Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Клинико-экспериментальное изучение особенностей иммунитета и усовершенствование терапии иерсиниоза

центральный научно-исследовательский институт

эпидел\иологии

АЛЕНУШКИ НА Татьяна Владимировна

КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ИММУНИТЕТА И УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕРАПИИ ИЕРСИНИОЗА

14.00.10— Инфекционные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

РГб од

- 5 дпр тз

На правах рукописи

Москва —1993

Работа выполнена в Московском медицинском стоматологическом институте им. Н. А. Семашко

Научные руководители:

доктор медицинских наук, член-корреспондент РАМН, профессор Ющук Н. Д.

доктор медицинских наук, ведущий научный сотрудник Ценева Г. Я.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Ильинский Ю. А.

доктор медицинских наук, старший научный сотрудник Шабалина С. В.

Ведущая организация — Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова

Защита состоится «<?/.» . '^ия- .... 1993 г. на // заседании специализированного совета Д 074.19.01 в Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии (111123, г. Москва, ул. Новогиреевская, За).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии.

Автореферат разослан « {К » .'^¡Ц'ц . < 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

Пименова М. Н.

Актуальность темы исследования.

В - настоящее время иерсиниоз составляет значительную часть инфекционной патологии и представляет серьезную проблему для здравоохранения.

До сих пор в отечественной и зарубежной литературе нет полной ясности о причинах своеобразия клинического проявления этой болезни, не решены вопросы патогенетической и этиотропной терапии, остаются невыясненными механизмы и причины формирования затяжных, хронических форм болезни [Дмитровский A.M., 1982; Покровский В.И. , 1983; Ющук Н.Д., Кареткина Г.Н., 1987, 1989; Leino R. et al. , 1987; Leirisalo-RepoM., 1988; SkurnikM., 1965; Walf-Watz, 1987].

Известно, что в развитии инфекционного процесса важное значение принадлежит вирулентности возбудителя и резистентности макроорганизма.

Так, показано, что Y.enterocolitica 03, как наиболее широко распространенный серовар (с более выраженными энтеротоксигенныыи свойствами), вызывает у больных преимущественно гастроэнтериты, энтериты, энтероколиты. A Y.enterocolitica 09 (с более выраженными инвазивными свойствами) способствует развитию энтероколитов с генерализацией инфекции [Дайтер А.В., 1987; Смирнов И.В., 1992; Ценева Г.Я., 1988; Cornells G., 1987; Ferrer М. et al, 1987, Skurnik M., 1985]. В работах В.I).Полоцкого и соавт. (1984) показано влияние вирулентных свойств иерсиний на своеобразие течения инфекции.

В последние годы заметно возросло внимание исследователей к изучению иммунитета при иерсиниозе, отмечающих при этом существенную иммунологическую перестройку организма [Вяльба Е.В., 1989; Малов И.В., 1988; Прокопенкова А.П., 1989; Романова С.Ю., 1990; Bechk Е. et al, 1978; Merilahti-Palo R. et al, 1991; Viitanen A. et al, 1991].

Ряд авторов считает, что длительное персистирование иерсиний и (или) их антигенов в организме, иммунопатологические изменения в Т и В системе приводят к развитию рецидивов инфекции, хронизации, осложнениям, что в дальнейшем индуцирует аутоиммунные процессы [Малов И.В., 1988; Granfors К. et al, 1986; Kekomaki R. et al, 1983; Vpfold L., 1985].

В связи с этим ведется поиск применения новых лекарственных средств, обладающих иммуномодулирующим эффектом.

В литературе имеются данные об успешном использовании Т-активина при иерсиниозе [Прокопенкова А.П., 1989]. Однако, учитывая тенденцию в применении иммуномодуляторов узконаправленного действия, синтетический пептид тимоген, ранее не применявшийся в лечении иерсиниоза, может оказаться перспективным.

Изложенное определило необходимость комплексного исследования патогенеза иерсиниоза с учетом биологических особенностей возбудителей и факторов специфической и неспецифической . резистентности макроорганизма.

Цель исследования - охарактеризовать клинико-патогенетические особенности иерсиниоза, обусловленного У .enterocoli.ti.ca 03 и 09 и определить возможность применения тимогена с лечебной целью.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать патогенетические особенности иерсиниоза в эксперименте, в зависимости от вирулентности возбудителей У.ег^егосоППса 03 и 09.

2. Изучить в эксперименте эффективность применения тимогена при иерсиниозе, обусловленном У.ег^егосо11Л1са 03 и 09.

3. Выявить особенности клинико-лабораторных данных у больных при иерсиниозе, обусловленном У.еп1егосоП1;1са 03 и 09.

4. Оценить в динамике иммунологические показатели, используя тесты I и II уровня, у больных иерсиниозом и выявить характерные особенности, связанные с сероварной принадлежностью.

Основные положения, выносимые иа защиту

1. Установленные различия в форме и тяжести течения иерсиниоза у экспериментальных животных равно как изменения в имунной системе обусловлены различиями биологических свойств возбудителя (вирулентностью и сероварной принадлежностью).

2. Экспериментально доказана эффективность тимогена при иерсиниозе. Его применение ослабляет поликлональный иммунный ответ, повышает неспецифическую резистентность, способствует быстрой элиминации возбудителей из организма.

3. Установлены клинические особенности течения генерализованной формы иерсиниоза, обусловленного возбудителями сероваров 03 и 09, у больных, проявляющиеся при ИУе 09, выраженным интоксикационным синдромом, полиорганностью поражений; а при ИУе 03 - слабым интоксикационным синдромом, полиорганностью поражений в сочетании с частым вовлечением в патологический процесс кишечника и почек.

4. Выявлены особенности динамики иммунологических показателей при ИУе 03 и ИУе 09, как тестами 1-ого, так и 11-ого уровней. Наиболее информативными оказались изменения субпопуляций: СБЗ и С04 у больных ИУе 09; СИЗ, СЫ, С08, СИЗ8, ЗГЗ, ИРИ у больных ИУе 03.

5. Клинико-экспериментальное сопоставление патогенеза иерсиниоза в зависимости от серовара возбудителя позволяет рассматривать У. епЪегосоШ1са 03 как возбудитель, способный вызвать более глубокие изменения иммунитета,

Научная новизна

Впервые на основании комплексного клинико-экспериментального исследования выявлены особенности течения иерсиниоза с учетом сероваров возбудителя. На основе полученных данных уточнены

механизмы развития инфекционного процесса, показано определяющее значение вирулентности возбудителя и резистентности организма.

Экспериментально обоснована эффективность применения тимогена при иерсиниозе.

С помощью отечественных моноклональных антител выявлены различия динамики субпопуляций лимфоцитов при иерсиниозе, обусловленном У.еп1егосоИ1;1са 03 и 09.

Сопоставление клинико-экспериментальных данных выявило своеобразие патогенеза иерсиниоза, обусловленного У.ег^егосоНиса 03, позволяющее рассматривать данный возбудитель как потенциально способный вызвать глубокие изменения иммунитета, приводящие к осложнениям, затяжному течению заболевания.

Практическая ценность работы.

На основании комплексного клинико-экспериментального исследования иерсиниоза, обусловленного сероварами 03 и 09 и углубленных иммунологических исследований тестами 1-ого и II-ого уровня существенно дополнены современные представления о патогенезе иерсиниоза.

Экспериментально определена эффективность применения иммуномодулирующего препарата тимогена.

Установлено, что для проведения эффективной терапии важно определение серовара-возбудителя. Особое внимание следует уделять серовару У.ег^егосоП^са 03, как потенциально способному вызывать глубокие изменения иммунитета, развитие аутоиммунных осложнений.

Показано, что изменения субпопуляций лимфоцитов (тесты II-ого уровня) при ИУе 03 и ИУе 09 в динамике заболевания информативно отражают тяжесть течения и прогноз инфекционного процесса.

Совпадающая тенденция при определении иммунологических показателей в динамике у больных ИУе 03 и ИУе 09 при оценке тестами 1-ого и II-ого уровня указывает на возможность использования в клинике тестов 1-ого уровня, как болеее доступных.

Воедреиие ■ практику

Исследование иммунитета у больных иерсйниозом (тесты I и II уровня) применяются во Второй клинической инфекционной больнице г.Москвы. Результаты и выводы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре инфекционных заболеваний ММСИ им.Н.А.Семашко. Материалы диссертации включены в методическое пособие по иерсиниозу для практических врачей.

Апроба1рм работы.

Материалы диссертации доложены на научно-практической конференции кафедры инфекционных заболеваний ММСИ им.Н.А.Семашко и

ЦНИИ эпидемиологии в 1991 году, ЦНИИЭМ им. Пастера (г.Санкт-Петербург, 1991), на обществе инфекционистов г.Москвы, 1992.

По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Объем диссертации.

Диссертация изложена на 116 страницах машинописи и включает введение, 5 глав, обсуждение, выводы, практические рекомендации, список основной использованной литературы. В работе представлено 9 таблиц и 8 рисунков. Основной текст изложен на 100 страницах. Указатель литературы включает 73 работы отечественных и 129 работ зарубежных•авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Моделирование нерсипноза на морских евнпках.

В работе использованы штаммы: У.епЪегосоНМса 03 №№ 354, 2950, выделенные от больных гастроинтестинальной формы иерсиниоза, а также штамм У.е^егосоИМса 03 И 2950а, полученный при культивировании штамма » 2950 на кальций дефицитной среде, т.е. его бесплазмидный производный; У.епЪегосоНМса 09 №Ж 121, 28, выделенные от больных генерализованной формы иерсиниоза. Все штаммы были предварительно охарактеризованы по основным факторам патогенности в лаборатории зооантропонозных инфекций НИИЭЫ им.Пастера г.Санкт-Петербурга. Так, штаммы У.епЬегосоИ<;1са 03 (№№ 354, 2950) в опытах на клетках НЕр-2 оказались наиболее энтеротоксигенными, способными к адгезии и слабоинвазивными. Штамм М 2950а был менее энтеротоксигеный, адгезивный и почти неинвазивный в сравнении с родительским штаммом. Штаммы У.еп1егосоНиса 09

121, 28) проявили выраженную адгезию и инвазию, интенсивно размножались в клетках НЕр-2, энтеротоксигенность бьша выражена незначительно'. Штаммы 2950, 354, 121, 28 обладали характерными для иерсиний, содержащих плазмиду вирулентности, свойствами: кальцпй зависимостью роста, способностью к аутоагглютинации, наличием связанных с плазмидой агглютиногенов, чем отличались от штамма № 2950а.

Анализ препаратов ДНК из штаммов №* 2950, 354, 121, 28 и № 2950а позволил выявить у первых 4 штаммов плазмиды с мол. массой 45-47 ГО (РТС)

Экспериментальные исследования проводились в лаборатории зооантропонозных инфекций НИИЭМ им.Пастера г.Санкт-Петербурга под руководством доктора мед.наук Г.Я.Ценевой.

В опытах использовали морских свинок массой 250-400 г, самцов, которым перорально вводили 3*109 микробных клеток иерсиний. Животных исследовали в динамике инфекционного процесса на 3, 6, 9, 14, 21, 28 сутки. Генерализацию инфекции определяли по результатам

количественных посевов гомогенатов мезентериального лимфоузла, кишечника, печени, селезенки, почки по методике Т.А.Авдеевой в модификации Г.Я.Ценевой и соавт., 1986.

Использовано 235 морских свинок, разделенных на в групп: 1 -контрольная - интактные животные (20 экз.), 2 - животные, зараженные штаммами Y.enterocolitica 03 »2950 (30 экз.) и №354 (30 экз.); 3 -животные, зараженные штаммом Y.enterocolitica 03 №2950а (15 экз.); 4 - животные, зараженные штаммами Y.enterocolitica 09 №121 (30 экз.) и №28 (30 экз.); 5 и 6 - группы животных (по 40 экз.), инфицированные', соответственно, иерсиниями сероваров 03 и 09, которым вводили тимоген в дозе 10 мкг/кг веса в течении 4 дней по одной инъекции в мышцу бедра на 2-й день после заражения. У всех животных в динамике инфекционного процесса в указанные сроки вскрытия исследовали показатели иммунитета в крови, тимусе, селезенке, лимфоузле.

Методы оценки показателей иммунитета.

Исследование показателей клеточного, гуморального иммунитета, неспецифическогй резистентности организма морских свинок включало:

1. Определение процентного содержания Т-лимфоцитов в органах иммунитета - тимусе, селезенке, лимфоузле в реакции розеткообразования с эритроцитами зайца (E-P0).

2. Определение процентного содержания В-лимфоцитов в органах иммунитета - тимусе, селезенке, лимфоузле в реакции розеткообразования с ЕАС - комплексом (EAC-P0).

3. Определение процента миграции лейкоцитов переферической крови (функциональная активность Т-лимфоцитов) в реакции торможения миграции лейкоцитов с Конквнавалином-А- PTMJI с Кон-А.

4.Определение процента фагоцитоза (способность нейтрофилов поглощать частицы латекса в латекс-тесте.

5. Определение специфических антител в сыворотке крови в реакции агглютинации (РА), с корпускулярным антигеном - иерсиний с дифференциацией иммуноглобулинов по классам.

6. Определение в крови общего количества лейкоцитов.

Животных забивали под эфирным наркозом, извлекали тимус, левый паратрахеальный лимфоузел, селезенку, тщательно очищали органы от жира, отмывали в 0,9% растворе NaCl от примесей крови, подсушивали на фильтровальной бумаге и взвешивали. Затем органы гомогенизировали в стеклянном гомогенизаторе в 5,0 мл среды 199 с последующей фильтрацией через капроновый фильтр [Пручанский А.В., 1988].

В сухую пробирку вносили 0,38 мл ЗХ раствора уксусной кислоты и 0,02 мл взвеси клеток, тщательно перемешивали и каплю взвеси вносили в камеру Горяева с целью вычисления концентрации лимфоцитов в 1 мл. Для создания необходимой концнтрации (2,2х10б в 1 мл) лимфоцитов добавляли Среду 199.

В полученных суспенциях определяли E-РОК, используя эритроциты зайца, по методике Jondal М. et al, 1972; ЕАС-РОК по методике Blanco С. et al, 1970.

Абсолютное количество лимфоцитов, Е-РОК и ЕАС-РОК в тимусе, селезенке, лимфоузле вычисляли путем определения удельной концентрации клеток в этих органах (тыс./мг).

Реакцию торможения миграции лейкоцитов (PTMJI) определяли капиллярным методом (модификация Хавинсона В.К., Немченко Н.С., Морозова В.Г., 1986). Для постановки реакции использовали капилляры из набора для определения С-реактивного белка (СРВ) с одинаковым внутренним диаметром. В капилляры до метки набирали из пробирки смесь, состоящую из гепаринизированной крови (0,4 мл) и митогена конканавалина А (КонА), растворенного в 0,1 мл физиологического раствора в концентрации 80 мкг/мл.

В контрольные капилляры набирали смесь крови и физиологического раствора. Капилляры запаивали с одного конца парафином и центрифугировали 5 минут при 500-800 об/мин. Затем каппиляры в вертикальном положении помещали на 24 часа в термостат при 37"С. После инкубации учитывали результат реакции, определяя под микроскопом с помощью измерительного окуляра величину миграции основной массы лейкоцитов от границы эритроцитарнорго осадка в контроле и опыте, подсчитывали процент миграции.

Фагоцитарную активность лейкоцитов переферической крови оценивали по способности поглощать ими инертные частицы (использовали меламиноформальдегидный латекс размером 1,47 мкм, производства ВНИИбиологического приборостроения г.Москвы). Для постановки реации использовали отмытые в физиологическом растворе частицы латекса в концентрации 50-75 тыс./мкл. Затем инкубировали 15 минут при t 37"С 0,05 мл клеточной суспензии и 0,05 мл взвеси частиц латекса в среде 199. После центрифугирования и однократного промывания дистиллированной водой, подсчитывали фагоцитирующие нейтрофилы [Пинегин Б.В., 1990].

Специфические антитела в сыворотке крови определяли в РА с корпускулярным антигеном иерсиний, полученным из эталонных штаммов.

Дифференциацию иммуноглобулинов по классам проводили с помощью редуцента этантиола [Стоянова H.A., 1979].

В крови определяли общее количество лейкоцитов общепринятым методом.

Общая характеристика обслсдовашшх больных.

Под нашим наблюдением находилось 70 больных генерализованной формой иерсиниоза, смешанный вариант течения средней степени тяжести в возрасте от 16 до 55 лет. Из них было 55 мужчин и 15 женщин.

Лечение и обследование больных проводилось на базе 2-й клинической инфекционной больницы г.Москвы (главный врач - кмн В.Т.Абубакиров) с 1989 по 1991 гг.

Диагноз иерсиниоза ставился на основании клинико-эпидемиологических данных и результатов серологического и бактериологического исследований.

В работе использовали клиническую классификацию иерсиниоза, разработанную В.И.Покровским и соавторами (1986).

Для подтверждения иерсиниозной этиологии заболевания у всех больных осуществляли 2-х кратное бактериологическое исследование кала. В динамике (1 раз в 7-10 дней) брали кровь для выявления антител к иерсиниям в реакции агглютинации и непрямой гемагглютинации; 2-3 раза в течение болезни проводили исследование слюны, мочи и копрофильтратов на наличие антигенов реакцией коагглютинации (РКА).

Серологические и бактериологические исследования осуществлялись в бактериологической лаборатории 2 КИБ г.Москвы и лаборатории зооантропонозных инфекций НИИЭМ им.Пастера г.Санкт-Петербурга. Бактериологически диагноз иерсиниоза был подтвержден у 4 больных (5,7%) - выделены штаммы Y.enterocoitica 03.

Специфические антитела выявлены в РА в титрах 1:160 и выше у 55,7% больных, в РИГА в титрах 1:200 и выше у 34,3%, антигены иерсиний с помощью РКА определены у 68,6% больных. У 25% больных диагноз подтвержден только в одной реакции, у 63% - в двух и у 12% -в 3-х, соответственно. При этом иерсиниоз, вызванный Y.enterocolitica 09 - у 30 (42,9%), Y.enterocolitica 03 установлен у 40 больных (57,1%).

Обследование больных включало также использование общепринятых клинических и лабораторных методов, кроме того, все больные с кишечными проявлениями были обследованы на дизентерию, сальмонеллез, псевдотуберкулез. В анализируемых группах сопутствующие заболевания отсутствовали.

Лечение больных иерсиниозом включало: антибактериальную, десенсибилизирующую витаминотерапию.

Методы оценка показателей иммунитета тестами 1-ого и 11-ого уровней.

Исследование показателей иммунитета включало: .

А - тесты I уровня

1. Определение процентного содержания Т-лимфоцитов в реакции

розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РО),

2. Определение процентного содержания В-лимфоцитов в реакции

розеткообразования с ЕАС-комплексом (ЕАС-РО),

3. Определение. поглотительной способности нейтрофилов частиц

латекс - процент фагоцитоза;

В - тесты II уровня

Методом проточной цитометрии с помощью моноклональных антител (МАТ) к дифференцировочным антигенам Т и В-лимофитов определено процентное содержание субпопуляций лимфоцитов:

1. Т-лимфоциты - (CD3),

2. Т-лимфоциты хелпер-индукторы - (CD4),

3. Т-лимфоциты супрессор-цитотоксические клетки (CD8),

4. Индекс иммунорегуляции (CD4/CD8),

5. Активированные В-клетки (CD38),

6. Активированные Т-клетки и В-клетки (HLA-Dr),

7. В-лимфоциты (3F3).

Иммунологические исследования проводили в лаборатории клинического отдела ЦНИИЭ МЗ РФ (зав.- профессор В.П.Машилов) и института иммунологии МЗ РФ (зав.- профессор Б.В.Пинегин).

Выделение лимфоцитов проводили стандартным методом из 10 мл цельной гепаринизированной крови на градиенте фикол-пак (Pharnacia -Швеция). После 3-х процедур отмывания в среде 199, количество лимфоцитов доводили до 2х10бкл/мл.

Определение процентного содержания Т и В-лимфоцитов проводили в реакциях розеткообразования с эритроцитами барана и комплексом ЕАС (Институт экспериментальной гематологии и биотехнологии) по Jondal М. et al. в модификации Б.В.Пинегина и соавт., 1990. Постановка латекс-теста осуществлялась по методике, описанной выше. Субпопуляционный состав лимфоцитов определяли с помощью МАТ (Научно-производственное объединение "Медбиоспектр"): ИК0-90 против антигена CD3 (зрелых Т-клеток); ИКО-86 против CD4 антигена (Т-хелпер-индукторов); ИКО-31 против антигена CD8 (Т-супрессор-цитотоксических клеток); ИК0-20 против CD38 (антигена активированных В-клеток, ЕК -клеток, моноцитов, плазматических клеток); НКО-1 против HLA-Dr (антигена В-клеток и активированных Т-клеток); ИКО-18 против 3F3 (антигена В-лимфоцитов). В качестве вторых антител использовали антитела к Ig.G мыши, меченые FITC (Sigma, США).

Подсчет проводили на проточном цитометре "Epix" (Франция).

Процент актвизированных Т-лимфоцитов вычисляли по формуле: HLH-Dr - В-клетки > 2-4%.

Статистическая обработка результатов исследования

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета "Statgraph" на компьютере "IBM РС/АТ-386"-.

Усредненные по каждой группе показатели представляли в виде Mtra (п), где п - количество человек (животных) в группе.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

В результате экспериментальных исследований установлены различия в форме и тяжести течения иерсиниоза у морских свинок, зараженных Y.enterocolitica 03 и 09, связанные в значительной степени с проявлением их основных патогенных свойств.

Так, течение инфекции, вызванное штаммами Y.enterocolitica 03 (наиболее энтеротоксигенные штаммы, содержащие плазмиду вирулентности) сопровождалось развитием локализованного процесса -

воспалительными изменениями в кишечнике и мезентериальных лимфоузлах.■ С третьих суток, прогрессивно к 6 суткам наблюдали полнокровие, • гиперемию кишечника, увеличение мезентерриальных лимфоузлов, регистрировали максимальную концентрацию возбудителей в этих органах (32х103 и 8х103 КОЕ/г, соответственно), а к 14-ым суткам иерсиний, не обнаруживали.

Течение инфекции, вызванное штаммами Y.enterocolitica 09 (наиболее инвазивные штаммы, содержание плазмиду вирулентности) характеризовалось развитием генерализованного процесса с развитием энтероколита, увеличением лимфоузлов, печени, селезенки, полнокровием паренхиматозных органов, милиарных абсцессов в печени и селезенке. Процесс протекал с диссеминацией возбудителя в органы и ткани. Максимальная концентрация иерсиний (2х103 КОЕ/г) отмечена в печени на 3-9 сутки, а в кишечнике (7х103 КОЕ/г) и мезентериальных лимфоузлах (2,2х103 КОЕ/г) на 3-9 сутки, к 28 суткам у животных возбудителей не обнаруживали.

Следует отметить, что пик инфекционного процесса (максимальная концентрация иерсиний в органах и тканях) соответствовал выраженности изменений в показателях иммунитета, для ИУе 03-6 суткам, а для ИУе 09 - 9-м. Реакция иммунной системы макроорганизма в эти сроки характеризовалась: снижением фагоцитарной активности нейтрофилов, причем при ИУе 03 менее выраженное (Р>0,05), чем при ИУе 09 (Р<0,05); развитием ГЗТ, причем при ИУе 03 она возрастает с 3-х суток к 14-м (34,4±4,7%, Р<0,05) и держится более длительно, нормализуясь лишь к 28 суткам, напротив при ИУе 09 развитие ГЗТ происходит более быстро, с пиком на 6 сутки (15,0±3,7%, Р<0,01) и начинает ослабевать, достигая нормальных показателей к 14 суткам; лейкоцитоз преобладал у животных с ИУе 09 (Р<0,05); увеличением количества лимфоцитов в органах иммунитета, а также числа Т и В-лимфоцитов (рис.1), причем в пиковые сроки показатели клеточного иммунитета для ИУе 03 и ИУе 09 не отличались по всем органам, кроме преобладающего в 2 раза числа В-лимфоцитов в тимусе у животных с ИУе 03. Гуморальное звено реагировало выработкой специфических антител, начиная с 3 суток при локализованном процессе иерсиниоза и достигая максимальных показателей к 9 суткам и с 6 суток к 21, соответственно при генерализованной форме.

Полученные характеристики поведения возбудителя в динамике инфекционного процесса в сочетании с изменениями в клеточном и гуморальном звене иммунитета отражают особенности течения патогенетических вариантов иерсиниозов, обусловленных возбудителями разной сероварной принадлежности. Что касается иерсиниоза, вызванного У.епЪегосо11Ъ1са 03, то, надо полагать, что описанный нами вариант характеризует одно из клинико-патогенетических проявлений иерсиниоза этого серовара.

,В результате экспериментов выявлен существенный факт - в разгар инфекционного процесса в тимусе выявлено максимальное количество В-лимфоцитов. В норме в тимусе В-лимфоциты присутствуют в ' кортикомедуллярной зоне, периваскулярном пространстве до 1% (Ярилин

А. А. и соавт., 1990), что совпадает с нашими данными определения В-лимфоцитов в норме. Исследователи считают, что В-клетки играют роль во внутритимусиой селекции Т-клеточного репертуара, формировании толерантности к собственным антигенам (Jan P.A. et al, 1978; Hofmann W.S. et al, 1988; Zoeller M., 1990). Описание В-лимфоцитов в тимусе при инфекционной патологии нами не найдено. Однако, в работах F.Dumont et al. (1985) показано, что при старении мышей (NZB К SYL/F^) (9-12 мес.) в тимусе обнаружена значительная продукция В-клеток, что расценивается исследователями как проявление аутоиммунного процесса. Следовательно, можно предположить, что В-клетки в тимусе в наших исследованиях - следствие аутоиммунных реакций. Учитывая, что в тимусе присутствуют гетерогенные антигены тканей организма (Белецкая Л.В., 1980, 1986; Гнездицкая Э.В. и соавт., 1984), а антигены Y.enterocolitica известны как перекрестнореагирующие антигены тканей, вызывающие аутоиммунные расстройства (Малов И.В., 1988; Bech К. et al, 1977; Heyma P. et al, 1984; Larsen J.H., 1987), можно допустить, что поликлональная стимуляция иммунной системы вызвала нарушение гематотимического барьера, способствовала развитию аутоиммунных реакций, что привело к мощной клеточной пролиферации, усиленным клеточным реакциям, напряжению ' защитных сил организма. Не исключено, что прицельное определение субпопуляций Т-лимфоцитов, классов и подклассов иммуноглобулинов в тимусе, выявило бы снижение числа Т-супрессоров, появление наряду с повышением В-клеток наиболее повреждающих IgG, что более достоверно свидетельствовало о развитии аутоиммунных процессов в тимусе, в частности аутоиммунном тимите (Лямперт И.М., 1988). Надо полагать, что преобладание В-клеток при ИУе 03 в 2 раза по сравнению с ИУе 09, возможно свидетельствует о большей способности Y.enterocolitica 03 вызывать аутоиммунные процессы. Косвенно об этом же свидетельствует более длительное развитие ГЗТ при ИУе 03. В литературе имеются множественные указания на связь Y.enterocolitica 03 с аутоиммунными процессами (Тойванен А. и соавт., 1986; Bech К. et al, 1978; Korpela М. et al, 1986).

Учитывая преобладание в структуре иерсиниозов''1 ИУе 03, недостаточные сведения о патогенности данного микроба были проведены опыты по выявлению роли белков наружной мембраны, кодируемых плазмидой вирулентности, в иммунном ответе макроорганизма. Показано, что бесплазмидный производный штамма Y.enterocolitica 03 элиминируется из кишечника в течение 1-х суток (обнаружен в кишечнике в незначительной концентрации до 10^ КОЕ/г), при этом все изучаемые показатели иммунитета находились в пределах нормы. Отсюда следует, что приведенные данные подтверждают положение о полидетерминантной природе вирулентности возбудителя иерсиниоза, факторы патогенности которых контролируются как хромосомными, так и плаамидными генами (Skurnik М., 1985; Walf-Watz, 1987). Вместе с тем установлено, что остаточной вирулентности PYV" производного недостаточно как для инициации заметного инфекционного процесса, так и л".ч гоотвптетвуРмей иммунной перестройки при использовании данной

модели. Не исключено, что связанные с РУУ продукты необходимы для размножения' и выживания возбудителя в условиях макроорганизма, в частности, за счет снижения эффективности фагоцитоза. Ранее отмеченная устойчивость РУУ+ иерсиний к бактерицидному действию сыворотки крови, наряду с устойчивостью к фагоцитозу, может способствовать их селекции в условиях макроорганизма. Возможно с фагоцитозом в данном опыте связана быстрая элиминация бесплазмидных клонов.

Для более обоснованного использования иммуномодулирующих препаратов было решено дополнить полученные ранее данные об изменении клеточного состава иммунокомпетентных органов, факторов неспецифической и специфической защиты при экспериментальной инфекции, вызванной У.епЬегосоИ^са 03 и 09, сведениями о действии тимогена на развитие инфекционного процесса.

В результате проведенных исследований установлено коррелирующее влияние тимогена на иммунную систему, способствующее более легкому течению иерсиниоза у животных. Так, в данных опытах при ИУе 03 инфекционный процесс был ограничен 3 сутками. Лишь на этом сроке была обнаружена невысокая концентрация возбудителей (2x10^ КОЕ/г) в кишечнике без каких-либо видимых изменений в нем (против 14 суток при ИУе 03 без тимогена). При ИУе 09 инфекционный процесс был генерализованным, однако диссеминация возбудителей была у этих животных менее выражена и ограничена. Продолжительность инфекции до 14 суток (против 28 суток при ИУе 09 без тимогена). При этом концентрация иерсиний в органах была в 2-3 раза ниже, чем в вышеописанных опытах без применения тимогена. ГЗТ у животных с ИУе 03. получавших тимоген, не развивалась (диссеминация ограничена 3 сутками), а у животных с ИУе 09, получавших тимоген, ГЗТ быстро нарастала, усиливаясь к 9 суткам (16,0±3,3%, Р<0,01) - момент вывода возбудителя - и нормализовалась к 14 суткам. Общее количество лейкоцитов крови, показатель поглотительной способности нейтрофилов в данных группах животных были в пределах нормы, также снизилась интенсивность клеточных реакций в лимфоидных органах (рис.1). Специфические антитела не обнаруживались во все сроки исследования.

Исходя из определения действия тимогена как препарата, усиливающего неспецифическую резистентность, Т и В иммунный ответ, нормализующего хелперносупрессорное соотношение, ускорящего выработку специфических антител и, если расценивать иммунный ответ в вышеописанных опытах без применения тимогена, как адекватный дозе инфекта, без развития аутоиммунных реакций, то можно было бы предположить усиление клеточных реакций в опытах с тимогеном. Однако, расценивая клеточные реакции лимфоидных органов как интенсивные, с развитием аутоиммунных реакций, при применении тимогена, как усиливающего активность супрессорных клеток, можно ожидать ослабления аутоиммунных реакций, снижения интенсивности клеточных, что и получено в данных экспериментах. Одной из причин отсутствия выработки специфических агглютининов в сроки наблюдения у животных, получавших тимоген, можно объяснить тем, что тимоген

Рис.1

Динамика изменения числа Т- и В-лимфоцитов (кл/мл) в органах иммунитета у морских свинок при инфекционном процессе, вызванном: А - У.епЪегосо1Шса 03; Б - Y.enterocolitica 03 + тг.моген; 3 - V.епгегосо1Шса 09; Г - Y.enterocolitica 09 + т;:моген.

1 - т,::.:ус; 2 - селезенка; 3 - лимфоузел.

повысил сниженное количество Т-супрессоров, и, следовательно, блокирует передачу импульса В-клеткам для трансформации в плазматические клетки и синтеза иммуноглобулинов, что свидетельствует о возможном влиянии тимогена в нейтрализации аутоиммунных процессов.

Таким образом, проведенные исследования позволили раскрыть некоторые вопросы патогенеза иерсиниоза, обусловленного возбудителями разной вирулентности, и показали эффективность действия тимогена.

Полученные различия в развитии инфекционных процессов при иерсиниозах, вызванных возбудителями различной вирулентности и сероварной принадлежности, стимулировали проведение комплексных клинико-иммунологических исследований у больных иерсиниозом с учетом сероварной принадлежности возбудителя.

Под нашим наблюдением находилось 70 больных генерализованной формой иерсиниоза, среди них 40 человек с ИУе 03 и 30 - с ИУе 09.

Генерализованная форма ИУе 03 и ИУе 09 характеризуется выраженной полисиндромностью клинических проявлений. Однако, сопоставление клинико-лабораторных данных больных ИУе 03 и ИУе 09 выявило некоторые отличия. Так, у больных ИУе 03 лихорадочный период сопрововдался преимуществевнно субфебрильной температурой и длился около 2 недель, а у больных ИУе 09 чаще температура держалась на фебрильных цифрах продолжительностью около недели. Более выражены катаральные явления в зеве у больных с ИУе 09 - 70% против 47% у больных ИУе 03; в этой же группе преобладали атралгии - 96,6% против 50%, увеличение печени - 50% против 37%, менингиты. У больных ИУе 03 существенно чаще развивались диареи - 67% против 43% у больных ИУе 09, боли в правой подвздошной области 90% против 62%. У этой группы больных в период реконвалесценции чаще отмечали астеновегетативный синдром до 68% против 44% при ИУе 09, а также выявлено затяжное течение заболевания у 9 больных (22,5%) против 1 больного с ИУе 09. Лабораторные анализы являются отражением патологических процессов при иерсиниозе. Так, лейкоцитоз крови в разгар клинических проявлений был более выражен у больных с ИУе 09, лейкоцитурия чаще в 82% случаев (против 52%) вявлялась у больных с ИУе 03.

Таким образом, ИУе 09, генерализованной формы, у обследованных больных протекал более остро, с выраженным интоксикационным синдромом, органными поражениями, и в большинстве случаев заканчивался полным выздоравлением. Что согласуется с данными многих исследователей о тяжести генерализованных форм ИУе 09 (Валишин Д.Д., 1990; Романова С.Ю., 1990).

ИУе 03, генерализованной формы, как правило, протекал с умеренно выраженной интоксикацией, и, наряду с полиорганной патологией, преимущественно поражался кишечник и почки. У 22,5% больных отмечено затяжное течение заболевания, проявлявшееся патологоией суставов, дисфункциями кишечника, астено-вегетативном синдромом более 3 месяцев.

По мнению ряда авторов именно с У.епЪегосоП^са 03 связывают частые поражения кишечника, почек, затяжное течение иерсиниоза, аутоиммунные осложнения (ЕДегЬБеп Т., 1987; СгапГога К. et а1, 1988).

Реакция иммунной системы при иерсиниозе рассмотрена первоначально традиционно, как и другими исследователями, у всех больных, без учета сероварной принадлежности (40 чел.). А затем в группах больных с ИУе 03 (20 чел.) и ИУе 09 (20 чел.) выявлены иммунологические отличия иммунного ответа, связанные с различиями возбудителей.

На первых этапах для получения определенной информации об изменениях в иммунном статусе больных пользовались тестами 1 уровня: определение поглотительной способности нейтрофилов (латекс-тест), реакции розеткообразования. Выявлены общие изменения в иммунной системе у больных иерсиниозом в начале заболевания (1-2 нед.) и периоде реконвалесценции (3-4 нед.). Так, показатель поглотительной способности нейтрофилов крови в острый период заболевания достоверно был снижен (Р<0,05), на 3-4 неделе повышался до нижней границы нормы. Эти результаты согласуются с данными многих авторов об угнетении фагоцитарного звена иммунитета при генерализованной форме иерсиниоза (Романова С.Ю., 1990; ВиП11 .ГА. еЬ а1, 1989).

Характер изменений средних показателей клеточного иммунитета у больных иерсиниозом выявил снижение общего количества Т-лимфоцитов (Е-Р0К) (Р<0,01), более выраженное в начале заболевания и совпадающее с разгаром клинических проявлений; тенденцию в повышении В-лимфоцитов (ЕАС-Р0К) в период реконвалесценции.

Аналогичные изменения со стороны иммунной системы описали Дмитровский А.М. и соавт., 1982; Валишин Д.А., 1990; (¡(пеЬгвсЬ Л. еЪ а1., 1986.

Исследований иммунного статуса у больных иерсиниозом в связи с сероварными различиями возбудителя нами в литературе не найдено. Вместе с тем, в наших исследованиях выявлены следующие особенности. Поглотительная способность нейтрофилов крови в разгар клинических проявлений снижена как у больных с ИУе 03, так и с ИУе 09, однако процент фагоцитоза у больных ИУе 09 в этот срок существенно ниже (Р<0,05), что связано, возможно, с большей токсичностью возбудителя У .е^егосоШлса 09 (цитотоксин) и большей выраженностью интоксикационного синдрома в клинике у больных. Не исключено, что У.епЪегосоППса 09 более чем Y.enterocolitica 03 ингибирует фагоцитоз. На; 3-4 неделе болезни процент фагоцитоза у больных ИУе 03 остается без изменения (нижняя граница нормы), напротив у больных ИУе 09 отмечается повышение данного показателя, также достигает нижней границы нормы.

Средние показатели клеточного иммунитета у больных ИУе 03 и ИУе 09 представлены следующими изменениями: общее количество Т-лимфоцитов (Е-РОК) на 1-2 нед. заболевания более снижено у больных ИУе 03 (Р<0,01), чем у больных ИУе 09 (Р>0,05), на 3-4 нед. у больных ИУе 09 отмечена нормализация показателей, напротив - у

Таблица 1.

Показатели клеточного иммунитета у больных иерсиниозом, вызванным >'-еп1егосоШ1еа 03 и 09, М+гп

Иуе 03 Группы больных Иуе 09 «

1-2 Сроки исследования 3-4 (нед.) 1-2 3-4 Контроль

"г.'.гло исследований 13 13 15 16 12

количество ."«"•ЙКОЦИТОВ (х10я/л) 8,05±0,75* 6,9±0,69 10,1±1,1"' 6,8±0,42 6,3±0,3

ОП-^р.р. количество (хЮн/л) абс.1,64*0,18 %20,4±2¡4* * абс.1,7±0,21 %24,7±2,0 абс.2,0±0,23 %20,4±3,8" абс.1,78±0,2 абс.1.94±0,31

Т-л;:м1'Оцить! Е-РОК (:<10я/л) абс.0,86±0,075*"" 5561,9±2,7* абс. 1,05±0,013""" %62,0±3,4* • абс.1,14±0,17 %64,4±2,3 ■абс. 1,32±0,16 %72±2,86 • абс.1,36±0,07 %69±2,5

Е-лимфоциты р-лг: • рок >:10ч/л) абс .0,23±0,025 %16,6±1,1 абс.0,26±0,02 %15,5±1,6 а0с.0,25б±0,038 %16,5±0,76 абс.0,264+0,038 •%15,5±0,9 абс . 0,24*0,05 %12,3±1,4

т*

Р • достоверность различий: " - с контролем;

' - р<0,05 '* - р<0,02 *•• - Р<0,01 --------- р<0,001

• - между показателями Иуе 03 и Иуе 09

• - р<0,05

Таблица 2.

Субпопуляция лимфоцитов у больных иерсиниоэом, вызванным у.епЪегосоПМса 03 и 09 (М±т)

Группы больных Т.епЬегосо1Шса 03 У.еп1^госо1Н1са 09 Контроль

12 Сроки исследования 3-4 (нед.) 1-2 3-4

1. (109/л) 7,710,8 . 9.8*0,5 8,5710,6' 7.4210,4 6,310,3

Абсолгтное 1,5710,15 1,7810.11 1,7910,1 1,9810,2 1,9410,31

содержание X 24,112,2 X 26,712,4 X 2112,2' X 28,811,8 X 30,8712,7

лимфоцитов

СГЭ ■6с.0,9510,14" абс.1,010,11" абс.0,9910,079'" абс.1,210,08 абс.1,4910,14

(х109/л) X 55,911,3' X 80,812,3 X 59,312,8 X 83,512,5 X 62,1612.64

(п-10) (п-14) (П-12) (П-8) (п-12)

СМ абс.0,610,13' абс.0,5й,086*"' абс.0,5910,049"" абс.0,7210,048'"> абс.0,910.04

(хю9/л) * 33,312,«" X 35,212' X 40,711,8-" X 40,010,9

(п-10) (п-11) (п-12) (П-8) (п-12)

СРЗ абс.0,4410.053'" абс.0,4910,088" абс.0,48810,05 абс.0,610,035

(х109/л) X 22,211,9" X 30,212.5 X 2712 X 2713 X 28.410,93

(п-10) (п-11) (П-12) (П-8) (п-12)

СР4/СС8 1.5 1,0 1,3 1,48 1,4510,5

С038 абс.0,4410,047' абс.0,5110.093 абс.0,48410.115 абс.0.54810,13 абс.0,7510,14

(х109/л) X 2512,7 X 38,316.5 X 33.817,5 X 30.717',5 X 34110

(п-10) (п-8) (п-8) (п-8) !п-12)

ни-ср абс.0,2610,037 абс.0,210,64 абс.0,24310,72 абс.0,3510,058 абс.0,310,03

(х10э/л) X 16,112,0 X 15,212,3 X 1714,4 X 19,814,4 X 1216

(п-10) (п-8) (П-9) ; (п-8) (п-12)

згз абс.0,09510,015"' абс.0,1910,04 абс.0,17210,03' абс.0,23310,043 абс.0,1810,03

(х109/л) X 6.210,96 X 12,512,3 X 11,812,1 X 1313,2 X 8,513,5

(п-10) (п-12) (п-12) (п-8) (п-12)

Р - достоверность различия: с контролем между показателями ИУе 03 и ИУе 09

- р<0,05 • - р<0,05

- р<0,02 •• - р<0,02 - р<0.01 *•• - р<0,01 - р<0,001

больных ИУе 03 количество Т-лимфоцитов сохранялось монотонно низким (Р<0,01); В-лимфоциты (ЕАС-РОК)-имеют тенденцию к повышению на 3-4 неделе заболевания в обоих группах, что свидетельствует о более существенных изменениях клеточного иммунитета у больных ИУе 03 (у 4 больных (20%) этой группы в последующем сформировалось затяжное течение заболевания).

Выявив общие изменения иммунологических показателей у больных с иерсиниозом и особенности, связанные с сероварными отличиями, дальнейшие исследования были сориентированы на изучение субпопуляций лимфоцитов с тем, чтобы глубже понять механизмы иммунопатогенеза. В доступной литературе встретились единичные работы по изучении субпопуляций лимфоцитов при иерсиниозе (Прокопенкова А.П., 1939; Quietzch J. et al, 1986).

С этой целью были использованы тесты II уровня. Также первоначально составлено впечатление об общих изменениях субпопуляционного состава лимфоцитов у всех больных, иерсиниозом (30 чел.), затем с учетом сероварных различий ИУе 03 (20 чел.) и ИУе 09 (10 чел.). Результаты представлены в таблицах 1 и 2.

Анализируя результаты иммунологических показателей (табл.1) в общей группе больных, можно заключить, что клеточный иммунитет реагирует на инфекцию динамичным снижением Т-клеток, супрессор-цитотоксических клеток и более стойким снижением популяций хелпер-индукторов. Центральная роль в индукции иммунного звена, его регуляции принадлежит Т-хелпер-индукторам. Нормальный их уровень и функциональная активность ведут к формированию цитотоксических Т-клеток, повышают активность киллеров, цитотоксическуп активность макрофагов, а хелперное влияние на В-клетки приводит к их пролиферации и синтезу специфических антител, которые связывают антигены и способствуют элиминации возбудителя. По нашим данным в сроки исследования (1-4 нед.) можно лишь констатировать факт снижения Т-хелпер-индукторов. Однако, косвенные признаки повышения Т-клеток и Т-супрессор-цитотоксических (а популяция CD8 может увеличиваться за счет цитотоксических клеток), пула В-клеток, позволяют предположить положительную динамику иммунологиеских изменений. Возможно при оценке функциональной активности CD4. в период 3-4 недели выявили бы ее повышение, а при исследовании в последующие сроки восстановились бы и количественные показатели. Снижение CD8 в остром периоде заболевания, а также индекса иммунорегуляции на 3-4 нед. можно объяснить только после анализа субпопуляций лимфоцитов в группах ИУе 03 и ИУе 09.

Особенности иммунологических показателей у больных с разным» сероварами возбудителей были выявлены реакциями розеткообразования И, также, с помощью моноклональных антител (табл.2). В обоих группах на 1-2 нед. заболевания снижены Т-клетки, хелпер-индукторы, супрессор-цитотоксические клетки, В-клетки, повышены активированное Т-клетки, однако у больных ИУе 09 на 3-4 неделе нормализуются все показатели и индекс иммунорегуляции повышается от 1,3 (1-2 нед.) до 1,48 (3-4 нед.), а у больных ИУе 03 отмечена тенденция к поЕ-.тан;:п

Т-лимфоцитов, супрессорцитотоксических клеток, хелпер-индукторы остаются монотонно снижены, повышаются В-клетки, индекс иммунорегуляции понижается от 1,5 (1-2 нед.) до 1,0 (3-4 нед.), а снижение индекса иммунорегуляции ниже 1,0 свидетельствует о развитии иммунодефицитного состояния.

Таким образом, иммунологические показатели отражают динамику заболевания. Для ИУе 09 характерно более острое течение инфекции, с выраженной интоксикацией и более быстрое выздоровление. А у больных ИУе 03 анализ субпопуляций лимфоцитов (на 1-4 нед.) свидетельствует о глубоких нарушениях в системе иммунитета. Монотонно низкие показатели CD4, снижение CD8, повышение пула В-клеток на 3-4 нед., могут служить поводом для развития аутоиммунных процессов. В группе больных с ИУе 03, обследованных с помощью МАТ, 5 человек (25%) имели затяжное течение болезни. Причем, тесты 1 уровня позволили выявить такие же изменения для больных ИУе 03 и ИУе 09 - это медленная динамика восстановления Е-Р0К и ЕАС-Р0К, незначительное снижение процента фагоцитоза у больных ИУе 03 и более существенное изменение данных показателей на 1-2 нед. болезни с последующим восстановлением на 3-4 нед. у больных ИУе 09.

Вышеизложенное подчеркивает значимость проведения анализа иммунологических показателей у больных иерсиниозом в связи с учетом серовара возбудителя. Большее внимание должно уделиться больным с ИУе 03, т.к. выявлены более глубокие изменения иммунитета, потенциальная возможность развития аутоиммунных осложнений.

На основании представленных выше материалов можно сопоставить данные клиникоокспериментальных изысканий.

Прежде всего следует отметить, что в эксперименте использованы штаммы Y.enterocolitica 03, выделенные от больных гастроинтестинальной формой иерсиниоза, энтеротоксигенные, которые на модели морских свинок также вызвали локализованное поражение кишечника и мезентериальных лимфоузлов. А в клинике обследованы больные ИУе 03 с генерализованной формой инфекции. Возможно причиной были инвазивные штаммы Y.enterocolitica 03, а возможно ослабленная резистентность больных на момент встречи с возбудителем.

Вместе с тем, можно выделить ряд особенностей, характерных для развития этой инфекции у экспериментальных животных и больных людей. Несмотря на полиорганность поражения, свойственную генерализованной форме, преимущественно у больных проакался кишечник, отмечались боли в правой подвздошной области, частые диареи. Как у больных, так и у животных повышение лейкоцитов в острый период было в пределах верхних границ нормы, поглотительная способность нейтрофилов снижена не существенно. А в клеточных реакциях тимуса выявлено повышение В-клеток (в 2 раза выше, чем при ИУе 09), предположительно свидетельствующее о развитии аутоиммунных реакций, у больных резко сниженное число CD4 и CDS; ИРИ до 1,0, 'что позволяет сурить о развитии иммунодефицита, у 25% из них отмечено затяжное течение иерсиниоза.

Более инвазивные штаммы Y.enterocolotica 09, изолированные от больных генерализованной формой иерсиниоэа и у животных вызвали генерализованный процесс с диссеминацией микробов в паренхиматозные органы. У больных ИУе 09 также отмечена полиорганность поражений, лабораторными анализами зафиксированы изменения в печени, почках. Лейкоцитоз в острый период высокий как у животных, так и больных. Поглотительная способность нейтрофилов существеннно снижена, более, чем в группах животных и больных с ИУе 03. Изменения клеточных реакций в иммунокомпетентных органах у животных выраженные. У больных изменение клеточных показателей крови в остром периоде сменяется их нормализацией, что совпадает с клиническим . выздоровлением.

Таким образом, сопоставление клинико-экспериментальных данных позволило выявить общие закономерности развития инфекции как у животных, так и у больных.

В заключение следует отметить, что изучение вопросов патогенеза иерсиниоза в эксперименте и клинике подчеркивает важное значение патогенности сероваров Y.enterocolitica 03 и 09 и важную роль иммунной системы в развитии инфекции.

ВЫВОДЫ

1. Генерализованная форма ИУе 09 у больных характеризуется более выраженным интоксикационным синдромом, поражением печени; для генерализованной формы ИУе 03 характерно более частое поражение кишечника и почек, лейкоцитурия.

2. У больных ИУе 09 и ИУе 03 при оценке иммунологических показателей как тестами I, так и II уровня имеет место в острый период угнетение показателей клеточного иммунитета. Наиболее информативными являются изменения субпопуляций CD3 и CD4 у больных ИУе 09; CD3, CD4, CD3, CD38, 3F3, ИРИ у больных ИУе 03.

3. При моделировании иерсиниоза у морских свинок, зараженных Y.enterocolitica сероваров • 03 и 09, различия в форме и тяжести течения связаны с проявлением основных патогенных свойств возбудителей (инвазивность и энтеротоксигенность).

4. Штамм Y.enterocolitica 03, не содержащий плазмиду вирулентности, у инфицированных животных не вызывает развития инфекционного процесса и иммунного ответа.

5. Реакция иммунной системы и экспериментальных животных характеризуется поликлональным иммунным ответом со снижением показателей неспецифической резистентности, развитием ГЗТ, выраженными клеточными реакциями лимфоидных органов, аутоиммунными реакциями, активной выработкой агглютининов и ее максимальное проявление совпадает с выраженностью инфекционного процесса.

6. Тимоген у экспериментальных животных сказизает иммунорегулирующее влияние, способствуя более легкому точен:*.» иерсиниоза, быстрой элиминации возбудителя.

7. Клинико-экспериментальное сопоставление патогенеза иерсиниоза в завивимости от серовара возбудителя позволяет рассматривать Y.enterocolitica 03 как возбудитель, потенциально способный вызвать глубокие изменения иммунитета, приводящие к затяжному течению заболевания, осложнениям.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Для проведения эффективной терапии иерсиниоза следует определять серовар возбудителя; особое внимание необходимо обращать 'на серовар Y.enterocolitica 03, как потенциально способный вызвать более глубокие '• изменения иммунитета, приводящие к развитию осложнений.

2. Исследование субпопуляций лимфоцитов периферической крови может быть использовано для прогнозирования течения патологического процесса при иерсиниозе. Причем, наиболее информативными оказались изменения субпопуляций CD3 и CD4 у больных ИУе 09 и CD3, CD4, CD3, CD38, 3F3, ИРИ у больных ИУе 03.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ.

1. Клинико-биохимическая характеристика синдрома гепатита у больных иерсиниозом / С.Э.Юдина, Э.Ы.Осна, Б.И.Хаимзон, Т.В.Аленушкина // Тез. докл. Всесоюзной научно-практической конференции "Иерсиниозы". - Владивосток, 1989. - С. 80-82.

2. Аленушкина Т.В. Роль плазмиды вирулентности Y.enterocolitica в развитии инфекционного процесса у лабораторных животных // Тез. докл. 2-ой межреспубликанской конференции "Актуальные проблемы инфекционной патологии, клинической иммунологии и медицинской ■генетики". М. - Луганск, 1990. - С. 6-7.

3. Иерсиниоз и псевдотуберкулез / Т.В.Аленушкина, Л.В.Быстрякова, О.Н.Домашенко и др. // Под ред. Г.Я.Ценевой. Метод, рекомендации для практических врачей - С.-Петербург, 1992.

4. Патогенные свойства возбудителя и иммунологические показатели при экспериментальной иерсиниозной инфекции / Н.Д.Ещук, Т.В.Аленушкина, И.В.Смирнов, Е.А.Воскресенская // Журн. микробиол. -будет опубликована в 1993г.

5.- Показатели иммунитета при экспериментальной иерсиниозной инфекции, вызванной Y.enterocolitica 03 и 09 / Н.Д.Ющук, Г.Я.Ценева, Т.В.Аленушкина, Л.Б.Куляшова // Журн. микробиол. - будет опубликована в 1993г.

6. Ющук Н.Д., Ценева Г.Я., Аленушкина Т. В. Эффективность применения тимогена при экспериментальной иерсиниозной инфекции, вызванной Y.enterocolitica 03 и 09 // Курн. микробиол. - будет опубликована в 1993г.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В РАБОТЕ.

ИУе 03 - иерсиниоз, вызванный Y.enterocolitica 03

ИУе 09 - иерсиниоз, вызванный Y.enterocolitica 09

PYU - плазмида вирулентности иерсиний

CD3 - Т-лимфоциты

CD4 - Т-лимфоциты хелпер-индукторы

CD8 - Т-лимфоциты супрессор-цитотоксические клетки

CD4/CD8 - индекс иммунорегуляции

CD38 ■. активированные В-клетки

HLA-Dr - активированные Т-клетки и В-клетки

3F3 - В-лимфоциты

Подписано в печать 199 jr._________3:ж. /бО Тир./¿УЗ

МАЛОЕ ПРЕДПРИЯТИЕ «ПЕТИТ»