Автореферат и диссертация по медицине (14.01.14) на тему:Клинико-генетические предикторы развития заболеваний пародонта

На правах рукописи УДК: 616.314.17-008.1 -084-07:577.21

Сафонова Анастасия Владимировна

Клинико-генетические предикторы развития заболеваний пародонта

14.01.14 - «Стоматология» (мед.науки) 03.02.07 - «Генетика» (мед.науки)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 2 ЯНВ 2012

Москва-2012

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития России)

Научные руководители: заслуженный врач РФ, доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Арутюнов Сергей Дарчоевич Петрин Александр Николаевич

Мамедов АдильАскерович Зинченко РенаАбульфазовна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования Российская медицинская академия последипломного образования Минздравсоцразвития России

сО

Защита состоится

_2012 года в '/3

часов на заседании

диссертационного совета Д 208.041.03 при ГБОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития России по адресу: ул. Долгоруковская д. 4. Почтовый адрес: 127473 г.Москва ул. Делегатская д. 20/1. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития России (127206, Москва, ул. Вучетича, д. 10а).

Автореферат разослан

2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета: доктор медицинских наук, профессор

Ю.А. Гиоева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Заболевания пародонта, особенно воспалительно-деструктивной формы, являются одной из наиболее актуальных проблем в современной стоматологии. Широкая распространенность, хронический характер течения, отсутствие досимптоматических методов диагностики и эффективных способов лечения деструктивных форм - все это требует глубокого изучения этиологии и патогенеза воспалительных заболеваний пародонта и разработки этиопатоге-нетического подхода к их своевременной диагностике и профилактике [Янушевич О.О., 2008; Jenkins W.M., Kinane D.F., 1989].

В современном мире наибольшую перспективу имеет медицина прогноза и молекулярной диагностики, которая на основе индивидуального строения генома человека и особенностей обменных процессов его организма может дать правильный прогноз в отношении возможного развития определенных болезней или патологических процессов [Баранов B.C., Баранова Е.В., 2000; Иващенко Т.Э., 2001].

Воспалительные заболевания пародонта, несомненно, имеют сложную мультифакториальную природу. Как известно, этиопатогенетическую основу таких заболеваний составляют функционально ослабленные варианты определенных генов (генов предрасположенности), повреждающий эффект которых реализуется на фоне действия неблагоприятных факторов внешней среды [Баранов B.C., 2010].

Данных о роли генетических факторов в этиологии воспалительных заболеваний пародонта в мировой литературе, особенно отечественной, крайне мало [Почтаренко В.А., 2005; Николаева E.H., 2007]. Что касается исследований, выполненных за рубежом, то они немногочисленны и противоречивы [Kornman K.S., 1997; Hodge P.J. et al. 1999; Yamazaki К., 2001; Craandijk L., 2002]. Во многих случаях сведения получены на негомогенных выборках без использования надежных клинических критериев диагностики данной патологии.

Поскольку состояние зубочелюстной системы тесно связано с общим статусом костной ткани организма, целесообразно проводить исследование генетической предрасположенности к воспалительно-деструктивным заболеваниям пародонта по изучению роли полиморфизма генов цитокинов как факторов, способствующих прогрессирующей деструкции костной ткани (гамма-интерферона (ШЧ-у), альфа- и бета-субъединиц интерлсйкина-1 (1Ь-1а и 1Ь-1р\ интерлейкинов 1Ь-4, 1Ь-6, 1Ь-10, 1Ь-18, фактора некроза опухолей ТЫРа), и гена лактазы (ЬСТ-13910) как фактора, связанного с метаболизмом кальция, в гомогенной по национальному и тендерному составу группе населения.

Цель исследования

Совершенствование доклинической диагностики и прогнозирования развития заболеваний пародонта на основе клинико-генетического исследования.

Задачи исследования

1. Установить особенности стоматологического статуса в этнически однородной выборке мужчин - бойцов отряда особого назначения.

2. Определить минеральную плотность костной ткани (МПКТ) периферического скелета в исследуемой группе.

3. Изучить распределение полиморфных вариантов генов цитокинов (ШИ-у, 1Ь-1а , 1Ь-1р, 1Ь-4, 1Ь-6, 1Ь-10, 1Ь-18, ТИР а) и гена лактазы в данной выборке.

4. Определить ассоциации изучаемых генных полиморфизмов с показателями стоматологического статуса и исследованной минеральной плотностью костной ткани (МПКТ).

5. На основе многофакторного анализа анамнестических, антропометрических, клинических, параклинических и генотипических данных выявить значимые факторы риска и разработать тест для индивидуального прогнозирования развития воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта.

Научная новизна

В работе установлены особенности стоматологического статуса и минеральной плотности костной ткани в гомогенной по национальному признаку выборке бойцов отряда особого назначения (ООН).

Впервые проведен комплексный молекулярно-генетический анализ полиморфизмов генов фактора некроза опухолей (ТАТ7«:), альфа- и бета-субъединиц интерлейкина-1 {1Ь-1а и 1Ь-1[Г), интерлейкинов И-4, 1Ь-6, И-10, 1Ь-18 у мужчин, страдающих воспалительно-деструктивными заболеваниями пародонта.

Уточнена взаимосвязь между полиморфными вариантами ряда генов (1Ь-б, 1Ь-1а, 1Ь-1р, 1Ь-10,1Ь-18, гена лактазы) и проявлениями воспалительно-деструктивных процессов в пародонте. Показана значимость этих генетических маркеров для доклинической диагностики и прогноза развития воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта.

Впервые на основе анализа анамнестических, антропометрических, клинических, параклинических и генотипических данных выявлены значимые факторы риска заболеваний пародонта у мужчин.

Практическая значимость

Определены генетические предикторы воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта - полиморфные аллели генов 1Ь-1а, 1Ь-1р, 1Ь-6 и лак-тазы. Также установлено, что у лиц, гомозиготных по аллелю А гена 1Ь-18 (-607) и носителей аллеля С гена 1Ь-10(-592) происходит более интенсивное образование зубного налета, что отражается на более высоком значении индекса ОШ-Б.

Доказана нецелесообразность использования 1РМС(+874), 1Ь-4(-590), ТКР(-308) генетического полиморфизма в качестве маркера развития паро-донтита.

Разработан тест индивидуального прогнозирования возникновения и развития воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта у мужчин.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Стоматологический статус этнически однородной выборки мужчин - бойцов отряда особого назначения (ООН) характеризуются высокой распространенностью кариеса (96,5%), заболеваний пародонта (92,1%), низким уровнем гигиены (49,9%), нарушений со стороны височно-нижнечелюстного сустава (ВНЧС) (до 40,7%). Явления остеопении наблюдали в 33,3% случаев, остеопороза - 9,1%.

2. Полиморфные аллели генов IL-la, IL-lfi, IL-6 и лактазы являются генетическими маркерами воспалительных заболеваний пародонта. В присутствии аллеля А гена IL- ip, эффект аллеля С гена IL-6 усиливается, влияя на тяжесть данной патологии. Гомозиготное носительство минорных аллелей у лиц с сочетанием генотипов А/А по сайту IL-1 [3-511 и С/С по сайту IL-6 —174 ассоциируется с тяжелым течением воспаления пародонта, а комбинация генотипов C/G и G/G оказывает «протективный» эффект. Лица с генотипом Т/Т по сайту LCT-13910 имеют больший риск развития заболевания, чем с генотипами С/С и С/Т.

