф. дис. канд. биол. наук. / И.Н. Швыдченко. М., 2000. - 23 с.

297. Шевченко Н.М. Строение, биологическая активность полисахаридов некоторых бурых водорослей и продуктов их ферментативной трансформации: Дис. . канд. хим наук / Н.М. Шевченко. Владивосток,2001.-93 с.

298. Шилов, В.А. Сравнительное изучение эффективности иммуномодулирующих препаратов в комплексном лечении хронического обструктивного бронхита / В.А. Шилов, B.C. Ширинский // Клинич. мед. 1995.-№4.-С. 88-90.

299. Ширшев, C.B. Изменения некоторых показателей иммунного статуса и уровня кортизола при рецидивирующем обструктивном бронхите у детей. Иммунокоррекция полиоксидонием / C.B. Ширшев, В.А. Лопатина // Мед. иммунол. 2003. - Т.5, №5-6. - С. 555-562.

300. Шмелев, Е.И. Хроническая обструктивная болезнь легких / Е.И. Шмелев // Тер. архив. 1999. - № 12. - С. 74-78.

301. Шмелев, Е.И. Хроническая обструктивная болезнь легких / Е.И. Шмелев // Пульмонология. Избранные вопросы. 2001. - №2. - С. 1-9.

302. Шмелев, Е.И. Различия в диагностике и лечении бронхиальной астмы и хронической обструктивной болезни легких / Е.И. Шмелев // Consilium medicum: журнал доказательной медицины для практикующих врачей.2002. Том 4. - № 9. - С. 492-497.

303. Шунтов, В.П. Биология дальневосточных морей России / В.П. Шунтов. -Владивосток: ТИНРО-центр. 2001. - 580 с.

304. Юхно, Т.Р. Влияние интерлейкинов 1 и 2 на систему гемостаза: Автореф дис. . канд. мед. наук / Т.Р. Юхно. Чита, 1999. - 21 с.

305. Яан, В. Сепсис и ДВС. Центральная роль цитокинов / В. Яан, Т. Кате.- В кн.: Тромбозы и геморрагии. ДВС-синдром. Проблемы лечения. М., 1997. -С. 70-71.

306. Яковлев, М.Ю. Эндотоксиновая агрессия» как предболезнь или универсальный фактор патогенеза заболеваний человека и животных / М.Ю. Яковлев //Успехи совр. биол. 2003. - Т.123. - №1. - С. 31-40.

307. Яковлев, М.Ю. Системная эндотоксемия в физиологии и патологии человека: Автореф дис. . д-ра. мед. наук / М.Ю. Яковлев. М.: РАМПО, 1993.-58 с.

308. Ярилин, А.А. Тимус как орган эндокринной системы / А.А. Ярилин, И.М. Беляков // Иммунология. 1996. - №1. - С. 4-10.

309. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. М.: Медицина. -1999. - 607 с.

310. Ярилин, А.А. Взаимодействие эпителиальных и лимфоидных клеток барьерных тканей в норме и при патологии / А.А. Ярилин // Современные проблемы аллеогологии, иммунологии и иммунофармакологии. М., 2000. -вып. 1. - С. 261-298.

311. Ярилин, А.А. Гомеостатические процессы в иммунной системе. Контроль численности лимфоцитов / А.А. Ярилин // Иммунология. 2005. -№5.-С. 312-318.1. Иностранная литература

312. JACC. 1996.- Vol. 28.- P. 1328-1428.

313. Activated platelets induce monocyte chemotactic protein-1 secretion and surface expression of intercellular adhesion molecule-1 on endothelial cells / M. Gawaz, F.J. Neumann, T. Dickfeld et al. // Circulation. 1998. - Vol. 98. - P. 1164-1171.

314. Activated platelets induce tissue factor expression on human umbilical vein endothelial cells by ligation of CD40 / J.R. Slupsky, M. Kalbas, A. Willuweit et al. // Thromb. Haemost. 1998. - Vol. 80. - P. 1008-1014.

315. Adachi, K. Potentiation of host-mediated anti-tumor activity in mice by P glucan obtained from Crifola frondosa (Maitake) / K. Adachi, H. Nanba, H. Kuroda // Chem. Pharm. Bull. 1987. - Vol. 35. - P. 262-270.

316. Adkins, J.C. Lepirudin: a review of its potential place in the management of thrombotic disorders / J.C. Adkins , M.I. Wilde // BioDrugs. 1998. - Vol. 10. - N 3.-P. 227-255.

317. Aggravation of endotoxin-induced disseminated intravascular coagulation and cytokine activation in heterozygous protein-C-deficient mice / M.D. Levi, J. Dorffler-Melly, P. Reitsma et al. // Blood. 2003. - Vol. 101, N 12. - P. 4823-4827.

318. A highly regular fraction of a fucoidan from brown seaweed Fucus distichus / M.I. Bilan, A.A. Grachev, N.E. Ustuzhanina et al. // Carbohydr. Res. 2004 - Vol. 339.-P. 511-517.

319. Alvarez, G.F. Heparin-induced thrombosis with a normal platelet count / G.F. Alvarez, D. Bihari, D. Collins // Crit. Care Resusc. 2007, Vol. 9, N1. - P.51-53.

320. Alveolar inflammation and its relation to emphysema in smokers / R. Finkelstein, R.S. Fraser, H. Ghezzo et al. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 1995. -Vol.152.-P. 1666-1672.

321. Aminina, N.M. Hypolipemic activity of brown seaweed polymers and extracts / N.M. Aminina., H.D. Yoon, T.P. Novgorodseva // XVIII International Seaweed Symposium. Bergen, Norway. 2004. - P. 47.

322. An anticoagulative polysaccharide from an enzymatic hydrolysate of Ecklonia cava / Y. Athukorala, W-K. Jung, T. Vasanthan, Y.-J. Jeon // Carbogydrate Polymers. 2006. - Vol. 66. - P. 184-191.

323. Angulo, Y. Inhibitory effect of fucoidan on the activities of crotaline snake venom myotoxic phospholipases A (2) / Y. Angulo, B. Lomonte // Biochem. Pharmacol. 1993.- Vol. 66, N10. - P. 1993-2000.

324. A novel antivirally active fucan sulfate derived from an edible brown alga, Sargassum horneri / S. Preeprame, K. Hayashi, J.B. Lee et al. // Chem. Pharm. Bull. (Tokyo). 2001. - Vol. 49, № 4. - P. 484-485.

325. Antioxidative activities of several marine polysaccharides evaluated in a phosphatidylcholine-liposomal suspension and organic solvents / C. Xue, G. Yu, T. Hirata et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1998. - Vol. 62, №2. - P. 206-209.

326. Antioxidant activity of phlorotannins isolated from the brown alga Eisenia bicyclis / T. Nakamura, K. Nagayama, K. Uchida, R. Tanaka // Fisher. Sci. 1996. - Vol. 62, № 5. - P. 923-926.

