Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВАРИАНТОВ МЕДУЛЛЯРНОГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

На правах.руколиси

/7

ФЕДЯЕВА ЛОРИСА МАРАДОВНА

КЛПНМКО-МОРФОЛОГПЧЕСКАЯ X А Р А КТ Е Р11СТ11К А ВАРИАНТОВ МЕДУЛЛЯРНОГО РАКА МОЛОЧНОМ ЖЕЛЕЗЫ

14.03.02 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 7 ОЕВ 2011

Челябинск-2010

4854031

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» на кафедре патологической анатомии с секционным курсом

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН, заслуженный деятель науки РФ

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Коваленко Владимир Леонтьевич ЯГщсв Сергеи Васильевич

Гринберг Лев Моисеевич

доктор медицинских наук,

профессор Кирьянов Николаи Александрович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию.

Защита состоится ЫЛ&Агъ-а^ 2011 года в -/О часов на заседании

Диссертационного Совета' Д 208.117.01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Автореферат разослан »

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор медицинских наук, профессор

¿иЦ&^и^ 2011 года

Казачкова Элла Алексеевна

Oóijüisi характеристики работы

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Рак молочной железы - одна из самых распространенных форм злокачественных опухолей в структуре онкологической заболеваемости и смертности женщин. Заболеваемость раком молочной железы (МЖ) непрерывно растет, увеличиваясь ежегодна на 1-2%. По данным ВОЗ ежегодно в мире регистрируется более 650 тысяч новых случаев рака МЖ, в странах СНГ - свыше 50 тысяч. Это наиболее частая локализация злокачественного новообразования у жительниц США, где данная патология развивается у каждой восьмой женщины, и в странах Европы, где заболевает каждая десятая (Boyle Р, Ferlay J., 2005). По данным американских авторов при локализованных стадиях рака МЖ 5-летняя выживаемость достигает 90%, при вовлечении подмышечных лимфатических узлов - 68%, а при наличии отдаленных метастазов - 18% (Young J.L, Percy

C.L., Asiré A.J., 1981). В России эти показатели значительно ниже (Хайленко В.А., Комова Д.В., Богатырева В.Н., 2005).

Медуллярный рак (MP) откосится к группе редких форм новообразований МЖ и составляет по данным различных авторов от 1% до 10% всех злокачественных эпителиальных опухолей МЖ (Bloom Н. J., Richardson W.W., Field J. R., 1970; Rapin V., Contcsso G. et al., 1988; Rosen P.P., Oberman H.A., 1993; Cook D.L., Weaver D.L., 1995). Несоответствие высокозлокачественной морфологической картины и относительно благоприятного биологического поведения опухоли выделяет ее из общего ряда инфильтрирующих раков МЖ. Имея морфологические черты высокозлокачественной опухоли с выраженной ядерной и клеточной атипиеи и высоким уровнем пролиферации, MP по этим признакам в большинстве случаев должен быть отнесен к 3 степени злокачественности по системам Mod. Bloom-Richardson grading (1997) и Eiston C.W. et Ellis I.O. (1991), но биологическое поведение опухоли, наоборот, является менее злокачественным (Ellis О., Schnitt S.J., Sastre-Garau X., Bussolati G. et al., 2003).

На сегодняшний день существует 3 классификационные схемы медуллярного рака молочной железы (МРМЖ): Ridolfi R.L. et al. (1977), Wargotz E.S. et al. (1988) и Pedcrsen L. et al. (1991). Все они разнятся между собой по количеству гистологических признаков, необходимых для постановки диагноза типичного медуллярного рака (TMP). Выбор классификационной схемы в работе патологоанатома произволен.

В зарубежной медицине подход к лечению TMP и «немедуллярного рака» МЖ, к которому обычно относят инфильтрирующий протоковый рак с медуллярными признаками, различен (Rubens J.R, Lewandrowski K.B, Kopans

D.B, Koerner F.C, Hall D.A, McCarthy K.A., 1990). В отечественной литературе также имеются немногочисленные клинические сообщения о первых результатах проведения органосохраняющих операций при МРМЖ (Абды-

лаев Д.К. и др., 2000). В то же время данная группа рака МЖ является неоднородной, и на сегодняшний день отсутствуют простые, четкие и легко воспроизводимые морфологические критерии, позволяющие исключить риск гипердиагностики типичного варианта МРМЖ, отличающегося благоприятным биологическим поведением. (Gaffey М. J., Mills S. Е., Frierson Н. F. Jr., Zarbo R. J. ct al., 1995). До сих пор является проблемой и отсутствие единого мнения в вопросах терминологии МРМЖ, что в очередной раз свидетельствует о недостаточной изученности этой формы рака МЖ.

Уровень развития науки и медицины определяет наши знания о болезнях и диктует методы их лечения и профилактики. Проблема адекватности лечения в онкологической службе является одной из главных. Проводимое лечение не должно принести вреда больше, чем злокачественная опухоль. Проведение органосохраняющих операций при раке - это вопрос сложного выбора, учитывающего несколько факторов. В случае варианта МРМЖ, характеризующегося благоприятным прогнозом, мы сталкиваемся с проблемой его морфологической диагностики.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ - на основе ретроспективного патоморфологического изучения операционных материалов и результатов клинического исследования разработать унифицированные критерии морфологической диагностики вариантов медуллярного рака молочной железы и принципы их рационального лечения.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Выделить признаки, позволяющие идентифицировать медуллярный рак молочной железы, определить удельный вес этой группы карциномы и ее гистологических вариантов в операционных материалах, относящихся к раку молочной железы.

2. Представить морфофункциональную характеристику паренхимы и стромы типичного медуллярного рака, оценить его метастатический потенциал, особенности клинического течения.

3. Выявить особенности морфофункциональной характеристики паренхимы и стромы, клинического течения атипичного медуллярного рака молочной железы.

4. Представить клннико-морфологическую характеристику выделенного на наших материалах гистологического варианта медуллярного рака - инфильтрирующего протокового рака с медуллярными признаками.

5. Создать унифицированный подход к морфологической и клинической дифференциальной диагностике вариантов медуллярного рака молочной железы.

6. Оценить возможные пути прогрессии изучаемой группы рака молочной железы и сформулировать основные принципы рационального лечения на разных этапах его развития.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые проведено комплексное клинико-морфологическое изучение группы медуллярного рака молочной железы с применением при исследовании операционных материалов обычных, специальных, иммуномор-фологическнх окрасок и морфометрнческих приемов, что позволило уточнить дифференциально-диагностические критерии типичного, атипичного медуллярного рака и инфильтрирующего протокового рака с медуллярными признаками. На основании выявленных особенностей паренхимы и стромы в изучаемых вариантах медуллярного рака обосновано выделение трех этапов морфогенеза медуллярной карциномы с нарастанием проявлений ее злокачественности от типичного медуллярного рака (моноклоновой опухоли)

- 1 этап морфогенеза к инфильтрирующему протоковому раку с медуллярными признаками (поликлоновое новообразование) - 3 этап морфогенеза.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Разработаны унифицированные подходы к клннико-морфологической верификации медуллярного рака молочной железы и его вариантов. С учетом гистологического варианта опухоли, являющегося определенным этапом ее прогрессии, рекомендуется расширить показания к органосохраняющлм операциям типа радикальной резекции молочной железы лишь на 1 этапе морфогенеза - типичном медуллярном раке. Атипичный медуллярный рак и инфильтрирующий протоковый рак с медуллярными признаками требуют стандартных подходов к лечению, применяемых при инвазивном протоковом раке.

ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Отличительными клинико-морфологическими особенностями медуллярного рака молочной железы и его вариантов являются:

- четко очерченный опухолевый край;

- наличие структур, характеризующих синцитпальный рост атипичных и полиморфных раковых клеток с высокой митотической активностью, которые при иммуногистохимическом исследовании экспрессируют цитокератины простых и плоских эпителиев и имеют высокий уровень коэкспрессии виментипа;

- различная степень выраженности лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы.

2. Основное различие между вариантами медуллярного рака

проявляется в изменении соотношения между синцитиальным компонентом и участками железистого роста. Увеличение структур железистого роста проявляется усилением метастазирования, нарастанием в строме количества коллагеновых волокон, сосудов микроциркуляторного русла, уменьшением площади некрозов раковых клеток, уровня их митотической активности, степени лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы.

3. Нарастание степени выраженности отличий при одновременном уменьшении содержания синцитиального компонента от типичного медуллярного рака к атипичному варианту и инфильтрирующему протоковому раку с медуллярными признаками отражает опухолевую прогрессию медуллярного рака, проявляющуюся переходом от моноклоновости к поликлоновости с нарастанием степени злокачественности в виде увеличения инвазивного и метастатического потенциала его паренхимы.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

По материалам диссертации изданы методические рекомендации «Морфологическая диагностика и принципы лечения медуллярного рака молочной железы», утвержденные приказом Министерства Здравоохранения Челябинской области от 07.07.2010 №895, которые внедрены в практику работы ОГУЗ «Челябинское областное патологоанатомическое бюро», патологоанатом пческого отделения ГУЗ «Областной онкологический диспансер №2», патологоанатомического отделения Челябинского окружного клинического онкологического диспансера, в учебный процесс на кафедре патологической анатомии с секционным курсом и кафедре онкологии Челябинской государственной медицинской академии.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертации представлены на VI-ой итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2008), в докладе на Научной сессии, посвященной 10-летию Южно-Уральского научного центра РАМН «Медицинская академическая наука - здоровью населения Урала» (Челябинск, 2008), на заседании кафедры патологической анатомии с секционным курсом и кафедры онкологии Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2010).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме диссертации опубликовано 7 работ, из них - 2 - в рецензируемых научных журналах, определенных перечнем Высшей аттестационной комиссии.

ОБЪЕМ II СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Работа состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Материал изложен на 135 страницах, иллюстрирован 48 рисунками, 27 таблицами, 6 диаграммами, 1 схемой. В указателе литературы приведено 123 источников (14 отечественных и 109 зарубежных публикаций).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основой проведенной работы являлось ретроспективное клинико-морфологическое изучение 100 наблюдений вариантов медуллярного рака молочной железы. При формировании объектов исследования мы базировались на учете первичного лагоморфологического заключения о наличии у пациенток Ml5 этого органа. Включение в группы исследования мы проводили при выявлении в раке МЖ следующих признаков:

1) четко очерченный опухолевый край или формирование псевдокапсулы;

2) наличие среди опухолевой ткани структур синцитиального роста из недифференцированных раковых клеток с выраженными признаками атипии и полиморфизма на 2 и 3 балла по системе Elston C.W. and Ellis 1.0. (1991) н высокой митотической активностью;

3) наличие различной степени выраженности лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы.

Критериями исключения из МРМЖ являлись:

1) выявление большого количества фокусов инфильтрирующего роста раковой паренхимы на границе с окружающими тканями;

2) отсутствие выраженной ядерной и клеточной атипии в паренхиматозных опухолевых клетках, а также лимфоидной инфильтрации стромы.

На основании указанных выше признаков из исследованной группы нами было исключено 7 случаев рака МЖ с первичным патогистологическим заключением «Медуллярный рак молочной железы».

Оперативное лечение по поводу МРМЖ в 77 наблюдениях было проведено в областном онкологическом диспансере №2 (г. Магнитогорск) с 1993 по 2009 гг. За этот период в данном лечебном учреждении хирургическое лечение с установленным диагнозом «рак МЖ» получило 2719 женщин. Кроме того, нами исследованы операционные материалы, относящиеся к МРМЖ у пациенток, обследованных и прооперированных в областном онкологическом диспансере №1 (г. Челябинск) с 2002 по 2005 гг.

При ретроспективном анализе в группу типичного медуллярного рака (TMP) включались только опухоли, удовлетворяющие сразу всем трем классификационным схемам за исключением одного из признаков схемы

Pcdcrscn L. ct al. (1991) - редкие некрозы опухолевой ткани (менее 25%), так как он противоречил классификации Ridolfi R.L. ct al. (1977), в которой обширные некрозы опухолевой паренхимы рассматриваются как один из признаков типичной медуллярной карциномы (Ridolfi R.L. et al., 1977) (20 женщин). К группе ИПР с мед. пр. относились все случаи, в которых наряду с синцитиальной гистоархитектурой опухоли определялись хорошо различимые фокусы инвазивной протоковой карциномы независимо от содержания процентной доли синцитиальных структур (54 больных). К атипичной медуллярной карциноме были отнесены все оставшиеся новообразования, которые по классификации Ridolfi R.L. ct al. (1977) могли быть отнесены к типичному варианту MP, но из-за наличия единичных железистых структур, согласно критериям схем Wargotz E.S, ct al. (1988) и Pcdcrscn L. ct al. (1991), были из этой группы исключены. Также в группу атипичного медуллярного рака (AMP) были переведены пациентки, опухоли которых имели строение, характерное для ТМР, но в регионарных лимфатических узлах (ЛУ) были выявлены метастазы (Reinfuss М., Stelmach A. ct al., 1995) (всего 26 случаев).

У 72 женщин, прооперированных в онкологическом диспансере г. Магнитогорска, были доступны для изучения амбулаторные карты и карты стационарного больного, на основании которых проанализированы данные ультразвукового исследования МЖ, маммографии, цитологического исследования, трепанбиопсии МЖ; оценены объемы проведенных оперативных вмешательств, химиолучевого и гормонального лечения. В остальных случаях (28) были использованы только первичные патогистологические заключения с макро- и микроскопическим описанием.

Кроме обзорной окраски гематоксилином и эозином дополнительно были проведены методики на выявление коллагеновых (по Ван Гизон) и ретикулярных (по Футу) волокон, слизи (реактивом Шиффа после окисления срезов в йодной кислоте, альциановым синим при рН 1,0 и 2,5) и аргирофильных гранул (по Гримелиусу).

В 30 случаях были поставлены иммуногистохимические реакции (ИГХ реакции) с антителами к: c-erbB-2 онкопротеину (HER2/neo). Интерпретация данных проводилась на основе Герцептеста «Dako» с учетом методических рекомендаций референс-лаборатории по НЕК2/пео-тестирован11ю на базе патологоанатомического отделения ФГУ «МНИОИ им. П.А. Герцена Росздрава» (Завалишина Л.Э, Франк Г.А., 2008); к рецепторам эстрогена и прогестерона. Выраженность экспрессии оценивалась полуколичественно в подсчете процента положительно окрашенных ядер эпителиальных опухолевых клеток: 0 - нет окрашенных клеток или окрашены единичные клетки, 1 - окрашено менее 30% опухолевых клеток, 2 - окрашено менее 60% опухолевых клеток, 3 - окрашено 60% и более опухолевых клеток; белкам СРР 32, р53 и bcl-2. Степень экспрессии белка р53 и bcl-2 онкопротеина

оценивалась полуколичественно: 0 - нет экспрессии, 1 балл - положительное окрашивание 30% и менее эпителиальных опухолевых клеток, 2 балла - положительное окрашивание более 30% и менее 60% опухолевых клеток, 3 балла - положительное окрашивание 60% и более эпителиальных опухолевых клеток. Экспрессия белка СРР 32 (каспазы 3) оценивалась с помощью подсчета процента интенсивно окрашенных злокачественных эпителиальных опухолевых клеток в срезе; к белку Кл-67. Результат оценивался методом подсчета процента положительно окрашенных ядер эпителиальных опухолевых клеток; к СО 34; к СО 20 и СО 3; виментину; к Хромогранину А; к цитокератину (ЦК) 7; к ЦК с высокой молекулярной массой (клон 34ВЕ12, «Бако», Дания); к ЦК 8; к ЦК 17; к ЦК 18; к ЭМА; к 8100 протеину; к СО 99. Степень экспрессии эпителиальными опухолевыми клетками ЦК, вимеитина, Б-ЮО протеина, нейрон специфической энолазы, ЭМА и СО 99 оценивалась полуколичественным методом (в баллах): 0 - нет окрашенных клеток или окрашены единичные клетки, 1 - окрашено менее 30% опухолевых клеток, 2 - окрашено менее 60% опухолевых клеток, 3 -окрашено 60% п более опухолевых клеток. Все ИГХ исследования были проведены на архивных кусочках тканей, фиксированных в нейтральном формалине (рН=7,0-7,2) и залитых в гомогенизированную парафиновую среду «Шхимтпх Р1ия».

Степень мукоидного набухания опухолевой стромы оценивалась полуколичественно (в баллах) на срезах, окрашенных с использованием ШИК-реакцни, альцианового синего при рН=1,0 и рН=2,5 : 1 - минимальная степень, 2 - умеренная, 3 - выраженная.

Выраженность лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы также верифицирована полуколичественным методом (в баллах): 1 - единичные рассеянные лимфоциты, 2 - рассеянная хорошо выраженная лимфоидная инфильтрация, распределяющаяся в строме опухолевого узла неравномерно, 3 - густая диффузная лимфоидная инфильтрация во всех исследованных участках опухолевого узла.

Пролиферативная активность эпителиальных опухолевых клеток, кроме использования ИГХ реакции с антителами к К1 67, параллельно оценивалась методом подсчета количества митозов в 10 полях зрения в различных отделах опухолевого узла на обзорной окраске гематоксилином и эозином (увеличение х400, диаметр поля зрения 0,59 мм). Так как размеры опухолевых клеток в сравниваемых группах варьировали, и на 1 поле зрения при увеличении микроскопа х400 в изучаемых опухолях приходилось разное количество опухолевых клеток, также на обзорной окраске гематоксилином и эозином при увеличении микроскопа х400 подсчитывалось количество митозов, приходящееся на 1000 паренхиматозных опухолевых клеток (митотический индекс).

Степень полиморфизма и атипии ядер опухолевых клеток изучалась полуколичественным методом (в баллах) по критериям Elston-Ellis (1991).

Методом точечного счета (Автандилов Г.Г., 2002) была определена относительная доля опухолевой стромы на препаратах окрашенных по Футу при увеличении микроскопа х400. При окраске по методу Ван Гизон опухолевая строма в ГМР плохо визуализировалась.

Площадь некроза опухолевой паренхимы оценивалась полуколичественным методом (в баллах) на обзорной окраске гематоксилином и эозином при увеличении микроскопа хЮО: 0 - менее 5% площади исследованных участков опухоли, 1 - более 5% и менее 15% площади исследованных участков, 2 - более 15% и менее 25% площади исследованных участков опухоли, 3 - более 25% площади исследованных участков опухолевой ткани.

Для выявления сосудов микроциркуляторного русла (МЦР) была проведена иммуногистохимическая реакция с антителами к CD 34 («LabVision Corporation», США). В каждом случае при увеличении микроскопа х400 методом точечного счета (Автандилов Г.Г., 2002) была определена относительная доля сосудов МЦР на участке опухолевой ткани площадью 0,274 мм2. Параллельно с этим в тех же полях зрения была подсчитана суммарная длина сосудов МЦР с использованием окуляр-микрометра при увеличении микроскопа х400 (Автандилов Г. Г., 2002). Дополнительно в этих же срезах при увеличении микроскопа х400 также было подсчитано количество пересеченных сосудов МЦР.

Статистический анализ полученных данных включал использование метода вариационной статистики с использованием критерия t (Стьюдента) для малых выборок (п<30) (Ефимова М.Р., Петрова Е.В., Румянцев В.Н., 2009). При проведении статистического исследования использованы программы Microsoft Excel 2002 пакета Microsoft Office ХР. Для измеряемых показателей - процент Ki 67 положительных опухолевых клеток, количество митозов в поле зрения, митотический индекс, удельная доля сосудов микроциркуляторного русла (МЦР) в срезе опухолевой ткани, суммарная длина сосудов МЦР и количество пересеченных сосудов МЦР в срезе опухолевой ткани, процент СРР 32 - положительно окрашенных раковых клеток рассчитывались средняя арифметическая, ошибка средней арифметической, определялась ошибка репрезентативности разности средних арифметических.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖЕНИЕ

Возраст пациенток с ТМР, АМР и ИПР с мед. пр. колебался от 29 до 73 лет (среднее значение 52,3±6,3 года), от 32 до 78 лет (51,5±8 лет) и от 31 до 84 лет (55,2±4 года) соответственно. Возрастной диапазон пациенток с ТМР был несколько моложе, чем у женщин с АМР и с ИПР мед. пр. Средний размер новообразования у этих трех групп опухолей был 3,5 см, 3,8 см и 3,5 см соответственно. Максимальное количество больных с МРМЖ приходилось

на возрастные диапазоны 40-49 лет (29%) и 50-59 лет (28%). Для ТМР п Mill5 с мед. пр. возрастной пик приходился на период 50-59 лет, для AMI5 - на 4049 лет. У 38 женщин из 100 было выявлено метастатическое поражение регионарных лимфатических узлов и у 7 - распространение опухолевого роста па кожу с ее изъязвлением. Количество метастазов в Л У варьировало от 1 до 10. Группа N1 (определялось поражение трех и менее ЛУ) представлена 14 пациентками с AMI' и 13 случаями ИПР с мед. пр., составляет 27% от всех наблюдений МРМЖ. Группа N2 (выявлено поражение 5 и более Л У, но не больше 10) представлена только 11 больными с ИПР с мед. пр, составляет 11% среди всех случаев МРМЖ.

Таблица 1

Распределение пациенток с различными вариантами медуллярного рака

по клиническим стадиям.

Варианты МРМЖ 1 ст 2а ст 26 ст За ст 36 ст

TMP 3 14 3 0 0

AMP 3 11 10 0 2

ИПР с мед. пр. 11 23 6 9 5

Всего 17 48 . 19 9 7

МРМЖ у пациенток с 1-ой и 2-ой клиническими стадиями опухолевого процесса в сумме составил 84%. TMP регистрировался только в 1-ой и 2-ой (2а и 26) клинических стадиях, при этом на 2-ую стадию в группе TMP приходилось 85%. У женщин с AMP диагностированы 1-ая, 2-ая (2а и 26) и 36 клинические стадии, при этом сумма 1-ой и 2-ой клинических стадий в этой группе была равна 92,3%. ИПР с мед. пр. регистрировался во всех стадиях. 1-ая п 2-ая (2а и 26) клинические стадии в группе ИПР с мед. пр. составили 74,1%.

Таблица 2

Анализ объема оперативного вмешательства у пациенток с различными

вариантами медуллярного рака, п=87.

Вари- Радикаль- Маст- Маст- Маст- Санитар- Сектораль-

анты ная эктомия эктомия эктомия ная ная резек-

МРМЖ резекция по по Пейти по ампута- ция или

МЖ Маддену Пирого- ция МЖ квадрант-

ву эктомия

TMP 8 6 2 0 0 1

AMP 2 6 7 1 0 1

ИПР с 17 И 22 0 1 2

мед.пр.

Всего 27 23 31 1 1 4

Радикальные мастэктомии проведены у 55 женщин и составляют большинство в группах AMP и ИПР с мед. пр. В группе TMP мастэктомия и радикальная резекция МЖ составили равное количество случаев. Паллиативные хирургические операции выполнены в каждой исследованной группе: по одной в группах TMP и AMP и 3 в случаях ИПР с мед. пр.

Наибольшему количеству пациенток (42 случая из 72-х/58,3%) кроме локорегионального воздействия (операция, лучевое лечение) была проведена системная I IXT (см табл. 3). При этом в группах AMP и ИПР с мед. пр. этот вид лечения преобладал. Максимальное число адъювантной ПХТ проведено в группе ИПР с мед. пр. - 28 человек, что в этой группе составляет 66,7%. В группе TMP 5-ти женщинам (33% в группе) было проведено только локорегиональное воздействие в объеме оперативного и лучевого лечения и 5 больных получило системную Г1ХТ. Тамоксифен был назначен 14 пациенткам без учета рецепторного статуса опухоли.

Таблица 3

Анализ объема проведенного лечения у пациенток с различными вариантами

медуллярного рака, п=72.

Вари- Операция, Опера- Опера- Только Опера- Операция,

анты ПХТ, ция, ция, опера- ция, гамма-терапия,

МРМЖ гамма- ПХТ гамма- ция тамокси- тамоксифен

терапия терапия фен

TMP 3 2 5 0 2 3

AMP 6 3 1 2 2 1

ИПР с 24 4 7 1 2 4

мед.пр.

Всего 33 9 13 3 6 8

Адъювантная ПХТ в 30 случаях была проведена по схеме САР (доксорубицин 30мг/м2, циклофосфан 100мг/м2, 5-фторурацил 500 мг/м2), в 8 - по схеме РАС (доксорубицин 50мг/м2, циклофосфан 500мг/м2, 5-фторурацил 500 мг/м2) и в 4 - по схеме СМР (метотрексат 40мг/м2, циклофосфан 100мг/м2, 5-фторурацил 500 мг/м2). Предоперационный курс дистанционной гамма-терапии в традиционном режиме на МЖ и зоны регионального метастазирования СОД 44 Гр получили 4 женщины. 39 больным был проведен послеоперационный курс дистанционной гамма-терапии в режиме традиционного фракционирования на МЖ 44 Гр и/или локально на постоперационный рубец до 50 Гр и в 11 случаях - на область рубца 50 Гр и пути лимфооттока до СОД 44 Гр.

При морфологическом исследовании операционных материалов во всех наблюдениях МРМЖ опухолевый узел характеризовался относительно четкими контурами, диаметр новообразования колебался от 0,8 см до 12 см, консистенция опухоли варьировала от мягкой до плотной. Во всех случаях в

строме неоплазмы определялась лнмфоидная инфильтрация различной степени выраженности. Микроскопически паренхиматозные опухолевые клетки в большинстве случаев характеризовались преобладающим синцитиальным характером роста, высокой пролпфератнвной активностью, выраженным ядерным и клеточным полиморфизмом.

Таблица 4

Макроскопический анализ вариантов медуллярного рака.

'———Вариант рака TMP AMP ИПР с мед.

Признак " ——____ п=20 п=26 пр., п=54

Четкий опухолевый край 100% 88,5% 64,8%

Средний диаметр узла 3,5 см 3,8 см 3,5 см

Консистенция:

Мягкая 75% 38,5% 1,1%

Эластичная 10% 3,8% 11,1%

плотная 15% 57,7% 85,2%,

Распространение на кожу 0 7,7% 9,3%

Наиболее часто поражаемый квадрант верхнеиа- верхнена- верхнена-

МЖ ружныи ружныи ружныи

Количество случаев с метастазами 0 53,8% 44,4%

Частота первично множественного 5% 3,8% 20,4%

или мультицентричного роста

При анализе характера макроскопического исследования всех трех изученных вариантов МРМЖ нельзя было выделить достоверных макропризнаков, позволяющих дифференцировать эти опухоли между собой. Тем не менее, I MP чаще других характеризовался как четко отграниченная опухоль мягкой консистенции без распространения на кожу и без метастазов в региональные лимфатические узлы (таблица 4). ИПР с мед. пр. наиболее часто имел нечеткий опухолевый край, плотную консистенцию, множественный или мультицентричный рост и чаще распространялся на кожу. AMP почти по всем показателям занимал промежуточное положение за исключением частоты выявления метастазов в региональных ЛУ (чаще всех) и первично множественного или мультицентричного характера роста (меньше всех). По характеру метастазирования и распространения на кожу AMP был схож с ИПР с мед. пр., по другим показателям он ближе находился к TMP.

При микроскопическом исследовании более четко проявились различия между TMP и ИПР с мед. пр. Это касалось и характера роста, и степени атипии и полиморфизма опухолевых клеток, и площади некрозов опухолевой паренхимы и степени лимфоидной инфильтрации стромы (таблица 5). AMP по всем сравниваемым показателям занимал промежуточное положение, но различия между TMP и AMP были невелики, поэтому в ряде случаев их трудно было дифференцировать между собой.

Таблица 5

Микроскопический анализ вариантов медуллярного рака._

" ----_---- Вариант рака TMP AMP ИПР с мед.

Признак —_____ п=20 п=26 пр. п=54

Синцитиальный характер роста 100% не менее 90% от 30% до 90%

Единичные железистые структуры нет да да

Наличие фокусов плоскоклеточной может может может

дифференцировки быть быть быть

Наличие муцина в опухолевых клетках нет может быть может быть

Определяемые фокусы роста инфильтрирующего протокового рака нет нет да

обычной гистоструктуры

Лимфоидная инфильтрация: 1 балл 10% 34,6% 44,5%

2 балла 65% 57,7% 33,3%

3 балла 25% 7,7% 22,2%

Атипия опухолевых клеток: I балл 0 0 0

2 балла 10% 19,2% 31,5%

3 балла 90% 80,8% 68,5%

Полиморфизм опухолевых клеток: 1 балл 0 0 5,6%

2 балла 10% 61,5% 61,1%

3 балла 90% 38,5% 33,3%

Площадь некрозов опухолевых клеток: 0 0 0 33,3%

1 балл 5% 30,8% 38,9%

2 балла 10% 7,7% 16,7%

3 балла 85% 61,5% 11,1%

Все исследованные опухоли имели отрицательную реакцию с антителами к Хромогранину А и отрицательный результат при окраске опухолевых клеток по Гримелиусу.

При анализе атипии и полиморфизма опухолевых клеток обращало внимание, что раковые клетки AMI' и ИПР с мед. пр. при относительно высокой степени атипии были значительно менее полиморфны, чем паренхиматозные клетки TMP. В отличие от TMP в AMP и ИПР с мед. пр. опухолевые клетки в синцитиальных пластах местами лежали рыхло с образованием щелей и формированием железисто-подобных структур.

Какой либо заметной разницы в степени мукоидного набухания опухолевой стромы между исследованными группами не выявлено. Можно говорить лишь о том, что в ГМР оно идет за счет преимущественного накопления (оценка на 2 и 3 балла) нейтральных мукополисахаридов и сильнокислых сульфатированиых гликозаминогликанов и в меньшей степени (оценка на 1 и 2 балла) слабокислых сульфатированиых гликозаминогликанов и сиалогликопротеинов. В AMI' - за счет всех вариантов мукополисахаридов. В НИР с мед. пр. также за счет нейтральных мукополисахаридов и сильнокислых сульфатированиых гликозаминогликанов и в несколько меньшей степени слабокислых сульфатированиых гликозаминогликанов и спалогликопротеинов.

Таблица 6

Анализ пролиферативной активности опухолевых клеток и степени

экспрессии каспазы 3 в различных вариантах медуллярного рака.

Вариант рака TMP AMP ИПР с мед. пр.

................... n=20 п=26 п=54

1¡ритак

Количество митозов в поле 8±2,77 6±1,4 5,33±1,04

зрения (1=0,59 мм

Митотический индекс 32±8,38 26±20,41 23,05±9,37

И 67 73%±10,01% 66,3%±29,56% 43,28%±10,33% *

Экспрессия каспазы 3 13,5%±5,7% 20,7%±9,41% 26% ± 13,25%

Примечание. * - достоверность р<0,001, в сравнении с группой TMP.

При сравнении показателей пролиферативной активности, как видно из таблицы 6, самый высокий уровень по всем трем показателям выявлен в TMP, наименьший - в ИПР с мед. пр. По всем показателям пролиферативной активности TMP превышал ИПР с мед. пр. А по проценту Ki-67 -положительных эпителиальных опухолевых клеток эти различия были статистически значимыми. AMI' по всем исследованным признакам строго занимал промежуточное положение. Различия между AMP и другими исследованными вариантами МРМЖ были статистически не достоверны. Обращает внимание широкий доверительный интервал в группе AMI1 по показателям Ki 67 и митотическому индексу, что указывает на большую вариабельность исследованного признака в группе.

При анализе экспрессии раковыми клетками каспазы 3 выявлена тенденция увеличения среднего значения процента интенсивно окрашенных эпителиальных опухолевых клеток от TMP к AMP и к ИПР с мед. пр. При сопоставлении результатов пролиферативной активности опухолевых клеток вариантов МРМЖ и уровня экспрессии ими каспазы 3 можно предположить, что типичная медуллярная карцинома по темпу роста и скорости увеличения опухолевой массы значительно опережает ИПР с мед. пр.

Таблица 7

Сравнительный анализ плотности сосудов микроциркуляторного русла в _различных вариантах медуллярного рака._

~ —-„.^Вариант рака Признак ~ ---____ TMP п=20 AMP и=26 ИПР с мед. пр. п=54

Относительная доля сосудов МЦР на участке опухолевой ткани 8=0,274 мм" 6,66%±3,06 7,85%±2,94 8,94%±2,15

Суммарная длина сосудов МЦР на участке опухолевой ткани 8=0,274 мм" 0,428мм±0,206 0,541мм±0,14 0,615мм±0,105

Количество пересеченных сосудов в поле зрения с!=0,59 мм 4±1,34 6±1,56 10,5±2,1 *

Примечание. * - достоверность р<0,05, в сравнении с группой TMP.

Как видно из таблицы 7 по всем трем показателям, отражающим степень развития сосудов МЦР, TMP уступал AMP и ИПР с мед. пр. При этом при исследовании каждого признака выявлялась тенденция увеличения степени развития сосудов МЦР от TMP к AMP и к ИПР с мед. пр.

Относительная доля опухолевой стромы в TMP составила 22,8%±6,93, в AMP - 32,4%±9,66, в ИПР с мед. пр. - 39,5%±9,9, при этом различие показателей между TMP и ИПР с мед. пр. было статистически значимым р<0,001). При сравнении показателей относительной доли опухолевой отромы отчетливо выявлялась тенденция увеличения относительной доли опухолевой стромы от TMP к AMP и к ИПР с мед. пр.

Таблица 8

Сравнительный анализ экспрессии цитокератинов в различных вариантах

медуллярного рака.

\ ЦК экспрессия ЦК экспрессия экспрессия ЦК

\ простых эпителиев ЦК 17 плоских эпителиев

\ TMP AMP ИПР TMP AMP ИПР TMP AMP ИПР

\ п=10 n=5 с мед. п=6 п=2 с мед. ii=10 n=5 с мед.

Баллы \ пр. п=10 пр. п=9 пр. п=10

Отрицательная 10% 0 0 33% 0 67% 0 0 0

реакция

1 балл 30% 20% 10% 67% 100% 33% 20% 40% 30%

2 балла 50% 60% 50% 0 0 0 80% 60% 60%

3 балла 10% 20% 40% 0 0 0 0 0 10%

При изучении цнтокератинового профиля во всех вариантах МРМЖ выявлялась одновременная экспрессия ЦК как простых, так и плоских эпителиев. При этом в ИПР с мед. пр. несколько интенсивнее экспрессировались ЦК простых эпителиев, чем в TMP.

Во всех исследованных опухолях определялся высокий уровень коэкс-прессии раковыми клетками синцитиальных структур виментина, максимально выраженный в группе TMP (90%), минимально - в ИПР с мед. пр. (59%), в AMI' положительная реакция к виментину была выявлена в 80% исследованных случаев. При этом клетки сипцитиалыюго компонента были негативны к РЭ и РП, белку HER2/neo, достаточно часто (в 50% проведенных реакций) экспрессировали р53 и в единичных случаях были положительны к bcl-2 онкопротеину.

В ИПР с мед. пр. в отличие от TMP и AMP в 30% исследованных случаев часть опухолевых клеток была положительна к РЭ и/или РП, выявлялись опухоли с гиперэкспрессией белка HER2/nco. Также в группе ИПР с мед. пр. заметно выше была частота экспрессии CD 99 (65%) и несколько реже наблюдалась экспрессия NSE (40%). Положительная реакция в паренхиматозных опухолевых клетках к ЭМА определялась во всех исследованных вариантах МРМЖ.

Заключение. Частота выявления MP среди всех карцином молочной железы по данным зарубежных авторов варьирует от 1% до 10% (Bloom H.J., Richardson W.W., 1970; Rap in V., Contesso G. et al., 1988; Rosen P.P., Obcrman H.A., 1993; Cook D.L., Weaver D.L., 1995). По операционным материалам крупного промышленного города удельная доля MP с лимфоидной стромой (МКБ-О), выделенного на основе предложенных нами критериев, составила 2,83% среди всех удаленных карцином молочной железы. При этом типичный его вариант верифицирован в 0,62%, атипичный - в 0,59%, ИПР с мед.пр. - в 1,62%.

Присутствие в опухолевой ткани структур, характеризующих синцитиальный рост атипичных и полиморфных раковых клеток с высокой митотической активностью, объединяет эти варианты между собой и придает им схожие морфологические особенности: четко очерченный опухолевый край и наличие лимфоидной инфильтрации стромы. Во всех проведенных ИГХ исследованиях данные опухолевые клетки в различных вариантах MP экспрессировали ЦК простых, плоских эпителиев, имели высокий уровень коэкспрессии виментина, часто (до 50%) были положительны к белку р53 и в 100% исследованных случаев были негативны к РЭ и РП. Именно одновременная экспрессия ЦК простых, плоских эпителиев и виментина отличает их от эпителиальных клеток инфильтрирующего протокового рака обычной гистоструктуры, которые, как правило, экспрессируют только ЦК простого эпителия (Ермилова В.Д., Петров C.B., 2004; Ellis О., Schnitt S.J., Sastre-Garau X., Bussolati G. et al., 2003). Учитывая высокий уровень

коэкспрессии раковыми клетками МРМЖ виментина, можно предполагать, что положительная реакция к ЦК с высокой молекулярной массой (смесь ЦК 1,5,10,14) отражает не плоскоклеточную дифференцировку в опухолевых клетках, а положительную реакцию к ЦК, характеризующим миоэпителий. Таким образом, в эпителиальной опухолевой клетке данной группы новообразований выявляются ИГХ признаки, как простого выстилающего эпителия, так и миоэпителия. Tot Т. (2002) в своей работе отметил, что в различных вариантах МРМЖ определяется положительная реакция к ЦК 5-6, типичным для миоэпителиальных клеток. С нашей точки зрения, учитывая слабую степень экспрессии ЦК 17 (на 1 балл) и высокую степень -виментина (на 2 и 3 балла), данный тип недифференцированных опухолевых клеток относится к варианту опухолевой трансформации стволовой клетки мелких концевых проточков дольки, которая сочетает в себе признаки железистой и миоэпителиальной дифференцировки. Бельгийские авторы (Larsimont D., Lespagnard L. et al., 1994) также высказали суждение, что гистогенез клеток МРМЖ связан с клеткой-предшественницей терминального протока дольковой единицы.

Во всех исследованных случаях TMP был на всем протяжении представлен вышеописанными не продуцирующими слизь раковыми клетками, имел скудную строму, низкую степень развития сосудов микроциркуляторного русла и чаще всего - выраженную лимфоплазмоцитарную инфильтрацию.

Морфологическая схожесть типичного и атипичного вариантов MP обусловлена тем, что AMP на большем протяжении (на 90%) представлен структурами TMP, и мы не выявили какого-либо значимого гистохимического и иммуногистохимического признака, позволяющего дифференцировать между собой эти варианты МРМЖ. Только обнаружение пула раковых клеток с морфологически различимой железистой дифференцировкой, которые в ряде случаев могут иметь гистохимические признаки слнзеобразовання, позволяет диагностировать атипичный вариант MP. Вторым критерием, позволяющим дифференцировать между собой TMP и AMP - это наличие метастазов в регионарных ЛУ, которые в нашем исследовании были представлены солидными и железистыми структурами протокового рака. Ни в одном случае нами не было зарегистрировано поражение метастазами рака более 2-х региональных ЛУ. Едва различимые отличия раковой паренхимы AMP от TMP сопровождаются изменением опухолевой стромы, которое проявляется в уменьшении степени выраженности лимфоидной инфильтрации, увеличении в строме количества коллагеновых волокон и сосудов МЦР, при этом площадь некроза и митотический потенциал раковых клеток также снижаются.

ИПР с мед. пр. наряду со структурами типичной медуллярной карциномы содержал хорошо различимые фокусы опухолевых клеток с

железистой дифференцировкой, имеющие черты строения инвазивного протокового рака. Удельный вес синцитиальпой гистоархитектуры раковых клеток в ИПР с мед. пр. в большинстве случаев преобладал. В этом варианте MI' четко прослежена разнородность опухолевых клеток: наряду с недифференцированными раковыми клетками, экспрессирующими ЦК простых, плоских эпителиев и виментин, определялись участки железистого роста, в которых эпителиальные клетки неоплазмы экспрессировали только ЦК простого эпителия. В ряде случаев часть опухолевых клеток экспрессировала РЭ и/или РП, выявлялись опухоли с гиперэкспрессией белка HER2/nco. В этом варианте МРМЖ отмечались случаи с метастатическим поражением до 10 региональных ЛУ, при чем метастазы в большинстве таких наблюдений имели железистый характер строения. Изменения стромы характеризовались значительным увеличением количества коллагеновых волокон, сосудов микроциркуляторного русла при еще большем, чем в AMP снижении степени лимфоидной инфильтрации стромы, очагов некроза опухолевой ткани.

В результате проведенного анализа медицинской документации в группе TMP выявлен самый высокий уровень 5-летней (100%), 10-летней (85,7%) и 15-летеией (75%) безрецидивной выживаемости. При этом он не зависел от объема проведенного оперативного лечения. В TMP выявлен сравнительно низкий уровень развития сосудов микроциркуляторного русла стромы в сравнении с ИПР с мед. пр. Несмотря на то, что в работах некоторых исследователей (Guidi A.J., Berry D.A., Broadwater G. et al., 2002) не выявлена связь между агрессивным поведением рака молочной железы и степенью развития сосудов микроциркуляторного русла в его строме, в нашем исследовании низкий удельный вес сосудов микроциркуляторного русла в строме TMP может объяснить его благоприятное клиническое поведение и причину распространенных некрозов опухолевой паренхимы, делая их одним из характерных морфологических признаков TMP.

У пациенток с ИПР с мед. пр. показатели безрецидивной выживаемости значительно ниже, но в целом они соответствуют уровню безрецидивной выживаемости, характеризующей инфильтрирующий протоковый рак Grade 3 (Zambctti М. et al., 1992). Только в этой группе были зарегистрированы локальные рецидивы опухолевого роста у 2-х пациенток через 2 года после проведенного комплексного лечения.

Больные с AMP имели относительно высокий уровень безрецидивной выживаемости (85%, 83% и 66% соответственно), но несколько меньший, чем в группе TMP, и занимали промежуточное положение по данному показателю между пациентами с TMP и с ИПР с мед. пр. Высокий уровень безрецидивной выживаемости в группе AMP по сравнению с ИПР с мед. пр. можно объяснить тем, что пул клеток с железистой дифференцировкой, способных к метастазированию, здесь очень мал, поэтому безрецидивная

выживаемость в этой группе близка к таковой при 1-ой клинической стадии инфильтрирующего протокового рака (Rosen P.P. et al., 1993).

Такие неблагоприятные прогностические факторы для рака МЖ как: отсутствие экспрессии bcl-2, р53-позитивность, отрицательная реакция с антителами к рецепторам стероидных гормонов (РЭ и РП) и высокий уровень пролиферации (Ермилова В.Д., Петров C.B., 2004, Ellis О., Schnitt S.J., Sastre-Garau X., Bussolati G. et al., 2003) в нашем исследовании достаточно часто выявлялись во всех группах MP. Но только в группе ИПР с мед. пр. они коррелировали с низким уровнем 5-летней безрецидивной выживаемости. При этом степень их выраженности уменьшалась от TMP к AMP и к ИПР с мед. пр. Таким образом, отсутствие экспрессии bcl-2, р53-позитивность, отрицательная реакция с антителами к рецепторам стероидных гормонов (РЭ и РП) и высокий уровень пролиферации - это характерные признаки TMP, но в этой опухоли они не оказывают существенного влияния на прогноз заболевания.

Для создания регистра и полного учета различных морфологических вариантов рака МЖ необходимо применять систему идентификации и кодирования новообразований. Полная идентификация вариантов MP с учетом требований МКБ-Х (1995), МКБ-0 (1995) и международной гистологической классификации опухолей молочной железы (2003) выражается 10-ю знаками и предусматривает учет топографии новообразования (4 знака); морфологического типа (4 знака); характера опухоли (1 знак) и гистологической градации или степени дифференцировки опухоли (1 знак).

По топографии вариантов МРМЖ указывается трехзначная рубрика -С50 2-го класса МКБ-Х, а после точки - четвертый знак с учетом более точной локализации процесса, изменяющийся от 0 до 9. По морфологическому типу MP по МКБ-0 кодируется как медуллярный рак с лимфоидной стромой - M 8512 (считаем, что сюда целесообразно включать типичный и атипичный варианты MP), а ИПР с мед. пр. - M 8521. После «косой» черты указывается следующий знак - «3» (злокачественная опухоль, первичный очаг). Гистологическая градация или степень дифференцировки кодируется 10-ым знаком (МКБ-О). При ИПР с мед. пр. необходимо использовать код «3» (слабо дифференцированная опухоль), при TMP - «4» (недифференцированная, анапластическая опухоль), при атипичном варианте MP - «3».

Уровень безрецидивной выживаемости - один из важных клинических признаков, характеризующих биологическое поведение опухоли. Основное морфологическое различие между вариантами МРМЖ проявлялось в изменении соотношения между синцитиальным компонентом и участками железистого роста. Увеличение структур железистого роста сопровождалось усилением метастазировапия Ml'. При гистологическом исследовании было выявлено, что чем меньше синцитиального компонента из

недифференцированных раковых клеток, тем менее выражена лимфоидная инфильтрация и площадь некроза раковой паренхимы и более развита коллагеновая строма с большей удельной долей сосудов МЦР. При этом по всем исследованным признаками AMP рак занимал промежуточное положение между TMP и ИПР с мед.

С позиций морфогенеза опухоли, имеющего стадийный характер (Foulds L., 1954), где в ходе опухолевой прогрессии может происходить ее клональная эволюция (Пальцев М.А., Иванов A.A., 1995) с появлением новых клонов клеток, имеющих более выраженные способности к инвазивному росту, метастазированию, с появлением другой чувствительности к гормонам и «антигенной невидимости». По теории опухолевой прогрессии начальная фаза стадии инвазивного роста характеризуется в первую очередь ослаблением контактов между клетками, появлением развитой сосудистой сети и стромы, что было прослежено на нашем материале от TMP к AMP и к ИПР с мед. пр. При этом в ИПР с мед. пр. выявлена разнородность опухолевых клеток по характеру экспрессии ЦК. Анализируя полученные данные, нарастание степени выраженности отличий при одновременном уменьшении содержания синцитиального компонента от TMP к атипичному варианту и ИПР с мед. пр. отражает опухолевую прогрессию МРМЖ, проявляющуюся переходом от моноклоновости к поликлоновости с нарастанием степени злокачественности в виде увеличения инвазивного и метастатического потенциала раковых клеток, изменения их гормональной чувствител ьн ости.

Анализируя уровни безрецидивной выживаемости и проведенные объемы оперативного лечения при TMP, AMP и ИПР с мед. пр., можно сделать вывод, что при расширении объема оперативного вмешательства от радикальной резекции МЖ до радикальных мастэктомий в случаях типичного варианта MP отдаленные результаты не улучшаются. Учитывая данное обстоятельство, считаем обоснованным расширить показания к применению органосохраняющих операций, типа радикальной резекции МЖ, при типичном варианте МРМЖ. AMP в нашем исследовании показал несколько меньший, но сравнительно высокий уровень 5-ти, 10-ти и 15-летней безрецидивной выживаемости. В связи с отсутствием в группе AMP пациенток с радикальной резекцией МЖ, оценить отдаленные результаты с данным объемом мы не смогли. Считаем, что AMP требует индивидуального подхода при выборе лечения, так как отрицательная реакция к РЭ/РП, высокая митотическая активность, положительная реакция к белку р53 и отрицательная к Ьс12-онкопротеину не являются неблагоприятными прогностическими факторами в этом варианте рака МЖ.

выводы

1. Удельная доля медуллярного рака среди всех карцином молочной железы у жительниц г. Магнитогорска составила 2,83%, при этом типичный вариант медуллярного рака с лимфоидной стромой верифицирован в 0,62%, атипичный вариант - в 0,59 %, инфильтрирующий протоковый рак с медуллярными признаками - в 1,62%.

2. Ведущими критериями клинико-морфологической диагностики медуллярного рака молочной железы являются следующие признаки:

- четко очерченный опухолевый край;

- наличие структур, характеризующих синцитнальный рост атипичных и полиморфных раковых клеток с высокой митотической активностью;

- различная степень выраженности лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы.

3. Паренхиматозные опухолевые клетки типичного медуллярного рака на всем протяжении имеют синцитиальный рост, характеризуются выраженной ядерной и клеточной атипией с высоким уровнем пролиферации, отсутствием муцина, распространенными некрозами, отрицательной реакцией к рецепторам эстрогена и прогестерона, белку НЕК2/пео и положительной реакцией к эпителиальному мембранному антигену. Раковые клетки маркируются цитокератинами как простых, так и плоских эпителиев, имеют высокий уровень экспрессии виментина и белка р53. Строма типичного медуллярного рака развита слабо, отличается малым количеством коллагеновых волокон и низкой степенью развития сосудов микроциркуляторного русла. Лимфоидная инфильтрация стромы умеренная или выраженная, представлена преимущественно Т-лимфоцитами, а в части случаев с формированием саркоидных эпителиоидно-клеточных гранулем. Для типичного медуллярного рака характерно отсутствие метастазов в региональных лимфатических узлах и распространения опухолевого процесса на кожу. Данный вариант медуллярной карциномы характеризуется благоприятным биологическим поведением с высоким уровнем 5-, 10- и 15-летней безрецидивной выживаемости (100%, 85,7% и 75% соответственно) независимо от размера опухолевого узла и объема проведенного оперативного лечения.

4. Атипичный медуллярный рак по морфофункциональной характеристике паренхимы и стромы имел сходные черты с типичным вариантом этой карциномы, отличаясь:

- присутствием единичных железистых структур, трабекул или цепочек из раковых клеток, в которых в части случаев выявлялись признаки слизеобразования;

- наличием метастатического поражения региональных лимфатических узлов структурами протокового рака, при этом не было зарегистрировано поражение более 2-х узлов;

- уменьшением степени выраженности лимфоидной инфильтрации, площади некроза паренхимы и митотической активности раковых клеток;

- увеличением в строме количества коллагеновых волокон и сосудов микроциркуляторного русла;

- несколько меньшим уровнем 5-, 10- и 15-летней безрецидивной выживаемости.

5. В инфильтрирующем протоковом раке с медуллярными признаками определяются многочисленные опухолевые железистые структуры и/или мелкие дискретные комплексы в виде трабекул или цепочек с четкими признаками инвазивного роста. В новообразованиях этой группы значительно увеличено количество коллагеновых волокон, сосудов микроциркуляторного русла при заметном снижении степени лимфоидной инфильтрации стромы, очагов некроза опухолевой ткани. В то же время количество структур, характерных для типичной медуллярной карциномы, варьирует от 30% до 90% исследованной опухолевой ткани. Регистрируется положительная реакция в части раковых клетках к рецепторам эстрогена и/или прогестерона, а в 25% обследованного материала - гиперэкспрессия белка НПК2/псо. Как правило, выявляется метастатическое поражение более 2-х регионарных лимфатических узлов, обычно имеющих железистый характер строения. Данный вариант рака характеризуется низким уровнем 5-и 10-летней безрецидивной выживаемости, составляющей 52% и 18% соответственно.

6. Морфогенез медуллярного рака молочной железы с лимфоидной стромой имеет 3-х этапный характер. Типичный медуллярный рак является однородной моноклональной опухолью, протекающей клинически благоприятно, и соответственно обоснованным является применение при ней органосохраняющих операций. Атипичный медуллярный рак, инфильтрирующий протоковый рак с медуллярными признаками целесообразно оценивать как 2-ой и 3-ий этапы течения этой карциномы с нарастанием злокачественности, появлением в опухолевой ткани клонов раковых клеток, способных к инвазивному росту и метастазпрованию, что отражается на клиническом течении заболевания, а терапия их требует интегрального комплексного подхода, как при банальном протоковом инфильтрирующем раке.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Комплексный клинико-морфологический подход к верификации группы медуллярного рака с лимфоидной стромой должен базироваться на результатах анализа клинических проявлений заболевания, а при патоморфологическом исследовании операционных материалов - на тщательной оценке макроскопической картины, использовании при гистологическом исследовании обычных, специальных методов и

морфометрических приемов. При верификации этапа морфогенеза (прогрессии) опухоли морфологическое исследование должно включать и результаты иммуноморфологического выявления в паренхиме рецепторов эстрогена, прогестерона, белка Ki 67 и HER2/neo.

2. С учетом особенностей прогрессии медуллярного рака молочной железы при верификации этапов его морфогенеза расширение показаний к проведению органосохраняющих оперативных вмешательств оправдано только при типичной медуллярной карциноме. Появление признаков поликлоновости в медуллярном раке, сопровождающееся повышением злокачественности новообразования, делает целесообразным применение в таких случаях стандартных подходов, определенных для инвазнвного протокового рака молочной железы.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Федяева Л.М. Клинико-морфологический анализ случаев медуллярной карциномы молочной железы / Л.М. Федяева // Актуальные вопросы патологической и нормальной морфологии: межрегиональный сб. науч. тр., посвященных 80-летию патологоанатомической службы Рязанской области - Рязань - Москва, 2008. - С. 56-60.

2. Федяева Л.М. Сравнительный морфологический анализ типичного и атипичного медуллярного рака молочной железы / Л.М. Федяева 7 Материалы VI итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии - Челябинск, 2008.-С. 154-156.

3. Федяева Л.М. Клнннко-морфологнческнн анализ 34 наблюдений медуллярном карцппомы молочной железы / Л.М. Федяева // Медицинская наука н образование Урала. - 2008. - 'Г.54, JN1>2. - С. 116-117.

4. Коваленко B.JI. Сравнительным анализ различных класснфнкацнонных схем морфологических вариантов медуллярного рака молочном железы / В.Л. Коваленко, Л.М. Федяева // Уральский мед. жури. - 2009. - Т.58, №4. - С. 49-51.

5. Федяева Л.М. Анализ плотности сосудов микроциркуляторного русла в различных вариантах медуллярного рака молочной железы / Л.М. Федяева // Медицинский вестник Башкортостана. - 2010. - Т.5, №3, приложение. - С. 51-52.

6. Коваленко В.Л. Морфологическая диагностика и принципы лечения медуллярного рака молочной железы / В.Л. Коваленко, Л.М. Федяева, C.B. Яйцев // Методические рекомендации. Утверждены приказом Министерства Здравоохранения Челябинской области от 07.07.2010 №895 -Челябинск, 2010.-е. 23.

7. Федяева Л.М. Сравнительный анализ плотности сосудов микроциркуляторного русла в типичном и атипичном медуллярном раке

молочной железы / JI.M. Федяева // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Стратегия развития онкорадиологической службы в регионах Российской Федерации» - Челябинск, 2010. - С. 129-130.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

AMP - атипичный медуллярный рак

ИГХ реакция - иммуногистохимическая реакция

ИПР с мед. пр. - инфильтрирующий протоковый рак с медуллярными признаками

ЛУ - лимфатические узлы МЖ - молочная железа MP - медуллярный рак

МРМЖ - медуллярный рак молочной железы

МЦР - микроциркуляторное русло

ПХТ - полихимиотерапия

РП - рецепторы прогестерона

РЭ-рецепторы эстрогена

TMP - типичный медуллярный рак

ЦК - цитокератин(ы)

ЭМА - эпителиальный мембранный антиген

На правах рукописи

ФЕДЯЕВА ЛОРИСА МАРАДОВНА

КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВАРИАНТОВ МЕДУЛЛЯРНОГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

14.03.02 - патологическая анатомия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2010

Ошсчатамо н (X) 11КФ "Сглус», I'. Мш шпогорск, ул. Гряшока, 20, тел. (3519)

ТирЛ'ЛС 1(Ю 'Ж !.

V

\

Актуальность.

Рак молочной железы - одна из самых распространенных форм злокачественных опухолей в структуре онкологической заболеваемости и смертности женщин. Заболеваемость раком молочной железы (МЖ) непрерывно растет, увеличиваясь ежегодно на 1-2%. По данным ВОЗ ежегодно в мире регистрируется более 650 тысяч новых случаев рака МЖ, в странах СНГ - свыше 50 тысяч. Это наиболее частая локализация злокачественного новообразования у жительниц США, где данная патология развивается у каждой восьмой женщины, и в странах Европы, где заболевает каждая десятая (Boyle Р, Ferlay J., 2005). По данным американских авторов при локализованных стадиях рака МЖ 5-летняя выживаемость достигает 90%, при вовлечении подмышечных лимфатических узлов (ЛУ) — 68%, а при наличии отдаленных метастазов -18% (Young J.L, Percy C.L., Asiré A J., 1981). В России эти показатели значительно ниже (Хайленко В.А., Комов Д.В., Богатырев В.Н., 2005).

Медуллярный рак (MP) относится к группе редких форм новообразований МЖ и составляет от 1 до 10% всех злокачественных эпителиальных опухолей МЖ (Bloom Н. J., Richardson W.W., Field J. R., 1970; Rapin V., Contesso G., Mourisse H., Bertin F. et al., 1988; Rosen P.P., Oberman H.A., 1993; Cook D.L., Weaver D.L., 1995). Несоответствие высокозлокачественной морфологической картины и относительно благоприятного биологического поведения опухоли выделяет ее из общего ряда инфильтрирующих раков МЖ. Имея морфологические черты высокозлокачественной опухоли с выраженной ядерной и клеточной атипией и высоким уровнем пролиферации, MP по этим признакам в большинстве случаев должен быть отнесен к 3 степени злокачественности по системам Mod. Bloom-Richardson grading (1997) и Eiston C.W. et Ellis I.O. (1991), но биологическое поведение опухоли, наоборот, является менее злокачественным (Ellis О., Schnitt S.J., Sastre-Garau X., Bussolati G. et al., 2003).

На сегодняшний день существует 3 классификационные схемы медуллярного рака молочной железы (МРМЖ): Ridolfi R.L. et al. (1977), Wargotz E.S. et al. (1988) и Pedersen L. et al. (1991). Все они разнятся между собой по количеству гистологических признаков, необходимых для постановки диагноза типичного медуллярного рака (TMP). Выбор классификационной схемы в работе патологоанатома произволен.

В зарубежной медицине подход к лечению TMP и «немедуллярного рака» молочной железы, к которому обычно относят инфильтрирующий протоковый рак с медуллярными признаками, различен (Rubens J.R, Lewandrowski K.B, Kopans D.B, Koemer F.C, Hall D.A, McCarthy K.A., 1990). В отечественной литературе также имеются немногочисленные клинические сообщения о первых результатах проведения органосохраняющих операций при МРМЖ (Абдылаев Д.К. и др., 2000). В то же время данная группа рака МЖ является неоднородной, и на сегодняшний день отсутствуют простые, четкие и легко воспроизводимые морфологические критерии, позволяющие исключить риск гипердиагностики типичного варианта МРМЖ, отличающегося благоприятным биологическим поведением. (Gaffey М. J., Mills S. Е., Frierson Н. F. Jr., Zarbo R. J. et al., 1995). До сих пор является проблемой и отсутствие единого мнения в вопросах терминологии МРМЖ, что в очередной раз свидетельствует о недостаточной изученности этой формы рака МЖ.

Уровень развития науки и медицины определяет наши знания о болезнях и диктует методы их лечения и профилактики. Проблема адекватности лечения в онкологической службе является одной из главных. Проводимое лечение не должно принести вреда больше, чем злокачественная опухоль. Проведение органосохраняющих операций при раке - это вопрос сложного выбора, учитывающего несколько факторов. В случае варианта МРМЖ, характеризующегося благоприятным прогнозом, мы сталкиваемся с проблемой его морфологической диагностики.

Цель исследования: на основе ретроспективного патоморфологического изучения операционных материалов и результатов клинического исследования разработать унифицированные критерии морфологической диагностики вариантов медуллярного рака молочной железы и принципы их рационального лечения.

Задачи исследования:

1. Выделить признаки, позволяющие идентифицировать медуллярный рак молочной железы, определить удельный вес этой группы карциномы и ее гистологических вариантов в операционных материалах, относящихся к раку молочной железы.

2. Представить морфофункциональную характеристику паренхимы и стромы типичного медуллярного рака, оценить его метастатический потенциал, особенности клинического течения.

3. Выявить особенности морфофункциональной характеристики паренхимы и стромы, клинического течения атипичного медуллярного рака молочной железы.

4. Представить клинико-морфологическую характеристику выделенного на наших материалах гистологического варианта медуллярного рака - инфильтрирующего протокового рака с медуллярными признаками.

5. Создать унифицированный подход к морфологической и клинической дифференциальной диагностике вариантов медуллярного рака молочной железы.

6. Оценить возможные пути прогрессии изучаемой группы рака молочной железы и сформулировать основные принципы рационального лечения на разных этапах его развития.

Новизна исследования

Впервые проведено комплексное клинико-морфологическое изучение группы медуллярного рака молочной железы с применением при исследовании операционных материалов обычных, специальных, иммуноморфологических окрасок и морфометрических приемов, что позволило уточнить дифференциально-диагностические критерии типичного, атипичного медуллярного рака и инфильтрирующего протокового рака с медуллярными признаками. На основании выявленных особенностей паренхимы и стромы в изучаемых вариантах медуллярного рака обосновано выделение трех этапов морфогенеза медуллярной карциномы с нарастанием проявлений ее злокачественности от типичного медуллярного рака (моноклоновой опухоли) - 1 этап морфогенеза к инфильтрирующему протоковому раку с медуллярными признаками (поликлоновое новообразование) - 3 этап морфогенеза.

Практическая ценность работы Разработаны унифицированные подходы к клинико-морфологической верификации медуллярного рака молочной железы и его вариантов. С учетом гистологического варианта опухоли, являющегося определенным этапом ее прогрессии, рекомендуется расширить показания к органосохраняющим операциям типа радикальной резекции молочной железы лишь на 1 этапе морфогенеза - типичном медуллярном раке. Атипичный медуллярный рак и инфильтрирующий протоковый рак с медуллярными признаками требуют стандартных подходов к леченшо, применяемых при инвазивном протоковом раке.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту 1. Отличительными клинико-морфологическими особенностями медуллярного рака молочной железы и его вариантов являются: - четко очерченный опухолевый край;

- наличие структур, характеризующих синцитиальный рост атипичных и полиморфных раковых клеток с высокой митотической активностью, которые при иммуногистохимическом исследовании экспрессируют цитокератины простых и плоских эпителиев и имеют высокий уровень коэкспрессии виментина;

- различная степень выраженности лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы.

2. Основное различие между вариантами медуллярного рака проявляется в изменении соотношения между синцитиальным компонентом и участками железистого роста. Увеличение структур железистого роста проявляется усилением метастазирования, нарастанием в строме количества коллагеновых волокон, сосудов микроциркуляторного русла, уменьшением площади некрозов раковых клеток, уровня их митотической активности, степени лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы.

3. Нарастание степени выраженности отличий при одновременном уменьшении содержания синцитиального компонента от типичного медуллярного рака к атипичному варианту и инфильтрирующему протоковому раку с медуллярными признаками отражает опухолевую прогрессию медуллярного рака, проявляющуюся переходом от моноклоновости к поликлоновости с нарастанием степени злокачественности в виде увеличения инвазивного и метастатического потенциала его паренхимы.

Внедрение результатов исследования в практику

По материалам диссертации изданы методические рекомендации «Морфологическая диагностика и принципы лечения медуллярного рака молочной железы», утвержденные приказом Министерства Здравоохранения Челябинской области от 07.07.2010 №895, которые внедрены в практику работы ОГУЗ «Челябинское областное патологоанатомическое бюро», патологоанатомического отделения ГУЗ «Областной онкологический диспансер №2», патологоанатомического отделения Челябинского окружного клинического онкологического диспансера, в учебный процесс на кафедре патологической анатомии с секционным курсом и кафедре онкологии Челябинской государственной медицинской академии.

Апробация работы и публикации Материалы диссертации представлены на У1-ой итоговой научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2008), в докладе на Научной сессии, посвященной 10-летию Южно-Уральского научного центра РАМН «Медицинская академическая наука - здоровью населения Урала» (Челябинск, 2008), на заседании кафедры патологической анатомии с секционным курсом и кафедры онкологии Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2010).

выводы

1. Удельная доля медуллярного рака среди всех карцином молочной железы у жительниц г. Магнитогорска составила 2,83%, при этом типичный вариант медуллярного рака с лимфоидной стромой верифицирован в 0,62%, атипичный вариант - в 0,59 %, инфильтрирующий протоковый рак с медуллярными признаками - в 1,62%.

2. Ведущими критериями клинико-морфологической диагностики медуллярного рака молочной железы являются следующие признаки:

- четко очерченный опухолевый край;

- наличие структур, характеризующих синцитиальный рост атипичных и полиморфных раковых клеток с высокой митотической активностью;

- различная степень выраженности лимфоидной инфильтрации опухолевой стромы.

3. Паренхиматозные опухолевые клетки типичного медуллярного рака на всем протяжении имеют синцитиальный рост, характеризуются выраженной ядерной и клеточной атипией с высоким уровнем пролиферации, отсутствием муцина, распространенными некрозами, отрицательной реакцией к рецепторам эстрогена и прогестерона, белку НЕК2/пео и положительной реакцией к эпителиальному мембранному антигену. Раковые клетки маркируются цитокератинами как простых, так и плоских эпителиев, имеют высокий уровнем экспрессии виментина и белка р53. Строма типичного медуллярного рака развита слабо, отличается малым количеством коллагеновых волокон и низкой степенью развития сосудов микроциркуляторного русла. Лимфоидная инфильтрация стромы умеренная или выраженная, представлена преимущественно Т-лимфоцитами, а в части случаев с формированием саркоидных эпителиоидно-клеточных гранулем. Для типичного медуллярного рака характерно отсутствие метастазов в региональных лимфатических узлах и распространения опухолевого процесса на кожу. Данный вариант медуллярной карциномы характеризуется благоприятным биологическим поведением с высоким уровнем 5-, 10- и 15119 летней безрецидивной выживаемости (100%, 85,7% и 75% соответственно) независимо от размера опухолевого узла и объема проведенного оперативного лечения.

4. Атипичный медуллярный рак по морфофункциональной характеристике паренхимы и стромы имел сходные черты с типичным вариантом этой карциномы, отличаясь:

- присутствием единичных железистых структур, трабекул или цепочек из раковых клеток, в которых в части случаев выявлялись признаки слизеобразования;

- наличием метастатического поражения региональных лимфатических узлов структурами протокового рака, при этом не было зарегистрировано поражение более 2-х узлов;

- уменьшением степени выраженности лимфоидной инфильтрации, площади некроза паренхимы и митотической активности раковых клеток;

- увеличением в строме количества коллагеновых волокон и сосудов микроциркуляторного русла;

- несколько меньшим уровнем 5-, 10- и 15-летней безрецидивной выживаемости.

5. В инфильтрирующем протоковом раке с медуллярными признаками определяются многочисленные опухолевые железистые структуры и/или мелкие дискретные комплексы в виде трабекул или цепочек с четкими признаками инвазивного роста. В новообразованиях этой группы значительно увеличено количество коллагеновых волокон, сосудов микроциркуляторного русла при заметном снижении степени лимфоидной инфильтрации стромы, очагов некроза опухолевой ткани. В то же время количество структур, характерных для типичной медуллярной карциномы, варьирует от 30% до 90% исследованной опухолевой ткани. Регистрируется положительная реакция в части раковых клетках к рецепторам эстрогена и/или прогестерона, а в 25% обследованного материала - гиперэкспрессия белка НЕЯ2/пео. Как правило, выявляется метастатическое поражение более

2-х регионарных лимфатических узлов, обычно имеющих железистый характер строения. Данный вариант рака характеризуется низким уровнем 5-и 10-летней безрецидивной выживаемости, составляющей 52% и 18% соответственно.

6. Морфогенез медуллярного рака молочной железы с лимфоидной стромой имеет 3-х этапный характер. Типичный медуллярный рак является однородной моноклональной опухолью, протекающей клинически благоприятно, и соответственно обоснованным является применение при ней органосохраняющих операций. Атипичный медуллярный рак, инфильтрирующий протоковый рак с медуллярными признаками целесообразно оценивать как 2-ой и 3-ий этапы течения этой карциномы с нарастанием злокачественности, появлением в опухолевой ткани клонов раковых клеток, способных к инвазивному росту и метастазированию, что отражается на клиническом течении заболевания, а терапия их требует интегрального комплексного подхода, как при банальном протоковом инфильтрирующем раке.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Комплексный клинико-морфологический подход к верификации группы медуллярного рака с лимфоидной стромой должен базироваться на результатах анализа клинических проявлений заболевания, а при патоморфологическом исследовании операционных материалов - на тщательной оценке макроскопической картины, использовании при гистологическом исследовании обычных, специальных методов и морфометрических приемов. При верификации этапа морфогенеза (прогрессии) опухоли морфологическое исследование должно включать и результаты иммуноморфологического выявления в паренхиме рецепторов эстрогена, прогестерона, белка Кл 67 и НЕЫ2/пео.

2. С учетом особенностей прогрессии медуллярного рака молочной железы при верификации этапов его морфогенеза расширение показаний к проведению органосохраняющих оперативных вмешательств оправдано только при типичной медуллярной карциноме. Появление признаков поликлоновости в медуллярном раке, сопровождающееся повышением злокачественности новообразования, делает целесообразным применение в таких случаях стандартных подходов, определенных для инвазивного протокового рака молочной железы.