Клиническое значение активности митохондриальных ферментов лимфоцитов при воспалительных заболеваниях кишечника у детей.

Климова, Светлана Вячеславовна

Диссертации по медицине → Педиатрия

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.08) на тему:Клиническое значение активности митохондриальных ферментов лимфоцитов при воспалительных заболеваниях кишечника у детей.

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Клиническое значение активности митохондриальных ферментов лимфоцитов при воспалительных заболеваниях кишечника у детей. - тема автореферата по медицине

Климова, Светлана Вячеславовна Москва 2010 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.01.08

Автореферат диссертации по медицине на тему Клиническое значение активности митохондриальных ферментов лимфоцитов при воспалительных заболеваниях кишечника у детей.

На правах рукописи

Климова Светлана Вячеславовна

Клиническое значение активности митохоидриальных ферментов лимфоцитов при воспалительных заболеваниях кишечника у детей

14.01.08-Педиатрия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 с лен т

Москва-2010

004618488

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научном центре здоровья детей РАМН

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Доктор медицинских наук, профессор

Потапов Александр Сергеевич Петричук Светлана Валентиновна

Мухина Юлия Григорьевна Сухоруков Владимир Сергеевич

Ведущая организация:

Российская Медицинская Академия последипломного образования Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится «21» декабря 2010 года в 14.00 часов на заседании Диссертационного совета Д 001.023.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук Научном центре здоровья детей РАМН по адресу: 119296, Москва, Ломоносовский проспект, 2/62.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук Научного центра здоровья детей РАМН.

Автореферат разослан «_» ноября 2010 года.

Ученый секретарь Диссертационного совета, кандидат медицинских наук

А.Г. Тимофеева

Общая характеристика работы Актуальность проблемы

В настоящее время воспалительные заболевания кишечника (ВЗК), к которым относятся неспецифический язвенный колит (НЯК) и болезнь Крона (БК), являются одной из наиболее серьезных проблем современной детской гастроэнтерологии, что обусловлено тяжестью их течения и постоянно возрастающей распространенностью во всем мире. Заболеваемость ВЗК у детей в мире в настоящее время составляет 2,2 - 6,8 на 100 тыс. детского населения. Отмечается тенденция к неуклонному росту со значительным "омоложением" этих заболеваний, что диктует настоятельную необходимость дальнейшего изучения их этиологии, патогенеза и поиска наиболее эффективных подходов к лечению (Н. Buller et al, 2002).

ВЗК сопровождаются хронической интоксикацией, значительными метаболическими изменениями, что неизбежно приводит к нарушению процессов энергообеспечения клеток. Для изучения интенсивности энергообмена используют показатели активности митохондриальных дегидрогеназ. Наиболее информативным и доступным морфологическим субстратом для изучения процессов энергообеспечения клетки являются лимфоциты периферической крови.

Активность внутриклеточных дегидрогеназ лимфоцитов отражает состояние энергообмена не только самих клеток, но и внутренних органов, особенно находящихся в состоянии напряжения или болезни; позволяет прогнозировать исход бактериальной и вирусной инфекции; даст возможность оценить эффективность лечения (Р.П.Нарциссов, 1997; Г.Ф.Семенова, 1999; B.C. Сухорукое, 2004; С.В.Петричук, 2005).

для дальнейших исследований. Была доказана высокая диагностическая и прогностическая информативность активности митохондриальных дегидрогеназ при хроническом гломерулонефрите, хроническом запоре, аппендикулярном перитоните, бронхиальной астме, атопическом дерматите, у детей с гипоксическим поражением ЦНС (Т.Д. Измайлова, 2003; ЕЛ. Толмачева, 2004; А.В.Петрова, 2006; ЕЛО. Капустина, 2006; И.В. Писарева, 2007);

Комплексный подход к изучению процессов, протекающих в иммунокомпетентных клетках, определяет перспективные направления в изучении иммунологических нарушений при воспалительных заболеваниях кишечника. С появлением проточной цитометрии расширились возможности изучения иммунного статуса детей при различных заболеваниях (Л.В. Пичугина, 1996). Однако, показано, что не всегда при развитии патологического процесса меняются количественные показатели клеточного иммунитета (Д. А. Шмаров, 2004). Можно полагать, что существуют качественные изменения в популяциях лимфоцитоз на уровне внутриклеточных ферментов, которые могут существенно влиять на реализацию иммунного ответа и течение патологического процесса.

Изучение активности внутриклеточных ферментов лимфоцитов важно как для установления новых патогенетических механизмов, происходящих на клеточном и субклеточном уровне при ВЗК у детей, так и для оценки активности воспаления и эффективности проводимой терапии при данной патологии.

Цель работы

Установить закономерности изменений активности митохондриальных ферментов лимфоцитов периферической крови у детей с воспалительными заболеваниями кишечника для улучшения диагностики болезни и оценки эффективности лечения.

Задачи исследования

1. Оценить клиническое значение цитохимических показателей лимфоцитов (активность внутриклеточных дегидрогеназ лимфоцитов -СДГ, НАДН-Д, ГФДГ) на разных стадиях и при различной длительности заболевания у детей с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом.

2. Определить цитохимические критерии активности воспаления у детей с неспецифическим язвенным колитом и болезнью Крона.

3. Провести сравнение показателей ферментного статуса лимфоцитов при неспецифическом язвенном колите и болезни Крона у детей.

4. Оценить состояние клеточного иммунитета и активность СДГ в различных популяциях лимфоцитов у детей с воспалительными заболеваниями кишечника.

5. Оценить влияние антицитокиновой терапии при воспалительных заболеваниях кишечника на цитохимические показатели и количественный состав популяций лимфоцитов.

Научная новизна

Впервые выявлены особенности энергетического обмена лимфоцитов у детей с воспалительными заболеваниями кишечника. Установлено, что начальные стадии заболевания характеризуются снижением сукцинатдегидрогсназы на фоне активации НАДН-дегидрогеназы со снижением индекса СДГ/НАДН-Д по сравнению с нормой. При длительном и неблагоприятном течении ВЗК происходит достоверное снижение активности дегидрогеназ (СДГ и НАДН-Д).

Впервые выявлены информативные цитохимические критерии, позволяющие вычислить клиническую и эндоскопическую активность воспалительных заболеваний кишечника у детей.

Впервые при иммуноцитохимическом исследовании у больных с воспалительными заболеваниями кишечника выявлено резкое угнетение сукцинатдегидрогеназы в популяции В-лимфоцитов и активация этого фермента в Т-цитотоксических и NK-клетках, степень которой зависит от продолжительности болезни.

Впервые описана динамика активности митохондриальных дегидрогеназ лимфоцитов на фоне биологической терапии у детей с воспалительными заболеваниями кишечника. Выявлено, что лучший клинический эффект от биологической терапии достигается при исходно высоких значениях активности СДГ и НАДН-Д и сопровождается нормализацией цитохимических показателей.

Практическая значимость

Выявленные изменения активности митохондриальных дегидрогеназ лимфоцитов периферической крови при ВЗК у детей в процессе течения заболевания позволяют считать цитохимические показатели дополнительными лабораторными критериями для оценки тяжести воспаления и степени компенсации нарушений энергетического обмена на фоне патологического процесса.

Депрессия активности митохондриальных дегидрогеназ СДГ и НАДН-Д лимфоцитов периферической крови соответствует наиболее неблагоприятному течению воспалительных заболеваний кишечника у детей.

При исходно высоких значениях активности СДГ и НАДН-Д отмечается хороший клинический эффект на фоне проведения биологической терапии, что можно использовать в качестве критерия прогноза эффективности лечения.

Апробация и внедрение результатов работы в практику

Основные положения диссертации доложены и обсуждены в рамках XIV Российской гастроэнтерологической недели (Москва, 2008), 4-го

Европейского Конгресса педиатров - EUROPAEDIATRICS - 2009, XVI Российской гастроэнтерологической недели (Москва, 2010), на IX Российском конгрессе «Инновационные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2010).

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ.

Результаты работы внедрены в практику гастроэнтерологического отделения с гепатологической группой НЦЗД РАМН.

Структура и объем диссертации

Материалы диссертации изложены на_страницах машинописного

текста и включает введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, 3 главы описания собственных наблюдений, обсуждение результатов, выводы, практические рекомендации и список литературы. Работа проиллюстрирована 46 рисунками и 31 таблицами. Список литературы содержит 162 источника, в том числе 85 отечественных и 77 зарубежных.

Содержание работы Объем и методы исследования

Работа была выполнена в гастроэнтерологическом отделении с гепатологической группой (заведующий отделением - докт. мед. наук., проф. А.С.Потапов) и лаборатории цитохимии (заведующая лабораторией - докт. биол. наук, проф. C.B. Петричук) Учреждения Российской академии медицинских наук Научного центра здоровья детей РАМН (директор -академик РАМН. А.А. Баранов).