327. Antithrombin activity of fucoidan / C.F. Church, J.B. Meade., R.E. Treanor, H.C. Whinna // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264. - N6.- P. 3618-3623.

328. Antitrombin activity of an algal polysaccharide / F. Trento, F. Cattaneo, R. Pescador // Tromb. Res. 2001.- Vol. 102.- P. 457-465.

329. Antitumor activity of low molecular weight fucans extracted from brown seaweed Ascophyllum nodosum / M. Ellouali, C. Boisson-Vidal, P. Durand, J. Jozefonvicz // Anticancer Res. 1993. Vol. 13. - P. 2011-2019.

330. Antitumor and immunomodulating activities of a (3-glucan obtained from liquid-cultured Grifola frondosa / I. Suzuki, K. Hashimoto, S. Oikawa et al. // Chem. Pharm. Bull. 1989. - Vol. 37. - P. 410-413.

331. Antiviral property and mode of action of a sulphated polysaccharide from Sargassum patents against herpes simplex virus type 2 / W. Zhu, L.C. Chiu, V.E.

332. Ooi et al. // Int. J. Antimicrob. Agents. 2004. - Vol. 24. - № 3. - P. 279-283.

333. An antivirally active sulfated polysaccharide from Sargassum horneri (Turner) / T. Noshino, T. Hayashi, K. Hayashi et al. // C. Agardh. Biol. Pharm. Bull. 1998. Vol. 21. - P. 730-734.

334. A study of fucoidan from the brown seaweed Chorda filum / A.O. Chizhov, A. Dell, H.R. Morris et al. // Carbohydr. Res. 1999. - Vol. 320, N 1. - P. 108119.

335. Atkinns, M.B. Therapeutic applications of Interleukin-2 / M.B. Atkinns, J. W. Mier. M. Dekker Inc, 1993. - 428 p.

336. Bactericidal activity of phlorotannins from the brown alga Ecklonia kurome / K. Nagayama, Y. Iwamura, T. Shibata // J. of Antimicrob. Chemother. 2002. -Vol. 50, №6.-P. 889-893.

337. Baglin, T. Disseminated intravascular coagulation: diagnosis and treatment / T. Baglin // BMJ. 1996. - Vol. 312. - P. 683-687.

338. Barnes, P.J. Chronic obstructive pulmonary disease: molecular and cellular mechanisms // P.J. Barnes, S.D. Shapiro, R.A. Pauwels // Eur. Respir. J. 2003. Vol. 22. - P. 672- 688.

339. B-cell stimulating activity of seaweed extracts / J.N Liu, Y. Yoshida, M.Q. Wang et al. // Int. J. Immunopharmacol. 1997.- Vol. 19, N3.- P. 135-142.

340. Bell, W.R. Heparin-induced coagulopathy // W.R. Bell, N.D. Anderson, A.O. Anderson // J. Lab. Clin. Med. 1977. - Vol. 89, №4. - P. 741-750.

341. Blood-borne tissue factor: another view of thrombosis / P.L. Giesen, U. Rauch, B. Bohrmann et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996.- P. 2311-2315.

342. Boneu, B. Low molecular weight heparins: are they superior to unfractionated heparins to prevent and to treat deep vein thrombosis? / B. Boneu // Thrombosis Research. 2000. - Vol. 100.-P. 113-120.

343. Bounameaux, H. Is laboratory monitoring of low-molecular-weight heparin therapy necessary? No / H. Bounameaux, P. de Moerloose // J. Thromb. Haemost. -2004. Vol. 2. - № 4. - P. 551-554.

344. Brennan, MJ. Adhesion of Bordetella pertussis to sulphatides and to the GalNac-P-1-4 Gal sequence found in glycosphingolipids / M.J. Brennan, J.H. Hannah, E. Leininger // J. Biol. Chem. 1991. - Vol. 266. - P. 18827-18831.

345. Carbohydrates of the antarctic brown seaweed Ascoseira mirabilis / P. Finch, E. Percival, I.R. Slaiding, H. Weigel // Phytochemistry. 1986. - Vol. 25. - P. 443449.

346. Casu, B. Heparin / Eds. D.A. Lane., U. Lindahl. CRC Press, Boca Raton, FL, 1989.-P. 25-49.

347. Clinical study of low molecular weight heparin therapy for sepsis / Y.H. Ai, L.N. Zhang, H. Gong et. al. // Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue. 2005. -Vol. 17, N12.-P. 736-739.

348. CDllb/CD18-dependent interactions of neutrophils with intestinal epithelium are mediated by fucosylated proteoglycans / K. Zen, Y. Liu, D. Cairo et al. // J. Immunol. 2002. - Vol. 169. - P. 5270-5278.

349. Cellular heparan sulfate participates in the metabolism of prions / O. Ben-Zaken, S. Tzaban, Y. Tal et al. // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278. - N 41. - P. 40041-40049.

350. Chemical characteristics and anticoagulant activities of a sulfated polysaccharide and its fragments from Monostroma latissimum / H.-J. Zhang, W.-J. Mao, F. Fang et al. // Carbohydrate Polymers. 2007,- Vol. 71. - №3. - P. 428434.

351. Chenand, X-H Q. Chemical characteristics and anticoagulant activities of a sulfated polysaccharide and its fragments from Monostroma latissimum / X.-H. Q. Chenand // Carbohydrate Polymers. 2007. - V.71, №3. - P. 428-434.

352. Clare, D.L. Saccharide anions as inhibitors of the malarie parasite // D.L. Clare, S.D. Su, E.A. Davidson // Glycoconj. J. 1997. - Vol. 14. - P. 473-479.

353. Choi, E.M. Immunomodulating activity of arabinogalactan and fucoidan in vitro / E.M. Choi, A.J. Kim, Y.O. Kim, J.K. Hwang // J. Med. Food. 2005. - Vol. 8. - P. 446-453.

354. Coagulation disorders in septic shock / L.G. Thijs, J.P. de Boer, M.C.M. de Groot, C.E. Hack // Intensive Care Med. 1993.- Vol. 19, Suppl 1. - P. 8-15.

355. Combination immunotherapy with soluble tumor necrosis factor receptors plus interleukin 1 receptor antagonist decreases sepsis mortality / D.G. Remick, D.R. Call, S.J. Ebong // Crit. Care Med. 2001. - Vol. 29, № 3. - P. 473-481.

356. Deitch, E.A. Animal models of sepsis and shock: a review and lessons learned / E.A. Deitch// Shock. 1998. - Vol. 9.-P. 1-11.

357. Desay, U.R. New antithrombin-based anticoagulants / U.R. Desay // Medicinal Research Rewvews. 2004. - Vol. 24. - P. 151-181.

358. Determinants of chronic infection with Staphylococcus aureus in patients with bronchiectasis / P.L. Shah, S. Mawdsley, K, Nash // Eur Respir. J. 1999. Vol. 14.-N6.-P. 1340-1344.

359. Differential effects of anti-cytokine treatment on bronchoalveolar hemostasis in endotoxemic chimpanzees / M. Levi, T. van Der Poll, H. ten Cate et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1998. - Vol. 158. - N1. - P. 92-98.

