Автореферат и диссертация по медицине (14.00.29) на тему:Клиническое значение иммунологического фенотипа неходжкинских лимфом

РГ8 ОД - 8 ОПТ 1996

На правах рукописи

Абдул Латиф Шахер Мухамед

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО ФЕНОТИПА НЕХОДЖКИНСКИХ ЛИМФОМ

14.00.29 — Гематология и переливание крови

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва — 1996

Р.абота выполнена в Московском областном научно-исследовательском клиническом институте (МОНИКИ).

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

доктор медицинских наук, профессор А. К. Голенков академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор В. Н. Шабалин

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

д. м. н. С. С. Бессмельцев,

д. м. н., профессор В. И. Мазуров

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ

Научно-исследовательский институт детской гематологии МЗМП РФ

Защита диссертации состоится «9,3 »_-

1996 г. в_Щ_часов на за^еданшГ диссертационного совета при Российском научно-.иоследовательском институте гематологии и гр а не ф уз и ол о ги и (г. Санкт-Петербург).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан «.%&-»-О %-1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

В. С. Быков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Исследованиями последних лет убедительно показано, что специфические черты фенотипа опухолевой клетки в основном являются устойчивым признаком.

Важность проблемы заключается не только в том, чтобы установить принадлежность опухоли к В- или Т-клеточной линии, но главным образом в том, чтобы определить специфический иммунологический фенотип, присущий конкретному гистологическому варианту НХЛ. Накопление подобной информации обеспечивает дальнейшее совершенствование иммунофенотипической классификации НХЛ, которая становится существенным дополнением к имеющимся гистологическим классификациям, а в дальнейшем может определять индивидуализацию терапевтических программ. Поиск стабильно воспроизводимых иммунофенотипических признаков опухолевой клетки при НХЛ представляется весьма важным с клинических позиций, так как фенотип может иметь прогностическое значение. В связи с этим представляется актуальным сопоставление клинических особенностей течения болезни с экспрессией дифференцировочных антигенов и установления их значимости в плане клинического прогноза.

Актуальной является проблема определения в крови лимфоцитов опухолевого клона по иммунологическому фенотипу с целью диагностики, а также иммунологического мониторинга, позволяющего оценивать глубину ремиссии и определять на ранних этапах рецидив заболевания. Накопленный в литературе материал по дан-•ным аспектам НХЛ (De Rossi et al, 1994; Morreti et al, 1994; Nakano et al, 1992; Eisterer W. et al, 1993) подчеркивает актуальность излагаемой проблемы, однако, многие ее аспекты остаются недостаточно изученными.

Цель работы. Изучить особенности антигенного состава лимфоцитов крови и опухолевых инфильтратов лимфатических узлов в криостатных срезах с использованием моноклональных антител к дифференцировочным антигенам лейкоцитов человека с учетом вариантов клинического течения неходжкинских лимфом.

Задачи исследования.

1. Изучить частоту В- и Т-иммунологических вариантов среди' мелкоклеточных, смешанноклеточных и крупноклеточных лимфом диффузного и фолликулярного гистологических типов.

2. Дать иммунофенотипическую характеристику различных гистологических вариантов неходжкинских лимфом.

3. Изучить клиническое значение экспрессии определенных дифференцнровочиых антигенов при неходжкинских лимфомах на основании сравнительной оценки результатов нммунофенотипиро-вания лимфоцитов крови и опухолевой ткани.

4. Изучить клиническое значение асинхронного и аберрантного фенотипов на основе идентификации коэкспрессии дифференциро-вочных антигенов на опухолевых клетках при неходжкинских лимфомах.

5. Изучить клиническое значение иммунофенотипического мониторинга неходжкинских лимфом по лимфоцитам крови в процессе программного противоопухолевого лечения.

Научная новизна. Установлено, что иммунологический фенотип опухолевой ткани при различных гистологических вариантах неходжкинских лимфом характеризовался определенными особенностями в основном в рамках В-клеточного фенотипа.