Для решения поставленных задач нами было обследовано 100 детей с ВЗК в возрасте от 6 месяцев до 17,9 лет (64 мальчика и 34 девочки), которые наблюдались в динамике от 1 до 12 раз. Из них 34 ребенка с БК и 66 детей с НЯК. Референтную группу составили 40 практически здоровых детей. Среди обследованных пациентов преобладали дети старшего школьного возраста

(52% при БК и 46% при НЯК). Длительность заболеваний у наблюдаемых детей варьировала от 1 месяца до 15 лет и в среднем составила 2,8±0,3 года.

Диагнозы БК и НЯК устанавливали на основании жалоб пациентов и их родителей, анамнестических, клинико-лабораторных, биохимических, иммунологических, эндоскопических и морфологических методов исследования.

Клиническое исследование крови с определением стандартных показателей, биохимическое исследование крови, оценку состояния гуморального звена иммунитета выполняли в клинико-диагностической лаборатории НИИ Педиатрии НЦЗД РАМН (зав.-д.м.н. ЕЛ.Семикина), в лаборатории клинической биохимии НИИ Педиатрии НЦЗД РАМН (зав.-д.м.н., проф. М.И.Баканов), в лаборатории вирусологии и серологических методов диагностики НИИ Педиатрии НЦЗД РАМН (зав.-д.м.н., НА.Маянский). Ультразвуковые исследования (УЗИ) органов брюшной полости выполняли в отделении ультразвуковой диагностики НИИ Педиатрии НЦЗД РАМН (зав.-д.м.н., проф. И.В. Дворяковский). Эндоскопические методы исследования проводили в отделении эндоскопии НИИ Педиатрии НЦЗД РАМН (зав.- д.м.н. А.А.Шавров). Гистологические исследования биоптатов кишечника выполнялись в паталогоанатомической лаборатории НИИ Педиатрии НЦЗД РАМН (зав.-д.м.н.,проф. А.Г'.Талалаев) и в патоморфологической лаборатории ГНЦК МЗ РФ (зав.- д.м.н., проф. ЛЛ.Капуллер).

Клиническую активность заболевания оценивали при БК с помощью педиатрического индекса активности болезни Крона (Pediatric Crohn's Disease Activity Index - PCDAI) ( H.J. Loonen, A.M. Griffiths et al., 2003), при НЯК - с использованием бальной шкалы Rachmilewitz (D.Rachmilewitz, 1989). Высокая степень активности отмечалась в 24% случаев при БК и в 18% случаев при НЯК, умеренная степень активности в 31% при БК и 18% при НЯК, низкая степень активности в 11 % при БК и 22% при НЯК и клиническая ремиссия в 34% случаев при БК и в 42% случаев при НЯК.

Оценку эндоскопической активное™ БК проводили с помощью простого эндоскопического индекса болезни Крона (SES-CD), при НЯК - с использованием индекса Rachmilewitz.

Активность митохондриальных дегидрогеназ определяли количественным цитохимическим методом оценки ферментов лейкоцитов крови (Р.П. Нарциссов, 1997). С помощью световой микроскопии оценивали параметры распределения лимфоцитов по активности фермента (сукцинатдегидрогеназы (СДГ), НАДН-дегидрогеназы (НАДН-Д), а-глицерофосфатдегидрогеназы (а-ГФДГ)). С помощью

цитоморфоденситометрического метода определяли морфологические и денситометрические характеристики гранул - продукта ферментативной реакции (площадь, оптическую плотность, интегральную оптическую плотность, общий продукт реакции). Анализ проводили на анализаторе изображений фирмы "Diamorph" с использованием специализированных программ «Diamorph - CITO» и «IPSO, 2003». В работе выполнено 1018 цитохимических исследований.

Для оценки активности СДГ в популяциях лимфоцитов в работе был использован иммуноцитохимический анализ (С.ВЛетричук и др., 2007). Активность СДГ определяли в общей популяции Т-лимфоцитов (CD3+), в Т-хелперах (CD3+CD4+), Т-цитотоксических лимфоцитах (CD3+CD8+), В-лимфоцитах (CD3-CD19+), NK-клетках (CD3-CD16+/CD56+) и активированных Т-лимфоцитах (CD3+HLADR+). Оценивали абсолютные и относительные количественные значения основных популяций лимфоцитов. Анализ проводили на проточном лазерном цитофлуориметре Beckman Coulter FC 500. В работе выполнено 2610 иммуноцитохимических исследований.

В работе была проанализирована динамика цитохимических показателей при воспалительных заболеваниях кишечника у детей на фоне антицитокиновой терапии. Количество детей, которым проводили лечение инфликсимабом, составило 16 человек, из них 7 пациентов с болезнью Крона

и 9 пациентов с неспецифическим язвенным колитом. Исследование проводили в динамике от 1 до 12 раз. Оценивали активность митохондриальных дегидрогеназ на фоне антицитокиновой терапии детей в зависимости от выраженности клинического эффекта: дети с хорошим клиническим эффектом составили 64%, дети с умеренным клиническим эффектом - 35,7%. У одного ребенка отмечалось отсутствие клинического ответа. Цитохимическое исследование проводили непосредственно перед инфузией препарата и на следующие сутки после введения. Доза препарата составляла 5 мг/кг при хорошем ответе на терапию и Юмг/кг при сниженном ответе. Количество проведенных инфузий составило от 4 до 19. Лечение проводили при условии информированного согласия родителей или официального опекуна ребенка.

Результаты исследований обработаны стандартными методами математической статистики с использованием программных продуктов Microsoft Excel и Statistica 6.0. В работе также применен математический метод нейронных сетей, который по информативности превосходит другие математические методы обработки статистических данных в медицине (И.В. Нарсесян, 1998, Ю.А. Комах и соавт., 2000, С.В.Петричук с соавт., 2000, Т.Д. Измайлова, 2002, В.В. Крепец, 2003; Ю.В.Разуваева, 2007).

Результаты исследования и их обсуждение

Изучение энергообразующих процессов в клетке при воспалительных заболеваниях кишечника у детей выявило существенные изменения в ферментном статусе лимфоцитов крови. В результате цитоморфоденситометрического анализа активности митохондриальных ферментов установлено, что у детей с болезнью Крона и неснецифическим язвенным колитом наблюдаются достоверные изменения активности митохондриальных ферментов (СДГ, ГФДГ и НАДН-Д). При исследовании цитохимических показателей у детей с ВЗК выявлено достоверное снижение активности СДГ и достоверное увеличение активности НАДН-Д как в стадии обострения, так и в ремиссии по сравнению с условно здоровыми детьми (рис.1). Это совпадает с данными, полученными в результате цитохимического анализа с применением световой микроскопии.

Болезнь Крона

Неспецифический язвенный колит

норма клиническая обострение ремиссия

Рис.1. Активность СДГ и НАДН-Д лимфоцитов у детей с ВЗК в стадии обострения и клинической ремиссии по сравнению с группой условно здоровых детей.

Получено, что снижение общей активности СДГ (общего продукта реакции) происходит за счет уменьшения количества очагов реакции и снижения интенсивности ферментативной реакции (оптической плотности). При этом отмечается компенсаторное увеличение площади очагов

ферментативной реакции, однако, подобное включение механизмов компенсации не приводит к нормальной работе фермента. Достоверное снижение активности СДГ является основным лабораторным признаком митохондриалыюй недостаточности у детей с ВЗК.

При исследовании активности НАДН-Д лимфоцитов периферической крови у детей с ВЗК выявлено достоверное увеличение общей ферментативной активности по сравнению с условно здоровыми (р<0,01). Установлено, что при БК и НЯК уровень общей активности НАДН-Д резко повышается (на 50% и более) за счет увеличения площади гранул, причем это увеличение выражено в стадии обострении. При этом увеличивается показатель интегральной оптической плотности, то есть увеличивается интенсивность окислительно-восстановительных реакций.

Учитывая неоднородность пациентов в стадии обострения, мы разделили их в зависимости от степени активности воспалительного процесса на детей с низкой, умеренной и высокой активностью.

Выявлено снижение активности СДГ по показателю общего продукта реакции у детей с низкой активностью на 16% при БК и 9% при НЯК, с умеренной активностью на 20% при БК и 18% при НЯК и с высокой - на 21% при БК и 20% при НЯК по сравнению с нормой (рис.2). Установлено, что активность СДГ у всех пациентов снижается за счет снижения числа гранул и кластеров и оптической плотности в них. При этом происходит увеличение площади отдельных гранул и кластеров, причем у пациентов с низкой клинической активностью этот показатель достоверно выше, чем при умеренной и высокой активности (р<0,05). Таким образом, общая активность СДГ была снижена во всех группах вне зависимости от степени клинической активности.

Болезнь Крона

60000 I 55000

9 50000

ё 45000 х

| 40000

низкая умеренная высокая условно

здоровые

Неспецифический язвенный колит

□ сдг ■ НАДН-Д

низкая умеренная высокая условно

здоровые

Рис.2 Активность СДГ и НАДН-Д лимфоцитов при ВЗК в зависимости от активности заболевания.