360. Direct stimulation of cytokines (IL-1 beta, TNF-alpha, IL-6, IL-2, IFN-gamma and GM-CSF) in whole blood. I. Comparison with isolated PBMC stimulation / D. De Groote, P.F. Zangerle, Y. Gevaert et al. // Cytokine. 1992.-Vol. 4. - № 3. - P.239-248.

361. Disseminated intravascular coagulation is a frequent complication of systemic inflammatory response syndrome / S. Gando, T. Kameue, S. Nanzaki et al. // Nakanishi Thromb. Haemost. 1996. - Vol. 75. - P. 224-228.

362. Doctor, V.M. Effect of fucoidan during activation of human plasminogen / V.M. Doctor, D. Hill, G.J. Jackson // Thromb. Res. 1995. - Vol. 79. - P. 243-247.

363. Effect of fucoidan on the activation of plasminogen by u-PA and t-PA / T. Nishino, T. Yamauchi, M. Horie et al. // Thromb. Res. 2000.- Vol. 99.- P. 37-49.

364. Effect of fucoidan on fibroblast growth factof-2-induced angiogenesis in vitro / S. Matou, D. Helley, D. Chabut et al. // Thromb. Res. 2002. - Vol. 106. - P. 213221.

365. Effects of lentinan on broiler splenocyte proliferation, interleukin-2 production, and signal transduction / H.L. Chen, D.F. Li, B.Y. Chang et al. // Poult. Sei. 2003. - Vol. 82. - № 5. - P.760-766.

366. Effect of low and high dose melagatran and other antithrombotic drugs on platelet aggregation / G. Soslau, A. Ando, L. Floyd // J. Thromb. Thrombolysis. -2007.-Vol. 21.-P. 117-123.

367. Effect of native fucoidan, sulfated fucoidan, heparin and 6-aminohexanoic acid on the activation of glutamic-plasminogen by urokinase: role of NaCl / G. Hall, D. Lang, X. Qiu, V. Doctor // Blood. Coagul. Fibrinolysis. 2006. - 17. -N4.-P. 277-281.

368. Effect of polysaccharide fucoidin on cerebrospinal fluid interleukin-1 and tumor necrosis factor alpha in Pneumococcal meningitis in the rabbit / C. Granert, J. Raud, A. Waage, L. Lindquist // Infect. Immun. 1999. -Vol. 67.- P. 2071-2074.

369. Fibronectin suppresses apoptosis and protects mice from endotoxic shock / A.H. Kwon, Z. Qui, H. Nagahama et al. // Transplant. Proc. 2004. - Vol. 36. - N8. -P. 2432-2435.

370. Fink, M.P. Laboratory models of sepsis and septic shock / M.P. Fink, S.O. Heard // J. Surg Res. 1990. - Vol. 49. - P. 186-196.

371. Fitton, J.H. Fucoidans: healthful saccharides from sea / J.H. Fitton // Glycoscience & Nutrition. 2005. - Vol. 6, №1. - P. 1-6.

372. Foex, B.A. The cytokine response to critical illness / B.A. Foex, M.P. Shelly, // J. Accident Emergency Med. 1996. -Vol. 13. - №3. - P. 154-162.

373. Frenette, P.S. Sulphated glycans induce rapid hematopoetic progenitor cell mobilization: evidence for selectin-dependent and independent mechanisms // P.S. Frenette, L. Weiss // Blood. 2000. - Vol. 96. - P. 2460-2468.

374. Fucoidin, a potent inhibitor of leukosyte rolling, prevents neutrophil influx into forbol-ester-induced inflammatory sites in rabbit lungs / M. Shimaoka, M. Ikeda, T. Iida et al. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 1996. - Vol. 153. - P. 307311.

375. Fucoidan induces apoptosis of human HS-sultan cells accompanied by activation of caspase-3 and down-regulation of ERK pathways / Y. Aisa, Y. Miyakawa, T. Nakazato et al. // Am. J .Hematol. 2005. - Vol. 78. - № 1.- P. 7-14.

376. Fucoidan prevents concanavalin A-induced liver injury through induction of endogenous IL-10 in mice / A. Saito, M. Yoneda, S. Yokohama // Hepatol. Res. -2006. Vol. 3. - N 3. - P. 190-198.

377. Gan, W.Q. The association between chronic obstructive pulmonary disease and systemic inflammation: a systematic review and a meta-analysis / W.Q. Gan, S. F. Man, A. Senthilselvan // Thorax. 2004. - Vol. 59. - P. 574-580.

378. Gil, W. Inflammo-coagulatory response, extrinsic pathway thrombin generation and a new theory of activated clotting time interpretation / W. Gil // Perfusion. 2001. - Vol. 16.- №1.- P. 27-35.

379. Godel, H.C. In Heparin: Chemical and biological properties. Clinical applications. / H.C. Godel / Ed. D.A. Lane and U. Lindahl, Edward Arnold, London, 1996.-P. 533-548.

380. Gouin-Thibault, I. Safety Profile of Different Low-Molecular Weight Heparins Used at Therapeutic Dose / I. Gouin-Thibault, E. Pautas, V. Siguret. -Drug Safety. 2005. - Vol. 28. - N4. - 333.

381. Hack, C.E. Sepsis and coagulation / C.E. Hack, T. Poll, L.G. Thijs // Sepsis. -1999.-Vol. 3.-P. 85.

382. Heinzelmann, M. Fondaparinux sodium lacks immunomodulatory effects of heparin / M. Heinzelmann, H. Bosshart // Am. J. Surg. 2004.- Vol. 187.- N1.- P. 111-113.

383. Heinzelmann, M. Modulation of lipopolysaccharide-induced monocyte activation by heparin-binding protein and fucoidan / M. Heinzelmann, H.C.J. Polk, F.N. Miller Infect. Immun. 1998. - Vol. 66. - P. 5842-5847.

384. Heparin induced thrombocytopenia: pathogenetic, clinical, diagnostic and therapeutic aspects / R. Castelli, E. Cassinerio, M.D. Cappellini // Cardiovasc. Hematol. Disord. Drug. Targets. 2007. - Vol. 7. - N3. - P. 153-162.

385. Heparin and low-molecular-weight heparin: mechanisms of action, pharmacokinetics, dosing, monitoring, efficacy and safety / J. Hirsh, T.E. Warkentin, S.G. Shaughnessy et al. // Chest. 2001. - Vol. 119 (Suppl).- P. 64-94.

386. Heparin blunts endotoxin-induced coagulation activation / T. Pernerstorfer, U. Hollenstein, J. Hansen et al. // Circulation. 1999. - Vol. 100, N25. - P. 2485-2490.

387. Heparin, low-molecular-weight heparins, and heparin pentasaccharide: basic and clinical differentiation / D. Hoppensteadt, J.M. Walenga, J. Fareed, R.L. Bick •//Hematol. Oncol. Clin. North. Am. 2003. - Vol. 17. - N1. - P. 313-341.

