Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Коррекция адаптогенами адгезионных взаимодействиймежду клетками при опухолевом процессе

На правах рукописи

БОЧАРОВА ОЛЬГА АЛЕКСЕЕВНА

Коррекция адаптогенами адгезионных взаимодействий между клетками при опухолевом процессе

(14-00-14 - Онкология)

%

О"

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

Москва - 1995 г.

Работа Еылолнока в Онкологическом научном центре имени академика Н.Н.Блоыша Российской академия медицинских наук

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор А.Ю. Барышников; доктор медицинских наук, профессор Б.П. Матвеев.

Официальные оппоненты: Академик РАМН, .докт. мед.наук, профзссор A.A. Воробьев; чхен-корр. РАМН, докт. мед.наук, профессор Л.А. Дурнов; докт. биол. наук, профссор Р.В. Ленская.

Ведущее учреждение - Московский научно-исследовательский онкологический институт им.П.А. Герцена

Защита диссертации состоится 1995 г.

в щ/0* часов на заседании Специализированного совета Д.001.17.01 по защите диссертаций на соискания ученой степени ' доктора наук при Онкологическом научном центре РАМН (UocKBfe, I15478, Каширское шоссе, 24)

С диссертацией можно о? акоииться в библиотеке Онкологического научного центра РАМН

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат медицинских наук C.B. Шишкин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность рромема,

Ослабление взаимной адгвзивности клеток е ткани-мишени, а также дисоаланс иммунитета являются факторами, сопровождающими возникновение и развитие опухолевого процесса в эпителиальных тканях 1Кадагидз9 З.Г., IS8I: Трапезников Н.Н., 1961; weinstein R. et el., 19761. Первое создает местные условия для нарушения тканевого гомеостаза С+ рост, - дефференцировка". по выражению академика Л.М.ШвОада ), второе характеризует нарушение оотего противоопухолевого надзора.

Вместе с тем в литературе появились многочисленные данные о том, что дефпшт иммунной зашиты организма при злокачественном росте, в значительной мере, ооусловлен также недостаточностью адгезионных взаимодействий между иммунными эффекторами и клетками-мишенями, что, в конечном итоге, и приводит к снижению элиминации последних lAitomonte ы., Gloghini А., 1993; К1я 5., Klin N.. 1993; Уопеоа К., Mori S. et al., 1993].

Известно, что на поверхности многих типое клеток присутству-вт молекулы кекклеточноя адгезии ЦСАМ - intercellular acLieslon noieculea), являющиеся, с одной стороны, контактными молекулами интеграции клеток в тканевых системах, а с другой стороны, служащие лигандами для функционально гомологичных молекул лейкоцитарных интегринов (LFA-1 и Мэс-1: CDIla, СГПЬ и CD18), присутствующих на клетках крови и ооеспечиващих адгезию иммунных' эффекторов а клеток-мишеней [Melman G., 1969].

Наряду с этим G. Edelman высказал гипотезу о том, что молекулы межклеточной адгезии являются эволюционными предшественниками сверхсемейства иммуноглооулинов, которое включает в сеоя молекулы клеточной адгезии, антитела класса IgO, рецепторы факторов роста, оелки главного комплекса гистосовместимости класса I, оп-ределяшего в организме активность реакшй клеточного иммунитета.

Вероятно, в данном случае существует не только эволюционная, но и функциональная взаимосвязь, заключавшаяся в том, что молекулы клеточной адгезии, обеспечившие переход одноклеточных организмов к многоклеточным, поддерживание целостность органов и тканей, а также реакции клеточного иммунитета у позвоночных, призваны играть решавшую роль в зашите организма от опухолевой патологии и, в конечном итоге, от тканевой дкссеминаиии, в существенной мере ооеспечиЕая и местное ^тканевое), и оошег тмушюс-; звено

противоопухолевого надзора.

Показано, что применение эндогенны* факторов, специфически нормализующих ослабленную интеграция клеток эпителиальных тканей, з также дефицит лейкоцитарных молекул адгезии, оказывает сдерживающее влияние на развитие опухолевого процессе [Маленков Д.Г., Ыодянова Е.А. и др., 1983; Кетлинский A.C., Воробьев A.A., 1992; Okamoto Ч., Tsuruiaga Т., 1993; ZlelaseK «Г., Arénelos «Г., (9931. В связи с этим наиболее существенной для реализации антиола с томного эффекта представляется одновременная коррекция дефектов местного и общего эшелонов противоопухолевой защиты, на которую, вероятнее всего, следует рассчитывать в случае использования неспецифических агентов.

Особый интерес в данном аспекте вызывают растительные препараты, регулирующие гсмеосгвз а стимулирующие дафферендаровку, которые относятся к груше адаптогенов (женьшень, родиола розовая, элеутерококк, лимонник и др.). Работами последних лет показана нормализация иммунного статуса у больных раком молочной железы, мелаисмой кожи, раком яичников такими препаратами, как женьшень, элеутерококк, китайский лимонник, салэрал, родиола розовая (Купин В.И., Ыусатов В.К., 1989; Купин В.И., Лвтягин В.П. и др., 1992; Купин В.И., Зарадъева S.A., 19921. С другой стороны, в частности, на клетках мышиной меланомы BI6 было обнаружено, что некоторые панаксозкды (биологически активные вешества. выделенные из корней женьшеня) усиливают межклеточную адгезию, повывают степень диф-ференцировки этих клеток, стимулируя процесс меланогенеза, а также ингиоируют клеточный рост cota Т. et al.. 1967].

Следует, однако, отметить, что до настоящего времени существовала проблема биологической стандартизации растительных адаптогенов. Поэтому изучение и применение этих препаратов вызывало трудности, связанные с фармакологической некорректностью их дозирования.

Итак, с одной стороны, имеется обширная литература по проблеме нарушения клеточной интеграции в ткани-мишени. С другой стороны, в. литературе широко освещены вопросы дефицита молекул межклеточной адгезии в иммунных реакциях при опухолевом процессе.

Комплексные исследования, затрагивающие од?">временно.особенности и последовательность нарушения адгезионных межклеточных взаимодействий тканевого и иммунного противоопухолевого надзора, нам неизвестны. Вместе с тем изучение возможности одновременной нормализации этих нарупений с псмоаь» растительных адаптогенов, а

ОШЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность дроолгсмы.

Ослабление взаимной адгезивности клеток в ткани-миле ни, а таюсе дисоаланс иммунитета являются факторами, сопровождающими возникновение и развитие опухолевого процесса в эпителиальных тканях 1Калагидзе З.Г., Ш1; Трапезников H.H., Iától; Weinstein R. et ai., 1976). Первое создает местные условия для нарушения тканевого гомеостаза <"+ рост, - дифференцирсвка". по вираженим академика Л.Ы.Шаоада ь второе характеризует нарушение оошего противоопухолевого надзора.

Вместе с тем в литературе появились многочисленные данные о том, что дефицит иммунной зашиты организма при злокачественном росте, в значительной мере, ооусловлен также недостаточностью адгезионных взаимодействия мевд иммунными эффектораим и клетками-мивенями, что, в конечном итоге, и приводит к снижению элиминации последних lAltomonte П., Gloghlnl А,, 1993; Kin S., Kim N.. 1993; Уопеаа К., Morl S. et al., 1993).

Известно, что на поверхности многих типов клеток присутствуют молекулы межклеточной адгезии ПСАМ - intercellular acueslon QoieculeB), являющиеся, с одной стороны, контактными молекулами интеграции клеток в тканевых системах, а с другой стороны, служащие лигандами для функционально гомологичных молекул лейкоцитарных интвгринов (JLPA-1 и Мас-1: CDiia, CDiib и CD1 в). присутствую-ших на клетках крови и ооеспечивапшх адгезию иммунных эффекторов в клеток-мишеней [Edelman G., 1989).

Наряду с этим о. Edelman высказал гипотезу о том, что молекулы межклеточной адгезии являются эволюционными предшественниками сверхсемейства иммуноглооулинов, которое включает в сеоя молекулы клеточной адгезии, антитела класса IgG, рецепторы факторов роста, оелки главного комплекса гистосовместимости класса I, определяющего в организме активность реакция клеточного иммунитета.

Вероятно, в данном случае существует не только эволюционная, но и функциональная взаимосвязь, заключающаяся в том, что молекулы клеточной адгезии, соеспечившие переход одноклеточных организмов к многоклеточным, поддерживающие целостность органов и тканей, а также реакции клеточного гомунитета у позеонсчшх, призваны играть решающую роль в защите организма от опухолевой патологии и, в конечном итоге, от тканевой диссеминации, в существенной мере ооеспечивая и.местное (тканевое!, и оовее (иммунное-) звено

противоопухолевого надзора.

Показано, что применение эндогенных факторов, специфически нормализуют ослабленную интеграцию клеток эпителиальных тканей, а также дефицит лейкоцитарных молекул адгезии, оказывает сдерживающее влияние на развитие опухолевого процесса [Маленков А.Г., Моденова Е.А. и др., 1983; Кетлинский A.C., Воробьев A.A., 1992; Okamoto í., Tsurunaga Т., 1993; Zielasek J., Archeloa J.. <9931. В связи с этим наиболее существенной для реализации антибластом-ного эффекта представляется одновременная коррекция дефектов местного и общего эшелонов противоопухолевой защиты, на которую, вероятнее всего, следует рассчитывать в случав использования неспецифических агентов.

Особый интерес в данном аспекте вызывают растительные препараты, регулируете гс.чеостаз в стимулирующие дифференцировку, которые относятся к группе адаптогенов (женьшень, родиола розовая, элеутерококк, лимонник и др.). Работами последяих лет показана нормализация иммунного статуса у больных раком молочной железы, меланомой кожи, раком яичников такими препаратами, как женьшень, элеутерококк, китайский лимонник, сапарал, родиола розовая (Кутан В.И., Мусатоа В.К., 1969; Купин В.И., Летягин В.П. и др., 1992; Купив В.И., Зарадьева S.A., 1992). С другой стороны, в частности, на клетках мышиной меланомы BI6 было обнаружено, что некоторые панаксозвды (биологически активные вещества, выделенные из корней женьшеня) усиливают межклеточную адгезию, повышают степень диф-ференцировки этих клеток, стимулируя процесс меланогенеза, а также ингибируют клеточный рост (Ota Т. et al., 1907].

Следует, однако, отметить, что до настоящего времени существовала проблема биологической стандартизации растительных адаптогенов. Поэтому изучение и применение этих препаратов вызывало трудности, связанные с фармакологической некорректностью их дозирования.

Итак, с одной стороны, имеется обширная литература по проблеме нарушения клеточной интеграции в ткани-мишени. С другой стороны, в. литературе широко освещены вопросы дефицита молекул межклеточной адгезии в иммунных реакциях при опухолевом процессе.

Комплексные исследования, затрагивающие одновременно.особенности и последовательность нарушения адгезионных межклеточных взаимодействий тканевого и иммунного противоопухолевого надзора, нам неизвестны. Вместе с тем изучение возможности одновременной нормализации этих нарушений с помощью растительных адаптогенов, а

тагам значимости этой коррекции для процесса образования и роста опухоли представляется актуальным. Последнее дополнит информацию о механизма гашуномодулируизего действия растительных адаптогенов.

Цель исследования: изучить межклеточную адгезию в ткани-миаени и реакциях иммунитета в процесса возникновения в роста опухоли, а токае исследовать возможность н условия использования растительных адаптогенов для коррекция выявленных нарушений.

1) исследовать характер п последовательность нарушений вза-к?«ноЗ адгозпЕгхости клеток в ткани-шшенп и функциональной активности Т-яккфоцитов при спонтанном канцерогенезе у эксперименталь-пих ппзотпнх;

2) определять динагаку взаимной адгезивностп клеток опухоли па разпшс стадиях прогрессия, а таете окрувавдей ее ткани н зкс-прэсслл молекул адгезип па клетках крови у больных пря опухолях сшиелпальпого пропсхоадепая;

3) разработать количественный способ биологического контроля одаптогегаоЗ активности (адаптогенностн) растительных галеновых прэпарзтов;

4) изучить препараты из натуральных и "культуральных" экстрактов ееньпеня и родаолн розовой по способности: а) нормализовать сниеэнный при опухолэобразовании уровень интеграции клеток в ткани-мишени и 0) корректировать на фоне иммунодепрессии иммуно-компетентность Т-лимфопитов;

5) исследовать возмоюгость V условия коррекции указанных параметров в процессе спонтанного канцерогенеза при воздействии экстракта из корневища родаолы розовой и определить профклактичес-, кое влияние таких изменений на частоту возникновения и скорость роста опухолей у экспериментальных гзтвоткчх;

6) используя препарат родиола розовой в послеоперационном периоде у онкологических больных в качестве единственного лекарственного воздействия, изучить возможность нормализации'выявленных нарушений и оценить ее значимость для снижения частоты рецидивов заболевания.

Найма воризваг

В настоящей работе Елервые изучены последовательность и роль

нарушений адгезионных взаимодействий кегэд клетками местного (в ткани-мишени) и ооаего иммунного) эшелонов противоопухолевой зашиты при возникновении и прогрессии эпителиальных опухолей, 'а также определена значимость нормализации этих параметров с помощью растительного адаптогена, что представляет новое направление в изучении механизме опухолевого процесса (канцерогенеза и опухолевой прогрессии) и их коррекции.

Впервые показано, что первоочередное нарушение гомотшкчас-. кой адгезии между клетками ткани в процессе возникновения в ней опухоли, способствующее нарушению регуляции пролкфервтивных процессов, что является необходимым условием для проявления иницки-рованными клетками опухолевого фенотипа, приводит в период опухолевой прогрессии к дефициту экспрессии адгезионных молекул, располагающихся на эффекторах иммунитета и ооеспечивавдих гетерота-пическую адгезию последних к опухолевым клеткам, внося определенный вклад в ускользание опухоли от иммунологического надзора.

Впервые оонарукено, что препараты растительных адаптогенов нормализуют контактные взаимодействия между эпителиальными клетками в ткани и реакциях клеточного иммунитета, ослаолешше пра опухолевом процессе.

Впервые исследовано значение нормализующего влияния экстракта из корневша радиолы розовой на контактные взаимодействия меа-ду клетками для частоты возникновения и скорости роста опухолей на модели спонтанного гепагоканцерогеяеза у экспериментальных животных.

Впервые у сольных опухолями эпителиального происхождения на ранних этапах прогрессии, в частности при поверхностном раке мочевого пузыря, изучена возможность и условия коррекции взаимной адгезивноети клеток ткани-мишени, экспрессии молекул лейкоцитарной адгезии и показателей клеточного иммунитета с помощью препарата родиолы розовой в качестве единственного лекарственного воздействия в послеоперационном периоде и ее значимость для .профилактики рецидивов заболевания.

В раооте получены результаты, свидетельствующие о связи нарушений экспрессии молекул лейкоцитарной адгезии и взаимной адге-зивности клеток ткани при возникновении и прогребай опухолей, а также значимости их коррекции с помощью растительных адаптогенов для частоты возникновения и торможения опухолей. Это позволяет расширить представления о • роли адгезионных взаимодействий мекду клетками как механизма местного и ооаего звеньев противоопухолэ-

вой завдты, а также выявляет клеточный механизм иммуномодулирую-щеп действия адаптогенов.

научно-практическая ЗНАЧИМОСТЬ ШШЬ.

Обнаружение способности растительных адаптогенов усиливать адгезионные взаимодействия между клетками выявляет клеточный механизм их кяяуномодулирувдего действия и может служить обоснованием использования этих препаратов для профилактики и нетоксической терапия онкологических заболеваний.

Возмогяость профилактики возникновения и торможения роста опухолей при использовании экстракта из корневица родиолы розовой в определенных режимах введения, продемонстрированная на модели экспериментальных животных, может сыть положена в основу разработки профилактических мер, направленных на снижение частоты опухолевых патологий у членов "раковых" семей; у людей с повышенным риском заболеваемости, работавших в условиях "вредного" производства; а также рецидивов у онкологических больных.

Выявленная связь нарушений адгезионных межклеточных взаимодействий в ткани-мишени и реакциях иммунитета с ШвШо-морфологическими признаками опухолевого процесса при рака левого пузыря у людей имеет практическое значение для Выбора Тактики лечения на разных этапах опухолевой прогрессий» а Тйога дозволяет наметить новый способ профилактики рецйдайов забоЛе&ШЯ*

Показанная возможность применения прейарата роМоЛы розовой в качестве иммунопрофилактики после грансуретрэЛЬйоЙ резекИйй ДЛЯ снижения рецидивов поверхностного рака Молевого пузыря Могут слу-гить основанием для дальнейших йлйнйческих Исследований с целью разработки методов применения фи эадаптогенов в онкоурологии.

Разработан биологический способ количественного определен адаптогенной активности галеновых растительных препаратов с ис? пользованием культуры клеток простейших эукариот, позволяющий характеризовать указанные препараты определенным числом условных единиц адаптогенности (УЕМ, что поможет устанавливать дозы при использовании этих препаратов в клинической практике. Вместе с тем ' указанный способ биологического контроля адаптогенов может быть использован при производстве этих препаратов для стандартизации их активности.

На защиту выносятся следующие положения.

1. Недостаточность гомотопической адгезия между зпителиаль-

ними клетками в ткани-мишени приводит в период опухолевое прогрессии к дефициту экспрессии адгезионных молекул ка эффекторах иммунитета, обеспечивающих гетеротшшческую адгезию последних к опухолевым клеткам, что вносит свой вклад в ускользание опухоли от иммунологического надзора.

2. Клеточным механизмом имауномодулируюгего действия растительных адаптогенов является нормализация ослабленных при опухолевом процессе контактных взаимодействий между клетками в ткани в реакциях клеточного иммунитета. Нормализация достигается тем существеннее, чем вша адаптогенная активность этих препаратов.

3. Разработанный биологический способ количественного определения адаптогенной активности галеновых растительных препаратов позволяет характеризовать указанные препараты определенным числом условных единиц адаптогенности (УЕА), что обеспечивает с учетом индивидуальной чувствительности к препарату объективное установление дозы при использовании этих препаратов в кщттескоЗ практике. Указанный способ заключается в определении ускорения роста одного из штаммов пекарских дроисей на энергетически бедной среда в присутствии адаптогена.

4. В зависимости от способа применения экстракт из коряеввда родволы розовой вызывает разную степень коррекции межклеточной адгезии в процессе спонтанного канцерогенеза у экспериментальных животных, что играет существенную роль в снижении частоты возникновения и торыокении роста опухолей.

5. Нарушения адгезионных мекклеточных взаимодействий в ткани -мишени и реакциях иммунитета связаны с клинико-морфологическими признаками опухолевого процесса у больных раком мочевого пузыря, что имеет практичес-эд значение для выбора тактики лечения на разных этапах опухолевой прогрессии, а также позволяет разработать новый способ профилактики рецидивов заболевания.

6. Применение препарата родиолы розовой в качестве единственного лекарственного воздействия у ладей после грансурвтральной резекции вызывает коррекцию взаимной адгезивности клеток уроте-лия, экспрессии молекул лейкоцитарной адгезии и клеточного иммунитета. Указанная коррекция проявляется и снимет частоту возникновения рецидивов поверхностного рака мочевого пузыря (Т1С1-2) тем в большей степени, чем короче анамнез боле?чи и чем дольсо длится курс лечения данным препаратом с учетом сохранения к нему индивидуальной чувствительности. Полученные результаты могут быть

положены в основу способа профилактики рецидивов поверхностного рака мочевого пузыря-у больных после удаления первичной опухоли.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, а также четырех глав собственных исследований.

Обзор литературы, состоящий из трех глав, содержит обоснование работы и включает не только анализ результатов исследований других авторов, но и результаты собственных предыдущих исследова-'ний, опубликованных в 19 печатных работах, по проблеме нарушений контактных взаимодействий между клетками ткани-мишени и поиска их коррекции при опухолеобразовании.

Работа изложена на 265 страницах машинописи, содержит 23 таблицы, 13 рисунков; список литературы (185 отечественных и 247 зарубежных наименования) занимает 52 страницы.

Основные экспериментальные исследования выполнены в лаборатории биологических модификаторов противоопухолевого иммунитета НИИ ЭДиТО ОВД РАЫН (рук.- проф. В.И.Купин).

Клинические исследования провели в отделении урологии НИИ клинической онкологии ОНЦ РАМН (рук. - профессор Б.П.Матве^).

Разработка количественного способа биологического контроля адаптогенов была выполнена в лаборатории культур тканей растений ММА им. И.Н.Сеченова (рук.- к.б.н. И.В.Александрова) и в лаборатории регуляцт рекомбинации Института биологии гена РАН (рук.-д.б.н. В.И.Башкиров).

ОёШ 2 ЩШ2М ФСКОРНЫХ ваошх №01 ОШ Шк

Работа выполнена в рамках il .на РАМН по теме: "Биологические модификаторы противоопухолевого иммунитета в онкологии". (Номер Государственной регистрации 01.91.0001778).

Апробация работы проведена на межла'Зораторной научной конференции в ОНЦ РАМН 10 марта 1995 г.

Материалы диссертации доложены на:

- 3-еЙ Украинской конференции медицинской ботаники, г.Киев, 1992;

- 5-м Национальном Конгрессе по раку (5th National cancer Congress), Г.София, 1993.

По материалам диссертации получено положительное решение о выдаче Патента РФ. Опубликовано 10 печатных работ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ йССДВДОВДШИ

Моноклонашзыв антитела а лекарственша средств».

Для выявления различных субпопуляций лимфоцитов периферической крови человека использовали ЫКА серии ИКО (IC0-90, IC0-86, IC0-3I, ICO-I, 1С0-Э1. ICO-GMI, -IC0-I08), любезно предоставленные НШ "МэдБиоСпоктр".

В работе использовали следуюдие препараты растительных адаптогенов:

- настойка из корня хевьяеия (TLnctura ginseng) на 703 спирте в соотношении 1:10 (Фрунзебиофары);

- экстракт родаолы кндкий (Extractan Rhodlolae íluldum) на 40* спирте в соотношении 1:1 (Томский химфаразавод);

- настойки из сухой биомассы каллуской культуры тканей Panax ginseng на 40% спирте в соотношении 1:10 (МП "Гинзенг", г. Павлодар; Новоград-Волынский завод кормовых антибиотиков);

- настойки из сухой биомассы каллусной культуры тканей Panax ginseng на 20» спирте в соотношении 1:10 (Янгеадьский биохимический завод; Бфремовский биохимический завод);

- настойки из сухой биомассы каллусной культур! тканей Rhodlolae rosea на 40$ спирте в соотношении 1:10 (МП "Гинзенг", г. Павлодар; Лаборатория культур тканей растений МЫА им. И.Ы.Сеченова ) ;

- настойка из сухой биомассы каллусной культуры тканей Rhodlolae rosea на 20% спирте в соотношении 1:10 (Лаборатория культур тканей растений КМА им. И.М.Сеченова);

- препарат Ganoderrna Mushroom powder extract {10%-й водный раствор), полученный из Оашой Кореи.

Клеточные линии * ткан».

Лри разработке способа оценки адаптогенной активности препаратов растительного происхождения использовали выбранный в результате предварительных экспериментов штамм пекарских дрожжей Saccharotnycas cemislae, концентрация клеток которого при культивировании. на среде с этанолом удваивается за время, не превышающее 5 часов.

При выполнении опытов на экспериментальных : шогаых материалом исследования слукала ткань печени самцов мышей линии СВА с высокой частотой возникновения спонтанных гепатом а также селезенки Э7ЯХ ЖИВОТНЫХ.

Материалом клинических исследований являлась нормальная и

опухолевая ткань переходноклэточяого эпителия мочевого пузыря, фрагменты окружавдей опухоль слизистой, взятые у 69 больных, оперированных в урологичесш отделении ОНЦ РАМН, а также кровь доноров (10 человек) и Сольных опухолями мочевого пузыря (71 человек). Среди них основную группу составили больные с поверхностной стадией рака мочевого пузыря (РМП) - Т1 (42 человека) разных степеней злокачественности: 61 (16 человек), 02 (15 человек) и 03 (II человек).

Наряду с этим изучены тканевые и иммунные показатели у больных второй Т2 (10 человек) и третьей ТЗ (II человек) стадий РМП, а также - с доброкачественными опухолями МП (переходноклеточная папиллома, II человек) и в норме. В последнем случав для определения тканевых характеристик нормальной слизистой МП использовала фрагменты переходного эпителия МП, взятые у больных раком предстательной железы во время трансуретральной резекции (ТУР) предстательной железы (В человек).

Клшссческак характеристика бодышх.

При проведении иммунопрофилактики препаратом родиолы в исследуемую грушу вошло Ю больных в возрасте от 38 до 80 лет. Средний возраст больных составил 58 лет. Среди них были 8 ¡лужчян п 2 женщины. Длительность анамнеза больных колебалась от 3 месяцев до 19 лет. За это время все больные, в большинстве своем неоднократно, подвергались оперативному лечению, имея до 5 рецидивов, регистрированных в клинике ОКЦ; всем ранее проводилась внут-рипузырная химиотерапия различными препарат? 5. У всех больных был верифицирован треходноклегочдай поверхностный рак мочевого пузыря 1-2 степени злокачественности (01-2), соответствующий стадии ТШхИО. Количество опухолей варьировало от I до множественного поражения мочевого пузыря. Размер опухолей колебался от 0,2 до 2,5 см. Сроки наблюдения за больными составили от 7 до 27 меся7 цев. При этом у каждого больного частоту рецидивов до начала курсов фитоадаптогена (учитывая лишь срог' наблюдения больного в ОНЦ, поскольку некоторые больные начинали лечение в других клиниках) сравнивали с частотой возникновения рецидивных опухолей за время проведения курсов препаратом родиолЫ.

Показаниями для включения больных в исследование были:

1) поражение мочевого пузыря поверхностными рецидивными опухолями;

2) отсутствие в анамнезе лечебного эФБекта в ответ на проводившуюся ранее химиотерапию.

Противопоказаниями являлись:

1) поражение МП поверхностными первичными опухолями;

2) отсутствие индивидуальной чувствительности больного в тесте m vitro к препарату родиолы розовой.

До начала лечения проводилось клиническое, рентгенологическое, ультразвуковс , эндоскопическое обследование больных с целью установления стадии заболевания, количества, размеров и локализации опухолевых образований. Исследовали иммунологический статус сольных, определяли индивидуальную чувствительность к препарату родиолы. Курсы профилактики препаратом начинали после операции ТУР по поводу рецидива, во время которой орали биопсию опухоли с целью гистологического исследования, а также фрагменты опухоли а скружашей слизистой для определения силы межклеточного, сцепления.

Режим и дозы приема адаптогена.

Мышам в питьевую воду добавляли 2% изучаемого фитоадаптоге-на, питье обновляли через день.

Больным препарат родиолы розовой назначали per os 2 раза .в день двухмесячными курсами с перерывом в 2 недели. Длительность курсов приема препарата варьировала у разных больных от 7 до 27 месяцев. Средняя продолжительность иммунопрсхдаахтшш препаратом родиолы составила 14.6 мес. So время проведения курсов профилактики фитоадаптогеиом химиотерапию и БШС- иммунотерапию не назначали:

Показатели иммунитета больных определяли до начала лечения и каждые З-ti месяцев в течение курсов приема препарата.

Частоту возникновения рецидивов г (recurrence rate) рака мо-. чевого пузыря у больных определяли как отяшение числа рецидивов (п) к промежутку времени (t.niecj, за которое они возникали iHoeltl W. et al., 19911:

г ■ n/x 100»

Измерение силы механической дезинтеграции маток из ткани по (юдафшшрованвому методу Исшна.

Поскольку на последних стадиях опухолевой прогрессии, при метастазировании, отдельные клетки свободно отрываются от остальной массы опухоли, распространяются и формируют колонии в различных тканях организма, нас по ходу исследования интересовала сила, которая удерживает отдельные клетки в массе ткани на разных этапах канцерогенеза и опухолевой прогрессии (взаимны адгезивность, или сала механической дезинтеграции клеток из ткани).

Силу, необходимую для механической дезинтеграции клеток из ткана (МДК) определяли с помощ.» микроманипулятора Фонбрюна по методу Комана в модификации (Модяяова Е.А. и др., 1980] и выражали в мг/клегху.

Для каядого исследуемого фрагмента ткани выполняли не менее 50 измерений с после душей статистической обработкой полученных данных. По степени вариабельности результатов судили б неоднородности сцепления отдельных клеток в тканевом фрагменте, иными словами, о гетерогенности ткани. Показателем, характеризующим вариабельность данного признака, является коэффициент вариации, определяешь по формуле:

К « О х 1005 / т , где К - коэффгщиопт вариации: и - средняя величина показателей; в - среднее квадратичное отклонение.

Для того, чтобы охарактеризовать препараты растительных адаптогенов по воздействию на силу механического отрыва клеток от фрагмента ткани печени у ,мыпей с высокой наследственной предрасположенностью к опухолям этой ткани, определяли изменение этого показателя относительно контроля. Этот показатель обознат и как коэффициент стимуляции механической интеграции' клеток в тканевой системе (Кега11;). Его подсчитывали по формуле:

к . Шопыта Лэт1Г «т, • •

""^контроля

: Для подтверждения того, что измеренная ила отрыва соответствовала дезинтеграции из фрагмента ткани одной клетки, а не ее фрагмента или группы клеток, дезинтегрированные клетки п зле проведения измерений- подвергали фиксации, окрашивали по Май-Грюнвальду. Полученный материал дополнительно контролировали в иммерсионной системе микроскопа. Жизнеспособность дезинтегрированных клеток оценивали по исключению трипановой сани.

Определение функциональной активкйсть Т-лтфоцитов.

Функциональную активность Т-лимфоиитов у экспериментальных животных определяли в реакции бласттрансформации лимфоцитов по их способности пролиферировать в ответ иа митоген конканавалин А (Кон А).

Для определения влияния изучаемых препаратов на функциональную активность Т-лимфоцитов вычисляли изменение индекса стимуляции для данного препарата относительно соответствующего контроля

(УСЛОВНО.

, ig препарата

А"1гав -

*ua ig контроля

Определенна экспрессии антигенов на лимфоцитах.

Экспрессию am/генов на лимфоцитах определяли в непрямой реакции иммунофлуоресценшш (РИФ) по стандартной методике, которую учитывали на клеточном цитофлуориметрэ PACScan (Becton Dickinson, США) в гейте лимфоцитов.

Определенна иынуноыэдулнруюсей активности препарата родиолы розовой 1л vitro.

Данный тест использовали для определения индивидуальной чувствительности оольного к фитоадаптогену - экстракту из корневища родполы розовой.

Выделенные из периферической зсрови человека лимхоциты инкубировали в течение одного часа при а?°С в присутствии лиофиизи-рованного препарата родиолы в разных концентрациях. Затем в непрямой ГИФ определяли экспрессию сш-антигена на лимфоцитах.

Вольного считала чувствительным к препарату родиолы. если количество UD3+-лимфоцитов в каком-либо дозовон варианте препарата превышало контрольный уровень не менее, чем на IOS. В соответствии с этим выоирали дозу препарата для назначения данному пациенту. При положительной реакции оВЗ-t-лимфоцитов в ответ на низкую концентрацию препарата оольному рекомендовали суточную дозу, кратную 2 мл (I УЕА); на среднюю - 4 мл (2 УЕА); на высокую - д мл (4 УЕА).

Вместе с тем в работе применяли химические методы количественного определения суммы гликозидов (СГФ) в препаратах женьшеня, а также - фенольных соединений в пересчете на салидрозид (ФС) в препаратах родиолы.

Статистическая обработка давних.

Для обработки данных использовали статистический - пакет STATGRAF. Корреляционный анализ проводили по методу Бравэ- Пирсона.

При клиническом исследовании воздействия препарата Rhodlolae rosea на иммунологические и клинические показате t у больных поверхностным раком мочевого пузыря мы наблюдали определенный сдвиг при сравнении значений двух выборок. Из-за большой вариабельности результатов в каждой из них доказать достоверность различий не удается. Поскольку в данных, исследованиях все варианты были по-

парно связаны меиу собой определенным условием и повторными измерениями "до" а "после" воздействия препарата соответственно у каждого отдельного оольног . то для оценки различий между зависимыми выборками наш оыл использован критерий стьюдента. мы применяла данный критерий в качестве параметрического метода сравнения зависимых выборок уже вэ как тест на достоверность различий между средними выоорок« а для опенки значимости отличия от нуля средней разности в парах.

где S - средняя арифметическая разностей, 0 - их среднее квадратичное отклонение.

В связи с тем, что в вашем случае мы имели дело с малыш выборками» большим разбросом данных и ненормальной формой распределения по факторам, в качестве величины, характеризующей некоторое среднее значение изучаемого признака, мы использовали медиану (М9>.

Для определения силы и направления связи между снижением частоты рецидивов и продолжительность» курсов иммунопрофилактики препаратом Rhodlolae rosea подсчитывали коэффициент ранговой корреляции Спирмена.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. СТАНДАРТИЗАЦИЯ АДАПТОГЕНОВ.

. Практикуемые метода заключаются в изучеши! влияния препарата на показатели физической выносливости экспериментальных аявотных [Александрова И.В., Данилина А.Н. и др., 1982; Крендэзь Ф.П., 19891. Подобные способы трудоемки и экономически не еыгодны из-за необходимости использования лабораторных животных. Поэтому они практически не применяются для маркировки выпускаемых промышленных партий различных фитоадаптогенов.

Нами било выдвинуто предположение,.'что градуировать активность адаптогена можно по уровню клеточной пролиферации на медленно растущих клетках дрожжей. Замедление роста возмогло при создании неблагоприятных условий культивирования, в частности, при замене источника углерода, усваиваемого по пути гликолиза и дающего наибольшие скорости ^оста (глюкоза), на источники углерода с другими путями ассимиляции. К последним относится этанол. 6 этом случае дрожжевая клетка начдаает процессы энергетического семена

с обращенного метаболического пути Эмодена-Мейергофа-Ларнаса, результатом которого является превращение этанола в глюкозу, т.е. глпконеогенез. На этот процесс затрагивается дополнительное время, поэтому снижается скорость роста клеток. Можно ожидать, что добавление адаптогенов в среду с этанолом приведет к ускорению роста клеток, и рассматривать этот фактор как характеристику биологической активности адаптогенов.

На рис.1 представлена функциональная зависимость индекса пролиферации клеток дрожзей на 4-час культивирования от содержания в среде СГО , которая представляет собой биологически активные вещества в препарате биоженьаеня.

Стершим СГФ в дрзпарлгя шжешш^ж •

Рис.1о функционачьная зависимость индекса тол5феращш кдэ-ток дрожжей на 4-й час культивирования от содержания СГФ в среде (препарат сдогеньаеня, С1Ф=0,2Ж; 20%-я спиртовая "астойкаь

Оказалось, что эта зависимость шеет вид обратной параболы.

Она описывается уравнением:

у * а ♦ Ь где у - индекс пролиферации 1р ; х - активность препарата биоженыаень, Ар} . а » 1,86 - значенио индекса пролиферации в "отрицательном" контроле, где активность настойки равна нули. Коэффициент ъ определили методом нелинейной регрессии на основании полученных экспериментальных точек* Таким образом мы получили формулу для определения содержания биологически активных веществ для препарата био-геньиень биологическим путем.

Аналогичная работа была проведена для препарата биородиола. Кы получили в результате такую же формулу, но с другим по величине коэффициентом в знаменателе (рис. 2).

Содержание Фсзлршарап

шяррдиош, мг

Рис.2. Функциональная зависимость индекса пролиферации клеток дрожжей на 4-й час культивирования от содержания ФС в среде (препарат биородаолы, ФС=0,25Ж; 402-я спиртовая настойка).

Проведя дополнительные исследования с препаратами из нату-

ральвых корней, ш показали, что полученные коэффициенты в формулах для гомологичных адаптогенов совпадают.

Проведенная работа позволила на« предложить унифицированный способ определения относительной адаптогеннои активности для разных адаптог8Нов. Принимая за благоприятные условия культивирования рост дрожжей ы среде с глюкозой, за яеблагопроиятные - рост на среде с этанолом, относительную адаптогенность препарата (АааарГ) мы определила как меру повышения индекса пролиферации клеток в среде с этанолом, выраженную в процентах:

-ааар* 1р(+К) - 1р(_К)

где 1р(ехр). 1риК). 1р(_К) - значения индекса пролиферации клеток дрожжей в инкубационной среде с оцениваемой настойкой адапто-гена, в "положительном" и "отрицательном" контроле, соответственно.

Таблица 1.

СРАВНЕНИЕ АКТИВНОСТЕЙ БИОПРЕПАРАТОВ.

ОИРЕДЕЯШШ РАЗЛИЧНЫМИ МЕТОДАМИ.

\Вид пре-\парата АКТИВ^Ч ность преч парата \ Препараты биоженыпеия Препарат биородиолы

I 2 3

Химический контроль % а к т и в н 0 г 0 в е о в а 0,12 СТО 0,23 СГФ 0,21 «С

Биологический контроль 0,13*0,01 СГФ 0,24*0,05 СГФ 0,1910.02 ФС

Аааарх (*) 16,47 35,22 32.16

ОТ® - содержание сужарной глакозидной фракции с»), пред-

ставляюаей биологически активные веиества в препарате оиохень-

<1С - содержание фенол^ных соединений (*) в пересчете на са-лидрозид, представляющих биологически активные вещества в препарате биородиола.

Аа1арг" адаптогенная активность препарата, определенная унифицированным спосооом по вьшбприведенной формуле.

Из таолицы I видно, что содержание оиологически активных веществ (СГФ - в препаратах биоженьшеня и «С - в препаратах родио-лы), определенных химическим и биологическим путем коррелирует с относительной адаптогенностью, определенной унифицированным спосооом, что свидетельствует о его корректности.

Предложенный способ определения адаптогенной активности препаратов растительного происхождения может также иметь применение в случае работы с новыми препаратами, для которых еще не разработаны методы химического определения его активного начала.

Таким образом, разработанный способ позволяет осуществлять простой количественный биологический контроль за активностью различных видов препаратов природных адаптогенов.

2. ПОИСК ПЕРСПЕКТИВНОГО СТИМУЛЯТОРА ТКАНЕВОЙ ИНТЕГРАЦИИ И КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА С УЧЕТОМ АДАПТОГЕШШ АКТИВНОСТИ СРЕДИ РАСТИТЕЛЬНЫХ АМТГОГШОВ.

Задачей данного этапа работы был выбор активного адаптогена, являиаегося наиболее перспективным стимуляторе . ослабленных адгезионных взаимодействий между клетками местного (тканевого) и об-тего (иммунного) эшелонов противоопухолевого надзора.

Для этого в работе, в перв} . очередь, использовали разработанный нами тест, позволяющий количественно определить здаптоген-ную активность препарата (Аайар1;), т.е. его способность адаптироч вать организм к неблагоприятным факторам окружающей среды. Последнее актуально для онкологических оол^-гых при стрессорных воздействиях оперативного вмешательства и химиолучевой терапии.

Показателем стимуляции ьзашоюй адгезивности клеток в ткани полагали увеличение силы механической дезинтеграции клеток из фрагмента ткани у экспериментальных животных ( принимавших препарат адаятог,на в течение недели ), имеющих Еысокую наследственную предрасположенность к опухолям и изначально низкий уровень сцепления между клетками ( Модянова, 1973; Модяно-ва, Бочарова и др., 1980 ). Как известно, усиление взаимной

адгезивности клеток ткани свидетельствует о повышении ее диффе-ренвдрованиости и улучшении регуляции процессов деления.

Косвенным параметром усиления адгезионных взаимодействий между клетками в иммунных реакциях приняли изменение функциональной активности Т-лимфоцитов (способности пролиферировать в ответ на неспешйическиа миг :ген) на фоне иммунодепроссанта (дексаметазо-на) у этих животных. Из литературы известно, что увеличение числа СЮ+лимфоцитов зависит от уровня экспрессии молекул лейкоцитарной адгезии [Giuliani, Splsanl et al., 1993; Cerll, Agea et al., 1993; Kvale, Brandtzaeg, 1993; Schelbentoogen, Kellholz, 19931.

Результаты исследований показали, что наиболее активным по изученным параметрам оказался препарат из натурального золотого корня - родиолы розовой. Он имеет саше высокие показатели адап-тогенности (Aa(lflpt), усиления шт-егращи клеток ткана (Ksmlt) печени мышей СВА, а также степени умножения Т-клеток (А^; у этих животных в ответ на неспецифический митогвн КонД в условиях т-мунодепрессии (таблица 2).

Таблица 2.

СРАВНЕНИЕ ИЗУЧЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ПО АДАПТОГЕННОИ АКТИВНОСТИ- (Aadapt),

ИЗМЕНЕНИЮ ФУШЩОНАЛЬНОП АКТИВНОСТИ Т-ЛШЮШТОВ (А^) И КОЭФФИЦИЕНТУ СТИМУЛЯЦИИ МЕХАНИЧЕСКОЙ ИНТЕГРАЦИИ ТКАНИ (Ks_lt;

Препарат frim Ksmlt

Panax nat. 33 2,6 1.7

Panax cult. 62 3,0 1,9

Rhodlolae nat. 50 3,7 2,2

Rhodlolae cult. 36 2,5 1.6

Ganoderna m. 12 1.4 1.2

Проведенные эксперименты подтвердили предположение о том, что растительные адаптогены усиливают нарушенную при опухолеобра-зовании взаимную адгезивность клеток ткани-мишени.

Достоверная корреляция между этими параметрь л (г=+0,7б+0,2, Р<0,05), позволяет предположить об их взаимосвязи, обусловленной, возможно, участием межклеточной адгезии в их обесг чении.

Это предположение усиливается также полученными данными о

том, что иммунодепрессант дексаметазон, подавляя активность Г-лимфоцитов, снижает силу МДК из ткани. Последнее согласуется с данными литературы о подавлении глюкокортикоидами экспрессии молекул Адгезии, опосредушиш гетеротипические взаимодействия между эффекторами иммунитета и клеточными мишенями [Groves R. et al., 1993; Waag А. et al.t 1993].

Вместе с тем хорошо известно, что при неблагоприятных воздействиях, вызывающих в организме состояние напряжения (стресса), происходит усиление функций гипофиза, сопровоздащееся повышенным выделением кортикотропша и стимуляцией функций корн надпочечников, которая приводят к подав— нню клеточного иммунитета. Корти-котропин усиливает образование и выделение глюкокортикостероидов, что является характерным признаком реакции тревоги при стрессор-ном воздействия на организм (Selye Н, 19521.

Таким образом, стимуляция адаптогеиами ослабленных под воздействием синтетического аналога глюкокортикостероидов дексамета-зона адгезионных взаимодействий между клетками в ткани может объяснить клеточный кеханизи актистрессорного действия этих препаратов.

Итак, зависимость активности клеточных реакций иммунитета от уровня взаимной адгезивности клеток в ткани вполне вероятна. Данная зависимость мокэт бить опосредована цепочкой реакций, связывающих активность молекул гомотопической межклеточной адгезии, обусловливающих уровень интеграция клеток в ткани; и молекул ге-теротипической адгезии, обеспечивающих межклеточные контакты иммунных эффекторов с клетками-мишенями, а отсюда активность клеточного иммунитета.

Вместе с тем положительная корреляция между адаптогенной активностью растительного препарата, а также его способностью усиливать звенья тканевой и иммунной противоопухол вой защиты под-твержает правомочность использования разработанного нами способа определения адаптогенности о использованием культуры клеток простейших еукариот для количественного биологического контроля фгго-адаптогенов. Иными словами, адаптогенность, определенная указанным способом, отражает меру антистрессорного и, в частности, им-муномодулируюаего дествия галеновых растительных препаратов.

Полученные результаты послужили основанием использования экстракта родиолы розовой, обладающего относительной адаитоген-ностью, равной 50%, или 0,5 УЕА (условных единиц адаптогенности) для изучения возможности коррекции адгезионных взаимодействий ме-

жду клетками местной (тканевой) и оовей (иммунной) противоопухолевой защиты и ее значимости для снижения частоты возникновения, а также скорости роста опухолей эпителиального происхождения у экспериментальных животных и лвдей.

3. ВОЗДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА РОДИОДЫ НА ВЗАИМНУЮ АДГЕЗИВНОСТЬ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ И ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ Т-ЛИМШШТОВ У МЫШЕП ВЫСОКОГЕПАТОМНОИ ЛИНИИ.

В предшествующих данной работе исследованиях нами было установлено, что одним из механизмов формирования устойчивости эпителиальной ткани к оцухолеосразованию является повышение степени интеграции клеток ткани на последнем этапе ее дифференцировки. В предрасположенных к опухолям тканях этого не происходит, фи введении тканевоспецифических адгезионных факторов в "критический" период развития высокораковым мышам частота спонтанных опухолей снижалась. Другая схема введения на частоту опухолей не влияла (Маленков А.Г., Бочарова O.A. и др., 19871.

Ш

(мг/кл) 0,14

0,10

Время (мес)

Рис. 3. Воздействие экстракта Rhodlolae rosea при разных схемах введения на величину механической дезинтеграции клеток из печени мышей линии СБА в онтогенезе

у животных без опухоли: ' у животных с опухолью:

.—в—■ - в возрасте до I месяца - •

- с 2-х до 3-х месяцев - • д

- с 7-ми до 8-ми месяцев - ' а -'интактные животные (контроль)- •

—д.

- 2а -

Исследования показали, что у интактных самцов сва сила сцепления гепатоцитов в онтогенезе постепенно снижается. При -введении экстракта родиоли, заматывая первый месяц жизни, т.е. критический период диМеренциро'ки печени (который приходится на 10-15- й день с момента рождения) этот показатель долговременно повышается. Аналогичная ситуация наблюдается и при других схемах введения препарата с условием, что захватывается время первого месяца жизни. При воздействии препарата в течение 3-го месяца, т.е. в критический период завершения развития тимуса, а также во время появления первых спонтанных опухолей (с 7-го по 8-й месяц) сила сцепления гепатоцитов возрастает кратковременно (рисунок 3).

Рис. 4. Воздействие препарата родиоли при разных схемах вве-, дения на функциональную активность Г-лимфоцитов в РБТЛ (1а) у мышей линии СВА в онтогенезе

у животных оез опухоли: у животных с опухолью:

—в— - в возрасте до I месяца. - •

—д._ _ -»_ с 2-х до 3-х месяцев - А

...о.«. - о 7-ми до 8-ми месяцев - ■

- -о-- - интектные животные (контроль) - •

Наряду с этим функциональная активность Т-клеток у интактных животных, т.е. при спонтанном канцерогенезе, имеет свой небольшой пик в возрасте 3-4 месяца, постепенно снижаясь в дальнейшем онто-

генезе. У первых трех групп мшей при воздействии экстракта ро-диолы, захватывая критический период ДпффарохгцкроЕки печени, указанный параметр также возрастает, но оолее сувдственно,. и держится на этом уровне продолжительное время. В тех группах, где препарат вводили минуя критический период развития печени, активность Т-лимфоцитов в РЕТЛ повышается кратковременно (рисунок 4).

В результате оказалось, что в контрольной, четвертой (где препарат вводили в возрасте с 2-х до 3-х месяцев; и пятой (препарат вводили в возрасте с 7-ми до 8-ми месяцев) грушах частота возникновения 'опухолей одаааково высока. Шесте с тем диаметр опухолей в четвертой и пятой группах достоверно вике, чем в контрольной. У животных первых трех групп, принимавших препарат захватывая критический период развития печени, частота возникших опухолей одинаково низка (таблица 3).

Таблица 3.

ВОЗДЕЙСТВИЕ ЭКСТРАКТА RHODIOIAE ROSEA ПРИ РАЗНЫХ СХЕМАХ ВВЕДЕНИЯ НА-ЧАСТОТУ СПОНТАННЫХ ГЕПАТОЫ У ШЛЕЯ ШШИ "ВА.

Груши мышей Количество мышей в группе Количество мышей с опухолями Диаметр опухоли (ММ) Число опухолей/ мышь

I (прием препарата в возрасте до I M9C.) 21 о 0 0

II (прием препарата ¡в возрасте до I мес + с 2 до 3 м) .19 0 0 0

! III (прием препарата в" возрасте до I мес + je 7 до 8 м) 26 1 (3,8*) 2,0 0,04

I IV (прием препарата в возрасте с 2 до 3 м) 22 10 (373t) 2,7*0,1 1,0

Ч (прием препарата в возрасте с 7 до б м) ' 27 7 (31,65) 2,5±0,2 1,3

Контроль 32 | 13 (40,&%) 4,8*0.34 j 1.2 1

Таким образом, стимуляция гомотопической адгейии клеток в ткали, ооладащей высокой наследственной предрасположенностью к опухолям, в заверивший период ее двфференшровки вызывает долговременный эффект усияния тканевой интеграции, что, вероятно, приводит к стойкому усилению экспрессии молекул гетеротипической адгезии, а отсвда - к долговременному повышения функциональной активности Т-лииСошгов. в результате, получено практически предотвращение возникновения опухолей. Цепочка ооратной связи не вполне .эффективна: в других вариантах введения фитоадаптогена (минуя критический период формирования тканевой интеграции) частота возникновения опухолей не изменилась, однако произошло достоверное тор?зовенЕв опухолевого роста.

Синхронные из?.*едання взаимной адгезивности клеток печени и функциональной активности Т-лшгфоцитов при спонтанном канцерогенезе. а такге при его коррекции препаратом родяолы подтверждают предпологение о взаимосвязи этих параметров п предполагают определяйте влияние первого па второй.

Выявленная возмогпость тормогения роста опухолей эпителиального происхондепля при введении препарата родаолы на ранних этапах прогрессии явилась основанием для изучения возможности профилактики рецидивов эпителиальных опухолей , у людей, в частности при раке мочевого пузыря.

4. КСПСЛЪЗОВАШЕ ПРЕПАРАТА РОЖОШ Ш Н0ИШПШ1Ш ШШТОЧНЫХ ВЗАПЗОШСТВ1Ш У БОЛЬНЫХ РАКШ ЯОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ.

4.1. ИБУЕНЕШМ ТКАНЕВОЯ ИНТЕГРАЦИИ КЛЕТОК ПЕРЕХОДНОГО

ЭПИТЕЛИЯ ШЧЕВОГО ЕУЭ1РЯ 1Г ЭКСПРЕССИИ ШЛЕКУЛ АДГЕЗИИ НА КЛЕТКАХ КРОВИ У ЕОЛЬШХ ОПУШШИ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ.

На разшх этапах прогрессия опухолей юочев^го пузыря у людей. Сила изучена дпва-лзка взапяоЗ адгезивности клеток опухоли, окру-сагйэй ткана п экспрессии лейкоцитарных молекул адгезии на клетках крови, Еюшчея показателя кгяушого статуса.

Выло обнаружено, что уг® прл доброкачественной папилломе «о-чосого пузыря взаимная адгезивность клеток опухоли снижена в четыре раза по сравненяэ с нормальной слизистой. С увеличением сте-шэпп злокачественности поверхностной стадам рака мочевого пузыря пается тенденция к дзльтаПзэиу сниеоншо этого показателя. Вместе с тем возрастает ого гетерогенность (таогзда

Таблица 4.

ВЕЛИЧИНА МДК И СТЕПЕНЬ ГЕТЕРОГЕННОСТИ ПЕРЕХОДНОГО ЭПИТЕЛИЯ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СТЕПЕНИ (ЕГО ДИФФЕРЕШШРОВКИ.

Объект ; иссле-| дования Число наблюдений Величина МДК в опухоли х мг/кл (Ш±0) Гетерогенность опухоли (коэф. вариации), % —1 Величина-МВК в окружающей ткани, мг/кл (Й*0) -- Гетероген--ть окрук. ткани (к-т вар-ции), %

Норм, слизистая мочевого пузыря 6 0,407*0,04 9,7*0,4

Переходно-клеточная папиллома (доброкач. опухоль) II 0,104*0,G23 18,7*2,6 0,280*0,026 9,5*0,2

Переходно-клеточный рак I ст. злокачест. II 0,104*0,02 19,2*2,0 0,270*0,03 12,4*0,7

_ И _ II ст. злок. (среднедиф.) II 0,097*0,02 20,6*2,5 0,268*0,033 13,9*0,8

_ и _ III ст. злок (низкодиф.) 9 0,089*0,02 20,3*2,2 0,221*0,036 14,9*0,8

Аналогичные изменения происходят и в окружающей слизистой, где межклеточное сцепление достигает особенно низких значений при третьей степени злокачественности (0,221 мг/кл), что составляет менее 60Ж от этой величины в нормальной слизистой.

Как было показано ранее на линейных мышах, в разной степени предрасположенных к наследственным опухолям, при снижении этого параметра более, чем на 405, по сравнению с его величиной для устойчивой линии, частота спонтанных опухолей резко возрастает.

Полученные результаты о снижении величины межклеточного сцепления более, чем на 40», при поверхностной форма рака МП третьей степени злокачественности согласуются с клиническими данными о том, что последняя имеет исключительно неблагопрятный прогноз.

Уровень тканевой интеграции клеток опухоли снижается с увеличением глубины инвазии в мышечный слой стенки мочевого пузыря (Табл.5), причем разрыв в большей мере,наблюдается между стадиями

Т1 и Т2. Гетерогенность опухоли по этому показателю также резко увеличивается» начиная со стадии Г2. Окружающий уротелиИ также характеризуется снижением тканевой интеграции и повышением гетерогенности. Следует оту тить, что статистически значимые отличия взаимной адгёзивности клеток в окружашей ткани по сравнению с нормальной слизистой, наблюдали, начиная со стадии 12. Последнее предполагает наиболее существенные функциональные нарушения слизистой органа при инвазии опухоли в мышечную стенку.

Таблица 5.

ВЕЛИЧИН! МДК И СТЕПЕНЬ ГЕТЕРОГЕННОСТИ ПЕРЕХОДНОГО ЭПИТЕЛИЯ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ СТАДИЯХ'РАСПРОСТРАНЕННОСТИ ОПУХОЛЕВОГО ПРОЦЕССА.

Стадия процесса Число наблюдений Величина МДК в опухоли* мг/кл (га*о) Гетерогенность опухоли (коэф. вариации), % Величина МДК в окружающей ткани, мг/кл <т*о) Гетероген--ть окруж. ткани (к-т ввр-ции), *

TI (рак в пред-х сли-зист.обол-ки 31 0,099*0,033 19,8*1,2 0,253*0,045 17,5*0,7

Т2 (неглубокая инвазия в мышечный слой) 10 0,081*0,038 25,3*1,9 0,198*0,032 (Р<0.01) 19,0*1,0

ТЗ (глубокая инвазия в мышечный слой) II 0,079*0,04 27,1*2,9 0,188*0,027 19,2*1,8

Также было установлено, что по мэре увеличения степени злокачественности, а также стадии заболевания нарушения клеточного* иммунитета усугубляются: снижается число Т-лимфоцитов (CD3), увеличивается дисбаланс хелпарно-супрессорного соотношения (CD4/8), показатели' гуморального иммунитета изменяются незначительно. Наряду с этим уменьшается уровень антигенов, характеризующих экспрессию лейкоцитарных молекул адгезии (CDlib и CD18). Причем при поверхностной форме рака с увеличением степени злокачественности намечается лишь тенденция к снижению этих показателей, а при переходе к стадия Т2 п ТЗ эти параметры достоверно уменьшаются в сравнении с донорами (таблица 6).

Таблица 6.

ИММУННЫЙ СТАТУС БОЛЬНЫХ ПРИ РАКЕ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ.

С1 - переходаоклеточвый рак 1-й степени злокачественности С2 - - " - 11-Й степени злокачественности

СЗ - - " - III-й степени злокачественности

Т1 - рак в пределах слизистой оболочки мочевого пузыря 12 - начало инвазия в мышечный слой мочевого пузыря ТЗ - глубокая инвазия в конечный слой мочевого пузыря

1* количество больных

переходноклат'очная пашшгама достоверные различия с донорами, Р<0,01 4) достоверные различия с донорами, Р<0,05

Таким образом, полученные результаты о существенном повышение гетерогенности опухоли при инфильтрации мышечного слоя мочевого пузыря на стадиях Т2 и ТЗ, т.е. появление большого числа неоднородных по взаимной адгезивности клеток, в'том числе пула с ослабленными взаимодействиями, создает местные условия для повышения темпов пролиферации и является важным фактором для реализации инвазивного роста. Поэтому достоверное ослабление тканевой интеграции окружающей опухоль слизистой, экспрессии лейкоцитарных молекул адгезии и клеточного иммунитета при инвазивном росте опухолей МП могут служить обоснованием расширения показаний к цист-эктомии при инвазшш формах рака, а также рекомендации к орга-

носохранявдему лечению только в случав поверхностной стадии рака МП у людей.

4.2. КОРРЕКЦИЯ ПРЕПАРАТОМ РОДИОЛЫ ВЗАИМНОЙ АДГЕЗИВНОСТИ КЛЕТОК УРОТЕЛИЯ И ИШУННОГО СТАТУСА У БОЛЬНЫХ ПОВЕРХНОСТНЫМ РАКОМ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ. У больных с разный по длительности анамнезом мы наблюдали

различное отклонение изучаемых показателей от нормы (рис.5). %

Рис. 5. Изменение изучаемых параметров в зависимости от продолжительности анамнеза заболевания.

1 о - сила МОК в * от нормы

2 в - экспрессия (ЛИ 1Ь зд- экспрессия СБ18

4 д - число СВЗ+лимфоцитов

5 о - СБ 4/8-соотношение -"Из Рис.5 видно, что меньший по длительности анамнез влечет

за собой менее глубокие их отклонения от нормы по сравнению с более продолжительным, и наоборот. В данном случав обнаружена достоверная отрицательная корреляция мевду длительностью анамнеза и изучаемыми показателями. Между самими параметрами наблюдается достоверная положительная корреляция.

В результате приема больными препарата родиолы в качестве единственного лекарственного воздействия после трансуретрвльной резекции мочевого пузыря было обнаружено, что относительные изменения изучаемых параметров зависят от длительности курсов иммунопрофилактики указанным препаратом (рис.6). *

20 +0 60 80 100 120

Броня (*)

Рис. 6. Зависимость относительного изменения изучаемых параметров (в X) от длительности курсов профилактики препаратом родиолы (в % от продолжительности анамнеза).

1 о - изменение силы МДК

2 о - экспрессии CDi1b .

3 д - экспрессии CD18

4 д - числа СЮ+лимфоцитов

5 а - CD 4/8-соотношения

6 в - частоты рецидивов

При этсм с увеличением времени применения фитоадаптогена изменения этих показателей сначала нарастай, а затем практически выходят на плато, доказывая тем самым нормализующее действие этого препарата.

Кроме того, нормализация взаимной адгезивности клеток уротв-лия опережает по времени нормализацию экспрессии молекул лейкоцитарной адгезии и показателей клеточного иммунитета. Достоверность всех пиков доказана на I уровне значимости (Р*0,5).

&ксте с тем снижение частоты рецидивов (кривая 6) и дли-

тельность курсов иммунопрофилактики имеют также достоверную оо-ратную связь: коэффициент ранговой корреляции Спирмена в данном случае равен - 0,80.

Следует обратить г имание, что кривая снижения частоты рецидивов пересекает кривые изменений клеточного иммунитета в выспей точке их колебаний, т.е. практически при нормализации этих показателей. Судя по графику, именно в этот период достигается существенное снижение (на 80-90$) частоты восникновеиия рецидивных опухолей. Подобный эффект наступает при условии, что курсы применения препарата родаолы длятся не менее 60% времени анамнеза данного больного.

В таблице 7 приведены величины, характеризующие средние значения изучаемых признаков для всей группы сольных до и после применения препарата родиолы. Из таблицы следует, что данный препарат (среднее время курсов приема - 14,6 иэс) вызывал у больных достоверное повышение взаимной адгезивности окрукавдего опухоль уротелия. Возрастали до нормы показатели лейкоцитарных молекул адгезии, наблюдалась достоверная нормализация клеточного иммунитета. При этом средняя частота рецидивов снизалась в 2,4 раза.

Однако из анализа полученных данных следует, для того чтобы получить существенные клинические результаты, необходимо соблюсти следующие условия: больной должен быть иммунологически чувствителен к препарату родиолы; длительность курсов применения препарата должна соответствовать периоду, равному не мэйое в0% от продолжительности анамнеза; за этот период больной не должен приобрести иммунологическую резистентность к данному препарату, иначе последняя не позволит выполнить временабе условие применения родаолы.

Представленные результаты* по нашему мнению, могут оыть положены в основу разработки способа иммунопрофилактики рецидивов, поверхностного рака МП у больных с коротким анамнезом, например, сразу пйсле удаления первичной опухоли. Последнее представляется перспективным в плане дальнейших рендомизированных исследований на большом контингенте больных с учетом отдаленных результатов.

Полученные результаты клинических исследований подтверждают предположение об определяющем воздействии адгезионных взаимодействий в ткани на таковые в иммунных реакциях и могут с этих позиций объяснить один из механизмов ускользания опухоли от иммунологического надзора.

Таблица 7.

ИЗМЕНЕНИЕ СИЛЫ МЕХАНИЧЕСКОЙ ДЕЗИНТЕГРАЦИИ КЛЕТОК (МДК) УРОТЕШ И ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУННОГО СТАТУСА У БОЛЬНЫХ (10 ЧЕЛ1) ПОВЕРХНОСТНЫМ РАКОМ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ (T1G1-2), ПРИНИМАВШИХ ПРЕПАРАТ Rhodlolae rosea (R.r.), В СРЕДНЕМ, В ТЕЧЕНИЕ 14,6 МЕС.

Показатели До применения R.r. (Me) После применения R.r. (Me) . средняя арифметическая разностей ( ±0 )

а н т и г л е и H м П ф 0 0 л ц 0 и ж т и ы 9 <*> л ь H ы в CD3 57,0 65,0 10,4±2,8 Р<0,01

CD4 28,5 ' 86,0 6,Ь»3,9 Р<0,01

era . 25,0 28,0 2,9*1,2

CE4/CD8 1,13 1,30 U,Ui3±U,UIU "»<0.01

HLA-DR 10,0 14,0 3,3*3,02 Р<0.05

CD22 5,0 8,5 з.ы.оь Р<0.01

CD11b 6,0 14,0 7,Ы,Ь Р<0.01

GDI8 37,0 60,0 ilb.Vib.ti Р<0,01

и " а к (мг/кл) опухоль 0,107 0,105 0,001*0,014

окруж: слизистая 0,242 0,325 0,037*0,022 . Р<0,01

частота возникновения рецидивов (Г. X) 18,0 7,5 13,1*10,7 Р<0,01

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Нарушение взаимной адгезивно ста инициированных клеток эпителиальных тканей является результатом промоторного действия наследственных факторов а также влияния внешней среды (курение, загрязнение атмосферы, работа во вредных условиях производства, нервные стрессы) и обеспечивается дефицитом, во-первых, тканеспеци-

<1аческих (вероятно, из семейства кадхеркнов) и, во-вторых, -нес-пециЩческих (из семейства 1САМ сверхсемейства иммуног/.-булшов) факторов гомотопической адгезии.

Дефицит тканеспеи фических факторов адгезии ограничивает, возможно, один из центральных механизмов тканевой противоопухолевой запиты, создавая местные условия для выхода высокодифференци-рованных, интегрированных в ткань клеток из 00-стадии клеточного цикла и активизации процессов деления, что приводит к дисдиффе-ренцировке, а в конечном итоге, к нарушении гомеостаза ткани (ее качественного и количественного состава). Таким образом преодолевается один нз механизмов тканевого ЭЕелона противоопухолевого надзора.

Дефицит гистонеспецифяческих факторов гомотипической адгезии (1САИ) сшиает. в своп очередь, экспрессии соответствуших лигая-дов из семейства лейкоцитарных интегринов (ЬРА-1, Иас-1) на поверхности иммунных эффекторов, что, вероятно, по цепочке обратной связи приводит к недостаточности взаимодействий молекул из семейства 1СА11 с двумя их лигандамя, сводя к минимуму элиминацию клэток-шгзэней макрофагами, нейтрофиллага, натуральным! киллера-га, активировашшют лимфоцитами. Таким образом вносится вклад в экранирование опухолевой прогрессии в данной ткани от иммунной реактивности организма, т.е. преодолевается, во-вторых, по времени, общий (кмдушшй) механизм противоопухолевого надзора.

Следовательно, цолекулы межклеточной адгезии,. сыгравшие центральную, определяемую роль в эволюционном процессе «ивой материи при переходе одноклеточных организмов к многоклеточным, а далее - при возникновении адаптивной иа«унной системы позвоночных швотных, и пгэя болызоэ значение в поддерзашш высокой дифферен-цированности органов и тканей, а также целостности всего организма, вероятно, удергиваят последний от обратного процесса - распа-. да, к чему в конечном итоге и приводит опухолевая патология.

Недостаточность наиболаэ эволюционно древних молекул гомотопической адгезии, осусествляюаях интеграцию клеток в тканевую систему, влечет за собой разрыв цепочки реакций, обеспечивающих один пз протекторных ентибластогяшх механизмов, приводя к ограничению как местной, так п обцей противоопухолевой задата, способствуя возникновению я беспрепятственно?^ распространению неоплазм.

Нормализация взакшой адгезивноста кд&тоя в тка}Ш приводит к снигзшда дефицита межлаточных взаимодэСствпз в ишунных реакци-

лх, восстанавливая звенья местной и оошей противоопухолевой защити, и вызывает противоопухолевый эффект.

Таким образом, на основании данных литературы, а также собственных предыдущих и настоящих исследований высказывается представление о том, что адгезионные взашодействия между плетками являются одним из существенных механизмов тканевого (местного) и иммунного (общего) противоопухолевого надзора, с позиций которого можно объяснить основные свойства опухолевого процесса: потерю местного контроля пролиферации, анаплазию, инвазию, метастази-рование и дефицит иммунологического надзора. Коррекция их нарушений вероятна и предпочтительна, по нашему мнению, при использовании неспецифических нетоксических агентов, в частности, адапто-генов. Последнее способствует нормализации гомеостаза окружающей опухоль ткани, а также стимуляции противоопухолевого иммунитета, | обосновывая целесообразность применения адаптогенов в противоопухолевой терапии.

Полученные в данной работе результаты дают возможность определить новые подходы к профилактике возникновения'и распространения опухолевого процесса, основанные на предотвращении нарушения контактных взаимодействий между клетками тканевого и иммунного эшелонов противоопухолевого надзора с помощью нетоксическях растительных препаратов адаптогенов. Разработка таких методов позволила бы снизить риск заболеваемости у пробавдов, при раооте ладей в условиях "вредного" прслзводства, а также - рецидивирования уже возникших опухолевых патологий.

Настоящая работа может явиться основанием для дальнейшего изучения нарушений адгезионных взаимодействий мевду клетками как ключевого механизма опухолевого процесса.

ВЫВОДЫ

I. В настоящей работе высказано представление о том, что нарушение межклеточной адгезии является механизмом опухолевого процесса (канцерогенеза и опухолевой прогрессии), с позиций которого можно объяснить основные свойства рака: потерю местного (тканевого) контроля пролиферации, анаплазию, инвазию, метастазироващю и дефицит иммунологического надзора.

А именно, нарушение гомотопической адгезии между клетками эпителиальной ткани при возникновении в ней опухоли, способствующее наруиению регуляции лролиферагивных процессов и дисдифферен-

цировке, достигает своего крайнего выражения на последних этапах опухолевой прогрессии, обусловливая процессы инвазии и ме.астази-рования. Недостаточность межклеточной адгезии в; ткани-мишени приводит, в период опухолев й прогрессии к дефициту экспрессии адге-зиошшх молекул на эффекторах иммунитета, обеспечивающих гетеро-типическую адгезию последних к опухолевым клеткам, что вносит свой вклад в ускользание опухоли от иммунологического надзора.

2., Выявлен клеточный механизм иммуномодулируода го действия растительных адаптогенов: показано, что адаптогены нормализуют ослабленные при опухолевом процессе контактные взаимодействия «езду эпителиальными клеткагя! в ткани и реакциях клеточного иммунитета тем существеннее, чем выше адаптогенная активность этих препаратов.

3. Разработан биологический способ количественного определения адаптогенной активности галеновых растительных препаратов, позволякдиЯ характеризовать указанные препараты определенным числом условных единиц адаптогешости (УЕА), что обеспечивает с учетом индивидуальной чувствительности к препарату объективное установление дозы при использовании этих препаратов в клинической практике. Указанный способ заключается в определении ускорения роста одного из штатов пекарских дрогжей на энергетически бедной среде в присутствии'адаптогена. Предложенный способ биологическо-

I го контроля фатоадаптогенов может быть использован при производстве этих препаратов для стандартизации их активности.

4. Продемонстрирована возможность п определены условия коррекции мекхлеточной адгезии в процессе спонтанного канцерогенеза экспериментальных кявотиых при воздействии экстракта из корневища родиолы розовой. Коррекция играет существенную роль в снижении частоты возникновения и торможении роста эпителиальных опухолей:

а) введение препарата родаолы в критические период заверив-, ния дифференцировки ткани печени в раннем постнатальном онтогенезе долговременно повышает взаимную адгезивность гепатоцитов, функциональна активность Т-лш.!фоцитов и практически предотвращает возникновение споитаинш: гепатом во второй половине жизни животных ( 1,355 - частота возникновения спонтанных гепатом в опыте; 41» - в контроле);

б) введение препарата родаолы вне критического периода диф-ференцировкп органа (в период завершения развития тимуса, а также на начальных этапах опухолевого роста) кратковременно повышает еыжэобозначенные параметры, частоту спонтанных опухолей не сни-

хает, однако приводит к достоверному торможению опухолевого роста <2,7 - 2,5+0,3 мм ,- диаметр опухолей в опыте; 4,8+0,3 мм - в контроле;.

Полученные результаты могут служить основанием для способа профилактики опухолеобразования у пробавдов, у работников "вредных" производств, а гакке рецидивов у онкологических больных.

5. Установлена связь нарушений адгезионных межклеточных взаимодействий в ткани-мишени и реакциях иммунитета с юинико- морфологическими признаками опухолевого процесса у больных раком кочевого пузыря, что имеет практическое значение для выбора тактики лечения на разных этапах опухолевой прогрессии, а также позволяет разработать новый способ профилактики рецидивов заболевания.

5.1. Обнаружено, что взаимная адгезивность клеток доброкачественной опухоли (переходаоклеточнзя папиллока) ЕЧетвэро снижена в сравнении со здоровым уротелием. При этом окружающая слизистая изменена по этому параметру незначительно, так яе как экспрессия молекул лейкоцитарной адгезии (CD11b и CD18), обаее количество Т-клеток (CD3+лимфоцитов) и хелперно-супрессорное соотношение (CD4/CD8).

5.2. Снижение взаимной адгезивности клеток опухоли при поверхностном раке третьей степени злокачественности (ТЮЗ) достигает более 40» от уровня здоровой слизистой, что соответствует "выходу" ткани за предел порога устойчивости к опухолэобразованшз (определенного эксперимен?ально) и может объяснить неблагоприятный клинический прогноз для этих больных.

5.3. Показано, что на этапе прогрессии, характеризущейся началом инвазии опухоли в мышочный слой органа (Т2-стадия), происходит статистически достоверное снижение взаимной адгезивностп окруяашей слизистой, возрастание гетерогенности опухоли по этому показателю, снижение экспрессии молекул лейкоцитарной адгезии (CD11Ь и CD18), а также общего количества Т-клеток (СБЗ+лимфоцитов) и хелперно-супрессорного соотношения (CD4/CD8). Полученные результаты могут служить дополнительным обоснованием для расширения показаний к цистэктомии и рекомендаций к органо-сохраняицему лечению лишь при поверхностном раке мочевого пузыря.

6. Показана возможность коррекции взаимной адгезивности клеток уротелия, экспрессии молекул лейкоцитарной адгезии и клеточного иммунитета с помощью препарата радиолы розовой в качестве единственного лекарственного воздействия у людей после трансуретральной резекции. Указанная коррекция проявляется и снижает час-

тоту возникновения решшивов поверхностного рака мочевого пузыря (T1G1-Z ) тем в большей степени, чем короче анамнез боле: ы и чем дольше длится курс лечения данным препаратом с учетом сохранения к нему индивидуальной чувствительности. У больных с разным по длительности анамнезом, принимавших препарат, в среднем, в течение 14,6 мес. частота рецидивов после лечения снизилась в ¿,4 раза t?,5S), по сравнению с таковой до лечения (18*). Полученные результаты могут оыть положены в основу способа профилактики рецидивов поверхностного рака мочевого пузыря у больных после удаления первичной опухоли.

СПИСОК ПЕЧАШД РАБОТ ПО ТЕЫ2 ДИССЕРТАЦИЯ

1. Бочарова O.A., Киркин А.Ф. Органы и хлетки иммунной системы. Малый практикум по иммунологии. Методическое пособие, 4.1. Ы.. Изд-во МГУ, 1966. 37 стр.

2. Бочарова O.A., Александрова И.В. Контактотропное действие препарата биоженьвень. Сборник докладов 1-й школы-семинара "Регуляция тканевого гомеостаза. Не токсическая профилактика и терапия хронических патологий". Тбилиси, 1987, стр. 6-II.

3. Бочарова O.A.. Томилина Н.Ю., Бодрова Н.Б., Грубова Е.А. Сравнительное изучение биологической активности природных адаптогенов и их аналогов из биомассы, выращенной In rltro. Тезисы III-ей Украинской конференции по медицинской ботанике, 1ЭЭ2, Киез, стр. 20.

4. Бочарова O.A.. Куренная О.Н., Носиков К.В., Серебрякова Р.В., Бодрова Н.Б., Александрова И.В., Зацепина Г.Н. Способ биологического контроля адаптогенов. Заявка на патент N 50332209/13 с приоритетом от 13 марта 1992 г., положительное реиение от 20 октября 1992 г.

5. Бочарова O.A.. Куренная О.Н., Серебрякова Р.В., Бодрова Н.Б. Новый способ биологического тестирования препаратов адаптогенов. Биотехнология, 1993, N 8, стр.28-34.

6. ВосЬягота О., Serebryalcova R. Experimental prophylaxis of ЬвгебДЛогу tumours in mice by Rhodlolae гоэеа administration. -Abatracгз oí 5-th National Cancer Congress, October 7-9 1993, Soria, Bulgaria.

7. Бочарова O.A., Серебряхова P.B. Испытание препаратов растительного проясхоздешя для профилактики и нетоксической терапии онкологических заболеваний на экспериментальных иоде лях. Вестник

РАМН. N2. !994, стр. 52-57.

8. Бочарова O.a., Серебрякова Р.В., Бодрова Н.Б. Профилактическая эффект ftoodlolae rosea на спонтанное опухолеобразование в пэчени у высокораковсй линии мышей. Вестник РАМН, 1994, Н 5, стр. 41-43.

9. Бочарова O.A., Серебрякова Р.В., Голубева В.А., Фигурин K.m., Бухарнвн Б.В., Бодрова Н.Б., Матвеев Б.П., Барышников A.D. Изменение механической интеграции клеток переходного эпителия и юмунвого статуса больных опухолями мочевого пузыря. Урология и нефрология, 1994, N 3, стр.27-30.

10. Бочарова O.a., Матвеев Б.П., Барышников A.D., Фигурин K.m., Серебрякова Р.В., Бодрова Н.Б. Влияние экстракта Rüodlolae rosea на частоту рецидивов поверхностного рака мочевого пузыря у людей, урология и нефрология. 1995, N 2, стр. 46-47.

УЧАСТОК MttCXMTEfttHOfl гехнйки ОНИ РАМН

2*КЛ> 9 В ТИРА* l0i>SJA

Rosn. кпечлт^ 15Л 95

тоту возникновения рецидивов поверхностного рака мочевого пузыря (T1G1-2) тем в большей степени, чем короче анамнез ооле: ш и чем дольше длится курс лечения данным препаратом с учетом сохранения к нему индивидуальной чувствительности. У больных с резным но длительности анамнезом, принимавших препарат, в среднем, в течение 14,6 мес, частота рецидивов после лечения снизилась в раза по сравнению с таковой до лечения (18*). Полученные результаты могут оыть положены в основу способа профилактики рецидивов поверхностного рака мочевого пузыря у больных после удаления первичной опухоли.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ ПО ТЕШ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бочарова O.A.. Кяркии А.Ф. Органы и клетки иммунной системы. Малый практикум по иммунологии. Методическое пособие, 4.1. П.. Изд-во МГУ, 1986, 37 стр.

2. Бочарова O.A., Александрова И.В. Контактотропное действие препарата оиоееныгень. Сборник докладов 1-й школы-семинара "Регуляция тканевого гомеостаза. Нетоксическая профилактика и терапия хронических патологий". Тбилиси, 1967, стр. 6-II.

3. Бочарова O.A., Томилина H.D., Бодрова Н.Б., Грубова Е.А. Сравнительное изучение биологической активности природных адвпто-генов и их аналогов из биомассы, выращенной in vitro. Тезисы III-ей Украинской конференции по медицинской ботанике, 1992, Киев, стр. 20.

4. Бочарова u.a., Куренная О.Н., Носиков К.В., Серебрякова Р.В., Бодрова Н.Б., Александрова И.В., Зацепина Г.Н. Способ биологического контроля адаптогенов. Заявка на патент N 50332209/13 с приоритетом от 13 марта 1992 г., положительное решение от 20 .октября 1992 г.

5. Бочарова O.A., Куренная О.Н., Серебрякова Р.В., Бодрова Н.Б. Новый способ биологического тестирования препаратов адаптогенов. Биотехнология. 1993, N 8, стр.28-34.

6. Bocharova 0., Serebryakova В. Experimental prophylaxis оГ heredltory "tuooura in nice by Rhodlolae rosea administration. -Abstracts or 5-th National Cancer Congress, October 7-9 1993, Soria, Bulgaria.

7. Бочарова O.A., Серебрякова P.B. Испытание препаратов растительного происхождения для профилактики и нетокснческой терапии онкологических заболеваний на экспериментальных моделях. Вестник

РАМН, N 2. t994. стр. 52-57.

8. Бочарова O.A., Серебрякова Р.в., Бодрова Н.Б. Профилактический эффект Rbodlolae rosea на спонтанное опухолеооразование в печени у высокораковой линий мышей. Вестник РАМН, 1994, N 5, стр. 41-43.

9. Бочарова O.A., Серебрякова Р.В., Голубева В.А., Фигурин K.m., Бухвркнн Б.В.. Бодрова Н.Б., Матвеев Б.П., Барышников A.C. Изменение механической интеграции клеток переходного эпителия и вмунного статуса больных опухолями мочевого пузыря. Урология и нефрология, 1994, N 3, стр.27-30.

10. Бочарова o.a., Матвеев Б.П., Барышников A.D., «Хигурин K.m., Серебрякова Р.В., Бодрова Н.Б. Влияние экстракта Rnodlolae rosea на частоту рецидивов поверхностного рака мочевого пузыря у довей. Урология я нефрология, 1995, И 2, стр. 4&г47.

участок мис-хитепъивя тсхнйкм они рамн

—■

оояп. к печд-И 15Л 95 глкл* 9 8 тира* IOÖjja