При исследовании активности лимфоцитов НАДН-дегидрогеназы в зависимости от степени активности воспалительного процесса выявлено повышение показателей активности во всех группах, наиболее выраженное у

детей с низкой и умеренной активностью (при БК на 38% и 52%, при НЯК -на 35% и 25% соответственно).

При высокой активности воспаления активность НАДН-Д достоверно ниже, чем при низкой и умеренной степени. Таким образом, выявлено, что при высокой активности воспалительного процесса на фоне депрессии СДГ активность НАД-Н приближается к норме, что свидетельствует не о нормализации процесса, а об истощении компенсаторных механизмов организма.

Установлено также, что при воспалительных заболеваниях кишечника у детей изменялась не только активность СДГ и НАДН-Д, но и их соотношение. Известно, что многие кислородозависимые состояния приводят к активации НАДН-Д, которая компенсирует снижение активности СДГ. В норме уровень активности НАДН-Д составляет около 70% от активности СДГ и соотношение составляет 1,44±0,05.

У детей с ВЗК выявлено снижение цитохимического индекса ниже 1,0, причем в стадии обострения достигает значения при БК - 0,84±0,06, при НЯК - 0,99±0,09, в основном за счет увеличения активности НАДН-Д.

Выявлено достоверное снижение активности СДГ лимфоцитов крови по мере увеличения продолжительности болезни (рис.3).

При длительности заболевания менее двух лет СДГ сохраняет высокую активность, в ряде случаев превышая нормативные значения, но по мере увеличения длительности заболевания выявлено достоверное снижение активности СДГ (р<0,05), при этом в стадии обострения активность СДГ достоверно выше, чем в ремиссии.

65000

0 обострение; □ ремиссия

55000

СГ

о 50000-

45000 -

40000

меньше 2 лет

2-5 лет

больше 5 лет

Рис. 3. Активность СДГ у детей с ВЗК при разной длительности заболевания.

В совокупности полученные данные цитохимических исследований свидетельствуют о том, что у пациентов с ВЗК на всех стадиях течения заболевания отмечаются признаки митохондриальной недостаточности, характеризующиеся активацией первого этапа дыхательной цепи и угнетением второго этапа. Инверсия показателей активности СДГ и НАДН-Д характеризует состояние «напряжение» процессов энергообмена, отражает степень активности воспалительного процесса и может служить оценкой степени компенсации и тяжести состояния организма в целом.

Сравнение цитоморфоденситометрических показателей у больных с болезнью Крона и неспецифическим язвенным колитом не выявили достоверных отличий, что подтверждает общие патогенетические механизмы в развитии этих воспалительных заболеваний кишечника.

При исследовании иммунного статуса у детей выявлено достоверное снижение абсолютного количества в 94% случаев (рис.4, табл.1). Снижение количества клеток в популяции В-лимфоцитов наблюдается как на стадии

обострения, так и в ремиссии. При НЯК абсолютное количество В-лимфоцитов снижается в 54% случаев. Подобная картина может объясняться тем, что все обследованные дети находятся на длительной иммуносупрессивной терапии (Е.А.Белоусова, 2005; О.С.Шифрин, 2006).

35 30

гг

Е »

О О 2

% 20 у

ф О.

Рис.4. Распределение пациентов с БК по абсолютному количеству В-лимфоцитов

В остальных популяциях лимфоцитов у детей с воспалительными заболеваниями кишечника не происходит достоверных количественных изменений (табл.1, табл.2).

Для определения качественных характеристик клеточного звена иммунитета мы определяли активность СДГ в основных попушциях лимфоцитов. При ВЗК у детей в стадии обострения выявлено достоверное увеличение активности СДГ в популяциях Т-цитотоксических лимфоцитов и ЯК-клетках при БК на 20% и 27% соответственно, при НЯК - на 15% и 24%. В В-лимфоцитах на фоне снижения абсолютных и относительных показателей происходит уменьшение активности СДГ и при БК и при НЯК (рис.5).

31,9

21,3 1 19,2

ч Шй к

в,5 ри 6,4 6,4 норма

щ 2,1 2,1 2,1 0,0 | || | 0,0 | | 0,0

О 50 100 150 200 250 300 350 40С 450 ЯЮ ЯЗД

абсолютные значения, кл/мкл

Таблица 1.

Иммунофенотип лимфоцитов крови у детей с БК в стадии обострения (М±т)

Популяция лимфоцитов Относительное значение, % Абсолютное значение, кл/мкл Норма (12-16 лет), %, кл/мкл

CD3+ (Т-лимфоциты) 81,77 ± 1,6 1441,5±85,4 66-76%

1400-2000

CD3+CD4+ (Т-хелперы) 48,9 ± 1,1 866,1 ±56,1 33-41%

700-1100

CD3+CD8+ (Т-цитотоксические) 28,6 ± 1,5 504,1 ±38,2 27-35%

600-900

CD4/CD8 1,9 ±0,2 1,1-1,4

CD3-CD19+ (В-лимфоциты) 9,34 ± 0,99 160,2 ±17,9* 12-22%

300-500

CD3+CD16+/CD56+ (NK-клетки) 8,8 ± 1,2 149,6±19Д 3-22%

70-480

CD3+HLA-DR+ 7,0 ±1,2 98,9±16,7 10-16%

60-280

*р<0,05 по сравнению с нормой

Таблица 2.

Иммунофенотип лимфоцитов крови у детей с НЯК в стадии обострения (М±т)

Популяция лимфоцитов Относительное значение, % Абсолютное значение, кл/мкл Норма (12-16 лет), %, кл/'мкл

CD3+ (Т-лимфоциты) 81,2 ± 1,8 2047,3±144,5 66-76%

1400-2000

CD3+CD4+ (Т-хелперы) 46,5 ± 1,9 1194,4 ±107,1 33-41%

700-1100

CD3+CD8+ (Т-цитотоксические) 32,3 ±2,1 792,9 ±61,9 27-35%

600-900

CD4/CD8 1,6 ±0,1 1Д-1,4

CD3-CD19+ (В-лимфоциты) 12,6 ±1,4 322,1 ±45,5 12-22%

300-500

CD3+CD16+/CD56+ (NK-клетки) 6,2 ± 0,8 149,5±20,2 3-22%

70-480

CD3+HLA-DR+ 11,9 ±2,9 215,1±41,1 10-16%

60-280

Рис.5. Активность СДГ в популяциях лимфопитов у детей с ВЗК в стадии обострения

(± 5% - диапазон нормы).

Выявлена различная степень активации СДГ в зависимости от длительности заболевания (рис. 6 - 7). На начальных этапах развития заболевания выявляется активация всех популяций лимфоцитов: Т-цитотоксических лимфоцитов на 35 - 40%, ИК-клеток - на 30 - 35%, Т-хелперов на 15-25%, В-лимфоцитов на 7-12% выше нормы.

С увеличением длительности заболевания, активация СДГ менее выражена и выявляется только в Т-цитотоксических лимфоцитах и ЫК-клетках (20-30%). Таким образом, если в дебюте заболевания происходит активация энергетического обмена во всех популяциях лимфоцитов, то при длительном течении происходит истощение компенсаторных механизмов, возникает энергодефицитное состояние, особенно в популяции В-лимфоцигов. Цитохимические показатели позволяют объективно, на субклеточном уровне оценить степень метаболических нарушений,

объяснить некоторые патогенетические механизмы развития воспалительных заболеваний кишечника у детей.

| 40 о. о

?! 30

- 20

Г )

а 10

< -10

-20

обострение ремиссия

Рис. 6. Активность СДГ в популяциях лимфоцитов у детей с ВЗК при длительности заболевания менее 2-х лет (± 5% - диапазон нормы).

2 40

с. о

С£

О л

о О х

30 20 10

< -10

-20

обострение ремиссия

□ С04+ ■ СЭ8+ В С019 ШМК

О СВ4+ ШС08+ асо19

□ мк

Рис. 7. Активность СДГ в популяциях лимфоцитов у детей с ВЗК при длительности заболевания более 5 лет (± 5% - диапазон нормы).

Таким образом, иммунофенотип у детей с ВЗК характеризуется достоверным уменьшением абсолютного и относительного количества В-лимфоцитов со снижением в них энергетического обмена. Уровень остальных субпопуляций не отличается от нормы, но активность СДГ достоверно увеличена в стадии обострения в Т-цитотоксических лимфоцитах и ЫК-клетках при БК и при НЯК. В стадии ремиссии эти показатели также сохраняют активность, но только на начальных этапах при длительности заболевания менее двух лет.

В нашей работе математическим методом нейронных сетей выявлена зависимость между цитохимическими показателями и клиническим и эндоскопическим индексом активности. Данный метод позволяет читывать не только зависимости между каждым исходным показателем и результатом, но и внутренние взаимодействия между исходными данными (В.В.Крепец, 2003).