3. На основании проведенного исследования и анализа полученных результатов показано, что генетический статус пациента с воспалительно-деструктивной формой патологии пародонта по IFNG, IL-4, TNF генам не оказывает влияния на особенности течения заболевания.

4. На основе многофакторного анализа анамнестических, антропометрических, клинических, параклинических и генотипических данных разработан метод индивидуального прогнозирования развития пародонтита у мужчин русской национальности в возрасте 20-49 лет.

Личное участие автора Автором лично осуществлено стоматологическое обследование 2957 бойцов ООН ГУ МВД России, определена МПКТ у 285 из них; разработана анкета, позволяющая установить этническую принадлежность; произведен сбор венозной крови с выделением ДНК, анализ материала, который сопровождался статистической обработкой полученных данных.

Апробация диссертации

Основные положения диссертации обсуждены и одобрены на IX и X научно-практических конференциях НИМСИ МГМСУ (Москва, 2009-2010), XXXII и XXXIII Итоговых конференциях молодых учёных МГМСУ (Москва, 2010-2011), VI съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 2010), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «медико-биологические аспекты мультифактори-альной патологии» (Курск2011), Фестивале Науки МГУ (Москва, 2011), совместном заседании кафедр стоматологии общей практики и подготовки зубных техников ФПДО; медицинской генетики; госпитальной ортопедической стоматологии; микробиологии, вирусологии и иммунологии 13.05.2011, протокол №35.

Внедрение результатов исследования

Результаты исследования внедрены в клиническую практику отделения профилактики стоматологических заболеваний стоматологической поликлиники ФПДО МГМСУ, стоматологического отделения медицинского отдела ЦСН ГУ МВД России по г. Москве, в учебный процесс интернов и ординаторов, слушателей ФПДО, научно-практические подразделения ГБОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития России.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 работ, из них 3 статьи в журналах из перечня ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 125 страницах машинописного текста, иллюстрирована 26 таблицами и 19 рисунками. Библиографический указатель содержит 136 источника, из них 60 отечественных и 76 иностранных публикаций.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Сбор материала для исследования осуществлялся в стоматологическом отделении медицинского отдела ЦСН ГУ МВД Росси по г. Москве (до 1 августа 2011г. - ОМОН ГУВД по г. Москве), являющемся клинической базой кафедры стоматологии общей практики и подготовки зубных техников ФПДО МГМСУ (2008 - 2011 гг.). Проведено стоматологическое обследование 2957 бойцов (табл. 1.).

Таблица 1.

Результаты обследования слизистой оболочки полости рта, околоушных слюнных _ желез, ВНЧС, мышц, языка, зубов__

Область поражения Характер поражения Количество человек

Абс. %

Слизистая оболочка рта Рецидивирующие афты полости рта (К12.0) 446 15,1

Болезни губ (К13.0) 715 24,2

Лейкоплакия и другие изменения эпителия полости рта, включая язык (К13.2) 20 0,7

Красный плоский лишай (1.43) 24 0,9

Эритема многоформная(Ь51) 4 0,2

ВНЧС Ассиметричное открывание рта 1115 37,7

Ограниченное открывание рта 213 7,2

Наличие внутрисуставных шумов 1205 40,7

Мышцы Болезненность при бимануальной пальпации

Жевательные 124 4,2

Височные 109 3,6

Двубрюшные (заднее брюшко) 122 4,1

Околоушные, подъязычные, поднижнечелюст-ные слюнные железы Гипертрофия (К 11.1) 662 22,4

Нарушения секреции (К11.7) 579 19,6

Язык Атрофия сосочков (К14.4) 724 24,5

Зубы Клиновидный дефект (К03.1) 434 14,7

Повышенное стирание (К03.0) 952 32,2

Потеря зубов вследствие несчастного случая, удаления или локальной периодонтальной болезни (К08.1) 2634 89,1

Наличие несъемных ортопедических конструкций 1217 41,1

Наличие съемных ортопедических конструкций 3 0,1

Необходимость в ортопедическом лечении 2115 71,5

Из жалоб чаще всего отмечались кровоточивость десны - у 1919 (64,9%) пациентов, запах изо рта - у 1132 (38,3%), болевые ощущения при пережевывании пищи и чистке зубов - у 867 (29,3%). Так же при сборе анамнеза выяснено, что 1516 (51,2%) пациентов по разным причинам чистят зубы только

один раз в день, 2720 (92,7%) не пользуются зубной нитью, из них 580 (21,3%) вообще никогда не слышали о дополнительных средствах гигиены.

Для исследования были отобраны лица мужского пола, русской национальности, подписавшие добровольное согласие на обследование и использование результатов для научных публикаций в специализированных изданиях. Так же у которых отсутствовало не более 4 зубов, включая третьи моляры, с интактными окклюзионными поверхностями зубов, без ортопедических конструкций, без патологии пародонта или с пародонтитом легкой (средней) степени тяжести, без соматической патологии или при её наличии в стадии компенсации. В исследование не включались лица с тяжелой степенью пародонтита, с нарушением окклюзионных взаимоотношений зубных рядов, с явлениями мышечно-суставной дисфункции, с разрушенными коронками зубов, с дефектами зубных рядов, с заболеваниями слизистой оболочки полости рта, с соматической патологией в стадии декомпенсации, а также отказавшиеся от участия в работе. Согласно данным критериям исследуемую выборку составили 285 мужчин в возрасте 20 - 49 лет. В 1-ю группу вошли пациенты без воспалительных заболеваний пародонта (201 чел), во 2-ю - с их наличием (84 чел).

Стоматологический статус оценивался по индексам: КПУ, ОШ-б, РМА, СР1Т1ч[, кровоточивости МиЬИешап (ИК), глубине пародонтального кармана (ГПК). Заболевания пародонта систематизировались с учетом международной статистической классификации болезней и проблем, связанных со здоровьем (МКБ-10).

МПКТ изучали при помощи аппарата ОТХ 200ВХАВ(ЖЕ [о51еоте1ег, Дания-США] с использованием рентгеновской двухфотонной абсорбцио-метрии дистального отдела предплечья. При уменьшении МПКТ от -1,0 до -2,5 от пиковой костной массы в соответствии с рекомендациями ВОЗ, констатировалась остеопения, при ее уменьшении более, чем на 2,5 80 по Т-критерию диагностировали остеопороз. Во время денситометрии фиксировали также антропометрические показатели (рост, массу тела).

Лабораторные исследования осуществлялись в Институте общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН в 2 этапа: выделение ДНК и проведение поли-меразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени. Выделение ДНК производилось сорбентным методом с помощью набора реагентов DiatomtmDNAPrep 200 (производитель - «Изоген», Москва).

Для статистического анализа результатов молекулярно-генетического тестирования и ассоциаций полиморфных вариантов изучаемых генов со стоматологическими признаками применялся непараметрический критерий Манна-Уитни. При оценке отношения шансов и значимости отличий частот по точному тесту Фишера использовался свободно распространяемый пакет программ WinPepi: http://www.brixtonhealth.com/pepi4windows.html [Abram-son J.H., 2004].

Анализ клинических, параклинических и молекулярно-генетических показателей, введенных в базу данных Microsoft Excel, проводили методом бинарной и многофакторной математической статистики [Сох D.R., 1981; Miller R.G., 1981; ArmitageP., Berry С., 1988].

