Автореферат и диссертация по медицине (14.00.32) на тему:Клинико-экспериментальное обоснование разработки тест-систем выявления стрессзависимых маркеров для изучения механизмов адаптации организма в экстремальных ситуациях
- Ученая степень
- доктора биологических наук
- ВАК РФ
- 14.00.32
Оглавление диссертации Виха, Галина Васильевна :: 2002 :: Москва
Список сокращений
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.
ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1. Характеристика основных микробиоценозов организма человека.
2. Дисбактериоз.20.
3. Роль микробиоценоза в канцерогенезе.
4. Некоторые структурные характеристики пристеночной зоны толстого кишечника.
5. Диагностически значимые маркеры слизистых покровов.
6. Система местного иммунитета.
6.1. Секреторный иммуноглобулинА (slgA).
6.2. Структура IgA.
6.3. Протеолитическое расщепление подклассов IgA.
6.4. Синтез IgA и slgA.
6.5. Содержание подклассов IgA в сыворотке и секретах.
ЧАСТЬ II. РЕЗУЛЬТАТЫ
Глава 1. Материалы и методы исследований.
Материалы.
Методы исследований.
Глава 2. Иммунологические и микробиологические исследования изменений слизистых покровов толстого кишечника в условиях стресса.
2.1. Влияние стрессорных факторов на уровнь slgA в копрофильтратах обезьян.
2.2. Исследование микрофлоры и уровня slgA в копрофильтратах человека.
2.2.1. Исследование микрофлоры и уровня slgA в копрофильтратах космонавтов в условиях предполетной подготовки и послеполетной реабилитации.
2.2.2. Изучение влияния производственных факторов на уровни slgA в копрофильтратах человека.
2.3. Исследование slgA в смывах со слизистой оболочки луковицы двенадцатиперстной кишки.
2.4. Исследование влияния профилактики и лечения дисбактериоза пробиотиками и пробиотиком на уровень slgA
2.4.1. Изучение влияния пребиотика адаптохит на уровень slgA в копрофильтратах обезьян в условиях хирургического стресса.
2.4.2. Исследование влияния пробиотиков бифидобак-терина и лактобактерина на уровень slgA при бактериотерапии.
Глава 3. Разработка тест-системы для количественного иммунофер-ментного определения секреторного IgA в копрофильтратах и брон-хоальвеолярных смывах.
3.1. Создание гибридомы-продуцента МКА к slgA человека (ПБМТ-IgA).
3.2. Выделение и очистка МКА к slgA
3.3. Разработка иммуноферментной тест-системы для количественного определения slgA в копрофильтратах, бронхоальвеолярных смывах.
Глава 4. Разработка тест-систем для выявления эпителиального муцинового антигена.
4.1. Выделение и очистка МКА ИКО- 25.
4.2. Иммуногистохимическая характеристика МКА
4.3. Выделение и характеристика эпителиального муцинового антигена CAg25 из секрета молочной железы.
4.3.1. Выделение мембран жировых глобул (МЖГ) из женского молока.
4.3.2.Получение аффинного сорбента.
4.3.3.Очистка эпителиального муцинового антигена CAg25.
4.3.4. Молекулярные свойства эпителиального муцинового антигена CAg25.
4.3.5. Структурные характеристики эпителиального муцинового антигена CAg25.
4.4. Разработка тест-системы для количественного иммуноферментного определения эпителиального муцинового антигена CAg25.
4.5. Разработка тест-системы для выявления опухолей эпителиального генеза по анализу цельной крови.
4.5.1. Методика качественного теста для выявления эпителиального муцинового антигена CAg25 в цельной крови.
Глава 5. Исследование эффективности тест-систем для выявления эпителиального опухолевого маркера CAg25.
5.1. Клиническое сравнительное исследование количественной иммуноферментной тест-системы для выявления эпителиального муцинового антигена CAg25 и коммерческих наборов реагентов СА15-3, СА125 и СБА фирмы Roche.
Глава 6. Исследование уровня slgA и эпителиального опухолевого маркера CAg25 в бронхоальвеолярных смывах лиц с заболеваниями бронхолегочной системы.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Иммунологические и микробиологические исследования изменений эпителия слизистой кишечника в условиях стресса.
1.1. Влияние стрессорных факторов на уровень slgA в фекалиях обезьян.
1.2. Исследование уровня slgA у космонавтов в условиях предполетной подготовки и после космического полета.
1.3. Изучение влияния производственных факторов на уровень slgA и микрофлору толстого кишечника человека.
1.4. Сопряженность микроэкологической системы и системы местного иммунитета у человека и животных.
1.5. Исследование влияния профилактики и лечения дисбактериоза пробиотиками и пребиотиком на уровень slgA.
1.6. Иммуноферментная тест-система количественного определения slgA в секретах.
2. Разработка тест-системы для выявления эпителиального муцинового антигена CAg25 в сыворотке, цельной крови и бронхоальвеолярных смывах.
3. Результаты проведения клинических испытаний тест-систем для выявления эпителиального муцинового антигена CAg25.
4. Исследование уровня slgA и эпителиального муцинового антигена CAg25 в БАС лиц с заболеваниями бронхолегочной системы.
Введение диссертации по теме "Авиационная, космическая и морская медицина", Виха, Галина Васильевна, автореферат
Актуальность проблемы. Экологическое неблагополучие, возрастание стрессорных воздействий, массовое бесконтрольное применение антибиотиков и химиотерапевтических препаратов, повышенный радиационный фон и неполноценность питания - характерный набор причин, вызывающий острые и хронические дисбиозы и рецидивирующие респираторные заболевания.
Лечить успешнО'Целый ряд серьезных болезней современная медицина может. А вот предупредить заболевание, т.е. определять его признаки на обратимом этапе не в состоянии. Оценка биохимических параметров крови заимствована из клинических нормативов и потому не применима по отношению к здоровому человеку. Нарушение здоровья (не болезнь, а пограничное состояние, т.е. переход к заболеванию) должно описываться не в терминах патологии, а в понятиях состояний, описывающих взаимодействие между основными физиологическими системами организма в условиях нагрузки - физической, интеллектуальной; эмоциональной, экологической.
Пограничное состояние пациента, являющееся предметом мониторинга, должно оцениваться по параметрам взаимодействия всех систем организма. Болезнь возникает тогда, когда нарушаются механизмы регуляции функций. Момент нарушения здоровья и следует уловить в условиях профилактических наблюдений. Реальным путем выведения из пограничного состояния является создание индивидуальных средств профилактики и реабилитации на принципах биологической обратной связи. При отсутствии критериев оценки пограничного состояния невозможна донозологическая диагностика.
Многочисленными микробиологическими обследованиями биотопов организма, проводившимися российскими исследователями, отмечено развитие у космонавтов кишечных дисбактериозов (6, 9, 15, 27, 29, 139). При нервно-эмоциональном напряжении имеет место снижение уровня бифидобактерий и лактобацилл, в отдельных случаях до полной редукции (29,122,139). Эту реакцию рассматривают, как «пусковой механизм» развития дисбактериоза у человека в экстремальных ситуациях (27). При исследовании изменений в тканях парадонта у космонавтов отмечено появление парадонтопато генных бактерий, уменьшение резидентной микрофлоры и увеличение содержания иммуноглобулинов классов А и G в ротовой жидкости (9,15). Наличие изменений в системе местного иммунитета при патологических процессах признается большинством исследователей (2, 5, 24, 25, 38, 39, 43, 46, 49, 50). Несмотря на многочисленные исследования по изучению процесса адаптации организма человека к измененным условиям среды обитания, следует отметить, что особенности и механизмы адаптации микроэкологической и иммунной систем остаются малоизученными. Причиной тому является отсутствие объективных количественных методов оценки изменений этих систем регуляции.
Поэтому актуальной является задача выявления маркеров, позволяющих фиксировать повреждающие стрессорные воздействия на слизистые покровы органов, непосредственно контактирующих с внешней средой, а также разработка количественных методов диагностики нарушений иммунорегуляторных процессов организма до развития выраженной клинической картины заболевания.
Цель исследования: изучение механизмов адаптации организма в экстремальных ситуациях и создание эффективных диагностических тест-систем выявления стрессзависимых маркеров.
Задачи исследования.
