Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Коагуляционная способность крови при некоторых аллергических процессах в эксперименте

АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР ИНСТИТУТ ОБЩЕЙ ПАТОЛОГИИ И ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ ФИЗИОЛОГИИ

На правах рукописи

КУЛИЕВА ЗЕМФИРА МАРДАН кызы

КОАГУЛЯЦИОННАЯ СПОСОБНОСТЬ КРОВИ ПРИ НЕКОТОРЫХ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССАХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

14.00.16 — Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА — 1981

| ^

г» ' , ш

Работа выполнена на кафедре общей клинической патологии Азербайджанского государственного института усовершенствования врачей им. А. Алиева.

Научный руководитель — Заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук, профессор С. А. Гулиева.

Официальные оппоненты — доктор медицинских наук Ю. Т. Пономарев.

— доктор медицинских наук Г. Н. Сушкевич.

Ведущее учреждение — Центральный научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови.

Автореферат разослан „ " . _19&£-г.

Защита диссертации состоится „ ь_часов на заседании Специализированного совета.

шифр Д-001.03.01, при Институте общей патологии и патологической физиологии АМН СССР (Москва, 125315, Балтийская ул., 8).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института.

Ученый секретарь Специализированного Совета, кандидат медицинских наук

Л. Н. СКУРАТОВСКАЯ

Отдел ЦЮЗЧТЙЧЙП

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Учение об аллергии в настоящее время стало одним из крупнейших разделов теоретической и практической медицины.

Несмотря па большие успехи, достигнутые в последнее время в изучении аллергии, многие вопросы этиологии и патогенеза аллергических заболевании до сих пор остаются нераскрытыми. Особенно это касается неспецифпческих изменении в организме, которые во многом определяют особенности течения и исход аллергических состояний, обеспечивают пуск, стадийность реакций, формируют функциональный фон, на котором развертывается специфический процесс. Среди ие-спецпфпческих проявлений, которые имеют значение в развитии реакций повышенной чувствительности, значительный интерес представляют нарушения со стороны системы гемостаза.

В последние годы вопрос об участии системы гемостаза в механизмах иммунологических реакций организма становится предметом пристального внимания специалистов различных медико-биологических дисциплин. Это обусловлено успехами молекулярной биологии, трансплантации органов и тканей п возрастанием заболеваний аллергической природы. Несмотря па то, что клинике и патогенезу аллергических реакции посвящено немало исследований, механизмы возникновения и развития геморрагического синдрома при этих заболеваниях нельзя считать достаточно изученными. Анализ данных литературы, касающейся исследований системы гемостаза при аллергических реакциях, выявляет различия в методических и методологических подходах исследователей. К ним относятся, в частности, разнообразие биологических объектов исследований, экспериментирование и теоретизирование и различные периоды сенсибилизации и др., что не позволяет составить достаточно четких представлений об участии системы гемостаза в аллергическом процессе н других его проявлений. Одной из характеристик аллергических реакций является геморрагический синдром, который в значи-

тельной мере определяет тяжесть патологического процесса и, нередко, является реализующим в исходе заболевания. В этой связи очевидно, что участие системы гемостаза необходимо для разработки патогенетически обоснованных мероприятий по предотвращению геморрагических проявлений при аллергических процессах.

Состояние вопроса, цель и задачи исследований. Как и

при изучении геморрагических диатезов вообще, важное значение в развитии геморрагического синдрома при аллергических реакциях придается изменениям функционального состояния системы гемостаза в целом: мегакариоцитарно-тром-боцитарпого аппарата, факторам свертывания крови, стенки сосудов, тканевого, кровообращения и др. функциональным расстройствам, реализующимся в нарушения кровяного и сосудистого компонентов системы гемостаза (Д. М. Зубаи-ров, 1959, 1978; К. Раби, 1974; В. П. Балуда, 1977, 1979; Hardaway. 1967; Lambotte, Lecompte, 1969; Mustard et al., 1970; Müller-Berghaus et al., 1976; Lipinski, 1976; Müller-, Eckhardt et al., 1968, 1978; Lüscher, Pflüeller, Massini, 1978 и-др.).

Под системой гемостаза понимают регулируемые нервной и эндокринной системами организма взаимоотношения крови и сосудов, обеспечивающие жидкое состояние крови в циркуляции и быструю остановку кровотечения при нарушении целостности сосудов (А. А. Маркосян, 1970; Б. А. Кудря-шов, 1975; В. П. Балуда, 1976; Д. М. Зубапров, 1978; Mustard, Packhain, 1970 и др.).

Согласно исследованиям Д. Е. Альперна (1936 — 1967), А. Д. Адо (1938 — 1978), Т. В. Митнной (1963, 1969), С. М. Павленко (1961, 1966), Е. П. Фролова (1967—1977), Brocklehurst (1975) и др., при экспериментальной ;аллергип ■ наблюдается и изменение тонуса вегетативной нервной системы, ненрогуморалыюй регуляции и функций отдельных органов.

Нарушения способности крови к свертыванию при экспериментальной аллергии были обнаружены уже в первых исследованиях при анафилаксии у собак и кроликов в 1903 году М. Артюсом. Замедление свертывания крови при остром анафилактическом шоке, сенсибилизации и местных проявлениях анафилаксии типа феномена Аргюса отмечали многие исследователи. Однако данные литературы по этим вопросам

противоречивы, скудны- я- не вносят определенной ясности. Проблема во многом остается неясной, поскольку большую значимость имеют не изменения отдельных факторов свертывающей системы крови, а процессы, в которые вовлекается . система гемостаза в целом при сенсибилизации (Mustard, Evans et al., 1969; Mustard', Packham, 1970; Раби, .1974; В. П. Балуда, 1976, 1977 н др.).

Важная роль в системе гемостаза отводится тромбоцитам с адсорбированными на их поверхности плазменными факторами крови — «плазматическая атмосфера» тромбоцитов, которые в первую очередь принимают участие в гемостатичес-ких реакциях и занимают основные позиции почти во всех реакциях крови на повреждение (В. П. Балуда, И. А. Онвпн, 1968; А. А. Маркосян, 1970; Ю. Т. Пономарев, 1971; Ч. С. Гусейнов, 1971, 1975 и др.; Marx, 1964; Мс Lean et al., 1964; Roskam, 1965; Packham et al., 1968; Mustard et al.. 1969; 1970; Walsch, 1974 и др.). Возникновение геморрагических диатезов связывается не только со снижением количества тромбоцитов в циркуляции, но и с нарушением их функциональных свойств — способности к адгезии, агрегации и вязкому метаморфозу.

Отсутствие данных о закономерности и выраженности нарушений функционального состояния системы гемостаза и, прежде всего, функциональных свойств тромбоцитов, способности тромбоцитов к гемостатнчсским реакциям, является существенным пробелом теоретической медицины, не позволяющее разработку, патогенетически обоснованных мероприятий по предотвращению геморрагических проявлений при аллергических реакциях.

В связи с этим целыо нашего исследования явилось выявление особенностей изменений коагуляцнонной способности крови в динамике развития белковой сенсибилизации и феномена Артюса. Были поставлены следующие конкретные задачи:

1. Выявление закономерностей нарушений гемокоагуля-цин в патогенезе реализации иммунологических процессов.

2. Выявление характера и выраженности нарушений функциональных свойств тромбоцитов в динамике развития белковой сенсибилизации и феномена Артюса в зависимости от периода сенсибилизации и выраженности гиперергнческого воспаления.

3. Сопоставление и выявление связи между нарушением коагуляцнонноп способности крови и специфическим проявлением аллергической реактивности, показателем которого служил титр прецшштинов и титр протпвоткапевых аутоан-тител, определяемые соответственно реакцией кольцснрсци-шгглцни и реакцией пассивной гемагглютинацун но Во]с1еп.

Научная новизна. Новым в настоящем исследовании является то, что изучение общей коагуляцнонноп способности крови проводилось одновременно с исследованием функциональной активности тромбоцитов, играющих важную "роль в процессе гсмокоагуляцпи, в различные сроки развития аллергической реакции, начиная с самых ранних периодов развития сенсибилизации и гиперергического воспаления и кончая в периоды почти полного восстановления функций организма. Это было сделано с целыо определения зависимости нарушений коагуляционпой способности крови и функциональной активности тромбоцитов от степени иммунологической перестройки организма, а также для сравнительное! опенки направленности обнаруженных изменений.

Настоящая работа является более углубленным изучением механизмов, ранее установленных другими авторами нарушений гсмокоагуляцпи при аллергических процессах. Исследования имеют значение для клинической аллергологии при разработке патогенетически обоснованных мероприятии по предотвращению геморрагических диатезов при аллергических реакциях.

Установлено, что изменения коагуляционпой способности крови, отмеченные через сутки после первой же сенсибилизирующей инъекции и. л. с. у кроликов, предшествуют, опережают по времени в своем разыпшг формирование иммунного ответа, а затем находятся с ними в сппергнческой взаимосвязи, обусловливая развитие тромбсеморрагического синдрома. Выявленные изменения могут служить дополнительным диагностическим фактором скрытой сенсибилизации организма с последующим увеличением частоты аллергических реакций.

Выявлена стойкая, стабильная и необратимая агрегация тромбоцитов, развивающаяся уже через сутки после первой же сенсибилизирующей инъекции антигена на фоне пониженной адгсзнвностн тромбоцитов, выраженной тромбоцпто-пепнн и дальнейших общих выраженных гппокоагулятивпых сдвигов по всем изучаемым показателям, что позволяет с большой достоверностью утверждать о ведущей натогепетиче-

ской роли этого фактора как одного из звеньев в возникновении тромбозов мелких кровеносных сосудов.

Установлена прямая зависимость между выраженностью аллергического воспаления", степенью повышения концентрации фибриногена и величиной агрегации тромбоцитов, между величиной агрегации тромбоцитов и активностью фпбрино-лиза.

Показано, что в процессе развития белковой сенсибилизации имеет место как гипер-, так и гипокоагуляция, и все зависит от периода сенсибилизации и развития феномена Ар-тюса, от времени наблюдений.

Следовательно, и рекомендации проведения клинических мероприятий должны основываться па конкретных данных лабораторных исследований и определяться в каждом отдельном конкретном случае, т. е. динамика патологических изменений со стороны функционального состояния системы гемостаза исключает однозначность рекомендаций по устранению нарушений коагуляционной способности крови. Поэтому, патогенетическим средством борьбы с коагулопатпями при иммунологических процессах является своевременное назначение соответствующих препаратов, обладающих антнтромбпновым действием и снижающих функциональную активность тромбоцитов, что обоснованно можно рекомендовать па основании проведенных исследований.

Практическое значение исследования. Полученные данные имеют значение для клинической аллергологии, поскольку углубляют представление о сложных патогенетических механизмах развития гнперчувствнтелыгасти, в какой-то степени раскрывают причинно-следственные нарушения системы гемостаза, раскрывают сущность подготовительной гпперергп-ческой реакции Артюса, доказывают участие тромбоцитов в формировании гииерергпческого воспаления, выраженность изменений которых в значительной мерс определяет тяжесть течения и исход заболевания, что обоснованно позволяет рекомендовать употребление ингибиторов агрегации тромбоцитов.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на заседаниях Азербайджанского научно-медицинского общества патофизиологов (октябрь, 1974; октябрь, 1975, апрель, 1978), на IV Закавказской конференции патофизиологов в Баку (1975), па 11 Всесоюзном съезде патофизиологов в Ташкенте (1970), на Всесоюзной конференции по дыхательной недостаточности в Куйбышеве (1977).

Реализация. Материалы диссертации используются при чтении курса лекций по патологической физиологии в Азербайджанском Государственном институте усовершенствования врачей им. А. Алиева.

Объем работы. Диссертация изложена на 206 страницах машинописи и состоит из: введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы. Работа содержит: 114 страниц текста, 12 таблиц (20 страниц), 19 фотоснимков (14 страниц). Указатель литературы (58 страниц) включает 621 источников (320 — отечественных и 301 — зарубежных).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены па 164 половозрелых здоровых кроликах «Шиншилла» обоего пола, весом 2800—3500 г. Сенсибилизация кроликов проводилась по общепринятой методике — трехкратным, с интервалом в 2 дня, введением нормальной лошадиной сыворотки без консерванта, из расчета 0,5 мл на 1 кг веса животного. Критерием степени сепсибл •лизании служил титр прсцкпитшюв' и противоткаовых ауто-аитител, выявляемые соответственно реакцией кольцепрецнии-тации и пассивной гемагглютпнацни антител (РИГА) по Во]Ч1еп. Период сенсибилизации считался с момента I инъекции сыворотки.

Аллергическое воспаление у кроликов вызывали повторными подкожными инъекциями в область бедра 3 мл нормальной лошадиной сыворотки с интервалом в 5—6 дней. Количество инъекций определялось тканевой реакцией животного. Разрешающей считалась инъекция, вызывающая на месте введения гпперергнческое воспаление.

Кролики в эксперименте были распределены на три серии опытов.

В первой серии опытов изучали показатели коагуляцион-иой способности крови п титра антител на здоровых кроликах (контроль); во второй — в динамике белковой сенсибилизации: через 24 часа после I, II, III сенсибилизирующей инъекции антигена и на 5, 10, 15 дни после последней инъекции нормальной лошадиной сыворотки, и в третьей серии опытов, исследовали показатели коагуляцнонной способности, крови в динамике развития гнперергичсского воспаления (феномена Артюса): через 24 часа после разрешающей инъекции антигена (на высоте аллергического воспале-шя), через 48

часов,на 5 и 15 дин после разрешающего введения и. л. с. (в период угасания аллергического воспаления).

У подопытных животных исследовали: время свертывания крови (Lee, White, 1913), время рскальцнфикацин плазмы (Bergerhoíf, Roka, 1954), толерантность плазмы к гепарину (Marbet, Winterstein, 1957), протромбпновую активность (Quick, 1935), тромбнновос время (Szirniai, 1957), концентрацию фибриногена ( Bidwell, 1953), уровень фибриногена В (Cumniine, Lyons, 1948, в модификации Smith, 1951), активность фактора XIII крови (В. П. Балуда с соавт., 1965), фнб-рпполптическую активность крови (Bidwell, 1953), уровень свободного гепарина (Szirmai, 1957), ретракцию кровяного сгустка, общее количество тромбоцитов — количество адгезивных форм тромбоцитов — адгезивный индекс (Moolten, 1948, в модификации Bobek nCepelak, 1958), агрегацию тромбоцитов (Born, 1962), активность фактора 3 тромбоцитов с помощью теста генерации тромбогтластппа (Biggs, Douglas, 1953, г, модификации М. С. Мачабелп, I960), тромбоэласто-графщо (Hnrtert, 1948), титр прешшитинов реакцией кольце-прецнпнтацнн, титр противооргаиных антител реакцией пассивной гемагглютинацпп (РПГА) (Bojdcn, 1951)

Кровь для исследований у кроликов брали нз краевой пены уха сухим енлнкопированпым шприцем и енлпконирован-hoí'i иглой со скоростью не менее 0,5 мл крови в секунду и с предосторожностями, предотвращающими ее гемолиз и свертывание.

Полученные результаты обрабатывали статистически, методом вариационной статистики (И. А. Ойвин, 1960), Достоверность различии выявлялась по критерию t Стыодента. Результаты считались достоверными при Р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

Результаты проведенных исследований показали, что аллергические реакции организма сопровождаются развитием гппокоагуляцпп, в основе которой лежат нарушения как сосудистого, так и кровяного компонентов системы гемостаза. Снижается способность крови к свертыванию, повышаются ее янтнкоагулянтпые свойства, уменьшается количество тромбоцитов, нарушается их способность к адгезии п агрегации.

Сумма этих изменений, развивающихся по типу тромбоге-моррагпческого синдрома и составляющих сущность подго-

товптелыгой реакции Артюса, вызванной повторными сенсибилизирующими инъекциями антигена,и приводит к нарушениям процессов первичного гемостаза.

Анализ результатов изучения показателей функционального состояния системы гемостаза в динамике развития белковой сенсибилизации показал, что уже через сутки после первой же сенсибилизирующей инъекции и. л. с. способность крови к свертыванию у кроликов, по отношению к контролю, на 45% повышалась (Р<0,01). Нарушения коагуляцнон-яой способности крови вызваны расстройствами во всех фазах свертывания крови, захватывающие его от пускового момента вплоть до нарушения процесса стабилизации фибрина. Об этом же свидетельствуют укорочение времени рекальци-фпкацип плазмы на 22% (Р<0,01), повышение толерантности плазмы к гепарину на 46% (Р<0,01); при этом со стороны тромбоцитов, через 24 часа после первой инъекции и. л. е., снижалось их общее количество на 20% (Р<0,05) и их адгезивная способность на 31% (Р<0,01); агрегация же тромбоцитов повышалась на 15% (Р<0,05). Однако, уже через сутки после-второй инъекции антигена, способность-крови к свертыванию значительно понижалась при сравнении с предыдущим периодом (па 61%), отмечалось удлинение времени рекальцификации плазмы на 32% при сравнении с предыдущим периодом, толерантность плазмы к гепарину снижалась на 52,5%, протромбпновая активность н концентрация фибриногена уменьшались соответственно на 41% и 34,2%, при этом фибрпнолптпческая активность крови на 68% повышалась, активность же фактора XIII при сравнении с предыдущим периодом, на 17% повышалась.

Со стороны показателен, характеризующих функциональное состояние тромбоцитов, через сутки после второй сенсибилизирующей инъекции, при еще более выраженной тром-боцнтопенин (па 27% при сравнении с контролем), (Р<0,01), отмечалось повышение адгезивных форм тромбоцитов на 44% при сравнении с предыдущим периодом и их адгезивной способности на 55% при сравнении с нормой (Р<0,001), превышая показатели предыдущего периода в 2,24 раза. При этом агрегацпониая способность тромбоцитов повышалась па 20% (Р<0,01).

Исследования, проведенные через 24 часа после третьей инъекции антигена, выявили дальнейшее усугубляющееся снижение способности крови к свертыванию по всем изучаемым показателям. Время свертывания крови при-сравненин с

нормой удлинялось на 49% (Р<0,01). Обращало на себя внимание значительное усиление фпбринолнтнческой активности крови — на 129% (п 2,29 раза) (Р<0,02); прн этом концентрация фибриногена повышалась па 30%, отмечалось повышение уровня фибриногена В. Общее количество тромбоцитов через сутки после третьей инъекции, при сравнении с предыдущим периодом, несколько повышалось, оставаясь па 20% (Р.<0,05) ниже нормы, прн этом количество их адгезивных форм понижалось прн сравнении с предыдущим периодом на 29% и было в 1,5 раза ниже, чем в контроле (Р<0,02), отмечалось резкое снижение адгезивной способности тромбоцитов (на 55% при сравнении с предыдущим периодом и па 29% при сравнении с нормой (Р<0,01); однако агрегацпонная способность тромбоцитов, продолжая увеличиваться, па 23% (С0,01) превышала норму.

Через пять дней после последней инъекции антигена выявлялось дальнейшее понижение способности крови к свертыванию (на 134% при сравр^нин с контролем) (Р<0,001); отмечалось дальнейшее, удлинение времени рскальцнфикации плазмы (на 20%) (Р<0,001), снижение протромбиновой активности (па 30%) (Р<0,001), еще большее увеличение уровня свободного гепарина (па 18%) (Р<0,05); повышалась концентрация фибриногена (па 72%) (Р<0,001), достигая максимального значения, наблюдалось дальнейшее увеличение активности фактора XIII крови (на 45%) (Р.<0,01) н уровня фибриногена В. При еще более выраженной тромбоцптопеппп оставалась пониженной их способность к адгезии на 29% (Р<0,01) п уменьшение адгезивных форм тромбоцитов на 40% (Р<0,02); агрегацпонная же активность тромбоцитов, продолжая повышаться, на 27% (Р<0,01) превышала норму. Доказательством нарушения функций тромбоцитов являются также изменения, наблюдаемые прн проведении теста генерации тромбопластпна. Выход тромбопластина во все исследуемые периоды наступал на 2—3 минуты позже, чем у здоровых животных, а активность образовавшегося тромбопластнк:. была низкой п выражалась удлинением времени свертывания субстрата.

Через 10 дней после последней сенсибилизирующей инъекции антигена показатели коагуляции крови, значительно отличаясь от контроля, были в пределах величин предыдущего периода исследований. При пониженном времени свертывания крови на 93% (Р<0,01) и рекальцпфпкацпп плазмы, толерантность плазмы к гепарину снижалась на 88%

(Р<0,001); протромбиновая активность снижалась на 41% при сравнении с нормой (Р<0,001), концентрация фибриногена, оставаясь выше нормы .снижалась на 38% при сравнении с предыдущим периодом, активность фактора XIII, несколько снижаясь, на 18% (Р.<0,05) превышала норму, уровень свободного гепарина, продолжая нарастась, на 20% превышал показатели контроля.

Гемостатпческне расстройства тромбоцитов на десятый день усугублялись. Общее количество тромбоцитов снижалось при сравнении с контролем на 35,5% (Р.<0,001), количество их адгезивных форм — на 56,3% (Р<0,01), индекс адгезивности — па 43,1% (Р<0,001), агрегацнонная же способность тромбоцитов па 35% (Р<0,001) повышалась.

Гипокоагуляция, выявленная в эти периоды исследования, также связана с резким снижением (на 61%) (Р<0,001) активности тромбопластнческого фактора 3 тромбоцитов.

Исследования, проведенные через 15 дней после последней инъекции антигена, выявили приближение к нормальным величинам показателей системы свертывания крови, однако общее количество тромбоцитов, продолжая снижаться, на 41% (Р<0,001) при сравнении с нормой уменьшалось; количество их адгезивных форм и адгезивная способность соответственно — на 74% (Р<0,001) и 48,8% (Р<0,001) снижались; агрегацнонная активность тромбоцитов несколько снижалась, па 19,2% (Р<0,001) превышая норму.

Анализируя экспериментальные данные по изучению свертывающей способности крови, можно заключить, что белковая сенсибилизация сопровождается фазовыми изменениями функционального состояния системы гемостаза. Первичная гиперкоагуляция сменяется понижением коагуляднопной способности крови.

Фактор, запускающий' механизм внутрисосудпстого свертывания крови, приводящий к распространенной гиперерги-ческой реакции и эквивалентным человеческим заболеваниям много обсуждался, но до сих пор не выявлен.

Современные исследования концентрируют внимание на роли тромбоцитов в распространенном впутрпсосудистом свертывании, вызванным иммунным агентом (Alüller-Bergh-aus, 1976; Müller-Eckhardt, 1978). Однако до сего времени значение тромбоцитов для активации внутрисосудпстого свертывания крови не может быть объяснено однозначно.

Представляло интерес выяснить, какова связь между этим иеспецифпческнм проявлением аллергической реактивности

н степенью сенсибилизации, показателем которой служил тнтр прецппптпнов и противотканевых ангнтсл.

Изучение титра прецппптпнов и противооргаиных антител (протнвосердсчных, —легочных, —почечных, —печеночных, —селезеночных) показало, что нарастание титра антител отмечалось только после второй сенсибилизирующей инъекции н. л. е., т. е. па пятый день с момента первой инъекции антигена. В период с 7 до 12 дня происходило резкое нарастание титра антител. С 12 по 17 день сенсибилизации титр антител достигал своего максимального значения, т. с. высота ответ-нон специфической реакции приходилась на 12—17 дни сенсибилизации. Более поздние сроки сенсибилизации характеризуются постепенным снижением титра и прецппнтинов и противотканевых антител.

Наиболее выраженные изменения коагуляционной способности крови по времени совпадали с периодом резкого нарастания титра антител.

Интенсивность иммунных реакций, их титр и положительный результат находились в прямой зависимости от периода сенсибилизации.

Анализ результатов изучения показателей функционального состояния системы гемостаза в динамике феномена Ар-тюса показал, что в процессе развития гппсрергичсского воспаления также имеет место как гипер-, так и пшокоагуляция. Развитие гипокоагуляцнн через 48 часов после разрешающей инъекции п. л. с. вслед за гпперкоагуляцней вызвано расстройствами во всех фазах свертывания крови, но по сравнению с периодом сенсибилизации при воспалении обнаруживались более глубокие расстройства функционального состояния системы гемосгаза. Эти нарушения захватывали процесс свертывания крови от его пускового момента до процесса стабилизации фибрина. Время свертывания крови через 48 часов после разрешающей инъекции антигена удлинялось на 59,7% (Р<0,001), увеличивалось время рекальцификацни плазмы на 26% (Р<0,001), уменьшалась толерантность плазмы к гепарину (на 58,7%) (Р<0,00П, уровень гепарина увеличивался в среднем на 15% (Р<0,01), удлинялось тромбиновое время (на 25,6%) (Р<0,001), увеличивалась концентрация фибриногена (на 95%) (Р<0,001).

Установлена прямая зависимость между выраженностью аллергического воспаления и концентрацией фибриногена; у

животных с обширными некротиче'скими изменениями тканей отмечалась более высокая концентрация фибриногена. Низкое содержание фибриногена наблюдалось у кроликов с незначительными участками некроза или ннфильтратнвным воспалением.

Исследование функциональной активности тромбоцнтор через 48 часов после разрешающей инъекции антигена выявило резкое снижение активности фактора 3 тромбоцитов. Обращают па себя внимание изменения адгезивной н агрега-цпонпой способности тромбоцитов. Исследование адгезивной способности тромбоцитов выявило снижение их общего количества на 46,5% (Р.<0,001), количества адгезивных форм па 61% (Р<0,001) и снижение адгезивного индекса па 33% (Р<0,001). При этом агрегацпоппая способность тромбоцитов, при сравнении с нормой, повышалась на 20% (Р<0,01). Согласно данным Braunsteiner, Pakesch ( 1956), процесс агрегации тромбоцитов в иммунологических реакциях организма значительно ослабляет их способность к адгезии, что обусловлено наличием тромбоцитов кролика феномена «иммунной адгезии» при соединении их с белковым антигеном в присутствии плазмы крови как источника комплемента (Siqueira, Nelson, 1961; Henson, Cochrane, 1969; Thomas, Wendell, 1977). Развивающаяся в результате потребления (агглютинации, разрушения и коагуляции) тромбоцнтопения приводит к ослаблению ретракции кровяного сгустка, что и нашло отражение в наших данных.

Через пять дней после разрешающей инъекции антигена, способность крови к свертыванию несколько повышаясь, на 30% (Р<0,01 ) оставалась ниже нормы, толерантность плазмы к гепарину почти не изменяясь, на 54% (Р<0,001 ) оставалась снижена, при этом концентрация фибриногена на 104% при сравнении с нормой повышалась (Р<0,001), повышался уровень фибриногена В, отмечалось резкое усиление фпбрнполитичсской активности крови (на 92% при сравнении с нормой, Р<0,001), активность фактора ХШ в этот период на 41,4% (Р<0,001 ) повышалась. Общее количество тромбоцитов через 5 дней после разрешающей инъекции антигена при сравнении с предыдущим периодом несколько повышалось, оставаясь ниже нормы на 30% (Р<0,05), индекс алгсзпвностп на 38% (Р<0,001) понижался \грегацноппая способность тромбоцитов на 20% (Р<0,001) превышала норму.

На 15 день после разрешающей инъекции антигена, т. е. в период угасания аллергического воспаления, выявлялась склонность к нормализации коагуляционнон способности крови, однако фнбриполптическая активность крови на 101,8% (Р<0,001)) превышала норму, отмечалось усиление активности (¡»актора XIII па 98,7% (Р<0,001) при сравнении с контролем.

На фоне нормализации коагуляции крови показатели функций тромбоцитов еще отличались от контроля. Общее количество тромбоцитов пл 37% (Р<<0,001) оставалось ниже нормы, число их адгезивных форм и адгезивный индекс, несколько повышаясь, приближались к контролю. Однако агре-гацпонная способность тромбоцитов увеличиваясь, превышала норму па 03,3% (Р<0,001).

Установлена прямая зависимость между выраженностью аллергического воспаления и выраженностью агрегации тромбоцитов, между степенью повышения концентрации фибриногена и величиной агрегашш тромбоцитов, между величиной агрегации тромбоцитов и активностью фибрииолиза: чем выше агрегация тромбоцитов,, тем выше концентрация фибриногена, чем выше агрегация тромбоцитов, тем выше фибри-нолнз.

ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты проведенных исследований показали, что формирование аллергической реактивности организма сопровождается фазовыми изменениями функционального состояния системы гемостаза.

Ранние периоды сенсибилизации сопровождаются повышением способности крови к сиертываншо. С развитием сенсибилизации, отмечающаяся после 1 сенсибилизирующей инъекции и. л. с. гпперкоагуляцпя сменяется выраженной ги-покоагуляцнеп.

Аллергическое воспаление вызывает еще более глубокие расстройства системы гемостаза.

Анализ результатов иммунологического исследования в ранние периоды сенсибилизации (через сутки после I и II инъекции антигена) и сопоставление изменений титра прецп-питпруюпшх и иротивоткапепых антител с изменениями коагуляционнон способности крови позволяет заключить, что изменения со стороны коагуляции крови, которые были отмечены через сутки после первой же сенсибилизирующей инъекции

1Г>

антигена у кроликов, предшествуют повышению титра антител, что связано, главным образом, с функциональными особенностями тромбоцитов и рядом условии, опережающих в своем развитии формирование иммунного ответа. На основании многочисленных данных отечественных и зарубежных исследователей известно, что одной из закономерностей реагирования организма па антигенный раздражитель является предшествование пеирогуморальимх сдвигов процессу иммунологической перестройки. В динамике сенсибилизации наблюдается ряд пейроэндокриппых сдвигов, которые определяют функциональное состояние системы гемостаза в отдельные периоды сенсибилизации. Установлено, что белковая сенсибилизация сопровождается изменением тонуса вегетативной нервной системы и функций отдельных органов (Н .Н. Сиротшши, 19.34; А. Д. Адо, 1940, 1978; С. М. Павленко, 1961, 1966; Д. Е. Альперн, 1966; Е. П. Фролов, 1975, 1977).

В ранние периоды сенсибилизации происходит повышение тонуса симпатического отдела вегетативной нервной системы, нарушение обмена катехолампнов н избыточное поступление в кровоток адреналина (Л. Адо, 1940; Б. А. Сааков с соавт., 1970, 1971, 1972 и др.). Катехоламины, оказывая регулирующее влияние на гипофнзарио-адрснокортикальиую и симпатоадрепалопую системы, осуществляют связь центральной нервной системы с железами внутренней секреции и являются одним из факторов «включающих» защитио-присно-собительпые реакции организма па воздействие чрезвычайною раздражителя, в частности, па парентеральное введение аллергена (Sehe, 1956, 1977; Euler, 1956; Б. В. Алешин, 1971; П. Д. Горизонтов, 1976, 1981).

На основании mhoi очнелеипых данных известно, что ги-перадреиалнпемпи может приводить к активации контактной фазы гемостаза путем непосредственного втиянин на фактор ХП (Д. М. Зубаиров, 1978). Активация же фактора ХП является пусковым моментом процесса свертывания крови. По мнению Д. М. Зубаирова (1978), быстрые изменения свертываемости крови начинаются именно с запускаемых нервными и гуморальными путями реакций освобождения из тромбоцитов и гшдотелнальных клеток и активации фактора ХП катехоламииамп (Д. М. Зубаиров, 1978), что, вероятно, и является одной из причин, обусловливающей повышение свертывающей способности крови, обнаруженное через сутки

после I ннъекцшг н. л. с. Громе того, симпато-адреналовая система играет роль эфферентного регулягорного механизма, обеспечивающего стимуляцию функции пммунокомпетентпых органов, усиливает процессы клеточного деления тимоцитов, способствует блпсттрансформацпп лимфоцитов (Isehizaka et al., 1970), оказывает положител1.пый иммунотронный эффект (Е .11. Фролов, 1974).

Однако, наиболее характерным изменением со стороны системы гемостаза и важным с современных теоретических позиций, является именно изменение функциональных свойств тромбопчтов, н поэтому вочникла необходимость рассмотрении функций тромбоцитов

Результаты исследования количества и функций тромбоцитов в различные периоды сенсибилизации выявили нарастающую с развитием белковой сенсибилизации тромбоцито-пешио и нарушение их способности к адгезии и агрегации.

Развитие тромбопитоиенин после внутрнсосудпстого свертывания крови — факт известный и возникает она при травме, после операцнип т. д. Однако, при аллергических процессах тромбоцпгопения наблюдается в условиях, исключающих первичную а к тпвпую свертываемость. В подобных формах тромбонптопепш! ответственен иммунный механизм. Тромбоциты во инутрпсосудистых иммунологических реакциях, подвергаясь воздействию аллергена и контакту комплекса антиген-антитело, либо захватывают последние, включая в вакуоли своих' цитоплазм, что сопровождается их дегранулянн-сп, либо разрушаются, теряя илтонлазматическне ингредиенты, обусловливающие выделение из последних нрн этом ну-клеотиды (АТФ, АДФ), адреналин, серотопин, гпстамни, ли-зосомнме ферменты, г/ещество Р и др. биологически активные амппч, инициирующие распространение агрегации тромбоцитов в кровотоке, образование активного кровяного тромбо-нластпна, тромбнпа, фибрина, т. е. мнкросвертывание крови (Mnller-Eckhardt et al., 19(58, ¡070; Lambotte, Leeompie, 19(59; Mustard, Evans el al., 19ii9; .Mustard et al„ 1970; Miiller-Berg-liaus el al., 1975, 197(5' Lipinski, 1976; Camussi et al., 1978; J.i'isclier, Pilneler, Massini, 1978); с участием компонента СГ) комплемента повреждаются клеточные мембраны и затем с активацией компонента Ci разрушаются тромбоциты и эри-троцты (Zimmerman, Kolb, 1У76 и др.), что выражалось в наших исследованиях увеличением агрегации тромбоцитов и выраженной тромбоцитопенией. Однако, основным — являет-

ся освобождение фактора 3 тромбоцитов, а с освобождением фактора 3 тромбоцитов в крови образуется активный кровяной тромбопл астпи. Микроцнркуляторпые гемодинамическпе расстройства, возникающие при этом усугубляют имеющиеся патологические изменения и дальнейшая выраженность процесса зависит от периода сенсибилизации и от выраженности аллергического процесса. Значит, образование агрегатов в кровотоке может явиться пусковым механизмом генерализованной патологии системы гемостаза.

За последние годы показано, ч-ю повышение агрегации тромбоцитов, связанное с высвобождением серотонина н других биологически активных веществ, реализуется через систему циклических нуклеотпдов п простагландппов (Butcher et al., 1967; Robison ¿t al., 1969; Mills et al., 1971; Salzman, 1972; Born, 1975; White, 1976; Oelz, 1977; С. В. Андреев, А. А. Ку-батиев, 19/6, 1977, 19/8). Исследованиями С. В. Андреева с соавт. (1977, 1978) установлено, что иод влиянием серотонина в тромбоцитах кроликов с тромбозом легочных сосудов иммунного геиеза происходит резкая активация фермента простагландннспнтетазы, ответственного за биосинтез про-стагландппа серпп F2a, в результате действия которого активность гуанплатцнклазы возрастает н это приводит к накоплению в клетках циклического 3', 5'-гуанозинмонофосфа-та (цГМФ). Было высказано предположение, что инициальным звеном развития внутрисосудистои агрегации тромбоцитов является изменение соотношения биосинтеза циклических нуклеотпдов и простагландппов всторону образовЬнияПГР2 а-цГМФ при одновременном подавлении звена ПГЕ-цАМФ.

Согласно данным Gorman с соавт. (1977) и других авторов, наиболее выраженными агрегирующими свойствами обладают эндоперекисн простагландппов ПГР2з и ПГНг, а также тромбоксапы, которые блокируют фермент аденилат-цпклазу и способствуют тем самым уменьшению внутриклеточного уровня цАМФ, увеличивая агрегацию тромбоцитов. Указанный механизм играет, вероятно, основополагающую роль в гепезе днссемшшрованного мпкрососудпстого сверты-ваипя крови, однако это не исключает уч?стпя и плазменных компонентов гемостаза. В последние годы в литературе неоднократно подчеркивалась связь между изменениями адге-знвно-агрегациоиных свойств тромбоцитов н фпбрннолитпчес-кой системой организма (В. Е. Пасторова, 1977; В. П. Балу-да, 1977; Б. А. Кудряшов, 1978 и др.). Показано, что повышение агрегации тромбоцитов сопровождается усилением фнб-

рпполиза (В. Е. Пасторова, 1977), что имело место и в наших исследованиях.

Образование тромбоцитарных агрегатов приводит к нарушению капиллярного кровотока в тканях, следствием чего и является кислородное голодание тканей (В. Л1. Володин, 1974). Развивающаяся тканевая гипоксия активирует местный фибринолиз, в результате поступления тканевых и клеточных активаторов, что приводит к отщеплению илазмниа от антиплазмппа. Отщепляющийся плазмнн не успевает нп-активироваться антиплазмппом и разрушает факторы свертывания крови, включая фибриноген (И. Д. Ойвии, 1965; Мс№со1, 1969). Образование фибрина на стадиях фибрин-мономер, фибрип-полпмер-стабнлпзпроваппый фибрин совершенно обязательно, как известно, сопровождается сорбированием нлазмнна и процессом его лизиса (10. Т. Пономарев, 1972). Следовательно, повышение антикоагулянтиой активности крови, наблюдавшееся в наших исследованиях у животных, в период развития белковой сенсибилизации и феномена Артюса, может быть не только результатом повышения уровня свободного гепарина, по и следствием образования антикоагулянтов фнбрннолитического происхождения.

Образовавшиеся в результате продукты деградации фибриногена и фибрина могут приводить к образованию фибри-ноподобного материала в результате полимеризации фибриногена и его производных основными белками. Возможно, что фибриноген В, обнаруженный нами на высоте сенсибилизации и в динамике развития феномена Артюса у кроликов, и является таким фибриноподобным материалом.

Выраженность роли повышенного фпбринолпза усугубляется наблюдающейся тромбоцптопенпей, при которой развивается дефицит тромбоцитарного апгифпбринолитического фактора (Ьакц 1970).

Существенное значение для понимания механизмов патологических реакций в системе гемостаза имеет система комплемента. Известно более 20 фрагментов системы комплемента, но детальное изучение проведено только с девятью из них. Основными активаторами этой системы являются иммунные комплексы. По современным представлениям комплемент — мпогомолекулярпая, самонастраивающаяся эффек-торная система, играющая важную роль в воспалении и повреждении тканей (Мигапо, 1978). Известны два пути активации комплемента: классический, начинающийся с первого (С!) и альтернативный, — с третьего (С3) компонента ком-

племента. Инициаторами классического пути в порядке эффективности являются IgM, IgG3, IgGb IgG2) IgA, IgD, а альтернативного — F(ab)1 фрагменты IgG, Igll, IgA, бактериальные полисахариды, инулин, зимосан. В итоге образуется комплекс поздних активных компонентов комплемента, оказывающих лнтпческнй эффект па клеточные мембраны (Б. И. Кузник с соавт., 1981). На всех клетках человеческого организма обнаружены рецепторы для компонентов комплемента, что доказывает универсальную роль комплемента и возможность его участия в различных реакциях гемостаза. В процессе активации комплемента образуется компонент С3|,. Связывая рецепторы на лейкоцитах эритроцитах и тромбоцитах С3|, вызывает адгезию форменных .элементов и образование иммунных комплексов. Тромбоциты, без которых невозможен процесс свертывания, несут рецепторы для С3 фракции комплемента. Присоединение тромбоцитов к Cj путем иммунного прилипания i образования С;М) приводит к их агрегации и последующему реактивному выходу фактора 3 тромбоцитов (Thomas, Wendel, 1977). Этот механизм имеет патогенетическое значение в развитии виутрнсосудистого свертывания при иммунологических процессах. ^

Тромбоциты чувствительны к специфическим и песиецн-фическим иммунным стимулам и могут вовлекаться в иммунные реакции, в которых антитела не направлены непосредственно против антигенов тромбоцитов, т. е. в, так называемые, неспецпфические иммунные реакции (3. Д. Федорова с соавт., 1981).

Способность иммунных комплексов вызывать секрецию и агрегацию тромбоцитов не противоречит наблюдениям о частом снижении функциональной активности тромбоцитов при иммунологических реакциях, поскольку выделительный процесс и агрегация являются первой ф.зой действия иммунных стимулов, а нарушение функции — их последствием (Zachavi,~1976).

Устойчивость же образовавшихся тромбоцитарных агрегатов зависит от процесса образования стабилизированного фибрина (10. Т. Пономарев, 1974). В наших исследованиях уже через сутки после второй сенсибилизирующей инъекции антигена и со вторых суток после получения феномена Артю-са, наблюдалось возрастающее во времени повышение фиб-рпнолитической активности крови на фоне снижения ее способности к свертыванию и повышения агрегации тромбоцитов. Следовательно, создаются условия для так называемой

фибринолитической предрасположенности к диатезам, но этому препятствует резкое повышение активности фактора XIII, отмечающееся у животных во все периоды исследований, под влиянием которого образуется стабилизированный фибрин, обеспечивающий физиологический гемостаз. С этих позиций повышение активности фактора ХШ можно расценивать как положительное. Но, с другой стороны, известно, что фактор XIII необходим для стабилизации образующихся агрегатов тромбоцитов и, следовательно, в данном случае может рассматриваться как усугубляющий течение аллергического процесса. Этот момент представляется крайне пп.жнчм в патогенезе гемостатических расстройств при аллергических процессах, и должен дифференцированно учитываться при клинических мероприятиях.

Таким образом, проведенные исследования показали, что развитие аллергической реактивности организма характеризуется фазовыми изменениями функционального состоянии системы гемостаза.

Противоположная направленность в нарушении гемокоагу-ляцшг сочетается с фазовым характером изменений функций тромбоцитов.

Изменения тромбоците;; при иммунологических реакциях являются частно развивающегося внутрлсосудпстого свертывания крови, важной особенностью которого является ранняя активация первичного гемостаза.

Результаты проведенных исследований представляют практический интерес для клинической аллергологии при разработке патогенетически обоснованных мероприятий по предотвращению геморрагических проявлений при аллергических процессах.

Выводы

1. Формирование аллергической реактивности организма сопровождается фазовыми изменениями функционального состояния системы гемостаза.

2. Ранние периоды белковой сенсибилизации (через 24 часа после 1 сенсибилизирующей инъекции антигена) характеризуются повышением способности крови к свертыванию, развитием тромбопитонеппп и резким усилением агрегации тромбоцитов. Через 21 часа после II инъекции и. л. е., первичная гиперкоагуляцпя сменяется выраженной гппокоагу-ляцией, прогрессирующей с развитием сенсибилизации на

фоне усугубляющейся тромбоцитопешш, пониженной адгезии и резко повышенной агрегации тромбоцитов.

3. Изменения коагуляционной способности крови при сенсибилизации предшествуют, опережают во времени формирование иммунного ответа, а затем находятся с ним в еннерги-чсскон взаимосвязи, обусловливая развитие тромбогеморра-гического синдрома.

4. Развитие белковой сенсибилизации у животных, наряду с формированием специфической иммунологической реакции, сопровождается образованием противоорганных аутоантител ^(противолегочных, -сердечных, -печеночных, -почечных, -селезеночных).

5. Интенсивность реакции кольцепреципнтацин и РИГА, тптр и положительный их результат находятся в прямой зависимости от периода сенсибилизации и интенсивности проявления феномена Артюса. Наиболее выраженные гпнокоа-гулятнвные изменения совпадают с периодом резкого нарастания титра антител.

6. Выявлена стойкая, стабильная и необратимая агрегация тромбоцитов, развивающаяся уже через сутки после первой же сенсибилизирующей инъекции антигена па фоне пониженной пх адгезии, выраженной тромбоцитопеипн и дальнейших общих выраженных гипокоагулятнвных сдвигов по всем изучаемым показателям, что позволяет с большой достоверностью утверждать о ведущей патогенетической роли этого фактора как одного из звеньев в возникновении тромбозов мелких кровеносных сосудов.

7. Аллергическое воспаление с момента геморрагических проявлении сопровождается спиж синем способности крови к свертыванию, обусловленным расстройствами во всех фазах процесса свертывания крови, захватывающие его от пускового момента до процесса стабилизации фибрина, а также функциональной активности тромбоцитов.

8. Между выраженностью аллергического воспаления и изменением коагулограммы у кроликов обнаружена определенная закономерность: выявлена прямая зависимость концентрации фибриногена крови, агрегации тромбоцитов и обратная — в содержании свободного гепарина. Повышение агрегации тромбоцитов находится в синергпчсской взаимосвязи с фибрпнолитической активностью крови: чем выше агрегация тромбоцитов, тем выше фпбринолнз.

9. Изменение показателей тромбоэластограммы при аллергическом воспалении отражают фазовый характер нару-

шеннй коагуляцнонных свойств крови: отмечающаяся через 24 часа ¡к>сле разрешающей инъекции антигена гнперкоагуля-цпи, через 48 часов, после воспроизведения реакции сменяется гнпокопгуляпнеп, прогрессирующей с развитием гпперергиче-ского воспаления.

10. Результаты проведенных исследований доказывают участие тромбоцитов в механизме запуска гемостатическпх расстройств, выраженность которых в значительной мере определяет формирование иммунологической реактивности, тяжесть течения и исход заболевания, что является прямым показанием к проведению мероприятии но борьбе с геморрагическими нарушениями при аллергических процессах в настоящее время п, прежде всего, применению дезагрегантов и ингибиторов агрегации тромбоцитов.

11. Закономерности выявленных нарушений свертывающей способности крови в эксперименте представляют практический интерес для клиники, т. к. могут служить дополнительным диагностическим критерием скрытой сенсибилизации организма с последующим увеличением частоты аллергических реакций и при изыскании терапевтических средств для их предупреждения.

в

Список работ, опубликопчипых по теме диссертации

1- Реакция пассивной гемагглготинлцпи при феномене Артюса у кро\н-кор,. — Материалы IV Закавказской науч. конф. патофизиологов, Баку, 1973, с. 173—174.

2. Об нзменеппн функциональных способностей тромбоцитов при аллергическом воспалении типа феномена Артгаса. — В кн.: Механизмы повреждения, резистентности, адаптации и компенсации. Тезисы докладов II Всесоюзного съезда патофизиологов..¿Ташкент, 1976, т. 2, с 253—254.

3. Влияние Гн-лковон сенсибилизации на состояние гемостаза у кроликов. — В кн.: Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии. 1 ашк. мед. ин-т, Ташкент, 1978, с. 13—16 (в соавторстве с С. А. Гулиевой).

4. Адгсзшшость п агрегация тромбоцитов при состоянии сенсибилизации у кроликов. — Материалы выездной сессии в г. Кировабаде, посвя-1.1'пшон 110-\етшо со дня рождения В. И. Ленина и 60-летию установлении Советской власти в Азербайджане. Баку, 1980, с. 75—76.

">. Функциональное состояние системы гемостаза в динамике развития белковой сенсибилизации. — Материалы науч. конф., посвященной 70-летшо проф. Т. Г. Пашаева, Баку, 1980, с. 84—86.