388. Heparin-induced thrombocytopenia: a frequent complication after cardiac surgery / C. Pouplard, S. Regina, M.A. May, Y. Gruel // Arch. Mal. Coeur. Vaiss. 2007. - Vol. 100. - N 6-7. - P. 563-568.

389. Heparin-induced thrombocytopenia following cardiac surgery is associated with poor outcome / A. Kuitunen, R. Suojaranta-Ylinen, P. Raivio et al. // J. Cardiothorac. Vase. Anesth. 2007. - Vol. 21. - P. 18-22.

390. Hirudin reduces tissue factor expression in heointima after ballon injury in rabbit femoral and porcine coronary arteries / S.D. Gertz, J.T. Fallon, R. Gallo et al. // Circulation. 1998. - Vol. 6. - P. 580-587.

391. Huang, R. Influence of functional groups on the in vitro anticoagulant activity of chitosan sulfate / R. Huang, Y. Du, J. Yang // Carbohydr. Res. 2003. - Vol. 338.-P. 483-489.

392. Hummel, B.C.W. A modified spectrophotometric determination of chymotrypsin, trypsin and trombine / B.C.W. Hummel // Can. J. Biochem. Physiol. 1959. - V. 37, № 12. - P. 1393-1399.

393. Hyaluronidase-inhibiting polysaccharide isolated and purified from hot water extracted of sporophyll of Undaria pinnafilida / T. Katsube, Y. Yamasaki, Y. Iwamoto M. et al. // Food Sci. Technol. 2003. - Vol. 9. - N1. - P. 25-29.

394. Hypercoagulability state in patients with chronic obstructive pulmonary disease. Chronic Obstructive Bronchitis and Haemostasis Group / C. Alessandri, S. Basili, F. Violi et. al. // Thromb. Haemost. 1994. - Vol. 72. - N3. - P. 343-346.

395. Imiela, J. Oral heparin in the treatment of rheumatoid arthritis / J. Imiela, J. Nosarzewski, A. Gorski // Arch Immunol. Ther. Exp. (Warsz). 1995. - Vol. 43. -N5-6.-P. 313-315.

396. Immune depression in polymicrobial sepsis: the role of necrotic (injured) tissue and endotoxin / A. Ayala, G.Y. Song, C.S. Chung et al. // Crit. Care Med. -2000. -Vol. 28. N 8. - P. 2949-2955.

397. Immunoreabilitation in severe trauma and surgery sepsis with the Roncoleukin (human interleukin-2 from yeast) / J.N. Tsybin, M.N. Tarelkina, M.I. Gromov et al. // Intern. J. Immunorehabilitation, 2000. № 1, suppl. - P. 359-360.

398. Immunotherapy with natural interleukins and/or Thymosin al potently augments T lymphocyte responses of hydrocortisone-treated aged mice / J.W. Hadden, A.R. Saha, M. Sosa, E.M. Hadden // Immunopharmacol. 1995. Vol. 17. -P. 821-828.

399. Immunovjdulating activity of seaweed extract on human lymphocytes in vitro / B.E. Shan, Y. Yoshida, E. Kuroda, et al. // Int. J. Immunopharmacol. 1999. -Vol.21.-Nl.-P. 59-70.

400. Increased production of TGF-P and apoptosis of T-lymphocytes in peripheral blood in COPD // S. Hodge, G. Hodge, R. Flower et al. // American J. of

401. Physiology and Lung Cell Molecular. Physiology. 2003. - Vol. 285. - N2. - P. 353-360.

402. Induction of intracellular cytokine production in human monocytes/macrophages stimulated with ligands of pattern recognition receptors / B. Mytar, M. Gawlicka, R. Szatanek et al. // Inflamm. Res. 2004. - Vol. 53. - N3. -P. 100-106.

403. Infection and inflammation and coagulation system / M.D. Levi, T.T. Keller, E. van Gorp, H. ten Cate // Cardiovasc. RES. 2003.- Vol. 60, N1.- P. 26-39.

404. Inflammatory consequences of the translication of bacteria and endotoxin to mesenteric lymphonodes / U. Schoeffel, K. Pelz, R.U. Haring et al. // Am. J. Surg. 2000. - Vol. 180. - N 1. - P. 65-72.

405. Inhibition of complement activation by natural sulfated polysaccharides (fucans) from brown seaweed / C. Blondin, E. Fischer, C. Boisson-Vidal, et al. // Mol. Immunol. 1994. - Vol. 31, N 4. - P. 247-253.

406. Inhibition of the generation of thrombin and factor Xa by a fucoidan from the brown seaweed Ecklonia kurome / T. Nishino, A. Fukuda, T. Nagumo // Thromb. Res. -1999.- Vol. 96.- P. 37-49.

407. Inhibitory effects of brown algal phlorotannins on secretory phospholipase A2S, lipoxygenases and cyclooxygenases / T. Shibata, K. Nagayama, R. Tanaka et al. // J. Appl. Phycol. 2003. - Vol. 15. - P. 61-66.

408. Inhibitory effect of Cladosiphon fucoidan on the adhesion of Helicobacter pylori to human gastric cells / H. Shibata, I. Takagi, M. Nagaoka // J. Nutr. Sci. Vitaminol. 1999. - Vol. 45.- P. 525-536.

409. Interactions of fucoidan with proteins of the complement classical pathway / B. Tissot, B. Montdargent, L. Chevolot et al. // BBA. 2003. - Vol. 1651. - N1-2. -P. 5-16.

410. Interleukin 10 reduces the release of TNF and prevents lethality in experimental endotoxemia / C. Gerard, C. Bruyns, A. Marchant // J. Exp. Med. -1993. Vol. 177. - N 2. - P. 547-550.

411. Interleukin-10 inhibits activation of coagulation and fibrinolysis during human endotoxemia / D. Pajkrt, T. van der Poll, M. Levi et al. // Blood. 1997. -Vol. 89.-N8.-P. 2701-2705.

412. In vitro antiinflammatory and antiproliferative activity of sulfolipids from the red alga Porphyridium cruentum / G.P. Berge, E. Debiton, J. Dumau et al. // J. Agric. Food Chem. 2002. - Vol. 50. - P. 6227-6232.

413. Irhimeh, M.R. Fucoidan ingestion increases the expression of CXCR4 on human CD34+ cells // M.R. Irhimeh, J.H. Fitton, R,M, Lowenthal // Exp. Hematol. 2007. -Vol. 35. - N 6. - P. 989-994.

414. Isolation of anticoagulant fractions from crude fucoidan / G.F. Springer, H.A. Wurzel, G.M.J. McNeal // Proc. Soc. Biol. Med. 1957. - Vol. 94. - N 2.- P. 404409.

415. Itoh, H. Antitumor activity and immunological properties of marine algal polysaccharides, especially fucoidan, prepared from Sargassum thunbergii of Phaeophyceae / H. Itoh, H. Noda, H. Amano // Anticancer Res. 1993. - Vol. 13. -P. 2045-2052.

416. Jaimes, F. Anticoagulation and sepsis: the opportunity for a new use of heparin? / F. Jaimes, G. de la Rosa // Biomedica. 2006. - Vol. 26. - N 1. - P. 150160.

417. Jerne, N.K. Plaque formation in agar by single antibody-producing cell / N.K. Jerne, F.N. Nordin // Science. 1963. - Vol. 40. - N 65. - P. 405-407.

418. Kerr, R. Interleukin 6 and haemostasis / R. Kerr, D. Stirling, C.A. Ludlam // Brit J. Haematol. 2001. - Vol. 115. - №1. - P. 3-12.

419. Kim, W.S. Activation of signaling pathways by putative scavenger receptor class A (SR-A) ligands requires CD14 but not SR-A / W.C. Kim, C.M. Ordija, M.W. Freeman // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. - Vol. 310. - №. 2. - P. 542-549.

420. Kitamura, K. Fucoidan from brown seaweed Laminaria angustata var. Longissima / K. Kitamura, M. Matsuo, T. Yasui // Agric. Biol. Chem. 1991. -Vol. 55.-P. 615-619.

421. Krianciunas, K.M. Effect of heparin on insulin binding and biological activity / K.M. Krianciunas, F. Grigoresa, C.R. Kahn // Diabetes. 1987. - Vol. 36. - №2. -P. 163-168.

422. Kumar, M.N. A review of chitin and chitosan applications / M.N. Kumar // React. Funct. Polym. 2000. - Vol. 46. - P. 1-27.

423. Lagrange, P.E. Influence of dose and route of antigen injection on the immunological induction of T-cells / P.E. Lagrange, G.B. Mackaness, T.E. Miller // G. Exp. Med. 1974. - Vol. 139.- №3. - P. 528-542.

424. Latifi, S.Q. Interleukin-10 controls the onset of irreversible septic shok / S.Q. Latifi, M.A Riord, A.D. Levine // Infect. Immune. 2002. - Vol. 70. - N8. - P. 4441-4446.

425. Lepirudin blunts endotoxin-induced coagulation activation / T. Pernerstorfer, U. Hollenstein, J.-B. Hansen // Blood. 2000. - Vol. 95. - N 5. - P. 1729-1734.

426. Lepor, N.E. Anticoagulation for acute coronary syndromes: from heparin to direct thrombin inhibitors / N.E. Lepor // Rev. Cardiovasc. Med. 2007.- Vol. 8.-Suppl. 3. - P. 9-17.

427. Levi, M.D. Disseminated Intravascular Coagulation / M.D. Levi, and H. ten Cate//New Engl. J. of Med. 1999. - Vol. 341. - №8. - P. 586-592.

428. Levis, B.E. Argatroban therapy in heparine-induced thrombocytopenia / B.E. Levis, M.J. Hursting // Heparineinduced Thrombocytopenia. Eds. T.E. Warkentin, A. Greinacher, N.Y., 2004. - P.437-474.

429. Ligands of macrophage scavenger receptor induce cytokine expression via differential modulation of protein kinase signaling pathways / H.Y. Hsu, S.L. Chiu, M.H. Wen // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - N31. - 28719-28730.

430. Li, B. Anticoagulant activity of fucoidan From Hizikia fusiforme / B. Li, R.X. Zhao, X.-J. Wei //Functional food.- 2008.- Vol.19. №1.- P.22-24.

431. Li, N. Toxicological evaluation of fucoidan extracted from Laminaria japónica in Wistar rats / N. Li, Q. Z.-J. Song // Food and Chemical Toxicology. -2005. Vol. 43, Issue 3. - P. 421-426.

432. Lin, P.-H. Antithrombin binding of low molecular weight heparins and inhibition of factor Xa / P.-H. Lin, U. Sinha, A. Betz // Biochimica et Biophysica Acta. 2001. - Vol. 1526. - P. 105-113.

433. Lin, H.Y. Highlighting the potential of heparin in the treatment of sepsis in view of failure of KyberSept and OPTIMIST projects / H.Y. Lin // Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue. 2007. - Vol. 19. - N 3. - P. 134-137.

434. Liu, A.H. Endotoxin: friend and foe? / A.H. Liu, A.H. Redmon // Allerg. Astma Proc. 2001. - 22.- N 6. - P. 337-340.

435. Low molecular weight fucoidan prevents neointimal hyperplasia after aortic allografting / C. Fréguin-Bouilland, B. Alkhatib, N. David // Transplantation. -2007. Vol. 83. - N 9. - P. 1234-1241.

436. Low-molecular-weight fucoidan promotes therapeutic revascularization in a rat model of critical hindlimb ischemia / C.-E. Luyt, A. Meddahi-Pell, B. Ho-Tin-Noe et al. // J. Pharmacol. Exp. Therap. 2003. - Vol. 305.- P. 24-30.

437. Low molecular weight heparin prevents the pulmonary hemodynamic and pathomorphologic effects of endotoxin in a porcine acute lung injury model / B.J. Darien, J. Fareed, K.S. Centgraf// Shock. 1998. - Vol. 9. - N 4. - P. 274-281.

438. Low molecular weight heparin and unfractionated heparin in thrombosis prophylaxis / A. Koch, S. Ziegler, H. Breitschwerdt, N. Victor // Thrombosis Research. 2001. - Vol. 102. - P. 295-309.

439. Mancini, G. Immunochemical quantitation of antigens by single radial immunodiffusion / G. Mancini // Immunochemistry. 1965. - Vol. 2. - № 3. - P. 235-254.

440. Mantovani, A. Cytokine regulation of endothelial cell function: from molecular level to the bed side / A. Mantovani, F. Bussolino, M. Introna // Immunol. Today. 1997. -Vol. 18. - P. 231-239.

441. Marine natural products as novel antioxidant protypes / S. Takamatsu, T.W. Hondges, J. Rajbhandary et al. // J. Nat. Prod. 2003. - Vol. 66, №5. - P. 605-608.

442. Martin, D. Tissue factor: Molecular recognition and cofactor function / D. Martin, C. Boys, W. Ruf// FASEB J. 1995. - Vol. 9. - P. 852-859.

443. Maruyama, H. Suppression of Th2 Immune Responses by Mekabu Fucoidan from Undaria pinnafilida Sporophylls / H. Maruyama, H. Tamauchi, M. Hashimoto // Int. Arch. Allergy Immunol. 2005. - Vol. 137. - P. 289-294.

444. Matsui, M.S. Sulfated polysaccharides from red microalgae have antiinflammatory properties in vitro and in vivo /M.S. Matsui, N. Muizzuddin, S. Arad // Appl. Biochem. Biotechnol. 2003. - Vol. 104. - № 1. - P. 13-22.

445. Mattioli, A.V. Heparin-induced thrombocytopenia: implictions for cardiologist / A.V. Mattioli // G. Ital. Cardiol. (Rome). 2006. - Vol. 7. - P. 675683.