1. Изучить состояние местного иммунитета и микробиоценоза слизистой оболочки толстого кишечника обезьян в условиях воздействия экстремальных факторов (космический полет, 4-х и 3-х стадийные хирургические операции по вживлению электродов, ан-тиортостатическая гипокинезия, введение пастообразного полетного рациона питания).
2. Изучить состояние местного иммунитета и микробиоценоз слизистой оболочки толстого кишечника космонавтов.
3. Изучить состояние местного иммунитета и микробиоценоз слизистой оболочки толстого кишечника работников наземных служб аэропорта.
4. Выявить общие закономерности изменений состояния слизистых покровов толстого кишечника при экстремальных воздействиях. Обосновать значимость и возможность использования показателя местного иммунитета для оценки естественной резистентности организма и мониторинга пограничных состояний организма человека в экстремальных ситуациях.
5. Разработать тест-системы, обеспечивающие выявление стрессзависимых маркеров слизистых покровов толстого кишечника и верхних дыхательных путей (ВДП).
6. Разработать принцип формирования групп риска по патологии слизистых покровов органов, непосредственно контактирующих с внешней средой.
Научная новизна.
Впервые получены доказательства, что в результате воздействия на организм экстремальных факторов (космический полет, хирургический стресс, антиортостатическая гипокинезия, вредные условия труда) общей закономерностью изменения слизистых покровов толстого кишечника является снижение уровня защитных групп микроорганизмов за счет вытеснения их условно-патогенной микрофлорой, формирования дисбактериоза разной степени выраженности на фоне увеличения уровня секреторного иммуноглобулина A (slgA).
Выдвинуто и экспериментально обосновано новое положение о функциональной сопряженности микроэкологической системы и системы местного иммунитета. Показано существование отрицательной коррелятивной связи между уровнями защитных групп микроорганизмов кишечного микробиоценоза и уровнем slgA слизистых покровов толстого кишечника.
Обоснована возможность использования slgA как маркера для оценки неспецифической резистентности организма, диагностики и прогнозирования дисбактериоза, и разработана оригинальная тест-система для количественного иммуноферментного (ИФА) определения slgA в секретах.
Разработана эффективная схема выделения нового эпителиального муцинового антигена CAg25 из фракции мембран секрета молочной железы. Установлены молекулярные свойства антигена: гликопротеин с молекулярной массой 400 кД, с содержанием белка 2,5%, сиаловых кислот 16%, N-ацетилгексозаминов 8%, нейтральных углеводов 16%, относящийся к группе полиморфных муцино-вых эпителиальных антигенов.
Разработаны оригинальные тест-системы для обнаружения эпителиального муцинового антигена CAg25 в сыворотке и цельной крови. Показано диагностическая эффективность разработанных тест-систем в отношении выявления опухолей эпителиального гене-за.
Исследованиями уровней slgA и эпителиального муцинового антигена CAg25 в бронхоальвеолярных смывах (БАС) контингента больных с бронхолегочной патологией показало, что снижение неспецифической резистентности организма сопровождается появлением в БАС эпителиального муцинового антигена CAg25. Сформулированы критерии формирования групп риска по патологиям слизистых покровов ВДП.
Практическая значимость работы.
Разработаны оригинальные тест-системы для количественного определения slgA в секретах (копрофильтратах и БАС) и нового эпителиального муцинового антигена CAg25 в сыворотке, цельной крови, БАС.
Разработан новый метод диагностики дисбактериоза и внедрен в лаборатории санитарно-пищевой микробиологии и микроэкологии ГУ НИИ Питания РАМН.
Набор реагентов для количественного иммуноферментного определения slgA в копрофильтратах и слюне «sIgA-ИФА ПБМТ» принят к серийному выпуску на предприятии ООО «Прогрессивные Био-Медицинские технологии» и проходит государственную регистрацию в Комитете по новой медицинской технике МЗ РФ.
Обосновано введение новой формы лабораторного контроля анализа slgA в секретах, который является показателем естественной локальной иммунной защиты организма. Это позволит повысить эффективности лекарственной терапии и методов иммунокор-рекции соответствующих сдвигов в различных системах регуляции за счет использования принципа обратной связи.
Положения, выносимые на защиту
1. При пребывания человека в условиях воздействия экстремальных факторов (предполетная подготовка, длительный космический полет, вредные условия труда) особенностью состояния слизистых покровов толстого кишечника является появление условнопатогенной микрофлоры, сопровождающееся снижением защитных групп микроорганизмов бифидобактерий и лактобацилл, формирование дисбактериоза разной степени выраженности, на фоне увеличения уровня slgA.
2. Уровень slgA в копрофильтратах является показателем адаптивных процессов в организме, свидетельствующим о предупреждающих защитных реакциях организма при повреждающих воздействиях, какими являются стресс, вредные условия труда.
3. Продемонстрирована функциональная сопряженность микроэкологической системы и системы местного иммунитета. Полученная отрицательная коррелятивная связь между уровнем slgA и содержанием защитных групп микроорганизмов (бифидобактерий и лактобацилл) у человека дает основание для создания нового ИФА метода диагностики дисбактериоза (объективного, менее трудоемкого и с меньшими затратами времени).
4. Выделен и охарактеризован новый эпителиальный муцино-вый антиген CAg25. Разработаны оригинальные тест-системы для выявления этого антигена в сыворотке, цельной крови,, позволяющие диагностировать опухоли эпителиального генеза.
5. Полученный экспериментальный материал по анализу slgA, эпителиального муцинового антигена CAg25 в секретах является основой для создания нового научного направления по целевому поиску маркеров адаптации и естественной резистентности организма, а также методов коррекции соответствующих сдвигов в различных системах организма в донозологическом периоде болезни на принципах обратной связи и формированию групп повышенного риска по иммунопатологическим состояниям.
Апробация работы и публикации.
Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на заседаниях Ученого совета НИИ Биотехнологии, НТЦ «Лек-биотех», а также на Международных конгрессах Европейского респираторного общества (ERS) в 1997г. (Берлин), 2000 г. (Флоренция); на Международных конгрессах общества по микробной экологии и болезням (SOMED) в 1996г. (Париж), 1997г. (Флорида); на III Российско-Американском симпозиуме по программе «Наука-НАСА» в 1997г. (Хансвилл, США); на I Национальной конференции Российской ассоциации аллергологов и клинических иммунологов в 1997 г. (Москва); I Международной конференции «Management of Human Intestinal Microflora. Probiotics and Fiber» в 1998г. (Рим); на Международных конференциях «Human Antibodies and Hybridomas» в 1997г. (Вашингтон) и «Спид, рак и ретровирусы человека» в 1992, 1993 гг. (С.-Петербург); XI конференции по космической биологии и авиакосмической медицине в 1998г. (Москва); на Международном экологическом форуме в 2001г. Москва).
По материалам диссертации опубликована 41 научная публикация, в том числе 2 патента. Диссертационная работа апробирована на межотдельческой конференции ГНЦ РФ - Института медико-биологических проблем РАН.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, 6 глав, содержащих обзор литературы и изложение результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы. Материал изложен на 206 страницах машинописного текста, иллюстрирован 14 рисунками, 32 таблицами. Библиография включает 202 наименования (57 отечественных, 145 зарубежных).
Заключение диссертационного исследования на тему "Клинико-экспериментальное обоснование разработки тест-систем выявления стрессзависимых маркеров для изучения механизмов адаптации организма в экстремальных ситуациях"
выводы
1. Установлено, что в результате воздействия на организм экстремальных факторов (космический полет, хирургический стресс, перевод на полетный рацион питания, антиортостатическая гипокинезия, вредные условия труда, связанные с шумом, вибрациями, парами топлива и свинца) общей закономерностью изменений слизистых покровов толстого кишечника является снижение уровня защитных групп микроорганизмов за счет вытеснения их условно/ патогенной микрофлорой, формирования дисбактериоза разной степени выраженности на фоне увеличения уровня slgA в копрофильтратах.
2. Функциональная сопряженность микроэкологической системы и системы местного иммунитета доказана на основании найденной нами коррелятивной связи между уровнем slgA и уровнями бифидобактерий и лактобацилл толстого кишечника человека (коэффициенты корреляции соответственно - 0,72 и - 0,46) и коррелятивной связи между уровнем slgA, уровнями бактероидов и лактобацилл толстого кишечника обезьян (коэффициенты корреляции соответственно -0,80 и -0,50).
3. Впервые показана возможность использования slgA для оценки неспецифической резистентности, диагностики изменений слизистой толстого кишечника и прогнозирования развития дисбактериоза. Создана гибридома-продуцент моноклональных антител к slgA и на ее основе разработана тест-система для количественного определения slgA в секретах. Создан коммерческий набор для им-муноферментного определения slgA в секретах. Разработан метод определения slgA в фекалиях и БАС.
4. Впервые показана возможность использования slgA в качестве маркера для оценки состояния слизистых покровов ВДП при хронических заболеваниях бронхолегочной системы.
5. Выделен и охарактеризован новый муциновый эпителиальный антиген (CAg25) из секрета молочной железы. Установлено, что антиген является гликопротеином с молекулярной массой 400 кД. Состав антигена (в процентах на сухой вес): белок-2,5, гексоза-мины-8, сиаловые кислоты-16, нейтральные углеводы-16. Установлены структурные особенности антигена CAg25: антигенные детер минанты находятся на полипептидном скелете, антиген содержит О-связанные олигосахаридные цепи, олигосахаридные цепи участвуют в формировании антигенной структуры. Разработана ИФА тест-система для количественного определения CAg25 в сыворотке. Разработана ИАГ тест-система для выявления муцинового антигена CAg25 в цельной крови.
6. Установлено, что с помощью разработанных тест-систем ИФА и ИАГ антиген опухолей эпителиального генеза выявляется в сыворотке и крови онкологических больных с высокой долей вероятности (рак молочной железы в 72% случаев, рак легких в 73% случаев, рак яичника в 57% случаев).
7. Показано, что эпителиальный муциновый антиген CAg25 обнаруживается в БАС пациентов с хроническим бронхитом, пневмонией, бронхиальной астмой и злокачественными новообразованиями легких. Обоснован принцип формирования групп риска по патологии слизистых покровов ВДП.
8. Полученный экспериментальный материал по анализу slgA и эпителиального муцинового антигена CAg25 может стать основой для создания нового научного направления по целевому поиску маркеров адаптации и естественной резистентности организма с целью раннего выявления и профилактики патологий слизистых покровов органов, непосредственно контактирующих с внешней средой.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Одной из основных характеристик процесса адаптации является резистентность - интегральный показатель, характеризующий общее состояние организма, степень его отклонения от физиологической нормы (сугубо индивидуальной) и способность переносить неблагоприятные и необычные воздействия. Адаптационные подготовка систем организма (иммунной и микроэкологической) к экстремальным воздействиям, последствия напряжения адаптационных систем, как количественно их измерить, как оценить возможные последствия в период переходного состояния к болезни - вопросы, которые стояли перед началом этого исследования. При отсутствии критериев оценки переходного состояния, характеризующегося активацией систем регуляции организма, невозможна донозологиче-ская диагностика.
В настоящее время уже общепризнанным и доказанным в экспериментах с безмикробными животными и гнотобиотами с известными наборами бактерий считается факт, что состояние микробной экологии хозяина играет важную роль в возникновении спонтанных и индуцированных злокачественных новообразований человека и животных. Резидентная и транзиторная микрофлора, метаболизируя эндогенные и экзогенные субстраты, способствует формированию канцерогенов, промоторов развития опухолей или предшественников. Предполагается, что канцерогены и промоторы формируются при микробной трансформации проканцерогенов, присутствующих в атмосферном воздухе, воде и пище. Бактериальными ферментами, для которых доказано участие в реакциях превращения проканцерогенов в активные канцерогены, являются гликозидазы, нитрозосин-тетазы, азоредуктазы, 7-альфа-стероид дегидрогеназа, 7-альфадегидроксилаза (54, 70, 78, 84, 95, 120, 123, 147, 191). Значимость микроорганизмов в формировании N-нитрозосоединений с канцерогенным эффектом установлена в 1970 г. и позднее подтверждалась неоднократно (63, 164). Предшественником N-нитрозаминов являются нитраты. Их метаболизм осуществляется за счет бактериальных нитрат- и нитритредуктаз, наиболее активных в анаэробных условиях. К их продуцентам относятся гемофильные бактерии, про-пионобактерии, клостридии, эубактерии, арахнии, вейллонеллы, бактероиды, актиномицеты (54,120).
Многообразные изменения в организме, происходящие при стрессе отражены в обзоре (138). Стрессовые ситуации создают условия к изменению адгезивных свойств бактерий и клеточной адге-зивности макроорганизма (122, 124). Физико-химическое состояние муцина может быть нарушено желчными кислотами, протеолитиче-скими ферментами, изменениями рН и многими другими факторами (13, 118, 123, 128, 172). Снижение содержания мукозной составляющей (муцина) и снижение кислых мукополисахаридов на поверхности мукозы и покрывающих ее клеток считают показателем стрессовой реакции (128). Имеются прямые доказательства существования некоторой предрасположенности к изменению адгезии во время стресс-индуцированных сдвигов в процессах пищеварения (122). Сдвиг в гормональном гомеостазе может касаться также адгезии. Есть доказательства, что гормоны индуцируют изменения в синтезе рецепторов для бактерий и модифицируют способность клеток связываться с бактериями (174). Происходят значительные изменения в иммунореактивности на стресс-активацию гипоталамо-гипофизарно-адреналиновой системы (11). Известно, что кортико-стероиды являются иммунодепрессантами. Имеются доказательства участия Т-лимфоцитов в регуляции бактериальной транслокации. Т-лимфоциты снижают риск выхода бактерий за пределы ЖКТ. Снижение иммунологической резистентности может оказывать влияние на топографическое распределение некоторых микробных популяций в ЖКТ. Следствие - эндогенная контаминация и метаболические последствия усиленного бактериального роста в тонком кишечнике. В исследованиях с созданием стрессовой ситуации на животных инфузией АКТГ показано, что активное распространение E.coli происходит в проксимальные отделы тонкого кишечника. Морфологические изменения характеризовались включением тимуса, атрофией фолликул лимфатических тканей слизистой кишечника, которая и определяет бактериальную топографию (183).
Таким образом, в организме всегда существует угроза злокачественного роста, поскольку фактором агрессии может быть микрофлора хозяина. Причина - атрибуты современной жизни - стрессы, экологическое неблагополучие окружающей среды. Реакция каждого индивидуума зависит от его генетического и иммунологического потенциала, состояния микробиоценоза. Изменить генетические признаки человека на современном уровне развития науки еще невозможно, но разработать критерии оценки ранних стадий изменений слизистых покровов и предупредить возникновение злокачественного роста в эпителии возможно, тем более, что современная наука создала целый арсенал иммунокорректирующих средств, в том числе и природного происхождения.
Основной принцип адаптации живых организмов заложен в концепции существования иммунохимической функциональной системы гомеостаза (ИФСГ), которая включает две основные функционально связанные системы: цитохром Р-450-зависимую метаболическую систему и иммунную систему (18). ИФСГ охватывает все ткани и клетки и способна узнавать структуры неограниченного числа веществ, кодировать полученную информацию, запоминать ее, активировать адаптационные механизмы, соответствующие данной экстремальной ситуации.
Следует отметить также, что исследованиями последних лет доказано существование популяции естественных антител, осуществляющих контроль за участием эндогенных субстанций в различных регуляторных процессах организма, направленных на поддержание гомеостаза (35).
Что касается механизма регуляции адаптационного процесса, то известно, что существует самообновляющаяся популяция CD5+ В-клеток, отличная от других В- клеток. Эти CD5+ В-клетки продуцируют большое разнообразие антител с низкой аффинностью и играют главную роль как первый барьер защиты от чужеродных агентов, таких как вирусы и бактерии (79). CD5+ активационный маркер на поверхности активированных В-клеток регулируется ин-терлейкином-4. CD5+ появляется на определенном этапе дифферен-цировки В-клеток и экспрессируется приблизительно на 20% В-клеток крови здоровых доноров, 10%> В-клеток миндалин и 50% В-клеток эмбриональной селезенки. Внеклеточная область CD5+ содержит 3 богатых цистеином доменов-скавенджеров (мусорщиков) и по структуре CD5+ близок к семейству рецепторов-скавенджеров, включающих рецептор типа 1 макрофагов, комплементный фактор 1 человека (62). Близость структуры CD5+ с семейством рецепторов «мусорщиков» предполагает близость функциональной роли в устранении чужеродных агентов (бактерий).
Данное исследование ставило своей задачей найти стрессзави-симый маркер адаптации организма в экстремальных ситуациях. В результате проведенного исследования было установлено, что о вызванных стрессом и вредными условиями труда, изменениях состояния эпителия слизистых покровов толстого кишечника сигнализирует slgA. SlgA является биологическим маркером, который выявляет изменения системы регуляции организма в ответ на агрессивные факторы внешней среды. Приведены доказательства сопряженности иммунной и микроэкологической систем, обеспечивающих локальную реакцию, направленную на сохранение гомеостаза восстановлением обычных свойств внутренней среды. Намечены пути управления этим процессом и предложены сферы применения найденного диагностического показателя -slgA (диагностика и контроль за лечением дисбактериозов, контроль лекарственной терапии, контроль пищевых добавок, выявление патологий слизистых покровов непосредственно контактирующих с внешней средой органов и т.д.).Для решения этих задач созданы ИФА тест-система и на ее основе - набор реагентов для количественного иммунофер-ментного определения slgA в секретах.
В процессе решения основной задачи выделен новый эпителиальный антиген CAg25 из секрета молочной железы - женского молока. Исследованием молекулярных и структурных свойств мы показали, что CAg25 является эпителиальным муциновым сталированным гликопротеином.
На основе МКА ИКО-25, выявляющих опухоли эпителиального генеза, нами разработана количественная ИФА тест-система для анализа сыворотки и ИГА экспресс-тест система для анализа цельной капиллярной крови. Как показали наши исследования, проведенные на 86 образцах сывороток от онкологических больных, обе тест-системы обнаруживают в сыворотке эпителиальный муцино-вый антиген CAg25. Клиническое сравнительное изучение, проведенное на 160 сыворотках доноров и 209 сыворотках от онкологических больных (РМЖ, опухоли яичника, опухоли ЖКТ), разработанной нами ИФА тест-системы на основе МКА ИКО-25 и коммерческих наборов фирмы Roche СА 15-3, СА 125, СЕА показало, что разработанная нами ИФА тест-система выявляет опухоли эпителиального генеза (молочной железы, яичника, ЖКТ).
На основе клинических исследований уровней slgA и эпителиального муцинового антигена CAg25 в БАС пациентов с патологиями бронхолегочной системы мы сформулировали принцип отбора групп риска по патологии ВДП.
Мы полагаем, что для ранней донозологической диагностики, определение уровня slgA и содержания эпителиального муцинового антигена CAg25 в БАС и секретах более информативным по сравнению с определением его в сыворотке крови. Доказательством тому служит пример одной из последних публикаций. Изучали роль дисбактериоза в формировании иммунной недостаточности у детей с рецидивирующими инфекциями дыхательных путей (острые пневмонии, острые бронхиты, острые респираторные вирусные инфекции). У всех детей выявлены условно-патогенные микроорганизмы (наиболее часто встречались два вида - St.aureus и грибы рода Candida). При этом «достоверных различий в лабораторных показателях крови не выявлено» (по показателям лейкоцитарная формула крови, фагоцитарной активности нейтрофилов, определению уровней IgA, IgE, IgG, IgM) (49). Естественно, различие должно быть на уровне слизистых покровов ВДП. В ответ на появление патогенной микрофлоры местно в подслизистом слое синтезируется slgA для борьбы с патогенной микрофлорой и защиты целостности слизистых покровов. Именно показатель местного иммунитета должен изменяться при колонизации слизистых покровов условно патогенной микрофлорой. Поэтому определение slgA имеет существенное значение для диагностики ряда заболеваний кишечника, легких, ротовой полости и др. Величина и знак этих изменений зависит от продолжительности неблагоприятных воздействий, от генетических особенностей организма. Возможно превышение исходного уровня, угнетение, восстановление и затем вторичное угнетение. При нарастании проявлений истощения процесс переходит в декомпенсирован-ную форму, а затем в тотальную иммунную недостаточность. Этим и объясняются частые рецидивы клинических манифестаций. Выбор правильного курса лечения должен идти также при контроле slgA в секретах, но не в крови.
Необходимо определять статус местного иммунитета в секретах для выбора эффективного лекарственного средства в каждом конкретном случае и в дальнейшем для характеристики активности процесса и прогноза заболевания. Полагаем, что за счет введения новой формы лабораторного контроля (анализа slgA в секретах) повысится эффективность лекарственной терапии, поскольку будет реализован принцип обратной связи.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2002 года, Виха, Галина Васильевна
1. Алексеев В.Г., Яковлев В.И. Очерки клинической пульмонологии. М., «Воениздат»,1998, 183 с.
2. Блохина И.Н., Дорофейчик В.Г. Дисбактериозы. Л., «Медицина»,-1979.-176 с.
3. Бондаренко В.М., Петровская В.Г. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры. //Вестн. РАМН, -1997, -т.З, -с.7-10.
4. Бочков И.А., Лизько Н.Н., Семина Н.А. Микрофлора зева космонавтов на этапе их профессиональной деятельности.//Сб. «Третий российско-американский симпозиум по медико-биологическим исследованиям по программе НАУКА-НАСА». 1997, Алабама, США, с.57.
5. Виха Г.В., Лизько Н.Н., Рыкова М.П. и др. Влияние углеводного адаптогена на аллергические реакции животного организма.
6. Космическая биология и авиакосмическая медицина. -1998, -т. 1, с.166-168.
7. Виха Г.В., Максимов В.И., Леонова M.JI. и др. Новый прай-мер для кондиционирования мышей перед инокуляцией гибридом-ных клеток. //Биотехнология.-1993, № 10, с.16-17.
8. Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М., Шендеров Б.А. Дисбактериозы актуальная проблема медицины. //Вестн. РАМН, -1997, -т.З, - с.4-7.
9. И. Газенко О.Г., Генин A.M., Ильин Е.А., и др. Основные результаты эксперимента с млекопитающими на биоспутнике «Кос-мос-782». //Космич. биология и авиакосмич. медицина,-1978,-т. 12,-№6,-стр.43-49.
10. Гончарова Г.И., Семенова Л.П., Лянная A.M. Бифидофлора человека и ее нормализующие и защитные функции.//Антибиотики и мед. биотехнология, 1987, т.ХХХИ, - №3, - с. 179-183.
11. Гришина И.А., Данилина A.M., Яковлев И.П. Влияние антибиотиков на адгезию микроорганизмов. // Антибиотики и химиотерапия. -1980, -т.35, -№3, с. 50-53
12. Диагностика, клиника и лечение дисбактериоза кишечника у детей. Методические рекомендации. М., «Медицина»Д990.
13. Каталог фирмы BioMerieux, 2000 г.
14. Каталог фирмы Lachema, 1999 г.
15. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным химическим соединениям. М., Наука, 1985,303 с.
16. Ковальчук В.К. Структурный аспект микроэкологии пристеночной зоны толстой кишки. //Ж. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, -1982, -№2, -с.41-45.
17. Коршунов В.М. Проблема регуляции микрофлоры кишечника. // Журн. Микробиол. -1995, -т.З, -с.48-55.
18. Кочеровец В.И. и др. Методические рекомендации по микробиологической диагностике заболеваний, вызванных неспорооб-разующими анаэробными бактериями. -М., «Медицина», 1986.
19. Куваева И.Б. Обмен веществ организма и кишечная микрофлора. М„ 1976,-105с.
20. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей. -М., «Медицина», -1989, 210 с.
21. Кузьменко Л.Г., Баталова Т.Н., Сойджодах Р. И др. Содержание иммуноглобулинов в слюне детей с хроническим тонзиллитом и бронхиальной астмой. //Вестник РУДН, серия «Медицина», -1999,- №2, -с.73-79.
22. Кушлинский Н.Е. Возможности, неудачи и перспективы исследования опухолевых маркеров в онкологической клинике. //Клиническая лабораторная диагностика, -1999, №3, с.25-32.
23. Лизько Н.Н. Дисбактериозы экстремальных состояний.-Антибиотики и медицинская биотехнология, 1987, - т. XXXII, №3, с.184-186.
24. Лизько Н.Н., Фролов В.Н., Ленцер А.А. и др. Микроэкология кишечника обезьян// Результаты исследований на биоспутниках. М., «Наука»,-1992,-с. 105- 117.
25. Лизько Н.Н. Микроэкологические аспекты космических полетов. //ВестникРАМН, -1996, №8, - с. 31-34.
26. Лопатина Т.К., Бляхер М.С., Николаенко В.Н. и др. Имму-номодулирующее действие препаратов -эубиотиков. // Вестн. РАМН, 1997,-т.3,-с.30-34.
27. Максимов В.И., Виха Г.В., Полетаева О.А. и др. Хитодек-стрин биологически активный препарат. //Кн. Производство и применение хитина и хитозана. М., « ВНИРО», 1995, с. 44-46.
28. Микробиологическая диагностика дисбактериозов. Методические рекомендации. Киев, «Наукова думка», 1986.
29. Минушкин О.Н., Елизаветина Г.А., Иванова Л.М. и др. Диагностика, лечение и профилактика дисбактериоза и хронических заболеваний кишечника. Методические рекомендации. -М., «Медицина», 1991.
30. Молодык А.А., Шапиро Н.А., Ловачева О.В. и др. Опухолевые маркеры бронхоальвеолярного смыва в диагностике рака легкого. //Вестник АМН, 1992, т.23, - №12, - с.71-75.
31. Мягкова М.А. Естественные антитела к низкомолекулярным соединениям, М., «МГУЛ», 2001, 260 с.
32. Оуэн Д.Б. Сборник статистических таблиц. -М., «Медицина», -1966, с.510.
33. Першин Б.Б., Кузьмин С.Н., Кочкуркин В.Н. и др. Реакции местного иммунитета у пловцов сборной страны. //Ж. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-1996, №1, - с.53-57.
34. Пинегин Б.В., Мальцев В.Н., Коршунов В.М., Дисбактерио-зы кишечника. -М., «Медицина», 1984.
35. Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечными инфекциями. Диагностика, лечение дисбактериоза кишечника. Методические рекомендации.-М., «Медицина», 1986.
36. Раевский К.К., Добрынин В.М., Кочеровец В.И. и др. Совершенствование микробиологической диагностики дисбактерио-зов.//Вестник РАМН. -1997, №3, -с.13-16.
37. Романова JLK., Овчаренко С.И., Младковская Т.Б. и др. Особенности клеточных реакций в легких во время обострения бронхиальной астмы. //Пульмонология, 1992, - №1, - с.20-27.
38. Савилов Е.В., Ильина С.В., Киклевич В.Т. Особенности острых респираторных вирусных инфекций у детей в условиях техногенного загрязнения окружающей среды. //Ж. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 2001,- №3, с.39-42.
39. Сайтов М.М., Никитенко В.И., Есипов В.К. и др. О роли дисбактериоза в развитии хирургической инфекции. //Вестник РАМН,-1997,-№3,-с. 17-19.
40. Сахаров Р.С., Виха Г.В., Батищев А.И. и др. Новый иммуно-модулятор для получения агглютинирующих и преципитирующих антител. //Биотехнология, -1998, №2, с.59-63.
41. Слатинова О.В., Мокроносов М.А., Сходова С.А. и др. Гуморальный иммунный ответ у пациентов с бронхолегочными заболеваниями при проведении иммунотерапии. //Ж. микробиологии,эпидемиологии и иммунобиологии, 2001.- №2, - с.49-53.
42. Тигранян Р.А. Метаболические аспекты проблемы стресса в космическом полете, т.52, М. «Наука», 221с.
43. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. -М.,- «Медицина»,- 1975, с. 193-195.
44. Федотова Т.А., Михайленко А.А., Сергеева С.Ф. и др. Роль дисбактериоза кишечника в формировании иммунной недостаточности у детей // Иммунология, 2001, №3, с.41-45.
45. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Кн. Экологическая иммунология, 1995, М., «ВНИРО», 219с.
46. Чернеховская Н.Е., Ярема И.В. Деформирующий бронхит.2000, М., «РМАПО», 371с.
47. Шевелева С.А. Пробиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса. //Вопросы питания, 1999, т.2, -с.32-40.
48. Шевченко Ю.Л. Онищенко Г.Г. Микроорганизмы и человек, некоторые особенности их взаимососуществования на современном этапе. //Ж. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,2001, №2, - с.94-104.
49. Шендеров Б.А. Микроэкологические аспекты канцерогенеза. // Антибиотики и химиотерапия. -1990, т.35, - №10, - с. 7-12.
50. Якубовская Р.И., Антигены молочной железы человека и возможности их использования в диагностике и терапии опухолей. Автореф. докт. биол. наук, М.,1992.
51. Якубовская Р.И., Барышников А.Ю., Виха Г.В. и др. Имму-ногистохимическое изучение моноклональных антител к антигену мембран жировых глобул женского молока //Архив патологии,1991,-т. 53, №.6, с.11-17.
52. Якубовская Р.И., Коростылева М.Д. и др. Выделение мембранных антигенов эпителиальных клеток молочной железы из мембран жировых глобул женского молока. //Вопросы мед. химии,-1986,- т.32, вып.5, - с.36-41.
53. Ahokas J., Nezami Н.Е1., Salminen S. Binding of aflatoxin by lactic acid bacteria. //Gastroenterology Int.- 1998, v.l 1,-p. 133-134.
54. Allison C.,Macfarlane G.T. Affect of nitrate on methan production by human faecal bacteria. //J.Gen.Microbiol. 1988,- v. 134, p. 13971405.
55. Affinity Chromatography: Principles and Methods. Sweden. 1974, v. 5, p. 36-41. (Eds. Rahms I. L.).
56. Arklie J., Taylor-Papadimitrou J., Bodmer W. Edan M., R.Millls Differentiation antigens expressed by epithelial cells in the lacting breast are also detectable in breast cancer. //Inter. Cancer, -1981, v. 28, -p.23-29.
57. Barclay A.N., Birkeland M.L., Brown M.H. et al. //The Leucocyte antigen. Facts Book, 1993, «АР»,- 336p.
58. Bartsch H., Ohshima H., Pignatally B. Contribution of intestinal bacteria in disease . //Mutat Res. -1988, v.202, - p.307-324.
59. Beuth J., KoH.L., Roszkowski W. et al. Lectins: Mediators of adhesion for bacteria in infection diseases and for tumor cell in metastasis // Zbl. Bact, 1990,- v.274, - p.350-358.
60. Bezkorovainy A., Miller-Catchpole R. Biochemistry and physiology of Bifidobacteria. 1989, CRC Press, Boka Raton, Fl.
61. Bradford 0. Adaption of the Bradford Protein assay to membrane-bound proteins by solubilizing in glucopyranoside detergents. //Anal. Biohem. -1987,-v. 162, p. 11-17.
62. Bradwell A.R. Book: IgG and IgA subclasses in disease.1. Birmingam, 1995, - p.148.
63. Brandtzaeg P. Human secretory Immunoglobulins: Immunochemical and physicochemical studies of secretorylgA and free secretory piece. //Acta Pathol. Microbiol.Scand.,-1971,- v.'79,- p. 165-172.
64. Brown T.A., Messtecky J. Immunoglobulin A subclass distribution of naturally occurring salivary antibodies to microbial antigens. //Infect.Immun., 1985,- v.49,- p.459-472.
65. Belled D., Bidart J. Tumor-associated markers A clinical study. //Rev. Press Medicale, -1993, - v. 22, - № 14, - p. 680-686.
66. Bleglmayer C., Szepesi Т., Neynteufel W., Schieder K. Properties of MCA and surveillance of breast cancer patients with tumor marker, //Brit. J. Cancer, -1989, v.59, - p.219.
67. Bombardieri E., Colombo A., Gion M. A preliminary evaluation of the tissue and serum levels of MCA, a new tumor -associated antigen of breast cancer, //Tumor-diagnost. and therap., 1988, v.9, - p. 39.
68. Burchell J., Gendlers S., Antibodies to human milk mucin core protein //Cancer Res, -1987, v. 47, - p. 5476-5482.
69. Burchell J., Gendler S., Taylor-Papadimitrou J. et al. Development and characterization of breast cancer reactive monoclonal antibodies directed to the core proteins of the human milk mucin. // Cancer Res., -1987,-v. 47,-p. 5476-5482.
70. Burchell J., Durbin H., Taylor-Papadimitrou J. et al. Complexity of expression of antigenic determinants recognized by monoclonal antibodies HMFG-1 and HMFG-2 in normal and malignant mammary epithelial cells. //J. Immunol, -1983, v. 131,- p.508 -513.
71. Burchell J., Wag D., Taylor-Paradimitriou J. "Detection of thetumor-associated antigens recognized by monoclonal antibodies HMFG1 and 2 In serum from patients with breast cancer", //Int. J. Cancer, 1984, -v. 34,-p.763-768.
72. Burchell J., Taylor-Paradimitriou J., Boshell M. et al. A short sequence, within the amino acid tandem repeat of a cancer-associated mucin, contains immunodominant epitopes. //Int. J. Cancer, 1989,- v.44,-p.691-696.
73. Caprilli R., Latella G. Colonocyte metabolizm and colorectal cancer //In: Recent progress in Colorectal Cancer, Excerpta Medica, 1991, p.115-118.
74. Casali P., Notkins A.L. CD5+ В lymphocytes, polyreactive antibodies and the human B-cell repertoire //Immunol, today, 1989,- v. 10,-№11,- p.364-380.
75. Cebra J.J., Shroff K. Peyer s Patches as Inductive Sites for IgA Commitment. //In: Handbook of Mucosal Immunology. 1994, - «АР»,-p.151-159.
76. Ceriani R., Peterson S., Lee J.Y. et al. Characterization of cell surface antigens of human mammary epithelial cells with monoclonal antibodies prepared against human milk fat globule. //Som. cell genet, -1983, v. 9,-p. 415-427.
77. Cerlani R., Rosenbaum E., Chandler M., Trujillo T. The role of circulating human mammary epithelial antigens as markers for breast cancer. //Prog. Clin. Biol. Res., -1986, v. 204, - p.3-19.
78. Cerlani R., Sasaki M., Sussman H., Wara W. Circulating human mammary epithelial antigens in breast cancer. //Proc. Nat. Acad. Sci. USA, -1992, v. 79, - p.5421-5424.
79. Correa P. A. Human model of gastric carcinogenesis, //Cancer Res., -1988, v.48, - p.3554-3560.
80. Cooper E., Forbes M., Hancock A., Price J. "An evaluation ofmucin-like carcinoma-associated antigen (MCA) in breast cancer". //Brit. J. Cancer, -1989, v. 59, - p. 797-800.
81. Csordas A. Butirate, aspirin and colorectal cancer. //Eur. J. Cancer prev., 1996,-p.221-231.
82. Cuatrecasas P., Anfinsen C. Affinity Chromatography //Ann. Rev. Biochem. -1971, v.40, -p.259-278.
83. Dalen A. Analytical requirements and standartization of CA 153. //Scand. J. Clin. Lab Invest., -1995, v. 55, -Suppl. 221, - p. 102-104.
84. Debois M., Gilles K. et al. Colorimetric method for determination of sugars and related substances. //Anal. Chem., 1950, - v.21, - №1, - p.350- 35.
85. Deich E.A. Bacterial translocation of the gut flora. //J.Trauma, -1990, v.30,- p.184-189.
86. Devine P.L.,Warren J.A., Ward B.G. et al. Glycosilation and the exposure of tumor-associated epitopes on mucins. // J.Tumour. Marker Oncol. 1990,- v.5,- p.11-26.
87. Dnistrian A., Schwarz M., Greeberg E., Smith C. CA 15-3 and carcinoembryonic antigen in the clinical evaluation of breast cancer. //Clin. Chem. Acta, 1991, - v. 200, - p.81-94.
88. Donadeo A., Lorusso V., Miccelli G. et al. Mucin-Like Carcinoma associated Antigen (MSA) Serum Levels In Breast- Cancer A Critical Appraisal". //Int. J. Oncol, - 1993, - v. 2, - p. 335-338.
89. Emad A. Bronchoalveolar Lavage:A Useful Method for Diagnosis of Some Pulmonary Disorders. // Respiratory care, 1997, - v.42, -№8,- p.765-790.
90. Evans D.F. Physicochemical environment of the colon. // Eur. J. of Cancer Prevention. -1998 v.7 (Suppl. 2) - p.79 - 80.
91. Falger W., Kramer S., Palapelas V., Norbert L. Breast cancer andclinical utility of CA 15-3 and CA. //Scand. J. Clin. Lab. Invest. -1995, -v. 55, ( suppl.2), p. 87-92.
92. Finnie I.A., Dwarakanath A.D., Tayler B.A. et al. Colonic mucin synthesis is incresed by the sodium butirate. //Gut, 1995,- v.36, - p.93-99.
93. Fontenot J.D., TjandraN., Bu D. et al. Biophysical characterization of the one- and three-tandem repeats of human mucin (Muc-1) core. //Cancer Res, 1993,- v.53, - p.5386-5394.
94. Fonti R., Latella G., Caprilli R. et al. Effect of butirate on normal human colonocytes. //Gastroenterology, 1994,- v. 106,- p.A234.
95. Freeman H. Lectin Histochemistry of 1,2-dimethylhydrazine induced rat colon neoplasia. //J.Histochem.Cytochem. 1983, - v.31,-p.1241-1245.
96. Fubara E.S., Freter R. Protection against enteric bacterial infection by secretory IgA antibodies. /Л.Immunol.,1973,- v.l 11,- p.395-403.
97. Fukushima R.,Gianotti L., Flexander J., The primary site of bacterial translocation. //Arch.Surg. 1994,- v. 129,- p.53-58.
98. Gion M. Serum markers in breast cancer managment. //Cancer Breast,-1992,-v.l,-p.173-178.
99. Ghosh S., Grossberg A., Kirn U. et al. Identification and purification of an organ specific tumor membrane associated antigen from a spontaneously metastazing. //Immunochem., -1978, v. 15, - p. 345-352.
100. Gendler S., Burchell J., Duhig T. et al. Cloning of partial DNA encoding differentiation and tumor-associated mucin glycoproteins expressed by human mammary epithelium. //Proc. Nat. Acad. Scil. USA. -1987,-v. 84,-p. 6060-6064.
101. Gendler S., Taylor-Papadimitrou J., Duhig T. et al. Highly immunogenic region of a human polymorphic epithelial mucin expressed bycarcinomas is made up of tandem repeats. //J.Biol.Chem. 1988,- v.263,-p.12820-12823.
102. Gibson G.R., Roberfroid M.R. Dietary modulation of human colonic microbiota: introducing in concept of prebiotics. //J. Nutr. -1995 v.125 - p.1401-1412.
103. Gibson G.R. ,Wang X. Inhibitory effects of bifidobacteria on other colonic bacteria. //J. Appl. Bacteriology, 1994, - v.11, - p.412-420.
104. Girling A.,Bartkova J., Burchell J. et al. A core protein epitope of the polymorphic epithelial mucin detected by the monoclonal antibody SM3 is selectively exposed in arrange of primary carcinomas". // Int. J. Cancer, -1989, v.43, - p.1072-1076.
105. Goldstain N., Lippmann M.L., Goldberg S.K. et al. Usefulness of tumor markers in serum and bronchoalveolar lavage of patients undergoing fiberoptic bronchoscopy. //Am. Rev. Respir. Dis. 1985,- v. 132,-№1,- p-60-64.
106. Gorovich P., Prelli F. and Fremgione B. Purification of Immu-noglobuline G. //Methods Enzymol. -1985, v.l 16, - p. 6.
107. Gruenke L.D., Wrensch M.R., Petrakis N.L. et al. Breast Fluid Cholesterol and Cholesterol Epoxides: Relationship to Breast Cancer Risk Factors and Other Characteristics. // Cancer Res. v.47, - p.5483-5487.
108. Hague A., Singh В., Parasceva C. Butirate acts as a survival factor for colonic epithelial cells. //Gastroenterology, -1997, v. 112, -p.1036-1039.
109. Hajishengallis G., Nilolova E., Russel M.W. Inhibition of
110. Streptococcus mutans adherence to saliva-coated hydroxylapatite by human secretory immunoglobulin A (slgA) antibodies to cell surface protein antigen 1/11: reversal by IgAl protease cleavage. //Infect. Immun.,-1992,- v.60, p.5057-5061.
111. Hanson L.A., Anderson В., Carlsson В., et al. The secretory IgA system and mucosal defence. //Scand. J. Infect. Dis.-1980. v. 12.-№24,- p. 13-21.
112. Hilgers J., Zotter S., Kenemans P. et al. Polymorphic epithelial mucin and СА-125-bearing glycoprotein in basic and applied carcinoma reseach. //Cancer Rev. 1988, - v.l 1-12,- p.3-10.
113. Hilkens J., Kroezen V., Bonfrer J.M. et al. MAM-6 antigen, a new serum marker for breast cancer monitoring. // Cancer Res. -1986, -v.46, p.2582-2587.
114. Hilkens J., Ligtenberg M.J.L., Vos H.L. et al. Cell membrane-associated mucins and their adhesion-modulating property. //Trends in Biochem. Sci.-1992, v.17, - p.359-363.
115. Hill M.J., Nitrate metabolism. // In: Microbial metabolism in the Digestive tract. (Ed.Hill M.J) CRC Press, - 1986.-p.176.
116. Hill M.J. Factors affecting bacterial metabolism. // In:Microbial metabolism in the Digestive tract. (Ed.Hill M.J.) CRC Press, -1986, -p.22-28.
117. Hinoda Y., Nakawgawa N., Nakamura H. et.al. Detection of a circulating antibody against a peptide epitope on a mucin core protein, MUC1, in ulcerative colitis. //Immunol.Letters, 1993, - v.35,- p.163-168.
118. Holdeman L.V, Good I.J., Moore W.E.C. Human fecal flora:variation in bacterial composition within individuals and a possible effectof emotional stress. //Appl. Environ. Microbiol. 1976, - v.31,- p.359-375.
119. Hoskins L.C., Boulding E.T. Mucin degradation in human colon ecosystems. //J. Clin. Invest., -1981,- v.67,- p. 163-172.
120. Jager W., Lang N., Cilaci S., Mercle E., Palapelas V. Analysis of the first signs of metastases in breast cancer patients. //Tumourdiagn. andTher,- 1991,-v. 12,-p.60-64.
121. Kerr M.A. The structura and function of human IgA. //Biochem.J.,- 1990, v.271,- p.285-289.
122. Kobayasshi J., Kitamura S. KL-6: a serum marker for interstitial pneumonia. //Chest,- 1995,- v. 108, -12 , p.311-315.
123. Kraehenbuhl J.P., Neutra M.R., Molecular and cellular basis of immune protection of mucosal surfaces. //Physiol.Rev. 1992,- v.72,-p.853-861.
124. Kritchevsky D. Cereal fibers and colorectal cancer a search for mechanisms. // Eur. J. of Cancer Prevention, -1998, v.7 (Suppl.2), -s33-s39.
125. Kufe D., Inghirami M., Abe D. et al. Differential reactivity of novel monoclonal antibody (DF-3) with human malignant versus benign breast tumors. //Hybridoma, -1989, v.3, - p.223-225.
126. Kuhn L.C., Kraehenbuhl J. The membrane recepter for polymeric immunoglobulin is structurally related to secretory component. //
127. J.Biol.Chem. 1981.- v.256,- p.12490-12495.
128. Lactionov K.P., Baykova V.N., Kormosh N.G., Gorozhanskaya E.G. Antioxidant treatment in oncogynecology. //The official publication of MEDLAB 97, Abstracts, - 1997, - p.205.
129. Latella G. Effects of SCFA on Human Colonocytes. //Gastroenterology Int., 1998,- v. 11p.76-79.
130. Latella G., Caprilli R. Metabolism of large bowel mucosa in health and disease. // Int. J. Colorect. Dis., 1991,- v.6,-p.l27-132.
131. Lee A, Sutton Ph. Helicobacter pylori long term survival in the gastric mucosa is immunomodulation the key. //In: «Immunomodulation gastrointestinal mucosa». v. 11, - p. 70-87.
132. Ligtenberg M.J.L., Buijs F., Vos H.L. et al. Suppression of cellular aggregation by high levels of episialin. // Cancer Res., 1992,-v.52, -p.2318-2324.
133. Lipkin M., Corea P., Mikol I.B. et al. Proliferative and antigenic modifications in human epithelial cells in chronic atrophic gastritis.
134. J.Natl. Cancer Inst, -1985, v.75,- p.613-619.
135. Lizko N.N. Stress and intestinal microflora. //Die Nahrung,-1987,-v. 5-6,-p.443-447.
136. Lizko N.N. Problems of microbial ecology in man space mission. //Acta Astronautica, 1991, - v.23,- p.163-169.
137. Lupton J.R., Butirate and colonic cytokinetics: differences between in vitro and in vivo studies. //Eur.J.Cancer Prevention, -1995,- v.4, p.373-378.
138. Majamaa H, Isolanri E. Probiotics: a novel approach in the management of food allergy. 1997, - v.99, - p. 179-185.
139. Mazanek M.B, Kaetzal, Lamm M.E. et al. Intracellular neutralization of virus by immunoglobulin A antibodies. //Proc.Nat. Acad. Sci. USA, 1992,- v.89,- p.6901-6905.
140. Merril W.W., Goodman M. , Matthay R.A. et al. Quantitation of carcinoembrionic antigen in the lung lining fluid of normal smokers and nonsmokers. // Am. Rev. Respir Dis., 1981,- v.123,- №4,- v.29-31.
141. Milkens J., Bulj S., Hilgers G, et al. Monoclonal antibodies against human milk fat globule membranes detecting differentiation antigens of the mammary gland and its tumors. //Inter. J. of Cancer, 1984, -v.34, - p.197.
142. Milner В., Alan Z., Haites N., Kage Z. Studies with 170 and 180 markers in breast ovarin cancer family. //Amer. J. Hum. Genet. -1993,-v. 52, - № 4, - p.761-766.
143. Mitsuoka T. Bifidobacteria and their role in human health. // J. Industrial Microbiology, 1990 - v.6 - p. 263-267.
144. Mizutani Т., Mitsuoka T. Inhibitory effects of some intestinal bacteria on liver tumorigenesis in gnotobiotic C3H/HE male mice. // Cancer Letters, 1980, - v.l 1, - p.89-95.
145. Mollicone R., Bara J., LePendu J., Oriol.R., Immunohistologicpattern of type l(Lea,Leb) and type 2 (X,Y,H) blood group-related antigens in the human pyloric and duodenal mucosa. //Lab.Invest.,- 1985,-v.53, p.219-227.
146. Morell A.,Muehlheim E., Schaad U. et al. Susceptibility to infections in children with selective IgA and IgA-IgG subclass deficiency. //Eur.J.Pediatr, -1986, v.145,- №3,- p.199-203.
147. Mueller-Brand J., Маске H., Hegyaejai T. Clinical value of a mucin-like carcinoma-associated antigen (MCA) in the monitoring of breast cancer patients. // J. Nucl. Med., -1988, v. 29, - p. 894.
148. Muraro R., Кигок M., Wunderich D. et al. Generation and characterization of В 72.3 second generation monoclonal antibodies reactive with the tumor-associated glycoprotein 72 antigen, //Cancer Res., -1988, -v. 48, p.4588-4596.
149. Murayama J.I. et al. Fluorimetric assay of sialic Acids. //Anal. Biochem.,- 1976, v. 73, - p.935-938.
150. Nardelli J., Loridon-Rosa В., Вага J. et al. Fetal gastric and small intestine pattern of intestinal mucus antigens in human gastric carcinomas. // Cancer Res., -1984, v. 44, - p.4157-4163.
151. Nemoto Т., Papsidero L., Croghan G. et al. Expression of ductal carcinoma antigen in breast cancer sera as defined using monoclonal antibody F36/22, //Cancer Res., -1990, v. 44, - p.4653-4657.
152. Nicolini A., Ferdeghini M., Colizzi C. Evaluation of CEA, TP A, CA 15-3. CA 549 and TPS in the monitoring of metastatic breast cancer. /Д. Nucl. Biol. Mod., -1993, v. 36, -p.126-133.
153. Nomura A., Stemmermann G.N., Samloff M., Serum pepsinogen 1 is a predictor of stomach cancer. // Ann. Intern. Med., -1980, -v.93,- p.537-540.
154. Novakovic S., Krosl G., Plesnicar S. Prognostics value of mucin-like carcinoma-associated antigen (MCA) in patients with breast carcinoma. //Tumor Diagn. Ther., -1989, v.10, - p,136-141.
155. Nozaura M., Yayima M., Kojma K., Sizuka K., Mochezuki H., Nagai Y. Tumor- associated mucin-type glycoprotein (GA54 /61) defined by two monoclonal antibodies in ovarin cancer. //Cancer Res., -1989, v. 49, - №15, - p.493-498.
156. Nuti M., Rughetti A., Turchi V. et al. Human B-cell immune response to selectes epitopes of the polymorphic epithelial mucin (РЕМ) in cancer patients. //In Vivo, 1993, - v.7,- p.645-648.
157. Ormerod M., Melthlnney J., Steele K., Shimizl M. Glycoprotein PAS-0 from the milk fat globule membrane carries determinants for epithelial membrane antigen M61. //J.Immunol., -1985, v. 22, - p. 265269.
158. Oshima H., Bartsch H., Quantitative estimation of endogenous nitrosation in human by monitoring N-nitrosoprolin excreted in the urea. //Cancer Res., 1981,- v.41,- p.3658-3662.
159. Palen A. Analytical requirements and standartization of CA 153. // Scand. J. Clin. Lab. Invest., -1995, v. 55, - (supl. 221), - p. 102104.
160. Parrot D.M.V. Interaction of flora, immune system and mucosal cells. In: «Old Herborn University Seminar Monograph 1. Microbial
161. Ecology of the human digestive tract» (Van der Waaij D., Heidt P.J.,j
162. Rusch V.D., Gebbers J.О eds.) p.3-5, 1990, Herborn, Germany.
163. Preyfuss A., Speak J., Bemal S. Localization of radiolabeled SM3 monoclonal antibody to small-cell Lung Cancer Tumors //Hybridoma, -1988, v. 7, - № 1, - p. 1-6.
164. Papsidero L., Croghan G., Connel M. Monoclonal antibodies (F36/22) to human breast carcinoma. //Cancer Res., -1983, v.43, -p. 1741-1747.
165. Pulverer G., Ко H.L., Roszkovski W. et al. Digestive tract microflora liberates low weight peptides with immunotriggering activity. // Zbl. Bact, 1990,- v.372,- p.318-327.
166. Pye G., Evans D.F., Ledingham S.J. et al. Gastrointestinal intraluminal pH in normal subjects and those with colorectal adenoma or carcinoma. // Gut, 1990, - v.31, - p.1355-1358.
167. Rasic J.L. The role of dairy foods containing bifido- and acidophilus bacteria in nutrition and health. //N. Eur. Diary J. -1983, v. 4, -p.80-88.
168. Rhodes J.M., Colonic mucus and mucosal glycoproteins: the key to colitis and cancer. // Gut,- 1989, v.30,- p. 1660-1666.
169. Rodeck U., Herlyn M., Leander K. et al. A Mucin Containing the X,Y and H Type 2 Carbohydrate Determinants is Shed by Carcinoma Cells. //Hybridoma,-1987,- v.6,-№4,- p.389-396.
170. Roddy B.S., Weisburger J.H., Wynder E.L. Effect of high risk and low risk diets for colon carcinogenesis on fecal microflora and steroids in man. //J. Nutr. 1975,-v.l05,-p.-878-884.
171. Rughetti A., Turchi V., Ghetti C.A. et all. Human B-cell immune response to the polymorphic epithelial mucin. //Cancer Res.,1993,- v.53, p.2457-2459.
172. Russel V.W., Broun T.A., Radle J et al. Assay of human IgA subclass antibodies in serum and secretions by means of monoclonal antibodies. //J. Immunol. Methods. -1986, v.87, - №1, - p.87.
173. Safl F., Kohler I., Rotting E., Berg H. The value of tumors marker CA 15-3 in diagnosing and monitoring breast cancer A com-plective study with carcinoembrionic antigen. //Cancer, -1991, - v. 68, -p.574-582.
174. Sakai N., Kubota Y. Statistically Signification Expression of B-Myb In Clinically Advanced Human Renal-Cell Carcinomas. //Inter. J. Oncol., -1993, v 2, -13, - p.419-423.
175. Sasaki M., Peterson S. and Gerlani R. Monoclonal antibodies against breast epithelial cell surface antigens. //Hybridoma, -1983, -v. 2, -p.120.
176. Schiffrin T.J., Haller D., Delneste Y. et al. Probiotics and Intestinal Immune Function. //Gastroenterology Int.,- 1998,- v. 11,- p. 116-121.
177. Scheppach W. Effects of short chain fatty acids on gut morphology and function. //Gut,- 1994,- v.35, (suppl.l), S35-38.
178. Schulze F., Hartman S. Book: Gastrointestinale Mikroflora des Menschen, p.221-224, (Ed. J.A.Darth), Lipzig, 1980.
179. Sipponen P., Seppala K., Varis K. et al. Intestinal metaplasia with colonic type sulfomucins in the gastric mucosa; its association with gastric carcinoma. //Acta Pathol. Microbiol. Scand.,- 1980,- v.88, -p.217-244.
180. Smith C.B., Purcell R.H., Bellanti J.A. et al. Protective effect ofantibody to parainfluenza type 1 virus. //N.Engl.J.Med., -1966, v.275, -p.1145-1152.
181. Stacker G., Thompson C., Nigel P. et al. Detection of Mamary Serum Antigen In Sera from Breast Cancer Patients Using Monoclonal Antibody 3E 1.2.//Cancer Res. -1988, v 48, - p.7060- 7066.
182. Stahli Ch., Caravatti M., Aeachbacher M. et al. Mucin-like carcinoma associated antigen defined by three monoclonal antibodies against different epitopes. //Cancer, -1988, R88., - v.48, - p.6799-6802.
183. Swallow D.M., Gendler S, Griffiths B. et al. The human tumour-associated epithelial mucins are coded by an expressed hypervari-able gene locus PUM. //Nature (London), -1987,- v.328,- p.82.
184. Swallow D.M., Gendler S., Griffiths B. et al. The hypervariable gene locus РЕМ, which codes for the tumour-associated epithelial mucins, is located on chromosome lq21-24. //Ann.Hum.Genet. 1987,-v.51,- p.289.
185. Tamura Z. Nutriology of bifidobacteria. //Bifidobacteria and Microflora. -1983, v.2, - p.3-16.
186. Thompson M.H. Microbial Metabolism in the Digestive Tract. // Scand.J.Gastroent. -1984, v. 19 -(Suppl.104), - p.77-89.
187. Tijssen P. Practice and theory of enzyme immunoassays. Elsevier, Amsterdam -1985, 223-241.
188. Tobias R., Rothwell C.,Wagner J. et al. Development and evaluation of a radio-immunoassay for the detection of a monoclonal antibody defined breast tumour- associated antigen 115D8/DF3.// Clin.Chem.,- 1985,- v.31,-p.986.
189. Tomasi T.B., Tan E.M., Solomon A. et al. Characteristics of animmune system common to certain external secretions. // J.Exp.Med. 1965, -v.121, p.101-142.
190. Van de Wiel-van Kemenade E., Ligtenberg M.J.L., de Boer A.J. et al. Episialin (MUC1) inhibits cytotoxic lymphocyte-target cell interaction. //J.Immunol. 1993, -v. 151,- p.767-776.
191. Van Saene H.K.F., Van der Waaij D. A novel technique for detecting IgA coated potentially pathogenic microorganisms in the human intestine. //J.Immun.Meth., -1979, v.30, - №1, - p.87-96.
192. Vikha G.V.,Yakubovskaya R.I., Karmakova T.A., Barishnikov A.U., Monoclonal Antibody for Diagnosis of Epithelial Origin Tumors. //Histochem.J. 1992,- v.24,- p.547.
193. Vincent C., Revillard J.-P. Sandwich-type ELISA for free and Bound secretory component in human biological fluids. //J.Immun. Meth. 1988, v.106, № 2, p.153-160.
194. Walker R. Immunomodulation of the intestinal mucosa: a challenge and an opportunity. //In «Immunomodulation of the Gastrointestinal mucosa». Old Harborn University Seminar. -1998
195. Woodcock N.P., Robertson J., Morgan D.R. et al. Bacterial translocation and immunohistochemical measurement of gut immune function. //J. Clin. Pathol., 2001, v.54, - p.19-23.
196. Zeilkman I., Hjerten S. Protein Immunoassay based on agluti-nation of antibody-coated ferric oxide particles, //J. Immunolog. methods,-1988,-v. 114, -p.267-273.
197. Zotter S., Philomena C., Hageman A. et al. Tissue and tumor distribution of human polymorphic epithelial mucin. //Cancer Rev., 1988, -v.il/12,-p.55-101.