Автореферат и диссертация по медицине (14.01.17) на тему:Комплексное влияние натрия гипохлорита на метаболические и морфофункциональные изменения при лечении желчного перитонита (экспериментальное исследование)

Кубанский государственный медицинский университет

ЩЪошиоД

На правах рукописи

Ивапов Вячеслав Владимирович

КОМПЛЕКСНОЕ ВЛИЯНИЕ НАТРИЯ ГИПОХЛОРИТА НА МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЖЕЛЧНОГО ПЕРИТОНИТА

(экспериментальное исследование)

14.01.17-хирургая

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

9 ИЮН 2011

Краснодар - 2011

4849261

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития» Российской Федерации (ГОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России).

Научный руководитель: заслуженный изобретатель РФ

лауреат премии Правительства РФ и РАМН доктор медицинских паук профессор Петросян Эдуард Арутюнович.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук профессор

Гуменюк Сергей Евгеньевич;

доктор медицинских наук Виниченко Алексей Викторович.

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития (ГОУ ВПО ВолГМУ Минздравсоцразвития России).

Защита состоится « 2011 г. в 10.00 часов на заседании

диссертационного совета Д208.038.01 при КубГМУ по адресу: 350063, Краснодар, ул. Седина, 4, КубГМУ, тел. (861) 262-73-75.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке КубГМУ. Автореферат разослан « \ » О.^ 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета профессор

Ю.Р.Шейх-Заде

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. В последние годы направление хирургической гастроэнтерологии сместилась к видеолапароскопическим технологиям, которые с одной стороны, сокращают сроки лечения больных, а с другой - существенно влияют на частоту ятрогенных осложнений, одним из которых является желчный перитонит (ЖП) (Левин Л.А., 2009]. Среди заболеваний, приводящих к- развитию ЖП, ведущее место занимают желчнокаменная болезнь, холангиолитиаз, холецистит и др., когда частота его возникновения достигает 50% [Творогов Д.А., 2010], а летальность - 12,2-34,7% [Брискин Б.С., 2006].

Общепризнанно, что основным патогенетическим фактором при перитоните является эндотоксикоз с метаболическими и функциональными расстройствами практически всех органов и систем [Купреева М.С., 2009]. Избыточное накопление токсинов при перитоните и неспособность физиологических систем организма обеспечить их выведение, обуславливают необходимость применения специальных средств и методов эфферентной терапии.

В настоящее время в хирургии положительно зарекомендовал себя метод непрямого электрохимического окисления с использованием натрия гипохлорита (НГХ) [ПетросянН.Э., 2008].

Исходя из вышеизложенного, представляет интерес провести исследование комплексного влияния НГХ на метаболические и морфофункциональные изменения при лечении экспериментального ЖП.

Цель исследования - повысить эффективность лечения экспериментального ЖП при комплексном использовании НГХ.

Задачи исследования

1. Оценить эффективность комплексного лечения экспериментального ЖП при изучении состояния системной воспалительной реакции.

2. Установить эффективность комплексного лечения экспериментального ЖП при изучении синдрома эндогенной интоксикации.

3. Определить эффективность комплексного лечения экспериментального ЖП при изучении процессов свободно-радикального окисления.

4. Выяснить эффективность комплексного лечения экспериментального ЖП при изучении состояния гормональной оси гипофиз - кора надпочечников - щитовидная железа.

5. Показать эффективность комплексного лечения экспериментального ЖП при изучении морфофункциональных изменений в печени и надпочечниках.

6. Изучить эффективность комплексного лечения экспериментального ЖП на морфометрические параметры «зрелого» фибрина в печет! и надпочечниках.

Новпзпа результатов исследования

В результате проведенных исследований впервые:

- установлено, что комплексное лечение экспериментального желчного перитонита натрия гипохлоритом сопровождалось двукратным снижением летальности животных, снижением ЛИИ, уменьшением первичной и вторичной интоксикации, стабилизацией структурно-функциональной организации эритроцитарных мембран, коррекцией гормонального дисбаланса в оси гипофиз - кора надпочечников -щитовидная железа и стимуляцией регенеративно-пролиферативных процессов с сохранением архитектоники печени и надпочечников;

- расширены современные представления механизма действия натрия гипохлорита на метаболические и морфофункциональные процессы при комплексном лечении экспериментального желчного перитонита.

Теоретическая значимость исследования.

Совокупность представленных данных расширяют современные представления о патогенезе ЖП и механизме действия НГХ на метаболические и морфофункциональные процессы при лечении желчного перитонита. Полученный материал может служить основой для дальнейшего изучения механизмов выявленных нарушений и оптимизации известных, и разработки новых методов гемокоррекции больных с ЖП.

Практическая значимость работы.

Комплексное использование НГХ, позволит повысить эффективность лечения ЖП путем снижения летальности, уменьшения частоты осложнений, сокращения сроков пребывания больных в стационаре и повышения качества жизни.

Структура и объем дпсссртацпп. Работа изложена на 156 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы, описывающей материалы и методы исследования, двух глав собственных исследований, заключения. выводов, литературного указателя, включающего 376 источника, из них - 238 отечественных и 138 иностранных, и приложения. Работа иллюстрирована 51 микрофотографиями, 22 таблицами и 8 графиками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 55 беспородных собаках-самцах, весом 16±1,5 кг. Экспериментальные животные были разделены на две группы:

— в 1-ю контрольную группу для определения лабораторных показателей нормы вошли 55 собак, из которых 5 были выведены из опыта для забора биоптатов печени и надпочечников;

— во 2-ю группу вошли оставшихся 50 животных, у которых создавали модель 24-часового экспериментального ЖП.

Суть модели ЖП заключалась в том, что предварительно на наружной поверхности заднего бедра собаки создавали очаг деструкции

путем подкожного введения 10% раствора кальция хлорида из расчета 0,25 мл/кг. Через 48 часов проводили троекратное внутрибрюшинное введение аптечной желчи, через каждые 8 часов из расчета 1,5 мл/кг [Петросян Э.А. и др. «Способ моделирования желчного перитонита», Патент РФ №2175784, Бюл., 2001, №31].

После создания модели 24-часовош ЖП во 2-ой группе из 50 животных были выведены 5 собак для забора биоптатов. Еще 5 животных с 24-часовым ЖП находились под наблюдением, у которых регистрировалась летальность каждые 12 часов в течение первых 3-х суток после создания модели, так называемый «трехдневный критерий летальности» [Бондарев Г.А., 1981].

Оставшиеся 40 животных с ЖП в свою очередь были разделены еще на две группы: 3-ю группу сравнения и 4-ю опытную группу, в которые были включены по 20 собак соответственно.

Эксперименты проведены в соответствии со статьей XI Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации [1964], «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» [1985] и Правилами лабораторной практики в Российской Федерации [приказ МЗ РФ №267 от 19.06.2003 г.].

Методика получения натрия гннохлорита.

НГХ получали путём электролиза 0,9% раствора натрия хлорида (ЫаС1) в аппарате - электрохимический детоксикатор организма (ЭДО-4).

Методика комплексного лечения животных с 24-часовым ЖП. Выполняли лапаротомшо, удаляли воспалительный экссудат и санировали брюшинную полость 400,0 мл раствора фурацилина (1:5000). После этого животным группы сравнения и опытной группы в брюшинную полость заливали 250,0 мл 0,04% раствора НГХ и зашивали края брюшной стенки. Животным группы сравнения проводили инфузию 0,9% раствора №С1 в

качестве средства дезинтоксикации, а животным опытной группы - 0,04% раствор НГХ в качестве бактерицидного и детоксицирующего средства, сразу и через 12 часов после санации брюшинной полости.

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Определение гематологических показателей проводили на анализаторе «Medonic 620» (Швеция).

Определение неспецпфнческого звепа иммунной системы

проводили путем качественного изучения состава лейкоцитов [Меньшиков В.В., 1987].

Определение концентрации общего белка проводили биуретовой реакцией с набором реактивов Total Protein «FL-Е» (Vital Diagnostics).

Определение общей копцептрацпп альбумина (ОКА) проводили по методике Л.И.Слуцкого [1964].

Определение белковых фракций крови проводили на аппарате ПЭФ-3 с последующ™ сканирование электрофореграмм с помощью программы «Scion Image».

Определение кортшола в крови проводили иммуноферментным методом с использованием реактивов «АмерКард» (Россия).

Определение тиреоидных гормонов: общего тироксина (ТТ4), свободного тироксина (СТ4), общего трийодтиронина (ТТЗ) и тиреостимулирующего гормона (ТСГ) проводили иммуноферментным методом с использованием набора реактивов «Амерлайт».

Определение эффективной концентрации альбумипа (ЭКА) проводили на аппарате АКЛ-01 с набором реактивов «Зонд альбумин».

Определение осмотической проппцаемостп мембран эритроцитов проводили по методике Л.И. Идельсона (1958).

Для изучения состояния систем детоксикации использовали интегральные методы: определение ЛИИ [Кальф-Калифа, 1941], индекса

токсичности (ИТ) [Малахова М.Я., 1995], резерва альбумина (РА) и резерва связывания альбумина (РСА) [Федоровский Н.М., 2004].

Морфологические и гистохимические исследования печени и надпочечников проводили на срезах, окрашенных гематоксилин-эозином и по Пикро-Маллори [Саркисов Д.С., 1996].

Морфометрические исследования заключались в измерении средних размеров (CP, мкм2) и объемной доли (ОД, %) «зрелого» фибрина в печени и надпочечниках с применением окулярной сетки [Автандилов Г.Г., 2002].

Динамику экспериментального ЖП изучали на 1, 3, 7, 10 и 30 сутки заболевания. Для забора морфологического материала в указанные сроки выводили из опыта по 4 животных.

Статистические исследования выполнены в программе «Statistica б.0 for Windows». При проведении параметрического анализа использовался парный и непарный t-критерий Стыодента. Для оценки достоверности межгрупповых различий приметался непараметрический критерий Манна-Уитни. При построении кривых использовалась методика сглаживания. Для выяснения взаимосвязей между показателями применялся метод корреляционного анализа по Спирмену. Данные в тексте и таблицах представлены в виде среднего арифметического значения и стандартной ошибки среднего М+т, а при непараметрическом характере распределения величин - в виде медианы с указанием 25-го и 75-го квартилей [медиана (25й - 75й- квартиль)].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При лапаротомии у животных с 24-часовым ЖП определялось до 250,0 мл мутного серозно-фибринозного экссудата с примесью желчи, гиперемия брюшины с множественными очагами геморрагии.

Общеизвестно, что системный характер воспаления приводит к мобилизации организма. Так, у животных с 24-часовым ЖП концентрация

лейкоцитов достигала 24,3±3,40х 109/л против 12,85±1,44х109/л в контрольной группе (р<0,05). На 1-е и 3-й сутки в группе сравнения количество лейкоцитов оставалось, по-прежнему, достоверно высоким (р<0,05), в то время, как в опытной группе начиная с 3-х суток не отличалось от контрольных величин (р>0,05).

При развитии 24-часового ЖП были выявлены качественные изменения белой крови, которые нашли отражение в показателях ЛИИ, достоверно превышая уровень контрольных животных в б раз (р<0,05). В последующие сроки происходило достоверное снижение ЛИИ (р<0,05), которое в группе сравнения не отличалось от контрольных данных к 30-м суткам, а в опытной группе - к 10-м суткам, что можно объяснить бактерицидным и детоксицирующим действием НГХ.

При оценке выраженности воспалительной реакции у животных с 24-часовым ЖП наблюдался в 2,6 раза рост относительного содержания палочкоядерных нейтрофилов (ПЯН) и снижение в 2 раза лимфоцитов. В процессе лечения в течение трех суток в группах происходил сдвиг формулы, выражающийся в достоверном снижение содержания сегментоядерных нейтрофилов (СЯН) и увеличении ПЯН (р<0,05). Нормализация СЯН в изучаемых группах происходила к 7-м суткам, ПЯН - в группе сравнения к 30-м суткам, а опытной - к 10-м суткам. Параллельно в группе сравнения отмечалось снижение лимфоцитов в течение трех суток, а в опытной группе на 1-е сутки, с одновременным ростом в опытной группе в 1,5 раза моноцитов на 3-й сутки.

Таким образом, при экспериментальном ЖП на фоне развития системной воспалительной реакции выявленный лейкоцитоз и «омоложение» лейкоцитарной формулы - результат мобилизации нейтрофильных гранулоцитов и активации красного костного мозга, а снижение лимфоцитов - перемещение клеток из сосудистого русла в

ткани. Комплексное лечение ЖП в опытной группе способствовало ранней нормализации содержания СЯН и лимфоцитов.

Известно, что многие функции крови основаны на способности белков, участвовать в образовании комплексов с токсинами, а затем транспортировать их к различным системам и органам детоксикации.

Так, у животных с 24-часовым ЖП отмечалось достоверное снижение ОКА в 2,3 раза относительно контроля (р<0,05), который обусловлен экссудацией выпота в брюшную полость и интенсивностью процессов протеолиза на фоне угнетения синтетической функции печени (рис. 1).

40,0 35,0

зо.о

25,0 20,0 15,0 10,0

24-ч. ЖП

30

Е£324-час ЖП ШШ группа сравнения

Сутки

Рис. 1. ОКА ггри комплексном лечении экспериментального ЖП.

После начала лечения в исследуемых группах в течение трех суток наблюдался достоверно низкий уровень ОКА. В группе сравнения уровень ОКА приходил к контролю только к 30-м суткам, а в опытной группе - на 7-е сутки, что свидетельствовало о восстановление метаболической и синтетической функции печени под влиянием ПГХ.

Общеизвестно, что течение и исход многих заболеваний, сопровождающиеся интоксикационным синдромом, находит отражение в нарушении транспортной функции альбумина. Так, у животных с 24-часовым ЖП отмечалось достоверное снижение ЭКА в 3,8 раза (р<0,05), которое связано ростом концентрации гидрофобных токсинов и развитием вторичной интоксикации (рис. 2).

30,0 25,0

20,0 -

15,0 -

10,0 -

5,0

р^Э_г

24-4. ЖП

Е23 24-час ЖП

группа сравнения

10

30

Сутки

Рис. 2. ЭКА при комплексном лечении экспериментального ЖП.

После проведенного лечения в группах наблюдался рост ЭКА, который в группе сравнения приходил к контрольным цифрам на 30-е сутки, а в опытной группе - на 10-е сутки, что свидетельствовало о раннем восстановлении транспортной функции альбумина под влиянием НГХ.

Известно, что мерой освобождением центров связывания альбумина от токсинов является РСА, который у животных с 24-часовым ЖП снижался в 1,7 раза (р<0,05), что свидетельствовало о загруженности молекул альбумина (рис. 3).

80,0 -70,0 -60,0 -50,0 -40,0 ■ 30,0 -

74-ц ЖП

т

3 24-час ЖП _ШЗгруппа сравнения

:

ч

_10

Ю*1

■

Сутки

Рис. 3. РСА при комплексном лечении экспериментального ЖП.

На фоне лечения в группе сравнения уровень РСА в первые трое суток оставался достоверно низким, в то время, как в опытной группе восстановление его уровня происходило уже на 3-й сутки, что указывало о деблокаде центров связывания альбумина натрия гипохлоритом.

Для оценки сорбционной способности альбумина был использован РА, который у животных с 24-часовым ЖП снижался до 8,1 ±0,44 относительно контроля (р<0,05) (рис. 4). После проведенного лечения в исследуемых группах происходило дальнейшее снижение РА вплоть до 3-х суток (р<0,05). В обеих группах показатели РА приходили к контролю на 7-е сутки наблюдения (р>0,05) и в дальнейшем не изменялись.

Полученные данные указывают на сохранение компенсаторных возможностей органов функциональной системы детоксикации.

12,0

Сутки

Рис. 4. РА при комплексном лечении экспериментального ЖП.

Оценку токсической загруженности молекул альбумина проводили изучением ИТ, который у животных с 24-часовым ЖП был в 4 раза выше показателя контрольных животных (р<0,05) и объяснялся ростом продуктов гидрофобной природы (рис. 5).

_24-ч.ЖП

Щ2Э24-час ЖП СПЗ опытная группа

10

группа сравнения —*— контрольная группа

тг-

Сут ки

Рис. 5. ИТ при комплексном лечении экспериментального ЖП.

На фоне проведенного лечения в исследуемых группах отмечалось снижение ИТ, который в группе сравнения приходил к контрольным

цифрам на 10-е сутки, а в опытной группе уже на 3-й сутки (р>0,05), что связано с возможностью НГХ окислять токсины.

Общеизвестно, что гормональная ось гипофиз - кора надпочечников - щитовидная железа является основным эффектором стрессовой реакции.

Исследования показали, что у животных с 24-часовым >КП уровень кортизола превышал в 1,8 раза контрольные данные (р<0,05) (рис. 6).

Рис. б. Динамик уровня кортизола в крови при комплексном лечении экспериментального ЖП.

В последующие сроки уровень кортизола в крови исследуемых группах постепенно снижался и приходил к контрольным цифрам на 10-е сутки наблюдения. Однако необходимо заметить, что в опытной группе уровень кортизола в течение всего этого времени достоверно превышал этот показатель у животных в группе сравнения (р<0,05), что можно объяснить неспецифической реакцией организма в ответ на действие промежуточных продуктов окисления белков крови, натрия гипохлоритом.

Изучение общего тироксина (ТТ4) у животных с 24-часовым желчным перитонитом показало его снижение в 2 раза относительно контроля (р<0,05) (рис. 7). В последующие сроки наблюдался рост содержания гормона, который в группе сравнения приходил к контрольным данным на 10-е сутки (р>0,05), а в опытной группе, где использовали натрия гилохлорит - на 7-е сутки наблюдения (р>0,05).

80,0 70,0

_24-м. жп__]_а_г_ю_ зо

Е53 24-час ЖП ЕщЭ группа сравнения '

1—1—1 опытная группа_—контрольная группа [

Рис. 7. Динамика уровня ТТ4 в крови при комплексном лечении экспериментально.!« ЖП.

Необходимо отметить, что, несмотря на важность для организма содержания ТТ4, физиологическим действием обладает свободный тироксин (СТ4), который у животных с 24-часовым ЖП достоверно снижался в 2 раза по сравнению с контролем (р<0,05) (рис. 8).

30,0 25,0 щ 20,0 1 15,0 = 10,0 5,0 0,0

т т т т т

1.......1 _ к. -X : 1 т . й Т Г

1: 3 3 'А М К« К 1 »я.::: че : •: ■

"1 тт |§ ШЛ ад ; •

м И*

Е32Э 24-час ЖП

опытная группа

группа сравнения ♦ контрольная группа

30

Сутки

Рис. 8. Динамика уровня СТ4 в крови при комплексном лечении экспериментального ЖП.

В дальнейшем наблюдался рост уровня СТ4, который в группе сравнения приходил к контрольным величинам на 30-е сутки, в то время, как в опытной группе он уже на 3-й сутки не отличался от контроля. Раннюю нормализацию уровня СТ4 в крови в опытной группе относительно уровня общего тироксина можно объяснить, как гипопротеинемией, так и окислением свободного тироксина натрия гипохлоритом.

Исследование содержания общего трийодтиронина (ТТЗ) у животных с 24-часовым ЖП показало достоверное его снижение в 2 раза (р<0,05) (рис. 9). В дальнейшем концентрация ТТЗ, как в группе сравнения, так и в опытной группе оставалась достоверно низкой относительно контрольных данных еще в течение 10-и суток (р<0,05). Такое состояние получило название синдрома эутиреоидной патологии (СЭП). В то же время, необходимо отметить, что в опытной группе содержание ТТЗ в течение 10-и суток наблюдения достоверно превышала уровень ТТЗ в группе сравнения (р<0,05).

Сутки

Рис. 9. Динамика ТТЗ в крови при комплексном лечении экспериментального ЖП.

Данное обстоятельство может быть связано с ранним увеличением общего тироксина за счет стимуляции НГХ репаративных процессов и синтеза белка в печени. Необходимо также отметить и на стабилизацию уровня кортизола у животных опытной группы, которая может свидетельствовать об уменьшении вырфкеян^сти Неспёцифического системного ответа на повреждение. ' ,: у '

Таким образом, можно предположить, что развитие СЭП у животных с ЖП направлено на активацию регуляции негеномных эффектов тиреоидных гормонов, в то время, как снижение уровня ТТЗ может служить реакцией адаптации, направленной на сохранение энергии и белка в организме. Применение НГХ в комплексном лечении ЖП способствует

стабилизации гормонального дисбаланса, как за счет повышения уровня кортизола, так и за счет стимуляции синтеза белка в печени, что отражается на уменьшении выраженности неспецифического системного ответа на воспаление.

Учитывая, что развитие желчного перитонита сопровождалось снижением функциональной способности органов детоксикации и стрессовым истощением эндокринных органов в работе были проведены морфофункциональные исследования печени и надпочечников.

Так, у животных с 24-часовым ЖП в печени наблюдался воспалительный отек глиссоновой капсулы и оболочек портальных трактов, дискомплексация, мелкокапельно-жировая и гиалиново-капельная дистрофия гепатоцитов. В капиллярах отмечался сладж и агрегация эритроцитов. В стенках сосудов отмечалось фибриноидное набухание с отложением «зрелого» фибрина. В корковом слое надпочечников наблюдался отек и жировая вакуолизация клеток клубочковой зоны, а в мозговом - поврежденные эндокриноциты, дистрофически измененные эпителиальные и соединительнотканные структуры. В синусоидвых капиллярах определялись стазы и агрегация эритроцитов с образованием фибриновых микротромбов.

На 3-й сутки происходили наиболее выраженные морфофункциональные изменения в исследуемых органах (рис. 10-12).

¡и.«« :

............................... " ' '

Ж

к

8 ' -V - * - ,

ж я»

....... "ша.........

, • . V г ,'' Ч

а б

Рис. 10. Гистологическая картина печени у животных с ЖП в группе сравнения (а) и опытной группе (б) на 3-й сутки. Окраска гематоксилин-эозин. Ув. х 280.

а б

Рис. 11. Гистологическая картина клубочковой зоны коркового вещества надпочечников у животных с ЖГ1 в группе сравнения (а) и опытной группе (б) на 3-й сутки. Окраска гематоксилин-эозин. Ув. х280.

Рис. 12. Гистологическая картина мозгового вещества надпочечников у животных с ЖП в группе сравнения (а) и опытной группе (б) на 3-й сутки. Окраска гематоксилин-эозин. Ув. х 280.

По-прежнему сохранялся воспалительный отек межуточной ткани, усиливались дистрофические и некробиотические изменения, полиморфноклеточная инфильтрация клетками лимфоидно-гистиоцитарного звена. При этом в группах сравнения определялись в основном лимфоидные (рис. 10-12, а), а в опытных - гастиоцитарные клетки (рис. 10-12, б). Гистохимические исследования свидетельствовали, что зоны фибриноидного набухания в печени и надпочечниках в исследуемых группах были выполнены, как «зрелым» так и «старым» фибрином.

На 10-е сутки заболевания в изучаемых органах определялась воспалительная реакция, очаги дистрофии и некробиоза, которые были более выраженными в группе сравнения. Пролиферативные процессы в печении и надпочечниках у животных в группе сравнения носили умеренный характер, а в опытной группе - более выраженный. В группе

сравнения выявляли очаги некроза с отложением «зрелого» и «старого» фибрина, причем «зрелый» фибрин преобладал, в то время как в опытной группе определялся только «старый» фибрин, что указывало на стихание воспалительного процесса.

На 30-е сутки на фоне нормализации структуры исследуемых органов в группах сравнения отмечались очаги зрелой грануляционной ткани и сформированного склероза с наложением «старого» фибрина, в то время, как в опытных группах наблюдались регенеративно-пролиферативные процессы с сохранением архитектоники , органов и отсутствием «старого» фибрина. ■

Для подтверждения полученных морфофункциональных изменений проведены морфометрические исследования среднего размера (СР) и объемной доли (ОД) «зрелого» фибрина в печени и надпочечниках. Результаты показали, что у животных с 24-часовым ЖП в печет! и надпочечниках выявлено увеличение СР и ОД «зрелого» фибрина относительно контроля, где он не обнаружен. После проведенного лечения, наблюдался дальнейший рост СР и ОД «зрелого» фибрина в печени, который достигал максимальной величины на 3-й сутки, превышая показатели животных с 24-часовым ЖП в группе сравнения в 1,8 и 2 раза (р<0,05), а в надпочечниках - соответственно в 2,4 и 2,7 раза (р<0,05). В опытной группе рост параметров СР и ОД был достоверно ниже, чем у животных группы сравнения (р<0,05). На 10-е сутки в исследуемых группах наблюдалось достоверное снижение СР и ОД «зрелого» фибрина в печени и надпочечниках относительно предыдущих сроков. При этом в опытной группе они в 1,8 и 1,5 раза были более значимыми, а в надпочечниках в 2,9 и 3,0 раза соответственно, чем в группе сравнения (р<0,05). На 30-е сутки в исследуемых группах происходила нормализация параметров СР и ОД «зрелого» фибрина в печени, что указывало на прекращение его новообразования. В то время, как в надпочечниках у

животных группы сравнения эти показатели были достоверно высокими (р<0,05), а в опытной группе они не отличались от контрольных, что свидетельствовало о положительном влиянии НГХ на гемокоагуляционные расстройства.

Таким образом, к основным проявлениям дисметаболических и дисрегуляторных расстройств гомеостаза, у животных с ЖП в печени и надпочечниках были выявлены морфофункциональные изменения, характеризующиеся преобладанием альтеративного компонента (дистрофия и некробиоз), экссудативной реакции (межуточный и периваскулярный отек, клеточная инфильтрации, полнокровие капилляров, агрегация эритроцитов с образованием эритроцитарно-фибриновых тромбов), указывающие на наличие признаков ДВС-синдрома. Комплексное лечение экспериментального ЖП с использованием НГХ способствовало стимуляции регенеративно-пролиферативных процессов с сохранением архитектоники исследуемых органов и нормализации гемокоагуляциош1ЫХ расстройств.

К подтверждению морфофункциональных и морфометрических изменений, выявленных у животных с экспериментальным желчным перитонитом, следует добавить, что в опытной группе, где в комплексном лечении использовался натрия гипохлорит, отмечалось почти двукратное снижение летальности относительно животных леченных в группе сравнения. В то же время, животные с экспериментальным желчным перитонитом, оставшиеся без лечения, наблюдалась 100% летальность.

ВЫВОДЫ

1. Комплексное лечение экспериментального желчного перитонита с использованием натрия гипохлорита сопровождалось двукратным снижением летальности животных, менее выраженной воспалительной реакцией со стороны макроскопической картины брюшной полости,

ранней нормализацией температуры тела, тахипноэ, лейкоцитоза, содержания палочкоядерных нейтрофилов, снижением ЛИИ, стимуляцией пролиферации клеток специфического иммунитета (лимфоциты, моноциты).

2. Комплексное лечение экспериментального желчного перитонита натрия пшохлоритом показало уменьшение первичной и вторичной интоксикации в виде ранней нормализации таких показателей как ОКА, ЭКА, РСА, РА и ИТ.

3. Применение натрия гипохлорита в комплексном лечении экспериментального желчного перитонита способствовало стабилизации структурно-функциональной организации эритроцитарных мембран и ранней нормализации соотношения фракций эритроцитов.

4. Комплексное использование натрия гипохлорита при лечении экспериментального желчного перитонита способствовало коррекции гормонального дисбаланса в оси гипофиз - кора надпочечников -щитовидная железа.

5. При комплексном использовании натрия гипохлорита наблюдалась стимуляция регенеративно-пролиферативных процессов в печени и надпочечниках с сохранением их архитектоники и отсутствием «старого» фибрина, в то время как в группе сравнения отмечались очаги зрелой грануляционной ткани и сформированного склероза с отложением «старого» фибрина.

6. Морфометрические исследования печени на фоне проводимых лечений показали полное восстановление среднего размера и объемной доли «зрелого» фибрина в печени и надпочечниках, что свидетельствовало о коррекции гемокоагуляционных расстройств, в то время, как в надпочечниках данное восстановление происходило только в опытной группе животных, где использовали натрия гипохлорит.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ИССЕРТАЦИИ

1. Иванов В.В., Лайпанов A.M. Влияние натрия гипохлорига на морфофункциональное и гистохимическое состояние структур печени при экспериментальном желчном перитоните // Материалы XXXVII научной конференции студентов и молодых ученых вузов ЮФО. - Часть 3. -Краснодар, 2010. - С.92.

2. Лайпанов A.M., Иванов В.В. Морфофункциональное и гистохимическое состояние структур печени при желчном перитоните в эксперименте // Материалы XXXVII научной конференции студентов и молодых ученых вузов ЮФО. - Часть 3. - Краснодар, 2010. - С.93-94.

3. Терещенко O.A., Боташев A.A., Петросян Э.А., Лайпанов A.M., Иванов В.В., Хасаева М.А., Рыкунова В.Е. Нарушение функциональной системы детоксикации при экспериментальном желчном перитоните // Вопросы реконструктивной и пластической хирургии. (Материалы III научно-практической конференции с международным участием, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И.Пирогова). - 2010. - №2. -С. 85-86.

4. Боташев A.A., Терещенко O.A., Петросян Э.А., Лайпанов A.M., Иванов В.В., Хасаева М.А., Рыкунова В.Е. Оценка состояния гормонального баланса при экспериментальном желчном перитоните // Вопросы реконструктивной и пластической хирургии. (Материалы III научно-практической конференции с международным участием, посвященной 200-летию со дня рождения Н.И.Пирогова). - 2010. - №3. -С. 31-32.

5. Терещенко O.A., Боташев A.A., Лайпанов A.M., Иванов В.В., Багдасарьян A.C., Хасаева М.А., Рыкунова В.Е., Петросян Э.А. Оценка состояния белкового и углеводного обмена при остром желчном перитоните // Вестник интенсивной терапии. - 2010. - №5. - С. 34-36.

6. Боташев A.A., Терещенко O.A., Иванов В.В., Лайпанов A.M., Хасаева М.А., Багдасарьян A.C., Рыкунова В.Е., Петросян Э.А. Оценка осмотической проницаемости эритроцитов при остром желчном перитоните // Вестник интенсивной терапии. - 2010. - №5. - С. 16-20.

*7. Боташев A.A., Терещенко O.A., Иванов В.В., Лайпанов А. М., Хасаева М.А., Багдасарьян A.C., Рыкунова В.Е., Петросян Э.А. Состояние мембран эритроцитов при экспериментальном желчном перитоните // Кубанский научный медицинский вестник. - 2010. - №5. - С. 36-39.

*8. Терещенко O.A., Боташев A.A., Лайпанов A.M., Иванов В.В., Рыкунова В.Е., Багдасарьян A.C., Хасаева М.А., Петросян Э.А. Метаболические нарушения при экспериментальном желчном перитоните // Кубанский научный медицинский вестник. - 2010. - №5. - С. 178-183.

*9. Боташев A.A., Терещенко O.A., Помещик Ю.В., Иванов В.В., Лайпанов , А.М„ Хасаева М.А., Рыкунова В.Е., Карипиди Г.К., Петросян Э.А. Оценка состояния системной воспалительной реакции при желчном'перитоните // Кубанский научный Медицинский вестник. - 2010. -№9.;- С. 39-42.

*10. Терещенко O.A., Боташев A.A., Помещик Ю.В., Иванов В.В., Лайпанов A.M., Хасаева М.А., Рыкунова В.Е., Багдасарьян A.C., Петросян Э.А. Влияние натрия гипохлорита на состояние системной воспалительной реакции и гормональный обмен при лечении желчного перитонита // Кубанский научный медицинский вестник. - 2010. - №9. -С. 149-153.

*11. Петросян Э.А., Боташев A.A., Терещенко O.A., Хасаева М.А., Лайпанов A.M., Иванов В.В. Продукция оксида азота тромбоцитами при экспериментальном желчном перитоните // Экспериментальная й клиническая гастроэнтерология. - 2010. - №10. - С.64-66.

*12. Петросян Э.А., Иванов В.В., Долгов В.Н., Лайпанов A.M., Терещенко O.A., Боташев A.A. Влияние натрия гипохлорита на некоторые звенья гомеостаза при лечении экспериментального желчного перитонита // Фундаментальные исследования. - 2010. - №11. - С. 98-103.

*- работы, опубликованные в журналах, включенных в перечень рецензируемых научных журналов и изданий (Бюллетень ВАК, 2007).

- ^

с. р —-

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ЖП - жёлчный перитонит

ЛИИ - лейкоцитарный индекс интоксикации

ИТ - индекс токсичности

НГХ - натрия гипохлорит

ОД - объёмная доля

ОКА - общая концентрация альбьумина

ПЯН - палочкоядерные нейтрофшгьные гранулоциты

РСА - резерв связывания альбумина

РА - резерв альбумина

CP - средний размер

СТ4 - свободный тироксин

СЭП - синдром эутиреоидной патологии

СЯН - сешентоядерные нейтрофильные гранулоциты

ТТГ - тиреотропный гормон

ТТЗ - общий трийодтиронин

ТТ4 -общий тироксин

ЭКА - эффективная концентрация альбумина

Формат 60x84 1/16. Усл. печ. л. 1,2. Бумага офсетная. Печать офсетная. Заказ № 49. Тираж 100 экз.

Отпечатано с готового оригинал-макета в типографии ООО "Ставропольбланкиздат" 355035, г. Ставрополь, пр. Октябрьской Революции, 32, тел/факс 26-70-47; Е-та11:5Ы2001п8@уапс1ех.ги

Актуальность проблемы. Современное развитие хирургии, несмотря на все свои успехи, сопровождается рядом осложнений, с которыми в прежние времена практически не сталкивалось. Ярким примером такой тенденции является широкое внедрение в современную хирургию печени и желчевыводящей системы — малоинвазивных технологий [Совцов С.А., 2001; Левин Л.А., 2009; Amendolara M. et al., 2002; Kang S.B. et al., 2004]. Эти технологии с одной стороны, сокращают сроки лечения больных, с другой — существенно влияют на частоту ятрогенных осложнений, одним из которых является острый желчный перитонит [Галлингер Ю.И., 2003].

Среди заболеваний, приводящих к развитию желчного перитонита, особое место отводится желчнокаменной болезни, холангиолитиазу, флегмонозному, гангренозному, перфоративному холециститу, гнойному холангиту и т.д. При этих заболеваниях частота возникновения желчного перитонита может достигать 50 % [Малюгина Т.А., 1973; Затевахин И.И. и др., 1997; Чернов В.Н., Велик Б.М., Пшуков Х.Ш., 2004; Iso Y.et al., 1996; Goodwin S.C. et al., 1998; Kang S.-B. et al., 2004]. Серьёзной озабоченностью является высокая летальность при остром желчном перитоните, достигающая 12,2-34,7 % [Шуркалин Б.К. и др., , 1998; Кригер А.Г. и др., 2000; Багненко С.Ф., Мосягина В.Б., 2000; Ludwig L.L. et al., 1997; Shah S.H. et al., 2000]. В большинстве случаев, это связано с нарушением герметичности швов после холедохотомии, соскальзыванием лигатуры с культи желчного пузыря, неадекватным клипированием культи пузырного протока, подтеканием желчи из ложа желчного пузыря, выпадением дренажей из холедоха, повреждением внепеченочных желчных протоков и др. [Носков B.C. и др., 1998; Chen C.Y. et al., 1999; Matthews B.D. et al., 2001; Gama-Odrigues J. et al. 2001; Wills V.L. et al., 2002]. Не последнее место среди причин, приводящих к развитию желчного перитонита, занимают реконструктивные операции на желчных путях и трансплантации печени [Малярчук В .И., и др., 2003; Guitron А. et al., 2001; Yang Z.Y. et al., 2003].

Общепризнанно, что основным патогенетическим фактором при перитоните является эндотоксикоз, представляющий собой сложный патогенетический комплекс, включающий метаболические и функциональные расстройства практически всех органов и систем, обусловленные микробной инвазией, угнетением неспецифического звена иммунной системы, накоплением промежуточных и конечных продуктов обмена веществ, расстройством системы гемостаза, дисбалансом оси гипофиз-кора надпочечников — щитовидная железа, нарушением морфофункционального строения клеточных мембран, угнетением систем естественной детоксикации организма и др. [Мартов Ю.Б., и др., 1996; Миронов И.П. и др., 1999; Купреева М.С., 2009].

Таким образом, избыточное накопление токсинов при перитоните и неспособность физиологических систем организма обеспечить их выведение, обуславливают необходимость применения специальных средств и методов эфферентной терапии.

В связи с этим интерес представляют немедикаментозные методы лечения, направленные на поддержание и восстановление естественных систем и функций организма. Наиболее оптимальным из них является воспроизведение основных физико-химических процессов происходящих в органах функциональной системы детоксикации, осуществляющих их конечные интегральные эффекты (бактерицидный и детоксицирующий).

Для моделирования бактерицидной (окислительной) функции фермента миелопероксидазы-Н202-СГ нейтрофильных гранулоцитов и детоксикационной (окислительной) функции цитохрома Р-450 гепатоцитов в настоящее время положительно зарекомендовал себя метод непрямого электрохимического окисления с использованием натрия гипохлорита

Лопаткин Н.А., Лопухин Ю.М., 1989; Сергиенко В.И., 1987; Петросян Э.А., 1991; Федоровский Н.М., 2004].

Исходя из вышеизложенного, одним из важных направлений решения проблемы желчного перитонита является повышение эффективности его лечения при комплексном использовании натрия гипохлорита.

Цель исследования — повысить эффективность лечения экспериментального желчного перитонита при комплексном использовании натрия гипохлорита.

Задачи исследования

1. Оценить эффективность комплексного лечения экспериментального желчного перитонита при изучении состояния системной воспалительной реакции.

2. Установить эффективность комплексного лечения экспериментального желчного перитонита при изучении синдрома эндогенной интоксикации.

3. Определить эффективность комплексного лечения экспериментального желчного перитонита при изучении процессов свободно-радикального окисления. к

4. Выяснить эффективность комплексного лечения экспериментального желчного перитонита при изучении состояния гормональной оси гипофиз -кора надпочечников - щитовидная железа.

5. Показать эффективность комплексного лечения экспериментального желчного перитонита при изучении морфофункциональных изменений в печени и надпочечниках.

6. Изучить эффективность комплексного лечения экспериментального желчного перитонита на морфометрические параметры «зрелого» фибрина в печени и надпочечниках.

Новизна результатов исследования

В результате проведенных исследований впервые:

- установлено, что комплексное лечение экспериментального желчного перитонита натрия гипохлоритом сопровождалось двукратным снижением летальности животных, снижением ЛИИ, уменьшением первичной и вторичной интоксикации, стабилизацией структурно-функциональной организации эритроцитарных мембран, коррекцией гормонального дисбаланса в оси гипофиз - ко ра надпочечников - щ итовидная железа и стимуляцией регенеративно-пролиферативных процессов с сохранением архитектоники печени и надпочечников; расширены современные представления механизма действия натрия гипохлорита на метаболические и морфофункциональные процессы при комплексном лечении экспериментального желчного перитонита.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Основными критериями дисметаболических и морфофункциональных изменений при экспериментальном желчном перитоните являются изменения системной воспалительной реакции, эндогенная интоксикация, гормональный дисбаланс оси гипофиз - кора надпочечников - щитовидная железа, а также морфометрические изменения среднего размера и объемной доли «зрелого» фибрина в печени и надпочечниках.

2. Применение натрия гипохлорита в комплексном лечении экспериментального желчного перитонита с пособствует ранней коррекции первичной и вторичной интоксикации, стабилизации структурно-функциональной организации клеточных мембран, устранению гиперкортизолемии, увеличению уровня общего трийодтиронина, общего и свободного тироксина в крови.

Теоретическая значимость исследования

Совокупность представленных данных расширяют современные представления о патогенезе желчного перитонита и механизме действия натрия гипохлорита на метаболические и морфофункциональные процессы при лечении желчного перитонита. Полученный материал может служить основой для дальнейшего изучения механизмов выявленных нарушений и оптимизации известных, и разработки новых методов гемокоррекции больных с желчным перитонитом.

Практическая значимость исследования

Комплексное использование натрия гипохлорита, позволит повысить эффективность лечения желчного перитонита путем снижения летальности, уменьшения частоты осложнений, сокращения сроков пребывания больных в стационаре и повышения качества жизни.

Сведения о практическом использовании результатов исследования

Разработанный алгоритм комплексной диагностики и лечения больных с желчным перитонитом внедрен в лечебную практику МУЗ «Краснодарская городская больница скорой медицинской помощи» (350042, Краснодар, ул. 40-лет Победы, 14); МУЗ «Благодарненская ЦРБ» (356420, г. Благодарный, ул. Однокозова, 162, Ставропольский край); МЛПУ «Карачаевская центральная городская и районная больница» (369200, г. Карачаевск, ул. Магометова, 5, Карачаево-Черксесская республика).

По результатам исследования опубликованы 10 печатных работ (см. приложение 2).

Считаю своим долгом выразить искреннюю признательность и глубокую благодарность моему учителю и научному руководителю, заведующему кафедрой топографической анатомии и оперативной хирургии Кубанского государственного медицинского университета заслуженному изобретателю РФ, лауреату премии Правительства РФ и РАМН, доктору медицинских наук профессору Эдуарду Арутюновичу Петросяну за ежедневную помощь в выполнении работы.

Выражаю благодарность и признательность коллективу кафедры топографической анатомии и оперативной хирургии за оказанную помощь и дружескую поддержку в выполнении диссертационной работы.

ВЫВОДЫ

1. Комплексное лечение экспериментального желчного перитонита с использованием натрия гипохлорита сопровождалось двукратным снижением летальности животных, менее выраженной воспалительной реакцией со стороны макроскопической картины брюшной полости, ранней нормализацией температуры тела, тахипноэ, лейкоцитоза, содержания палочкоядерных нейтрофилов, снижением ЛИИ, стимуляцией пролиферации клеток специфического иммунитета (лимфоциты, моноциты).

2. Комплексное лечение экспериментального желчного перитонита натрия гипохлоритом показало уменьшение первичной и вторичной интоксикации в виде ранней нормализации таких показателей как ОКА, ЭКА, РСА, РА и ИТ.

3. Применение натрия гипохлорита в комплексном лечении экспериментального желчного перитонита способствовало стабилизации структурно-функциональной организации эритроцитарных мембран и ранней нормализации соотношения фракций эритроцитов.

4. Комплексное использование натрия гипохлорита при лечении экспериментального желчного перитонита способствовало коррекции гормонального дисбаланса в оси гипофиз — кора надпочечников — щитовидная железа.

5. При комплексном использовании натрия гипохлорита наблюдалась стимуляция регенеративно-пролиферативных процессов в печени и надпочечниках с сохранением их архитектоники и отсутствием «старого» фибрина, в то время как в группе сравнения отмечались очаги зрелой грануляционной ткани и сформированного склероза с отложением «старого» фибрина.

6. Морфометрические исследования печени на фоне проводимых лечений показали полное восстановление среднего размера и объемной доли «зрелого» фибрина в печени и надпочечниках, что свидетельствовало о коррекции гемокоагуляционных расстройств, в то время, как в надпочечниках данное восстановление происходило только в опытной группе животных, где использовали натрия гипохлорит.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Несмотря на успехи в диагностике и лечении острого перитонита, данная проблема остается актуальной в современной хирургии [Гостшцев В.К. и др., 1992; Савельев B.C. и др., 1990; Васильков В.Г., и др., 2001]. Указанный тезис определяется высокой заболеваемостью перитонитом - 15% больных поступают в экстренное отделение, при выполнении экстренных операций его диагностируют примерно в 60% случаев, а как причина лапаротомий он составляет 57%.

Летальность у этой категории больных за последние десятилетия не имеет существенной тенденции к снижению и достигает в среднем 30-40% [Симонян К.С., 1971; Шуркалин Б.К. и др., 1998; Кузин М.И. и др., 1994].

Острый перитонит сопровождается каскадными нарушениями во внутренней среде, что связывают с развитием синдрома системной воспалительной реакции и сопряженной с ней эндогенной интоксикацией [Гологорский В.А., 1988; Соколов A.A., Вельских А.Н., 2000].

В настоящее время остается недостаточно изученной проблемой хирургии - желчный перитонит [Багненко С.Ф. и др., 2000]. Данная проблема особенно актуальна на фоне мировой тенденции роста количества больных, страдающих желчнокаменной болезнью. Ежегодно в мире выполняется до 2,5 млн оперативных вмешательств на желчном пузыре и желчевыводящих путях у больных с желчнокаменной болезнью. При этом у большинства из них выполняются лапароскопические вмешательства, при которых осложнения отмечены в 1,5 раза чаще, чем при открытой холецистэктомии [Бойко В.В. и др., 2007], а желчный перитонит отмечается до 0,5% случаев [Меджидов Р.Т. и др., 2005], из которых. 12,2% заканчиваются летально (Багненко С.Ф., Мосягин В.Б., 2000). Несвоевременно проведенная повторная лапаротомия является причиной того, что при развитии желчного перитонита погибает от 50 до 100% больных [Козлов A.B. и соавт. 2004]. Достаточно серьезную озабоченность вызывает и рост летальности при желчном перитоните, которая достигает 12,2% (Кригер А.Г. и др., 2000; Shah S.H. et al., 2000).

Значительное место среди причин, приводящих к развитию желчного перитонита, занимают реконструктивные операции на жёлчных путях, в том числе стентирование жёлчных протоков [BurmesterE. et al., 2003]. Достаточно высокий процент случаев возникновения желчного перитонита наблюдается при пересадке печени как у реципиента [МалярчукВ.И. и др., 2003; Kusano T. et al., 2005], так и в послеоперационном периоде у доноров [LeeS.G. et al., 2004].

Таким образом, неуклонно возрастающее количество осложнений после операций на органах гепатобилиарной зоны, явилось причиной проведения комплексной оценки клинико-лабораторных и морфофункциональных изменений при остром экспериментальном желчном перитоните.

Используемая модель 24-часового жёлчного перитонита на собаках макроскопически характеризовалась картиной острого серозно-фибринозного воспаления с множественными очагами геморрагии и налётом фибрина на стенках тонкой кишки, полнокровием сосудов брыжейки тонкой кишки, явлениями стаза, многочисленными очагами геморрагии и характерными признаками микроциркуляторных расстройств.

Анализ летальности в исследуемых группах у животных с 24-часовым с экспериментальным желчным перитонитом выявил, что в опытной группе, где в лечении желчного перитонита использовали санационную лапаротомию с внутривенной инфузией 0,04% раствора натрия гипохлорита, отмечалось почти двукратное снижение летальности относительно животных группы сравнения и более благоприятная макроскопическая картина со стороны органов брюшной полости.

Известно, что количественное и качественное соотношение элементов лейкоцитарной формулы отражает уровень воспалительной реакции в процессе развития заболевания.

Системный характер воспаления брюшины приводит к мобилизации костномозгового резерва и пристеночного пула нейтрофильных лейкоцитов периферической крови, что подтверждается высоким лейкоцитозом: концентрация лейкоцитов у животных с острым желчным перитонитом достигает 24,30±3,40 х109/л против 12,85 ±1,44 х109/л в контрольной группе (р<0,05). На 1-е и 3-й сутки количество лейкоцитов в группе сравнения оставалось, по-прежнему, достоверно высокими, относительно контрольных животных (р<0,001-Я),05), в то время, как у животных опытной группы начиная с 3-х суток количество лейкоцитов не отличалось от контрольных величин (р<0,05). В последующие сроки количество лейкоцитов в группе сравнения и опытной группе практически не отличались от контрольных животных (р>0,05).

Таким образом, характер изменения количества лейкоцитов в периферической крови у животных экспериментальным желчным перитонитом свидетельствует о том, что внутривенное использование натрия гипохлорита приводит к более раннему восстановлению концентрации лейкоцитов в крови.

В процессе развития острого экспериментального желчного перитонита со стороны белого ростка крови были выявлены не только количественные, но и качественные изменения, которые нашли свое отражение в лейкоцитарном индексе интоксикации (ЛИИ). Согласно полученным результатам у животных с 24-часовым желчным перитонитом величина ЛИИ достоверно превышала уровень контрольных животных в 6 раз (р<0,05), что указывало на высокую степень эндотоксикоза у данной группы животных. В последующие сроки после начала лечения в исследуемых группах происходило достоверное снижение ЛИИ относительно уровня данного показателя у животных с 24-часовым желчным перитонитом (р<0,05), однако его величина по-прежнему достоверно превышала уровень контрольных животных (р<0,05). Однако необходимо отметить, что показатели ЛИИ в опытной группе животных в отмеченные сроки наблюдения были заметно ниже, хотя и достоверно не отличались от величины ЛИИ в группе сравнения (р>0,05).

Таким образом, у животных опытной группы после лапаротомии, санации брюшной полости и двукратной внутривенной инфузии 0,04% раствора натрия гипохлорита отмечалось более существенно снижение ЛИИ относительно животных группы сравнения, что можно объяснить бактерицидным и детоксицирующим эффектом натрия гипохлорита.

Известно, что ЛИИ представляет собой показатель, зависящий от относительного содержания различных типов лейкоцитов в периферической крови, который отражает уровень воспалительной реакции в процессе развития заболевания.

Так, у животных с 24-часовым экспериментальным желчным перитонитом наблюдался достоверный рост относительного содержания палочкоядерных нейтрофильных гранулоцитов в 2,6 раза по сравнению с контрольными животными (р<0,05) и снижение содержания лимфоцитов приблизительно в 2 раза (р<0,05). В то же время относительное содержание сегментоядерных нейтрофильных гранулоцитов оставалось в пределах нормальных величин (р>0,05). В процессе лечения 24-часового экспериментального желчного перитонита было выявлено, что в течение первых трех суток, как в группе сравнения, так и в опытной группе происходил сдвиг лейкоцитарной формулы влево, выражающийся в достоверном падение содержания сегментоядерных нейтрофилов (р<0,05) и увеличении палочкоядерных нейтрофилов (р>0,05). Нормализация относительного содержания сегментоядерных нейтрофилов в исследуемых группах происходила к 7-суткам (р<0,05), а палочкоядерных нейтрофилов -на 30-е сутки в группе сравнения (р<0,05) и на 10-е сутки - в опытной (р<0,05).

При изучении количества агранулоцитов в периферической крови животных с желчным перитонитом в группе сравнения было отмечено достоверное снижение лимфоцитов до 3-х суток (р<0,05), а в опытной группе до 1-х суток (р<0,05). В то же время, содержание моноцитов в группе сравнения оставалось без изменений (р>0,05), а в опытной группе на 3-й сутки отмечался его рост в 1;5 раза (р<0,05).

Таким образом, при экспериментальном желчном перитоните наблюдались признаки развития системной воспалительной реакции и напряженности компенсаторных механизмов, обеспечивающих процессы детоксикации организма. При этом выявленный лейкоцитоз и «омоложение» лейкоцитарной формулы, по-видимому, происходят не только за счет мобилизации пристеночного пула нейтрофильных гранулоцитов, но и активации красного костного мозга. В то же время, механизм отмеченного снижения относительного содержания лимфоцитов в крови, можно объяснить активным перемещением клеток из сосудистого русла в ткани под влиянием воспалительных цитокинов. Лечение экспериментального желчного перитонита показало, что в опытной группе, где использовали инфузии натрия гипохлорита происходила более ранняя нормализация содержания палочкоядерных нейтрофилов, стимуляция пролиферации клеток специфического иммунитета (лимфоциты и моноциты) и подавление выброса в кровеносное русло клеток неспецифического звена иммунитета. Последнее может быть обусловлено тем, что активация специфического звена иммунитета (клеточного, гуморального антигенрепрезентативного факторов) обуславливает быстрое снижение общевоспалительных процессов в организме, что, в свою очередь, уменьшает концентрацию в крови хемоаттрактантов, способствующих мобилизации клеточных элементов неспецифической звена иммунитета.

Одним из проявлений интоксикационного синдрома в организме является снижение синтетической функции печени, проявляющееся уменьшением концентрации общего белка крови. Известно, что многие функции крови основаны на способности белков, участвовать в образовании комплексов с токсинами, а затем транспортировать их к различным системам и органам.

Так, у животных с 24-часовым желчным перитонитом отмечалось достоверное снижение ОКА более чем в 2 раза относительно контрольных животных (р<0,05), которое можно объяснить нарушением синтетической функции гепатоцитов и выходом плазменного альбумина из просвета сосудов. После проведения санирующей лапаротомии и лечебных мероприятий в группе сравнения, по-прежнему, наблюдалась тенденция к снижению уровня ОКА, оставаясь по-прежнему низкой и на 10-е сутки наблюдения (р<0,05). Низкий уровень ОКА обусловлен экссудацией воспалительного выпота в брюшную полость, а также интенсивностью протеолитических процессов на фоне угнетения синтетической функции печени. В отличие от группы сравнения в опытной группе также происходило достоверное падение концентрации ОКА в первые трое суток (р<0,05), но оно было более медленным и достоверно превосходило показатели ОКА в группе сравнения (р<0,05). Необходимо также отметить, что если уровень ОКА в группе сравнения приходил к исходным цифрам к 30-м суткам (р>0,05), то в опытной группе он не отличался от контрольных цифр уже на 3-й сутки (р>0,05), что указывало на восстановление метаболической и синтетической функции печени под влиянием натрия гипохлорита.

Известно, что течение и исход многих заболеваний, сопровождающихся интоксикационным синдромом, находит свое отражение в нарушении транспортной функции альбумина. Именно этому белку принадлежит ведущая роль в связывании гидрофобных токсинов и их доставки к органам функциональной системы детоксикации.

У животных с желчным перитонитом отмечалось достоверное снижение ЭКА приблизительно в 4 раза по сравнению с контрольной группой (р<0,05), что объясняется ростом концентрации гидрофобных токсинов и развитием вторичной интоксикации.

После проведения лечебных мероприятий у животных с 24-часовым желчным перитонитом в группе сравнения наблюдалась тенденция к восстановлению ЭКА, который вплоть до 7-х суток почти в 2 раза был достоверно ниже контрольных величин (р<0,05) и приходил к исходным данным только на 10-е сутки наблюдения (р>0,05). В опытной группе восстановление ЭКА происходило значительно быстрее, достоверно превышая показатели животных группы сравнения (р<0,05) и достигала контрольных величин на 7-е сутки наблюдения (р>0,05).

В физиологических условиях в печени происходит окисление токсинов, что приводит к освобождению большинства центров связывания на молекуле альбумина, мерой, которого служит «резерв связывания альбумина» (РСА).

У животных с желчным перитонитом РСА достоверно уменьшался приблизительно в 2 раза относительно животных контрольной группы (р<0,05), что говорит о снижении эффективности транспортной функции альбумина. На фоне проведенного лечения уровень РСА в группе сравнения в течение первых трех суток, несмотря на тенденцию к его росту, по-прежнему, оставался достоверно низким относительно уровня контрольных животных (р<0,05), что отражает тяжесть состояния интоксикации и связанную с этим степень загруженности молекул альбумина. В опытной группе, где при лечении желчного перитонита, использовали натрия гипохлорит, восстановление уровня РСА происходило уже на 3-й сутки наблюдения. При этом показатели РСА в опытной группе достоверно превышали эти же показатели у животных группы сравнения (р<0,05).

Для оценки сорбционной способности альбумина был использован показатель характеризующий РА, который у животных с 24-часовым ЖП достоверно снижался до 8,1±0,44 (р<0,05). После проведенного лечения в группах происходило дальнейшее снижение РА вплоть до 3-х суток (р<0,05). В обеих группах показатели РА приходили к контрольным величинам на 7-е сутки наблюдения (р>0,05). Полученные данные указывают на сохранение компенсаторных возможностей органов функциональной системы детоксикации у данной группы животных. После проведения лечебных мероприятий у животных с 24-часовым желчным перитонитом в. группе сравнения, по-прежнему, наблюдалась тенденция к снижению РА, вплоть до 3-х суток. В опытной группе динамика РА была аналогичной лишь с той разницей, что ее снижение было несколько замедленным. Как в группе сравнения, так и в опытной группе показатели РА приходят к контрольным данным на 7-е сутки наблюдения.

Для интегральной оценки токсической загруженности молекулы альбумина был использован индекс токсичности крови (ИТ).

У животных с 24-часовым экспериментальным желчным перитонитом отмечался рост ИТ в 4 раза по сравнению с контрольной группой (р<0,05), что обусловлено ростом продуктов гидрофобной природы. После проведения лапаротомии, санации брюшной полости и лечебных мероприятий в группе сравнения, отмечалось снижение уровня ИТ, который приходил к контрольным величинам только на 10-е сутки наблюдения (р>0,05).

Таким образом, лапаротомия, санация брюшной полости и внутривенная дезинтоксикационная терапия животных с 24-часовым острым экспериментальным желчным перитонитом 0,9% раствором натрия хлорида приводила к восстановлению синтеза альбумина в печени, уменьшению первичной (гидрофильной) интоксикации, росту ОКА и снижению общей интоксикационной нагрузки. Данный механизм связан лишь со снижением поступления токсинов из очага воспаления в кровоток, но не влияет на механизмы вторичной (гидрофобной) интоксикации организма.

В опытной группе животных, где в лечении был использован натрия гипохлорит уже на 3-й сутки показатели ИТ достоверно не отличались от контрольных данных (р>0,05), что связано с окислением токсинов и улучшением большинства показателей эндогенной интоксикации.

Общеизвестно, что перитонит сопровождается образованием избыточного количества активных форм кислорода (АФК) с развитием синдрома эндогенной интоксикации. Развитие процессов пероксидации на мембране приводит к накоплению цитотоксичных вторичных продуктов окисления и, несмотря на сохранение компенсации со стороны антиоксидантной системы и отсутствие явлен ий оксидативного стресса, к возрастанию процента поврежденных клеток и возникновению условий для образования дополнительных каналов проницаемости (кластеров), приводящих к изменению клеточного гомеостаза с последующим их разрушением.

Исследование осмотического гемолиза эритроцитов в контрольной группе животных позволили выделить три фракции эритроцитов с различной степенью осмотической проницаемости: 1) слабоустойчивые, когда гемолиз эритроцитов наступал при воздействии 0,1-0,3% раствора №С1; 2) среднеустойчивые, когда гемолизом возникал при воздействии 0,3-0,45% раствора ЫаС1 и 3) сильноустойчивые, с гемолизом после воздействия 0,450,6% раствора КаС1. Полученные результаты согласуются с данными о более высокой интенсивности разрушения «старых» форм эритроцитов по сравнению со «средними» и «молодыми» формами. ^ На фоне разрушения эритроцитарных мембран «старых» форм эритроцитов появляются клетки с высокой осмотической резистентностью мембраны. Об этом говорит сдвиг максимума осмотической проницаемости эритроцитарных мембран при 24-часовом желчном перитоните в каждой возрастной группе эритроцитов в сторону уменьшения концентраций ИаСЬ Подобная направленность изменений подтверждается и ростом скорости гемолиза с 6,22/0,1% ЫаС1 у контрольных животных до 7,55/0,1% №С1 у животных с желчным перитонитом и уменьшение концентрации 50%-го гемолиза с 0,40% №С1 у контрольных животных до 0,36% у животных с желчным перитонитом. С одной стороны, разрушение менее резистентных «старых» форм эритроцитов можно объяснить тем, что процессы свободнорадикального окисления изменяют фосфолипидное окружение в фермент—ион-транспортной АТФ-азе эритроцитарных мембран и, как следствие, его активность.

Интересным на наш взгляд представляется то, что усредненные по группа кумулятивные кривые осмотического гемолиза эритроцитов контрольных животных и животных с 24-часовым желчным перитонитом имеют вид, близкий к линейной. При этом индивидуальные кривые осмотического гемолиза эритроцитов контрольных животных и животных с желчным перитонитом имеют характерный для гемолитических кривых 8-образный вид, отражающий наличие фракций эритроцитов разного возраста и разной гемолитической стойкостью.

Таким образом, разрушение менее резистентных «старых» форм эритроцитов при экспериментальном желчном перитоните, во-первых, можно объяснить процессами свободнорадикального окисления и изменениями активности ион-транспортных АТФ-аз эритроцитарных мембран, приводящих к повышению их осмотической проницаемости и, во-вторых, запуском адаптационно-компенсаторного механизма стимуляции эритропоэза красного костного мозга с выходом в сосудистое русло «молодых» форм эритроцитов, более устойчивых к гемолизу.

У животных с экспериментальным желчным перитонитом в группе сравнения на 1-е сутки от начала лечения отмечался рост содержания «слабоустойчивых! форм эритроцитов. Одновременно у животных опытной группы кривая имела относительно сглаженный характер с ростом «слабоустойчивых» и «сильноустойчивых» эритроцитов с падением «среднеустойчивых» эритроцитов. На 3-е сутки у животных в группе сравнения отмечался рост количества «среднеустойчивых» клеток и снижение «слабоустойчивых» форм эритроцитов. У животных в опытной группе наблюдалось уменьшение количества «среднеустойчивых» эритроцитов. К 7-м суткам, как в группе сравнения, так и в опытной группе происходит относительный рост «слабоустойчивых» форм эритроцитов.

Таким образом, развитие свободно-радикального окисления наблюдаемое в группе сравнения, по-видимому, связано с низким уровнем антиокислительной активности плазмы, в то время, как в основной группе развитие процессов перекисного окисления липидов имеет регуляторный характер и направлено на модификацию мембран эритроцитов, обеспечивающих уменьшение токсических эффектов и саморегуляцию окислительных процессов цитозольными сульфгидрильными группами. Отсюда можно предположить, что использование натрия гипохлорита при лечении животных опытной группы усиливает окислительный эффект и приводит к элиминации эритроцитов с поврежденной мембраной, что далее сопровождается ранним восстановлением нормального соотношения эритроцитов в сосудистом русле.

Общеизвестно, что ось гипоталамус-гипофиз-кора надпочечников-щитовидная железа является основным эффектором стрессовой реакции.

Для изучения динамики стрессорной реакции у животных с экспериментальным желчным перитонитом нами был исследован уровень кортизола в сыворотке крови.

Так, у животных с 24-часовым экспериментальным желчным перитонитом уровень кортизола в крови возрастал приблизительно в 2 раза относительно контрольных животных (р<0,05). В последующие сроки уровень кортизола, как в группе сравнения, так и в опытной группе постепенно снижался и приходил к контрольным цифрам к 10-м суткам наблюдения (р>0,05). Однако необходимо отметить, что на 10-е сутки уровень кортизола в опытной группе уже достоверно превышал уровень кортизола у животных в группе сравнения (р<0,05), что является неспецифической реакцией адаптации на внутривенное применение натрия гипохлорита.

Общеизвестно, что тиреоидные гормоны играют существенную роль в процессах регуляции разнообразных клеточных и физиологических функций организма.

У животных с экспериментальным желчным перитонитом уровень ТТГ в крови находился в пределах допустимых норм- (феномен «низкого нормального тиреотропного гормона»). Примерно у 30% животных его не удалось выявить. Вместе с тем, при изучении количества животных с определяемым количеством ТТГ (ТТГ - позитивные животные) было обнаружено, что при лечении 24-часового желчного перитонита у относительного количества таких животных уровень ТТГ был достоверно значимым (р<0,05).

Так, в. группе животных с 24-часовым желчным, перитонитом отмечалась некоторая тенденция к уменьшению доли ТТГ-позитивных животных (р>0,05). В группе сравнения, относительная доля ТТГ-позитивных животных во все сроки наблюдения достоверно не .отличалась от контрольных животных (р>0,05), в то время, как в опытной группе их доля с 3-й по 10-е сутки-были достоверно значимыми (р<0,05), как относительно контрольной группы животных, так и относительно животных с 24-часовым желчным перитонитом.

Исследование уровня содержания общего тироксина в крови животных с 24-часовым желчным перитонитом показало его достоверное уменьшение в 2 раза по сравнению с контрольной группой (р<0,05). В последующие сроки, как в группе сравнения, так и в опытной группе после начала лечения наблюдался рост содержания общего тироксина. При этом в группе сравнения данный рост приходил к контрольным величинам только на 10-сутки, в то время, как в опытной группе - уже на 3-й сутки наблюдения (р>0,05).

Необходимо отметить, что, несмотря на важность и необходимость содержания общего тироксина в крови, физиологическим действием обладает только свободная - не связанная с белками-переносчиками — фракция этих биологически активных веществ. /

Так, у животных с 24-часовым экспериментальным желчным перитонитом наблюдалось достоверное уменьшение содержания свободного тироксина в крови до 10,2±1,9 пмоль/л против 19,7±2,6 пмоль/л у контрольных животных (р<0,05).

На 1-е сутки с момента начала лечения в группе сравнения и опытной группе уровень содержания свободного тироксина остается достоверно ниже, как контрольных величин, так и результатов у животных с 24-часовым желчным перитонитом (р<0,05). В последующие сроки у животных группы сравнения вплоть до 10-х суток наблюдения уровень свободного тироксина был достоверно ниже показателей контрольной группы, и только к 30-м суткам он приходил к контрольным данным (р>0,05). У животных опытной группы уже на 3-й сутки наблюдалась нормализация уровня свободного тироксина в крови (р>0,05).

Таким образом, более раннюю нормализацию уровня общего тироксина по сравнению со свободным тироксином в опытной группе можно объяснить, как гипопротеинемией при развитии экспериментального желчного перитонита, так и возможным окислением свободного тироксина натрия гипохлоритом.

Лечение животных с 24-часовым желчным перитонитом показало достоверное снижение содержания общего трийодтиронина до 1,2±0,3 пмоль/л против 2,3±0,2 пмоль/л (р<0,05) у контрольных животных. В ходе дальнейших исследований концентрация общего трийодтиронина в плазме крови, как в группе сравнения, так и в опытной группе оставалась достоверно низкой относительно контрольных данных (р<0,05). Такое явление получило название синдрома «Ьо\у-ТТз» или синдрома эутиреоидной патологии (СЭП). В то же время, необходимо отметить, что в опытной группе животных содержание общего трийодтиронина в течение первых трех суток достоверно превышала уровень данного гормона у животных в группе сравнения (р<0,05). Данное обстоятельство свидетельствует, что более раннее увеличение общего тироксина в опытной группе указывает на стимуляцию репаративных процессов и синтеза белка в печени. Необходимо также отметить и на стабилизацию уровня кортизола у животных опытной группы, что свидетельствует об уменьшении выраженности неспецифического системного ответа на повреждение.

Таким образом, можно предположить, что развитие СЭП направлено на активацию регуляции негеномных эффектов тиреоидных гормонов, в то время, как снижение уровня ТТз может служить как реакция адаптации, направленная на сохранение энергии и белка в организме. Поэтому тяжесть основного заболевания, как правило, коррелирует с выраженностью этих гормональных изменений.

В настоящее время концепция, предполагающая исключительно повреждающее влияние АФК на функционирование клетки, пересматривается, в связи, с чем широкую известность приобрёл термин «окислительная регуляция», отражающий активную роль окислительно-восстановительной модификации протеинов в регуляции гомеостаза (.Г.НасШас!, 2002). Исходя из вышеизложенного, можно предположить, что окисленные молекулы протеина в результате воздействия на них натрия гипохлорита являются «сигналами», несущими биологическую информацию на структуры гипоталамуса и гипофиза, необходимую для регуляции клеточных функций гомеостаза. Кроме того, нельзя исключить прямого модифицирующего влияния этих веществ непосредственно на железы внутренней секреции. Эти сложные вопросы, несомненно, требуют дальнейшего детального изучения. В связи с этим одной из целей данной работы явилось проведение поиска показателей, величина которых связана с динамикой изменений уровня гормонов.

Так, при анализе взаимосвязи динамики изучаемых гормонов показано, что концентрация кортизола отрицательно коррелирует с общим (г= -0,75; р<0,001) и свободным тироксином (г= -0,70; р<0,001), что соответствует пониманию механизма развития СЭП. В то же время, существует достоверная связь между концентрациями общего и свободного тироксина (г=0,62; р<0,001), что отражает механизм десорбции активной молекулы тироксина с таких белков-переносчиков, как тироксин-связывающий глобулин. Кроме того, обнаружена достоверная слабая отрицательная связь между концентрацией ТТГ и общего трийодтиронина (г= -0,39; р=0,036). Данный факт становится понятным, если учесть, что трийодтиронин в последние годы начинают рассматривать как основной гормон щитовидной железы, а тироксин — как прогормон.

Известно, что активность тиреоидных гормонов подвержена обратной саморегуляции - рост концентрации • гормонов ингибирует синтез тиреотропного гормона, а при низкой их концентрации синтез тиреотропного гормона вновь активируется. Таким образом, отрицательная корреляция ТТГ и трийодтиронина, и отсутствие достоверной корреляции ТТГ с общим (г=0,28; р=0,128) и свободным тироксином (г=0,14; р=0,460) служат еще одним доводом в пользу того, что основной гормон щитовидной железы -трийодтиронин.

Для сопоставления изученных в работе показателей, которые могли бы наиболее достоверно отражать состояние секреции гормонов в крови, нами был проведен корреляционный анализ средних величин изучаемых признаков при экспериментальном желчном перитоните.

Учитывая, что развитие перитонита сопровождается снижением функциональной способности органов детоксикации, стрессовым истощением эндокринных органов и гемокоагуляционными расстройствами были проведены гистологические, гистохимические и морфометрические исследования печени и надпочечников при лечении экспериментального желчного перитонита.

У животных с 24-часовым желчным перитонитом морфологические изменения в печени характеризовались наличием воспалительного отека, дискомплексацией гепатоцитов, мелкокапельной жировой и гиалиново-капельной дистрофии. Воспалительные изменения проявлялись стазом эритроцитов в просвете сосудов, формированием эритроцитарных, гиалиновых, фибриновых и смешанных тромбов, наличием диапедезных и очаговых кровоизлияния в паренхиме печени. Гистохимические исследования выявили очаги фибриноидного некроза на серозном покрове и субкапсулярном пространстве печени, покрытые тонкой фибриновой пленкой из «зрелого» фибрина. В просвете сосудов выявлялись фибриновые агрегаты, выполненные «зрелым» фибрином. В портальных трактах отмечалось фибриноидное набухание и некроз с отложением «зрелого» фибрина, а в периваскулярных пространствах центральных вен и портальных трактов определялись лимфо-гистиоцитарные инфильтраты.

Таким образом, гистологические исследования печени у животных с 24-часовым желчным перитонитом выявили картину серозно-фибринозного воспаления с нарушением микроциркуляторного русла в виде стаза, появления эритроцитарных агрегатов, образования эритроцитарных и фибриновых тромбов, выполненных фибрином, что свидетельствовало о наличии объективных признаков ДВС-синдрома.

На 1-е сутки лечения у животных в группе сравнения сохранялся отек межуточной ткани и дискомплексация гепатоцитов. При этом в группе сравнения отмечалась выраженная воспалительная реакция сосудистого русла по типу венозного полнокровия, проявляющаяся расширением сосудов, стазами, агрегацией эритроцитов, краевым стоянием лейкоцитов, редкими эритроцитарно-фибриновыми тромбами в венах триад, в то время как в опытной группе, воспалительная сосудистая реакция была менее выраженной и характеризовалась отсутствием тромбов и активной миграцией лейкоцитов в периваскулярные пространства. При гистохимическом исследовании у животных группы сравнения в портальных трактах и межуточной ткани определялись дистрофически измененные участки, дающие положительную реакцию на «старый» фибрин, а в опытной группе преимущественно на «зрелый» фибрин, что, по-видимому, связано с активацией процессов фибринолиза в печени под действием натрия гипохлорита.

На 3-й сутки в исследуемых группах сохранялся отек межуточной ткани и реакция сосудистого русла на воспаление, усиливались дистрофические и некротические процессы. В группе сравнения инфильтрат был представлен в основном лимфоидными клетками, а в опытной группе — гипертрофированными купферовскими клетками с редкими очагами молодой грануляционной ткани. Гистохимическое исследование животных в группе сравнения выявляло наложения «зрелого» фибрина на капсуле печени, в то время как в опытной группе - «старый» фибрин.

На 10-е сутки в группе сравнения в большой степени, а в опытной группе в меньшей степени выраженности сохранялся отек межуточной ткани печени, дистрофические и некробиотические изменения, очаги дискомплексации гепатоцитов, полиморфноклеточная инфильтрация с преобладанием лимфоидных клеток и гистиоцитов. Пролиферативные процессы в фибробластах животных группы сравнения носили умеренный характер, а в опытной группе среди недифференцированных клеток грануляционной ткани выявлялось значительное количество гипертрофированных фибробластов. Гистохимические исследования в группе сравнения выявили очаги некроза с отложением «зрелого» и «старого» фибрина с преобладанием «зрелого» фибрина, в то время как в опытной группе определялся только «старый» фибрин.

На 30-е сутки исследования в группе сравнения на фоне нормализации структуры паренхимы печени определялись очаги дискомплексации и жировой дистрофии гепатоцитов, участки зрелой грануляционной ткани, клетки лимфоидно-гистиоцитарного звена и очаги склероза, что указывало на цирротические процессы. В опытной группе сохранялись единичные лимфоидно-гистиоцитарные клетки в портальных трактах, слабо выраженные дистрофические изменения по периферии печеночных долек, двуядерные и значительное количество гипертрофированных гепатоцитов, что указывало на остаточные репаративно-пролиферативные процессы паренхимы печени. При гистохимическом исследовании печени у животных в группе сравнения в участках фиброза определялись отложения «старого» фибрина, в то время, как у животных опытной группы он отсутствовал.

Общеизвестно, что помимо прямого действия токсинов на органы-мишени, все большую роль в патогенезе и морфогенезе эндогенной интоксикации отводиться нарушениям нейрогуморального баланса. Поскольку эндокринным органам отводится ведущая роль в опосредовании стрессорных нейроэдокринных реакций на повреждение, особый интерес представляет изучение морфофункциональных изменений в надпочечниках, поскольку, исследования в этом направлении может привести к расширению современных представлений о патогенезе развития эндогенной интоксикации, его органах-мишенях, подходах к диагностике и патогенетической коррекции выявленных нарушений.

Морфологические изменения в надпочечниках у животных с 24-часовым желчным перитонитом характеризовались отсутствием четкости границ между корковым и мозговым веществом, отеком и очагами набухания в корковом веществе, а также вакуолизация клеток мозгового вещества. При гистохимическом исследовании в корковом и мозговом веществе наблюдалось полнокровие сосудов, стазы и агрегация эритроцитов с образованием фибриновых микротромбов из «зрелого» фибрина.

Таким образом, к основным проявлениям дисметаболического и дисрегуляторного повреждения у животных с 24-часовым желчным перитонитом в надпочечниках определялось развитие выраженных сосудистых реакции на границе мозгового и коркового вещества с развитием прогрессирующего истощения эндокриноцитов.

При микроскопическом исследовании надпочечников на 1-е сутки лечения в изучаемых группах сохранялась воспалительная сосудистая реакция в виде мезенхимального отека, расширение капилляров, стаз и агрегация эритроцитов, образование фибриновых микротромбов в венулах коркового и мозгового вещества, причем перечисленные изменения наиболее ярко были выражены у животных в группе сравнения. Гистохимические исследования, проведенные в группе сравнения на фоне дистрофически измененных соединительнотканных структур мозгового вещества надпочечников определяли отложения «зрелого» и «старого» фибрина, в то время как в опытной группе - преимущественно «старый» фибрин.

На 3-й сутки в исследуемых группах в корковом веществе надпочечников сохранялась воспалительная сосудистая реакция, более выраженная в группе сравнения. При этом в клубочковой и сетчатой зонах коркового вещества наблюдались очаговые кровоизлияния, а в мозговом веществе - глобулярные тромбы. В группе сравнения сохранялась полиморфноклеточная инфильтрация с пролиферацией лимфоидно-фибробластического звена, в то время, как в опытной группе — превалировали лимфоцитарно-гистиоцитарное звено с активацией макрофагов. В опытной группе животных в мозговом веществе надпочечников отмечалась молодая грануляционная ткань. При гистохимическом исследовании в группе сравнения и опытной группе на капсуле надпочечников, в корковом и мозговом веществе выявлялись отложения «зрелого» и «старого» фибрина.

На 10-е сутки наблюдения в изучаемых группах наблюдалась умеренная воспалительная реакция, более выраженная в группе сравнения, в которой отмечались пролиферация, атрофические и очаговые некробиотические изменения в клубочковой зоне коркового и железистого эпителия мозгового вещества. При этом в опытной группе в свою очередь выявлялась умеренная вакуольная дистрофия железистого эпителия пучковой зоны коркового слоя, а также его компенсаторная гипертрофия. В мозговом веществе надпочечников у животных в группе сравнения выявлялась массивная полиморфноклеточная инфильтрация с преобладанием лимфоцитов, макрофагов и пролиферацией фибробластов, а в опытной группе — лимфоцитарно-макрофагальная инфильтрация, которая захватывала только мозговое вещество и клубочковую зону надпочечников. Гистохимические исследования показали, что в группе сравнения, по-прежнему, отмечались очаговые отложения «зрелого» и «старого» фибрина, в то время как в опытной группе наблюдались лишь редкие фрагменты «старого» фибрина.

При гистологическом исследовании на 30-е сутки в группе сравнения наблюдали очаговые фиброзные изменения коркового вещества надпочечников, диффузную атрофию железистого эпителия с уменьшением клубочковой зоны, очаговые фиброзные изменения мозгового вещества, умеренную лимфоидно-макрофагальную инфильтрацию и пролиферацию фибробластов. В опытной группе определялись регенеративно-пролиферативные процессы в паренхиматозных и мезенхимальных клеточных структурах коркового и мозгового вещества надпочечников с сохранением архитектоники органа. При гистохимическом исследовании надпочечников в группе сравнения отмечались очаговые наложения «старого» фибрина на капсуле и в очагах фиброза и его отсутствие в опытной группе.

Завершая обсуждение полученных результатов, необходимо подчеркнуть, что на основании проведенных морфофункциональных исследований у животных с 24-часовым желчным перитонитом в печени и надпочечниках были выявлены изменения, указывающие на развитие серозно-фибринозного воспаления, выраженные альтеративные и сосудисто-экссудативные проявления в виде отека межуточной ткани, лейкоцитарной инфильтрации, дистрофических и некробиотических изменений. В сосудистом русле наблюдались микроциркуляторные расстройства, проявляющиеся полнокровием капилляров, стазами, агрегацией эритроцитов с образованием эритроцитарно-фибриновых тромбов, указывающие на наличие признаков ДВС-синдрома. Комплексное лечение экспериментального ЖП с использованием натрия гипохлорита способствовало стимуляции регенеративно-пролиферативных процессов и нормализации гемокоагуляционных расстройств в печени и надпочечниках с сохранением архитектоники органов.

Для подтверждения полученных морфологических и гистохимических изменений у животных с экспериментальным желчным перитонитом были проведены морфометрические исследования с использованием л планиметрического метода определения средних размеров (СР, мкм ) и объемной доли (ОД, %) «зрелого» фибрина в печени и надпочечниках.

Морфометрические исследования показали достоверное увеличение СР и ОД «зрелого» фибрина в печени и надпочечниках у животных с 24-часовым желчным перитонитом относительно животных контрольной группы (р<0,05), у которых «зрелый» фибрин не выявлялся. Полученные данные свидетельствовали, что у животных с желчным перитонитом в исследуемых органах определялись ранние признаки гемокоагуляционных расстройств в микроциркуляторном русле.

В процессе дальнейшего исследования нами были проведены морфометрическое исследование СР и ОД «зрелого» фибрина в печени и надпочечниках при лечении животных с 24-часовым желчным перитонитом.

Так, у животных в группе сравнения начиная с первых суток лечения, I наблюдался рост СР и ОД «зрелого» фибрина в печени, который достигал максимальной величины на 3-й сутки, превышая приблизительно в 2 раза исследуемые параметры «зрелого» фибрина у животных с 24-часовым желчным перитонитом. На 10-е сутки заболевания наблюдалось достоверное снижение СР «зрелого» фибрина, который однако, по-прежнему, достоверно превышал данный показатель животных контрольной группы (р<0,05). К 30-м суткам наблюдения морфометрические изменения СР и ОД «зрелого» фибрина в группе сравнения приходили к норме.

В опытной группе животных морфометрические измерения также показали достоверный рост СР и ОД «зрелого» фибрина в печени вплоть до 3-х суток относительно животных с 24-часовым желчным перитонитом (р<0,05). Однако, данный рост показателей был достоверно ниже этих же данных у животных группы сравнения (р>0,05). На 10-е сутки наблюдения СР и ОД «зрелого» фибрина, приблизительно в 2 раза были ниже чем у животных группы сравнения (р<0,05). Также как и в группе сравнения, в опытной группе СР и ОД «зрелого» фибрина в печени достигали нормальных величин к 30-м суткам лечения, что свидетельствовало о прекращении его новообразования и стихании воспалительного процесса в печени.

Исследование морфометрических изменений в надпочечниках при лечении животных с 24-часовым желчным перитонитом в группе сравнения также показали достоверный рост СР и ОД «зрелого» фибрина.

Как и в печени, максимальные морфометрические изменения в надпочечниках приходились на 3-й сутки, когда СР и ОД «зрелого» фибрина более чем в 2 раза превышали размеры у животных с 24-часовым желчным перитонитом (р<0,05). На 10-е сутки заболевания наблюдалось достоверное снижение СР и ОД «зрелого» фибрина, относительно предыдущих сроков, которые однако, по-прежнему, достоверно превышали величину животных контрольной группы (р<0,05). К 30-м суткам наблюдения морфометрические изменения СР и ОД «зрелого» фибрина в надпочечниках снижались, но продолжали оставаться достоверно высокими по сравнению с животными контрольной группы (р<0,05).

В опытной группе животных морфометрические измерения также показали достоверный рост СР и ОД «зрелого» фибрина в надпочечниках вплоть до 3-х суток, где то в 1,5 раза превышая показатели животных с 24-часовым желчным перитонитом. На 10-е сутки наблюдений СР и ОД «зрелого» фибрина составляла 38,2±10,0 мкм2 и 3,6±0,7% против 111,3±13,6 мкм и 10,7±0,6% соответственно, что приблизительно в 3 раза ниже чем у животных группы сравнения (р<0,05). На 30-е сутки наблюдения в надпочечниках морфометрические изменения СР и ОД «зрелого» фибрина приходили к норме.

Таким образом, морфометрические исследования печени на фоне проводимых лечений показали полное восстановление гемокоагуляционных расстройств, в то время как в надпочечниках данная нормализация происходила только в опытной группе.