Установлена зависимость эндоскопической активности от возраста пациента, индекса клинической активности, стадии воспалительного процесса, а также от цитохимических показателей (рис.8). Наиболее информативными цитохимическими показателями оказались: средняя активность СДГ в популяции лимфоцитов, разнородность клеток по активности СДГ, число, площадь и интегральная оптическая плотность гранул при выявлении СДГ и НАДН-Д, а также уровень активности кислой фосфатазы лимфоцитов.

Рис. 8. Сопоставление расчетного и эмпирического эндоскопического индекса активности у детей с ВЗК (метод нейронных сетей, коэффициент определения 71%).

С помощью нейросетевого метода анализа была также доказана зависимость индекса клинической активности от клинико-лабораторных и цитохимических показателей. Определена связь со стадией воспалительного процесса, количеством лейкоцитов, уровнем гемоглобина, 1§М, ЦИК, АСЛО и такими цитохимическими критериями, как разнородность клеток по активности СДГ; число, площадь и интегральная оптическая плотностью гранул при выявлении СДГ и НАДН-Д (рис.9).

Таким образом, выявлены информативные цитохимические критерии и клинико-лаборяторные параметры, позволяющие по уравнениям регрессии вычислить клиническую и эндоскопическую активность воспалительных заболеваний кишечника у детей.

3,5

2,5

1,5

0,5

-0,5

1 I *

» * *

« « "• 1 1 1

г 1

♦ ♦

II *

(1 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3

индекс активности эмпирический, балл

Рис. 9. Сопоставление расчетного и эмпирического индекса активности воспаления у детей с ВЗК (метод нейронных сетей, коэффициент определения 76%). 0 - ремиссия, 1,2,3 - степени активности.

Современным терапевтическим подходом при лечении ВЗК является применение моноклональных антител. В настоящее время в клиническую практику вошел рскомбинантный препарат инфликсимаб (Ремикейд), представляющий собой химерные моноклональные мышиные антитела к ФНО-а, соединенные с человеческим иммуноглобулином 01.

В нашей работе мы установили, что реакция на введение инфликсимаба неодинакова и зависит от индивидуальных особенностей организма и уровня внутриклеточных дегидрогеназ до назначения терапии. Установлено, что чем выше исходная активность митохондриальных ферментов, тем лучше клинический эффект антицитокиновой терапии (рис.10).

^ 70000

с;

65000

I 60000

ф" 55000 ■&

I- 50000 О

Ш 45000 £

< -»ООО

Рис. 10. Зависимость клинического эффекта лечения инфликсимабом у детей с ВЗК от исходного уровня активности митохондриальных дегидрогеназ.

В группе детей при хорошем клиническом ответе на терапию отмечается нормализация активности СДГ: при повышенных значениях уровень фермента снижается, при пониженных значениях - повышается до уровня нормы. При этом активность НАДН-Д снижается после каждой инфузии препарата. При умеренном клиническом эффекте также отмечается тенденция к нормализации активности митохондриальных дегидрогеназ: исходно низкая активность СДГ повышается, но не достигает нормативных показателей, активность НАДН-Д достоверно снижается. При отсутствии клинического эффекта изменения активности внутриклеточных ферментов не имеют определенной динамики и носят хаотичный характер.

Таким образом, проведенные нами исследования показали, что воспалительный процесс при болезни Крона и неспецифическом язвенном колите у детей сопровождаются выраженными изменениями активности митохондриальных ферментов лимфоцитов и их отдельных популяций. Полученные результаты позволили определить наиболее информативные цитохимические критерии для оценки тяжести воспалительного процесса и эффективности проводимого лечения.

Хороший эффект

Умеренный эффект

Отсутствие эффекта

ВЫВОДЫ

1) Воспалительные заболевания кишечника у детей сопровождаются достоверным изменением активности митоховдриапьных ферментов лимфоцитов периферической крови, которые зависят от выраженности воспалительного процесса, стадии и длительности заболевания.

2) Начальные стадии заболевания характеризуются активацией НАДН-дегидрогеназы на фоне угнетения СДГ со снижением индекса СДГ/НАДН-Д по сравнению с нормой. При длительно сохраняющейся активности заболевания и неблагоприятном его течении наблюдается депрессия СДГ и НАДН-Д.

3) Показатели ферментного статуса лимфоцитов коррелируют с индексами клинической и эндоскопической активности (коэффициент определения 78% и 71% соответственно). Использование показателей активности СДГ и НАДН-Д при расчете индекса клинической активности значительно повышает его достоверность.

4) Ферментный статус лимфоцитов при болезни Крона и неспецифическом язвенном колите у детей не имеет достоверных различий.

5) Иммунофенотип у детей с воспалительными заболеваниями кишечника характеризуется достоверным уменьшением абсолютного и относительного количества клеток в популяции В-лимфоцитов при нормальном содержании Т-хелперов, Т-цитотоксических и МК-клеток.

6) У детей с воспалительными заболеваниями кишечника выявлено резкое угнетение СДГ в популяции В-лимфоцитов и активация СДГ в Т-цитотоксических и ЫК-клетках. Степень активации фермента зависит от продолжительности болезни и максимально выражена в дебюте заболевания.

7) Исходно высокий уровень активности внутриклеточных дегидрогеназ (СДГ и НАДН-Д) является фактором благоприятного прогноза

эффективности антицитокиновой терапии. Нормализация активности СДГ и НАДН-Д на фоне терапии сопровождается выраженной положительной клинической динамикой.

Практические рекомендации

1. Детям с воспалительными заболеваниями кишечника показано цитохимическое определение активности СДГ и НАДН-дегидрогеназы для объективной оценки активности заболевания.

2. Показатели активности митохондриальных ферментов СДГ и НАДН-дегидрогеназы дают возможность рассчитать эндоскопический индекс воспаления, что позволяет сократить число эндоскопических исследований.

3. Рекомендуется использовать определение активности митохондриальных дегидрогеназ детям с воспалительными заболеваниями кишечника для мониторинга течения заболевания и прогноза эффективности антицитокиновой терапии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Климова C.B., Цимбалова Е.Г., Семенова Г.Ф., Потапов A.C., Духова З.Н., Петричук C.B. Особенности ферментного статуса лимфоцитов у детей с болезнью Крона // Материалы XIV Российской гастроэнтерологической недели. - Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2008. -Т. 18. - №5. - С. 132.

2. Kuznetsova L.,Kurbatova 0.,Klimova S., Tsimbalova E., Izmailova T., Petrichuk S. Functional mitochondria activity of children with Crohn's disease (CD)// Сборник материалов The 4-th Europaediatrics 2009. - M.- 2009,- C.349.

3. Кузнецова JI.B., Курбатова O.B., Климова C.B., Цимбалова Е.Г., Петричук C.B. Влияния антицитокиновой терапии на активность митохондриальных дегидрогеназ лимфоцитов периферической крови у детей с воспалительными заболеваниями кишечника (ВЗК) // Сборник материалов

XIII конгресса педиатров России "Фармакотерапия и диетология в педиатрии".- М.-2009. - С.85.

4. Климова C.B., Кузнецова Л.В., Измайлова Т.Д., Цимбалова Е.Г., Потапов A.C., Пстричук C.B. Активность дегидрогсназ лимфоцитов при биологической терапии у детей с воспалительными заболеваниями кишечника // Медицинский вестник Северного Кавказа. - 2010. - №3 (19). - С. 33-34.

5. Кузнецова JI.B., Цимбалова Е.Г, Измайлова Т.Д., Климова C.B., Семенова Г.Ф., Петричук C.B. Активность митохондриальных дегидрогеназ лимфоцитов при воспалительных заболеваниях кишечника (ВЗК) у детей //Сборник материалов XVI Российской гастроэнтерологической недели. - М. -2010.-С.108.

6. Кузнецова JI.B., Климова C.B., Семенова Г.Ф. Активность внутриклеточных ферментов при воспалительных заболеваниях кишечника (ВЗК) у детей // Сборник материалов IX Российского конгресса «Инновационные технологии в педиатрии и детской хирургии". - М - 2010.-С.466.

7. Измайлова Т.Д., Климова C.B., Кузнецова JI.B., Цимбалова Е.Г., Семёнова Г.Ф., Петричук C.B., Потапов A.C. Активность митохондриальных дегидрогеназ лимфоцитов периферической крови у детей с болезнью Крона // Российский педиатрический журнал. - 2010. -№6. - С.14-19.

Подписано в печать:

19.11.2010

Заказ Лг» 4615 Тираж - 120 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autorefcrat.ru

Оглавление диссертации Климова, Светлана Вячеславовна :: 2010 :: Москва

Список сокращений.

Введение.

ГЛАВА 1. Воспалительные заболевания кишечника у детей (обзор литературы).

1.1. Особенности этиологии, патогенеза и клинические проявления воспалительных заболеваний кишечника у детей.

1.2. Митохондриальные и лизосомальные ферменты лимфоцитов, их функции в клетке.

ГЛАВА 2. Объем и методы исследования.

2.1. Клинико-лабораторные и эндоскопические проявления воспалительных заболеваний кишечника у детей.