Фенотип лимфомы из мелких лимфоцитов отличался от фенотипов фолликулярной и смешанноклеточной лимфомы по типам экспрессии СБз, СО10, С071 и антигенам А-легких цепей иммуноглобулинов. Иммунологические фенотипы опухолевой ткани диффузной лимфомы из расщепленных клеток и смешанноклеточной лимфомы полностью совпадали, а фенотип крупноклеточного варианта отличался от других стабильной экспрессией СБ2о при слабой выраженности других антигенов.

Сформулировано понятие асинхронного и аберрантного фенотипов опухолевых клеток, основанное на идентификации коэкспрессии опухолевой клеткой антигенов другой клеточной линии или антигенов зрелой и незрелой фаз клеточной дифференцировки.

Дано клиническое толкование полученным результатам. Показана возможность с помощью тканевого иммунофенотипирования устанавливать трансформацию фолликулярной лимфомы в диффузную, по наличию клеток с опухолевыми маркерами в межфолликулярных зонах.

Научно-практическая ценность. Установлено, что иммунологическое фенотшшрование лимфоцитов крови и опухолевой ткани при НХЛ имеет важное клиническое значение и может использоваться для диагностики и прогноза течения заболевания.

Коэкспрессия опухолевыми лимфоцитами Т-клеточного антигена CD5 при В-клеточных лимфомах из мелких лимфоцитов является благоприятным прогностическим фактором. Двойная коэкспрессия CD5, CDs при данном типе лимфомы имеет неблагоприятный клинический прогноз.

Коэкспрессия CD3 при фолликулярных лимфомах коррелирует с тяжелым клиническим прогнозом.

Экспрессия CD10 и CD71 при смешанной клеточной лимфоме коррелирует с более короткой выживаемостью по сравнению с лимфомой из мелких лимфоцитов, в которой CD10 и CD71 антигены не представлены.

Иммунологический мониторинг опухолевого фенотипа лимфоцитов крови при лимфомах в процессе противоопухолевой химиотерапии позволяет оценивать избирательность противоопухолевого действия проводимого лечения, подтверждать факт ремиссии и диагностировать ранний (доклинический) рецидив болезни. Основные положения, выносимые на защиту.

1. Понятие аберрантного и асинхронного фенотипов опухолевых клеток при НХЛ как фактор клинического прогноза заболевания.

2. Диагностическое и прогностическое значение экспрессии CD19, CD20i HLA-DR, CD5, k/X, CD10, CD71 - антигенов при B-клеточных неходжкинских лимфомах.

3. Клиническое значение иммунологического мониторинга в процессе проведения противоопухолевой химиотерапии, а также идентификация минимальной остаточной опухоли и раннего (доклинического) рецидива.

Апробация диссертации. Основные положения работы доложены:

- на совместном заседании проблемной комиссии МОНИКИ и отделения клинической гематологии и иммунотерапии МОНИКИ,

- на 24 Международном конгрессе по экспериментальной гема-тологиии в г. Дюссельдорфе ФРГ в августе 1995 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 3 печатные работы.

Объем и структура диссертации. Работа представлена на. 103 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 таблицами и 2 рисунками; состоит из введения, 4 глав, заключения, выво-, дов, практических рекомендаций. Библиографический указатель включает 117 источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследовано 55 больных с различными гистологическими вариантами неходжкинских лимфом. Больные были в возрасте от 18 до 74 лет, средний возраст - 34 года. Мужчин - 34, женщин - 21 человек.

Все больные проходили полное клиническое исследование, необходимое для уточнения диагноза и стадии болезни.

Проводимое лечение включало программы противоопухолевой химиотерапии CHOP, CHOP-Bleo и реже CAP-BOP, COP-BLAM. В отдельных случаях дополнительно применяли хирургическое и лучевое лечение.