Сравнение групп наблюдения друг с другом производили с помощью критерия Стьюдента, который дает ответ о достоверности различий сравниваемых групп в форме вероятности (р). Различия считали достоверными при значениях р<0,05 [УрбахВ.Ю., 1975].

При многофакторном анализе использовалась Байессовская процедура (пошаговый дискриминантный анализ) [Вапник В.Н., 1984]. Вычислялись коэффициенты информативности Вапника-Червоненкиса [Вапник В.Н., Черво-ненкис А.Я., 1974]. Сравнение групп наблюдения друг с другом производили с помощью непараметрических критериев достоверности различий (Хи-квадрат, точный критерий Фишера) [Гублер Е.В.,1978; Лакин Г.Ф., 1980; Сох D.R., 1981; Armitage P., Berry С., 1988]. Доверительные интервалы вычислялись с помощью биномиального распределения по методу Бонферрони (Учет "многократных сравнений") [Сох D.R., 1981; Miller R.G., 1981; Matthews D.E., 1988].

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Подавляющее большинство мужчин в выборке - 213 (74,7%) были в возрасте 20-29 лет и только 72 (25,3%) - старше 30 лет. Средний возраст отобранных пациентов составил 26±0,3 лет.

Распространенность кариеса составила 96,5% случаев. Распределение пациентов с учетом индекса ОШ-б представлено на рис. 1.

количество человек 120

100 80 60 40 20 0

115 ■И 1 [ 1 112 1

н-—- 2

3 4

\ 1 -1 49

уровни гигиены

Рис.1. Уровень гигиены с учетом индекса ОШ-в.

У 112 (34,7%) пациентов отмечен неудовлетворительный уровень гигиены полости рта, а у 49 (15,2%) - плохой. Возможно, эти показатели связаны с культурным и социально-профессиональным статусом обследованных.

Рис. 2 демонстрирует распространенность и интенсивность заболеваний пародонта по индексу СР1ПЧ[. % пациентов

КЗ

70 60 50 40 30 20 10 О

| 1 ниц

I |

~ >3 Ё'1| Г *

1 д |||||1||Р Щш? 1

Коды

Рис. 2. Распределение пациентов по результатам индекса СРПЧУ

Как видно, у 29,5% пациентов помимо кровоточивости (код 1), зубного камня (код 2) наблюдались такие признаки, как неглубокие пародонтальные

карманы (код 3) - 4 или 5 мм (край десны находится в черной области зонда или скрывается метка 3,5 мм) [Дмитриева Л.А., 2007]. Код 4 не использовали, так как пациенты с тяжелой степенью пародонтита не включались в исследование.

На рис. 3 отражены данные пародонтологического статуса пациентов с учетом возраста, которые свидетельствуют о том, что в младшей группе (20-29 лет) изначально превалировал гингивит (87%). Что же касается пациентов старших возрастных групп (30-49 лет), то у 97% из них преобладает хронический пародонтит.У лиц старше 40 лет распространенность заболеваний пародонта составляет 100%.

% пациентов................................................................................................................................. ............_............................

ЮО 87 86

80 1 j I

60 Fu 1

40 [fit; £ i 1

20 ИИ. Шй — Г' 1 2,9................................3. .1

20-29 ЗО-ЗЭ 40-49

■ гингивит : пародонтит Я без патологии

Рис. 3. Распределение пациентов с учётом возраста и пародонтологического статуса

Это согласуется с сообщениями других исследователей о высокой распространенности гингивита среди населения России. Согласно эпидемиологическим данным, именно он является наиболее часто встречающейся патологией в молодом возрасте [Сааг М.Х., 1991; Улитовский С.Б., 2000].

На следующем этапе оценивалась МПКТ. Отклонения от нормальных значений МПКТ зарегистрированы у 121 (42,4%) пациента: у 95 (33,3%) показатели соответствовали остеопении, а у 26 (9,1%) - остеопорозу.

Корреляционный анализ данных МПКТ, стоматологического статуса, возраста, массы тела и роста обследованных показал, что уменьшение МПКТ ассоциируется с повышенным риском развития воспалительных заболеваний пародонта, о чем свидетельствуют значимые корреляции между МПКТ, степенью воспаления десны и глубиной пародонтального кармана (табл. 2).

В результате анализа выявлена статистически значимая обратная корреляционная зависимость между уменьшением МПКТ и индексом РМА (г^—0,18 при р=0,001). Несколько более слабая, но также статистически достоверная зависимость установлена между уменьшением МПКТ и ГПК (г=-0,39; р=0,00004).

Таблица 2.

Результаты корреляционного анализа показателей стоматологического статуса, __ возраста, роста, масса тела и МПКТ ___

Признаки Возраст Рост Масса тела КПУ OHI-s РМА ГПК ИК МПКТ

Возраст 1,00 -0,08 0,25* 0,52* 0,09 0,16 0,22* 0,17 0,07

Рост 1,08 1,00 0,51* 0,10 -0,07 -0,04 -0,09 0,04 0,14*

Масса тела 0,0007 0,00004 1,00 0,17 -0,12 -0,07 -0,09 0,08 0,42*

КПУ 0,00004 2,52 0,36 1,00 0,13 0,27* 0,16* 0,18 0,04

OHI-s 11,6 9,36 1,44 0,36 1,00 0,54* 0,42* 0,44* -0,15*

РМА 0,36 9,72 7,2 0,00004 0,00004 1,00 0,45* 0,38* -0,18*

ГПК 0,009 3,96 2,88 0,09 0,00004 0,00004 1,00 0,21* -0,39*

ИК 1,44 15,12 12,96 1,44 0,01 0,001 0,0003 1,00 0,07

МПКТ 10,08 0,01 0,00004 17,28 0,02 0,001 0,00004 2,88 1,00

Примечание: * - обозначены статистически значимые значения. o,ooi- обозначен коэффициент р<0,05. До 0,2 очень слабая корреляция; 0,2-0,5 - слабая корреляция; 0,5-0,7 -средняя корреляция

Таким образом, можно сделать заключение, существует достоверная взаимосвязь между показателями сниженной МПКТ с параметрами, отражающими патологический процесс тканей пародонта (индекс РМА, глубина пародонтального кармана).

Основным направлением настоящего исследования был поиск генетических факторов, вовлеченных в формирование наследственной предрасположенности к воспалительно-деструктивным заболеваниям пародонта. В качестве генов-кандидатов были выбраны гены цитокинов и их полиморфные варианты, уровень которых меняется в зависимости от тяжести патологических процессов в тканях пародонта:

- IFN-y (+874), - IL-la (-889), - IL-lß (-511), - 1L-4 (-590),

- IL-6 (-174), - IL-10 (-592), - IL-18 (-607), - TNFa (-308).

Кроме того, проверялось влияние полиморфного варианта гена лактазы (LCT-13910) как фактора, участвующего в метаболизме кальция.

Получены данные, отражающие распределение генотипов и аллелей генов цитокинов в выборке, которые показывают, что для всех изученных од-нонуклеотидных полиморфизмов (SNP) частота аллелей соответствует равновесию Харди — Вайнберга, что свидетельствует об отсутствии отбора по этим видам полиморфизма. Ни по одному из исследованных локусов распределение частот полиморфных вариантов генов цитокинов не отличается от данных по европейским популяциям. Это имеет приоритетное значение и может служить основой сравнительного межпопуляционного анализа, который важен для оценки микроэволюционных процессов в популяциях, проживающих на территории нашей страны и в сопредельных государствах.