2.2. Метод количественного цитохимического определения активности ферментов в лимфоцитах периферической крови.

2.3. Цитоморфоденситометрический метод определения активности дегидрогеназ.

2.4. Иммуноцитохимический метод.

2.5. Статистическая обработка результатов цитохимической реакции.

ГЛАВА 3. Активность ферментов лимфоцитов крови при воспалительных заболеваниях кишечника у детей.

3.1. Ферментный статус лимфоцитов периферической крови у детей при болезни Крона.

3.2. Ферментный статус лимфоцитов периферической крови при неспецифическом язвенном колите у детей.

ГЛАВА 4. Иммуноцитохимический анализ лимфоцитов крови при воспалительных заболевания кишечника у детей.

ГЛАВА 5. Влияние антицитокиновой терапии на активность внутриклеточных дегидрогеназ при лечении воспалительных заболевания кишечника у детей.

Обсуждение результатов исследования.

Выводы.

Введение диссертации по теме "Педиатрия", Климова, Светлана Вячеславовна, автореферат

Активность внутриклеточных дегидрогеназ лимфоцитов отражает состояние энергообмена не только самих клеток, но и внутренних органов, особенно находящихся в состоянии напряжения или болезни; позволяет прогнозировать исход бактериальной и вирусной инфекции; дает возможность оценить эффективность лечения [36, 44, 56, 66, 67].

Использование цитоморфоденситометрического метода в оценке функциональной активности митохондрий лимфоцитов периферической крови у больных с различными формами патологии показало его высокую диагностическую ценность для характеристики патологического процесса и его динамики под воздействием терапии, что открывает новые возможности для дальнейших исследований. Была доказана высокая диагностическая и прогностическая информативность активности митохондриальных дегидрогеназ при хроническом гломерулонефрите, хроническом запоре, аппендикулярном перитоните, бронхиальной астме, атопическом дерматите, у детей с гипоксическим поражением ЦНС [18,23, 45, 48, 71].

Комплексный подход к изучению процессов, протекающих в иммунокомпетентных клетках; определяет перспективные направления в изучении иммунологических нарушений при воспалительных заболеваниях кишечника. С появлением проточной цитометрии расширились возможности изучения иммунного статуса детей- при различных заболеваниях [49]. Однако, показано, что не всегда при- развитии патологического процесса меняются количественные показатели клеточного иммунитета [79]. Можно полагать, что существуют качественные изменения в популяциях лимфоцитов на уровне внутриклеточных ферментов, которые могут существенно влиять на' реализацию иммунного ответа и течение патологического процесса.

Изучение активности внутриклеточных.ферментов лимфоцитов важно как для установления новых патогенетических механизмов, происходящих на клеточном и субклеточном- уровне при ВЗК у детей, так и для оценки активности воспаления и эффективности проводимой терапии при данной патологии.

Цель работы: Установить закономерности изменений активности митохондриальных ферментов лимфоцитов периферической крови у детей.с воспалительными заболеваниями кишечника для улучшения диагностики болезни и оценки эффективности лечения.

Задачи исследования:,

1. Оценить клиническое значение цитохимических показателей лимфоцитов (активность внутриклеточных дегидрогеназ лимфоцитов 5

СДГ, НАДН-Д, ГФДГ) на разных стадиях и при различной длительности заболевания у детей с болезнью- Крона и неспецифическим язвенным колитом.

4. Оценить состояние клеточного иммунитета и активность СДГ в различных популяциях лимфоцитов1 у детей с воспалительными заболеваниями кишечника.

5. Оценить влияние антицитокиновой терапииг при воспалительных заболеваниях кишечника на цитохимические показатели и количественный состав популяций лимфоцитов.

Научная новизна

Впервые выявлены особенности энергетического обмена лимфоцитов у детей с воспалительными заболеваниями кишечника. Установлено, что начальные стадии заболевания* характеризуются снижением сукцинатдегидрогеназы на фоне активации! НАДН-дегидрогеназы со снижением индекса^ СДГ/НАДН-Д по сравнению с нормой. При длительном и неблагоприятном течении ВЗК происходит достоверное снижение активности дегидрогеназ (СДГ и НАДН-Д).

Впервые при иммуноцитохимическом исследовании у больных с воспалительными заболеваниями кишечника выявлено резкое угнетение сукцинатдегидрогеназы в популяции В-лимфоцитов и активация этого фермента в Т-цитотоксических и №С-клетках, степень которой зависит от продолжительности болезни.

Практическая значимость

Апробация и внедрение результатов работы в практику

Основные положения диссертации доложены и обсуждены в рамках XIV Российской гастроэнтерологической недели (Москва, 2008), 4-го Европейского Конгресса педиатров - Е1ЖОРАЕБ1АТШС8 - 2009, XVI Российской гастроэнтерологической недели (Москва, 2010), на IX Российском конгрессе «Инновационные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2010).

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ. 7

Заключение диссертационного исследования на тему "Клиническое значение активности митохондриальных ферментов лимфоцитов при воспалительных заболеваниях кишечника у детей."

выводы

1) Воспалительные заболевания кишечника у детей сопровождаются достоверным изменением активности митохондриальных ферментов лимфоцитов периферической крови, которые зависят от выраженности воспалительного процесса, стадии и длительности заболевания.

6) У детей с воспалительными заболеваниями кишечника выявлено резкое угнетение СДГ в популяции В-лимфоцитов и активация СДГ в Т-цитотоксических и №С-клетках. Степень активации фермента зависит от продолжительности болезни и максимально выражена в дебюте заболевания.

7) Исходно высокий уровень активности внутриклеточных дегидрогеназ

СДГ и НАДН-Д) является фактором благоприятного прогноза эффективности антицитокиновой терапии. Нормализация активности СДГ

134 и НАДН-Д на фоне терапии сопровождается выраженной положительной клинической динамикой.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Климова, Светлана Вячеславовна

1. Адлер Г. Болезнь Крона и язвенный колит: Пер. с нем. Шептулина А.А.-М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. 500с.

2. АдоА.Д., АдоМ.А., ПыцкийВ.И. и др. Патологическая физиология. М.: Триада-Х, 2002.- 616с.

3. Алиева Э.И. Дифференциальная диагностика заболеваний толстой кишки у детей: Автореф. дисс.д-ра мед. наук. М.: 2003 - 27с.

4. Алиева Э.И., Румянцев В.Г. Болезнь Крона у детей // Педиатрия.-2001. -: №6. — С. 75-79

5. Баранов A.A., Климанская Е.В., Римарчук Г.В. Детская гастроэнтерология (избранные главы) -М.: 2002. - 592с.

6. Белоусова Е.А. Язвенный колит и болезнь Крона.- Тверь: ООО «Издательство «Триада», 2002. — 128 с.

7. Белоусова Е.А. Биологическая стратегия в лечении воспалительных заболеваний кишечника // Фарматека 2006.- 6(121): 5 11.

8. Белоусова Е.А., Морозова H.A., Никитина Н.В. Инфликсимаб (Ремикейд) в лечении рефрактерных форм болезни Крона // Российский медицинский журнал. 2005. - Т. 7 № 1. - С. 28-32

9. Бельмер C.B., Бубнова Л.В.и др. Значение цитокинов в патогенезе воспалительных заболеваний толстой кишки у детей // Русский медицинский журнал. -2003.-№3.-С. 116- 119

10. Бочков Н.П. Генетические основы болезней кишечника// Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии-1999.-N6.-С. 7-13

11. Васильев С.Ц., Петричук C.B., Себелева И.А. и др. Возможности цитоморфометрического анализа лимфоцитов в диагностике и лечении митохондриальных кардиомиопатий. Митохондрии в патологии // Материалы Всероссийского совещания. Пущино. 2001. - С.32-35

12. Васин М.В., Королева JI.B Активация сукцинатоксидазной системы клеток при патофизиологических состояниях организма // Митохондрии в патологии: Материалы Всероссийского совещания. — Пущино, 2001.-С.25-27.

13. Водилова О.В. Клинические особенности болезни Крона у детей и принципы диагностики: Автореф. дис.канд.мед.наук.-Москва. 2004.-34с.