В качестве материала для гистологического исследования использовали биопсированные лимфатические узлы, биоптаты и нунктаты костного мозга а также ткани селезенки, кишечника, желудка, удаленных в момент оперативного вмешательства. Гистологическую классификацию болезни проводили согласно "Working Formulation of Non-Hodgkins lymphomas for clinical usage" (WF).

Клиническую стадию определяли по критериям Ann Arbor в соответствии с данными исследований, включающими рентгенографию грудной клетки, ультразвуковое исследование и компьютерную томографию брюшной полости.

Лимфома из мелких лимфоцитов была диагностирована у 21 больного, диффузный смешанноклеточный вариант болезни установлен в 16 наблюдениях. Диффузная лимфома из мелких клеток с расщепленными ядрами диагностирована у 8 больных, а фолликулярная смешанноклеточная - у 4, фолликулярная крупноклеточная - у 2. У 2 больных диагностирована фолликулярная HXJI из мелких расщепленных клеток, у 2 - диффузная крупноклеточная лимфома.

Иммунофенотипирование лимфоцитов крови проводили методом проточной цитометрии на проточном цитофлюориметре Epics-C с использованием моноклональных антител к дифференцировочным

антигенам лейкоцитов человека серии ИКО и фирмы Becton Diskenson.

Иммунофснотипирование опухолевой ткани проводили иммуно-ферментным методом в криостатных срезах.

Статистическая обработка результатов включала вычисление средней арифметической ошибки по Петерсу с использованием фактора Мольденгауэра с последующим определением достоверности методом непрямых разностей.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

Иммунологический фенотип лимфоцитов крови при различных гистологических типах НХЛ

Иммунологический фенотип лимфоцитов крови изучен у 43 больных с различными вариантами НХЛ. Лимфома из мелких лимфоцитов диагностирована у 19 больных. У большинства из них установлена генерализованная форма болезни. В анализах крови среднее количество лейкоцитов составляло 12,6+3,1x109/л; лимфоцитов - 50,2±9,3 %. Лимфоидная инфильтрация костного мозга 44,3±8,2 %. По данным трепанобиопсии, проведенной 11 больным диффузная опухолевая инфильтрация установлена у 3, очаговая у 7, в одном наблюдении признаков инфильтрации в костном мозге не обнаружено.

Клинические признаки опухолевого роста характеризовались поражением лимфатических узлов, печени, селезенки, ротоглотки, плевры.

Исследование * иммунологического фенотипа лимфоцитов крови показало, что в 18 из 19 наблюдений установлен В-клеточный вариант НХЛ. Отмечен высокий уровень экспрессии В-клеточных 'маркеров HLA-DR, CD20, CD2|. Практически у всех больных было изменено k/Х отношение, подтверждающее наличие в циркуляции В-лимфоцитов опухолевого клона.

Анализ Т-клеточной системы у исследуемой группы больных был проведен на основании изучения дифференцировочных антигенов на поверхности лимфоцитов CD2, CD3, CD5, CD4, CDg. Показатели Т-клеточной системы характеризовались значительным угнетением как общей популяции Т-лимфоцитов (CD2, CD3), так и Т4-хелперов, хотя количество CDS было близким к норме. Это обусловлено ингибирующим влиянием опухолевых В-лимфоцитов

\1

на Т-сисгему. Их количество, превышающее норму в 6 раз, сопровождалось снижением числа СБ2, СОэ, СИ4 лимфоцитов в 2 - 5 раз.

Анализируя значение СВ5 экспрессии при лимфоме из мелких лимфоцитов, было установлено, что данный антиген присутствовал у 7 из 19 наблюдаемых больных. Следует отметить, что у 6 из 7 СБ5+ больных было трудно провести дифференциальный диагноз с хроническим лимфолейкозом по данным комплексного обследования больного.

У 12 больных с СБ/ фенотипом отмечена умеренная лимфоид-. ная инфильтрация крови и костного мозга при нормальном уровне лейкоцитов.

При исследовании трепанатов костного мозга гистологическая картина характеризовалась в основном очаговым характером роста. В трех наблюдениях были признаки локального опухолевого роста с поражением ротоглотки, селезенки, средостения.

Диффузная смешанноклеточная лимфома диагностирована у 14 больных. Так же как и при НХЛ из мелких лимфоцитов, отмечалась отчетливая экспрессия НЬА-Б11 и В-клеточного антигена СВ2о, экспрессия одного типа легкой цепи

В отличие от НХЛ из мелких лимфоцитов в приведенном анализе не. удалось установить коэкспрессию С05. Еще одним имму-нофенотипическим отличием данного варианта НХЛ является более высокий процент циркулирующих лимфоцитов, несущих антигены клеточной активности (СО10, СВ71), значения которых были в 6-7. раз выше, чем в сравниваемой группе НХЛ из мелких лимфоцитов (СБ7, 22,5±8,1 и 3,0±0,6 р<0,05; СО10 33±26 и 7,1±4 р>0,05).

Анализ экспрессии дифференцировочных антигенов в процессе лечения позволил оценить противоопухолевый эффект и избирательность проводимой терапии. Установлено, что через три недели после проведения 5-дневной программы СНОР-В1ео количество циркулирующих опухолевых лимфоцитов снижалось на 50%. Это сопровождалось снятием ингибирующего эффекта опухоли на Т-клеточную систему и повышением количества циркулирующих Т-лимфоцитов почти в 3 раза.

Диффузная НХЛ из мелких лимфоцитов с расщепленными ядрами диагностирована у 6 больных. Циркулирующие лимфоциты данного типа НХЛ экспрессировали В-клеточные маркеры НЬА-ОИ, СБ20, к или X. Выраженность экспрессии в приведенных на-

блюдениях определялась массой опухоли, связанной с проведением предшествующей противоопухолевой химиотерапии. Феномен мо-ноклональности, определяемый k/Я отношением, совпадал с экспрессией HLA-DR и CD;o. Коэкспрессии CD5 не было выявлено. Антигены клеточной активности (CD10, CD71) были экспрессирова-ны на опухолевых клетках примерно в тех же значениях, что и при НХЛ из мелких лимфоцитов. В одном из этих наблюдений, характеризующихся сплепомегалией и умеренным лимфоцитозом в крови, почти все лимфоциты имели опухолевый фенотип (по экспрессии CD20 и k/Я, отношению - 1:74). После проведенной енленэк-томии опухолевый фенотип в крови не определялся.

Лимфома с фолликулярным типом строения опухоли была диагностирована у 4 больных (смешанноклеточный вариант).

Все исследуемые случаи отнесены к В-клеточному фенотипу, без коэкспрессии Т-клеточного антигена CD5 на опухолевых В-лнмфоцитах. Следует отмстить высокую экспрессию CD7, и CD10 в двух наблюдениях, что совпадало.с тяжелым клиническим течением и короткой выживаемостью. Установленная экспрессия А-типа легких цепей Ig у 3 из 4 больных, позволяет предполагать, что это является особенностью данного варианта лимфомы.

Проведенный анализ выживаемости больных. различными гистологическими вариантами лимфом показал, что у больных с НХЛ из мелких лимфоцитов она составляла 56±9 месяцев. При смешанноклеточном варианте диффузной НХЛ она составляла 28+5 месяцев. Сравнивая иммунологический фенотип указанных гистологических вариантов НХЛ, следует отметить значительные различия этих групп по экспрессии антигенов клеточной активности (CD10 и CD-,).

Анализ выживаемости больных с НХЛ из мелких лимфоцитов так же показал, что имелись различия в зависимости от наличия или отсутствия коэкспрессии CD5 на опухолевых В-лимфоцитах. В случаях с CD5 отрицательным фенотипом выживаемость была значительно короче (22±7 месяца, р<0,05),чем в целом по группе с этим вариантом НХЛ (56±9 месяцев).

Сравнительный анализ выживаемости изученных вариантов НХЛ представлен на рисунке.