Связь полиморфизмов исследованных генов цитокинов с пародонтоло-гическим статусом носителей различных генотипов представлена в табл. 3.

Из табл. 3 видно, что из 8 полиморфных вариантов генов достоверные ассоциации со средними показателями стоматологических индексов обнаружены для IL-la(-889), IL-6(-174), IL-10(-592), IL-18(-607). Для остальных полиморфизмов IFNG(+874), И-Щ-5П), IL-4(-590), TNF(-308) ассоциаций не выявлено.

Расчеты для сайта IL-la(-889) позволили установить частоту аллелей С (69,8%) и 7" (30,2%). Риск развития заболевания пародонта с более тяжелой степенью воспаления десны (РМА >30) оказался повышенным у носителей мажорного аллеля С по сравнению с носителями генотипа Т/Т: OR=3.86 при р=0,026.

Полиморфизм гена IL-6(-l 74) изучен у 285 человек. Установлены частоты аллелей С (45,8%) и G (54,2%), а также получено распределение генотипов С/С, G/C, G/G. Достоверное повышение среднего значения индексов РМА, ИК и ГПК выявлено у носителей аллеля IL-6 -174С.

Таблица 3.

Средние значения пародонтологическнх индексов у пациентов с различными генотипами по 8 полиморфным сайтам _генов цнтокинов___

Генотипы Количество человек Стоматологические индексы (±SE) Эффект минорного аллеля

PMA ГПК ИК OHI-s

IFNG (+874) A/A 67 25±0,2 2,8±0,10 1,2±0,12 1,85±0,9 p>0,2 для всех показателей

T/A 127 22±0,1 2,7±0,06 1,3±0,15 1,74±0,7

T/T 87 24±0,4 2,6±0,07 1,8±0,16 1,78±0,7

IL-la (-889) c/c 140 26±0,1* 2,0±0,06 2,0±0,19* 1,72±0,6 Индекс РМА-1 рецессивный (р=0,026)

C/T 118 30±0,2* 2,0±0,07 2,1±0,16* 1,84±0,7

T/T 27 24±0,2* 1,6±0,11 1,4±0,18* 1,79±1,2

IL-lß (-511) A/A 29 26±0,3 2,9±0,11 1,7±0,12 1,77±1,2 Индекс PMAÎ рецессивный (р=0,157)

G/A 122 23±0,2 2,6±0,07 1,3±0,14 1,80±0,7

G/G 133 22±0,1 2,4±0,06 0,9±0,21 1,76±0,6

1L-4 (-590) C/C 171 24±0,1 2,3±0,06 1,4±0,17 1,79±0,5 р>0,5 для всех показателей

C/T 98 23±0,2 2,4±0,07 1,2±0,13 1,78±0,7

T/T 14 19±0,4 1,4±0,22 0,5±0,10 1,57±2,0

IL-6 (-174) C/C 61 31±0,2* 3,4±0,10* 2,8±0,19* 1,70±0,7 Индекс РМА доминантный (р=0,003) ГПК доминантный (р=0,008) Индекс кровоточивости доминантный (р=0,005)

G/C 139 29±0,1* 2,5±0,06* 1,6±0,13* 1,83±0,7

G/G 85 26±0,2* 2,i±0,08* 1,3±0,15* 1,74±0,8

IL-10 (-592) A/A 23 24±0,3 2,3±0,15 1,4±0,21 1,66±1,6* Индекс Offl-sJ. доминантный (р=0,043)

C/A 110 22±0,1 2,7±0,07 1,1±0,15 1,72±0,6*

C/C 152 24±0,1 2,9±0,06 1,3±0,17 1,84±0,6*

IL-18 (-607) C/C 85 26±0,2 2,2±0,08 0,9±0,12* 1,69±0,7* Индекс OHI-s рецессивный (р=0,022) Индекс РМА рецессивный (р=0,188) Индекс кровоточивостирецессивный (р=0,009)

A/C 140 22±0,1 2,1 ±0,06 1,0±0,14* 1,75±0,6*

A/A 57 28±0,2 2,5±0,09 2,1±0,16* 1,96±0,9*

TNF (-308) A/A 4 18±0,4 1,4±0,22 0,9±0,19 1,83±2,5 р>0,2 для всех показателей

G/A 68 26±0,2 1,8±0,08 1,1±0,21 1,84±0,9

G/G 212 24±0,3 1,7±0,05 1,0±0,18 1,76±0,5

Примечание:* - обозначены статистически значимые ассоциации

Интерес представляют результаты проверки влияния аллеля 1Ь-6-174С на ГПК в разных возрастных группах (рис. 4). ГПК

® _....................................................................................................................................................................................................................................................................................................Возраст

. ■ <30

G/G G/C С/С

Генотипы по сайту IL-S—174 G>C

Рис. 4. Средние значения (±SE) ГПК у носителей различных генотипов по IL6(-174) для двух возрастных групп (младше 30 лет - 215 человек; 30 и более лет - 70 человек)

Статистический анализ показал, что для каждой возрастной группы, также как и для суммарных значений, ассоциация аллеля IL-6-174С с увеличением ГПК по доминантной схеме является статистически значимой. Таким образом, достоверно установлено, что полиморфный аллель /Z-6-174C является генетическим маркером предрасположенности к развитию воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта.

Статистический анализ взаимосвязи между полиморфизмом IL-10(-592), индексом РМА, ИК и ГПК не показал. В тоже время, ассоциация этого полиморфизма с индексом OHI-s оказалась статистически значимой с доминантным эффектом минорного аллеля (р=0,043).

Данные по частотам полиморфизма гена IL-18(-607) получены при генотипировании 282 человек. Ассоциации полиморфизма IL-18{—6Q1) со стоматологическими индексами РМА и ГПК не выявлены. Вместе с тем, обнаружена достоверная ассоциация полиморфизма этого гена со средними величинами индекса OHI-s по рецессивному типу (р=0,022).

Значимые различия наблюдаются у индивидов с разными генотипами по полиморфизму IL-18-6070A. У носителей гомозиготного генотипа А/А индекс OHI-s составляет 1,96±0,09 против 1,73+0,05 у носителей аллеля С (различие значимо, (р=0,018) по тесту Манна-Уитни). Так как различия гигиени-

ческих навыков вряд ли можно связать с генотипом, можно предположить, что у индивидов, гомозиготных по аллелю А, происходит более интенсивное образование бляшек и зубного налета, что отражается на более высоком значении индекса OHI-s.

Таким образом, гены цитокинов, у которых установлена ассоциация с теми или иными признаками стоматологического статуса, нельзя отнести ни к главным генам, ни к генам с малыми эффектами. Полученные данные позволяют выдвинуть гипотезу о том, что природа выявленных ассоциаций состоит либо в действительном участии этих генов в патогенезе заболевания, либо в неравновесном сцеплении с другими генами, реально участвующими в нем. Для проверки этой гипотезы мы рассмотрели как эффекты отдельных генов, так и их совместное действие.

При изучении совместного действия IL-lß -511 и IL-6 -174 обнаружены значимые эффекты в виде ассоциации этих генов со средними значениями ГПК, отражающими тяжесть воспаления тканей пародонта. Наименьшие средние значения были характерны для двойных гомозигот по обоим сайтам. По мере увеличения числа минорных аллелей в генотипе по сайтам IL-lß -511 и IL-6 -174 ГПК заметно увеличивалась (рис. 5).

ГПК

4 Г

з -г 2 т' 1

О +■

0 12 3 4

Число минорных аллелей

Рис. 5. Средние значения (±8Е) ГПК в зависимости от числа минорных аллелей в сайтах 1Ь-1В(-511) и 1Ь-6(-174). На столбиках указано число лиц с данным генотипом.

На рис. 6 представлено распределение общего числа копий минорных аллелей в сайтах IL-1/3-511 и IL-6 -174 у пациентов в зависимости от средних значений глубины пародонтальных карманов.

Частота, %

50

40

30

20

10 I

о -К

о „ 1 2 3 „ 4

Число минорных аллелей Рис. 6. Распределение общего числа копий минорных аллелей в сайтах IL-1B(-511) и IL-6{-174) в зависимости от ГПК.

Видно, что носители хотя бы одного из минорных аллелей генов IL-ip -511 и IL-6-174 чаще встречаются среди индивидов с более тяжелой формой патологии. Риск развития заболевания (ГПК >3 мм) у гомозиготных носителей минорных аллелей (IL-1/3 -511А и IL-6 -174С) в сравнении с таковыми мажорных (IL-1/3-511G и IL-6-174G) характеризуется отношением шансов, равным OR=7,63 при р=0,0009. Доля гомозиготных носителей минорных аллелей (с сочетанием генотипов А/А по сайту IL-lfi-511 и С/С по сайту IL-6-174, ассоциирующимся с более тяжелым течением воспаления па-родонта) составила 1,1%, а доля лиц с «протективным» сочетанием G/G и G/G по тем же сайтам - 11,3% пациентов. О неслучайности выявленной ассоциации свидетельствует нарастание эффекта при увеличении числа минорных аллелей.

Распределение полиморфного варианта гена лактазы (LCT-13910) с учетом показателей стоматологического статуса представлено в табл. 4. У носи-

телей генотипа Т/Т средние значения индекса РМА, ИК и ГПК выше, чем у носителей С/С, С/Т.

Таблица 4.

Распределение генотипов по полиморфизму ЬСТ-13910, с учетом показателей стоматологического статуса

Генотипы по LCT-13910 Число обследованных, п РМА OHI-s ГПК ИК

С/С 110 21,65±0,15 1,38±0,64 2,73±0,67 1,2±0,12

С/Т 125 23,29±0,16 1,57±0,76 2,75±0,68 1,3±0,15

Т/Т 41 26,72±0,19 1,54±0,73 4,96±0,84 1,8±0,16

Эти данные позволяют предположить, что носители генотипа Т/Т имеют больший риск развития воспалительных заболеваний пародонта, чем носители С/С и Т/Т. Корреляционный анализ между полиморфизмом LCT-13910 и средними значениями индексов PMA, OHI-s, ИК и ГПК подтвердил достоверную положительную корреляцию между полиморфным аллелем LCT С13910Ти ГПК (г=0,52 при р=0,03).

Завершающим этапом настоящего исследования был многофакторный анализ анамнестических, антропометрических, клинических, параклинических и генотипических данных о пациентах исследуемой выборки в целях идентификации факторов воспалительных заболеваний пародонта и разработки метода их прогнозирования у русских мужчин в возрасте 20-49 лет. Для этого пациентов разделили на две группы: контрольную (201 чел) -без патологии пародонта и основную (84 чел) - с хроническим генерализованным пародонтитом. Многофакторный анализ 22 первично тестируемых признаков позволил выявить 12 наиболее информативных и на основе их совокупности разработать прогностический тест для определения степени риска развития воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта.

Прогностический тест имеет вид таблицы, в которой перечислены признаки и их значимость (коэффициенты) (табл. 5).

Для выяснения риска развития воспалительных заболеваний пародонта у мужчины русской национальности в возрасте 20-49 лет следует провести

тестирование (см. табл. 5) и суммировать соответствующие значения коэффициентов.

Таблица 5.

Прогностический тест (решающее правило) для определения индивидуального прогноза развития пародонтита (фрагмент)

Признаки Градации признаков Коэффициенты

Возраст (годы) 20-29 21

30-39 11

40-49 -45

Уровень гигиены полости рта Хороший 157

Удовлетворительный 113

Неудовлетворительный -83

Очень плохой 27

Минеральная плотность костной ткани норма 44

остеопения -55

остеопороз -134

Генотип по ЬСТ-13910 С/Т 24

С/С -б

Т/Т -47

Генотип по 11-1 а (-889) С/Т 9

С/С -25

т/т 87

Генотип по И-6-13910 с/с -28

с/в -22

с/с 71

Сумма со знаком «-» означает повышенный риск развития пародонтита, причем, чем она больше, тем выше риск возникновения воспалительно-деструктивного процесса. Испытание теста на экзаменационной выборке пациентов продемонстрировало его характеристики: чувствительность составила 86,6%, специфичность - 70,4%, точность - 81,9%. Эти высокие качества позволяют рекомендовать его использование в стоматологической практике.

выводы

1. Особенностями стоматологического статуса этнически однородной выборки мужчин-бойцов отряда особого назначения (ООН) являются очень высокая распространенность кариеса (96,5%), воспалительных заболеваний пародонта (92,1%). У лиц в возрасте 20-29 лет превалирует хронический гингивит (76%), в возрасте 30-49 лет - хронический пародонтит (96%). Каждый третий боец имеет нарушения со стороны височно-нижнечелюстного сустава (ВНЧС): ассиметричное открывание рта (37,7%), наличие внутрисуставных шумов (40,7%).

2. Выявлены достоверные слабые корреляционные связи индекса OHI-s с КПУ (г=0,13), ИК (г=0,44), ГПК (г=0,42) и средняякорреляционная связь с РМА (г=0,54), что указывает на роль неудовлетворительной гигиены, как одного из основных факторов риска возникновения заболеваний пародонта.

3. У 42,4% обследованных выявлено явление уменьшение минеральной плотности костной ткани (МПКТ): у 33,3% соответствующее остеопении, у 9,1% - остеопорозу. У пациентов с нормальной и сниженной МПКТ в анамнезе зарегистрированы переломы (46,6%) и трещины (20,8%) костей. Установлена обратная взаимосвязь между уменьшением минеральной плотности костной ткани (МПКТ) и индексами, отражающими патологический процесс в тканях пародонта: индекс РМА (г=-0,18), ГПК (г=-0,39).

4. Установлено, что полиморфные аллели IL-1а -889С, IL-6 -174С и LCT С139 ЮТ являются генетическими предикторами воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта. Определено, что у индивидов, гомозиготных по аллелю А гена IL-18, происходит более интенсивное образование зубного налета, что отражается на более высоком значении индекса OHI-s.

5. Обнаружен феномен совместного влияния генов IL-1B-511 и IL-6-174 на тяжесть данной патологии, в присутствии аллеля IL-1B-511A эффект алле-ля IL-6-174С усиливается. Достоверно установлено, что гомозиготное но-сительство минорных аллелей у лиц с сочетанием генотипов А/А по сайту 1L-1B-511 и С/С по сайту 1L-6-174 ассоциируется с тяжелым течением па-

родонтита, а комбинация генотипов C/G и G/G дает «протективный» эффект.

6. Определено, что полиморфизм генов IFNG, IL-4, TNF не оказывает влияния на особенности течения заболеваний пародонта воспалительно-деструктивной формы.

7. В результате многофакторного анализа разработан прогностический тест, позволяющий по совокупности значимых генетических, анамнестических и клинических признаков определить прогноз развития пародонтита у мужчин, страдающих гингивитом. Чувствительность прогностического теста составляет 86,6%, специфичность - 70,4%, точность - 81,9%, что дает основание рекомендовать его использование в стоматологической практике.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Лиц, находящихся на военной службе в отряде особого назначения (ООН) необходимо мотивировать на стоматологическое здоровье, организовывать лекции по профилактике стоматологических заболеваний, проводить мониторинг выполнения назначенного врачом лечения, а также профилактические осмотры каждые 3 месяца.

2. При определении генетических маркеров развития пародонтита рекомендовано использовать гены цитокинов IL-la, IL-lß, IL-6 и ген лактазы.

3. Для определения индивидуального прогноза развития пародонтита у мужчин рекомендуется использовать прогностический тест, отражающий анамнестический, генотипический, клинический и параклинический статусы.

4. Лицам, поступающим на военную службу (не зависимо от структуры и подразделения), необходимо проводить генетическое исследование для выявления маркеров предрасположенности к заболеваниям тканей пародонта, для предупреждения инвалидизации лиц группы риска.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ 1. Арутюнов С.Д., Сафонова A.B., Петрин А.Н., Акуленко Л.В., Борин-ская С.А. Генетический факторы предрасположенности к пародонтиту. // Стоматолог. - М., - 2009. - № 4,- С. 32-37.

2. Сафонова A.B., Боринская С.А., Петрин А.Н., Акуленко JI.B., Янковский Н.К. Исследование носительства генотипа С С по полиморфизму С/Т-13910 в регуляторном участке гена лактазы LCT как фактор риска развития остеопороза в российских популяциях. // Сб. трудов НИМСИ «От науки - к практике. Новые технологии в медицине»,- М., - 2009. -С. 176.

3. Сафонова A.B., Петрин А.Н., Арутюнов С.Д., Акуленко Л.В. Клинико-генетические ассоциации предрасположенности к пародонтиту, остео-пении и остеопорозу. // Сборник трудов НИМСИ «От науки - к практике. Новые технологии в медицине».- М., - 2009. - С. 177.

4. Акуленко JI.B., Петрин А.Н., Боринская С.А., Сафонова A.B. Генетические факторы предрасположенности к остеопорозу. // Российский медицинский журнал. - М., - 2010. - № 2 — С. 53-56.

5. Сафонова A.B. Медико-генетическое исследование полиморфизмагена лактазы, как фактор риска развития остеопороза и заболеваний паро-донта у русского населения. // Труды XXXII Итоговой конференции Молодых учёных - М., - 2010. - С. 356-357.

6. Сафонова A.B., Петрин А.Н., Акуленко JI.B., Арутюнов С.Д., Боринская С.А., Янковский Н.К., Ребриков Д.В., Богомазов Е.А., Захарова О.М., Ильяшенко Л.Д., Угаров И.В. Полиморфизм гена лактазы как фактор риска развития остеопороза и заболеваний пародонта. // Материалы VI съезда Российского общества медицинских генетиков. Ростов-на-Дону, - 2010. - С.160.

7. Сафонова А.В.,УгаровИ.Н., Петрин А.Н., Акуленко Л.В. Корреляционный анализклинических и денситометрических показателей для оценки риска развития заболеваний пародонта. // Российский стоматологический журнал. - М., -2010. -№ 6. - С. 32-35.

8. Сафонова A.B., ПетринА.Н., Арутюнов С.Д., Царев В.Н., Акуленко Л.В., Зорина O.A., Ребриков Д.В., Рубанович A.B., Боринская С.А., Янковский Н.К. Ассоциация генов цитокинов с заболеваниями пародонта у человека. // Actanature. - М., - 2010. - Т. 3. - № 1(8).-С. 123-129.

9. Сафонова A.B. Генетическая компонента при заболеваниях тканей па-родонта. // Сборник трудов XXXIII Итоговой конференции молодых учёных МГМСУ. - М., - 2011. - С. 356.

10. Петрин А.Н., Царев В.Н., Акуленко JI.B., Сафонова A.B., Тарлычева JI.B., Боринская С.А., Рубанович A.B., Янковский Н.К. Молекулярно-генетические технологии в диагностике пародонтита. // Инновационные технологии в генетике и детской эпилептологии. Сборник научных трудов по материалам I Международного российско-американского симпозиума. - М. - 2011. - С. 132-142.

11. Сафонова A.B. Полиморфизм генов цитокинов в этиологии заболеваний пародонта. // Сборник трудов XXXIII Итоговой конференции молодых учёных МГМСУ. - М., - 2011. - С. 357.

12. Царёв В.Н., Николаева E.H., Петрин А.Н., Арутюнов С.Д., Акуленко JI.B., Сафонова A.B., Боринская С.А., Ребриков Д.В., Рубанович A.B., Янковский Н.К. Аллельный профиль цитокинов у мужчин с гингивитом и здоровым пародонтом. // Стоматолог. - М., -№ 1.-2011.-С. 56-61.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота МПКТ - минеральная плотность костной ткани МФЗ - мультифакториальные заболевания ПЦР - полимеразная цепная реакция ЦСН - центр специального назначения IL - интерлейкин IFN-y - гамма-интерферон LCT - лактаза

TNF-a - фактор некроза опухоли альфа, провоспалительный цитокин Т/Т, С/Т, С/С, AJA, С/А, G/G, G/A, А/Т, G/C - возможные варианты генотипов различных генов.

Отпечатано в РИО МГМСУ 127473, г. Москва, ул. Делегатская, д. 20, стр. 1. Заказ № 1048. Тираж 100 экз.

Заболевания пародонта, особенно воспалительно-деструктивной формы, являются одной из наиболее актуальных проблем в современной стоматологии. Широкая распространенность, хронический характер течения, отсутствие досимптоматических методов диагностики и. эффективных способов лечения деструктивных форм — все это требует глубокого изучения этиологии и патогенеза воспалительных заболеваний пародонта и разработки этиопатогенетического подхода к их своевременной диагностике и профилактике [Янушевич О.О., 2008; Jenkins W.M., Kinane D.F., 1989].

В современном мире наибольшую перспективу имеет медицина^ прогноза и молекулярной диагностики; которая-на основе индивидуального строения генома, человека и, особенностей, обменных процессов его организма может дать правильный, прогноз в отношении возможного развития определенных болезней' или; патологических процессов [Баранов B.C., Баранова Е.В., 2000; ИващенкоТ.Э., 2001].

Воспалительные заболевания пародонта, несомненно; имеют сложную мультифакториальную природу. Как известно; этиопатогенетическую основу, таких заболеваний составляют функционально ослабленные варианты определенных генов (генов, предрасположенности), повреждающий эффект которых реализуется на фоне действия неблагоприятных факторов внешней среды.[Баранов B.C., 2010].

Данных о роли генетических факторов в этиологии» воспалительных заболеваний пародонта в мировой литературе, особенно отечественной, крайне мало [Почтаренко В.А., 2005; Николаева E.H., 2007]. Что касается исследований, выполненных за рубежом, то они немногочисленны и противоречивы [Kornman K.S., 1997; Hodge P.J. et al. 1999; Yamazaki К., 2001; Craandijk L., 2002]. Во многих случаях сведения получены на негомогенных выборках без использования надежных клинических критериев диагностики данной патологии.

Поскольку состояние зубочелюстной системы тесно связано с общим статусом костной ткани организма, целесообразно проводить исследование генетической предрасположенности к воспалительно-деструктивным заболеваниям пародонта по изучению роли полиморфизма генов цитокинов как факторов, способствующих прогрессирующей деструкции костной ткани (гамма-интерферона (IТЫ-у), альфа- и бета-субъединиц интерлейкина-1 {1Ь-1а и 1Ь-1/3), интерлейкинов 1Ь-4, 1Ь-б, 1Ь-10, 1Ь-18, фактора некроза опухолей 7М^а), и гена лактазы (X СТ-13910) как фактора, связанного с метаболизмом кальция, в гомогенной по национальному и тендерному составу группе населения.

Цель исследования

Совершенствование доклинической диагностики и прогнозирования развития заболеваний пародонта на основе клинико-генетического исследования.

Задачи исследования

1. Установить особенности стоматологическогостатуса в этнически однородной выборке мужчин - бойцов отряда особого назначения.

2. Определить минеральную плотность костной ткани (МПКТ) периферического скелета в исследуемой группе.

3. Изучить распределение полиморфных вариантов генов цитокинов (1ПЧ-у, 1Ь-1а , 1Ь-1р, 1Ь-4, 1Ь-6, 1Ь-10, 1Ь-18, ТИГа) и гена- лактазы в данной выборке.

4. Определить ассоциации изучаемых генных полиморфизмов с показателями стоматологического статуса и исследованной минеральной плотностью костной ткани (МПКТ).

5. На основе многофакторного анализа анамнестических, антропометрических, клинических, параклинических и генотипических данных выявить значимые факторы риска и разработать тест для индивидуального прогнозирования развития воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта.

Научная новизна В работе установлены особенности стоматологического статуса и минеральной плотности костной ткани в гомогенной по национальному признаку выборке бойцов отряда особого назначения (ООН).

Впервые проведен комплексный молекулярно-генетический анализ полиморфизмов генов фактора некроза опухолей- (.ШРа), альфа- и бета-субъединиц интерлейкина-1 (.1Ь-1а и 1Ь-1Р), интерлейкинов 1Ь-4, 1Ь-6, 1Ь-10; 1Ь-18 у мужчин, страдающих воспалительно-деструктивными заболеваниями пародонта.

Уточнена взаимосвязь между полиморфными вариантами ряда генов (1Ь-6, 1Ь-1а, 1Ь-1[11Ь-10,1Ь-18, гена лактазы) и проявлениями воспалительно-деструктивных процессов в пародонте. Показана значимость этих генетических маркеров для доклинической диагностики и1 прогноза развития воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта.

Впервые на. основе анализа анамнестических, антропометрических, клинических, параклинических и генотипических данных выявлены значимые факторы риска заболеваний пародонта у мужчин.

Практическая значимость Определены генетические предикторы воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта - полиморфные аллели генов 1Ь-1а, 1Ь-1р, 1Ь-6 и лактазы. Также установлено, что у лиц, гомозиготных по аллелю А гена 1Ь-18(-607) и носителей аллеля С гена 1Ь-10(-592)происходит более интенсивное образование зубного налета, что отражается на более высоком значении индекса ОН1-5.

Доказана нецелесообразность использования IFNG(+874), IL-4(—590), TNF(—308) генетического полиморфизма в качестве маркера развития пародонтита.

Разработан тест индивидуального прогнозирования возникновения и развития воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта у мужчин.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Стоматологический статус этнически однородной выборки мужчин — бойцов отряда особого назначения (ООН) характеризуются высокой распространенностью кариеса (96,5%), заболеваний пародонта (92,1%); низким уровнем гигиены (49,9%), нарушений со стороны височно-нижнечелюстного сустава (ВНЧС) (до 40,7%). Явления остеопении наблюдали в 33,3% случаев, остеопороза- 9,1%.

2. Полиморфные аллели генов IL-la, IL-lß, IL-6 и лактазы являются генетическими1 маркерами воспалительных заболеваний пародонта. В присутствии аллеля А гена IL-lß, эффект аллеля С гена IL-6 усиливается, влияя- на тяжесть данной патологии. Гомозиготное носительство минорных аллелей у лиц с сочетанием генотипов А/А по сайту IL-lß —511 и С/С по сайту IL-6 —174 ассоциируется с тяжелым течением воспаления пародонта, а комбинация генотипов C/G и G/G оказывает «протективный» эффект. Лица с генотипом Т/Т по сайту LCT—13910 имеют больший! риск развития-заболевания, чем с генотипами С/С и С/Т.

3. На основании проведенного исследования и анализа полученных результатов показано, что генетический статус пациента с воспалительно-деструктивной формой патологии пародонта по IFNG, IL-4, TNF генам не оказывает влияния на особенности течения заболевания.

4. На основе многофакторного анализа анамнестических, антропометрических, клинических, параклинических и генотипических данных разработан метод индивидуального прогнозирования развития пародонтита у мужчин русской национальности в возрасте 20—49 лет.

Личное участие автора

Автором лично осуществлено стоматологическое обследование 2957 бойцов ООН ГУ МВД России, определена МПКТ у 285 из них; разработана анкета, позволяющая установить этническую принадлежность; произведен^ сбор венозной крови с выделением ДНК, анализ материала, который сопровождался статистической обработкой полученных данных.

Апробация диссертации

Основные положения диссертации обсуждены и одобрены на IX и X научно-практических конференциях НИМОИ МГМСУ (Москва, 2009-2010 гг.), XXXII и XXXIII Итоговых конференциях молодых учёных МГМСУ (Москва;. 2010-2011гг.), VI съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 2010 т.); П1 Всероссийской научно-практической конференции с международным? участием «медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (Курск2011г.), Фестивале Науки МГУ (Москва, 2011г.), совместном заседании* кафедр стоматологии' общей? практики? и подготовки зубных техников ФПДО; медицинской генетики;: госпитальной; ортопедической. стоматологии; микробиологии, вирусологии и иммунологии 13.05.2011 г., протокол №35.

Внедрение результатов исследования, Результаты исследования внедрены в клиническую практику отделения; профилактики; стоматологических заболеваний стоматологической поликлиники ФПДО МГМСУ, стоматологического отделения медицинского отдела' ООН ГУ МВД России по г. Москве, в учебный процесс интернов и ординаторов, слушателей ФПДО, научно-практические подразделения ГБОУ ВПО МГМСУ Минздравсоцразвития России.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 работ, из них 3 статьи в журналах из перечня ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 125 страницах машинописного текста, иллюстрирована 26 таблицами и 19 рисунками. Библиографический указатель содержит 136 источников, из них 60 отечественных и 76 иностранных публикаций.

выводы

1. Особенностями стоматологического статуса этнически однородной выборки мужчин-бойцов отряда особого назначения (ООН) являются очень высокая распространенность кариеса (96,5%), воспалительных заболеваний пародонта (92,1%). У лиц в возрасте 20-29 лет превалирует хронический гингивит (76%), в возрасте 30-49 лет — хронический пародонтит (96%). Каждый третий боец имеет нарушения со стороны височно-нижнечелюстного сустава (ВНЧС): ассиметричное открывание рта (37,7%), наличие внутрисуставных шумов (40,7%).

2. Выявлены достоверные слабые корреляционные связи индекса OHI-s с КПУ (г=0,13), ИК (г=0,44), ГПК (г=0,42) и средняя корреляционная связь с РМА (г=0,54), что указывает на роль неудовлетворительной гигиены, как одного из основных факторов риска возникновения заболеваний пародонта.

3. У 42,4% обследованных выявлено явление уменьшение минеральной плотности костной ткани (МПКТ): у 33,3% соответствующее остеопении, у 9,1% - остеопорозу. У пациентов с нормальной, и сниженной МПКТ в анамнезе зарегистрированы переломы» (46,6%) и трещины (20,8%) костей. Установлена' обратная взаимосвязь между уменьшением минеральной плотности костной ткани (МПКТ) и индексами, отражающими патологический процесс в тканях пародонта: индекс РМА (г= —0,18), ГПК г= -0,39).

4. Установлено, что полиморфные аллели IL-la-889C, IL-6-174C и LCT Cl 39 ЮТ являются генетическими предикторами воспалительно-деструктивных заболеваний пародонта. Определено, что у индивидов, гомозиготных по аллелю А гена IL-18, происходит более интенсивное образование зубного налета, что отражается на более высоком значении индекса OHI-s.

5. Обнаружен феномен совместного влияния генов IL-1B—511 и IL-6-174 на тяжесть данной патологии, в присутствии аллеля IL-1B-511A эффект аллеля IL-6-174С усиливается. Достоверно установлено, что гомозиготное носительство минорных аллелей у лиц с сочетанием генотипов А/А по сайту IL-1B-511 и С/С по сайту IL-6—174 ассоциируется с тяжелым течением пародонтита, а комбинация генотипов C/G и G/G дает «протективный» эффект.

6. Определено, что полиморфизм генов IFNG, IL-4, TNF не оказывает влияния на особенности течения заболеваний пародонта воспалительно-деструктивной формы.

7. В результате многофакторного анализа разработан прогностический тест, позволяющий по совокупности значимых генетических, анамнестических и клинических признаков определить прогноз развития пародонтита у мужчин, страдающих гингивитом. Чувствительность прогностического теста составляет 86,6%, специфичность - 70,4%, точность - 81,9%, что дает основание рекомендовать его использование в стоматологической практике.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Лиц, находящихся на военной службе в отряде особого назначения (ООН) необходимо мотивировать на стоматологическое здоровье, организовывать лекции по профилактике стоматологических заболеваний, проводить мониторинг выполнения назначенного врачом лечения, а также профилактические осмотры каждые 3 месяца.

2. При определении генетических маркеров развития пародонтита рекомендовано использовать гены цитокинов IL-la, IL-lß, IL-6 и ген лактазы.

3. Для определения индивидуального прогноза развития пародонтита у мужчин рекомендуется использовать прогностический тест, отражающий анамнестический, генотипический, клинический и параклинический статусы.

4. Лицам, поступающим на военную службу (не зависимо от структуры и подразделения), необходимо проводить генетическое исследование для выявления маркеров предрасположенности к заболеваниям тканей пародонта, для предупреждения инвалидизации лиц группы риска.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Арутюнов С.Д., Сафонова A.B., Петрин А.Н., Акуленко Л.В., Боринская С.А. Генетический факторы предрасположенности к пародонтиту. // Стоматолог. - М., - 2009.' - № 4 - С. 32-37.

2. Сафонова A.B., Боринская С.А., Петрин А.Н., Акуленко Л.В., Янковский Н.К. Исследование носительства генотипа СС по полиморфизму С/Т-13910 в регуляторном участке гена лактазы LCT как фактор риска развития остеопороза в российских популяциях. // Сборник трудов НИМСИ «От науки - к практике. Новые технологии в медицине».- М. - 2009. - С. 176.

3. Сафонова A.B., Петрин А.Н., Арутюнов С.Д., Акуленко JI.B. Клиннко-генетические ассоциации предрасположенности к пародонтиту, остеопении и остеопорозу. // Сборник трудов НИМСИ «От науки - к практике. Новые технологии в медицине».— М., — 2009. — С. 177.

4. Акуленко Л.В., Петрин А.Н., Боринская С.А., Сафонова A.B. Генетические факторы предрасположенности к остеопорозу. // Российский медицинский журнал. - М., — 2010. — № 2 — С. 53-56.

5: Сафонова A.B. Медико-генетическое исследование полиморфизма гена лактазы, как фактор риска развития остеопороза и заболеваний парод онта у русского населения. // Труды XXXII Итоговой конференции Молодых учёных - М., - 2010. - С.356-357.

6. Сафонова' A.B., Петрин А.Н., Акуленко JI.B:, Арутюнов С.Д., Боринская С.А., Янковский Н.К., Ребриков: Д:В., Богомазов Е.А., Захарова О.М., Ильяшенко Л:Д., Угаров И:В;. Полиморфизм гена лактазы как фактор риска развития остеопороза^ и заболеваний пародонта. // Материалы VI съезда Российского общества медицинских генетиков. Ростов-на-Дону.- 2010. — С. 160.

7. Сафонова А.В1, Угаров- И.Н., Петрин А.Н:, Акуленко. Л.В. Корреляционный анализ клинических и денситометрических показателей для оценки риска развития заболеваний пародонта. // Российский стоматологический журнал. - М1, — 2010. — № 6. - С. 3235:

8. Сафонова A.B., Петрин А.Н.,, Арутюнов С.Д., Царев В.Н:, Акуленко Л. В. , Зорина О. А., Ребриков.Д. В., Рубанович А. В., Боринская С. А., Янковский Н. К. Ассоциация генов цитокинов с заболеваниями пародонта у человека. // Actanature. - М., - 2010. - Т. 3.- № 1(8).-С. 123-129.

9. Сафонова A.B. Генетическая компонента при заболеваниях тканей пародонта. // Сборник трудов ХХХШ Итоговой конференции молодых учёных МГМСУ. - М., - 2011. - С. 356.

10. Петрин А.Н., Царев В.Н., Акуленко JI.B., Сафонова A.B., Тарлычева JI.B., Боринская С.А., Рубанович A.B., Янковский Н.К. Молекулярно-генетические технологии в диагностике пародонтита. // Инновационные технологии в генетике и детской эпилептологии. Сборник научных трудов по материалам I Международного российско-американского симпозиума. — М. - 2011. — С. 132-142.

П.Сафонова A.B. Полиморфизм генов цитокинов в этиологии заболеваний пародонта. // Сборник трудов XXXIII Итоговой конференции молодых учёных МГМСУ. - М., - 2011. - С. 357.

12. Царёв В.Н., Николаева E.H., Петрин А.Н., Арутюнов С.Д., Акуленко Л.В., Сафонова A.B., Боринская С.А., Ребриков Д.В., Рубанович A.B., Янковский Н.К. Аллельный профиль цитокинов у мужчин с гингивитом и здоровым пародонтом. // Стоматолог. — М., -№ 1.-2011.-С. 56-61.