446. Mechanism by which orally administered (3-1,3-glucans enhance the tumoricidal activity of antitumor monoclonal antibodies in murine tumor models / F. Hong, J. Yan, J. Baran et al. // J. Immunol. 2004. - Vol. 173. - P. 797-806.

447. Medcalf, D.G. Structural features of a novel glucuronogalactofucan from Ascophyllum nodose / D.G. Medcalf, T.L. Schneider, R.W. Barnett // Carbohydr. Res. 1978. - Vol. 66. - P. 167-171.

448. McClure, M.O. Investigations into the mechanism by which sulfated polysaccharides inhibit HtV infection in vitro / M.O. McClure, J.P. Moore, D.F. Blanc // AIDS Res. Hum. Retroviruses. 1992. - Vol. 8. - P. 19-26.

449. Minix, R. Interaction of fucoidan with proteases and inhibitors of coagulation and fibrinolisis / R. Minix, V.M. Doctor // Thromb. Res. 1997. - Vol. 87. - №5. -P. 419-429.

450. Mobilization of stem/progenitor cells by sulfated polysaccharides does not require selectin presence / E.A. Sweeney, G.V. Pristley, B. Nacomoto et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol. 97. - P. 6544-6549.

451. Modlin R.L. The toll of innate immunity on microbial pathogens / R.L. Modlin, H.D. Brightbill, P J. Godowski // N. Engl. J. Med. 1999. - Vol. 340. - P. 1834-1835.

452. Modulation of protease nexin-1 activity by polysaccharides / B. Richard, M.C. Bouton, S. Loyau et al. // Thromb. Haemost. 2006. -Vol. 95. - N2. - P. 229-235.

453. Mourao, P.A. Searching for alternatives to heparin: sulfated fucans from marine invertebrates / P.A. Mourao, M.S. Pereira // Trends Cardiovasc. Med. -1999. Vol. 9. - N8. - P. 225-232.

454. Mushrooms, tumors, and immunity / A.T. Borchers, J.S. Stern, R.M. Hackman et al. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1999. - Vol. 221. - P. 281-293.

455. Nagumo T. Fucan Sulfates and Their Anticoagulant Activities / T. Nagumo, T. Nishino // In: Polysaccharides in Medicinae Applications. Ed. S. Dumitriu. University of Sherbrooke, Quebes, Canada: N.-York-Basel-Hong-Kong. 1997. -P. 545-574.

456. New natural polysaccharides with potent antithrombic activity: fucans from brown algae / V. Grauffel, B. Kloareg, S. Mabeau et al. // Biomaterials. 1989. -Vol.10. - P. 363-368.

457. Nishino, T. Change in the anticoagulant activity and comparison of a fucan sulfate from the brown seaweed Ecklonia kurome during refrigerated storage of the fronds / T. Nishino, T. Nagumo // Bot. Mar. 1991. Vol. 34. - P. 387-389.

458. Nishino, T. Anticoagulant and antithrombin activities of oversulfated fucans / T. Nishino, T. Nagumo // Carbohydr. Res. 1992. - Vol. 229. - P. 355-362.

459. Nishino, T. Sugar constituens and blood anticoagulant activities of fucose-containing sulfated polysaccharides in nine brown seaweed species / T. Nishino, T.Nagumo // Nippon Nogeikagaku Kaishi. - 1987. - V. 61. - P. 361- 363:

460. Nishino, T. The relationship between the molecular weight and the anticoagulant activity of two types of fucan sulfates from the brown seaweed Ecklonia kurome / T. Nishino, Y. Aizu, T. Nagumo // Agric. Biol. Chem. 1991. -Vol. 55. - P.791-803.

461. Norman, J. The role of cytokine in the pathogenesis of acute pancreatitis / J. Norman // Am. J. Surg. 1998. - Vol. 175. - N 1. - P. 76-83.

462. Ollerenshaw, S.L. Characteristics inflammation in biopsies from large airways of subjects with asthma and subjects with chronic airflow lim / S.L. Ollerenshaw, A.J. Woolcock // Amer. Rev. Respir. Dis. 1992. - Vol. 145. - P. 922-927.

463. Osterud, B. Tissue factor expression by monocytes: regulation and pathophysiological roles / B. Osterud // Blood Coagul. Fibrinolysis. 1998. - Vol. l(Suppl.).-P. 9-14.

464. Owen, R.L. Uptake and transport of intestinal macromolecules and microorganisms by M-cells in Peyer's pathes: A personal and historical perspective / R.L. Owen // Semin. Immunol. 1999. Vol. 11. - P. 157-163.

465. P38 mitogen-activated protein kinase-dependent chemokine production, leukocyte recruitment, and hepatocellular apoptosis in endotoxemic liver injury / D. Klintman, X. Li, S. Santen et al. // Ann. Surg. 2005. - Vol. 242, N 6. - P. 830839.

466. Patent US № 993172 A61K 031/715; C08B 037/00 Fucans with low molecular weight having anticoagulant, antithrombinic and antithromobic activity / A. Cedro, R. Porta., F. Cattaneo 18.12.1997.

467. Pereira, M.S. Structure and anticoagulant activity of sulfated fucans / M.S. Pereira, B. Mullow, P.A.S. Mourao // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. - P. 76567667.

468. Plasma markers of endothelial dysfunction in chronic obstructive pulmonary disease / G. Cella, A. Sbarai, G. Mazzaro et al. // Clin. Appl. Thromb. Hemost. -2001. Vol. 7. - N3. - P. 205-208.

469. Platelet aggregation size and volume in chronic obstructive pulmonary disease /1. Onder, S. Topcu, H.S. Dokmetas et al. // Mater. Med. Pol. 1997. - Vol. 29. - N 14.-P. 11-13.

470. Pletcher, C. Kinetic analysis of various heparin fractions and heparin substitutes in the thrombin inhibition reaction / C. Pletcher, M. Cunningham, G. Nelsestuen // Biochim. Biophys. Acta. 1985. - Vol. 838. - №1. - P.106-113.

471. Poll, T. Regulatory role of cytokines in disseminated intravascular coagulation / T. Poll, E. de Jonge, M. Levi // Semin. Thromb. Hemost. 2001. -Vol. 27.-N6.-P. 639-651.

472. Prandoni, P. Venous thromboembolism and atherosclerosis: is there a link? / P. Prandoni // J. Thromb. Haemost. 2007. - Vol. 5, Suppl 1. - P. 270-275.

473. Prion protein in patients with renal failure / R. Starke, I. Mackie, O. Drummond et al. // Transfus. Med. 2006. - Vol. 6. - N3. - P. 165-168.

474. Prisco, D. Heparin-induced thrombocytopenia: a brief update in an Italian perspective / D. Prisco // Recenti Prog. Med. 2007. - Vol. 98. - N 9. - P. 452-456.

475. Prophylactic effect of dietary seaweed Fucoidan against enteral prion infection / K. Doh-Ura, T. Kuge, M. Uomoto et al. // Antimicrob. Agents Chemother. 2007. -Vol. 51. - №6. - P. 2274-2277.

476. Properties of fucoidan from Cladosiphon okamuranus tokida in gastric mucosal protection / H. Shibata, I. Kimura-Takagi, M. Nagaoka // BioFactors. -2000.-Vol. 11.-P. 235-245.

477. Protective effects of polysaccharide fucoidin on miocardial ischemia -reperfusion injury in rats / M. Omata, Matsui, N. Inomata, T. J. Ohno // Cardiovasc. Pharmacol. 1997. - Vol. 30. - P. 717-724.

478. Reed, G.L. Platelet secretory mechanisms / G.L. Reed // Semin. Thromb. Hemost. 2004. - Vol. 30. - P. 441-450.

479. Regulation of (l-3)-beta-glucan-stimulated Ca2+ influx by protein kinase C in NR8383 alveolar macrophages / A.C. Mork, X.H. Sun, X.B. Liu et al. // J. Cell. Biochem. 2000. Vol. 78. - № 1. - P. 131-140.

480. Relationships between chemical characteristics and anticomplementary activity of fucans / C. Blondin, F. Chaubet, A. Nardella et al. // Biomaterials. -1996.-Vol. 17.-P. 597-603.

481. Relationship between antithrombotic activities of fucans and their structure / C. Boisson-Vidal, F. Chaubet, L. Chevolot et al. // Drug Devel. Res. 2000. - Vol. 51.-P. 216-224.

482. Release of urokinase plasminogen activator receptor during urosepsis and endotoxemia / P.E. Dekker, T. ten Hove, A.A. te Velde et al. // J. Infect. Immun. -2000. Vol. 68. - № 4. - P. 2156-2160.

483. Rennard, S.I. Inflammation and repair processes in chronic obstructive pulmonary disease / S.I. Rennard // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 1999. - Vol. 160.-P. 512-516.

484. Robertson, M.S. Heparin: the cheap alternative for immunomodulation in sepsis? / M.S. Robertson // Crit. Care Resusc. 2006. - Vol. 8. - N 3. - P. 235-238.

485. Role of tissue factor and protease-activated receptors in a mouse model of endotoxemia / R. Pawlinski, B. Pedersen, G. Schabbauer et al. // Blood. 2004. -Vol. 103.-N4.-P. 1342-1347.

486. Ruperez, P. Potential antioxidant capacity of sulfated polysaccharides from the edible marine brown seaweed Fucus vesiculosis / P. Ruperez, O. Ahrazem, J.A. Leal // J. of Agricultural & Food Chemistry. 2002. - Vol. 50. - N 4. - P. 840-845.

487. Safety of low-molecular-weight heparin in pregnancy: a systematic review / B.J. Sanson, A.W. Lensing, M.H. Prins, et al. // Thromb. Haemost. 1999. - Vol. 81.-N5.-P. 668-672.

488. Sagawa, T.I.H. Снижение риска заболевания раком с помощью пищевых волокон морских водорослей (перевод с яп.) / T.I.H. Sagawa, I. Kato // Ipn. J. Phycol. (Sorui). 2000, № 1. - P. 13-19.

489. Sagawa, T.I.H. Fucoidan as functional foodstuff. Structure and biological potency / T.I.H. Sagawa, I. Kato // Japan J. Phycol. (Sorui). 2003. - Vol. 51. - P. 19-25.

490. Samama, M.M. New data on the pharmacology of heparin and low molecular weight heparins /М.М. Samama, L. Вага, I. Gouin-Thibault // Drugs. 1996. -Vol. 52, Suppl. 7.-P. 8-14.

491. Sasaki, T. Further study of the structure of lentinan, an anti-tumor polysaccharide from Lentinus edodes / T. Sasaki, N. Tacasaka // Carbohydr. Res. -1976.-Vol. 47.-P. 99-104.

492. Schaeffer, D.J. Anti-HIV activity of extracts and compounds from algae and cyanobacteria / D.J. Schaeffer, V.S. Krylov // Ecotoxicol. Environ. Saf. 2000. -Vol. 45. - № 3. - P. 208-227.

493. Sepiashvili, Y.R. Cytokines and immunologic status of patients with chronic bronchitis caused by secondary immunodeficiency / Y.R. Sepiashvili // XXII

494. Congress of European academy of Allergology and Clinical Immunology, Allergy as a Global Problem. Paris, 2003. - P. 324.

495. Serkedjieva, J. Antiherpes virus effect red marine alga Polysiphonia denudate Serkedjieva J. // Z. Naturforsch. 2000. - Vol. 55, № 9-10. - P. 830-835.

496. Shanmugam, S. Heparonid active sulfated polysaccharides from marine algae as potential blood coagulant agents / S. Shanmugam, K.H. Mody // Currant Sciences. 2000. - Vol. 79. - P. 1672-1683.

497. Sheng, Z.Y. Immunologic dissonance in the pathogenesis of sepsis / Z.Y. Sheng, Y.M. Yao, H.Y. Lin // Zhongguo Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue. 2006. -Vol. 1, N 11. - P. 641-642.

498. Shi, Z. Strain-specific differences in mouse hepatic wound healing are mediated by divergent T helper cytokine responses / Z. Shi, A.E. Wakil, D.C. Rockey // Proc. Natl. Acad. Sci., USA. 1997. - Vol. 30 (94). - N 20. - P. 1066310668.

499. Shwert, G.W. A spectrophotometric determination of trypsin and chymotrypsin / G.W. Shwert, Y. Takenaka // Biochem. Biophys. Acta. - 1955. -V.16. - № 4. - P. 570-575.

500. SIRS, sepsis, severe sepsis and septic shock: incidence, morbidities and outcomes in surgical ICU patients / D. Pittet, S. Rangel-Frausto, N. Li et al. // Intensive Care Med. 1995. - Vol. 127. - P. 302-309.

501. Structure of a fucoidan from the brown seaweed Fucus evanescens C.Ag. / M.I. Bilan, A.A. Grachev, N.E. Ustuzhanina et al. // Carbohydr. Res. 2002. -Vol. 337.-P. 719-730.

502. Sugar constituens of some sulfated polysaccharides from the sporophylls of wacame (Undaria pinnatijida) and their biological activities / H. Mori, H. Kamei, E. Nishide, K. Nishizawa // Mar. Algae Farm. Sci. 1982. - №2. - P. 109-121.

503. Sugawara, T. Digestion of plant monogalactosyldiascylglycerol and digalactosyldiascylglycerol in rat alimentary canal / T. Sugawara, T. Miyazawa // J. Nutrition Biochem. 2000. - Vol. 11. - N 3. - P. 147-152.

504. Sugawara, T. Beneficial effect of dietary wheat glycolipids on cecum short-chain fatty acid and secondary bile acid profiles in mice / T. Sugawara, T. Miyazawa // G. Nutrir. Vitaminol. Tokyo, 2001. - Vol. 47. - N 4. - P. 299-305.

505. Teixeira, M.M. The effect of the selectin binding polysaccharide fucoidin on eosinophil recruitment in vivo / M.M. Teixeira, P. Hellewell // Brit. J. Pharmacol. 1997. Vol. 120. - P. 1059-1066.

506. The cytokine mediated imbalance between coagulant and anticoagulant mechanisms in sepsis and endotoxaemia / M. Levi, T. van der Poll, H. ten Cate, S.J. van Deventer // Eur. J. Clin. Invest. 1997. - Vol. 27. - N1. - P. 3-9.

507. The malaria circumsporozoite protein: interaction of the concerved regions I and II-plus with heparin-like oligosaccarides in heparan sulphate / P. Ying, M. Shakibaei, E.S. Patankar et al. // Exp. Parasitol. 1997. - Vol. 85. - P. 168-182.

508. The proinflammatory cytokine response to coagulation and endotoxin in whole blood / K. Jonson, L. Aarden, Y. Choi et al. // Blood. 1996. - Vol. 87. -№12.-P. 5051-5060.

509. The use of specific antidotes as a response to bleeding complications during anticoagulant therapy for venous thromboembolism / D. Haverkamp, B.A. Hutten, H.R. Buller et al. // J. Tromb Haemost. 2003. - Vol. 1. - № 1. - P. 69-73.

510. Thymosin betta (4) reduses lethality and down-regulates inflammatory mediators inendotoxin-indused septic shock / M. Badamchian, M.O. Fagarasan, R.L. Danner // Int. Immunopharmacol. 2003. - Vol. 3. - №8. - P. 1225-1233.

511. Usui, T. Isolation of hightly purified fucoidan from Eisenia bicyclis and anticoagulant and antitumor activities / T. Usui, K. Asari, T. Mizuno // Agric. Biol. Chem. 1980. - Vol. 44. - P. 1945-1966.

512. Vasselon, T. Toll receptors: a central element in innate immune responses / T. Vasselon, P.A. Detmers //Infect. Immun. 2002. - Vol. 70. - P. 1033-1041.

513. Verstrate, M. Pharmacotherapeutic aspects of unfractionated and low molecular weight heparins / M. Verstrate // Drugs. 1990. - Vol. 40. - P. 498-530.

514. Vischer P. Different action of heparin and fucoidan on arterial smooth muscle cell proliferation a thrombospondin and fibronectin metabolism / P. Vischer, E. Buddecke // Eur. J. Cell. Biol. 1991. - 54. - P. 407-414.

515. Voelkel, N.F. Pulmonary vascular involvement in chronic obstructive pulmonary disease / N.F. Voelkel, C.D. Cool / Eur. Respir. J. Suppl. 2003. Vol. 46. - P. 28-32.

516. Wahl, A.F. Oncostatin M in the anti-inflammatory response / A.F. Wahl, P.M. // Wallace Ann. Rheum. Dis. 2001. - Vol. 60. - N3. - P. 75-80.

517. Walenga, J.M. Preliminary biochemical and pharmacologic studies on a chemically synthesized pentasaccharide / J.M. Walenga, J. Fareed // Semin. Thromb. Hemost. 1985. - Vol.11. -N 2. - P. 89-99.

518. Wasser, S.P. Medicinal mushrooms as a soucer of antitumor and immunomodulatingpolysaccharides / S.P. Wasser// Appl. Microbiol. Biotechnol. -2002. Vol. 60. - P. 258-274.

519. Water-soluble polysaccharides of some far-eastern brown seaweeds. Distribution, structure, and their dependence on the developmental conditions /

520. T.N. Zvyagintseva, N.M. Shevchenko, A.O. Chizhov et al. // J. Exp. marine Biol. Ecol. 2003. - Vol. 294, Issue 1. - P. 1-13.

521. Westphal, O. Bacterial lipopolysaccharides. Extraction with phenol-water and further applications of the procedures / O. Westphal, K. Jann. In book: Methods in carbohydrate chemistry. Ed. B.L.Whistler, Acad.Press, New York, 1965. - Vol. 5.-P. 83-91.

522. Wheeler, M.D. Production of superoxide and TNF alpha from alveolar macrophages is blunted by glycine / M.D. Wheeler, R.G. Thurman // Am. J. Physiol. - 1999. - Vol. 277. - N1. - P. - 952-959.

523. Winter, C.A. Carragenin-induced edema in hind paw of the rat as an assay for antiiflammatory drugs / C.A. Winter, E.A. Risley, G.W. Nuss // Proc. Soc. Expr. Biol. And Med. 1962.-Vol. 111. - №3. - P. 544-547.

524. Xie, M. Prethrombotic state in patients with chronic obstructive pulmonary disease and treatment with heparin / M. Xie, Z. Wang // Hua Xi Yi Ke Da Xue Xue Bao. 1998. - Vol. 29. - N 4. - P. 411-414.

525. Yang, J. The biology of P-selectin glycoprotein ligand-1: its role as a selectin counterreceptor in leukocyte-endothelial and leukocyte-platelet interaction / J. Yang, B.C. Furie, B. Furie // Thromb. Haemost. 1999. - Vol. 81. - P. 1-7.

526. Yoon, S.-J. A sulfated fucan from the brown alga Laminaria cichorioides has mainly heparin cofactor Independent anticoagulant activity / S.-J. Yoon, U.-R. Pyun, J.-K. Hwang // Carbohydrate Research. 2007. Vol. 342. - P. 3226-3230.

527. Zaretzky, F.R. Sulfated polyanions block Chlamydia trachomatis infection of cervix-derived human epithelia / F.R. Zaretzky, R. Pearce-Pratt, D.M. Phillips // Infect. Immun. Vol. 63. - P. 3520-3526.

528. Zeymer, U. Recombinant hirudins: an overview of recent developments / U. Zeymer // BioDrugs. 1998. - Vol. 1. - N 6. - P. 425-436.1. QhA

529. Zhang, X.J. Therapeutic effects of early administration of low-dose heparin in patients with severe sepsis / X.J. Zhang, X.C. Ma // Zhonghua Wai Ke Za Zhi. -2006. Vol. 1 (4). - N 17. - P. 1209-1211.

530. Zhang, X.W. Inhibition of selectin function and leukocyte rolling protects against dextran sodium sulfate-induced murine colitis / X.W. Zhang, Q. Liu, H. Thorlacius // Scand. J. Gastroenterol. 2001. - Vol. 36. - № 3. - P. 270-275.

531. Zhang, O. Glycolipid receptors for attachment of Mycoplasma hyopneumoniae to porcine respiratory ciliated cells / O. Zhang, T.F. Young, R.F. Ross // Infect. Immun. 1994. - Vol. 62. - P. 4367-4373.

532. Zsila, F. Binding of anti-prion agents to glycosaminoglycans: evidence from electronic absorption and circular dichroism spectroscopy / F. Zsila, G. Gedeon // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006. - Vol. 346. - N4. - P. 1267-1274.

Оглавление диссертации Кузнецова, Татьяна Алексеевна :: 2009 :: Москва

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Кузнецова, Татьяна Алексеевна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Кузнецова, Татьяна Алексеевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций