Клинико-иммунологическая диагностика и иммунокоррекция при рассеянном склерозе

Акимов, Станислав Борисович

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Клинико-иммунологическая диагностика и иммунокоррекция при рассеянном склерозе

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Акимов, Станислав Борисович Санкт-Петербург 2004 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Клинико-иммунологическая диагностика и иммунокоррекция при рассеянном склерозе

На правах рукописи

р Г Б ОД

АКИМОВ Станислав Борисович 2 9 Я Н В 2004

КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА И ИММУНОКОРРЕКЦИЯ ПРИ РАССЕЯННОМ СКЛЕРОЗЕ

14.00.36 - аллергология и иммунология 14.00.13 - нервные болезни

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург - 2003

Работа выполнена в Военно-медицинской академии и Всероссийском цешре экстренной и радиационной медицины МЧС России, Санкт-Петербург.

Научные руководители:

Доктор медицинских наук профессор Калинина Наталия Михайловна Кандидат медицинских наук Бисага Геннадий Николаевич

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук профессор Козлов Виктор Константинович Доктор медицинских наук профессор Зинченко Александр Павлович

Ведущая организация: Институт мозга человека РАН

Защита диссертации состоится 2004 г. в / Э часов I

заседании Диссертационного совета Д 215.002.08 в Военно-мсднцннскон академии им. С.М. Кирова (194044, г. Санкт-Петербург, ул. Лебедева, дом 6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова.

Автореферат разослан " "г&^Х^рз г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Доктор медицинских наук профессор Пастушенков Владимир Леонидович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Рассеянный склероз (PC) - хроническое прогрессирующее заболевание центральной нервной системы, проявляющееся рассеянной неврологической симптоматикой и патоморфологически характеризующееся образованием очагов разрушения миелина в белом веществе головного и спинного мозга (Гусев Е.И. и соавт., 1997). Обычно заболевание начинается в молодом возрасте и, в типичных случаях, изначально имеет ремиттирующее течение, с наличием периодов обострений и ремиссий. В 10-15% случаев наблюдается первично-прогредиентное течение PC, когда заболевание характеризуется неуклонным нарастанием неврологического дефицита, при этом периоды хронического прогрессирования могут чередоваться с периодами стабилизации (Головкин В.И., 2003).

Данные многочисленных популяционных и миграционных исследований убедительно подтверждают участие наследственных факторов в развитии заболевания (Бадапян J1.0. и др., 1987, Ebers G.С., Sadovnick A.D., 1994, Compston D.A.S. et al., 1995). Установлено, что генетические факторы могут не только обуславливать предрасположенность к PC, но влиять на особенности клинической картины, патогенеза, течения PC и прогноз заболевания (Gorodezky С. et al., 1986; Hillen J. et al., 1992; Runmarker B. et al., 1994; Dyment D.A. et al., 1997). Наиболее сальные ассоциации прослеживаются с генами и антигенами главного комплекса гистосовместимости (ГКГ): гаплотипом DRB1 *1501-DQA1 *0102-DQB10602 и антигеном HLA-DR2 (Dhib-Jalbut S. et al., 1990, Hillert J„ Olerup O, 1993, Ghabanbasani M.Z. et al., 1995).

Решающее значение, в развитии иммунопатологического процесса в ЦНС имеет баланс активационных и супрессорных цитокинов, их растворимых рецепторов и ингибиторов (Столяров И.Д., Осетров Б.А., 2002). Предшествующее обострению преобладание продукции провоспалительных цитокинов, продуцируемых преимущественно Т хелперами 1 типа: IL-2, IFN-y, TNF-a, и оказывающих, помимо иммунорегуляторного, прямое повреждающее действие на миелин и олигодендроциты, сменяется нарастанием продукции противовоспалительных цитокинов, секретируемых Т хелперами (Тх) 2 типа: IL-4, IL-10, TGF-ß (Lu C.Z. et al., 1993, Rieckman P. et al., 1994, Navikas V. et al., 1995), что ограничивает повреждение собственных тканей организма и снижает активность иммунопатологического процесса.

За последние годы достигнут значительный прогресс в понимании механизмов развития демиеликизирующего процесса при PC и роли цитокинов в патогенезе PC, в результате стало возможным применение цитокиновых препаратов для лечения больных PC. Наиболее широко применяемыми с этой целью препаратами являются интерфероны, и в частности, интерферон-бета-1Ь. Важным достижением последних лет принято считать появление препарата другого класса - кополимера-1, успешное применение которого связывают с

его способностью вырабатывать толерантность Т лимфоцитов к основному белку миелина (ОБМ). При обострении заболевания продолжают использовать кортикостероиды, предпочтение отдается коротким курсам в высоких дозах. Однако, несмотря на широкое применение данных препаратов, ключевые моменты вызываемых ими изменений иммунологических параметров до настоящего времени остаются недостаточно изученными (НоЫГеШ Я., 1997; №со1ет Р. е1 а1., 1999; Ьоэу.). е1 а1., 2002), отсутствуют надежные прогностические признаки эффективности иммуиомодулирующей терапии.

Несмотря на активное изучение иммукопатогенеза РС особенности развития иммунопатологического процесса при различных вариантах РС, иммунологические маркеры прогноза РС, механизмы реализации генетической предрасположенности, остаются неясными. В связи с "омоложением" контингента больных РС, ранней инвалидизацией пациентов, расширением зоны с высокой распространенностью рассеянного склероза, сложностью ранней диагностики заболевания, высокой стоимостью современного печения, необходимостью проведения комплексных реабилитационных мероприятий, особую актуальность приобретает уточнение механизмов развития иммунопатологического процесса, характерного для различных вариантов РС, изучение механизмов действия и возможных предикторов клинической эффективности современных иммуномодулирующих препаратов.

В связи с вышеизложенным была сформулирована цель исследования: На основании изучения распределения антигенов НЬА, особенностей параметров клеточного иммунитета и цитокинового профиля у пациентов с различными вариантами течения РС выявить диагностически значимые показатели, маркеры прогноза и предикторы клинической эффективности иммуиомодулирующей терапии.

Для достижения цели были сформулированы следующие задачи исследования:

1. Изучить распределение антигенов главного комплекса гистосовместимости у больных РС.

2. Изучить параметры клеточного иммунитета и цитокинового статуса у больных с ремиттирующим и прогредиентным РС в различные фазы патологического процесса: обострения/активного течения и ремиссии/стабилизации.

3. Изумить особенности клеточного иммунитета и цитокинового профиля у пациентов с благоприятным и неблагоприятным течением РС.

4. Изучить корреляционные взаимосвязи между иммунологическими и иммуногенетическимл показателями у пациентов с РС.

5. Оценить влияние иммуномодулируюшеи терапии интерфероном-бета-1Ь,

кополимером-1, метилпреднизолоном на изученные иммунологические показатели.

6. Вылепить и охарактеризовать иммунологические предикторы клинической эффективности иммуномодулируюшеи терапии.

Научная новизна исследования.

Проведенное исследование позволило установить связь антигенов системы НЬА и их сочетаний с заболеваемостью РС среди жителей Северо-западного региона. При этом обнаружены связи, характерные для изученной популяции.

Выявлены особенности экспрессии активационных маркеров и продукции цитокинов лимфоцитами периферической крови пациентов с различными типами течения РС и в различные фазы патологического процесса.

Впервые сопоставлены особенности НЬА фенотипа больных РС с паттернами продукции цитокинов и количественными характеристиками субпопуляций лимфоцитов.

Впервые проанализированы иммунологические параметры при благоприятном и неблагоприятном вариантах РС, выявлены и охарактеризованы критерии неблагоприятного прогноза.

Изучены изменения показателей клеточного и гуморального иммунитета при назначении иммуномсдулирующей терапии, выявлены предикторы клинической эффективности интерферона-бета-1Ь.

Практическая значимость.

Выявленные особенности распределения антигенов системы НЬА, изменения субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови больных РС, продукции цитокинов и пролиферативной активности клеток могут быть использованы при дифференциальной диагностике РС как с другими заболеваниями, так и внутри этой нозологической формы. Оценка показателей продукции цитокинов может быть использована для уточнения стадии и активности иммунопатологического процесса при выборе метода терапии.

Изучение изменений субпопуляционного состава лимфоцитов и уровней продукции цитокинов позволяет прогнозировать не только развитие клинической симптоматики, обострение и ремиссию, но также развитие патологического процесса в долгосрочной перспективе.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Заболеваемость рассеянным склерозом среди жителей Северо-западного региона ассоциируется с антигенами главного комплекса гистосовместимости (ПСГ). Существуют антигены ГКГ, предрасполагающие к развитию рассеянного склероза, а также антигены, оказывающие протекторное действие в отношении развития заболевания. Особенности продукции провоспалительных цитокинов связаны с НЬА фенотипом больного и определяют характер течения заболевания (благоприятное или неблагоприятное).

2. Изменения иммунологических показателей периферической крови больных РС зависят от стадии процесса и типа течения РС. У больных с ремиттируюшим течением наблюдается выраженная цикличность в характере иммунного ответа - при обострении преобладает продукция цитокинов Тх1 типа, которая сменяется повышенной продукцией Тх2 цитокинов, что является компенсаторным механизмом и способствует наступлению ремиссии. Для больных с прогредиентным течением данная цикличность не характерна: наблюдаются признаки смешанного Тх1/Тх2 иммунного ответа, причем функциональная способность клеток иммунной системы у этих пациентов снижена.

3. Препараты, обладающие иммуномодулирующими свойствами и используемые в терапии рассеянного склероза (интерферон-бета-1Ь, кополимер-1, метилпреднизолон) отличаются по своим эффектам на параметры иммунитета. Положительный клинический эффект при использовании интерферона-бета-1Ь и метилпреднизолона сопровождается изменениями иммунологических параметров периферической крови.

Апробация работы. Результаты исследования были доложены на Юбилейной научной конференции ВМедА (Санкт-Петербург, 1997), итоговых конференциях ВМедА (Санкт-Петербург, 1998, 1999), конференциях «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (1999, 2001), 15-ом конгрессе Европейского общества изучения и лечения рассеянного склероза (Базель, 1999), научно-практической конференции «Нейроиммунология» (Санкт-Петербург, 2001).

По теме диссертации опубликовано 14 научных работ.

Полученные результаты используются в лечебной практике клиники нервных болезней Военно-медицинской академии. Разработки диссертации используются в лекциях и на практических занятиях со слушателями факультетов подготовки врачей, I и VI факультетов Военно-медицинской академии.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 182 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных

исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы. Текст диссертации проиллюстрирован 30 таблицами и 14 рисунками. Библиографический список включает 383 источника.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ. Материал и методы исследования

В ходе исследования было проведено неврологическое и иммунологическое обследование 105 пациентов (62 женщины и 43 мужчины). Средний возраст больных составил 35,2+1,1 года, средний возраст начала заболевания 26,2±0,8 года, средняя продолжительность заболевания 9,2±0,7 года. Оценку тяжести состояния больных проводили по шкале EDSS Куртцке (1983). По характеру течения PC классифицировали как: 1. ремиттирующий (57 пациентов) с типичной для заболевания нестойкостью и дробностью появления отдельных симптомов; 2. прогредиентный (48 пациентов) при неуклонном прогрессировании процесса, в группу были включены больные с первично- и вторично-прогрессирующим течением. Фазы обострения и ремиссии определяли по критериям С.М.Poser (1983), в фазе обострения находился 31 пациент с ремитгирующим течением PC (ОРТ), в ремиссии находилось 26 пациентов с ремитгирующим PC (РРТ). Стабилизацию определяли как отсутствие обострений, ремиссий или хронического прогрессирования на протяжении, по крайней мере, 1 месяца. В стадии стабилизации находилось 12 пациентов с прогредиентным течением PC (СПТ). При наличии признаков хронического прогрессирования, выражавшегося в увеличении тяжести симптомов заболевания на протяжении не менее двух месяцев без стабилизации или улучшения, пациентов относили к группе больных с активным прогредиентным PC (АПТ), в которую вошло 36 пациентов.

Достоверность диагноза PC определяли по шкале С.М.Poser (1983). Всем больным для верификации диагноза проводили МРТ головного мозга (при необходимости - МРТ шейного и грудного отделов) с целью подтверждения многоочагового поражения ЦНС. При отсутствии изменений на МРТ, характерных для PC (по критериям D.W.Paty, 1999), также проводили исследование спинномозговой жидкости с целью выявления повышенного уровня свободных легких цепей иммуноглобулинов типа каппа и лямбда. Все 105 пациентов, чьи данные были включены в статистической анализ, имели достоверный диагноз PC. У части больных выделяли благоприятный вариант PC (БРС) - при длительности заболевания более 10 лет уровень неврологического дефицита по шкале EDSS составлял не более 3 баллов (Paty D.W., Ebers G.С., 1998) и неблагоприятный PC (НРС)- при длительности PC до 5 лет, степень неврологического дефицита составляла 5 и более баллов по шкале EDSS (Kurtzke J.F. et al., 1977).

Для изучения влияния иммуномодулирующей терапии на показатели иммунного статуса больных PC было сформировано три группы пациентов: первая группа получала интерферон-бета-1Ь, вторая - кополимер-1, третья -метилпреднизолон. Клиническое неврологическое и иммунологическое обследование больных, получавших интерферон-бета-1Ь и кополимер-1, проводилось до назначения терапии, через три месяца приема препарата и по завершению курса. Иммунологическое обследование пациентов, получавших метилпреднизолон проводилось перед началом курса и на 10-й день терапии, оценка клинического эффекта - на 10 и 21 дни. Все больные, включенные в группы лечения, не получали средств патогенетической терапии в течение месяца до назначения исследуемых препаратов. Бета-интерферон-1Ь (бетаферон, "Шеринг-АГ", Германия) назначался в дозе 8 млн международных единиц (MME) подкожно через день. В группу лечения вошли 4 женщины и 8 мужчин. Кополимер-1 ("копаксон TEVA") назначался ежедневно по 20 мг подкожно, группа состояла из 10 пациентов (6 мужчин, 4 женщин). Пациенты первой и второй групп находились в стадии ремиссии. Метилпреднизолон использовался в дозе 500 мг внутривенно ежедневно первые три дня, затем через день, всего 46 инъекций. Метилпреднизолон был назначен 22 больным, находившимся в стадии обострения.

Об эффективности применения препаратов судили на основании анализа изменения неврологического статуса, при этом эффективность терапии оценивали в баллах: 0 - нет эффекта (продолжение прогрессирования или дальнейшее ухудшение), 1 - сомнительный или нестойкий эффект, 2 - слабый положительный эффект (исчезновение/улучшение 1-2 симптомов, стабилизация по шкале EDSS), 3 - умеренный положительный эффект (исчезновение/улучшение 3-4 симптомов, снижение по шкале EDSS на 0,5 балла), 4 - выраженный эффект (исчезновение/улучшение 4-6 симптомов, улучшение по шкалу EDSS на 1-1,5 балла), 5 - резко выраженный эффект (уменьшение тяжести по шкапе EDSS на 2 и более балла). О наличии положительного эффекта говорили при эффективности препарата равной или превышающей 2 балла. В то же время, учитывая открытый характер исследования (и больной, и врач знали о применяемом препарате) и влияние субъективного фактора в оценке эффективности, о наличии достоверного клинического эффекта говорили в тех случаях, когда тяжесть состояния по расширенной шкале степени инвалидизации уменьшалась не менее, чем на 0,5 балла, регрессировали 3-4 симптома (то есть наблюдался, по меньшей мере, умеренный положительный эффект).

Распределение антигенов А, В, DR локусов системы HLA изучали в группе пациентов, состоящей из 59 больных. Исследование HLA-антигенного состава тканей обследуемых лиц проводили в стандартном лимфоцитотоксическом тесте с использованием панели антилейкоцитарных сывороток НИИ гематологии и трансфузиологии и международного набора гистотипирующих стандартов.

Фенотипирование мононуклеаров осуществляли с применением проточной цитометрии с использованием моноклональных антител к маркерам CD3, CD4, CD8, CD16, CD20, HLADR, CD95, CD25 и их изотопических контролей. Цитометрический анализ лимфоцитов и моноцитов проводился на проточном цитофлюориметре EPICS XL (Coulter Corp., USA). Данные анализировались с помощью программы Coulter System 11.

В качестве индукторов использовали РНА-Р (Sigma) в дозе 10 мкг/мл (для IL-2, IL-4), пирогенал в дозе 50 мкг/мл (для TNFa, IL-lß, IL-6, IL-10), вирус болезни Ньюкасла с инфекционным титром 81g ЭИД/0,2 мл в объеме 10 мкл на лунку (для IFNy). Для определения цнтокинов использовались тест-системы, производимые фирмой "Протеиновый контур", Cytlmmune Science Inc (IL-10), "Цитокин" (IFN-y), и основанные на "сандвич"-методе твердофазного иммуноферментного анализа.

Пролиферативная активность лимфоцитов периферической крови исследовалась в реакции бласттрансформации, в качестве митогенов использовались РНА-Р и митоген лаконоса, в качестве специфического антигена был использован основной белок миелина.

Результаты HLA-типирования больных PC и иммунологического обследования сопоставлялись с результатами, полученными при обследовании 50 здоровых доноров, которые составили контрольную группу. Для статистической обработки полученных данных использовали непараметрический критерий Вилкоксона-Манна-Уитни для сравнения средних, корреляционный анализ по Спирману. Статистическая оценка ассоциаций HLA-антигенов с заболеванием проводилась по общепринятым формулам (Зарецкая Ю.М., Абрамов Е(.Ю., 1986). Критический уровень достоверности нулевой гипотезы (об отсутствии значимых различий) принимали равным 0,05.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ. Антигены комплекса гистосовместимости у больных рассеянным склерозом

В группе больных PC установлена достоверно более высокая частота встречаемости антигенов А10, В7, В13 ,В35, DR2, DR6 (рис. 1). Значения хи-квадрат (хг), относительного риска (RR), этиологической фракции (EF) позволяют сделать вывод о существовании наиболее выраженной иммуногенетической связи PC среди лиц обследованной группы с антигеном DR2; ассоциация HLA-DR2 с заболеваемостью PC характерна для большинства национальностей и территорий распространения PC (Hillen J. et al. 1992, Tienari P.J. 1994, Гусев Е.И. и др., 1996).

Анализ внутрилокусных и межлокусных сочетаний антигенов при PC выявил наличие достоверно повышенной частоты встречаемости комбинации B7DR2 (25,4% versus 8,7%; х!=9,77; р<0,01; RR=3,58), относительный риск (RR)

для этой комбинации антигенов выше, чем для каждого антигена в отдельности: В7 (1111=2,05), (КК-2,99), что может быть проявлением феномена

синергизма при реализации механизма ассоциации антигенов с РС.

И Контроль □ Ремиттирующий PC И Прогредиентный PC

Рис. 1. Положительные ассоциации HLA антигенов с заболеваемостью PC, частота встречаемости HLA-DR7 антигена при различных типах течения PC

Наряду с антигенами, которые обнаруживаются среди больных PC с повышенной частотой, были изучены и, так называемые, отрицательные ассоциации, обусловленные возможным протекторным эффектом отдельных аллелей. В группе больных PC установлено достоверное снижение частоты встречаемости антигенов HLA А2, All, АЗО, В18, DR5. Наиболее значимым было уменьшение частоты антигена DR6. Анализ распределения антигенов HLA в группах с различным течением PC выявил в группе больных с прогредиентным течением по сравнению с группой контроля и больными с ремиттирующим течением достоверное повышение частоты встречаемости антигена DR7 (57% versus 24% и 57% versus 16% соответственно), что позволяет говорить о том, что антиген DR7 предрасполагает к прогредиентному течению PC, и совпадает с данными Runmarker В. и соавт. (1994), которые выявили связь HLA-DR7 антигена с неблагоприятным течением PC и быстрым нарастанием степени инвапидизации.

Параметры иммунитета у больных в различные фазы процесса

При обострении ремиттирующего PC (ОРТ) (табл. 1) наблюдалось снижение относительного количества Т-клеток (CD3+), повышение количества клеток, несущих рецептор к IL-2 (CD25+), молекулы ГКГ класса И (HLA 11+) и клеток, готовых к апоптозу (CD95+), возрастал иммунорегуляторный индекс. У

больных с ремиттируюшим PC в стадии ремиссии (РРТ) показатели субпопуляционного состава лимфоцитов достоверно не отличались от показателей контрольной группы.

Табл. 1

Соотношение субпопуляций Т лимфоцитов периферической крови у больных ___РС и лиц контрольной группы ___

CD3+ CD4+ CD8+ CD4/ CD8 CD 16+ CD20+ CD25+ HLA II CD95+

РРТ 64,2 40,8 22,6 1,7 13,4 10,7 6,4 11,5 9,5

ОРТ 60,6* 38,9 22,5 2,3* 12,7 11,5 8,7* 14,6* ' 13,1*"

СПТ 56,3* 32,9* 23,0 1,5 17,1 10,9 4,3 12,0 6,3

АПТ 56,7**« 35,2** 21,6* 2,2* 16,1 14,9* 12,9** 17,1**' 17,1** *»

Контроль 67,4 41,7 24,3 1,7 9,6 8,5 4,8 9,2 7,1

*, **, *** - достоверность различий с контролем р<0,05 р<0,01.р<0,001 соответственно

и, Ш, НИН - достоверность различий с больными в неактивной фазе р<0,05 р<0,01 р<0,001 соответственно

В активную фазу при прогредиентном течении (АПТ) были выявлены более выраженные изменения: помимо снижения СБЗ+ и СБ4+ клеток, уменьшалась доля цитотоксических лимфоцитов (С08+), значимо увеличивалось относительное количество В-клеток (СЭ20+), клеток, несущих рецептор к 1Ь-2 (СБ25+), клеток, несущих молекулы ГКГ класса II (НЬА 11+), а также клеток, готовых к апоптозу (С095+). При стабилизации процесса у больных прогредиентым РС (СПТ) сохранялись пониженные количества Т-клеток (СОЗ+) и Т хелперов (СЭ4+).

Изучение особенностей синтеза провоспалительных цитокинов клетками периферической крови в группах больных в различные фазы патологического процесса (рис. 2) позволило выявить повышение продукции провоспалительных цитокинов при обострении ремиттирующего РС (ОРТ) и в активную фазу прогрединтного РС (АПТ). У пациентов с ремиттирующим РС в период обострения (ОРТ) и у больных прогредиентным РС в активной фазе (АПТ) наблюдалось достоверное повышение уровня спонтанной продукции ТЫР-а по сравнению с контролем, а также больными ремиттирующим РС в стадии ремиссии и больными прогредиентным РС в неактивную фазу.

И - достоверность различий р<0,05 по сравнению с больными в неактивной фазе * - достоверность различий р<0,05 по сравнению с лицами контрольной группы

Рис. 2. Продукция TNF-a, IFN-y, IL-ip у больных с различными типами течения в зависимости от сталии заболевания

Стимулированная продукция и концентрация TNF-a в сыворотке возрастала в активную стадию и снижалась до нормального уровня при стабилизации процесса (р<0,05), что не противоречит результатам ранее опубликованных работ (Chofflon М., et а!., 1992, Rieckman F. et al., 1994, Калашникова А.А. и др., 2000).

Изменения продукции INF-y также коррелировали с активностью воспалительного процесса: в активной фазе (обострение/хроническое прогрессирование) наблюдалось увеличение спонтанной продукции и концентрации INF-y в сыворотке по сравнению с группой больных в неактивной фазе.

У обследованных пациентов с ремиттирующем PC продукция 1L-4 зависела от стадии заболевания и возрастала при выходе пациентов в ремиссию (рис. 3). При обострении ремитгирующего PC (ОРТ) отмечалось снижение уровней спонтанной и стимулированной (р<0,05) продукции IL-4, а также уровня 1L-4 в сыворотке по сравнению с пациентами в стадии ремиссии. У больных с прогредиентным PC изменения продукции IL-4 в меньшей степени отражали фазу процесса: в активной фазе (АПТ) и при стабилизации (СПТ) выявлялись повышенные уровни спонтанной продукции (р<0,05) (АПТ versus контроль, СПТ versus контроль), увеличение концентрации IL-4 в сыворотке (р<0,05 АПТ versus контроль). Индуцированная продукция у больных прогредиентным PC не зависела от стадии заболевания и оставалась пониженной в активной и неактивной фазах (р<0,05) (АПТ versus контроль, СПТ versus контроль).

ИРРТ ПОРТ ПСПТ ОАПТ а Контроль

# - достоверность различий р<0,05 по сравнению с больными в неактивной фазе

* - достоверность различий р<0,05 по сравнению с лицами контрольной группы

Рис. 3. Продукция 1Ь-4 и 1Ь-10 у больных с различными типами течения РС в зависимости от стадии заболевания.

Изучение продукции другого противовоспалительного цитокина - 1Ь-10 позволило выявить повышение его продукции у больных со стабильным РС и у больных ремиттирующим РС в период ремиссии, что совпадает с данными других исследователей (^есктап Р. е| а!., 1994, V. е1 а1., 1995, БагсЫеШ

Р. е( а]., 1997). При ремиттирующем РС наблюдалось снижение спонтанной (р<0,05) и индуцированной (р<0,05) продукции 1Ь-10 при обострении заболевания (ОРТ). У больных с прогредиентным РС по сравнению с лицами контрольной группы отмечались более низкие уровни продукции 1Ь-10 как в активной фазе (АПТ), так и при стабилизации процесса (СПТ), однако степени достоверности данные различия не достигали. При изучении пролиферативной активности лимфоцитов было выявлено достоверное увеличение индекса пролиферации у больных прогредиентным РС в активную фазу (р<0,05), при стабилизации процесса наблюдалось снижение индекса пролиферации, который оставался повышенным по сравнению с уровнем нормальных значений (данные не приводятся).

Параметры иммунитета у больных с благоприятным и неблагоприятным вариантами течения рассеянного склероза

Результаты работы по изучению параметров клеточного иммунитета у больных с различными вариантами течения РС представлены на рис. 4.

При изучении соотношений субпопуляций лимфоцитов у больных неблагоприятным РС (НРС) было обнаружено снижение относительного

количества цитотоксических Т лимфоцитов (CD8-), повышение иммунорегуляторного индекса (р<0,05, НРС versus контроль), повышение количества В-лимфоцитов (CD20+), клеток с рецептором к IL-2 (CD25+), клеток, несущих молекулы ГКГ класса II (HLA I1+), клеток готовых к апоптозу (CD95+).

В Благоприятный PC □ Неблагоприятный PC

И, НИ, Ши - достоверность различий р<0,05, р<0,01, р<0,001 соответственно по сравнению с благоприятным вариантом течения РС

*, **, *** - достоверность различий р<0,05, р<0,01, р<0,001 соответственно по сравнению с лицами контрольной группы

Рис. 4. Соотношение различных субпопуляций лимфоцитов периферической крови у больных благоприятным и неблагоприятным РС.

При изучении продукции цитокинов у больных неблагоприятным РС (НРС) было выявлено достоверное снижение индуцированной продукции 1Ь-1р, 1Ь-6 и 1Ь-4. Кроме того, у больных с неблагоприятным вариантом РС (НРС) по сравнению с больными благоприятным РС (БРС) отмечались более низкие уровни спонтанной продукции И.-1Р и его концентрации в сыворотке (р<0,05). Спонтанная продукция ЮТ-сс и И-Т^-у, их концентрации в сыворотке у больных с неблагоприятным РС были достоверно выше по сравнению с показателями группы контроля и больных благоприятным РС (БРС). Изучение продукции противовоспалительных цитокинов выявило повышение концентрации 1Ь-4 в сыворотке и снижение индуцированной продукции 1Ь-4 (р<0,05) у больных обеих групп (БРС и НРС) в сравнении с контролем, при НРС была также достоверно увеличена спонтанная продукция 1Ь-4 (р<0,05) в сравнении с показателями контрольной группы.

* - достоверность различий р<0,05 по сравнению с группой контроля

# - достоверность различий р<0,05 по сравнению с благоприятным РС

Рис. 4. Продукция ТОТ-а, 1РМ-у, 1И [5,1Ь-4,1Ь-6 у больных с благоприятным и неблагоприятным вариантами течения заболевания.

Проведенный корреляционный анализ выявил наличие связи между уровнем неврологического дефицита и спонтанной продукцией ТЫР-а (г=0,45; р<0,05), а также уровнем Т№-а в сыворотке (р=0,42; р<0,05). Кроме того, тяжесть неврологического дефицита коррелировала с концентрацией 1РЫ-у в сыворотке (г=0.58; р<0,05), сходные корреляции были установлены другими исследователями (Агпахоп В.СЛУ., 1996, Ре1еге)( Н.Р. е! а1., 2000).

Иммуногенетическая рестрикция продукции цитокинов при рассеянном склерозе

У носителей 0112 антигена обнаружены повышенные количества Т-хелперов (СЭ4+), ЫК-клеток (СБ16+) и В-лимфоцитов (СБ20+) по сравнению и пациентами, не имеющими данного антигена (данные не приводятся). В группе БЛ2(+) больных наблюдалось снижение индуцированной продукции 1Ь-1[3 (р<0,01) в сравнении с группой контроля, в то время как в группе ОЯ2(-) больных при сравнении с контролем отмечалось повышение спонтанной продукции 1Ь-1(5 (р<0,01). По сравнению с БЯ2(+) больными, клетки периферической крови ОГ12(-) больных продуцировали достоверно более высокие количества 1Ь-1р и 1Ь-6 (р<0,05). Продукция ТЫР-а в обеих группах изменялась сходным образом, но у ОЯ2(4-) больных отмечались более высокие концентрации ТЫР-а в сыворотке. Наши данные

согласуются с результатами, полученными Zipp F. и соавт. (1995) о повышении ОБМ-специфичными CD4+ Т-лимфоцитами от HLA-DR2+ доноров продукции TNF-a по сравнению с Т-лимфоцитами DR2(-) доноров. Данные различия в продукции TNF-a могут быть объяснены локализацией генов, контролирующих продукцию TNF-a и TNF-ß, внутри супергена HLA или способностью HLA-DR2 в процессе представления антигена стимулировать продукцию повышенных уровней цитокинов.

Изменение иммунологических параметров на фоне иммуномодулируюшей терапии интерфероном-бета-lb. кополимером-1 и метилпреднизолоном

Достоверный положительный эффект (3 балла по используемой шкале оценки эффективности терапии) от приема интерферона-бета-lb наблюдался у 3 больных (25 %). У 5 пациентов (42 %) был отмечен слабый положительный эффект (2 балла по используемой шкале оценки эффективности терапии), сопровождавшийся субъективным улучшением самочувствия и стабилизацией состояния по шкале EDSS. На шестом месяце курса 4 пацие1гга (33 %) закончили прием интерферона-бета-lb в связи с ухудшением состояния.

При сравнении иммунологических показателей до и после 3-х месяцев курса интерферона-бета-lb было обнаружено достоверное увеличение количества B-лимфоцитов (CD20+) и снижение количества клеток с рецептором к IL-2 (CD25+) на фоне лечения.

На 3-м месяце курса интерферона-бета-lb отмечалось снижение спонтанной продукции IL-lß (р<0,05), индуцированной продукции IL-6 (р<0,05) (табл. 4), спонтанной продукции TNF-a (р<0,05), а также снижение спонтанной продукции IFN-y и его содержания в сыворотке, не достигавшее, однако, достоверного уровня.

При анализе уровней продукции IL-lß до начала лечения было обнаружено, что у пациентов с положительным эффектом, наблюдались значительно более высокие уровни спонтанной продукции, в то время как у пациентов, у которых не было отмечено эффекта от терапии интерфероном-бета-lb, спонтанная продукция IL-lß приближалась к показателям здоровых лиц.

На фоне приема интерферона-бета-lb наблюдалось увеличение уровней продукции IL-4 как in vitro, так и in vivo, что может отражать активацию продукции цитокинов Т хелперов 2 типа, и подтверждается данными литературы (Weber F. et al., 1999). В то же время интерферон-бета-lb был эффективен у тех больных, у которых спонтанная продукция IL-4 изначально была снижена, у пациентов с исходно высокой продукцией IL-4 эффект от терапии интерфероном-бета-lb отсутствовал.

Табл. 4

Продукция 1Ъ-1р, ТЫИ-а у больных РС до и после лечения ___ интерфероном-бета-1Ь ___

1ЫР 1Ыр 1ЫР 1Ь-6 1Ь-6 И-6 1 ТЫР-а ТЫР-а ТЫР-а

спон инд сыв спон инд сыв спон инд сыв

Показатели до лечения 274,8 601,8 95,8 294,4 1710,8 12,8 198,2 1010,9 69,2

Показатели на фоне 40,0 * 380,0 63,3 393,4 789,6* 12,6 102,3 * 867,6 69,8

лечения

Показатели

до лечения (без эффекта) 50,8 380,0 56,0 267,4 1320,7 11,2 186,5 1015,4 53,1

Показатели

до лечения (с клин, эффектом) 312,5 ♦ 632,7 114,6 316,5 1877,4 13,5 210,4 1009,6 74,4

* - достоверность различий р<0,05

Достоверный положительный эффект от лечения кополимером-1 (3 балла по используемой шкале эффективности терапии) наблюдался у 4 больных (40%), слабый положительный эффект (2 балла) - у 3 больных, все 7 пациентов сообщили о субъективном улучшении самочувствия, выражавшемся в снижении утомляемости и повышении работоспособности; -у 2 больных с вторично-прогредиентным течением РС при отсутствии признаков клинического ухудшения отмечалось субъективное ухудшение состояния, выражавшееся в нарастании утомляемости, 1 пациент закончил курс кополимера-1 на 3-м месяце из-за развития побочных реакций в виде гиперемии и отечности лица, стеснения в груди, головной боли, причем побочные реакции не купировались назначенной дополнительной терапией.

Проведенные исследования не позволили выявить изменения параметров клеточного иммунитета или системной продукции цитокинов после 3-х месяцев лечения кополимером-1. Отсутствие статистически достоверных различий может быть следствием индукции антиген-специфичной супрессорной активности, не сопровождающейся изменениями продукции цитокинов на системном уровне (РгапсюНа Б. е! а!., 2003).

Во время курса метилпреднизолона у 2 больных наблюдались явления диспепсии, у 1 больного - повышение артериального давления. При оценке на 10 день от начала терапии хороший клинический эффект отмечался у 4 (18,2%) из 22 больных, умеренный - у 9 (41%), слабый - у 6 (27,3%) и сомнительный -

у 3 (13,5%) пациентов. После 10 дня курс метилпреднизолона был завершен и всем пациентам были назначены препараты метаболической терапии. При оценке на 21 день хороший клинический эффект наблюдался у 7 (31,8%) из 22 больных, умеренный - у 12 (54,5%), слабый - у 1 (4,5 %) и сомнительный -у 2 (9,2%) пациентов. Таким образом, положительный клинический эффект на 10 день наблюдался в 59,2% случаев, на 21 - в 86,3%. У всех пациентов с РС до начала лечения наблюдались отклонения иммунологических показателей, характерные для активного процесса: повышение экспрессии активационных маркеров (CD25+, HLAII+), повышение продукции провоспалительных цитокинов. У 19 больных, у которых отмечался положительной клинической эффект на 21 день, наблюдалась нормализация иммунологических показателей на 10 день; у 3 больных с сомнительным и слабым эффектом от терапии (при оценке на 21 дне) сохранялись изменения параметров иммунитета, характерные для активного процесса. В статистический анализ были включены данные иммунологического обследования пациентов, у которых на 21 день наблюдался положительный эффект от терапии (19 пациентов).

Изучение субпопуляций лимфоцитов у больных РС до и после лечения метилпреднизолоном выявило достоверное снижение абсолютного и относительного количества клеток с молекулами HLA класса II (HLA II+).

При изучении уровней продукции провоспалительных цитокинов мы обнаружили статистически достоверное снижение продукции in vivo IL-lp (р<0,05), индуцированной продукции IL-6 (р<0,05), спонтанной продукции TNF-a и IFN-y (р<0,05) (табл. 5).

Табл. 5

Продукция IL-ip, IL-6, TNF-a, IFN-y у больных PC до и после лечения метилпреднизолоном _

IL-1 спон IL-1 ИНД IL-1 сыв IL-6 спон IL-6 инд IL-6 сыв TNF спон TNF инд TNF сыв IFN спон IFN инд IFN сыв

До лечения 243 1562 83 290 1476 15 269 1154 56 128 914 197

После лечения 195 1795 12* 216 877 * 32 101 * 949 69 66 * 815 156

* - достоверность различий р<0,05

Однако, несмотря на снижение указанных показателей, уровни продукции не достигали значений, наблюдаемых у здоровых лиц или пациентов в стадии ремиссии. При изучении уровней продукции противоспалительных цитокинов 1Ь-4 и 1Ь-10 достоверных различий у пациентов до и после лечения метилпреднизолоном выявлено не было.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Настоящее исследование было предпринято с целью выявления иммуногенетических маркеров, ассоциированных с заболеваемостью PC среди жителей Северо-западного региона, определения наиболее значимых показателей иммунитета, отражающих течение PC и стадию иммунопатологического процесса, выявления прогностических критериев неблагоприятного варианта течения PC и эффективности иммуномодулируюшей терапии. Проведенное исследование позволило выявить наличие признаков активации иммунной системы у больных PC. У больных ремиттирующим PC наблюдалось изменение иммунологических показателей, коррелировавшее со стадиен заболевания, активация Тх! иммунного ответа отмечалась у больных в стадии обострения. Признаки активации Тх2 иммунного ответа наблюдались у пациентов при выходе в ремиссию и могут рассматриваться как компенсаторный механизм, направленный на ограничение чрезмерного клеточного иммунного ответа. У больных прогредиентным PC подобной стадийности в изменениях иммунологических показателей не наблюдалось: в активную фазу Тх1 иммунный ответ сочетался с наличием признаков активации Тх2 иммунного ответа и признаками истощения функциональных возможностей клеток иммунной системы. Неблагоприятное течение PC характеризовалось смешанным иммунным ответом и повышением продукции как Txl, так л Тх2 цитокинов, выраженным снижением индуцированной продукции провоспалительных цитокинов и высокими концентрациями TNF-a и IFN-y в сыворотке.

Изучение иммунологических показателей у пациентов, получавших лечение, позволило выявить основные эффекты интерферона-бета-1 b и метилпреднизолона на иммунную систему больных PC. Были предложены предикторы эффективности терапии интерфероном-бета-lb, которые могут быть использованы при назначении патогенетического лечения пациентам в стадии ремиссии.

Полученные результаты свидетельствуют о возможности использования результатов исследования иммуногенетических маркеров, цитокинового профиля, пролиферативной активности, соотношения субпопуляций лимфоцитов у больных PC для уточнения варианта течения, стадии патологического процесса, прогнозирования нарастания неврологического дефицита и оптимизации терапии PC.

ВЫВОДЫ

1. Наибольший риск развития рассеянного склероза у жителей Северозападного региона связан с антигеном DR2 и антигенным сочетанием B7DR2. Наличие в HLA фенотипе антигенов А2, All, АЗО, В18, DR5 обусловливает протекторный эффект по отношению к развитию PC. Наибольшим

протекторным эффектом обладает антиген HLA-DR5. Прогрессирующий тип течения PC ассоциирован с DR7 антигеном.

2. У больных ремитирующим PC при обострении наблюдаются признаки активации иммунного ответа, выражающиеся в увеличении количества клеток с активационными маркерами, повышении продукции цитокинов Тх1 типа. Наступление клинической ремиссии сопровождается снижением продукции Тх1 цитокинов и повышением продукции Тх2 цитокинов.

3. При прогредиентном PC стадийность изменений иммунологических показателей в зависимости от клинической фазы заболевания выражена в меньшей степени. Превалирует Тх2 тип реагирования, наблюдаются признаки истощения иммунного ответа, выражающиеся в снижении индуцированной продукции цитокинов.

4. Высокие уровни спонтанной продукции и концентрации в сыворотке TNF-a, IFN-y и IL-4 на фоне снижения спонтанной продукции IL-lß, сочетающиеся с уменьшением количества цитотоксических лимфоцитов и увеличением - В лимфоцитов и клеток с антигенами HLA DR, являются неблагоприятным прогностическим маркером в отношении нарастания степени неврологического дефицита.

5. Терапия интерфероном-бета-lb клинически эффективна у 25 % больных и сопровождается нормализацией целого ряда иммунологических показателей у 100% пациентов. Показатели продукции IL-lß и IL-4 являются прогностическими маркерами эффективности терапии интерфероном-бета-lb. Через 3 месяца приема кополимера-1 клинический эффект наблюдается у 40 % пациентов, препарат не оказывает влияния на изученные иммунологические показатели.

6. Метилпреднизолон у пациентов в стадии обострения клинически эффективен в 83 % случаев. Препарат оказывает преимущественно иммуносупрессивный эффект, подавляет продукцию провоспалительных цитокинов и не влияет на продукцию противовоспалительных цитокинов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для подтверждения диагноза рассеянного склероза при дифференциальной диагностике дополнительными критериями являются: повышение пролиферативного ответа лимфоцитов на основной белок миелина, наличие в фенотипе анигена HLA-DR2, снижение количества цитотоксических/супрессорных лимфоцитов (CD8+), повышение иммунорегуляторного индекса и повышение продукции провоспалительных цитокинов (IL-lß, IL-6, TNF-a и IFN-y).

2. Пациентам с PC вне обострения в качестве препаратов патогенетической терапии могут быть назначены кополнмер-1 или интерферон-бета-lb. При

принятии решения о сроках начала лечения следует провести илшунологическое исследование, при наличии прогностических маркеров неблагоприятного варианта течения РС патогенетическая терапия должна быть назначена как можно раньше.

3. Учитывая эффективность интерферона-бета-1Ь при исходно сниженной спонтанной продукции 11--4 и повышенной продукции 1Ь-1 (5, перед назначением лечения интерфероном-бета-1Ь необходимо определить уровни спонтанной продукции 1Ь-1р и 1Ь-4.

4. Исследование продукции провоспалительных цитокинов показано с целью мониторирования состояния пациентов с рассеянным склерозом. Определение исходных уровней продукции провоспалительных цитокинов и сопоставление с показателями продукции через 10 дней терапии метилпреднизолоном позволяет судить о наступлении иммунологической ремиссии, которая зачастую опережает клиническую ремиссию.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Распределение антигенов гистосовместимости у больных рассеянным склерозом в Северо-западном регионе России // Актуальные вопросы клинической и военной неврологии: Сб. трудов юбил. науч. конф. ВМедА -СПб.: ВмедА, 1997. - N27. (Соавт. Бисага Г.Н., Сапроненков Г1.М., Семилуцкая И.Б., Головкин В.И., Калинина Н.М.)

2. Распределение антигенов гистосовместимости у больных с различными типами течения рассеянного склероза // Итоговая конференция военно-научного общества слушателей академии: Сб. тезисов. - СПб.: ВмедА, 1998.-С.141.

3. Исследование антигенов гистосовместимости у больных рассеянным склерозом // Итоговая конференция военно-научного общества слушателей академии: Сб. тезисов. - СПб.: ВмедА, 1998. - С.141-142.

4. Генетические признаки рассеянного склероза // Современн. проблемы медобеспечения л/с ВМФ: Тез. докл. конф.: СПб.: ВМедА, 1998. - С.91.

5. Параметры клеточного иммунитета у больных рассеянным склерозом // Итоговая конференция военно-научного общества курсантов и слушателей академии: Тез. докл. конф.: - СПб.: ВМедА, 1999 - С.4-5.

6. Цитокиновый статус при рассеянном склерозе // Итоговая конференция военно-научного общества курсантов и слушателей академии: Тез. докл. конф.: - СПб.: ВМедА, 1999 - С.5-6.

7. Особенности распределения НЬА-антигенов, параметры иммунитета и цитокиновый статус у пациентов рассеянным склерозом, жителей Санкт-Петербурга // Дни иммунологии в Санкт-Петербурге: Мат. конф.:

Медицинская иммунология. - 1999. - Т.1, №3-4. - С.64. (Соавт. Калинина Н.М., Давыдова Н.И., Бисага Г.Н., Головкин В.И.)

8. Использование интерферона а2 (виферон) в лечении больных рассеянным склерозом: цитокиновый профиль // 15-ый конгресс Европейского общества изучения и лечения рассеянного склероза: Тез. докл. конф. - Базель, Швейцария, 1999. - С.69. (Соавт. Бисага Г.Н., Калинина Н.М., Давыдова Н.И., Ариненко Р.Ю.)

9. Рассеянный склероз в Северо-Западном регионе России: результаты HLA-типирования // Журн. Невр. и Псих. - 2000. - Т. 100, N2. - С.40-44. (Соавт. Бисага Г.Н., Калинина Н.М., Семилуцкая И.Б., Сапроненков П.М., Журавский A.C., Одинак М.М.)

Ю.Иммунопатогенетические различия ремиттирующего и прогредиентного рассеянного склероза // Иммунология. - 2000. - N3. - С.41-44. (Соавт. Бисага Г.Н., Калинина Н.М., Давыдова Н.И.)

11 .Ремиттирующий и прогредиентный рассеянный склероз: иммунопатогенетические различия. II Медико-социальные аспекты рассеянного склероза. - Мат-лы конф. - СПб.: «Лики России», 2001. - С.17-21. (Соавт. Бисага Г.Н., Калинина Н.М., Давыдова Н.И.)

12.Иммуногенетическая рестрикция цитокинового статуса при рассеянном склерозе // Журн. Невр. и Псих. - 2001. - Т.101, N9. - С.39-44. (Соавт. Одинак М.М., Бисага Г.Н., Калинина Н.М., Давыдова Н.И.)

13.Иммунологические характеристики ремиттирующего и прогредиентного рассеянного склероза П Конф. "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге": Сб. материалов. - СПб., 2001. - С.34. (Соавт. Калинина Н.М., Бисага Г.Н., Давыдова Н.И.)

14.Иммунопатогенетические различия ремиттирующего и прогредиентного рассеянного склероза // Медицинская иммунология. - 2002. - N4-5. -С.637-644. (Соавт. Бисага Г.Н., Калинина Н.М., Давыдова Н.И.)

Подписано в печать IL ХЧ

Объем 4'fo п.л._Тираж /cg экз.

Формат 60x84 '/16-Заказ № ./2*2

Типография ВМедА, 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6

Оглавление диссертации Акимов, Станислав Борисович :: 2004 :: Санкт-Петербург

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ ОБ ИММУНОПАТОГЕНЕЗЕ РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА И ВОЗМОЖНОСТЯХ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ ТЕРАПИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1 Факторы генетической предрасположенности.

1.2 Иммунный статус больных рассеянным склерозом.

1.2.1 Изменения соотношения и количеств лимфоцитов различных субпопуляций у больных РС.

1.2.2 Продукция цитокинов в ЦНС.

1.2.3 Продукция цитокинов клетками периферической крови.

1.2.4 Пролиферативная активность лимфоцитов периферической крови. 31 1.2.4 Особенности различных типов течения и вариантов РС.

1.3 Иммуномодулирующая терапия.

1.3.1 Влияние препаратов 1ЕК-Р-1Ь на иммунологическую реактивность.

1.3.2 Влияние кополимера-1 на иммунологическую реактивность.

1.3.3 Эффекты метилпреднизолона.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Общая характеристика больных.

НЬА-типирование.

Иммунофенотипирование.

Определение цитокинового статуса.

Индукция пролиферации мононуклеаров.

Методы статистической обработки полученных результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Антигены комплекса гистосовместимости у больных рассеянным склерозом.

3.2 Параметры иммунитета у больных в различные фазы процесса.

3.2.1 Параметры клеточного иммунитета.

3.2.2 Изменения показателей цитокинового звена иммунитета.

3.2.3 Изменения пролиферативной активности лимфоцитов.

3.3 Параметры иммунитета у больных с благоприятным и неблагоприятным вариантами рассеянного склероза.

3.3.1 Параметры клеточного иммунитета.

3.3.2 Изменения показателей цитокинового звена иммунитета.

3.4 Иммуногенетическая рестрикция продукции цитокинов при рассеянном склерозе.

3.5 Изменение иммунологических параметров на фоне проведения иммуномодулирующей терапии интерфероном-бета-1Ь, кополимером-1 и метилпреднизолоном.

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Акимов, Станислав Борисович, автореферат

Актуальность темы.

Рассеянный склероз (PC) - хроническое прогрессирующее заболевание центральной нервной системы, проявляющееся рассеянной неврологической симптоматикой и патоморфологически характеризующееся образованием очагов разрушения миелина в белом веществе головного и спинного мозга (Гусев Е.И. и соавт., 1997). Обычно заболевание начинается в молодом возрасте и, в типичных случаях, изначально имеет ремиттирующее течение, с наличием периодов обострений и ремиссий. В дебюте заболевания ремиссии сопровождаются полным регрессом неврологической симптоматики, однако в течение 10 лет около 40% больных с ремиттирующим течением входят в прогредиентную фазу (McDonnell G.V., Hawkins S.A., 2002). В 10-15% случаев наблюдается первично-прогредиентное течение PC, когда заболевание характеризуется неуклонным нарастанием неврологического дефицита, при этом периоды хронического прогрессирования могут чередоваться с периодами стабилизации (Головкин В.И., 2003). Неуклонное прогрессирование, приводящее к инвалидизации людей трудоспособного возраста, и «омоложение» контингента больных определяют важность проблемы своевременной диагностики и лечения больных PC не только в медицинском, но и в социально-экономическом аспекте (Зинченко А.П., 1973, Хондкариан O.A. и соавт., 1987, Гусев Е.И. и соавт., 1997, Завалишин И.А., Головкин В.И., 2000).,

В патогенезе воспаления и демиелинизации при PC большое значение имеют аутоиммунные механизмы, в запуске которых важную роль играет генетическая предрасположенность, реализуемая под воздействием патогенных факторов внешней среды (Arnason B.G.W., 1996).

Наличие генетической предрасположенности к PC в настоящее время не вызывает сомнений, данные многочисленных популяционных и особенно миграционных исследований убедительно подтверждают участие наследственных факторов в развитии заболевания (Бадалян JI.O. и др., 1987, Ebers G.C., Sadovnick A.D., 1994, Compston D.A.S. et al., 1995). Установлено, что генетические факторы могут не только обуславливать предрасположенность к PC, но влиять на особенности клинической картины, патогенеза, течения PC и прогноз заболевания (Gorodezky С. et al., 1986; Hillert J. et al., 1992; Runmarker В et al., 1994; Dyment D.A. et al., 1997). Наиболее сильные ассоциации прослеживаются с генами и антигенами главного комплекса гистосовместимости (ГКГ) класса II: гаплотипом DRB1*1501-DQA1*0102-DQB10602 и антигеном HLA-DR2 (Dhib-Jalbut S. et al., 1990, Hillert J., Olerup О, 1993, Ghabanbasani M.Z. et al., 1995).

Предполагается, что триггерным фактором, реализующим генетическую предрасположенность к PC и запускающим иммунопатологический процесс, является вирусная инфекция, проявляющая свое действие в периферических органах иммунной системы и активирующая Т клетки, которые, в свою очередь преодолевая гематоэнцефалический барьер (ГЭБ), проникают в ЦНС, где разрушают миелин и олигодендроциты (Arnason B.G.W., 1996). При этом гиперреактивность иммунной системы в ответ на действие триггерного фактора играет ключевую роль. Влияние вирусов на иммунную систему может проявляться как неспецифической антигенной стимуляцией, так и, благодаря молекулярной мимикрии и перекрестному реагированию, - запуском аутоиммунных реакций в отношении компонентов миелина (Гусев Е.И. и др. 1997).

Развитие реакции клеточно-опосредованной гиперчувствительности замедленного типа, реализующейся при участии Т хелперов 1 типа, предваряет развитие клинической симптоматики и сопровождается повышением продукции провоспалительных цитокинов, что наблюдается за 2 недели до появления первых неврологических симптомов (Beck J. et al., 1988).

Выраженность иммунопатологических реакций определяется активностью антигенпредставления в ткани, активностью адгезии клеток к эндотелию сосудов, степенью активации Т клеток, которая при ответе на некоторые антигены может иметь поликлональный характер. Решающее значение в развитии иммунопатологического процесса в ЦНС имеет баланс активационных и супрессорных цитокинов, их растворимых рецепторов и ингибиторов (Столяров И.Д., Осетров Б.А., 2002).

Предшествующее обострению преобладание продукции провоспалительных цитокинов, продуцируемых преимущественно Т хелперами 1 типа: ¡КИ-у, ЮТ-а, и оказывающих, помимо иммунорегуляторного, прямое повреждающее действие на миелин и олигодендроциты, сменяется нарастанием продукции противовоспалительных цитокинов, секретируемых Т хелперами (Тх) 2 типа: 11,-4,1Ь-10, ТСБ-р (Ьи С.1. а а1., 1993, Шесктап Р. & а1., 1994, Шуйсаэ V. еХ а1., 1995), что ограничивает повреждение собственных тканей организма и снижает активность иммунопатологического процесса.

Получены данные, свидетельствующие о том, что особенности уровней продукции цитокинов у больных РС отражают не только стадию процесса, но также тип течения РС (ЗИапеГ М.К. е1 а1., 1991) и тяжесть демиелинизирующего процесса (Апшбоп В.ОЖ, 1996). Были сделаны предположения о наличии связи между преобладанием Тх1 или Тх2 иммунного ответа и предрасположенностью к развитию различных клинических форм РС: азиатского (оптикомиелита) или классического РС (Уашатига Т., 2002).

За последние годы достигнут значительный прогресс в понимании механизмов развития демиелинизирующего процесса при РС и разработке терапевтических подходов, способных влиять на патологический процесс при РС. Появление нового направления в лечении РС - профилактики обострений и предотвращения прогрессирования заболевания - стало следствием многочисленных исследований, посвященных роли цитокинов в патогенезе РС, в результате чего стало возможным применение цитокиновых препаратов для лечения больных РС. Широко применяемыми с этой целью препаратами являются интерфероны, наибольшая эффективность была продемонстрирована при применении интерферонов-бета-1Ь. Важным достижением последних лет в терапии РС принято считать появление препарата другого класса - кополимера-1, успешное применение которого связывают с его способностью вырабатывать толерантность Т лимфоцитов к основному белку миелина (ОБМ). При обострении заболевания продолжают использовать кортикостероиды, предпочтение отдается коротким курсам в высоких дозах. Однако, несмотря на широкое применение препаратов данной группы, ключевые моменты вызываемых ими изменений иммунологических параметров до настоящего времени остаются неясными (НоИНЫсШ., 1997; №со1еШ Р. е1 а1., 1999; Ьоэу а1., 2002), отсутствуют надежные прогностические признаки эффективности проводимой иммуномодулирующей терапии.

Несмотря на активное изучение иммунопатогенеза РС многие особенности развития иммунопатологического процесса при различных вариантах РС, иммунологические маркеры прогноза РС, механизмы реализации генетической предрасположенности, остаются неясными. В связи с "омоложением" контингента больных РС, ранней инвалидизацией пациентов, расширением зоны высокой частоты встречаемости рассеянного склероза, высокой стоимостью современного лечения, необходимостью проведения комплексных реабилитационных мероприятий, особую актуальность приобретает уточнение механизмов развития иммунопатологического процесса, характерного для различных вариантов РС, изучение механизмов действия и возможных предикторов клинической эффективности современных иммуномодулирующих препаратов.

В связи с вышеизложенным была сформулирована цель исследования:

На основании изучения распределения антигенов НЬА, особенностей параметров клеточного иммунитета и цитокинового профиля у пациентов с различными вариантами течения РС выявить диагностически значимые параметры, маркеры прогноза и предикторы клинической эффективности иммуномодулирующей терапии.

Для достижения цели были сформулированы следующие задачи исследования:

1. Изучить распределение антигенов главного комплекса гистосовместимости у больных РС.

3. Изучить особенности клеточного иммунитета и цитокинового профиля у пациентов с благоприятным и неблагоприятным течением РС.

4. Изучить корреляционные взаимосвязи между иммунологическими и иммуногенетическими показателями у пациентов с РС.

5. Оценить влияние иммуномодулирующей терапии интерфероном-бета-1Ь, кополимером-1, метилпреднизолоном на изученные иммунологические показатели.

6. Выделить и охарактеризовать иммунологические предикторы клинической эффективности иммуномодулирующей терапии. Научная новизна.

Проведенное исследование позволило установить связь антигенов системы НЬА и их сочетаний с заболеваемостью РС среди жителей Северозападного региона. При этом обнаружены связи, специфические для изученной популяции.

Впервые сопоставлены особенности НЬА фенотипа больных РС с паттернами секреции цитокинов и количественными характеристиками субпопуляций лимфоцитов.

Изучены изменения показателей клеточного и гуморального иммунитета при назначении иммуномодулирующей терапии, выявлены предикторы клинической эффективности иммунокорригирующей терапии. Практическая значимость.

Оценка продукции про- и противовоспалительных цитокинов перед назначением иммуномодулирующей терапии позволяет правильно выбрать метод иммунокоррекции и прогнозировать его эффективность; мониторирование иммунологических показателей в ходе лечения дает возможность судить о наличии эффекта от проводимой терапии. Основные положения, выносимые на защиту: 1. Заболеваемость рассеянным склерозом среди жителей Северо-западного региона ассоциируется с антигенами главного комплекса гистосовместимости. Существуют антигены ГКГ предрасполагающие к развитию рассеянного склероза, а также антигены, оказывающие протекторное действие в отношении развития заболевания. Особенности продукции провоспалительных цитокинов связаны с НЬА фенотипом больного и определяют характер течения заболевания (благоприятное или неблагоприятное).

2. Изменение иммунологических показателей периферической крови больных РС зависит от стадии процесса и типа течения РС. У больных с ремиттирующим течением наблюдается выраженная цикличность в характере иммунного ответа - при обострении преобладает продукция цитокинов Тх1 типа, которая сменяется повышенной продукцией Тх2 цитокинов, что является компенсаторным механизмом и способствует наступлению ремиссии. Для больных с прогредиентным течением данная цикличность не характерна: наблюдаются признаки смешанного Тх1/Тх2 иммунного ответа, причем функциональная способность клеток иммунной системы у этих пациентов снижена.

Заключение диссертационного исследования на тему "Клинико-иммунологическая диагностика и иммунокоррекция при рассеянном склерозе"

ВЫВОДЫ

1. Наибольший риск развития рассеянного склероза у жителей Северозападного региона связан с антигеном БЯ2 и антигенным сочетанием В7БК2. Наличие в НЬА фенотипе антигенов А2, А11, АЗО, В18, БЯ5 обусловливает протекторный эффект по отношению к развитию РС. Наибольшим протекторным эффектом обладает антиген НЬА-0115. Прогрессирующий тип течения РС ассоциирован с БИ7 антигеном.

2. У больных ремитгарующим РС при обострении наблюдаются признаки активации иммунного ответа, выражающиеся в увеличении количества клеток с активационными маркерами, повышении продукции цитокинов Тх1 типа. Наступление клинической ремиссии сопровождается снижением продукции Тх1 цитокинов и повышением продукции Тх2 цитокинов.

3. При прогредиентном РС стадийность изменений иммунологических показателей в зависимости от клинической фазы заболевания выражена в меньшей степени. Превалирует Тх2 тип реагирования, наблюдаются признаки истощения иммунного ответа, выражающиеся в снижении индуцированной продукции цитокинов.

4. Высокие уровни спонтанной продукции и концентрации в сыворотке ЮТ-ос, №N-7 и 1Ь-4 на фоне снижения спонтанной продукции 1Ь-1р, сочетающиеся с уменьшением количества цитотоксических лимфоцитов и увеличением - В лимфоцитов и клеток с антигенами НЬА БЯ, являются неблагоприятным прогностическим маркером < в отношении нарастания степени неврологического дефицита.

5. Терапия интерфероном-бета-1Ь клинически эффективна у 25 % больных и сопровождается нормализацией целого ряда иммунологических показателей у 100% пациентов. Показатели продукции 1Ь-1р и 1Ь-4 являются прогностическими маркерами эффективности терапии интерфероном-бета-1Ь. Через 3 месяца приема кополимера-1 клинический эффект наблюдается у 40 % пациентов, препарат не оказывает влияния на изученные иммунологические показатели. 6. Метилпреднизолон у пациентов в стадии обострения клинически эффективен в 83 % случаев. Препарат оказывает преимущественно иммуносупрессивный эффект, подавляет продукцию провоспалительных цитокинов и не влияет на продукцию противовоспалительных цитокинов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для подтверждения диагноза рассеянного склероза при дифференциальной диагностике дополнительными критериями являются: повышение пролиферативного ответа лимфоцитов на основной белок миелина, наличие в фенотипе анигена НЬА-0112, снижение количества цитотоксических/супрессорных лимфоцитов (СБ8+), повышение иммунорегуляторного индекса и повышение продукции провоспалительных цитокинов (1Ь-1р, ГЬ-6, ЮТ-а и №N-7).

2. Пациентам с РС вне обострения в качестве препаратов патогенетической терапии могут быть назначены кополимер-1 или интерферон-бета-1Ь. При принятии решения о сроках начала лечения следует провести иммунологическое исследование, при наличии прогностических маркеров неблагоприятного варианта течения РС патогенетическая терапия должна быть назначена как можно раньше.

3. Учитывая эффективность интерферона-бета-1Ь при исходно сниженной спонтанной продукции 1Ь-4 и повышенной продукции 1Ь-1р, перед назначением лечения интерфероном-бета-1Ь необходимо определить уровни спонтанной продукции 1Ь-10 и 1Ь-4.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Акимов, Станислав Борисович

1. Алаев Б.А. Особенности распространения РС // Журн. Невр. и Псих.- 1988. Т.88, N.2. - С.119-124.

2. Алаев Б.А. Этнические факторы, связь с патогенезом и географией рассеянного склероза II Журн. Невр. и Псих. 1992. - Т.92, N2. - С.9-12.

3. Аутеншлюс А.Н., Панкратов Е.В. Способ определения активности патологического процесса у больных рассеянным склерозом // Пат. 2116651. -1998.-бюл. N21.

4. Бадалян Л.О., Малышина Н.А., Дунаевская Г.Н. и др. Нестабильность хромосом при рассеянном склерозе // Журн. Невр. и Псих. 1987. - Т.87, N2. -С.205-208.

5. Бисага Г.Н. Рассеянный склероз. Современные представления. Диагностика и лечение. (Методические рекомендации). СПб.: ООО «Аспет-плюс», 2001. - 88 с.

6. Бисага Г.Н., Калинина Н.М., Акимов С.Б., Давыдова Н.И. Иммунопатогенетические различия ремитгирующего и прогредиентного рассеянного склероза // Иммунология. 2000. - N3. - С.41-44.

7. Бисага Г.Н., Калинина Н.М., Акимов С.Б., Давыдова Н.И. Иммунопатогенетические различия ремитгирующего и прогредиентного рассеянного склероза // Медицинская иммунология. 2002. - N4-5. - С.637-644.

8. Бисага Г.Н., Калинина Н.М., Акимов С.Б., Давыдова Н.И. Ремиттирующий и прогредиентный рассеянный склероз: иммунопатогенетические различия. // Медико-социальные аспекты рассеянного склероза. Мат-лы конф. - СПб.: «Лики России», 2001. - С. 17-21.

9. Бойко А.Н., Гусев Е.И., Демина Т.Л. Рассеянный склероз. М., 1997. -463с.

10. Бойко А.Н., Фаворова О.О. Рассеянный склероз: молекулярные и клеточные механизмы // Молек. биол. 1995. - Т.29. - С.727-749.

11. Войтенюк H.H. Интерлейкин-1: закономерности синтеза, биологическая активность // Успехи совр. биол. 1988. - Т.106. - С.102-114.

12. Головкин В.И. История учения о рассеянном склерозе и современное состояние проблемы. В: Иммуноопосредованный ремитгарующий рассеянный склероз. Под ред В.И.Головкина, Н.М.Калининой. СПб.: Роза мира, 2003. 196с- С.4-28.

13. Гусев Е.И., Беляева И.А., Чехонин В.П., Демина Т.Л. Клинико-иммунохимическая характеристика ремиттирующего течения PC // Вестн. РАМН. 1999. - N7. - С.40-45.

14. Гусев Е.И., Бойко А.Н. Современные подходы к назначению интерферона-бета в терапии рассеянного склероза // Журн. Невр. и Псих. 2000 -Т. 100, N11. -С.54-59.

15. Гусев Е.И., Демина Т.Л., Бойко А.Н., Татаринова М.Ю. Клинико-иммунологический мониторинг состояния больных рассеянным склерозом // Журн. невр. и псих. 1992. - Т.92, N2. - С. 14-18.

16. Гусев Е.И., Судомоина М.А., Бойко А.Н., Турецкая Р.Л. и др. Факторы генетической предрасположенности к рассеянному склерозу // Журн. невр. и псих. 1997. - Т.97, N5 - С.39-46.

17. Демина Т.Л., Бойко А.Н., Балашов К.Е., Пинегин Б.В. Особенности клеточного иммунитета при рассеянном склерозе // Журн. Невр. и Псих. 1989.- Т.89, N2. С.35-41.

18. Демина Т.Л., Гусев Е.И., Бойко А.Н., Пинегин Б.В. Цитокины в иммунопатогенезе рассеянного склероза // Журн.Невр. и Псих. 1997. - Т.97, N5.-C.68-73.

19. Завалишин И.А., Головкин В.И. Рассеянный склероз. Избранные вопросы теории и практики. М.:Медицина, 2000. - 640с.

20. Завалишин И.А., Захарова М.Н., Аскарова Л.Ш. и др. Современные направления в изучении патогенеза демиелинизирующих заболеваний // Журн. невр. и псих. 1997. - Т.97, N5. - С.64-67.

21. Завалишин И.А., Захарова М.Н., Переседова A.B. и др. // Материалы конф. Медико-социальные аспекты рассеянного склероза. СПб. - 2001. -С.35-36.

22. Завалишин И.А., Ковалева B.JL, Евстафьева O.JI. и др. Функциональное состояние цитохром-Р-450-зависимой монооксигеназной системы при рассеянном склерозе и боковом амиотрофическом склерозе // Сов. Медицина. 1989. - N5. - С.106-108.

23. Завалишин И.А., Невская О.М., Кулов Б.Б. Антигены гистосовместимости при ретробульбарном неврите и рассеянном склерозе // Журн. невр. и псих. 1989. - Т.89, N4. - С.55-58.

24. Зарецкая Ю.М., Абрамов В.Ю. Новые антигены тканевой совместимости человека. (HLA-DR: теория, клиника, практика). М.: Медицина, 1986. - 176с.

25. Зинченко А.П. Рассеянный склероз и энцефаломиелит (Этиология, патогенез, лечение). Ленинград, Медицина. 1973. - 295с.

26. Зыбина H.H., Бисага Г.Н., Фролова М.Ю. «Окислительный стресс» при рассеянном склерозе. Иммуноопосредованный ремитирующий рассеянный склероз. Под ред В.И.Головкина, Н.М.Калининой. СПб.: Роза мира, 2003. 200 с. -C.I01-125.

27. Калашникова A.A., Калинина Н.М., Бисага Г.Н., Давыдова Н.И. Особенности субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови больных PC. «Неврология-Иммунология». Мат-лы.конф. СПб, 2001. - С. 123.

28. Калашникова A.A., Калинина Н.М, Давыдова Н.И, Солнцева О.С. Продукция провоспалительных и противовоспалительных цитокинов у больных рассеянным склерозом // Мед. Иммунология. 2000. - Т.2, N2. - С.166

29. Калинина Н.М, Бисага Г.Н, Давыдова Н.И. и др. Особенности распределения HLA-антигенов, параметры иммунитета и цитокиновый статус у пациентов рассеянным склерозом, жителей Санкт-Петербурга // Мед. иммунология. 1999. - Т.1, N3-4. - С.64.

30. Ланг Н.Р. Стимуляция лимфоцитовю М.: Медицина, 1976. - 288с.

31. Ларина И.В, Жирнова И.Г, Комелькова Л.В. и др. // Материалы конф Неврология-Иммунология. СПб. - 2001. - С. 162-164.

32. Прокофьев В.Ф, Грибачева И.А, Коненков В.И и др. Иммуногенетические маркеры рассеянного склероза в Западной Сибири // Журн. невр. и псих. 1988. - Т.88, N12. - С.49-52.

33. Столяров И.Д, Каримова P.P., Ивашкова Е.В. и др. Нейроиммунные аспекты патогенетических взаимодействий при рассеянном склерозе // В: "Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины" (Материалы конференции): Москва, 1998. С.201.

34. Столяров И.Д, Николаева Н.В, Ивашкова Е.В. и др. Продукция интерлейкинов 1-бета, 6 и фактора некроза опухолей-альфа при рассеянном склерозе // В: Материалы IX конференции "Нейроиммунология". СПб, 2000. -С.85-86.

35. Столяров И.Д, Осетров Б.А, Рассеянный склероз. СПб, 2002.176с.

36. Фримель Г. Иммунологические методы. М, 1987. - 303с.

37. Хондкариан О.А, Завалишин И.А, Невская О.М. Рассеянный склероз М.: Медицина. - 1987. - 255с.

38. Чекнев С.Б. Патогенез рассеянного склероза: иммуностимуляция или иммунодефицит // Иммунология. 1994. - N2. - С.9-17.

39. Яздовский В.В, Алексеев Л.П, Земсков В.М. и др. Связь параметров иммунного статуса с HLA-фенотипом у здоровых лиц русской национальности // Иммунология. 1998. - N3. - С.20-24.

40. Adachi К, Kumamoto Т, Araki S. InterIeukin-2 receptor levels indicating relapse in multiple sclerosis // Lancet. 1989. - Vol.1, N8637. - P.559-560.

41. Adams C.W, Poston R.N, Buk S.J. Pathology, histochemistry and immunocytochemistry of lesions in acute multiple sclerosis // J. Neurol. Sci. 1989. -Vol.92, N2-3.-P.291-306.

42. Aharoni R, Teitelbaum D, Arnon R. T suppressor hybridomas and interleukin-2-dependent lines induced by copolymer 1 or by spinal cord homogenate down-regulate experimental allergic encephalomyelitis // Eur. J. Immunol. 1993. -Vol.23, N1.-P.17-25.

43. Aharoni R, Teitelbaum D, Sela M, Arnon R. Bystander suppression of experimental autoimmune encephalomyelitis by T cell lines and clones of the Th2 type induced by copolymer 1 // J. Neuroimmunol. 1998. - Vol.91, N1-2. - P.135-146.

44. Akdis C.A., Blaser K. IL-10-induced anergy in peripheral T cell and reactivation by microenvironmental cytokines: two key steps in specific immunotherapy // FASEB J. 1999. - Vol.13, N6. - P.603-609.

45. Alaev B.A. The epidemiology of multiple sclerosis in Uzbekistan. In: Multiple Sclerosis in Europe. W.Firnhaber, K.Lauer (eds.), Leuchtturn-Verlang, LTP Press.- 1994. -P.236-240.

46. Allen I., Glover G., Anderson R. Abnormalities in the macroscopically normal white mater in cases of mild or spinal multiple sclerosis// Acta neuropathol. -1981. special suppl.VII.- P.176-178.

47. Antel J.P., Oger J.J.F., Jackevicius S. et al. Modulation of T-lymphocyte differentiation antigens: potential relevance for multiple sclerosis // Proc. Natl. Acad. Sei: 1982. - Vol. 79, - P.3330-3334.

48. Arnason B.G. Abnormalities of immunocyte function in multiple sclerosis // Acta. Neuropathol. Suppl. (Berl). 1983. - Vol.9. - P.7-20.

49. Arnason B.G., Dayal A., Qu Z.X. et al. Mechanisms of action of interferon-beta in multiple sclerosis // Springer. Semin. Immunopathol. 1996. -Vol.18, N1.-P.125-148.

50. Arnason B.G.W. Pathophysiology of multiple sclerosis: finding the mechanisms of demyelination // Adv. Neuroimmunol. 1996. - Vol.3, N3. - P. 13-18

51. Arnold D.L. Magnetic resonance spectroscopy: imaging axonal damage in MS // J. Neuroimmunol. 1999. - Vol.98, N1. - P.2-6.

52. Arnon R. The development of Cop 1 (Copaxone), an innovative drug for the treatment of multiple sclerosis: personal reflections // Immunol. Lett. 1996. -Vol.50, N1-2.-P.l-15.

53. Assoian R.K., Fleurdelys B.E., Stevenson H.C. et al. Expression and secretion of type beta transforming growth factor by activated human macrophages // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -1987. Vol.84, N17. - P.6020-6024.

54. Balashov K.E., Comabella M., Ohashi T. et al. Defective regulation of IFNgamma and IL-12 by endogenous IL-10 in progressive MS // Neurology. 2000. -Vol.55, N2.-P.192-198.

55. Balashov K.E., Smith D.R., Khoury S.J. et al. Increased interleukin 12 production in progressive multiple sclerosis: induction by activated CD4+ T cells via CD40 ligand // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol.94, N2. - P.599-603.

56. Bancroft G.J. Schereiber R.D., Unanue E.R. Natural immunity, a T-cell-independent pathway of macrophage activation, defined in the SCID mouse // Immunol. Rev. 1992. - Vol.124. - P.5-24.

57. Bansil S., Troiano R., Cook S.D., Rohowsky-Kochan C. Serum soluble interleukin-2 receptor in chronic progressive, stable and steroid-treated multiple sclerosis // Act. Neurol. Scand. 1991. - Vol.84. - P.282-285.

58. Becher B., Blain M., Giacomini P.S., Antel J.P. Inhibition of Thl polarization by soluble TNF receptor is dependent on antigen-presenting cell-derived IL-12 // J. Immunol. 1999. - Vol.162, N2. - P.684-688.

59. Becher B., Giacomini P.S., Pelletier D. et al. Interferon-gamma secretion by peripheral blood T-cell subsets in multiple sclerosis: correlation with disease phase and interferon-beta therapy // Ann. Neurol. 1999. - Vol.45, N2. - P.247-250.

60. Beck J., Rondot L., Catinot L. et al. Increased production of interferon gamma and tumor necrosis factor precedes clinical manifestation in multiple sclerosis: Do cytokines trigger off exacerbations? // Acta Neurol. Scand. 1988. -Vol.78.-P.318-323.

61. Becker S., Riecks M., Epplen et al. yS-T-cells and activation patterns in relapsing-remitting multiple sclerosis // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1997. - Vol.3, N5. - P.l 16.

62. Bellamy A.S., Calder V.L., Feldmann M., Davison A.N. The distribution of interleukin-2 receptor bearing lymphocytes in multiple sclerosis: evidence for a key role of activated lymphocytes // Clin. Exp. Immunol. 1985. - Vol.61, N2. -P.248-256.

63. Benvenuto R., Parolli M., Buttinnelle C. Tumor necrosis factor-alpha and interferon-gamma synthesis by cerebrospinal fluid-derived T cell clones in multiple sclerosis // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1992. - Vol.650. - P.341-346.

64. Bever C.T. Jr., McFarlin D.E., Levy H.B. A comparison of interferon responses to poly ICLC in males and females // J. Interferon. Res. 1992. - spec.N. -P.85-90.

65. Bever C.T. Jr., Panitch H.S., Levy H.B. et al. Gamma-interferon in patients with chronic progressive MS // Neurology. 1991. - Vol.41, N7. - P.l 124-1127.

66. Boyum A., Separation of leukocytes from blood and bone marrow // Scand S. Clin. Lab. Investig. 1968. - Vol.76. - P.1092-1097.

67. Brautbar C., Amar A., Cohen I. et al. Histocompatibility (HLA) antigens and multiple sclerosis in Israelis // Isr. J. Med. Sci. 1982. - Vol.18, N5. -P.631-634

68. Brod S.A., Nelson L.D., Khan M. et al. Increased in vitro induced CD4+ and CD8+ T cell IFN-gamma and CD4+ T cell IL-10 production in stable relapsing multiple sclerosis // Int. J. Neurosci. 1997. - Vol.90,N.3-4. - P. 187-202.

69. Brosnan C.F., Cannella B., Battistini L., Raine C.S. Cytokines localization in multiple sclerosis lesions: correlation with adhesion molecule expression and reactive nitrogen species //Neurology. 1995. - Vol.45.suppl.6. - S.16-21.

70. Burns J., Krasner L.J., Guerrero F. Human cellular immune response to copolymer I and myelin basic protein // Neurology. 1986. - Vol.36, N1. - P.92-94.

71. Calabresi P.A., Fields N.S., Farnon E.C. et al. ELI-spot of Th-1 cytokine secreting PBMC's in multiple sclerosis: correlation with MRI lesions // J. Neuroimmunol. 1998. - Vol.85, N2. - P.212-219.

72. Calabresi P.A., Pelfrey C.M., Tranquill L.R. et al. VLA-4 expression on peripheral blood lymphocytes is downregulated after treatment of multiple sclerosis with interferon beta // Neurology. 1997. - Vol.49, N4. - P.l 111-1116.

73. Calabresi P.A., Tranquill L.R., McFarland H.F., Cowan E.P. Cytokine gene expression in cells derived from CSF of multiple sclerosis patients // J. Neuroimmunol. 1998. - Vol.89, N1-2. - P.198-205.

74. Campbell L.L., Stalder A.K., Pagenstencher Y.A., Asensio V.C. Transgenic models to study the action of cytokines in the CNS // Neuroimmunomodulation. 1998. - Vol.5, N3-4. - P. 126-135.

75. Canella B., Raine C.S. The adhesion molecule and cytokine profile of multiple sclerosis lesions // Ann. Neurol. 1995. - Vol.37, N4 - P.424-435.

76. Carrieri P.B., Provitera V., Bruno R. et al. Possible role of transforming growth factor-beta in relapsing-remitting multiple sclerosis // Neurol. Res. 1997. -Vol.19, N6.-P.599-600.

77. Chalazonitis A, Kalberg J, Twardzik DR, Morrison RS, Kessler JA. Transforming growth factor beta has neurotrophic actions on sensory neurons in vitro and is synergistic with nerve growth factor. DevBiol. 1992 Jul;152(l):121-32.

78. Cheng B., Mattson M.P. NT-3 and BDNF protect CNS neurons against metabolic/excitotoxic insults // Brain Res. -1994. Vol.640, N1-2. -P.56-67.

79. Chofflon M., Juillard C., Juillard P. et al. Tumor necrosis factor alpha production as a possible predictor of relapse in patients with multiple sclerosis // Eur. Cytokine Netw. 1992. - Vol.3, N6. - P.523-531.

80. Chofflon M., Roth S., Juillard C. et al. Tumor necrosis factor production capacity as a potentially useful parameter to monitor disease activity in multiple sclerosis // Eur. Cytokine. Netw. 1997. - Vol.8, N3. - P.253-257.

81. Chung I.Y., Benveniste E.N. Tumor necrosis factor-alpha production by astrocytes. Induction by lipopolysaccharide, IFN-gamma, and IL-1 beta // J. Immunol 1990. - Vol.144, N8. - P.2999-3007.

82. Clerici M., Saresella M., Trabattoni D. et al. Single-cell analysis of cytokine production shows different immune profiles in multiple sclerosis patients with active or quiescent disease // J. Neuroimmunol. 2001. - Vol.121, N1-2. -P.88-101.

83. Clerici N., Fernandez M., Restriction fragment length polymorphism analysis of HLA-DR- and DQ-linked alleles in multiple sclerosis in Spain // J. Neuroimmunol. 1992. - Vol.41, N2. - P.245-248.

84. Compston D.A.S., Kellar Wood H., Robertson N. et al. Genes and susceptibility to multiple sclerosis // Acta Neurol. Scand. 1995. - Vol.161. - P.43-51.

85. Confavreux C., Vukusic S., Moreau T., Adeleine P. Relapses and progression of disability in multiple sclerosis // N. Engl. J. Med. 2000. - Vol.343, N20. -P.1430-1438.

86. Cowan E.P., Pierce M.L., McFarland H.F., McFarlin D.E. HLA-DR and -DQ allelic sequences in multiple sclerosis patients are identical to those found in the general population // Hum. Immunol. -1991. Vol.32, N3. - P.203-210.

87. Craig J.C., Hawins S.A., Swallow M.W. et al. Subsets of T-lymphocytes in relation to T lymphocytes function in multiple sclerosis // Clin. Exp. Immunol. -1985.-Vol.61.-P.548-555.

88. Dabbert D, Rosner S, Kramer M. et al. Glatiramer acetate (copolymer-1)-specific, human T cell lines: cytokine profile and suppression of T cell lines reactive against myelin basic protein // Neurosci. Lett. 2000. - Vol.289, N3. - P.205-208.

89. Davie C.A., Barker G.J., Webb S. et al. Persistent functional deficit in multiple sclerosis and autosomal dominant cerebellar ataxia is associated with axon loss // Brain. 1995. - Vol.118, N6. - P.1583-1592.

90. Dayal A.S., Jensen M.A., Lledo A., Araason B.G. Interferon-gamma-secreting cells in multiple sclerosis patients treated with interferon beta-lb // Neurology. 1995. - Vol.45, N12. - P.2173-2177.

91. Debruyne J., Philippe J., Dereuck J. et al. Relapse markers in multiple sclerosis: are in vitro cytokine production changes reflected by circulatory T-cell phenotype alterations? // Mult. Scler. -1998. Vol.4, N3. - P. 193-197.

92. Del Prete G. The concept of type-1 and type-2 helper T cells and their cytokines in humans // Int. Rev. Immunol. 1998. - Vol.16, N3-4. -P.427-455.

93. Dhib-Jalbut S., McFarlin D.E. Immunology of multiple sclerosis // Ann. Allergy. 1990. - Vol.64. - P.433-444.

94. Diab A., Zhu J., Xiao B.G. et al. High IL-6 and low IL-10 in the central nervous system are associated with protracted relapsing EAE in DA rats // J. Neuropathol. Exp. Neurol. 1997. - Vol.56, N6. - P.641-650.

95. Dinarello C.A. The biological properties of interleukin-1 // Eur. Cytokine Netw. 1994. - Vol.5, N6. - P.517-531.

96. Dore-Duffy P., Newman W., Balabanov R. et al. Circulating, soluble adhesion proteins in cerebrospinal fluid and serum of patients with multiple sclerosis: correlation with clinical activity// Ann. Neurol. 1995. - Vol.37, N1. - P.55-62.

97. Duda P.W., Schmied M.C., Cook S.L. et al. Glatiramer acetate (Copaxone) induces degenerate, Th2-polarized immune responses in patients with multiple sclerosis // J. Clin. Invest. 2000. - Vol.105, N7. - P.967-976.

98. Duddy M.E., Armstrong M.A., Crockard A.D., Hawkins S.A. Changes in plasma cytokines induced by interferon-betala treatment in patients with multiple sclerosis //J. Neuroimmunol. 1999. - Vol.101, N1. -P.98-109.

99. Dufour A., Corsini E., Gelati M. et al. In vitro glatiramer acetate treatment of brain endothelium does not reduce adhesion phenomena // Ann. Neurol. 2000. -Vol.47, N5. -P.680-682.

100. Duquette P., Pleines J., Girard M. et al. The increased susceptibility of women to multiple sclerosis // Can. J. Neurol. Sei. 1992. - Vol.19, N4; - P.466-471

101. Dur an I., Martinez-Caceres E.M., Brieva L. et al. Similar pro- and antiinflammatory cytokine production in the different clinical forms of multiple sclerosis // Mult. Scler. 2001. - Vol.7, N3. - P.151-156.

102. Dyment D.A., Sadnovich A.D., Ebers G.C. Genetics of multiple sclerosis // Hum. Mol. Genet. 1997. - Vol.6, N10. - P.1693-1698.

103. Ebers G.C.,Sadovnick A.D. The role of genetic factors in multiple sclerosis susceptibility // J. Neuroimmunol. 1994. - Vol.54. - P. 1-17.

104. Elian M., Alonso A., Awad J. et al. HLA associations with multiple sclerosis in Sicily and Malta // Dis. Markers. 1987. - Vol.5, N2. - P.89-99.

105. Eoli M., Pandolfo M., Amoroso A. et al. Evidence of linkage between susceptibility to multiple sclerosis and HLA-class II loci in Italian multiplex families // Eur. J. Hum. Genet. 1995. - Vol.3, N5. - P.303-311.

106. Epstein L., Blumberg B., Crowley J. et al. Serum antibodies to HTLV-1 in human demyelinating diseases // Acta Neurol. Scand. 1987. - Vol.75. - P.231-233.

107. European Study Group on Interferon beta-lb in Secondary Progressive MS Placebo-controlled multicenter randomized trial of interferon beta-lb in treatment of secondary progressive multiple sclerosis // Lancet. 1998. - Vol.352. - P.1491-1497.

108. Falcone M., Bloom B.R. A T helper cell 2 (Th2) immune response against non-self antigens modifies the cytokine profile of autoimmune T cells and protectsagainst experimental allergic encephalomyelitis // J. Exp. Med. 1997. - Vol.185, N5. -P.901-907.

109. Finkelman F.D., Holmes J., Katona I.M. et al. Lymphokine control of in vivo immunoglobulin isotype selection // Annu. Rev. Immunol. 1990. - Vol.8. -P.303-333.

110. Fluckiger G. Interleukin-10 // Cytokines Ed. By Mire-Sluis A., Thorpe R.- 1998. Chapter 18. - P.234-237.

111. Fogdell A., Olerup O., Fredrikson S. et al. Linkage analysis of HLA class II genes in Swedish multiplex families with multiple sclerosis // Neurology. 1997. -Vol.48, N3. -P.758-762.

112. Frequin S.T., Lamers K.F., Barkhof F. et al. Follow-up study of MS patients treated with high-dose intravenous methylprednisolone // Acta Neurol. Scand- 1994. Vol.90. - P. 105-110.

113. Fridkis-Hareli M., Sela M., Strominger J.L. et al. Binding motifs of copolymer 1 to multiple sclerosis- and rheumatoid arthritis-associated HLA-DR molecules // J. Immunol. 1999. - Vol.162, N8. - P.4697-4704.

114. Fridkis-Hareli M., Strominger J.L. Promiscuous binding of synthetic copolymer 1 to purified HLA-DR molecules // J. Immunol. 1998. - 160, N9. -P.4386-4397.

115. Friedlander R.M., Gagliardini V., Rotello R.J., Yuan J. Functional role of interleukin 1 beta (IL-1 beta) in IL-1 beta-converting enzyme-mediated apoptosis // J. Exp. Med. 1996. - Vol.184, N2. - P.717-724.

116. Furlan R., Poliani P.L., Galbiati F. et al. Central nervous system delivery of interleukin 4 by a nonreplicative herpes simplex type 1 viral vector ameliorates autoimmune demyelination// Hum. Gene. Ther. 1998. - Vol.9, N17. -P.2605-2617

117. Gallo P., Piccinno M.G., Tavolato B., Siden A. A longitudinal study on IL-2, sIL-2R, IL-4 and IFN-gamma in multiple sclerosis CSF and serum // J. Neurol. Sci.- 1991. Vol.101, N2. - P.227-232.

118. Gata J.M., Dinca L. Dinamics of CD4, CD8 and CD16 subpopulations during relaps versus remitting in MS patients // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1999. - Vol.7, N4. -P.514.

119. Gata J.M., Garcia-Moreno J.M., Dinca L. et al. Changes in lymphocyte subsets's and treatment with beta interferon in active multiple sclerosis // Rev. Neurol- 1998. Vol.27, N160. - P.939-942.

120. Gately M.K., Renzetti L.M., Magram J. et al. The interleukin-12/interleukin-12-receptor system: role in normal and pathologic immune responses // Annu. Rev. Immunol. 1998. - Vol.16. - P.495-521.

121. Gayo A., Mozo L., Suarez A. et al. Interferon beta-lb treatment modulates TNFalpha and IFNgamma spontaneous gene expression in MS // Neurology. 1999. -Vol.52, N9. -P.1764-1770.

122. Ge Y., Grossman R.I., Udupa J.K. et al. Glatiramer acetate (Copaxone) treatment in relapsing-remitting MS: quantitative MR assessment // Neurology. -2000. Vol.54, N4. - P.813-817.

123. Gehr G., Gentz R., Brockhaus M. et al. Both tumor necrosis factor receptor mediate proliferative signals in human mononuclear cells activation // J. immunol. -1992.-Vol.149.-P.911-917.

124. Gene K., Dona D.L., Reder A.T. Increased CD80(+) B cells in active multiple sclerosis and reversal by interferon beta-lb therapy // J. Clin. Invest. 1997. -Vol.99, N11. -P.2664-2671.

125. Ghabanbasani M.Z., Gu X.X., Spaepen M. Importance of HLA-DRB1 and DQA1 genes in the functional domain of DR01 chain in multiple sclerosis // J. Neuroimmunol. 1995. - Vol.59, N1-2. -P.77-82.

126. Gonatas N.K., Greene M.I., Waksman B.H. Genetic and molecular aspects of demyelination // Immunol. Today. 1986. - Vol.7. - P.121-126.

127. Gorodezky C., Najera R., Rangel B.E. et al. Immunogenetic profile of multiple sclerosis in Mexicans // Hum. Immunol. 1986. - Vol.16, N4. - P.364-374.

128. Gran B., Tranquill L.R., Chen M. et al. Mechanisms of immunomodulation by glatiramer acetate // Neurology. 2000. - Vol.55, N11.- P.1704-1714.

129. Haegert D.G., Michaud M., Schwab C. et al. Multiple sclerosis and HLA class II susceptibility and resistance genes // J. Neurosci. Res. 1990. - Vol.26, N1. -P.66-73.

130. Haegert D.G., Swift F.V., Benedikz J. Evidence for a complex role of HLA class II genotypes in susceptibility to multiple sclerosis in Iceland // Neurology. 1996. - Vol.46, N4. -P.l 107-1 111.

131. Hafler D.A., Brod S.A., Weiner H.L. Immimoregulation in multiple sclerosis // Res. Immunol. 1989. - Vol.140, N2. - P.233-239.

132. Hafler D.A., Buchsbaum M., Johnson D., Weiner H.L. Phenotypic and functional analysis of T cells cloned directly from the blood and cerebrospinal fluid of patients with multiple sclerosis // Ann. Neurol. 1985. - Vol.18, N4. - P.451-458.

133. Hartung H.P., Archelos J.J., Zielasek J. et al. Circulating adhesion molecules and inflammatory mediators in demyelination // Neurology. 1995. -Vol.45, N6, suppl.6. - S.22-32.

134. Hartung H.P., Hughes R.A., Taylor W.A. et al. T cell activation in Guillain-Barre syndrome and in MS: elevated serum levels of soluble IL-2 receptors // Neurology. 1990. - Vol.40, N2. - P.215-218.

135. Hauser S.L., Doolittle T.H., Lincoln R. et al. Cytokine accumulations in CSF of multiple sclerosis patients: frequent detection of interleukin-1 and tumor necrosis factor but not interleukin-6 // Neurology. 1990. - Vol.40, N11. -P.1735-1739.

136. Hawkins B.R., Yu Y.L., Woo E., Huang C.Y. No apparent association between HLA and multiple sclerosis in southern Chinese // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1988. - Vol.51, N3. - P.443-445.

137. Hawkins S.A., McDonnell G.V. Benign multiple sclerosis? Clinical course long term follow up, and assessment of prognostic factors // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1999. - Vol.67, N2. -P.148-152.

138. Heesen C., Sieverding F., Schoser B.G. et al. Interleukin-12 is detectable in sera of patients with multiple sclerosis association with chronic progressive disease course? // Eur. J. Neurol. - 1999. - Vol.6, N5. - P.591-596.

139. Hermans G., Stinissen P., Hauben L. et al. Cytokine profile of myelin basic protein-reactive T cells in multiple sclerosis and healthy individuals // Ann. Neurol. 1997. - Vol.42, N1. - P.18-27.

140. Hillert J., Groning M., Nyland H. An immunogenetic heterogeneity in multiple sclerosis // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1992. - Vol.55, N10. -P.887-890.

141. Hillert J., Olerup O. Multiple sclerosis is associated with genes within or close to the HLA-DR-DQ subregion on a normal DR15,DQ6,Dw2 haplotype // Neurology. 1993. - Vol.43, N1. - P.163-168.

142. Hillert J., W.-X. Huang, Y.-P. Jin Cytokine network analysis in multiple sclerosis. Journal of neurological sciences // Abstract of the XVII world congress of neurology. London, 2001. - Vol.187, suppl.l. - P.269.

143. Hintzen RQ, Polman CH. Th-cell modulation in multiple sclerosis. Immunol Today. 1997 C>ct;18(10):507-8.

144. Hohlfeld R. Biotechnological agents for the immunotherapy of multiple sclerosis. Principles, problems and perspectives // Brain. 1997. - Vol.120, N5. -P.865-916.

145. Hohnoki K., Inoue A., Koh C.S. Elevated serum levels of IFN-gamma, IL-4 and TNF-alpha/unelevated serum levels of IL-10 in patients with demyelinating diseases during the acute stage // J. Neuroimmunol. 1998. - Vol.87, N1-2. - P.27-32.

146. Horiuchi I., Kawano Y., Yamasaki K. et al. Thl dominance in HAM/TSP and the optico-spinal form of multiple sclerosis versus Th2 dominance in mite antigen-specific IgE myelitis // J. Neurol. Sci. 2000. - Vol.172, N1. - P.17-24.

147. Huang W.X., Huang P., Link H., Hillert J. Cytokine analysis in multiple sclerosis by competitive RT PCR: A decreased expression of IL-10 and an increased expression of TNF-alpha in chronic progression // Mult. Scler. - 1999. - Vol.5, N5. -P.342-348.

148. Huang Y.M., Hussien Y., Yarilin D. et al. Interferon-beta induces the development of type 2 dendritic cells // Cytokine. 2001. - Vol.13, N5. - P.264-271.

149. Ilyas A.A., Davison A.N. Cellular hypersensitivity to gangliosides and myelin basic protein in multiple sclerosis // J. Neurol. Sci. 1983. - Vol.59, N1. -P.85-95.

150. Inoges S., Merino J., Bandres E. et al. Cytokine flow cytometry differentiates the clinical status of multiple sclerosis (MS) patients // Clin. Exp. Immunol. 1999. - Vol.115, N3. - P.521-525.

151. Jacobs L.D., Cockfair D.L., Rudick R.A. et al. Intramuscular interferon beta-lb for disease progression in relapsing multiple sclerosis. The multiple sclerosis collaborative research group (MSCRG) // Ann. Neurol. 1996. - Vol.39. - P.285-294.

152. Jenkins J.K., Malyak M., Arend W.P. The effects of interleukin-10 on interleukin-1 receptor antagonist and interleukin-1 beta production in human monocytes and neutrophils // Lymphokine. Cytokine. Res. 1994. - Vol.13, N1. -P.47-54.

153. Johns L.D., Flanders K.C., Ranges G.E., Sriram S. Successful treatment of experimental allergic encephalomyelitis with transforming growth factor-beta 1 // J. Immunol. 1991. - Vol.147, N6. -P. 1792-1796.

154. Johns L.D., Sriram S. Experimental allergic encephalomyelitis: neutralizing antibody to TGF beta 1 enhances the clinical severity of the disease // J. Neuroimmunol. 1993. - Vol.47, N1. - P.l-7.

155. Johnson D., Hafler D.A., Fallis R.J. et al. Cell-mediated immunity to myelin-associated glycoprotein, proteolipid protein, and myelin basic protein in multiple sclerosis // J. Neuroimmunol. 1986. - Vol.13, N1. - P.99-108.

156. Joseph J, Knobler R.L, D'Imperio C, Lublin F.D. Down-regulation of interferon-gamma-induced class II expression on human glioma cells by recombinant interferon-beta: effects of dosage treatment schedule // J. Neuroimmunol. 1988. -Vol.20, N1.-P.39-44.

157. Jovicic A, Dordevic D, Kataranovski M. et al. Possible role of tumor necrosis factor-a (TNFa), interleukin-4 (IL-4), and transforming growth factor-p (TGF-p) in multiple sclerosis patients // Mult. Scler. 1997. - Vol.3, N5. - P.313.

158. Kahl K.G, Kruse N, Toyka K.V, Rieckmann P. Serial analysis of cytokine mRNA profiles in whole blood samples from patients with early multiple sclerosis // J. Neurol. Sci. 2002. - Vol.200, N1-2. - P.53-55.

159. Karandikar N.J, Crawford M.P, Yan X. et al. Glatiramer acetate (Copaxone) therapy induces CD8+ T cell responses in patients with multiple sclerosis // J. Clin. Investig. 2002. - Vol.109, N5. - P.641.

160. Karp C.L, Biron C.A, Irani D.N. Interferon beta in multiple sclerosis: is IL-12 suppression the key? // Immunol. Today. 2000. - Vol.21, N1. - P.24-28.

161. Karpus W.J, Gould K.E, Swanborg R.H. CD4+ suppressor cells of autoimmune encephalomyelitis respond to T cell receptor-associated determinants on effector cells by interleukin-4 secretion // Eur. J. Immunol. 1992. - Vol.22, N7. -P.1757-1763.

162. Kelly M.A, Zhang Y, Penny M.A. et al. Genetic susceptibility to multiple sclerosis in a Shanghai Chinese population. The role of the HLA class II genes // Hum. Immunol. -1995. Vol.42, N3. - P.203-208.

163. Killestein J., Den Drijver B.F., Van der Graaff W.L. et al. Intracellular cytokine profile in T-cell subsets of multiple sclerosis patients: different features in primary progressive disease // Mult. Scler. 2001. - Vol.7, N3. - P. 145-150.

164. Killestein J., Hintzen R.Q., Uitdehaag B.M. et al. Baseline T cell reactivity in multiple sclerosis is correlated to efficacy of interferon-beta // J. Neuroimmunol. -2002. Vol.133, N1-2. -P.217-224.

165. Killestein J., Rep M.H., Barkhof F. et al. Active MRI lesion appearance in MS patients is preceded by fluctuations in circulating T-helper 1 and 2 cells // J. Neuroimmunol. 2001. - Vol.118, N2. - P.286-294.

166. Kipnis J., Yoles E., Porat Z. et al. T cell immunity to copolymer 1 confers neuroprotection on the damaged optic nerve: possible therapy for optic neuropathies // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol.97, N13. - P.7446-7451.

167. Kittur S.D., Kittur D.S., Soncrant T.T. et al. Soluble interleukin-2 receptors in cerebrospinal fluid from individuals with various neurological disorders // Ann. Neurol. 1990. - Vol.28, N2. - P.168-173.

168. Kozovska M.E., Hong J., Zang Y.C. et al. Interferon beta induces T-helper 2 immune deviation in MS // Neurology. 1999. - Vol.53, N8. - P.1692-1697.

169. Kracke A., von Wussow P., Al-Masri A.N. et al. Mx prteins in blood leukocytes for monitoring interferon-beta-lb therapy in patients with multiple sclerosis // Neurology. 2000. - Vol.54, N1. - P. 193-199.

170. Kurtzke J.F. Rating neurologic impairment in multiple sclerosis: an expanded disability status scale (EDSS) // Neurology. 1983. - Vol.33, N12. -P.1444-1452.

171. Kurtzke J.F., Beebe G.W., Nagler B. et al. Studies on the natural history of multiple sclerosis VIII. Early prognostic features of the later course of illness // J. Chron. Dis. 1977. - Vol.30. - P.819-830.

172. Kuzmanovski I, Daskalovska V. TNF-a serum levels in patients with relapsing-remitting and chronically progressive multiple sclerosis // Eur. Cytokine Network. 1998. - Vol.9, N3. - P.337.

173. La Mantia L, Illeni M.T, Milanese C. et al. HLA antigens in Italian multiple sclerosis patients // Ital. J. Neurol. Sci. 1991. - Vol.12, N1. - P.81-86.

174. La Mantia L, Illeni M.T, Milanese C. HLA and multiple sclerosis in Italy: a review of the literature // J. Neurol. -1990. Vol.237. - P.441-444.

175. Lafaille J.J. The role of helper T cell subsets in autoimmune diseases // Cytokine Growth. Factor. Rev. -1998. Vol.9, N2. - P.139-151.

176. Laske C. Oschmann P, Tofighi J. et al. Prognostic value of soluble tumor necrosis factor receptors 1 and 2 in multiple sclerosis patients treated with interferon-beta-lb // Eur. Neurol. 2001. - Vol.46, N4. - P.210-214.

177. Lassman H. Mechanisms of demyelination in multiple sclerosis // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1999. - Vol.5. - P.2.

178. Lee S.C, Liu W, Brosnan C.F, Dickson D.W. Activation of nitric oxide synthase pathway in human fetal astrocytes by IL-lp and IFN-y // J. Neuroimmunol. 1993.- Vol.46. -P.19-25.

179. Lee S.C, Liu W, Roth P. et al. Cytokine production by human fetal microglia and astrocytes // J. Immunol. 1993. - Vol.150. - P.2659-2667.

180. Leibowitz U, Alter M, Clinical factors associated with increased disability in multiple sclerosis // Acta Neurol. Scand. -1970. Vol.46. - P.53-70.

181. Leppert D, Waubant E, Burk M.R. et al. Interferon beta-lb inhibits gelatinase secretion and in vitro migration of human T cells: a possible mechanism for treatment efficacy in multiple sclerosis // Ann. Neurol. 1996. - Vol.40, N6. -P.846-852.

182. Leussink V.I, Jung S, Merschdorf U. et al. High-dose methylprednisolone therapy in multiple sclerosis induces apoptosis in peripheral blood leukocytes // Arch. Neurol. 2001. - Vol.58, N1. - P.91-97.

183. Li Q., Milo R., Panitch H., Swoveland P., Bever C.T. Jr. Glatiramer acetate blocks the activation of THP-1 cells by interferon-gamma // Eur. J. Pharmacol- 1998.-Vol.342, N2-3.-P.303-310.

184. Lindberg R. Matrix metalloproteinases in the brain tissue and CSF of MS // J. Neurol. Sci. 2001. - Vol. 187, suppl.l. - P.262.

185. Link H. The cytokine storm in multiple sclerosis // Mult. Scler. 1998. -Vol.4, N1. -P.12-15.

186. Link J., Soderstrom M., Ljungdahl A. et al. Organ-specific autoantigens induce interferon-gamma and interleukin-4 mRNA expression in mononuclear cells in multiple sclerosis and myasthenia gravis // Neurology. 1994. - Vol.44, N4. -P.728-734.

187. Link J., Soderstrom M., Olsson T. et al. Increased transforming growth factor-beta, interleukin-4, and interferon-gamma in multiple sclerosis // Ann. Neurol.- 1994. Vol.36, N3. - P.379-386.

188. Liu C., Blumhardt L.D. Benefits of glatiramer acetate on disability in relapsing-remitting multiple sclerosis. An analysis by area under disability/time curver // J. Neurol. Sci. 2000. - Vol.181, N1-2. - P.33-37.

189. Losy J., Michalowska-Wender G. In vivo effect of interferon-beta la on interleukin-12 and TGF-beta(l) cytokines in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis // Acta Neurol. Scand. 2002. - Vol.106, N1. - P.44-46.

190. Losy J., Niezgoda A. IL-18 in patients with multiple sclerosis // Acta Neurol. Scand. 2001. - Vol.104, N3. - P.171-173.

191. Lu C.Z., Fredrikson S., Xiao B.G., Link H. Interleukin-2 secreting cells in multiple sclerosis and controls // J. Neurol. Sci. 1993. - Vol.120, N1. - P.99-106.

192. Lu C.Z., Jensen M.A., Arnason B.G. Interferon gamma- and interleukin-4-secreting cells in multiple sclerosis // J. Neuroimmunol. 1993. - Vol.46, N1-2. -P.123-128.

193. Maimone D., Guazzi G.C., Annunziata P. IL-6 detection in multiple sclerosis brain // J. Neurol. Sci. 1997. - Vol.146, N1. - P.59-65.

194. Mancardi G.L., Sardanelli F., Parodi R.C. et al. Effect of copolymer-1 on serial gadolinium-enhanced MRI in relapsing remitting multiple sclerosis // Neurology. 1998. - Vol.50, N4. -P.l 127-1133.

195. Manual of flow cytometry // Abstract of the X world congress of laboratory research. -1999. Mainz. - P.72.

196. Marrosu M.G., Muntoni F., Murru M.R. et al. Sardinian multiple sclerosis is associated with HLA-DR4: a serologic and molecular analysis // Neurology. -1988.-Vol.38, N11.-P.1749-1753.

197. Martin R., Voskuhl R., Flerlage M. Myelin basic protein-specific T-cell response in identical twins discordant or concordant for multiple sclerosis // Ann. Neurol. 1993. - Vol.34. - P.524-535.

198. Martino G., Furlan R., Galbiati F. et al. A gene therapy approach to treat demyelinating diseases using non-replicative herpetic vectors engineered to produce cytokines // Mult. Scler. 1998. - Vol.4, N3. - P.222-227.

199. Martino G., Hartung H.P. Immunopathogenesis of multiple sclerosis: the role of T cells // Curr. Opin. Neurol. 1999. - Vol.12, N3. - P.309-321.

200. Martino G., Moiola L., Brambilla E. et al. Interferon-gamma induces T lymphocyte proliferation in multiple sclerosis via a Ca(2+)-dependent mechanism // J Neuroimmunol. 1995. - Vol.62, N2. - P.169-176.

201. McAlpine D. The benign form of multiple sclerosis. A study based on 241 cases seen within 3 years of onset and followed up until the tenth year or more of the disease // Brain. -1961. Vol.84. - P.186-203.

202. McAlpine D., Compston N. Some aspects of the natural history of disseminated sclerosis // Quart. J. Med. 1952.- Vol.21. - P.135-167.

203. McDonald W.I., Halliday A.M. Diagnosis and classification of multiple sclerosis // Br. Med. Bull. 1977. - Vol.33. - P.4-9.

204. McDonald W.I., Ron M.A. Multiple sclerosis: the disease and its manifestations // Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 1999. - Vol.354, N1390. -P.1615-1622.

205. McDonnell G.V., Hawkins S.A. Primary progressive multiple sclerosis: increasing clarity but many unanswered questions // J. Neurol. Sci. 2002. - Vol.199 N1-2. -P.l-15.

206. McDonnell G.V., Mawhinney H., Graham C.A. et al. A study of the HLA-DR region in clinical subgroups of multiple sclerosis and its influence on prognosis // J. Neurol. Sci. 1999. - Vol.165, N1. - P.77-83.

207. McFarland H.F., Chib-Jalbut S. Multiple sclerosis: possible immunological mechanisms // Clin. Immunol. Immunopathol. 1989. - Vol.50. - S.96-105.

208. McRae B.L., Semnani R.T., Hayes M.P., van Seventer G.A. Type I IFNs inhibit human dendritic cell IL-12 production and Thl cell development // J. Immunol. 1998. - Vol.160, N9. - P.4298-4304.

209. Merrill J.E., Benveniste E.N. Cytokines in inflammatory brain lesions: helpful and harmful // Trends. Neurosci. -1996. Vol.19, N8. - P.331-338.

210. Miller A, Shapiro S, Gershtein R. et al. Treatment of multiple sclerosis with copolymer-1 (Copaxone): implicating mechanisms of Thl to Th2/Th3 immune-deviation // J Neuroimmunol. -1998. Vol.92. N1-2. - P.l 13-121.

211. Miller D.H., Thompson A.J., Morrisey S.P. et al. High dose steroids in acute relapses of multiple sclerosis: MRI evidence for a possible mechanism of therapeutic effect // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1992. - Vol.53. - P.450-453.

212. Milo R., Panitch H. Additive effects of copolymer-1 and interferon beta-lb on the immune response to myelin basic protein // J. Neuroimmunol. 1995. -Vol.61, N2.-P.185-193.

213. Mokhtarian F., Shi Y., Shirazian D. et al. Defective production of antiinflammatory cytokine, TGF-beta by T cell lines of patients with active multiple sclerosis // J. Immunol. 1994. - Vol.152, N12. - P.6003-6010.

214. Monteyne P., Van Laere V., Marichal R., Sindic C.J. Cytokine mRNA expression in CSF and peripheral blood mononuclear cells in multiple sclerosis: detection by RT-PCR without in vitro stimulation // J. Neuroimmunol. 1997. -Vol.80, N1-2. -P.137-142.

215. Moore K.W., O'Garra A., de Waal Malefyt R. Interleukin-10 // Annu. Rev Immunol. 1993. - Vol.11. -P.165-190.

216. Moreau T., Coles A., Wing M. et al. A CAMPATH-IH in multiple sclerosis // Mult. Scler. 1996. - Vol.1, N6. - P.357-365.

217. Mosmann T.R., Coffman R.L. Heterogeneity of cytokine secretion patterns and functions of helper T cells // Adv. Immunol. 1989. - Vol.46. - P.l 11-147.

218. Mostrarica S.M., Badovinac V., Stosic-Grujicic S. et al. The effects of recombinant interleukin-lR antagonist (rlL-lra) on the adoptive transfer of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in rats // Neuroimmunology. -1995.-Vol.1.-P.13.

219. Najim Al-Din A.S., Kurdi A., Mubaidin A. et al. Epidemiology of multiple sclerosis in Arabs in Jordan: a comparative study between Jordanians and Palestinians // J. Neurol. Sci. 1996. - Vol.135, N2. - P.162-167.

220. Navikas V., Link J., Palasik W. et al. Increased mRNA expression of IL-10 in mononuclear cells in multiple sclerosis and optic neuritis // Scand. J. Immunol. 1995. - Vol.41, N2. - P.171-178.

221. Nedospasov S.A.,Udalova J.A.,Kuprash D.V. et al. DNA sequence polymorphism at the human tumor necrosis factor (TNF) locus // J. Immunol. 1991.- Vol.147, N3.-P.1053-1059

222. Nicoletti F., Patti F., Cocuzza C. et al. Elevated serum levels of interleukin-12 in chronic progressive multiple sclerosis // J. Neuroimmunol. 1996. -Vol.70, N1. -P.87-90.

223. Noronha A., Toscas A., Jensen M.A. Interferon beta augments suppressor cell function in multiple sclerosis // Ann. Neurol. 1990. - Vol.27, N2. - P.207-210.

224. Noronha A., Toscas A., Jensen M.A. Interferon beta decreases T cell activation and interferon gamma production in multiple sclerosis // J. NeuroimmunoL- 1993.-Vol. 46. -P.145-153.

225. Odum N., Hyldig-Nielsen J.J., Morling N. et al. HLA-DP antigens are involved in the susceptibility to multiple sclerosis // Tissue Antigens. 1988. -Vol.31, N5. -P.235-237.

226. Olerup O., Hillert J., Fredrikson S. et al. Primarily chronic progressive and relapsing-remitting multiple sclerosis: Two immunogenetically distinct disease entities // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. - Vol.86 - P.7113-7117.

227. Olsson T. Cytokine-producing cells in experimental autoimmune encephalomyelitis and multiple sclerosis // Neurology. 1995. - Vol.45, suppl.6. -S.11-15.

228. OHiordan J.I., Thompson A.J., Kingsley D.P.E., et al. The prognostic value of brain MRI in clinically isolated syndromes of the central nervous system. A 10 year follow up // Brain. -1998. Vol. 121. - P.495-504.

229. Ormerod I.E.C., McDonald W.I. Multiple sclerosis presenting with progressive visual failure // J. NeuroL Neurosurg. Psychiatry. 1984. - Vol.47. -P.943-946.

230. Ossege L.M., Sindera E., Patzold T., Malin J.P. Immunomodulatory effects of interferon-beta-lb in vivo: induction of the expression of transforming growth factor-betal and its receptor type II // J. Neuroimmunol. 1998. - Vol.91, N1-2. -P.73-81.

231. Ozenci V., Kouwenhoven M., Link H. Cytokines in multiple sclerosis: methodological aspects and pathogenic implications // Mult. Scler. 2002. - Vol.8, N5; -P.396-404.

232. Ozenci V., Kouwenhoven M., Teleshova N. et al. Multiple sclerosis: pro-and anti-inflammatory cytokines and metalloproteinases are affected differentially by treatment with IFN-beta // J. Neuroimmunol. 2000. - Vol.108, N1-2. - P.236-243.

233. Panitch H.S., Hirsch R.L., Schindler J., Johnson K.P. Treatment of multiple sclerosis with gamma interferon: exacerbations associated with activation of the immune system // Neurology. 1987. - Vol.37, N7. - P.1097-1102.

234. Paty D.W., Ebers G.C. Multiple sclerosis // Philadelphia: FA Davis, 1988. -P.151-152.

235. Perez L., Alvarez-Cermeno J.C., Rodriguez C. et al. B cells capable of spontaneous IgG secretion in cerebrospinal fluid from patients with multiple sclerosis: dependency on local IL-6 production // Clin. Exp. Immunol. 1995. -Vol.101, N3.-P.449-452.

236. Perez-Vicente J.A., Minguela A., Alvares-Lopez M.R. et al. Th2 cytokine patterns in multiple sclerosis // Europ. J. of immunol. 1996. - Vol.3, suppl.l - P.4-47.

237. Perrella O., Carrieri P.B., De Mercato R., Buscaino G.A. Markers of activated T-lymphocytes and T-cell receptor gamma delta+ in patients with MS. -1993.-Vol. 33. -P.152-155.

238. Peter J.B., Boctor F.N., Tourtellotte W.W. Serum and CSF levels of IL-2, sIL-2R, TNF-alpha, and IL-1 beta in chronic progressive multiple sclerosis: expected lack of clinical utility//Neurology. 1991. - Vol.41, N1. -P.121-123.

239. Petereit H.F., Bamborschke S., Esse A.D., Heiss W.D. Interferon gamma producing blood lymphocytes are decreased by interferon beta therapy in patients with multiple sclerosis // Mult. Scler. -1997. Vol.3, N3. - P.180-183.

240. Petereit H.F., Richter N., Pukrop R., Bamborschke S. Interferon gamma production in blood lymphocytes correlates with disability score in multiple sclerosis patients // Mult. Scler. 2000. - Vol.6, N1. - P.19-23.

241. Pette M., Pette D.F., Muraro P.A. et al. Interferon-beta interferes with the proliferation but not with the cytokine secretion of myelin basic protein-specific, T-helper type 1 lymphocytes // Neurology. 1997. - Vol.49, N2. - P.385-392.

242. Phadke J.G. Clinical aspects of multiple sclerosis in north-east Scotland with particular reference to its course and prognosis // Brain. 1990. - Vol.113, N6. -P.1597-1628.

243. Poser C.M. Management of multiple sclerosis: from clinical criteria to new therapies // Adv. Neuroimmunology. 1996. - Vol.3, N3. - P.3-12.

244. Poser C.M., Paty D.W., Scheinberg L. et al New diagnostic criteria for multiple sclerosis: guidelines for research protocols // Ann. Neurol. 1983. - Vol.13, N3: -P.227-231.

245. Poser S., Bauer H.J., Poser W. Prognosis of multiple sclerosis. Results from an epidemiological area in Germany // Acta Neurol. Scand. 1982. - Vol.65. -P.347-354.

246. Prat A., Al-Asmi A., Duquette P., Antel J.P. Lymphocyte migration and multiple sclerosis: relation with disease course and therapy // Ann. Neurol. 1999. -Vol.46, N2.-P.253-256.

247. Qin Y., Zhang D.Q., Prat. A. et al. Characterization of T cell lines derived from glatiramer-acetate-treated multiple sclerosis patients // J. Neuroimmunol. 2000 -Vol.108, N1-2.-P.201-206.

248. Raine C.S. Multiple sclerosis: prospects for remyelination // Mult. Scler. -1996.-Vol.2, N4.-P.195-197.

249. Raine C.S., Bonetti B., Cannella B. Multiple sclerosis: expression of molecules of the tumor necrosis factor ligand and receptor families in relationship to demyelinated plaque // Rev. Neurol. -1998. Vol.154, N8-9. - P.577-585.

250. Ransohoff R.M., Devajyothi C., Estes M.L. Interferon-beta specifically inhibits interferon-gamma-induced class II major histocompatibility complex gene transcription in a human astrocytoma cell line // J. Neuroimmunol. 1991. - Vol.33, N2. -P.103-112.

251. Refaeli Y., Abbas A.K. Role of cytokines in autoimmunity // Eur. Cytokine Netw. 1998. - Vol.9, suppl.3. - P.81-82.

252. Reger A.T., Antel J.P., Oger J.J.F. et al. Low T8 density on lymphocytes in active multiple sclerosis 11 Ann. Neurol. 1984. - Vol.16. - P.242-249.

253. Reinherz E.L., Weiner H.L., Häuser S.L. et al. Loss of suppressor T lymphocytes in active multiple sclerosis: analysis with monoclonal antibodies // New Engl. J. Med. 1980. - Vol.303, N3. -P.125-129.

254. Rep M.H., Hintzen R.Q., Polman C.H., van Lier R.A. Recombinant interferon-beta blocks proliferation but enhances interleukin-10 secretion by activated human T-cells // J. Neuroimmunol. 1996. - Vol.67, N2. - P. 111-118.

255. Rep M.H., Hintzen R.Q., Polman C.H., van Lier R.A. Recombinant interferon-beta blocks proliferation but enhances interleukin-10 secretion by activated human T-cells // J. Neuroimmunol. 1996. - Vol.67, N2. - P.l 11-118.

256. Rep M.H., Schrijver H.M., van Lopik T. et al. Interferon (IFN)-beta treatment enhances CD95 and interleukin 10 expression but reduces interferon-gamma producing T cells in MS patients // J. Neuroimmunol. 1999. - Vol.96, N1. -P.92-100.

257. Rep M.H., Schrijver H.M., van Lopik T. et al. Interferon (IFN)-beta treatment enhances CD95 and interleukin 10 expression but reduces interferon-gamma producing T cells in MS patients // J. Neuroimmunol. 1999. - Vol.96, N1. -P.92-100.

258. Rieckmann P., Albrecht M., Kitze B. et al. Cytokine mRNA levels in mononuclear blood cells from patients with multiple sclerosis // Neurology. 1994. -Vol.44, N8.-P.1523-1526.

259. Rieckmann P., Albrecht M., Kitze B. et al. Tumor necrosis factor-alpha messenger RNA expression in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis is associated with disease activity // Ann. Neurol. 1995. - Vol.37, N1. - P.82-88.

260. Riise T., Gronning M., Fernandez O. et al. Early prognostic factors for disability in multiple sclerosis, a European multicenter study // Acta Neurol. Scand. -1992.-Vol.85.-P.212-218.

261. Rodrigues-Sainz Mdel C., Sanchez-Ramon S, de Andres C. et al., Thl/Th2 cytokine and nitric oxide in cerebrospinal fluid and serum from patients with multiple sclerosis //Eur. Cytokine Netw. 2002. - Vol.13, N1. - P. 110-114.

262. Rogge L., Barberis-Maino L., Biffî M. et al. Selective expression of an interleukin-12 receptor component by human T helper 1 cells // J. Exp. Med. 1997. -Vol.185, N5.-P.825-831.

263. Rogge L., Papi A., Presky D.H. et al. Antibodies to the IL-12 receptor beta 2 chain mark human Thl but not Th2 cells in vitro and in vivo // J. Immunol. 1999. - Vol.162, N7. - P.3926-3932.

264. Rudick R. Mechanisms of disability progression in primary progressive multiple sclerosis: are they different from secondary progressive multiple sclerosis? // Mult. Scler. 2003. - Vol.9, N2. - P.210-212.

265. Rudick R.A., Ransohoff R.M., Lee J.C. et al. In vivo effects of interferon beta-la on immunosuppressive cytokines in multiple sclerosis // Neurology. 1998. -Vol.50, N5. -P.1294-1300.

266. Runmarker B., Martinsson T., Wahlstrom J. et al. HLA and prognosis in multiple sclerosis // J. Neurol. 1994. - Vol.241, N6. - P.385-390.

267. Salmaggi A., LaMantia L., Milanese C. et al. CSF T-cell subsets in multiple sclerosis: relationship to cerebrospinal fluid myelin basic protein and clinical activity // J. Neurol. 1989. - Vol.236, N6. - P.336-339.

268. Sandberg-Wolheim M., Lymphocyte population in the cerebrospinal fluid and peripheral blood of patients with multiple sclerosis and optic neuritis // Scand. J. Immun. -1983. Vol.17. - P.575-581.

269. Sandberg-Wollheim M., Ciusani E., Salmaggi A. et al. An evaluation of tumor necrosis factor microsatellite alleles in genetic susceptibility to multiple sclerosis // Mult. Scler. -1995. Vol.1, N3. - P.181-185.

270. Santoli D., Moretta L., Lisak L. et al. Imbalances in T-cell subpopulations in multiple sclerosis//J. Immunol. 1979. - Vol.120. -P.1369-1371.

271. Sasaki H., Pollard R.B., Schmitt D., Suzuki F. Transforming growth factor-beta in the regulation of the immune response // Clin. Immunol. Immunopathol -1992.-Vol.65, Nl.-P.l-9.

272. Schattner E., Friedman S.M. Fas expression and apoptosis in human B cells // Immunol. Res.- 1996,- Vol.15. P.246-257.

273. Scheider H., Prossi F., Balschun D. et al. A neuromodulatory role of interleukin-1(3 in hippocampus // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol.95. -P.7778-7783.

274. Schluep M., van Melle G., Henry H. et al. In vitro cytokine profiles as indicators of relapse activity and clinical course in multiple sclerosis // Mult. Scler. -1998.-Vol.4, N3.-P.198-202.

275. Schmied M, Duda PW, Krieger JI, Trollmo C, Hafler DA. In vitro evidence that subcutaneous administration of glatiramer acetate induces hyporesponsive T cells in patients with multiple sclerosis // Clin. Immunol. 2003. -Vol.106, N3.-P.163-174.

276. Schobitz B., De Kloet E.R., Holsboer F. Gene expression and function of interleukin 1, interleukin 6 and tumor necrosis factor in the brain // Prog. Neurobiol. -1994. Vol.44, N4. - P.397-432.

277. Schonrock L.M., Galowski G., Bruck W. IL-6 expression in early multiple sclerosis lesions // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1999. - Vol. 5.-P.4.

278. Segal B.M., Cross A.H. Fas(l) track to apoptosis in multiple sclerosis: TNF receptor may suppress or potentiate CNS demyelination // Neurology. 2000. -Vol.55, N7. -P.906-907.

279. Segal B.M., Dwyer B.K., Shevach E.M. An interleukin (IL)-10/IL-12 immunoregulatory circuit controls susceptibility to autoimmune disease // J. Exp. Med. 1998. - Vol.187, N4. - P.537-546.

280. Sellebjerg F., Bendtzen K., Christiansen M., Freseriksen J. Cytokines and soluble IL-4 receptor in patients with acute optic neuritis and multiple sclerosis // Europ. J. Neurol. 1996. - Vol.3, suppl.4. - P.31.

281. Selmaj K., Raine C.S., Cannella B., Brosnan C.F. Identification of lymphotoxin and tumor necrosis factor in multiple sclerosis lesions // J. Clin. Invest.- 1991. Vol.87, N3. -P.949-954.

282. Selmaj K.W., Raine C.S., Brosnan C.F. et al. Proliferation of astrocytes in vitro in response to cytokines. A primary role for tumor necrosis factor // J. Immunol.- 1990. Vol.144, N1. - P.129-135.

283. Semra Y.K., Seidi O.A., Sharief M.K. Disease activity in multiple sclerosis correlates with T lymphocyte expression of the inhibitor of apoptosis proteins // J. Neuroimmunol. 2002. - Vol.122, N1-2. - P.159-166.

284. Semra Y.K., Seidi O.A., Sharief M.K. Heightened intrathecal release of axonal cytoskeletal proteins in multiple sclerosis is associated with progressive disease and clinical disability // J. Neuroimmunol. 2002. - Vol.122, N1-2. -P.132-139.

285. Sharief M.K. Cytokines in multiple sclerosis: pro-inflammation or pro-remyelination? // Mult. Scler. 1998. - Vol.4, N3. - P.169-173.

286. Sharief M.K., Hentges R. Association between tumor necrosis factor-alpha and disease progression in patients with multiple sclerosis // N. Engl. J. Med. 1991. -Vol.325, N7. -P.467-472.

287. Sharief M.K., Hentges R., Ciardi M., Thompson E.J. In vivo relationship of interleukin-2 and soluble IL-2 receptor to blood-brain barrier impairment in patients with active multiple sclerosis // J. Neurol. 1993. - Vol.240, N1. - P.46-50.

288. Sindic C.J., Van Laere V., MonteyneP Cytokine mRNA expression in CSF and peripheral blood mononuclear cells in multiple sclerosis // Multiple sclerosis: clinical and laboratory research. 1997. - Vol.3, N5. - P.32.

289. Smith D.R., Balashov K.E., Hafler D.A. et al. Immune deviation following pulse cyclophosphamide/methylprednisolone treatment of multiple sclerosis: increased IL-4 production and associated eosinophilia // Ann. Neurol. 1997. -Vol.42, N3.-P.313-318.

290. Soderstrom M., Hillert J., Link H. et al. Expression of IFN-gamma, IL-4, and TGF-beta in multiple sclerosis in relation to HLA-Dw2 phenotype and stage of disease // Mult. Scler. 1995. - Vol.1, N3. - P.173-180.

291. Sommer N., Cepok S., Jacobsen M. et al. Patterns of cerebrospinal fluid pathology correlate with disease progression in multiple sclerosis // Brain. 2001. -Vol.124,N11.-P.2169-2176.

292. Sorensen T.L., Sellebjerg F. Distinct chemokine receptor and cytokine expression profile in secondary progressive MS // Neurology. 2001. - Vol.57, N8. -P.1371-1376.

293. Sorensen T.L., Tani M., Jensen J. et al. Expression of specific chemokines and chemokine receptors in the central nervous system of multiple sclerosis patients // J. Clin. Invest. 1999. - Vol.103, N6. - P.807-815.

294. Sotgiu S., Serra C., Dolei A. et al. HLA-based cytokine production in Sardinians: implication for the pathogenesis of multiple sclerosis // Eur. Cyt. Network -1998.-Vol.9, N3.-P.337.

295. Southanthiran M., Strom T.B. Renal transplantation // N. Engl. J. Med. -1994.-Vol.331.-P.365-376.

296. Spadaro M., Amendolea M.A., Mazzucconi M.G. et al. Autoimmunity in multiple sclerosis: study of a wide spectrum of autoantibodies // Mult. Scler. 1999. - Vol.5, N2. - P.121-125.

297. Stewart G.J., Teutsch S.M., Castle M. et al. HLA-DR, -DQA1 and -DQB1 associations in Australian multiple sclerosis patients // Eur. J. Immunogenet. 1997. -Vol.24, N2.-P.81-92.

298. Stoliarov I, Ogurtsov R, Petrov A. et al. Immunological monitoring in patients with multiple sclerosis can help to prevent exacerbation // Eur. Cyt. Network. -1998.-Vol.9, N3.-P.337.

299. Swingler R.J, Compston D. The distribution of multiple sclerosis in the United Kingdom // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1986. - Vol.49, N10. -P.l 115-1124.

300. Swingler R.J, Kirk P.F, Darke C, Compston D.A. HLA and multiple sclerosis in south east Wales // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1987. - Vol.50, N9.-P.l 153-1155.

301. Takai Y, Wong G.G, Clark S.C. et al. B-cell stimulatory factor-2 is involved in the differentiation of cytotoxic T-lymphocytes // J. Immunol. 1988. -Vol.140, N2. -P.508-512.

302. Tanaka M, Suda T, Haze K. et al. Fas ligand in human serum // Nature medicine. 1996. - Vol.2. - P.317-322.

303. Teitelbaum D, Aharoni R, Araon R, Sela M. Specific inhibition of the T-cell response to myelin basic protein by the synthetic copolymer Cop 1 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. - Vol.85, N24. - P.9724-9728.

304. Teitelbaum D, Meshorer A, Hirshfeld T, Arnon R, Sela M. Suppression of experimental allergic encephalomyelitis by a synthetic polypeptide // Eur. J. Immunol. 1971. - Vol.1, N4. - P.242-248.

305. Teitelbaum D, Milo R, Araon R, Sela M. Synthetic copolymer 1 inhibits human T-cell lines specific for myelin basic protein // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.1992. Vol.89, N1. - P.137-141.

306. Teitelbaum D, Webb С, Bree M. et al. Suppression of experimental allergic encephalomyelitis in Rhesus monkeys by a synthetic basic copolymer // Clin. Immunol. Immunopathol. 1974. - Vol.3, N2. - P.256-262.

307. The IFNB Multiple Sclerosis Study Group Interferon beta-lb in the treatment of multiple sclerosis: final outcome of the randomised controlled trial // Neurology- 1995. Vol.45. -P.1277-1285.

308. Thompson A. The cytokine handbook // San-Diego: Academic Press. -1998.-P.425.

309. Thompson A.J, Brazil J, Whelan C.A. et al. Peripheral blood T lymphocyte changes in multiple sclerosis: a marker of disease progression rather than of relapse? // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. 1986. - Vol.49, N8. - P.905-912.

310. Thompson A.J, Francis D.A, Brookes P. et al. Multiple sclerosis and HLA: is the susceptibility gene really HLA-DR or -DQ? // Hum. Immunol. 1991. -Vol.32, N2.-P.l 19-124.

311. Thompson A.J, Hutchinson M, Brazil J. et al. A clinical and laboratory study of benign multiple sclerosis // QJM. 1986. - Vol.225. - P.69-80.

312. Thompson A.J, Kermode A.G, MacManus D.G. et al. Pathogenesis of progressive multiple sclerosis // Lancet. 1989. - Vol.1, N8650. - P.1322-1323.

313. Thompson A.J, Kermode A.G, Wicks D. et al. Major differences in the dynamics of primary and secondary progressive multiple sclerosis // Ann. Neurol. -1991.-Vol.29.-P.53-62.

314. Tienari P.J. Multiple sclerosis: multiple etiologies, multiple genes? // Ann. Med. 1994. - Vol.26. - P.259-269.

315. Tienari P.J, Wikstrom J, Sajantila A. et al. Genetic susceptibility to multiple sclerosis linked to myelin basic protein gene // Lancet. 1992. - Vol.340. -P.987-991.

316. Trapp BD, Ransohoff R, Rudick R. Axonal pathology in multiple sclerosis: relationship to neurologic disability. Curr Opin Neurol. 1999 Jun;12(3):295-302.

317. Trinchieri G. Cytokines acting on or secreted by macrophages during intracellular infection (IL-10, IL-12, IFN-gamma) // Curr. Opin. Immunol. 1997. -Vol.9, N1.-P.17-23.

318. Trinchieri G. Interleukin-12: a proinflammatory cytokine with immunoregulatory functions that bridge innate resistance and antigen-specific adaptive immunity// Annu. Rev. Immunol. 1995. - Vol.13, - P.251-276.

319. Trinchieri G. Proinflammatory and immunoregulatory functions of interleukin-12 // Int. Rev. Immunol. 1998. - Vol.16, N3-4. - P.365-396.

320. Trojano M., Avolio C., Liuzzi G.M. et al. Changes of serum sICAM-1 and MMP-9 induced by rIFNbeta-lb treatment in relapsing-remitting MS // Neurology. -1999. Vol.53, N7. - P.1402-1408.

321. Trotter J.L., Collins K.G., van der Veen R.C. et al. Serum cytokine levels in chronic progressive multiple sclerosis: interleukin-2 levels parallel tumor necrosis factor-a levels // J. Neuroimmunol. 1991. - Vol.33. - P.29-36.

322. Tsukada N., Miyagi K., Matsuda M. et al. Tumor necrosis factor and interleukin-1 in the CSF and sera of patients with multiple sclerosis // J. Neurol. Sci.- 1991. Vol.104, N2. - P.230-234.

323. Van Weyenbergh J., Lipinski P., Abadie A.et al. Antagonistic action of IFN-beta and IFN-gamma on high affinity Fc gamma receptor expression in healthy controls and multiple sclerosis patients // J. Immunol. 1998. - Vol.161, N3. -P.1568-1574.

324. Vandanabeele P., DePereq W., Beyaert R., Fiers W. Two tumor necrosis factor receptors: structure and functions // Trends. Biochem. Sci. 1995. - N5. -P.392-399.

325. Vandevyver C., Raus P., Stinissen P. et al. Polymorphism of the tumour necrosis factor beta gene in multiple sclerosis and rheumatoid arthritis // Eur. J. Immunogenet. 1994. - Vol.21, N5. - P.377-382.

326. Vartdal F., Sollid L.M., Vandvik B. et al. Patients with multiple sclerosis carry DQB1 genes which encode shared polymorphic amino acid sequences // Hum. Immunol. 1989. - Vol.25, N2. - P.103-110.

327. Visscher B.R., Liu K.-S., Clark V.A. et al. Onset symptoms as predictors of mortality and disability in multiple sclerosis // Acta Neurol. Scand. 1984. -Vol.70.-P.321-328.

328. Wahl S.M., McCartney-Francis N., Mergenhagen S.E. Inflammatory and immunomodulatory roles of TGF-beta // Immunol. Today. 1989. - Vol.10, N8. -P.258-261.

329. Walczak A., Mycko M., Selmaj L. Spontaneous apoptosis of lymphocytes in multiple sclerosis // Abstract of the XVII world congress of neurology. London, 2001. - Vol.187, suppl.l. -P.272.

330. Wandinger K.P., Lunemann J.D., Wengert O. et al. TNR-related apoptosis inducing ligand (TRAIL) as a potential response marker for interferon-beta treatment in multiple sclerosis // Lancet. 2003. - Vol.361, N9374. - P.2036-2043.

331. Wandinger K.P., Wessel K., Neustock P. et al. Diminished production of type-I interferons and interleukin-2 in patients with multiple sclerosis // J. Neurol. Sci. 1997. - Vol.149, N1. - P.87-93.

332. Wandinger K.P., Wessel K., Neustock P. et al. Diminished production of type-I interferons and interleukin-2 in patients with multiple sclerosis // J. Neurol. Sci 1997. - Vol.149, N1. - P.87-93.

333. Warren J.S. Interleukins and tumor necrosis factor in inflammation // Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 1990. - Vol.28, N1. - P.37-59.

334. Weinshenker B.G. Natural history of multiple sclerosis // Ann. Neurol. -1994.-Vol.36, suppl.-S.6-ll.

335. Weinshenker B.G., Bass B., Rice G.P. et al. The natural hystory of multiple sclerosis: a population-based study. I.Clinical course and disability // Brain-1989.-Vol.112.-P.133-146.

336. Weinshenker B.G., Rice G.P.A., Noseworthy J.H. et al. The natural history of multiple sclerosis: a geographically based study 3. Multivariate analysis of predictive factors and models of outcome // Brain. 1991. - Vol.114. - P. 1045-1056.

337. Weinshenker B.G., Wingerchuk D.M., Liu Q. et al. Genetic variation in the tumor necrosis factor alpha gene and the outcome of multiple sclerosis // Neurology. 1997. - Vol.49, N2. - P.378-385.

338. Wildbaum G., Youssef S., Grabie N. et al. Neutralizing antibodies to IFN-gamma-inducing factor prevent experimental autoimmune encephalomyelitis // J Immunol. 1998. - Vol.161, N11. - P.6368-6374.

339. Woodroofe M.N., Cuzner M.L. Cytokine mRNA expression in inflammatory multiple sclerosis lesions: detection by non-radioactive in situ hybridization // Cytokine. 1993. - Vol.5, N6. - P.583-588.

340. Yagi Y., Takahashi M., Nakamura Y. Cytokine-secreting cells in relapsing multiple sclerosis patients treated with high-dose intravenous methylprednisolone // Rinsho Shinkeigaku. 1997. - Vol.37, N7. - P.575-579.

341. Yamamura T. Hypothetical view on the environmental factors, Thl/Th2 balance, and disease phenotype of MS/EAE // Rinsho Shinkeigaku. 2002. - Vol.42, N11. -P.1201-1203.

342. Zaffaroni M., Ghezzi A. The prognostic value of age, gender, pregnancy and endocrine factors in multiple sclerosis // Neurol. Sci. 2000. - Vol.21, N4, suppl.2. - S.857-860.

343. Zipp F., Weber F., Huber S. et al. Genetic control of multiple sclerosis: increased production of lymphotoxin and tumor necrosis factor-a by HLA-DR2+ T cells // Ann. Neurol. 1995. - Vol.38. - P.723-730.