14. Водилова О.В., Мазанкова Л.Н., Халиф И.Л. Особенности течения болезни Крона в детском возрасте //Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2003. - Т.6 №8. - С.69-74

15. Захарова И.Н., Коровина H.A., Копейкин В.H и др. Современные представления о хронических воспалительных заболеваниях толстой кишки у детей (часть 1) // Вопросы практической педиатрии. 2009. - Т.4 №1. - С. 3946

16. Захарова И.Н., Коровина H.A., Копейкин В.Н. и др. Современные возможности диагностики хронических воспалительных заболеваниях толстой кишки у детей (часть 2) // Вопросы практической педиатрии. 2009. - Т.4 №2. - С.56-62

17. Захарова И.Н., Малиновская В.В., Коровина H.A. и др. Современные возможности лечения хронических воспалительных заболеваниях толстой кишки у детей (часть 3) // Вопросы практической педиатрии. 2009.- Т.4 № 3. - С. 53-64

18. Измайлова Т.Д., Петричук C.B., Агейкин В.А. и др. Цитохимическая оценка адаптации у новорожденных детей грудного возраста с гипоксическим поражением ЦНС // Педиатрия. 2003. - №5.-С.119-120

19. Измайлова Т.Д., Петричук C.B., Шищенко В.М., Писарева И.В. и др. От здоровой клетки к здоровому организму // Лечащий Врач. 2005. - № 4.-С. 66-68

20. Измайлова Т.Д., Радыгина Т.В., Петричук C.B. и др. Митохондриальная активность популяций лимфоцитов у здоровых детей дошкольного и раннего школьного возраста // Российский педиатрический журнал.-2007.-№1.- С. 11-14

21. Измайлова Т.Д., Радыгина Т.В., Петричук C.B. и др. Иммуноцитохимическая оценка популяций лимфоцитов у здоровых детей // Вопросы современной педиатрии.-2006.-№ 5. С. 221

22. Капустина Е.Ю. Активность митохондриальных ферментов лимфоцитов периферической крови у детей с респираторными и кожными проявлениями аллергии: Автореф. дисс. канд. мед. наук. 2006. 26 с.

23. Капустина Е.Ю., Балаболкин И.И., Петричук C.B. Биоэнергетическая активность популяций лимфоцитов у детей с бронхиальной астмой // Аллергология и Иммунология в Педиатрии. М. — 2006. - №2-3(9). - С.73

24. Комарова О.В. Влияние иммуносупрессивной терапии на лейкопоэз и ферментный статус лимфоцитов у детей с хроническим гломерулонефритом;: Автореф. дис.канд.мед. наук. -2000. -22с.

25. Копейкин В.Н., Лозовская Л.И. Механизмы формирования неспецифического язвенного колита у детей // Российский педиатрическийжурнал. 1998: -ЖЗ. - С.25-27138

26. Крепец B.B. Нейронные сети максимальной- устойчивости как альтернатива робастным нейронным сетям // Материалы 11-й Всероссийской конференции «Математические методы распознавания образов (ММРО-11). -М.-2003.- С. 112-115

27. Логинов А.Г. Состояние энергетического метаболизма лимфоцитов регионарного лимфатического узла при имплантации никелида титана // Бюллетень СО РАМН. 2005. - №2 (116). - С.139-142

28. Мазурин A.B., Воронцов И.М. Пропедевтика детских болезней.-Спб: ООО «Издательство Фолиант», 2001.- 928с.

29. Мацукатова Б.О. Эрдес С.И., Ратникова М.А. Системные проявления хронических воспалительных заболеваний кишечника у детей // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -2009.- N 2 .- С.65-69

30. Маянская И.В., Шабунина Е.И., Ашкинази В.И. и др. Лейкоцитмодулирующая активность сыворотки- крови у детей с хроническими воспалительными* заболеваниями органов пищеварения // Вопросы диагностики в педиатрии. 2009. - Т. 1 №1. - С. 28-32

31. Назарова Л.В., Отмахов В.Н. Энзиматический статус циркулирующих лимфоцитов как показатель регенераторных процессов в эксперименте и клинике:— Горький, 1978.-С.52-59.

32. Нарциссов Р.П, Шищенко В.М., Петричук C.B. и др. Диагностика, прогноз и метаболическая коррекция осложнений плода, новорожденного и ребенка первого года жизни //Методические рекомендации. -М., 1987

33. Нарциссов P.I I: Анализ; изображения клетки. следующий этап I развития клинической цитохимии в педиатрии // Педиатрия. — 1998. - №4. —1. С.101-105

34. Нарциссов1 Р.П., Петричук C.B., Духова 3:Н. и др.

35. Петричук C.B., Темная В.М., Шищенко В.М., и др. Использование цитохимической экспертизы качества жизни для оценки состояния здоровья детей, проживающих в условиях Европейского Севера //

36. Дети на севере: защита, выживание и: защита в условиях экстремальнойсреды». Тез. докл. М., 1996.- С.92-93 > 44. Петричук C.B., Шищенко В.М. Духова З.Н; и др.

37. Диагностические и прогностические возможности клинической цитохимии // : М:: 2005.-74 е.

38. Петрова А.В., Комарова Е.В., Потапов А.С. др. Особенности цитоморфоденситометрии и перекисного окисления липидов у детей с хроническими запорами // Сборник материалов XI Конгресса педиатров России " Актуальные проблемы педиатрии" М., 2007. С.524

39. Петрова А.В., Потапов А.С., Семенова Г.Ф. и др. Особенности энергообмена лимфоцитов крови у детей с хроническим запором // Материалы съезда научного общества гастроэнтерологов. М., 2005. - С. 476-477

40. Писарева И.В., Карасёва О.В., Рошаль JI.M. и др. Цитохимическая оценка течения раннего послеоперационного периода при аппендикулярном перитоните у детей // Вопросы современной педиатрии. -2007. -Т.6№3.-С. 28-31

41. Пичугина JI.B. Изменение фенотипа лимфоцитов при некоторых патологиях // М.-2006г.- 36с.

42. Потапов А.С., Цимбалова Е.Г., Пахомовская H.JI. Антицитокиновая терапия у детей с воспалительными заболеваниями кишечника // Педиатрическая фармакология.- 2009.- Т.6 №1.- С. 23-29

43. Романенко Е.С. Особенности функциональной активности лимфоцитов у детей раннего возраста у детей с перинатальным поражением ЦНС // Материалы 2-го Российского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии. М., 2003, С.21

44. Румянцев В.Г., Щиголева Н.Е. Болезнь Крона в детском возрасте // Consilium medicum. 2002.- Т. 4 №6. - С.20-23

45. РумянцевВ.Г., Щиголева Н.Е. Неспецифический язвенный колиту детей // Consilium medicum. 2002.-Т. 04/N 6/2002, с.16-19141

46. Рябчикова Т.В. Формирование здоровья у детей с задержкой внутриутробного развития (диагностика, прогноз и профилактика его нарушений); Автореф. дис. .докт.мед.наук. — Иваново, 1996.-27 с.

47. Семенова Г.Ф. Обоснование и применение метаболического пособия и терапии. М., 1999. - 91с.

48. Семенова Г.Ф., Комарова Е.В., Потапов А.С. и др. Информативность основного энергообмена митохондрий лимфоцитов периферической крови у детей с хроническими запорами //Вопросы современной педиатрии. -2007. Т. 6 №3 - с48 - 52

49. Семенова Г.Ф., Петричук C.B., Шищенко В.М. и др. Актуальность цитохимических исследований в педиатрии // Сборник материалов XII Конгресса педиатров России "Актуальные проблемы педиатрии". М.,. 2008. - С.517

50. Семенова Г.Ф., Петричук C.B., Шищенко СБ. и др.

51. Семенова Г.Ф., Саруханян О.О., Петрова A.B. и др. Значение морфоденситометрических исследований лимфоцитов крови при хронических запорах у детей // Вопросы современной педиатрии. — 2006. -Т.5 (1): 519-520

52. Сигарева М.Е., Ермошенко Б.Г. Характеристика цитохимических параметров у больных с ювенильными маточными кровотечениями // Митохондриии в патологии: Материалы Всероссийского совещания. — Пущино, 2001. -С.35-37

53. Синчихин С.П, Синчихина М.Е., Лечиева Э.У. и др. Возможности использования иммунохимических и морфологических методов исследования в акушерстве и перинатологии // Consilium medicum. — 2008. -Т. 10 №3.- С. 37-41

54. Суслова Г.Ф. Динамика некоторых ферментных систем лимфоцитов и органов в условиях нормального развития и патологии: Дис.канд.биолог.наук. М., 1975.-202 с.

55. Сухоруков B.C. Значение индивидуальных особенностей вIпроявлениях митохондриальной недостаточности: постановка проблемы // I Всероссийский!, конгресс Современные технологии в педиатрии и детской хирургии . М.; 2002. - С. 479-80

56. Сухоруков B.C. Нарушение клеточного энергообмена у детей // Российский вестник перинатологии и педиатрии. — 2002. № 5. - Т.47. - С. 44- 50

57. Татьянина О.Ф., Потапов А.С, Намазова Л.С. и др. Фекальный кальпротектин маркер кишечного воспаления при заболеваниях кишечника у детей // Педиатрическая фармакология. -2008. - Т. 5 № 3. - С. 13-19

58. Татьянина О.Ф., Потапов A.C., Намазова Л.С. и др. Новыевозможности неинвазивной диагностики воспалительных заболеваний143кишечника у детей // Педиатрическая, фармакология. -2008. Т. 5 № 3. - С. 20-25

59. Татьянина О.Ф., Потапов А.С., Намазова-Баранова J1.C и др. Возможности кальпротектина в диагностике воспалительных заболеваний кишечника у детей // Вопросы диагностики в, педиатрии.- 2009.- Т.1 №1.- С. 42-48

60. Толмачева E.JI. Нарушение энергетического обмена митохондрий и их коррекция при первичном ночном энурезе у детей: Автореф. дис.канд.мед.наук., М., 2004-22с.

61. Толмачева^ E.JL, Семенова Г.Ф., Петричук СВ: Диагностические возможности цитоморфоденситометрии лимфоцитов у детей с энурезом // IX Конгресс педиатров России. Актуальные проблемы педиатрии. М., 2004.-С.416

62. Фурсова З.К., Балика Ю.Д., Мамендалиева* Н:М. и- др. Особенности. , ферментного статуса, лимфоцитов- новорожденных при метаболической-терапии у беременных // Акушерство и гинекология. 1995. - №4. - С. 26-28 '

63. Цимбалова Е.Г. Клинико-лабораторные проявления и критерии активности воспалительных заболеваний* кишечника! у детей: Автореф.дис.канд.мед.наук. Москва, 2005. - 24с

64. Цимбалова Е.Г., Потапов А.С., Щербаков* П:Л. Схема медикаментозной терапии' неспецифического язвенного колита у детей // Лечащий врач. 2003. - №6. -с.52-55

65. Шифрин О.С. Болезнь Крона: особенности патогенеза, клиники илечения // Consilium medicum.-2001.-T.3 №6: С.261-267144

66. Шищенко В.М., Петричук С.В., Духова З.Н. и др. Новые возможности цитохимического анализа в оценке состояния здоровья ребенка и прогнозе его развития // Педиатрия. -М., 1998. С.96-101

67. Шмаров Д. А., Козинец Г. И. Лабораторно-клиническое значение проточно-цитометрического анализа крови. — М., 2004. — С. 12—13

68. Шумилов П.В., Хандамирова О.О., Малахинова Н.А. и др. Роль иммунных нарушений и микробного фактора в развитии воспалительных заболеваний кишечника у детей // Вопросы детской диетологии. 2009. - Т.7 №4.-С. 13-19

69. Шумилов П.В., Щиголева Н.Е., Ипатова М.Г. и др. Антицитокиновая терапия при болезни Крона у детей // Вопросы практической педиатрии. — 2010. Т. 5 №1. - С. 23-30

70. Щиголева Н.Е., Бельмер С.В., Румянцев В.Г. и др. Неспецифический 'язвенный колит у детей // Детская гастроэнтерология и проблемы педиатрии: вчера, сегодня и завтра. Н.Новгород, 1999. - С. 147148

71. Щиголева Н.Е., Бельмер С.В., Румянцев В.Г. и др. Современные представления о диагностике и лечении неспецифического язвенного колита у детей // Педиатрия.-.-№4. С.100-104

72. Щиголева Н.Е., Матина И.А., Пономарева А.П. и др. Применение инфликсимаба при воспалительных заболеваниях кишечника у детей // Педиатрическая фармакология. 2010. - т.7 №1 - С.55-61

73. Яблокова Е.А., Горелов А.В., Ратникова М.А. и др. Воспалительные заболевания кишечника у детей // Педиатрия. — 2006. №5. -С. 99-102

74. Abreu МТ, Fukata М, Arditi М. TLR signaling in the gut in health and disease. // J Immunol 2005. 174(8): 4453-60

75. Aeberhard P., Berchtold W., Reidmann H.J. Surgical recurrence of perforating and not-perforating Crohn's disease: A study of 102 surgically treatedpatients.// Dis. Colon Rectum. 1996. - Vol. 39. - P.80145

76. Behrens R., Timmer A., Buderus S. et al. Childhood Onset Inflammatory Bowel Disease: Predictors of Delayed Diagnosis from the CEDATA German-Language Pediatric Inflammatory Bowel Disease Registry // J. Pediatr. — 2010.-Nov 2

77. Benevento G, Avellini C, Terrosu G. et al. Diagnosis and assessment of Crohn's disease: the present and the future //Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 2010. - Vol.4(6). - P.757-66

78. Binder V. Genetic epidemiology of inflammatory bowel disease // Dig Dis. 1999.-Vol. 16.-P. 351-355

79. Bischoff SC, Mayer J, Nguyen QT et al. Immunnohistological assessment of intestinal eosinophil activation in patients with eosinophilic gastroenteritis and inflammatory bowel disease.// Am J Gastroenterol. 1999. -94(12): 3521-9

80. Buller H., Chin S., Kirshchner B et al . IBD in children and adolescents: working report of the fist world congress of pediatric gastroenterology, Hepatology and nutrition // I Pediatr Gastroenterology Nutr. -2002.- Vol 35. P.151-158

81. Cosnes J, Nion-Larmurier I, Beaugerie L. et al. Impact of the increasing use of immunosuppressants in Crohn's disease on the need for intestinal surgery // Gut. 2005. -Vol. 54. - P. 237-241

82. De Dombal F.T. Epidemiology of inflammatory bowel disease // Oxford medical publications, 1993. P. 96-127

83. Di Nardo G, Oliva S, Ferrari F. et al. Usefulness of wireless capsule endoscopy in paediatric inflammatory bowel disease // Dig Liver Dis.- 2010. -Nov 17

84. Dubucquol S, Janin A, Desreumaux P et al. Activated eosinophils and interleukin 5 expression in early recurrence of Crohn's disease // Gut. 1995/ -Vol. 37.-P. 242-246

85. ECCO Consensus on the Management of Crohn's disease // Gut 2006; 55 (suppl. 1)

86. Eidelwein A. P., Cuffary C, Abadom V., Oliva-Hemker M. Infliximab efficacy in pediatric ulcerative colitis // Inflamm. Bowel Dis. 2005. Vol.11 (3). -P. 213-218

87. Eidewein A., Cuffani C., Abadom V. Infliximab efficacy in pediatric ulcerative colitis// Inflamm Bowel Dis. 2005. - Vol.11(3). - P. 213-218

88. Ekbom A. The IBD epidemiology // A report from the 1st International meeting on chronic inflammatory bowel disease. Madrid, 2000. -May 4-5.

89. Fármer R.G. Study of family history among patients with inflammatory bowel disease // Scand. J.Gastroenterol. 1989. - 24(suppl.l70).-P.64-65 I

90. Fiocchi C. Inflammatory bowel disease: etiology and pathogenesis // Gastroenterology. 1998. -Vol.115(1). - P.182-205

91. Froslie KF, Jahnsen J, Moum BA, et al and the IBSEN Group. Mucosal healing in inflammatory bowel disease: results from a Norwegian population-based cohort // Gastroenterology. 2007. - Vol. 133.- P. 412 - 422

92. García-Sáncheza V., Iglesias-Floresa E., Gonzálezb R. et al. Does fecal calprotectin predict relapse in patients with Crohn's disease and ulcerative colitis? // Journal of Crohn's and Colitis. 2010. - - Vol. 4, P. 144-152

93. Gionchetti P., Ribello F. et al. Oral bacteriotherapy as maintenance treatment in patients with chronic pouchitis: A double-blind, placebo-controlled trial//Gastroenerol. -2000. Vol. 119.-P. 1305-1309

94. Greenstein AJ et al. The extraintestinal complications of Crohn's disease and ulcerative colitis: a study of 700 patients // Medicine-1979. -Vol. 55. -P.410-412

95. Griffits AM. A Review of activity indices and end points for clinical trials in children with Crohn's disease // Inflamm Bowel Dis.-2005- Vol.11(2) -P.185-196

96. Griffits AM. Specificities of inflammatory bowel disease in childhood // Best Pract Res Clin Gastroenterol. 2004. -Vol. 18(3). - P.509-23

97. Gupta SK et al. Comparison of serological markers of inflammatory bowel disease with clinical diagnosis in children // Inflamm Bowel Dis. 2004. — Vol. 10(3) - p.240-244

98. Heyman MB., Krischner BS., Gold BD. et all. Children with early-onset IBD: analysis of Pediatric IBD consortium registry // J Pediatr. 2005. — Vol.146 (1).-P. 35-40

99. Harparat M., Keljo DJ. Perspectives on osteoporosis in pediatric inflammatory bowel disease // Curr Gastroenterol Rep.-2003- 5(3) P.225-32

100. Holtmann MH, Neurath MF: Anti-TNF strategies in stenosing and fistulizing Crohn's disease // Int J Colorectal Dis. 2005. - Vol. 20(1). - P. 1-8

101. Hyams J.S. et al. Extraintestinal manifestations of inflammatory bowel disease in children // J Pediatr Gastroenterol Nurt. -1994. Vol.19 - P.7-21

102. Hyams J.S., Ferry G.D., Mandel F.S., et al. Development and validation of a pediatric Crohn's disease activity index // J. Pediatr Gastroenterol Nutr. 1991. - Vol. 12(4). - P. 439-47

103. Hyams J.S. et all. Inhibition of bone formation in children witht

104. Crohn's disease: an in vitro study // J Pediatr gastroenterol Nutr. 1997. -Vol.24-P .289-295

105. Hyams J., Crandall W., Kugathasan S. et al. Induction andmaintenance infliximab therapy for the treatment of moderate-to-severe Crohn's disease inchildren // Gastroenterology. 2007. - Vol. - 132 (3). - P. 863873

106. Jowett SL., Seal CJ., Phillips E. et all. Defining relapse of ulcerative colitis a symptom-bases activity index // Scand J Gastroenterol. 2003. - Vol. -38(2).-P. 164-71

107. Holrsten S. Monitoring Bowel Inflammation Looking // American Journal of Gastroenterology 2005 vol.97 №.1-11-12

108. Hsia E.C., Ruley K.M., Rahman M.U. Infliximab (Remicade®): from bench to clinical practice. A paradigm shift in rheumatology practice // APLAR J Rheumat. 2006. - Vol.9. - P. 107-118

109. Huibregtse IL, van Lent A U, van Deventer S J H. Immunopathogenesis of IBD: insufficient suppressor function in the gut? // Gut 2007.-Vol.56.-P.584-592

110. Inohara N, Chamaillard M, et al. NOD-LRR proteins: role in host-microbial interactions and inflammatory disease // Annu Rev Biochem 2005. -Vol.74.-P.355-383

111. Jarnerot G, Hertervig E, Friis-Liby I et al. Infliximab as rescue therapy in severe to moderately severe ulcerative colitis: a randomized, placebo-controlled study // Gastroenterology. 2005. - Vol. 128. - P. 1805-1811

112. Kaufman I, Caspi D, Yeshurun D et al: The effect of infliximab on extraintestinal manifestations of Crohn's disease // Rheumatol Int. 2005. -Vol. 25.-P. 406-10

113. Krajina T., Leithayuser F., Moller P. et al. Colonic lamina propria dendritic cells in mice with CD4+ Tcell-induced colitis. // Eur. J. Immunol. 2003. -Vol.33.-P. 1073-83

114. Kugathasan S., Judd RH., Hoffmann RG. et all. Epidemiological and clinical characteristics of children with newly diagnosed IBD in Wisconsin: a statewide population-bases study // J of Pediftrics. -2003. -Vol 143. -P.525-531

115. Langholz et all. Inflammatory bowel disease with onset in childhood // Scand J.Gastroenterol. 1997. - Vol.32. - P.139-147

116. Levy AM, Gleich GJ, Sandborn WJ et al. Increased eosinophil granule proteins in gut lavage fluid from patients with inflammatory bowel disease // Mayo Clin Proc. 1997. - Vol.72. - P. 117-123

117. Lichtenstein G. et al. Safety of Infliximab in Crohn's Disease // Clin Gastroenterol Hepatol. 2006. - № 4. - P. 621-630

118. Lichtenstein G., Feagan B., Cohen R., et al. Serious Infections and Mortality Association With Therapies for Crohn's Disease: TREAT Registry // Clin Gastroenterol Hepatol. 2006. - Vol.4. - P.621-30>

119. Lichtenstein GR, Olson A, Travers S. et al: Factors associated with the development of intestinal strictures or obstructions in patients with Crohn's disease //Am J Gastroenterol. -2006. Vol.101. - PI 1030-103 8

120. Lochs H, MayerM, Fleig WE. et all Prophylaxis of postoperative relapse in Crohn's disease with mesalamine: European Cooperative Crohn's Disease Study VI // Gastroenterology. 2000. - Vol.118(2)/ - P.264-733

121. Loonen H.J., Griffiths A.M., Merkus M.P. et al. A critical assessment of items on the Pediatric Crohn's Disease Activity Index // Pediatr.Gastroenterol. Nutr.-2003.-Vol.36.-№ 1 .-P.90-95

122. Nicholas D.B., Otley A., Smith C Challenges and strategies of children and adolescents with inflammatory bowel disease: a qualitative examination // Health Qual Outcomes. 2007.-Vol.25.-№5.-P.28

123. Rachmilewits D:, Eliakim R., Ackerman Z. Tt al. Direct determination jf colonic nitric oxide level. A sensitive marker of disease activity in ulcerative: colitis //Am. J. Gastroenterol -1998.- Vol.93 .-№3.- P.209-212

124. Scaldaferri F., Fiocchi C. Inflammatory bowel disease: Progress and current concepts of etiopathogenesis // J of Digestive Dis. 2007; Vol.8. - P. 171178

125. Schnitzler F, Fidder H., Ferrante MC et al. Long-term outcome of treatment' with infliximab in 614 patients with Crohn's disease: results from a single-centre cohort // Inflam Bowel dis; Gut 2009. - Vol.58. - P.492-500.

126. Selby W, Pavli P, Grotty B et al: Two year combination antibiotic therapy with clarithromycin, rifabutin,- and clofazimine for Crohn's disease. // Gastroenterology. 2007. - Vol. 132. - P.2313-9

127. Shamir R; Nutrition and growth in inflammatory bowel disease // J Pediatr Gastroenterol Nutr.- 2010.- Vol.51. -, Suppl 3.- P: 131-2

128. Semenova G., Tsygina E., Kurbatova Ô., Dukhova, Z., Petrichuk S. Lymphocyte metabolic changes and its prevention in contrast media use in children with nephropathies// 4 Europaediatrics, 2009,- M. P1574

129. Shanahan F, O'Mahony J. The mycobacteria story in Crohn's-disease. // Am J Gastroenterol. -2005. Vol.100. - P.1537-1538

130. Sorrentino D, Avellini C, Beltrami CA, et al. Selective effect of infliximab on the inflammatory component of a colonic stricture in Crohn's disease // Int J Colorectal Dis. 2006. - Vol. 21. - P.276-281

131. Sorrentino D, Terrosu G, Avellini C, et al: Prevention of postoperative recurrence of Crohn's disease by infliximab // Eur J Gastroenterol Hepatol .2006. Vol. 18. - P.457-459

132. Swidsinski A, Weber J, Loening-Baucke V, et al. Spatial organization and composition of the mucosal flora in patients with inflammatory bowel disease. // J Clin Microbiol. 2005. - Vol. 7. - P. 3380-9

133. Thayu M., Marcowitz J.E., Mamula P. et al. Hepatosplenic T-cell lymphoma in adolescent patient after immunomodulator and biologic therapy for Crohn disease // J Pediatric Gastroenterol Nutr. 2005. № 40. - P. 220-222

134. Tsimbalova E.G., Potapov A.S., Petrichuk S.V. et al. Enzyme status of lymphocytes in IBD in children. // Inflammatory bowel disease: translation from basic research to clinical practice. Dubrovnik (Croatia.) Falk Symposium, 2004.-P.85 128.

135. Urne F.U. et al. Chronic inflammatory bowel disease in children. An epidemiological study from eastern Denmark 1998-2000 // Gut.-2003-Vol. 52-Suppl.6 A 39

136. Vainer B., Nielsen O.H., Hendel J., et al. Colonic expression and synthesis interleukin-13 of interleukin-15 in inflammatory bowel disease // Cytokine.-2000.-Vol.12. -P. 1531-6527-35

137. Van Assche GP., Magdelaine C, Haens G. Et al. Concomitant immunosuppression does not impact on the outcome of maintenance infliximab therapy in Crohn, s disease: final results of the IMID trial // Gastroenterology.2007. P. 734

138. Van Assche G, Magdelaine-Beuzelin C, D'Haens G, et al. Withdrawal of immunosuppression in Crohn's disease treated with scheduled infliximab maintenance: a randomized trial // Gastroenterology. 2008. - Vol.134.- P. 18611868

139. Venkateshan SP, Sidhu S, Malhotra S. et al. Efficacy of biologicals in the treatment of rheumatoid arthritis. A meta-analysis. //Pharmacology. 2008. — Vol.83.-P.l-9

140. Vergani D., Mieli- Vergani G. Autoimmune hepatitis and sclerosing cholangitis // Autoimmunity.-2004. Vol. 37(4). -P.329-32

141. Vermeire S, Van Assche G, Rutgeerts P. Review article: altering the natural history of Crohn's disease — evidence for and against current therapies // Aliment Pharm Ther. 2006. -Vol.25. - P.3-12

142. Vermeire S., Wild G., Kocher K et al. CARD 15 genetic variation in Quebec population: prevalence, genotype-phenotype relationship, and haplotype structure //American J of Human Genetics. -2002. -Vol. 1(1) P.74-83

143. Vermeire S, Van Assche G, Rutgeerts P. Inflammatory bowel disease and colitis? new concepts from the bench and the clinic // Curr Opin Gastroenterol. -2010.-Nov 18

144. Vind I. et al. Paediatric incidence of inflammatory bowel disease in Copenhagen 2003-2004: a prospective population based cohort study // Gut. -2005. Vol. 54 (Suppl VII - 13th UEGW). - A 5

Оглавление диссертации Климова, Светлана Вячеславовна :: 2010 :: Москва

Введение диссертации по теме "Педиатрия", Климова, Светлана Вячеславовна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Климова, Светлана Вячеславовна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций