Коррекция ишемических и реперфузионных повреждений миокарда с использованием липосомальных препаратов

Веремеев, Алексей Владимирович

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Коррекция ишемических и реперфузионных повреждений миокарда с использованием липосомальных препаратов

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Веремеев, Алексей Владимирович Кемерово 2012 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.03.03

Автореферат диссертации по медицине на тему Коррекция ишемических и реперфузионных повреждений миокарда с использованием липосомальных препаратов

На правах рукописи

Веремеев Алексей Владимирович

КОРРЕКЦИЯ ИШЕМИЧЕСКИХ И РЕПЕРФУЗИОННЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ МИОКАРДА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

14.03.03 - патологическая физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 1 ОКТ 2012

Кемерово 2012

005052918

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт комплексных проблем сердечнососудистых заболеваний» Сибирского отделения РАМН, Кемерово

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Журавлева Ирина Юрьевна Официальные оппоненты:

Золоев Георгий Кимович - доктор медицинских наук, профессор, ФГБУ «Новокузнецкий научно-практический центр медико-социальной экспертизы и реабилитации инвалидов Федерального медико-биологического агентства», генеральный директор

Будаев Алексей Владимирович - доктор медицинских наук, ГБОУ ВПО «Кемеровская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, профессор кафедры патологической физиологии

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится « »_2012 года в _ часов на заседании

диссертационного совета Д 208.035.02 при ГБОУ ВПО КемГМА Минздравсоцразвития России по адресу: 650029, г.Кемерово, ул.Ворошилова, 22а

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГБОУ ВПО КемГМА Минздравсоцразвития России

Автореферат разослан « »_2012 года

Ученый секретарь диссертационного совета,

д-р мед. наук, профессор Разумов Александр Сергеевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Сохранение жизнеспособности миокарда при операциях на открытом сердце или при его пересадке продолжает оставаться одной из главных проблем кардиохирургии [Surendian А., 2009]. Для продления жизнедеятельности миокарда применяют различные методы консервации. В настоящее время наибольшее распространение получил метод кардиоплегической защиты, включающий гипотермическую и фармакологическую защиту [Allen D.G., 1985; Willund L., 1994]. В связи возрастанием информации о механизмах повреждения миокарда при ишемии и реперфузии появляются новые исследования, направленные на применение этих знаний в практике. Так как важнейшим повреждающим фактором ишемии и реперфузии является разрушение мембран из-за активации в них процессов перекисного окисления липидов, активно изучают защитные возможности различных антиоксидантов [Grattagliano I., 2008]. Рассматривают также возможности фармакологической коррекции энергетического обмена ишемизированного миокарда [Torchilin V.P., 2005; Verma D.D., 2006].

Для защиты от ишемических и реперфузионных повреждений может оказаться перспективными использование липосомальных препаратов [Panwar Р., 2010].

За последнее время описаны десятки способов получения липосом [Sakai Н., 2008]. В состав липосом удалось ввести как углеводные последовательности, так и белки («протеолипосомы»), что послужило поводом к созданию так называемых «иммунолипосом», специфичных к определенным лигандам [Gotoh Т., 2008]. Получены липосомы, способные избегать защитных факторов организма, что значительно продляет время их циркуляции в кровотоке [Цорогова O.A., 2006]. Вместе с тем, пока нет общепринятых методов стандартизации полученных липосомальных препаратов, что затрудняет сопоставление результатов различных исследований, так как авторы используют липосомы, отличающиеся по размеру, составу, способу получения, что может повлиять на их фармакологические свойства.

Включение биологически активных веществ в состав лотосом позволяет вводить эти соединения непосредственно в клетку и предохраняет их от разрушения при нахождении в кровяном русле.

Цель исследования: обосновать возможность применения липосомальных форм препаратов, относящихся к группам макроэргических

соединений и антиоксидантов и оценить их эффективность на экспериментальных моделях ишемических и реперфузионных повреждений миокарда.

Задачи исследования

1. Выполнить комплексную оценку углеводно-энергетического обмена тотально ишемизированного миокарда при различных температурных режимах.

2. Исследовать поглощение и распределение липосом в миокардиоцитах в зависимости от температуры.

3. Оценить эффективность способа экструзии для получения и стандартизации липосомальных препаратов.

4. Оценить эффективность системного введения липосомальных препаратов.

5. Оценить эффективность интракоронарного введения липосомальных препаратов на модели перфузии изолированного сердца при различных температурных режимах.

Научная новизна

Установлено, что метод экструзии более приемлем для получения липосом, так как имеет ряд преимуществ: низкий уровень процессов ПОЛ, стабильный размер и состав липосом. Показано, что данный метод не влияет на активность веществ, включенных во внутреннюю фазу липосом.

Установлено, что липосомы активно встраиваются в миокардиоциты и определяются, преимущественно, в митохондриях и грубых плазматических мембранах.

Доказана возможность коррекции ишемических и реперфузионных повреждений миокарда с использованием липосом различного состава. Установлено, что липосомальные препараты антиоксидантов, введенные системно или интракоронарно, значительно восстанавливают функциональную активность миокарда после ишемии и последующей реперфузии.

Практическая значимость

Показана возможность получения липосом стандартного размера, со стабильной липидной фазой и внутренним составом.

Показана эффективность применения липосомальных препаратов при ишемии-реперфузии миокарда. Установлено, что при системном и интракоронарном введении липосом, содержащих антиоксиданты в значительной степени сохраняется функциональная активность сердца.

Положения, выносимые на защиту

1. Метод экструзии позволяет получить липосомы стандартного диаметра и состава с заданно низким уровнем содержания продуктов перекисного окисления липидов.

2. Липосомы активно включаются в субклеточные структуры миокардиоцитов и распределяются в основном в цитоплазматической мембране и мембране митохондрий.

3. Введение а-токоферола в состав липидной фазы липосом стабилизирует липосомальную мембрану и значительно ограничивает процессы липопероксидации в ней.

4. Липосомальные препараты антиоксидантов и макроэргических фосфатов эффективно предотвращают ишемические и реперфузионные повреждения миокарда как при системном, так и при интракоронарном введении.

Введение результатов исследования в практику

Научные положения и практические рекомендации, сформулированные в диссертации, введены в научную деятельность ФГБУ «НИИ комплексных проблем сердечно-сосудистых заболеваний» СО РАМН, в учебно-методический процесс кафедры кардиологии и сердечно-сосудистой хирургии ГБОУ ВГГО «Кемеровская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России.

Апробация работы

Материалы настоящего исследования были доложены и обсуждены на VIII международном конгрессе по адаптивной медицине (ISAM) (Москва,

2006), XIII Всероссийском съезде сердечно-сосудистых хирургов (Москва,

2007), III съезде фармакологов России (Санкт-Петербург, 2007), Международном форуме по нанотехнологиям «RUSNANOTECH» (Москва,

2008), Международном молодежном научном форуме «ЛОМОНОСОВ 2010» (Москва, 2010), XIV ежегодной сессии НЦССХ им. А.Н. Бакулева (Москва, 2010), Первом Российско-Греческом симпозиуме «Biomaterials and bionanomaterials: recent adnances and safety — toxicology issues» (Гераклион, Греция, 2010), 60-м конгрессе европейского общества кардиоваскулярных и эндоваскулярных хирургов (ESCVS) (Москва, 2011).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов диссертаций на соискание ученой степени кандидата медицинских наук.

Объем и структура работы

Работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и практических рекомендаций. Диссертация изложена на 157 страницах текста,

содержит 9 таблиц и 53 рисунка. Указатель использованной литературы содержит 190 источников.

Личный вклад автора

Анализ данных литературы по теме диссертации, биохимические исследования, оценка и статистическая обработка результатов, написание диссертации выполнены лично автором. Проведение экспериментов на открытом сердце, разработка технологии получения липосом и оценка метаболизма миокарда при ишемии и реперфузии проведены совместно с канд. биол. наук P.A. Мухамадияровым и канд. биол. наук НЛ. Воронцовой, которым автор выражает глубокую признательность.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. Эксперименты проведены на 529 взрослых крысах-самцах линии Wistar с массой тела 300-450 г. При проведении экспериментов руководствовались рекомендациями, изложенными в Приказе N 755 МЗ СССР от 12 августа 1977г. Под тиопенталовым наркозом (50 мг/кг) животным вскрывали грудную клетку, извлекали сердца, быстро фиксировали их на аортальной канюле и начинали перфузию по LangendorfF.

Перфузия изолированного сердца. В течение 15 минут сердце перфузировали оксигенированным раствором Кребса-Хензеляйта при 37°С и давлении 90 см вод.ст., после чего переходили на антеградную перфузию через канюлю, введенную в левое предсердие, при постоянном давлении 12 см вод.ст. На 10-15 минуте работы сердца регистрировали аортальный выброс и коронарный поток, отбирали аликвоту оттекающего от сердца перфузата для определения активности лактатдегидогеназы (ЛДГ). После подготовительного этапа моделировали нормотермическую ишемию миокарда путем перекрывания всех перфузат-несущих магистралей; сердце при этом погружали в термостатируемую камеру с перфузатом. Использовали модель тотальной тепловой ишемии в течении 30 минут и последующей 15-минутной реперфузии в режиме коронарной перфузии по Langendorff. Через 10 мин реперфузии через аортальную канюлю вводили 1 мл раствора Кребса-Хензеляйта, содержащего Ю^М адреналина. Для регистрации метаболических изменений в динамике сердца забирали после 5, 10, 20 и 30 минут ишемии, а также на 5, 10 и 15 минутах реперфузии, быстро замораживали в жидком азоте для последующего исследования. Кроме того, на 5, 10 и 15 мин реперфузии отбирали аликвоты оттекающего перфузата для определения ЛДГ. С помощью установки для исследования изолированного сердца (ТОО «Топаз», Россия) регистрировали

электрограмму (хлорсеребряными электродами) и силу сокращения сердца (фотоэлектрическим изометрическим датчиком). По кривой силы сокращения определяли силу натяжения сердца, закрепленного на аортальной канюле перфузионной системы; максимальную силу сокращения (Fmax); максимальную скорость сокращения (МСС); максимальную скорость расслабления (MCP). По электрограмме оценивали длительность периода нарушений ритма сердца во время реперфузии [Ласукова Т.В., 2009].

Биохимические методы. Концентрацию АТФ определяли энзиматическим методом (набор BioVision Inc., США). Определение содержания малонового диальдегида в ткани миокарда проводили в реакции с а-тиобарбитуровой кислотой [Стальная И.Д., 1977]. Для оценки содержания ДК и ТК проводили спектрофотометрическое измерение оптической плотности гексановых экстрактов против исходного н-гексана при длинах волн 233 нм и 268 нм и длине референтной волны 215 нм [Klein I., 1990]. Активность каталазы (КАТ) измеряли по скорости разложения перекиси водорода [Королюк М.А., 1987]. Активность супероксиддисмутазы (СОД) в гомогенатах миокарда оценивали методом, основанным на способности данного фермента ингибировать автоокисление адреналина [Мальцев Г.Ю., 1994]. Активность ЛДГ в оттекающем от сердца перфузате определяли с использованием диагностических наборов DiaSys (Германия). Содержание глюкозы оценивали глюкозооксидазным методом по образованию перекиси водорода (DiaSys, Германия); лактата — по нарастанию НАДН в лактатдегидрогеназной реакции в гидразин-глициновом буфере (DiaSys, Германия). Активность тритий-меченых липосом измеряли на жидкостно-сцинтилляционном счетчике RackBeta-II (LKB, Швеция) [Журавлева И.Ю., 1995].

Получение липосом методом ультразвуковой сонпфнкации. Для приготовления мультиламмелярных везикул использовали метод, основанный на получении липидной пленки на внутренней поверхности стеклянной колбы с последующим ее ресуспендированием в водных средах [Omoi N., 2006]. Суспензию мультиламмелярных везикул подвергали воздействию ультразвука (ультразвуковой дезинтегратор «type UD-20», TECHPAN, Poland). Суммарное время озвучивания составляло 12 мин. Осаждали сохранившиеся мультиламеллярные везикулы методом центрифугирования в рефрижераторной центрифуге при 10000 g в течение 15 мин. Измеряли оптическую плотность 1% раствора липосом в диапазоне волн 400-780 нм на спектрофотометре Ultraspec Plus (Pharmacia-LKB, Biochrom Ltd., Великобритания) и рассчитывали размер липосом [Безрукова А.Г., 1981].

Получение липосом методом экструзии. Использовали лабораторный экструдер («Lipex», Biomembranes Inc., Canada), в котором мультиламмелярные везикулы продавливали через два слоя поликарбонатного фильтра с диаметром пор 100 или 50 нм; избыточное давление создавали сжатым аргоном. С целью увеличения включения активных веществ во внутреннюю водную фазу липосом вводили дополнительную стадию гидратации липидов путем замораживания-оттаивания [Mayer L.D., 1985].

Статистическая обработка материала осуществлялась с помощью программы STATISTICA версии S.0.360.0 компании StatSoft, Inc (США). Применялись стандартные параметры описательной статистики при распределении, отличном от нормального. Проверка статистической гипотезы о нормальности распределения осуществлялась с использованием критерия Шапиро-Уилка. Использованы следующие методы статистического анализа: U-критерий Манна-Уитни или метод Колмогорова-Смирнова - с целью сравнения двух независимых групп по количественному признаку; дисперсионный анализ Краскала-Уоллиса — с целью сравнения трех и более независимых групп по количественному признаку. Расчет медианы, интерквартильного размаха, средней и стандартной ошибки средней использован для описания центральных тенденций и дисперсий. Во всех процедурах статистического анализа уровень значимости р принимался менее 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Установлено, что уже через час ишемической экспозиции при 25°С и 14°С тканевая концентрация креатинфосфата (КФ) достоверно снижалась на 50,8%, а АТФ на 63,1% (р<0,05). При 4°С отрицательный пик концентрации МЭФ наблюдали через 2 часа наблюдения, при этом концентрация АТФ составила 57,7% от исходных значений, а концентрация КФ - 62,5% (р<0,05) (табл. 1).

В дальнейшем, концентрация МЭФ при 25°С и 4°С демонстрировала линейное возрастание до контрольных значений (к 4-му часу при 25°С и к 6-му - при 4°С). В последующем происходило достоверное снижение концентрации МЭФ в данных группах.

Таблица 1- Состояние углеводно-энергетического метаболизма и концентрация продуктов липопероксидации в изолированном миокарде крыс при различных температурах ишемической экспозиции

Показатель Режим Время ишемической экспозиции

Исходные значения 1 час 2 часа 4 часа 6 часов 8 часов

АТФ, мкмоль/г 4иС 7,19±0,41 5,6±0,24 4,15±0,6 5,06±0,49 8,54±0,8 5,02±0,42

14°С 7,19±0,41 2,65±0,7 4,13±0,57 3,94±0,71 6,93±1,05 6,76±1,07

25иС 7,19±0,41 5,68±0,55 7,29±0,98 8,76±1,08 4,64±0,49 3,54±0,21

КФ, мкмоль/г 4°С 13,б±0,92 10,95±1,52 8,5±1,4 14,8±2,3 18,37±2,12 5,63±1,24

14°С 13,6±0,92 6,69±0,34 9,92±1,52 9±0,98 8,83±0,89 6,97±0,94

25иС 13,6±0,92 7,39±0,85 10±1,21 12,86±0,64 9,45±0,89 7,05±1,09

Глюкоза, мг/100 г 4иС 510±2б 240±22 160±29 256±29 284±14 311±18

14иС 510*26 122±21 131±12 159±15 226±26 254±25

25иС 510±26 52±6 97±21 136±33 215±15 222±12

Лактат, мкмоль/г 4иС 14,74±1,4 29,4±3 27,2±6,3 41,2±3,2 44,3±3,7 42,1±4,3

14°С 14,74±1,4 33,5±2,5 36,2±1,9 37,б±2,3 39,2±2,7 39±2,6

25иС 14,74±1,4 57,2±6,4 64,8±9,6 43,96±2,7 42,4±2,9 34,7±2,6

ДК, нмоль/г 4°С 7,б8±0,б4 11,02±0,79 9,46±1,15 9,99±0,89 12,68±0,48 14,17±1,01

14°С 7,68±0,64 13,56±2,05 13,79±0,78 14,13±1,25 14,40±0,62 11,40±0,65

25иС 7,68±0,64 15,49±0,80 16,84±0,46 11,44±0,79 10,75±1,34 11,85±0,77

МДА, нмоль/г 4иС 0,88±0,16 1,35±0,31 1,38±0,33 1,4±0,09 2,57±0,11 1,79±0,07

14иС 0,88±0,16 1,02±0,25 1,4±0,16 1,86±0,04 2,44±0,16 2,21±0,12

25иС 0,88±0,16 1,68±0,05 1,5±0,13 3,19±0,40 3,24±0,22 2,51±0,35

При 14°С наблюдали иную закономерность. Так, концентрация АТФ восстанавливалась к 6-му часу ишемии и до конца наблюдения достоверно не отличалась от исходных значений (р>0,05) (табл. 1).

Установлено, что через час шпемической экспозиции при 25°С тканевая концентрация глюкозы достоверно снизилась на 90%, при 14°С - на 75%, а при 4°С — лишь на 50% и продолжала снижаться вплоть до 2-го часа наблюдения (табл. 1). Параллельно с расходованием глюкозы наблюдали возрастание концентрации лакхата: на 280% при 25°С, на 136% при 14°С и на 11% при 4°С.

В последующие часы концентрация глюкозы при всех температурах недостоверно увеличивалась. Уровень лактата при 25°С продолжал нарастать до 2-го часа ишемии, после чего достоверно снижался, и эта тенденция сохранялась до окончания периода наблюдения. В противоположность этому, в сердцах, инкубированных при 4°С, концентрация лактата достоверно возрастала на 64,9%, а при 14°С - на 16%.

Установлено, что ишемия активирует процессы ПОЛ при всех использованных режимах гипотермии. Уже в течение первого часа инкубации отмечали быстрое достоверное нарастание содержания ДК в миокарде. Это увеличение было наиболее выраженным при температуре 25°С и наименьшим при 4°С. При 14°С после 6 часов ишемии отмечалось достоверное снижение содержания ДК (табл. 1). Концентрация МДА в миокарде достигала максимума к 6-му часу при температурах 4°С и 14°С, а при 25°С - к 4-му часу и сохранялась на высоком уровне вплоть до 6-го часа ишемии. Далее подъем содержания МДА сменялся его снижением. При 14°С и 25°С повышение концентрации МДА несколько «запаздывало» по сравнению с ДК.

Одновременно с увеличением содержания в ткани продуктов ПОЛ отмечали изменение активности антиоксидантных ферментов - СОД и КАТ. При температуре 25°С наблюдали достоверное повышение активности СОД (в 2.5 - 3,0 раза), достигающее максимума к 2-му часу ишемии (табл. 2). Далее происходило постепенное снижение ее активности до 79,7% от исходных значений. Кинетика изменения активности СОД при 14°С была аналогичной, но характеризовалась меньшей амплитудой. При 4°С активность СОД была достоверно ниже исходного уровня на протяжении всего периода наблюдения. Изменение активности катал азы в целом носило аналогичный характер, но происходило с некоторым отставанием по времени. Так, если активность СОД при 14°С и 25°С достигала максимума через 2 часа инкубации, то активность КАТ - через 4 часа при 25°С и через 6 часов при 14°С. При 4°С активность КАТ достоверно не отличалась от контрольных значений.

Таблица 2 — Активность антиоксидантных ферментов в изолированном миокарде крыс при различных температурах ишемической экспозиции

Показатель Режим Время ишемической экспозиции

Исходные значения 2 часа 6 часов 8 часов

СОД, нмоль/мин/г 4°С 395,6±27,1 204,8±39,4 216,8±71,2 209±37,2

14°С 395,6±27,1 886,6±76,5 340,8±57,8 274,4±24,0

25°С 395,6±27,1 1175,7±46 662,7±35,0 315,3±95,5

Каталаза, мкмоль/мин/г 4°С 13,67±0,8 15,95±1,86 18,13±0,91 14,94±1,04

14°С 13,67±0,8 19,43±0,73 33,49±1,56 23,20±0,38

25°С 13,67±0,8 19,10±0,59 26,87±0,92 24,09±1,39

Таким образом, снижение температуры приводит к уменьшению расхода энергии, но активизирует повреждение мембран. По-видимому, оптимальным уровнем охлаждения миокарда является 14°С, при котором возможно сохранение баланса ПОЛ-АОС.

В связи с полученной информацией о патофизиологических механизмах ишемических и реперфузионных повреждений был предложен подход к антиишемической защите миокарда, включающий введение липосомальных препаратов антиоксидантов и макроэргических фосфатов.

Способ получения липосом был выбран на основании сравнительной оценки двух методов - ультразвуковой сонификации (УЗС) и экструзии. Основными критериями служили интенсивность процессов ПОЛ в липосомальной мембране и сохранение активности включенных в липосомы биологически активных веществ.

Было установлено, что исходная концентрация МДА в группах липосом, полученных методом УЗС, достоверно превышает данный показатель в липосомах, приготовленных методом экструзии в 3 раза (р<0,05).

Была выполнена попытка ограничения липопероксидации введением в состав липосомальной мембраны а-токоферола. Действительно, а-токоферол предотвращал накопление МДА, ДК и ТК в процессе получения липосом, вне зависимости от способа. Так, исходные значения содержания МДА в липосомах с а-токоферолом, были в 9 раз ниже, чем в стандартных липосомах (р<0,05). Концентрации ДК и ТК в липосомах с а-токоферолом на всем протяжении эксперимента (72 часа) были достоверно ниже значений в стандартных липосомах в 2 раза (р<0,05).

Установлено, что при экструзии активность СОД и КАТ, а также концентрация глутатиона, цитохрома С и а-токоферола, включенных в липосомы, снижается недостоверно. В то же время, при сонификации активность КАТ, достаточно большой и разветвленной молекулы, падает приблизительно в 20 раз (р<0,05), а концентрация цитохрома С достоверно снижается на 11% по сравнению с исходной (р<0,05).

Было показано, что температура 4°С является оптимальной для хранения полученных липосомальных препаратов, так как концентрация продуктов липопероксидации не отличалась от исходных значений вплоть до 72 часа наблюдения. Повышение температуры хранения препаратов до 25°С способствует активации процессов ПОЛ в липосомах, полученных как методом экструзии, так и методом УЗС. Так, на протяжении 72 часов наблюдали значимое нарастание концентрации МДА в липосомах, хранившихся при 25°С в 2,9 раза (р<0,05).

Было показано, что включение и распределение липосом в ишемизированном миокарде зависит от их концентрации, липидного состава и температуры ишемической экспозиции. Сравнивали два вида липосом: «жесткие», с соотношением ФХ:Х - 7:5 и «мягкие» с подобным соотношением 2:1. Липосомы вводили в концентрации 10 мг/мл и 25 мг/мл

При температуре 4°С в миокард включалась 17-20% введенных липосом (рис. 1). Однако приблизительно половина их была обнаружена в цитоплазматических мембранах, лишь одна третья часть - в мембранах

митохондрий, и только 3-6% — в микросомальных мембранах. %

30 25 -20 -15 -10 5 -0

А щ

37 14

3 25 мг/мл 7:5 ■ 25мг/мл2:1 ОЮмт/мл7:5 Ш10мг/мл2:1

Зт

град

Рисунок 1 - Суммарное включение в миокард 3Н-меченых липосом с различными концентрациями липидов (25 или 10 мг/мл) и отношениями их массовых долей ФХ:Х (7:5 или 2:1) по субклеточным фракциям при различной температуре

При нормотермической ишемии в группе, где использовали липосомы с соотношением липидов ФХ:Х равным 2:1 в концентрации 25 мг/мл, включение их в миокард было достоверно ниже в 2,5-3 раза (р<0,05), чем в трех остальных (рис. 1). Максимальное же включение было отмечено при использовании липосом в концентрации 10 мг/мл с соотношением ФХ:Х=2:1. Распределение Н-ФХ по субклеточным фракциям в данной группе также представляется оптимальным. Так, в митохондриальной фракции было обнаружено 61±6% включенной метки, микросомальной - 4±1%, и лишь 27±3% - во фракциях грубых мембран.

При гипотермии 14°С максимальное включение липосом в миокард достигнуто при использовании концентрации липидов 10 мг/мл, причем для липосом с ФХ:Х=7:5 оно было наивысшим и составило 23±3% (рис. 1). В данной группе 45±4% липосом включались в грубые плазматические мембраны, 29±4% - в митоходриальную и 6±1% - микросомальную фракции.

Таким образом, для предупреждения и коррекции ишемических и реперфузионных повреждений миокарда были выбраны липосомы с соотношением ФХ:Х равным 7:5 в концентрации 25 мг/мл. Липосомальные препараты разделили на группы: «антиоксидантные» липосомы (в состав внутренней фазы включали СОД и ГТ, а в мембрану- а-токоферол), «энергетические» липосомы (содержащие во внутренней фазе АТФ и КФ) и «пустые» липосомы (содержащие во внутренней фазе 0,9% NaCl).

В эксперименте на крысах при системном введении АЛ в значительной степени предупреждали развитие ишемических и реперфузионных повреждений изолированного сердца. Об этом свидетельствует, наблюдавшиеся при реперфузии, достоверное увеличение на 39,9% величины максимальной силы сокращения (р<0,05), достоверно меньшая длительность аритмий на 40% (р<0,05) и значимое снижение в 2 раза активности ДЦГ в оттекающем перфузате (р<0,05) (рис. 2) по сравнению с показателями в контроле. После введения адреналина на 10-й минуте реперфузии Fmax в группе АЛ была достоверно выше показателей в контроле на 32,8% (р<0,05). Кроме того в данной группе наблюдали восстановление МСС на 75,9% (р<0,05) и MCP на 76,3% (р<0,05) (табл. 3).

В результате системного введения липосом, содержащих макроэргические фосфаты, наблюдали достоверное ограничение длительности нарушений ритма сердца на 71,3% (р<0,05), значимое увеличение силы сокращения на 20% (р<0,05) и достоверное снижение активности ЛДГ в 1,5 раза (р<0,05) по сравнению с контролем (табл. 3, рис. 2).

Сила сокращения, длительность аритмий и активность ЛДГ в группе ПЛ достоверно (р<0,05) отличались от аналогичных показателей в контрольной группе на 24,6%, 13,7% и 9,7% соответственно.

После интракоронарного введения липосомальных препаратов, воспроизведения 30-минутной ишемии и возобновления перфузии в контрольной группе происходило восстановление максимальной силы сокращения на 57,8%; в группе ПЛ - на 78,5%; в группе ЭЛ - на 44,9% (табл. 4). В то же время в группе сердец, в которой для защиты использовали антиоксиданты (АЛ) максимальная сила сокращения после цикла ишемии -реперфузии достоверно не отличалась от исходных показателей.

микат/л 400

350

300

250

200

150

100

Контроль

* - р<0,05 по сравнению с контролем Рисунок 2 - Активность ЛДГ в перфузате после предварительного системного введения липосомальных препаратов, 30-минутной ишемии и последующей 10-минутной реперфузии

Величина МСС в контрольной группе сердец после цикла ишемия-реперфузия составила 40,9% от исходного уровня. В группе ЭЛ данный показатель восстанавливался до уровня 44,0%, ПЛ - до уровня 61,0%. При использовании АЛ данный показатель достоверно не отличался от исходного уровня и составил 83,3% от исходных значений. Схожая динамика наблюдалась и при регистрации MCP миокарда. Так, в контрольной группе и группе ЭЛ процент восстановления составил 31,5% и 35,0% соответственно. В группе ПЛ - 47%.

Таблица 3 - Сило-скоростные показатели деятельности миокарда и активность ЛДГ после предварительного системного введения липосомальных препаратов, 30-минутной ишемии и последующей 10-минутной реперфузии

Группы Р шах, г МСС, г/с МСР г/с Длительность нарушений ритма, сек Б шах.адр, г

Исходные значения После И-Р Исходные значения После И-Р Исходные значения После И-Р

Контроль б,14±0,75 2,45±0,39 20,62±2,98 13,01±2,24 15,86±2,77 6,92±1,02 328±14 5,42±1

АЛ 6,94±0,51 4,07±0,55 25,63±3,20 19,47±1,81 1б,35±3,29 12,48±2,09 197±28 8,06±0,75

ЭЛ 5,84±0,65 3,31±0,97 22,51±2,42 1б,36±2,01 16,29±2,26 9,37±1,30 94±34 6,7Ш,7

ПЛ 6,91±0,41 3,25±0,86 23,22±2,73 13,95±3,25 18,55±3,33 9,86±2,40 283±55 5,83±0,6

Таблица 4 - Сило-скоростные показатели деятельности миокарда после интракоронарного введения липосомальных препаратов, 30-минутной ишемии и последующей 10-минутной реперфузии

Группы Б тах, г МСС, г/с МСР г/с Длительность нарушений ритма, сек Б тах.адр, г

Исходные значения После И-Р Исходные значения После И-Р Исходные значения После И-Р

Контроль 10,2±0,7 5,9±0,9 43,9±4,7 17,6±2,3 32,0±5,3 10,1±1,1 357±59 7,5±0,8

АЛ 10,9±1,4 9,1±0,9 47,2±9,3 39,3±6,2 35,9±5,9 28,0±3,1 73±26 11,6±0,2

ЭЛ 10,9±0,5 4,9±0,6 43,0±5,2 19,1±2,4 37,1±5,2 13,0±1,3 379±79 9,4±0,9

ПЛ 10,Ш ,9 8,4±0,9 49,0±7,8 29,9±6,5 41,3±8,4 19,7±3,3 135±19 10,5±0,5

В группе АЛ максимальная скорость расслабления после ишемии-реперфузии составила 78,0% от исходных показателей, при этом различия были не достоверными (р>0,05) (табл. 4).

Однократное интракоронарное введение адреналина в дозе 10"8 М/мл на 11 минуте репефузии вызвало повышение Fmax у всех сердец. При этом величина данного показателя у сердец группы ЭЛ была наименьшей. Максимальную же реакцию на введение адреналина наблюдали в группе, где для защиты миокарда использовали АЛ (табл. 4).

Для оценки аритмогенного эффекта ишемии и последующей реперфузии использовали суммарную длительность аритмий, длительность конкретного вида аритмий и процент наблюдения аритмий в группах. Так в первые минуты постишемической реперфузии наблюдали различные нарушения ритма сердца: атрио-вентрикулярный блок (А-В), желудочковую тахикардию (ЖТ) и фибрилляцию желудочков (ФЖ).

Наибольшую аритмогенную активность демонстрировали сердца контрольной группы и группы ЭЛ. В группе ПЛ данный показатель составлял 78,7% от контроля. В контрольной и ЭЛ группах после цикла ишемия-реперфузия были отмечены все вышеперечисленные виды аритмий. В контрольной группе у 70% сердец развивалась ЖТ, у 60% - А-В и у 10% - ФЖ. В то же время, в группе ЭЛ у всех сердец развивалась ЖТ и А-В и у 60% - ФЖ. У сердец групп ПЛ и АЛ тахиаритмии (ЖТ и ФЖ) не наблюдали вообще. В данных группах были отмечены лишь А-В-блокады, но у всех сердец. Общая длительность периода реперфузионных аритмий также была различной в разных группах и наибольшей была у сердец группы ЭЛ, и наименьшей - у сердец групп ПЛ и АЛ.

Таким образом, было показано, что в результате интракоронарного и системного введения липосом в условиях нормотермической ишемии наилучшим защитным эффектом обладали липосомы с антиоксидантами. В данных группах отмечено наилучшее сохранение максимальной силы сокращения, МСС, MCP, значительное увеличение силы сокращения в ответ на введение адреналина. Кроме того, данный препарат в значительной степени предотвращал развитие фибрилляций желудочков и желудочковых тахикардий.

ВЫВОДЫ

деструктивный эффект связан с процессами липопероксидации. Динамика метаболизма и степень повреждения мембран миокардиоцитов напрямую зависят от температуры ишемической экспозиции. Оптимальным температурным режимом является 14°С; при этом сохраняется баланс ПОЛ/АОС наряду с умеренным расходованием пула МЭФ.

2. Липосомы, введенные в ишемизированный миокард при температурах 4 С, 14 С и 37°С, включаются в миокардиальную ткань, распределяясь в различных соотношениях между фракциями грубых цитоплазматических мембран, митохондриальной и микросомальной. Интенсивность включения липосом в миокардиоциты и распределение их по субклеточным фракциям в значительной степени зависят от концентрации, липидного состава и температурного режима.

3. Как экструзия, так и ультразвуковая сонификация могут быть использованы в качестве способа получения липосомальных препаратов сложного состава. Однако, липосомы, полученные методом экструзии, характеризуются достоверно более низким содержанием продуктов ПОЛ, стандартным диаметром и стабильностью внутреннего состава.

4. При предварительном системном введении наиболее выраженный защитный эффект оказывают липосомы с заключенными в них природными антиоксидантами, что проявляется восстановлением функциональной активности миокарда, уменьшением длительности периода реперфузионных аритмий и низким показателем выхода внутриклеточных ферментов.

5. При интракоронарном введении наиболее выраженное антиишемическое воздействие оказывает липосомальная форма комплекса природных антиоксидантов, что проявляется значительным восстановлением сократимости миокарда в постишемическом периоде, как при нормо-, так и при гипотермии; отсутствием реперфузионных аритмий и стабильностью мембранных структур миокардиоцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для оценки степени повреждения миокарда при ишемии и реперфузии рекомендовано использовать комплекс методов, включающий, как минимум, оценку состояния гликолиза (уровень ПВК, лактата, глюкозы); энергетического метаболизма (уровень АТФ, ФК); показатели системы ПОЛ-АОЗ (концентрацию МДА, ДК и ТК, активность СОД и каталазы); выброс внутриклеточных ферментов в перфузат (ЛДГ и КФК).

2. Для оценки функционального состояния изолированного сердца после ишемии рекомендовано производить анализ физико-механической деятельности миокарда: Fmax, МСС, MCP, оценивать длительность нарушений ритма сердца.

3. В качестве технологии получения липосомальных препаратов предпочтительно использование экструзии, которая позволяет приготовить липосомы, стандартизованные по размеру и составу, с низким содержанием продуктов липопероксидации.

4. При приготовлении липосом рекомендовано вводить дополнительный компонент — а-токоферол. Присутствие этого соединения в составе препарата стабилизирует липосомальную мембрану и значительно ограничивает процессы ПОЛ.

5. Полученные липосомальные препараты рекомендовано хранить при 4°С. При данном уровне температуры значительно снижается интенсивность процессов липопероксидации при сохранении структуры и целостности липосом.

6. Для предотвращения повреждений, сохранения и восстановления функций изолированного сердца после ишемии и последующей реперфузии целесообразно использовать липосомы, содержащие в своем составе комплекс природных антиоксидантов. Липосомальные препараты антиоксидантов в значительной степени восстанавливают сократимость миокарда после ишемии-реперфузии и ограничивают развитие реперфузионных аритмий.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в журналах, рекомендованных ВАК

1. Влияние а-токоферола на динамику процессов липопероксидации в липосомах, полученных методами ультразвуковой сонификации и экструзии, при различных температурах хранения / Р. А. Мухамадияров, А. В. Веремеев, Н. Е. Марцияш, В. Г. Зинчук // Фундаментальные исследования. - 2012. - №6. -С. 566-570.

2. Клиническая и прогностическая значимость интерлейкина-12 у пациентов с инфарктом миокарда / М. В. Зыков, О. Л. Барбараш, В. В. Кашталап, А. В. Веремеев //Медицинская иммунология. -2011.-Т. 13, № 2-3. -С. 219-226.

3. Nanotechnology and nanomaterials: use of vascular nanosystems for ischemic heart injury repair / R.A. Mukhamadiyarov, A.V. Veremeev, I.Yu. Zhuravleva // Journal of International Scientific Publications: Materials, Methods & Technologies. -2012. - Vol.6.-P. 392-400.