I - A (CDs+ + CDs ), n=19 II - F, n=14 III - A (CDs ), n= 12

Рис. Выживаемость больных с мелкоклеточным Tiinoivi лнмфомы (А) в зависимости от экспрессии (CDs) (А - CDs ) (А - CDs+) и смешан-ноклеточной диффузной лимфомон (F)

На представленном рисунке видны отчетливые различия кривых выживаемости HXJI типа А в зависимости от коэкспрессии CD5. Медиана выживаемости НХЛ А-типа (CD5~) составляла около 15 месяцев, при НХЛ А-типа, включающем CD5+ и CD/ фенотипы -около 40 месяцев, а при диффузной смешанноклеточной НХЛ F-типа около 25 месяцев.

По мере увеличения длительности наблюдения характер кривых выживаемости (CD5" и F) становится полностью идентичным, что свидетельствует о высокой прогностической ценности определения CD5 при НХЛ из мелких лимфоцитов. По существу при одинаковой морфологии CD5 отрицательный фенотип по тяжести течения идентичен диффузной смешанноклеточной лимфоме.

Иммунофенотипическая характеристика опухолевых инфильтратов при различных вариантах неходжкинских

лимфом

Определение иммунологического фенотипа опухолевых инфильтратов проведено 35 больным, причем в 23 наблюдениях это совпало с определением иммунологического фенотипа опухолевых лимфоцитов в крови.

Таблица 1

Иммунофенотипнческая характеристика опухолевых инфильтратов лимфатических узлов _у 35 больных с различными гистологическими типами-неходжкинских лимфом

Гисто- Дифференцировочные антигены*"

Число логи- В-клеточные

наблю чес- иммуноглобулины Т-клеточные

дений кий тяжелые цепи легкие цепи

тип* со19 СРго С022 и У а к X Нид-0Р{ СО10 С01 С02 сш со5 Сйв

12 А 12/12 12/8 12/9 12/10 12/6 12/2 12/10 12/2 12/12 12/0 12/0 12/0 12/0 12/4 12/0

7 В;С:0 7/6 7/4 7/2 7/5 7/4 7/4 7/1 7/6 7/6 7/6 7/0 7/0 7/0 7/1 7/0

7 Е 7/7 7/7 7/7 7/7 7/7 7/5 7/5 7/2 7/7 7/0 7/0 7/0 7/0 • 7/1 7/0

7 И 7/5 7/5 7/4 7/7 7/6 7/3 7/6 7/1 7/6 7/0 7/0 7/0 7/0 7/0 7/0

2 О 2/0 2/2 2/0 2/1 2/1 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0

Примечание: * - А - НХЛ из мелких лимфоцитов; В - фолликулярная НХЛ из мелких клеток с расщепленными ядрами; С - фолликулярная НХЛ из мелких клеток с расщепленными ядрами и крупных клеток; Б - фолликулярная НХЛ из крупных клеток; Е - диффузная НХЛ из мелких клеток с расщепленными ядрами; Р - диффузная НХЛ из мелких и крупных клеток; О - диффузная НХЛ из крупных клеток. ** - исслсдовано/выявлено больных с экспрессией данного маркера; *** - МКА Вес1оп - В;з1ипзоп (США).

Двенадцати больным с лимфомой из мелких лимфоцитов проведено определение иммунологического фенотипа опухолевого инфильтрата в ткани биопсировашгых лимфатических узлов (табл.1).

Как следует из табл.1 во всех исследуемых случаях отмечена диффузная инфильтрация ткани CD19+ и (HLA-DR)+ лимфоцитами, CD20 и CD22 лимфоциты встречались значительно реже.

При данном гистологическом варианте НХЛ преимущественно определялись поверхностные ц-тяжелые цепи и преобладал к-тип легких цепей. Лимфоцитов, несущих Т-клеточные маркеры, обнаружено не было, за исключением CD5 в отдельных случаях, что расценивалось как коэкспрессия этого антигена на опухолевых В-лимфоцитах. Не было обнаружено антигенов острого лимфобласт-ного лейкоза (CD10).

Полученные результаты позволяют расценивать опухолевую инфильтрацию как лимфоидную В-клеточного типа, вытесняющую Т-клеточную систему.

У 7 больных с диффузной смешанноклеточной лимфомой из мелких и крупных клеток опухолевый инфильтрат ткани лимфатического узла был представлен лимфоидными клетками В-типа. Эти клетки характеризуются высокой экспрессией CD1S, HLA-DR, причем инфильтрация носит диффузный характер. Однако CD20 и CD22 маркеры характеризуются чередованием положительных' и отрицательных участков.

Отмечена высокая экспрессия ^-тяжелой цепи Ig, моноклоновый характер подтверждался также экспрессией одного типа легкой цепи, чаще к.

Антигены Т-клеточной системы не были представлены в опухолевом инфильтрате, за исключением отдельных срезов, где можно было определить реактивные Т-клеточные участки по яркой окраске материала.

Иммунофенотипическое исследование биопсированных лимфатических узлов у 7 больных с диффузной НХЛ из мелких клеток с расщепленным ядром показало высокую экспрессию CD19; CD20; CD22; HLA-DR, что может иметь важное диагностическое значение. Данный гистологический вариант опухоли имел В-клеточный фенотип. Т-клеточных маркеров не было выявлено.

Результаты исследования иммунологического фенотипа у больных фолликулярной лимфомой из мелких клеток с расщепленным ядром и крупных клеток свидетельствовали о том, что клетки опу-

холевого инфильтрата при данном варианте НХЛ экспрессировали 1а и CDig антигены у всех четырех больных. Экспрессия CD2o и CD22 выявлена в трех и двух наблюдениях соответственно.

Еще одной важной особенностью данного варианта лимфомы является Х-фенотип опухолевого инфильтрата, который был выявлен у всех больных. Это практически совпадало с результатами иммунологического фенотипа крови, где >„-тип был выявлен у 3 из 4 больных.

Следует отметить так же важную экспрессию антигена острого лимфобластного лейкоза (CD10) при данном варианте лимфомы. Причем по гистологическому иммунофенотипированию этот показатель был более достоверным, чем по аналогичному типированшо лимфоцитов крови. Очевидна корреляция экспрессии CD10 с короткой выживаемостью больных, которая не превышала 24 месяцев, что может расцениваться как фактор неблагоприятного прогноза.

У двух больных с фолликулярной лимфомой из мелких клеток с- расщепленным ядром отмечена экспрессия CD13 при отсутствии или слабой экспрессии других В и Т-клеточных антигенов. В одном из этих наблюдений был CD 10 позитивный фенотип.

У одной больной с фолликулярной крупноклеточной лимфомой (тип D по WF) CD ,0 позитивные клетки определялись в межфолликулярных зонах, что свидетельствовало о переходе фолликулярного типа роста в диффузный и коррелировало с тяжелым клиническим течением и короткой выживаемостью.

Иммунофенотипирование в криостатных срезах лимфатических узлов у двух больных с диффузной крупноклеточной лимфомой позволило установить В-клеточный фенотип по экспрессии CD20. Остальные В и Т-клеточные антигены не определялись на опухолевых клетках.

В обобщенном виде иммунофенотипические характеристики различных гистологических типов НХЛ представлены в табл.2. Таким образом, проведенные исследования показали, что почти каждому гистологическому варианту НХЛ соответствовал определенный иммунологический фенотип. Установлено, что иммунологический фенотип НХЛ из мелких лимфоцитов практически не отличался от В-клеточного хронического лимфолейкоза. Исключение составляла экспрессия CD5, которая при данном варианте

Таблица 2

Иммунологический фенотип различных гистологических вариантов неходжкинских лнмфом по данным тнпировання крови и опухолевой ткани лимфатических узлов (п=55)

Гистологический вариант* Иммунологический фенотип

А CDi9+ CD2(TCD2r CD22± Ig+ HLA-DR+ CD^CDio-CDr CDVCD*- CDs- (k или Л)+

В, С, D CDi<>+CD2<r CD21-СБгг* Ig+ HLA-DR+ CDr CDio+CDr CDr CD4- CDs" k- X+

Е CDi9+ CD2o±CD2rCD22± Ig+ HLA-DR+CDio-CDrCDi-CDrCDr CDs" (k или X)+

F CDi9+ CD2o± CD21" CD22± Ig+ HLA-DR+CDio-CDrCDrCD2 CD4- CDs" (k или X)+

G CD I?- CD2o+ СОгг-Тц1 HLA-DR- CDio" CDr CD2-CD4- CDs* (k или X)-

Примечание: * - в соответствии с классификацией "Рабочая формулировка для клинического применения"

А - НХЛ из мелких лимфоцитов; В - фолликулярная НХЛ из мелких клеток с расщепленными ядрами; С - фолликулярная НХЛ из мелких клеток с расщепленными ядрами и крупных клеток; Б - фолликулярная НХЛ из крупных клеток; Е - диффузная НХЛ из мелких клеток с расщепленными ядрами; Р - диффузная НХЛ из мелких и крупных клеток; О - диффузная НХЛ из крупных клеток.

HXJI встречалась менее часто, чем при ХЛЛ, что может иметь дифференциально-диагностическое значение.

В результате проведенных исследований было установлено, что иммунофенотипическая картина лимфом фолликулярного типа имела четкие отличительные характеристики. Прежде всего это касается экспрессии CD10, отсутствие экспрессии. CD5 и А-тип легких цепей Ig. Причем экспрессия А-типа легких цепей Ig была установлена как по фенотипу крови, так и по фенотипу опухолевой ткани.

Не отмечено различий иммунологического фенотипа между Е и F гистологическими вариантами НХЛ. В то же время указанные формы отличались от описанных выше (А; В; С; D) различными сочетаниями экспрессии CD5 и CD10. Крупноклеточный вариант диффузной лимфомы (тип G) характеризовался наличием на опухолевых клетках только CD20 антигена, что отличает его от других, где стабильно выявлялась экспрессия CD19. Следует подчеркнуть, что при сравнительной оценке криостатных срезов обнаружено неравномерное связывание опухолевыми клетками различных МКА. Так при лимфоме типа А диффузный характер опухолевого поражения устанавливается по CD19, HLA-DR, к или А.-антигенам. В то же время не все опухолевые клетки экспрессировали CD20, CD22 и тяжелые цепи Ig. Это свидетельствует о том, что клетки опухолевого инфильтрата находятся на разных стадиях дифферен-цировки и окрашиваются лишь теми МКА, которые соответствуют антигенам, сохраняющимся на всех дифференцирующихся опухолевых клетках.

Установлено, что антигены CD5, CD10, CD71 при НХЛ из мелких лимфоцитов, диффузном смешанноклеточном варианте и фолликулярном типе являются важными факторами клинического прогноза.

Определение иммунологического фенотипа лимфоцитов крови при НХЛ в процессе проводимой противоопухолевой химиотерапии позволяет осуществлять иммунологическое мониторирование опухолевого процесса. Идентификация минимального объема остаточной опухоли, наблюдение его динамики являются важным фактором оптимизации лечения.

выводы

1. Установлены четкие коррелятивные связи между гистологическими вариантами неходжкинских лимфом и определенными иммунологическими параметрами опухолевых клеток.

2. Неходжкинские лимфомы из мелких лимфоцитов, смешанно-клеточные и крупноклеточные, включая фолликулярный тип гистологического строения, в основном имели В-клеточный фенотип.

3. Гистологическим вариантам неходжкинских лимфом A,B,C,D,G (согласно "Рабочей формулировке для клинического применения") соответствует определенный иммунологический фенотип опухолевого инфильтрата, в то время, как лимфомы из клеток с расщепленными ядрами (тип Е) и смешанноклеточный вариант (тип F) имели идентичные фенотипы.

4. Коэкспрессия антигена CD5 на опухолевых лимфоцитах крови больных лимфомой из мелких лимфоцитов имеет благоприятное прогностическое значение. Выживаемость больных экспрессирую-щих CD5 антиген составляла 56+9 месяцев, отсутствие экспрессии CD5 антигена коррелировало с меньшей выживаемостью 22±7 месяца (р<0,005).

5. Сформулировано понятие аберрантного фенотипа, включающего коэкспрессию на опухолевых В-лимфоцитах крови Т-клеточных антигенов CDS и CDS, при лимфоме из мелких лимфоцитов, что корреллировало с короткой выживаемостью больных (12 месяцев).

6. Различия выживаемости при лимфоме из мелких лимфоцитов (56±9 мес.) и диффузной смешанноклеточной лимфоме (28+5 мес.) отчетливо коррелировало с достоверно более высокой экспрессией CDI0 и CD7i на опухолевых лимфоцитах крови при смешанноклеточной варианте.

7. Иммунологический фенотип лимфоцитов крови и опухолевого инфильтрата в криостатных срезах при фолликулярном типе лимфом характеризовался А-типом иммуноглобулинов. Наличие CD5 антигена при данном варианте лимфомы указывало на неблагопри; ятный клинический прогноз.

8. Экспрессия HLA-DR; CD20; CDlg; k/A-антигенов на лимфоцитах крови и опухолевой ткани при мелко-, крупно- и смешанно-клеточных вариантах неходжкинских лимфом имеет высокое диагностическое значение. Иммунологический фенотип более точно определялся при типировании ткани опухоли.

9. Мониторинг иммунологического фенотипа лимфоцитов крови при неходжкинских лимфомах в процессе лечения дает возможность оценивать глубину ремиссии и диагностировать рецидив заболевания на доклиническом этапе и позволяет осуществлять оптимизацию программ противоопухолевого лечения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение экспрессии CD5 на лимфоцитах крови является информативным диагностическим тестом и может применяться в сложных случаях для дифференциальной диагностики хронического лимфолейкоза и B-клеточной лимфомы из мелких лимфоцитов.

2. При нечетких гистологических признаках фолликулярной лимфомы необходимо определять экспрессию к и X антигенов на лимфоцитах крови. Установление ^.-фенотипа подтверждает предполагаемый диагноз.

3. Установление измененного к/Х - отношения по экспрессии этих антигенов на лимфоцитах крови следует использовать для констатации ремиссии или для диагностики раннего (доклинического) рецидива неходжкинских лимфом.

4. Определение к/Х - отношения по экспрессии этих антигенов на лимфоцитах крови при экстранодальных лимфомах следует применять для установления показаний к радикальному хирургическому лечению и установления необходимости проведения химиотерапии после проведенной операции.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Абдул Латиф Шахер, Юрченко Д.Г. Иммунофенотипическая характеристика лимфоцитов в периферической крови и в ткани лимфатических узлов при неходжкинских лимфомах. Тезисы докладов VIII научно-практической конференции молодых ученых и врачей Московской области // Актуальные вопросы клинической медицины. - 1995. - С.225-226.

2. Голенков А.К., Митерев Г.Ю., Попов В.М., Абдул Латиф Шахер. Клиническое значение иммунологического фенотипа неходжкинских лимфом //Тер. архив. - 1995. - N7. - С. 3 ° - 323. Golenkov А.К., Sedov K.V., Mitina Т.А., Polosukhina E.R., Baryshnikov A.Yu., Zabotina T.M., Abdul Latif Shaher, Abdul

Khaliq. Immunophenotypic identification of residual disease in extranodal non-Hodgkin's lymphoma and multiple myeloma //Experimental Hematology. - 1995. - Vol.8. - N23. abst.N79.-P.763.