Публикации в рецензируемых журналах

4. Приготовление липосом сложного состава методами ультразвуковой сонификации и экструзии и их сравнительные характеристики / Р. А. Мухамадияров, А. В. Веремеев, И. Ю. Журавлева и др. // Медицинский вестник Башкортостана. - 2006. - № 1. _ с. 259-263.

5. Мухамадияров, Р. А. Оценка безопасности применения липосомальных препаратов на модели изолированного сердца / Р. А. Мухамадияров, А. В. Веремеев, И. Ю.Журавлева // Медицина в Кузбассе. -2008. - Спецвыпуск № 9. - С. 65-66.

Материалы конференций

6. Мухамадияров, Р. А. Динамика включения и субклеточного распределения липосом в изолированном миокарде, как показатель перспективы их применения для коррекции ишемических повреждений сердца/ Р. А. Мухамадияров, А. В. Веремеев, И. Ю. Журавлева // Материалы Российского национального конгресса кардиологов. -М., 2010. -С. 228-229.

7. Мухамадияров, Р. А. Субклеточное распределение липосом в миокарде, как показатель перспективы их применения для клеточной и генной терапии ишемических повреждений сердца / Р. А. Мухамадияров, А. В. Веремеев // Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии : материалы IV Всероссийского симпозиума. - С.-Пб., 2010. - С. 98-99.

8. Мухамадияров, Р. А. Эффективность интракоронарного введения липосом в условиях тотальной нормотермической ишемии и последующей реперфузии в эксперименте / Р. А. Мухамадияров, А. В. Веремеев, И. Ю. Журавлева // Бюллетень НЦССХ им. А.Н.Бакулева РАМН. - 2010. - T.l 1, №3. _ С. 304.

9. Воронцова, Н. JI. Влияние гипотермии на состояние миокардиоцитов изолированного сердца / Н. JI. Воронцова, А. В. Веремеев, Р. А. Мухамадияров // Бюллетень НЦССХ им. А.Н.Бакулева РАМН. - 2007. - Т.8, №6. - С. 208.

10. Мухамадияров, Р. А. Сравнительное исследование интракоронарного и системного введения липосомальных препаратов для предотвращения ишемических и реперфузионных повреждений изолированного сердца / Р. А.

Мухамадияров, А. В. Веремеев, И. Ю. Журавлева // Сибирский медицинский журнал. — Томск, 2007. -№1- С. 87-88.

11. Мухамадияров, Р. А. Характеристика липосом, полученных методами ультразвуковой сонификации и экструзии / Р. А. Мухамадияров, А. В. Веремеев // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. — 2007. -№ 62. - С. 187-190.

12. Veremeev, А. V. Lipoperoxidation level in liposomes as safety index of their implementation / A. V. Veremeev, R. A. Mukhamadiarov, I. Yu. Zhouravleva // Biomaterials and Nanobiomaterials: Recent advances safety and toxicology issues : Matherials of 1st Russian-Hellenic Symposium with International Participation and Young Scientists School. - Heraclion, 2010. - P. 54-55.

13. Veremeev A. V. The way of correction of ischemic and reperfiision defects in myocardium using vesicular nanosystems / A. V. Veremeev, R. A. Mukhamadiarov, I. Yu. Zhouravleva // Biomaterials and Nanobiomaterials: Recent advances safety and toxicology issues : Materials of 1st Russian-Hellenic Symposium with International Participation and Young Scientists School. - Heraclion, 2010. - P. 41.

14. Use of liposome preparations for ischemic and reperfiision damages of myocardium / R. A. Mukhamadiarov, I. G. Khaliulin, A. V. Veremeev et al. // International society for adaptive medicine (ISAM) : VIII World congress. — Moscow, 2006.-P. 155.

15. Veremeev, A.V. Correction of ischemic and reperfiision defects in myocardium using liposomal forms of antioxidants / A. V. Veremeev, R. A. Mukhamadiarov, I. Yu. Zhouravleva // 60th international congress of European society for cardiovascular and endovascular surgery (ESCVC). — Moscow, 2011. - P. S107.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

Fmax — максимальная сила сокращения

а-ТФ — а-токоферол

А-В — атриовентрикулярная блокада

АОЗ — антиоксидантная защита

АЛ — липосомы с антиоксидантами

ДК — диеновые коньюгаты

ЖТ —желудочковая тахикардия

КАТ — каталаза

КФ — креатинфосфат

ДЦГ — лактатдегидрогеназа

МДА — малоновый диальдегвд

МСР — максимальная скорость расслабления

МСС — максимальная скорость сокращения

ПЛ — «пустые» липосомы

ПОЛ — перекисное окисление липидов

СОД - супероксиддисмутаза

ТК — триеновые коныогаты

УЗС —ультразвуковая сонификация

ФЖ — фибрилляция желудочков

ЭЛ — липосомы с макроэргичекими фосфатами

Оглавление диссертации Веремеев, Алексей Владимирович :: 2012 :: Кемерово

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ КАК СПОСОБА ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И КОРРЕКЦИИ ИШЕМИЧЕСКИХ И РЕПЕРФУЗИОННЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ МИОКАРДА (ОБЗОР

ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Липосомы. Получение и свойства липосом

1.2. Применение липосом в биологии и медицине

1.3. Формирование патогенетической цепи ишемического повреждения миокарда

1.4. Механизмы и роль нарушений энергетического обмена клеток миокарда при острой ишемии и реперфузии

1.5. Активация процессов липопероксидации в период ишемии

1.6. Активация процессов липопероксидации в период реперфузии

ГЛАВА 2. МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В МИОКАРДЕ ПОСЛЕ ИШЕМИИ И ПОСЛЕДУЮЩЕЙ РЕПЕРФУЗИИ В УСЛОВИЯХ НОРМО- И ГИПОТЕРМИИ

2.1. Структурные повреждения мембран и метаболические изменения в клетках при нормотермической ишемии миокарда

2.2. Структурные повреждения мембран и метаболические изменения в миокарде при ишемии и реперфузии в условиях гипотермии

ГЛАВА 3. СВОЙСТВА, ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ И СТАНДАРТИЗАЦИИ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ 68 3.1. Получение липосом методом ультразвуковой сонификации

3.1.1. Получение мультиламеллярных везикул

3.1.2. Получение малых однослойных липосом методом ультразвуковой сонификации

3.2. Включение и субклеточное распределение липосом в миокарде 71 3.2.1. Метод определения радиоактивности

3.3. Получение малых однослойных липосом методом экструзии

3.4. Влияние способа получения липосом на интралипосомальные биологически активные вещества

3.5. Сравнительная оценка интенсивности процессов свободнорадикального окисления в липосомах, полученных различными методами

ГЛАВА 4. ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ ИШЕМИЧЕСКИХ И РЕПЕРФУЗИОННЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ МИОКАРДА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

4.1. Эффекты предварительного системного введения липосомальных препаратов при нормотермической ишемии и реперфузии

4.2. Эффекты интракоронарного введения липосомальных препаратов при нормотермической ишемии и реперфузии

4.3. Эффекты интракоронарного введения липосомальных препаратов в условиях гипотермичекой ишемии

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Веремеев, Алексей Владимирович, автореферат

В настоящее время большое внимание уделяют поиску способов защиты миокарда от ишемических повреждений, в частности, посредством фармакологических воздействий. Важнейшими патогенетическими факторами повреждения клетки в условиях ишемии и реперфузии являются перекисное окисление липидов мембран (ПОЛ) и нарушение энергетического обмена. Значительное количество исследований посвящено предупреждению ишемических повреждений сердца с помощью антиоксидантов и препаратов, восстанавливающих энергетический запас миокарда [1,27]. Однако далеко не все лекарственные средства из-за высокой молекулярной массы способны проникать в клетку. Решением данной проблемы может служить использование липосомальных форм высокомолекулярных препаратов. Сродство с природными мембранами клетки, универсальность и отсутствие защитных и аллергических реакций на природные липиды позволяет рассматривать липосомальные препараты как перспективную лекарственную форму.

Обнаружение в 1965 году жидкокристаллических липидных структур -липосом - открыло новые возможности в изучении различных свойств биологических мембран. В середине 70-х годов прошлого века липосомы стали использовать не только как модель клеточных мембран, но и как инструмент воздействия на них [13,49,118].

За последнее время описаны десятки способов получения липосом. В состав липосом удалось ввести как углеводные последовательности, так и белки («протеолипосомы»), что послужило поводом к созданию так называемых «иммунолипосом», специфичных к определенным лигандам. Получены липосомы, способные избегать защитных факторов организма, что значительно продляет время их циркуляции в кровотоке [18]. Вместе с тем, пока нет общепринятых методов стандартизации полученных липосомальных препаратов, что затрудняет сопоставление результатов различных исследований, так как авторы используют липосомы, отличающиеся по размеру, составу, способу получения, что может повлиять на их фармакологические свойства.

С конца прошлого столетия липосомы используют в экспериментах и в клинической практике для лечения новообразований различной локализации, острых лейкозов, миеломной болезни [152]. Имеются данные по применению липосом при сахарном диабете, вирусных заболеваниях, паразитарных инвазиях [3]. Проводятся эксперименты по применению липосомальных препаратов при ишемии печени, почек, головного мозга [183]. Однако в доступной литературе отсутствует информация об использовании их для коррекции ишемических и реперфузионных повреждений миокарда. Возможно, это связано с проблемой доставки препарата непосредственно в сердечную ткань, недостаточной изученностью механизмов и эффективности включения липосом в миокард. Поэтому данная проблема представляет несомненный научный и практический интерес. Варьируя липидный состав липосом и состав внутренней фазы, возможно введение в ишемизированное сердце высокомолекулярных веществ, которые в свободной форме элиминируются из системного кровотока и не проникают внутрь миокардиоцитов.

В связи с этим представляется возможным и перспективным использование липосомальных форм макроэргических соединений и антиоксидантов.

Целью настоящего исследования явилось обоснование возможности применения липосомальных форм препаратов, относящихся к группам макроэргических соединений и антиоксидантов, и оценка их эффективности на экспериментальных моделях ишемических и реперфузионных повреждений миокарда.

Задачи исследования

2. Исследовать поглощение и распределение липосом в миокардиоцитах в зависимости от температуры.

3. Оценить эффективность способа экструзии для получения и стандартизации липосомальных препаратов.

4. Оценить эффективность системного введения липосомальных препаратов.

Научная новизна исследования

Практическая значимость

Показана эффективность применения липосомальных препаратов при ишемии-реперфузии миокарда. Установлено, что при системном и интракоронарномм введении липосом, содержащих антиоксиданты в значительной степени сохраняется функциональная активность сердца.

Положения, выносимые на защиту

Апробация материалов диссертации

Материалы настоящего исследования были доложены и обсуждены на на VIII международном конгрессе по адаптивной медицине (ISAM) (Москва,

2006), XIII Всероссийском съезде сердечно-сосудистых хирургов (Москва,

Греция, 2010), 60-м конгрессе европейского общества кардиоваскулярных и эндоваскулярных хирургов (ESCVS) (Москва, 2011).

Публикации

Объем и структура диссертации

Работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственного материала, заключения, выводов и практических рекомендаций. Диссертация изложена на 159 страницах текста, содержит 9 таблиц и 53 рисунка. Указатель использованной литературы содержит 227 источников.

Заключение диссертационного исследования на тему "Коррекция ишемических и реперфузионных повреждений миокарда с использованием липосомальных препаратов"

ВЫВОДЫ

1. Ишемия и последующая реперфузия приводят к значительному нарушению сократительной функции сердечной мышцы, угнетению энергетического метаболизма и интенсификации процессов ПОЛ. Основной деструктивный эффект связан с процессами липопероксидации.Динамика метаболизма и степень повреждения мембран миокардиоцитов напрямую зависят от температуры ишемической экспозиции. Оптимальным температурным режимом является 14°С; при этом сохраняется баланс ПОЛ/АОС наряду с умеренным расходованием пула МЭФ.

2. Липосомы, введенные в ишемизированный миокард при температурах 4°С, 14°С и 37°С, включаются в миокардиальную ткань, распределяясь в различных соотношениях между фракциями грубых цитоплазматических мембран, митохондриальной и микросомальной.Интенсивность включения липосом в миокардиоциты и распределение их по субклеточным фракциям в значительной степени зависят от концентрации, липидного состава и температурного режима.

5. При интракоронарном введении наиболее выраженное антиишемическое воздействие оказывает липосомальная форма комплекса природных антиоксидантов, что проявляется значительным восстановлением сократимости миокарда в постишемическом периоде, как при нормо-, так и при гипотермии; отсутствием реперфузионных артимий и стабильностью мембранных структур миокардиоцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для оценки степени повреждения миокарда при ишемии и реперфузии необходимо использовать комплекс методов, включающий, как минимум, оценку состояния гликолиза (уровень ПВК, лактата, глюкозы); энергетического метаболизма (уровень АТФ, ФК); показатели системы ПОЛ-АОЗ (концентрацию МДА, ДК и ТК, активность СОД и каталазы); выброс внутриклеточных ферментов в перфузат (ЛДГ и КФК).

2. Для оценки функционального состояния изолированного сердца после ишемии необходимо производить анализ физико-механической деятельности миокарда: Fmax, МСС, MCP, оценивать длительность нарушений ритма сердца.

4. При приготовлении липосом необходимо вводить дополнительный компонент — g-токоферол. Присутствие этого соединения в составе препарата стабилизирует липосомальную мембрану и значительно ограничивает процессы ПОЛ.

5. Полученные липосомальные препараты необходимо хранить при 4°С. При данном уровне температуры значительно снижается интенсивность процессов липопероксидации при сохранении структуры и целостности липосом.

6. Для предотвращения повреждений, сохранения и восстановления функций изолированного сердца после ишемии и последующей реперфузии целесообразно использовать липосомы, содержащие в своем составе комплекс природных антиоксидантов. Липосомальные препараты антиоксидандов в значительной степени восстанавливают сократимость миокарда после ишемии-реперфузии и ограничивают развитие реперфузионных аритмий.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Веремеев, Алексей Владимирович

1. Барышников, А. Ю. Иммунолипосомы новое средство доставки лекарственных препаратов / А. Ю. Барышников, Н. А. Оборотов // Соврем, онкология. - 2001. - Т. 3, № 2. - С. 44-48.

2. Безкаравайный, Б. А. Препараты природного фосфатидилхолина: перспективы применения в педиатрии / Б. А. Безкаравайный, М. И. Когутницкая // Здоровье ребенка. 2007. - № 6. - С. 100-105.

3. Дынник, О. Б. Внутрикоронарная ультразвуковая томографическая визуализация / О. Б. Дынник, В. Н. Залесский // Укр. мед. часопис. 2005. — № 5. — С. 89-94.

4. Залесский, В. Н. Визуализация кальциноза методом спиральной компьютерно-томографической коронароангиографии / В. Н. Залесский, О. Б. Дынник // Укр. мед. часопис. 2006. - № 3. - С. 78-83.

5. Залесский, В. Н. Магнитно-резонансная коронароангиография / В. Н. Залесский, О. Б. Дынник // Укр. кардюл. журнал. 2006. - № 2. - С. 103107.

6. Залесский, В. Н. Молекулярная медицина: применение нанотехнологий для молекулярной визуализации в кардиологии / В. Н. Залесский, О. Б. Дынник // Укр. мед. часопис. 2005. - № 2. - С. 76-83.

7. Кобринский, Ю. Липосомы в медицине / Ю. Кобринский // Наука и жизнь. 1988.-№6.-С. 13-17.

8. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ / А. П. Каплун, Ш. Ле Банг, Ю. М. Краснопольский, В. И. Швец // Вопр. мед. химии. 1999. - № 1. - С. 3-12.

9. НанотехнолопУ, наномедицина: перспективи наукових дослщжень та впровадження IX результате у медичну практику / Л. Г. Розенфельд, В. Ф. Москаленко, I. С. Чекман, Б. О. Мовчан // Укр. мед. часопис. 2008. - № 5.-С. 63-68.

10. Ю.Третьякова, О. С. Кардиопротекторные возможности липина при перинатальной гипоксии у новорожденных / О. С. Третьякова, И. В.

11. Заднипряный, Г. Гуру. // Тавр, мед.-биолог. вестник. 2006.- Т. 9, № 3 (ч. 1).-С. 62-66.

12. Третьякова, О. С. Корекщя дисметабол!зму ппоксично ушкодженого мюкарда новонароджених / О. С. Третьякова, С. С. Казак, I. В. Задшпряний // Соврем, педиатрия. 2006. - № 2. — С. 177-180.

13. Чекман, И. С. Карбоновые нанотрубки: методы получения и перспективы использования в медицине / И. С. Чекман, О. В. Швец, О. О. Нагорная // Укр. мед. часопис. 2008. - № 3. - С. 86-91.

14. Юлиш, Е. И. Липосомальная терапия: настоящее и будущее / Е. И. Юлиш, А. Е. Абатуров // Здоровье ребенка. 2008. - № 1. - С. 87-90.

15. Accelerated thrombolysis and reperfusion in a canine model of myocardial infarction by liposomal encapsulation of streptokinase / P. D. Nguyen, E. A. О'Rear, A. E. Johnson et al. // Circ. Res. -1990. Vol. 66. - P. 875-878.

16. Adenosine monophosphate-activated protein kinase mediates the protective effects of ischemic preconditioning on hepatic ischemia-reperfusion injury in the rat / C. Peralta, R. Bartrons, A. Serafín et al. // Hepatology. 2001. - Vol. 34.-P. 1164-1173.

17. Adenosine triphosphate liposomes: encapsulation and distribution studies / G. X. Xu, X. H. Xie, F. Y. Liu et al. // Pharm. Res. -1990. Vol. 7. - P. 553-557.

18. Aerosolized liposomebased delivery of amphotericin B to alveolar macrophages / S. P. Vyas, S. Quraishi, S. Gupta, K. S. Jaganathan // Int. J. Pharm. 2005. - Vol. 296. - P. 2-25.

19. Albendazole versus placebo in treatment of echinococcosis / M. Keshmiri, H. Baharvahdat, S. H. Fattahi et al II Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2001. -Vol. 95.-P. 190-194.

20. Alkaline extraction and reverse-phase highperformance liquid chromatography of adenine and pyridine nucleotides in human platelets / G. Leoncini, E. Buzzi, M. Maresca et al. // Anal. Biochem. -1987. Vol. 165. - P. 379-383.

21. Allen, T. M. Liposomal pharmacokinetics. Classical, stericallystabilized, cationic liposomes and immunoliposomes / T. M. Allen, D. D. Stuart // Liposomes: Rational design / ed. A. S. Janoff. NY, 2005. - P. 63-87.

22. AMP-activated protein kinase: a key stress signaling pathway in the heart / L. H. Young, J. Li, S. J. Baron, R. R. Russell // Trends Cardiovasc. Med. 2005. -Vol. 15. -P. 110-118.

23. AMP-activated protein kinase: Ancient energy gauge provides clues to modern understanding of metabolism / B. B. Kahn, T. Alquier, D. Carling, D. G. Hardie // Cell Metabolism. 2005. - Vol. 1. - P. 15-25.

24. AMP-activated protein kinase mediates ischemic glucose uptake and prevents postischemic cardiac dysfunction, apoptosis, and injury / R. R. Russell, J. Li, D. L. Coven et al. // J. Clin. Invest. 2004. - Vol. 114. - P. 495-503.

25. An ectonucleotide pyrophosphatase is one of the main enzymes involved in the extracellular metabolism of ATP in rat C6 glioma / B.Grobben, K. Anciaux, D. Roymans et al. // J. Neurochem. -1999. Vol. 72. - P. 826-834.

26. Antitumor activity of vincristin encapsulated in glucuronide-modified long-circulating liposomes in mice bearing Meth A sarcoma / Y. Tokudome, N. Oku, K. Doi et al. // Biochim. Biophys. Acta. 1996. - Vol. 1279. - P. 70-74.

27. Apomorphine prevents myocardial ischemia/reperfusion-induced oxidative stress in the rat heart / I. Khaliulin, A. Schneider, E. Houminer et al. // Free Radic. Biol. Med. 2004. - Vol. 37. - P. 969-976.

28. Armstrong, S. C. Protein kinase activation and myocardial ischemia/reperfusion injury / S. C. Armstrong // Cardiovasc. Res. 2004. -Vol. 61.-P. 427-436.

29. Arrhythmogenic peroxynitrite-induced alterations in mammalian heart contractility and its prevention with quercetinfilled liposomes / A. Soloviev, A. Stefanov, A. Parshikov et al. // Cardiovasc. Toxicol. -2002. Vol. 2. - P. 129139.

30. Assessing transferrin modification of liposomes by atomic force microscopy and transmission electron microscopy / S. Anabousi, M. Laue, C. M. Lehr et al. // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2005. - Vol. 60. - P. 295-303.

31. ATP-containing immunoliposomes specific for cardiac myosin / W. Liang, T. Levchenko, B. A. Khaw, V. Torchilin // Curr. Drug. Deliv. -2004. Vol. 1. -P. 1-7.

32. ATP diphosphohydrolase is responsible for ecto-ATPase and ecto-ADPase activities in bovine aorta endothelial and smooth muscle cells / K. Yagi, M. Shinbo, M. Hashizume et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1991. -Vol. 180.-P. 1200-1206.

33. ATP-loaded liposomes effectively protect mechanical functions of the myocardium from global ischemia in an isolated rat heart model / D. D. Verma, T. Levchenko, E. A. Bernstein, V. Torchilin // J. Control. Release. -2005. -Vol. 108.-P. 460—471.

34. ATP-loaded liposomes effectively protect the myocardium in rabbits with an acute experimental myocardial infarction / D. D. Verma, W. C. Hartner, T. S. Levchenko et al. // Pharm. Res. -2005. Vol. 22. - P. 2115-2120.

35. Bailey, A. L. Modulation of membrane fusion by asymmetric transbilayer distributions of amino lipids /A. L. Bailey, P. R. Cullis // Biochemistry. -1994. -Vol. 33.-P. 12573-12580.

36. Baines, C. P. Oxygen radicals released during ischemic preconditioning contribute to cardioprotection in the rabbit myocardium / C. P. Baines, M. Goto, J. M. Downey // J. Mol. Cell. Cardiol. 1997. - Vol. 29. - P. 207-216.

37. Balaban, R. S. Cardiac energy metabolism homeostasis: role of cytosolic calcium / R. S. Balaban // J. Mol. Cell. Cardiol. 2002. - Vol. 34. - P. 12591271.

38. Bangham, A. D. Cation permeability of phospholipid model membranes: effect of narcotics / A. D. Bangham, M. M. Standish, N. Miller // Nature. 1965. -Vol. 208.-P. 1295-1297.

39. Bedford, G. K. High-performance liquid chromatographic method for the simultaneous determination of myocardial creatine phosphate and adenosine nucleotides / G. K. Bedford, M. A. Chiong // J. Chromatogr. -1984. Vol. 305. -P. 183-187.

40. Bell, R. M. The cardioprotective and mitochondrial depolarising properties of exogenous nitric oxide in mouse heart / R. M. Bell, H. L. Maddock, D. M. Yellon // Cardiovasc. Res. 2003. - Vol. 57. - P.405-415.

41. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation / R. T. Dean, S. Fu, R. Stocker, M. J. Davies // Biochem. J. 1997. - Vol. 324. - P. 118.

42. Bioenergetic consequences of opening the ATP-sensitive K+ channel of heart mitochondria / A. J. Kowaltowski, S. Seetharaman, P. Paucek, K. D. Garlid // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2001. - Vol. 280. - P. 649-657.

43. Bioenergetic effect of liposomal coenzyme Q10 on myocardial ischemia reperfusion injury / K. Niibori, K. P. Wroblewski, H. Yokoyama et al. // Biofactors. -1999. Vol. 9. - P. 307-313.

44. Botnar, R. M. In vivo magnetic resonance imaging of coronary thrombosis using a fibrin-binding molecular magnetic resonance contrast agent / R. M. Botnar, A. Buccker, A. J. Wiethoff// Circulation. 2004. - Vol. 110. - P. 1463-1466.

45. Brustovetsky, T. Lack of manifestations of diazoxide/5-hydroxydecanoatesensitive K-ATP channel in rat brain nonsynaptosomal mitochondria / T. Brustovetsky, N. Shalbuyeva, N. Brustovetsky // J. Physiol. -2005. Vol. 568. - P. 47-59.

46. Bulte, J. W. In vivo MR tracking of magnetically labeled cells / J. W. Bulte, I. D. Duncan, J. A. Frank // J. Cerebr. Blood Flow Metabol. 2002. - Vol. 22. -P. 899-907.

47. Burnstock, G. The past, present and future of purine nucleotides as signalling molecules / G. Burnstock // Neuropharmacology. -1997. Vol. 36. - P. 11271139.

48. Carden, D. L. Pathophysiology of ischaemia-reperfusion injury / D. L. Carden, D. N. Granger // J. Pathol. 2000. - Vol. 190. - P. 255-266.

49. Cardioprotection by e-protein kinase C activation from ischemia: continuous delivery and antiarrhythmic effect of an co-protein kinase C-activating peptide / K. Inagaki, R. Begley, F. Ikeno, D. Mochly-Rosen // Circulation. 2005. -Vol. 111.-P. 44-50.

50. Caride, V. J. Liposome accumulation in regions of experimental myocardial infarction / V. J. Caride, B. L. Zaret // Science. -1977. Vol. 198. - P. 735738.

51. Catheter-based endomyocardial injection with real-time magnetic resonance imaging / R. J. Ledermann, M. A. Guttmann, D. C. Peters et al. // Circulation. -2002.-Vol. 105.-P. 1282-1284.

52. Cellular energetics in the preconditioned state: protective role for phosphotransfer reactions captured by 180-assisted 31P NMR / D. Pucar, P. P. Dzeja, P. Bast et al. // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 44812-44819.

53. Chelerythrine is a potent and specific inhibitor of protein kinase C / J. M. Herbert, J. M. Augereau, J. Gleye, J. P. Maffrand // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990. - Vol. 172. - P. 993-999.

54. Cold preservation injury in rat liver: effect of liposomally-entrapped adenosine triphosphate / N.Neveux, J. P. De Bandt, E. Fattal et al. // J. Hepatol. -2000. -Vol. 33.-P. 68-75.

55. Comparative sencapsulated in long-circulating, pegylated liposomes (SPI-077) in tumor-bearing mice / M. S. Newman, G. T. Colbern, P. K. Working et al. // Cancer Chemother. Pharmacol. 1999. - Vol. 43. - P. 1-7.

56. Comparison of intermittent warm and cold blood perfusion during hypothermic myocardial preservation on functional and metabolic recovery / T. N. Masters, F. Robicsek, A. A. Fokin et al. // J. Card. Surg. 1999. - Vol. 14. - P. 451459.

57. Cullis, P. R. Effects of fusogenic agent on membrane structure of erythrocyte ghosts and the mechanism of membrane fusion / P. R. Cullis, M. J. Hope // Nature (London). 1978. - Vol. 271. - P. 672-674.

58. Cullis, P. R. Lipid polymorphism / P. R. Cullis, C. P. Tilcock, M. J. Hope // Membrane Fusion / eds. J. Wilschut, D. Hoekstra. NY, 1990. - P. 35-64.

59. Cullis, P. R. Lipid polymorphism and the functional roles of lipids in biological membranes / P. R. Cullis, B. de Kruiff // Biochim. Biophys. Acta. 1979. -Vol. 559.-P. 399-420.

60. Cullis, P. R. Lipid polymorphism and the roles of lipids in membranes / P. R. Cullis, M. J. Hope, C. P. Tilcock // Chem. Phys. Lipids. -1986. Vol. 40, № 2-4.-P. 127-144.

61. Cullis, P. R. Physical properties and functional roles of lipids in membranes / P. R. Cullis, M. J. Hope // Biochemistry of Lipids and Membranes / eds. D. E. Vance, J. E. Vance. -Amsterdam, 1985. P. 25-72.

62. Curtis, M. J. Quantification of arrhythmias using scoring systems: an examination of seven scores in an in vivo model of regional myocardial ischaemia / M. J. Curtis, M. J. Walker // Cardiovasc. Res. 1988. - Vol. 22. -P. 656-665.

63. Daldup-Link, H. E. Targeting of hematopoetic progenitor cells with MR contrast agents / H. E. Daldup-Link, M. Rudelins, R. A. Dostendorp // Radiology. 2003. - Vol. 228. - P. 760-767.

64. Das, M. Matrix volume measurements challenge the existence of diazoxide/glibencamide-sensitive K-ATP channels in rat mitochondria / M. Das, J. E. Parker, A. P. Halestrap // J. Physiol. 2003. - Vol. 547. - P. 893902.

65. Davis, A. Multicentre clinical trials of benzimidazole-carbamates in human cystic echinococcosis (phase 2) / A. Davis, H. Dixon, Z. S. Pawlowski // Bull. World Health Organ. 1989. - Vol. 67. - P. 503-508.

66. Depre, C. Metabolic aspects of programmed cell survival and cell death in the heart / C. Depre, H. Taegtmeyer // Cardiovasc. Res. 2000. - Vol. 45. - P. 538-548.

67. Detection of angiogenesis in vivo by alpha V beta 3 targeted magnetic resonance imaging / D. A. Sipkins, D. A. Cheresh, M. R. Karemi et al. // Nature Med. 1998. - Vol. 4. - P. 623-626.

68. Detection of vascular adhesion molecule-1 expression using a novel multimodal nanoparticles / K. A. Kelly, J. R. Allport, A. Tsourkas et al. // Circ. Res. 2005. - Vol. 96. - P. 327-336.

69. Development and characterization of a novel Cremophor EL free liposome-based paclitaxel (LEPETU) formulation / J. A.Zhang, G. Anyarambhatla, L. Ma et al. // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2005. - Vol. 59. - P. 177-187.

70. Diazoxide-induced respiratory inhibition a putative mitochondrial K(ATP) channel independent mechanism of pharmacological preconditioning / J. Minners, L. Lacerda, D. M. Yellon et al. // Mol. Cell. Biochem. - 2007. - Vol. 294.-P. 11-18.

71. Discrepancy between in vitro and in vivo antifungal activity of albendazole / T. C. Hardin, L. K. Najvar, J. Rizzo et al. // J. Med. Vet. Mycol. 1998. - Vol. 35.-P. 153-158.

72. Effect of ischemic preconditioning and PKC activation on acidification during ischemia in rat heart / W. Chen, W. Wetsel, C. Steenbergen, E. Murphy // J. Mol. Cell. Cardiol. 1996. - Vol. 28. - P. 871-880.

73. Effect of reperfusion late in the phase of reversible ischemic injury. Changes in cell volume, electrolytes, metabolites, and ultrastructure / R. B. Jennings, J. Schaper, M. L. Hill et al. //Circ. Res. 1985. - Vol. 56. - P. 262-278.

74. Efficiency of liposomal ATP in cerebral ischemia: bioavailability features / S. Chapat, V. Frey, N. Claperon et al. // Brain Res. Bull. -1991. Vol. 26. - P. 339-342.

75. Ellens, H. PH-induced destablization of phosphatidylethanolamine-containing liposomes: role of bilayer contact / H. Ellens, J. Bentz, F. C. Szoka // Biochemistry. -1984. Vol. 23. - P. 1532-1538.

76. Enhanced circulation time and antitumor activity of doxorubicin by comblike polymer-incorporated liposomes / H. D.Han, A. Lee, T. Hwang et al. // J. Control. Release. 2007. - Vol. 120. - P. 161-168.

77. Expression of activated PKC°a protects the ischaemic heart, without attenuating ischaemic H+ production / H. R. Cross, E. Murphy, R. Bolli et al. // J. Mol. Cell. Cardiol. 2002. - Vol. 34. - P. 361-367.

78. Folmes, C. D. L. Role of malonyl-CoA in heart disease and the hypothalamic control of obesity / C. D. L. Folmes, G. D. Lopaschuk // Cardiovasc. Res. -2007. Vol. 73. - P. 278-287.

79. Formation of protein kinase Ce-Lck signaling modules confers cardioprotection / P. Ping, C. Song, J. Zhang et al. // J. Clin. Invest. 2002. -Vol. 109.-P. 499-507.

80. Galinanes, M. Assessment of ischemic injury and protective interventions: the Langendorff versus the working rat heart preparation / M. Galinanes, D. J. Hearse // Can. J. Cardiol. -1990. Vol. 6. - P. 83-91.

81. Gels and liposomes in optimized ocular drug delivery: Studies on ciprofloxacin formulations / L.Budai, M. Hajdu, M. Budai et al. // Int. J. Pharm. -2007. -Vol. 343.-P. 34-40.

82. Gordon, J. L. Extracellular ATP: effects, sources and fate / J. L. Gordon // Biochem. J. 1986. - Vol. 233. - P. 309-319.

83. Grover, G. J. ATP-sensitive potassium channels: a review of their cardioprotective pharmacology / G. J. Grover, K. D. Garlid // J. Mol. Cell. Cardiol. -2000. Vol. 32. - P. 677-695.

84. Gunther-Ausborn, S. Inhibition of influenza-induced membrane fusion by lysophosphatidylcholine / S. Gunther-Ausborn, A. Praetor, T. Stegmann // J. Biol. Chem. -1995. Vol. 270. - P. 29279-29285.

85. Halestrap, A. P. Mitochondrial permeability transition pore opening during myocardial reperfusion a target for cardioprotection / A. P. Halestrap, S. J. Clarke, S. A. Javadov // Cardiovasc. Res. - 2004. - Vol. 61. - P. 372-385.

86. Hanley, P. J. K-ATP channels and preconditioning: a re-examination of the role of mitochondrial KATpchannels and an overview of alternative mechanisms / P. J. Hanley, J. Daut // J. Mol. Cell. Cardiol. 2005. - Vol. 39. -P. 17-50.

87. Hausenloy, D. Transient mitochondrial permeability transition pore opening mediates preconditioning-induced protection / D. Hausenloy, A. Wynne, M.

88. Duchen, D. Yellon // Circulation. 2004. - Vol. 109. - P. 1714-1717.

89. Hearse, D. J. Ischemic contracture of the myocardium: mechanisms and prevention / D. J. Hearse, P. B. Garlick, S. M. Humphrey // Am. J. Cardiol. -1977. Vol. 39. - P. 986-993.

90. Hong, R. J. Phase I and pharmacokinetic study of a stable, polyethylene-glycolated liposomal doxorubicin in patients with solid tumors / R. J. Hong, Y. L. Tseng//Cancer. -2001. Vol. 91. - P. 1826-1833.

91. Hope, M. J. Lipid asymmetry induced by transmembrane pH gradients in large unilamellar vesicles / M. J. Hope, P. R. Cullis // J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 262.-P. 4360-4366.

92. Hope, M. J. The role of nonbilayer lipid structures in the fusion of human erythrocytes induced by lipid fusogens / M. J. Hope, P. R. Cullis // Biochim. Biophys. Actu. -1981. Vol. 640. - P. 82-90.

93. Hopwood, A. M. ATP mediates coronary vasoconstriction via P2x-purinoceptors and coronary vasodilatation via P2y-purinoceptors in the isolated perfused rat heart / A. M. Hopwood, G. Burnstock // Eur. J. Pharmacol. -1987. -Vol. 136.-P. 49-54.

94. Horton, R. J. Albendazole in treatment of human cystic echinococcosis: 12 years of experience / R. J. Horton // Acta Trop. 1997. - Vol. 64. - P. 79-93.

95. Houslay, M. D. Dynamics of Biological Membranes / M. D. Houslay, K. K. Stanley. NY: JohnWiley& Sons, 1982. - 330 p.

96. Hypothermia augments reactive oxygen species detected in the guinea pig isolated perfused heart / A. K. Camara, M. L. Riess, L. G. Kevin et al. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2004. - Vol. 286. - P. 1289-1299.

97. Hypothermia preserves function and signaling for mitochondrial biogenesis during subsequent ischemia / X.-H. Ning, C.-S. Xu, Y. C. Song et al. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1998. - Vol. 274. - P. 786-793.

98. Hypothermic preconditioning induces rapid tolerance to focal ischemic injury in the rat / M. Yunoki, S. Nishio, N. Ukita et al. // Exp. Neurol. 2003. - Vol. 181.-P. 291-300.

99. In vitro evaluation of drug release kinetics from liposomes by fractional dialysis / I. Henriksen, S. A. Sande, G. Smistad et al. // Int. J. Pharm. -1995. -Vol. 119.-P. 231-238.

100. In vivo molecular imaging of stretch-induced tissue factor carotid arteries with ligand-targeted nanoparticles / G. M. Lanza, D. R. Abendschein, C. S. Hall et al. // J. Amer. Soc. Echocardiogr. 2000. - Vol. 13. - P. 608-614.

101. In vivo targeting of acoustically reflective liposome for intravascular and transvascular ultrasonic enhancement / S. M. Demos, H. Alkan-Onyuksel, B. J. Kane et al. // J. Am. Coll. Cardiology. 1999. - Vol. 33. - P. 867-875.

102. Influence of phospholipid asymmetry on fusion between large unilamellar vesicles / S. J. Eastman, M. J. Hope, K. F. Wong, P. R. Cullis // Biochemistry. 1992. - Vol. 31, № 17. - P. 4262-4268.

103. Inhibition of membrane fusion by lysophosphatidylcholine / P. L. Yeagle, F. T. Smith, J. E. Young, T. D. Flanagan // Biochemistry. 1994. - Vol. 33. - P. 1820-1827.

104. Interstitial ATP level and degradation in control and postmyocardial infarcted rats / A. I. Kuzmin, V. L. Lakomkin, V. I. Kapelko, G. Vassort // Am. J. Physiol. 1998. - Vol. 275. - P. 766-771.

105. Intracarotidal administration of liposomally-entrapped ATP: improved efficiency against experimental brain ischemia / A.Laham, N. Claperon, J. J. Durussel et al. // Pharmacol. Res. Commun. -1988. Vol. 20. - P. 699-705.

106. Intracellular targeting therapy of cisplatin-encapsulated transferring-polyethyleneglycol liposome on peritoneal dissemination of gastric cancer / H. I Iinuma, K. Maruyama, K. Okinaga et al. // Int. J. Cancer. 2002. - Vol. 99.1. P. 130-137.

107. Is a high glycogen content beneficial or detrimental to the ischemic rat heart? A controversy resolved / H. R. Cross, L. H. Opie, G. K. Radda, K. Clarke // Circ. Res. 1996. - Vol. 78. - P. 482^191.

108. Ischemic contracture begins when anaerobic glycolysis stops: a 31P-NMR study of isolated rat hearts / P. B. Kingsley, E. Y. Sako, M. Q. Yang et al. // Am. J. Physiol. 1991. - Vol. 261. - P. 469-478.

109. Ischaemic preconditioning inhibits opening of mitochondrial permeability transition pores in the reperfused rat heart / S. A. Javadov, S. Clarke, M. Das et al. // J. Physiol. 2003. - Vol. 549. - P. 513-524.

110. Ischemic preconditioning activates AMPK in a PKC-dependent manner and induces GLUT4 up-regulation in the late phase of cardioprotection / Y. Nishino, T. Miura, T. Miki et al. // Cardiovasc. Res. 2004. - Vol. 61. - P. 610-619.

111. Ischemic preconditioning alters real-time measure of 02 radicals in intact hearts with ischemia and reperfusion / L. G. Kevin, A. K. Camara, M. L. Riess et al. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2003. - Vol. 284. - P. 566-574.

112. Ischemic preconditioning of musculocutaneous flaps: effects of ischemia cycle length and number of cycles / T. M. Zahir, K. S. Zahir, S. A. Syed et al. // Ann. Plast. Surg. 1998. - Vol. 40. - P. 430^35.

113. Israelachvilli, J. N. Physical principals of membrane organization / J. N. Israelachvilli, S. Marcelja, R. J. Horn // Q. Rev. Biophys. 1980. - Vol. 13. -P. 121-148.

114. Jaffer, F. A. Seeing within: molecular imaging of the cardiovascular system / F. A. Jaffer, R. Weissleder // Circ. Res. 2004. - Vol. 94. - P. 433-445.

115. Karmazyn, M. The 1990 Merck Frosst Award. Ischemic and reperfusion injury in the heart. Cellular mechanisms and pharmacological interventions / M. Karmazyn // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1991. - Vol. 69. - P. 719-730.

116. Kayawake, S. Association of liposomes with the isolated perfused rabbit heart / S. Kayawake, K. J. Kako // Basic Res. Cardiol. -1982. Vol. 77. - P. 668-681.

117. Khudairi, T. Preservation of ischemic myocardial function and integrity with targeted cytoskeleton-specific immunoliposomes / T. Khudairi, B. A. Khaw // J. Am. Coll. Cardiol. -2004. Vol. 43. - P. 1683-1689.

118. Korchazhkina, O. No effect of aluminium upon the hydrolysis of ATP in the coronary circulation of the isolated working rat heart / O. Korchazhkina, G. Wright, C. Exley // J. Inorg. Biochem. -1999. Vol. 76. - P. 121-126.

119. Kuroiwa, T. Blood-brain barrier disruption and exacerbation of ischemic brain edema after restoration of blood flow in experimental focal cerebral ischemia / T. Kuroiwa, M. Shibutani, R. Okeda // Acta Neuropathol. -1988. Vol. 76. -P. 62-70.

120. Lanza, G. M. Targeted ultrasonic contrast agents for molecular imaging and therapy / G. M. Lanza, S. A. Wickline // Curr. Prob. Cardiology. 2003. - Vol. 28.-P. 625-653.

121. Law, S. L. Characterization of calcitonin-containing liposomes formulations for intranasal delivery / S. L. Law, C. L. Shih // J. Microencapsul. — 2001. -Vol. 18.-P. 211-221.

122. Left ventricular remodeling after myocardial infarction: a corollary to infarct expansion / R. G. McKay, M. A. Pfeffer, R. C. Pasternak et al. // Circulation. -1986. Vol. 74. - P. 693-702.

123. Liang, W. Encapsulation of ATP into liposomes by different methods: optimization of the procedure / W. Liang, T. S. Levchenko, V. P. Torchilin // J. Microencapsul. -2004. Vol. 21. - P. 251-261.

124. Lindblom, G. Cubic phases and isotropic structures formed by membrane lipids-possible biological relevance / G. Lindblom, L. Rilfors // Biochim. Biophys. Acta. 1989. - Vol. 988. - P. 221-256.

125. Lipid polymorphism: The molecular basis of non-bilayer phases / S. M. Gruner, P. R. Cullis, M. J. Hope, C. P. Tilcock // Ann. Rev. Biophys. Biophys. Chem.-1985.-Vol. 14.-P. 211-238.

126. Liposomal atp or NAD+ protects human endothelial cells from energy failure in a cell culture model of sepsis / Y. Y. Han, L. Huang, E. K. Jackson et al. // Res. Commun. Mol. Pathol. Pharmacol. -2001. Vol. 110. - P. 107-116.

127. Liposomal ATP protects the liver from injury during shock / H. Konno, A. F. Matin, Y. Maruo et al. // Eur. Surg. Res. -1996. Vol. 28. - P. 140-145.

128. Liposomally entrapped adenosine triphosphate. Improved efficiency against experimental brain ischaemia in the rat / A. Laham, N. Claperon, J. J. Durussel et al. // J. Chromatogr. -1988. Vol. 440. - P. 455^58.

129. Liposomes, an interesting tool to deliver a bioenergetic substrate (ATP): in vitro and in vivo studies / F. Puisieux, E. Fattal, M. Lahiani et al. //J. Drug. Target. 1994. - Vol. 2. - P. 443-448.

130. Liu, Y. Ischemic preconditioning protects against infarction in rat heart / Y. Liu, J. M. Downey // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1992. - Vol. 263. -P. 1107-1112.

131. Localization of cardiac myosin-specific antibody in myocardial infarction / B. A. Khaw, G. A. Beller, E. Haber, T. W. Smith // J. Clin. Invest. 1976. - Vol. 58.-P. 439-446.

132. Lukyanov, A. N. Increased accumulation of PEG-PE micelles in the area of experimental myocardial infarction in rabbits / A. N. Lukyanov, W. C. Hartner, V. P. Torchilin // J. Control. Release. -2004. Vol. 94. - P. 187-193.

133. Lysolipids reversibly inhibit Ca(2+)-, GTP- and pH-dependent fusion of biological membranes / L. V.Chernomordik, S. S. Vogel, A. Sokoloff et al. //FEBS Lett. 1993.-Vol. 318. - P. 71-76.

134. Madden, T. D. Stabilization of bilayer structure for unsaturated phosphatidylethanolamines by detergents / T. D. Madden, P. R. Cullis // Biochim. Biophys. Acta. -1982. Vol. 684. - P. 149-153.

135. Maeda, H. The enhanced permeability and retention (EPR) effect in tumor vasculature: the key role of tumorselective macromolecular drug targeting / H. Maeda // Adv. Enzyme Regul. -2001. Vol. 41. - P. 189-207.

136. Magnetic resonance contrast enhancement of neovasculature with alpha(v) beta(3)-targeted nanoparticles / S.A.Anderson, R.K. Rader, W.F. Westlin et al. // Magn. Reson. Med. 2002. - Vol. 44. - P. 433-439.

137. Magnetodendrimers a low endosomal magnetic labeling and in vivo tracking of stem cells / J. M.Bulte, T. Duglas, B. Witner et al. // Nat. Biotechnol. 2001. -Vol. 19.-P. 1141-1147.

138. Markin, V. S. On the theory of membrane fusion. The stalk mechanism / V. S. Markin, M. M. Kozlov, V. L. Borovjagin // Gen. Physiol. Biophys. 1884. -Vol. 5.-P. 361-377.

139. Martin, I. Lysophosphatidylcholine inhibits vesicle fusion induced by the NH2-terminal extremity of SIV/HIV fusogenic proteins / I. Martin, J. M. Ruysschaert // Biochim. Biophys.Actu. -1995. Vol. 1240. - P. 95-100.

140. Mechanisms whereby glucose deprivation triggers metabolic preconditioning in the isolated rat heart / M. M. Awan, S. Makaula, S. Forresti et al. // Mol. Cell. Biochem. 2000. - Vol. 211. - P. 111-121.

141. Methods of Enzymatic Analysis / ed.H.-U. Bergmeyer. NY; London: Academic Press, 1965. - 1451 p.

142. Metselaar, J. M. Liposomes for I.V. drug targeting: Design and applications / J. M.Metselaar, E. Mastrobattista, G. Storm // Mini Rev. Med. Chem. 2002. -Vol. 2.-P. 319-329.

143. Mibefradil, a T-type and L-type calcium channel blocker, limits infarct size through a glibenclamide-sensitive mechanism / M. M. Mocanu, S. Gadgil, D. M. Yellon, G. F. Baxter // Cardiovasc. Drugs Ther. 1999. - Vol. 13. - P. 115-122.

144. Mitochondrial potassium transport: the role of the mitochondrial ATP-sensitive K+ channel in cardiac function and cardioprotection / K. D. Garlid, P. DosSantos, Z. J. Xie et al. // Biochem. Biophys. Acta. 2003. - Vol. 1606. - P. 1-21.

145. Miyawaki, H. Ca2+ as a mediator of ischemic preconditioning / H. Miyawaki, M. Ashraf// Circ. Res. 1997. - Vol. 80. - P. 790-799.

146. Miyawaki, H. Calcium preconditioning elicits strong protection against ischemic injury via protein kinase C signaling pathway / H. Miyawaki, X. Zhou, M. Ashraf// Circ. Res. 1996. - Vol. 79. - P. 137-146.

147. Modulation of myocardial function and Ca2+. sensitivity by moderate hypothermia in guinea pig isolated hearts / D. F. Stowe, S. Fujita, J. An et al. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1999. - Vol. 277. - P. 2321-2332.

148. Molecular magnetic resonance imaging of atrial clots in a swine model / E. Spuentrup, B. Fausten, S. Kirzel et al. // Circulation. 2005. - Vol. 111. - P. 1317-1320.

149. Monoclonal antibody to human endothelial cell surface internalization and liposome delivery in cell culture / O. V. Trubetskaya, V. S. Trubetskoy, S. P. Domogatsky et al. // FEBS Lett. -1988. Vol. 228. - P. 131-134.

150. Murry, C. E. Preconditioning with ischemia: a delay of lethal cell injury in ischemic myocardium / C. E. Murry, R. B. Jennings, K. A. Reimer // Circulation. 1986. - Vol. 74. - P. 1124-1136.

151. Myocardial injury: quantitation by cell sorting initiated with antimyosin fluorescent spheres / B. A. Khaw, J. Scott, J. T. Fallon et al. // Science. 1982. -Vol. 217.-P. 1050-1053.N

152. Near-infrared fluorescence microscopy of single -walls carbon nanotubes in phagocytic cells / P. Cherukuri, S. M. Bachilo, S. H. Litovsky et al. // J. Amer. Chem. Soc.-2004.-Vol. 126.-P. 15638-15639.

153. Near-infrared optical sensors based on single-walled carbon nanotubes / P. W. Barone, S. Baik, D. A. Heller et al. // Nat. Mater. 2005. - Vol. 4. - P. 86-92.

154. Oldenburg, O. Mitochondrial K-ATP channels in preconditioning / O. Oldenburg, M. V. Cohen, J. M. Downey // J. Mol. Cell. Cardiol. 2003. - Vol. 35.-P. 569-575.

155. Opie, L. H. Metabolic plasticity and the promotion of cardiac protection in ischemia and ischemic preconditioning / L. H. Opie, M. N. Sack // J. Mol. Cell. Cardiol. -2002. Vol. 34. - P. 1077-1089.

156. O'Rourke, B. Evidence for mitochondrial K+ channels and their role in cardioprotection / B. O'Rourke // Circ. Res. 2004. - Vol. 94. - P. 420-432.

157. O'Rourke, B. Myocardial K(ATP) channels in preconditioning / B. O'Rourke //Circ. Res. -2000. Vol. 87. - P. 845-855.

158. Parratt, J. Pronounced antiarrhythmic effects of ischemic preconditioning / J. Parratt, A. Vegh // Cardioscience. 1994. - Vol. 5. - P. 9-18.

159. Paveli, Z. Liposomal gels for vaginal drug delivery / Z. Paveli, N. Skalko-Basnet, R. Schubert // Int. J. Pharm. 2001. - Vol. 219. - P. 139-149.

160. Pegylated protein encapsulated multivesicular liposomes: a novel approach for sustained release of Interferon / S. P. Vyas, M. Rawat, A. Rawat et al. // Drug

161. Dev. Ind. Pharm. -2006. Vol. 32. - P. 699-707.i

162. Pharmacokinetic and cytotoxic studies of pegylated liposomal daunorubicin / H.Song, J. Zhang, Z. Han et al. // Cancer Chemother. Pharmacol. 2006. -Vol. 57.-P. 591-598.

163. Pharmacokinetics, biodistribution and therapeutic efficacy of doxorubicin encapsulated in STEALTH liposomes / P. K. Working, M. S. Newman, Y. Stuart et al. // J. Liposome Res. 1994. - Vol. 46. - P. 667-687.

164. Pick, U. Liposomes with a large trapping capacity prepared by freezing and thawing of sonicated phospholipid mixtures / U. Pick // Arch. Biochem. Biophys. -1981. Vol. 212. - P. 186-194.

165. Plug and seal: prevention of hypoxic cardiocyte death by sealing membrane lesions with antimyosin-liposomes / B. A. Khaw, V. P. Torchilin, I. Vural, J. Narula // Nat. Med. -1995.-Vol. l.-P. 1195-1198.

166. Poly(ethylene glycol)-coated anti-cardiac myosin immunoliposomes: factors influencing targeted accumulation in the infarcted myocardium / V. P. Torchilin, J. Narula, E. Halpern, B. A. Khaw // Biochim. Biophys. Acta. -1996.-Vol. 1279.-P. 75-83.

167. Powell, S. R. Actin is oxidized during myocardial ischemia / S. R.Powell, E. M. Gurzenda, S. E. Wahezi //Free Radic. Biol. Med. 2001. - Vol. 30. - P. 1171-1176.

168. Preconditioning improves postischemic mitochondrial function and diminishes oxidation of mitochondrial proteins /1. Khaliulin, H. Schwalb, P. Wang et al. // Free Radic. Biol. Med. 2004. - Vol. 37. - P. 1-9.

169. Preconditioning of isolated rat heart is mediated by protein kinase C / M. B. Mitchell, X. Meng, L. Ao et al. // Circ. Res. 1995. - Vol. 76. - P. 73-81.

170. Preconditioning of the heart by repeated stunning: attenuation of post-ischemic dysfunction / Y. Kimura, J. Iyengar, R. Subramanian et al. //Basic Res. Cardiol. 1992. - Vol. 87. - P. 128-138.

171. Preconditioning protects by inhibiting the mitochondrial permeability transition / D. J. Hausenloy, D. M. Yellon, S. Mani-Babu, M. R. Duchen // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2004. - Vol. 287. - P. 841-849.

172. Preparation characterization and in vivo evaluation of 120-day poly (D,L-lactide) leuprolide microspheres / B. H.Woo, J. W. Kostanski, S. Gebrekidan et al. // J. Control. Release. 2001. - Vol. 75. - P. 307-315.

173. Preservation of antimyosin antibody activity after covalent coupling to liposomes / V. P. Torchilin, B. A. Khaw, V. N. Smirnov, E. Haber // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1979. Vol. 89. - P. 1114-1119.

174. Pyruvate prevents cardiac dysfunction and AMP-activated protein kinase activation by hydrogen peroxide in isolated rat hearts / H. Leon, L. L. Atkinson, J. Sawicka et al. // Can. J. Physiol. Pharmacol. 2004. — Vol. 82. -P. 409-416.

175. Ramos, G. Hydatid cyst of the lung: diagnosis and treatment / G. Ramos, A. Orduna, M. Garcia-Yuste // World J. Surg. 2001. - Vol. 25. - P. 46-57.

176. Rapid preparation of giant unilamellar vesicles / M. Alexander, P. M. Biren, T. C. Daniel et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93. - P. 1144311447.

177. Reactive oxygen species precede the epsilon isoform of protein kinase C in the anesthetic preconditioning signaling cascade / E. Novalija, L. G. Kevin, A. K. Camara et al. // Anesthesiology. 2003. - Vol. 99. - P. 421-428.

178. Recombinant HDL-like nanoparticles: a specific contrast agent for MRI of atherosclerotic plaques / J. C. Frias, K. J. Williams, E. A. Fisher et al. // J. Amer. Chem. Soc. 2004. - Vol. 126.-P. 16316-16317.

179. Reduced cytosolic Ca2+ loading and improved cardiac function after cardioplegic cold storage of guinea pig isolated hearts / D. F. Stowe, S. G. Varadarajan, J. An, S. C. Smart // Circulation. 2000. - Vol. 102. - P. 11721177.

180. Reduced reactive 02 species formation and preserved mitochondrial NADH and Ca2+. levels during short-term 17°C ischaemia in intact hearts / M. L. Riess, A. K. Camara, L. G. Kevin et al. // Cardiovasc. Res. 2004. - Vol. 61. -P. 580-590.

181. Role of AMP-activated protein kinase in mechanism of metformin action / G. Zhou, R. Myers, Y. Li et al. // J. Clin. Invest. 2001. - Vol. 108. - P. 11671174.

182. Seddon, J. M. Structure of the inverted hexagonal (Hn) phase, and non-lamellar phase transitions in lipids / J. M. Seddon // Biochim. Biophys. Actu. 1990. -Vol. 1031.-P. 1-69.

183. Sessions, A. Differentiation-related differences in the plasma membrane phospholipid asymmetry of myogenic and fibrogenic cells / A. Sessions, A. F. Horwitz // Biochim. Biophys. Acta. -1983. Vol. 728. - P. 103-111.

184. Siegel, D. P. Energetics of intermediates in membrane fusion: comparison of stalk and inverted micellar intermediate mechanisms / D. P. Siegel // Biophys. J.- 1993. -Vol. 65. P. 2124-2140.

185. Simonis, G. Ischemic preconditioning promotes a transient, but not sustained translocation of protein kinase C and sensitization of adenylyl cyclase / G.Simonis, C. Weinbrenner, R. H. Strasser //Basic Res. Cardiol. 2003. - Vol. 98.-P. 104-113.

186. Stimulation of movement and acrosome reaction of human spermatozoa by PC 12 liposomes encapsulating ATP / M. Skiba-Lahiani, J. Auger, J. Terribile et al. // Int. J. Androl. -1995. Vol. 18. - P. 287-294.

187. Strijdom, H. Nitric Oxide synthase (NOS) does not contribute to simulated ischaemic preconditioning in an isolated rat cardiomyocyte model / H. Strijdom, S. Genade, A. Lochner // Cardiovasc. Drugs Ther. 2004. - Vol. 18. -P. 99-112.

188. Struck, D. K. Use of resonance energy transfer to monitor membrane fusion / D. K. Struck, D. Hoekstra, R. E. Pagano // Biochemistry. 1981. - Vol. 20. -P. 4093-4099.

189. Study of azathioprine encapsulation into liposomes / M. Gulati, M. Grover, M. Singh, S. Singh // J. Microencapsul. 1998. - Vol. 15. - P. 485-494.

190. Swartz, D. R. Cross bridge-dependent activation of contraction in cardiac myofibrils at low pH / D. R. Swartz, D. Zhang, K. W. Yancey // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 1999. - Vol. 276. - P. 1460-1467.

191. Szoka, F. Comparative properties and methods of preparation of lipid vesicles (liposomes) / F. Szoka, D. Papahadjopoulos // Annu. Rev. Biophys. Bioeng. -1980.-Vol. 9.-P. 467-508.

192. Targeted nanoparticles for quantitative imaging of sparse molecular epitomes with MRI / A. M. Morawski, P. M. Winter, K. C. Crower et al. // Magn. Reson. Med. 2004. - Vol. 51. - P. 480-486.

193. The cesium-induced delay in myoblast membrane fusion is accompanied by changes in isolated membrane lipids / M. T. Santini, P. L. Indovina, A. Cantafora, I. Blotta //Biochim. Biophys. Actu. -1990. Vol. 1023. - P. 298304.

194. The effects of ischaemic preconditioning, diazoxide and 5-hydroxydecanoate on rat heart mitochondrial volume and respiration / K. H. H. Lim, S. A. Javadov, M. Das et al. // J. Physiol. 2002. - Vol. 545. - P. 961-974.

195. The Lambeth Conventions: guidelines for the study of arrhythmias in ischaemia infarction, and reperfusion / M. J. Walker, M. J. Curtis, D. J. Hearse et al. // Cardiovasc. Res. 1988. - Vol. 22. - P. 447-455.

196. The lipidic particle as an intermediate structure in membrane fusion processes and bilayer to hexagonal Hn transitions / A. J.Verkleij, C. J. A. van Echteld, J. Gerritsen et al. // Biockim. Biopkys. Acta. -1980. Vol. 600. - P. 620-624.

197. The liposomal formulation of doxorubicin / S. A. Abraham, D. N. Waterhouse, L. D. Mayer et al. // Methods Enzymol. 2005. - Vol. 391. - P. 71-97.

198. The mechanism of liposome accumulation in infarction / T. N. Palmer, V. J. Caride, M. A. Caldecourt et al. // Biochim. Biophys. Acta. -1984. Vol. 797. -P. 363-368.

199. The shape of lipid molecules and monolayer membrane fusion / L. V. Chernomordik, M. M. Kozlov, G. B. Milikyan et al. // Biochim. Biophys. Acta. 1985. - Vol. 812. - P. 643-655.

200. Therapeutic effect of adriamycin encapsulated in long-circulating liposomes on Meth-A-sarcoma-bearing mice / N. Oku, K. Doi, Y. Namba, S. Okada // Int. J. Cancer. 1994. - Vol. 58. - P. 415-419.

201. Tilcock, C. P. S. Calcium induced phase separation phenomena in multicomponent unsaturated lipid mixtures / C. P. S. Tilcock, P. R. Cullis, S. M. Gruner//Biochemistry.-1988.-Vol. 27.-P. 1415-1420.s