Автореферат и диссертация по медицине (14.00.11) на тему:Клинические проявления и морфофункциональные свойства эритроцитов и использование аутоэритроцитарной массы, подвергнутой лазерному облучению, при васкулитах кожи

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УКРАИНЫ ХАРЬКОВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ДЕРМАТОЛОГИИ И ВЕНЕРОЛОГИИ

На правах рукописи

КОВАЛЕВА Софья Михайловна

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АУТОЭРИТРОЦИТАРНОЙ МАССЫ, ПОДВЕРГНУТОЙ ЛАЗЕРНОМУ ОБЛУЧЕНИЮ, ПРИ ВАСКУЛИТАХ

КОЖИ

14.00.11. — кожные и венерические болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Харьков — 1992

Работа выполнена в Луганском медицинском институте

Научные руководители

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук,

профессор

В. Г. Коляденко

доктор медицинских наук Н. К. Казимирко

доктор медицинских наук,

профессор

М. Н. Бухарович

доктор медицинских наук,

профессор

Е. В. Сабадаш

Ведущая организация

— Днепропетровский медицинский нпстптут

Защита состоится 1992 г. в ,^..'~часов

на заседании специализированного совета (К-088.28.01) Харьковского научно-исследовательского института дерматологии и венерологии (310057, г. Харьков, ул. Чернышевского, 7/9).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат' разослан «.

// » . .......1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

Л. С. ТАЦКАЯ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы определяется тем, что количество больных с поражением кровеносных сосудов кожи неуклонно растет, чаще стали встречаться тяжелые формы этих заболеваний - с обильными экссудативными проявлениями, значительными участками геморрагического некроза, причиняющие больным большие страдания (В.В.Кулага, И.М.Роыаненко, 1984). Нередко эти болезни протекают с рецидивами, при этой больные длительное время остаются нетрудоспособными (В.Я.Некачалов,1969; А.А.Антоньев и соавт.,1982), а существующие методы лечения недостаточно эффективны (В.П.Федотов, 1970; А.И.Лесмицкий,1971; А.И.Бринд, Г.С.Цераидис,1971 ; В.Н.Антипов,1978; Л.И.Галченко, Л.Н.Липавская, 1978; В.В.Латышева и соавт.,1979; Р.Ф.Айзятулов,1982; В.В.Майле-Августинович, 1987; га Mltcbell , 1985).

Этиология и патогенез васкулитов кожи сложны и не в полной мере изучены (Ы.Н.Бухарович и соавт., 1973; Н.В.Ко:лькова и соавт., 1980; В.Г.Коляденко и соавт.,1981; И.И.Мавров, Б.И.Каруна, 1985; Ю.Н.Стогов, Т.В.Домасева, 1983; А.Н.Родионов, Т.В.Домасе-ва, 1989; в.ï.Boom et al., 1988). Механизм их развития включает иммунологические процессы, клеточные реакции, генетическое предрасположение. В последние годы наибольшее внимание исследователей было обращено на изучение показателей клеточного и гуморального иммунитета, особенно состояния Т- и В-лимфоцитов (Б.Т.Глу-хенький и соавт., 1986; Л.Д.Калюжная, 1990; Т.И.Шварева, 19' ). Цри этом обращает на себя внимание сравнительно небольшое количество работ, посвященных другим форменным элементам крови -эритроцитам при коаных заболеваниях (И.С.Гончаренко и соавт., 1986,1989; М.А.Захаров,1988; c.M.Giles et al., 1987; Q.Ferrattl et al., 1989; p.Eaynaua, 1989).

Между тем важным условием в изучении физиологических и патологических процессов, протекающих в организме человека, является оценка количественного и качественного состава эритроцитов как ведущего звена системы красной крови - эритрона (Н.К.Ка-зимирко,1989). Составляя основную часть форменных элементов (значительно превыпают все другие виды клеток крови), не являясь и в норме однородной массой, какой они обычно представляются под микроскопом, функционирующие эритроциты образуют систему, в которой закономерно сочетаются клетки разного возраста, разли-

чных состояний и свойств. Однако при васкулитах кожи остаются не изученными морфофункциональные свойства эритроцитов, в том числе в условиях лазерного облучения.

До недавнего времени считалось, что роль красных клеток кро ви ограничена и сводится к обеспечению организма кислородом, Бяа годаря исследованиям последних лет удалось установить, что эритроциты активно взаимосвязаны с лимфоцитами и способны участвовать в регулировании иммунного ответа организма (В.А.Козлов и со авт., 1960; а.иоЬогу еЪ ей., 1985). Эти данные открывают новые возможности для поиска методов лечения иммунопатологических состояний путем воздействия через красную кровь. Это тем более важно, т.к. установлено, что у пациентов, в крови которых насчитывалось 4 млн и ниже эритроцитов, заболевание, независимо от его характ« ра, протекает более злокачественно (В.А.Козлов и соавт.,1990).

В последние годы в лечении различных болезней кожи все шир< применяется лазерное излучение (Б.А.Задорожный и соавг.,1976, 1977; В.Г.Коладенхо, Н.Ы.Шупенько,1980; А.П.Ракчеев,7982,1984; В.Г.Радионов,1985; В.Н.Романенко и соавт.,1987; В.И.Ковалев, З.Ф.Кривенко, 1988, и др.). Однако многие механизмы, посредстве, кот _ ых реализуется терапевтический эффект лазерного излучения неповрездаюцей интенсивности, пока не изучены (Н.Ф.Гамалея, В.Я.Стадник,1988). Одним из основных путей влияния этого излуче кия на организм и очаг поражения является кровь, которой принадлежи ключевая роль в энергетическом, метаболическом и регуля-торном обеспечении организма. Ври этом из других клеток крови наибольшей фоточувствительностью к лазерному излучению обладают эритроциты, т.к. содержа? естественный пигмент - гемоглобин.

Целью исследования явилось сопоставление клинических проявлений сосудистых поражений кожи и морфофункциовальныг свойств эритроцитов; разработка метода лечения васкулитов с использованием аутоэритроцитарной массы, подвергнутой лазерному облучешя

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

1. Провести изучение морфофункциональных свойств эритроцитов с учетом клинических форм васкулитов и особенностей их течения.

2. Исследовать влияние низкоинтенсивного лазерного излуче ния не показатели, суммирующие многие свойства структуры мембран и цитоплазмы - резистентность эритроцитов к лизируюцим во здействиям, содержание ионов халия и натрия в этих форменных элементах у больных васкулитами коки в сравнении со здоровыми

людьми.

3. Изучить антигена»! состав эритроцитов путем определения групповой принадлежности крови (системы ABO, ЛА, Н.1 , Ы/Г% Р).

4. Предпринять попытку выявления антиэритроцитарных веществ (гемолизинов'* в крови больных васкулитаыи.

5. Разработать метод лечена с использованием аутоэритро-цитарной массы, подвергнутой лазерному облучению, и оценить его эффективность в комплексной терапии больных васкулитаыи.

Научная новизна. Впервые у больных васкулитами кожи изучены морфофункциональные свойства эритроцитов в условиях лазерного облучения. Установлено, что sroi физический фактор оказывает не однотипное воздействие на эритроциты больных в сравнении с* здоровыми лицами.

Исследован во взаимосвязи с клиническими проявлениями вас-кулита антигенный состав эритроцитоь Показано, что среди больных. особенно с тяжелым рецидивирующим течением болезни преобладают лица с AjB(iy) и А-^(П), резус отрицательной групповой принадлежностью крови (фактор врожденного повышенного риска). Обнаружено, что в крови больных васкулитами в 36,8 + II, 2% можно выявить антиэритроцитарный фактор, который разрушается под влиянием низкоинтенсивного лазерного излучения (экспозиция 2 мин). Наибольшей агрессивностью антиэритроцитарный фактор отличается у больных с АВ(Н), (-) группой крови.

На основе проведенных комплексных исследований разработан и применен нетрадиционный метод лечения больных васкулитам с использованием интрафокально вводимой аутоэритроцитарной массы, подвергнутой .лазерному облучению; показана положительная клиническая динамика и ускоренная нормализация периферических показателей эритрона в процессе лечения, что позволяет снизить число рецидивов и удлинить период ремиссии.

Практическая значимость работы заключается г озможности с учетом периферических показателей эритрона (сниженного количества эритроцитов, изменения их морфологических свойств групповой глинадяежности - прогнозирования врожденного повышенного риска возникновения к тяжелого, рецидивирующего течения сосудистых поражений кожи.

Разработан эффективный метод лечения больных васкулитами с использованием аутоэритроцитарной массы, подвергнутой лазерному облучение. Метод прост и доступен для клинической практики, позволяет избежать осложнений, связанных с введением гетерокрови

к ее компонентов, лекарственной аллергией, добиться более быстрого регресса проявлений васкудита, статистически достоверной ускоренной нормализации периферических показателей эритрона (по сравнению с общепринятыми способами лечения васкулитов) -и в результате - достоверного снижения числа рецидивов, удлинения периода ремиссии.

Установлено, что больные васкулитами (независимо от клинической формы) ввиду возможности появления в их крови антиэритро-цитарного фактора являются "опасными" донорами; следует считать противопоказанной им гетерогемотерапию.

По материалам диссертации оформлена заявка на изобретение, имеется 19 рационализаторских предложений.

Разработанный способ лечения внедрен в клинике кожных и венерических болезней Луганского мединститута, в клиническую практику отделений Донецкой, Новосибирской областей.

Материалы диссертации используются в учебном.процессе при изучеыи дерматологии и патофизиологии студентами Луганского медицинского института.

Основные положения работы, представленные к защите

1. В патогенезе васкулитов кожи значительную роль играет мож '^функциональное состояние эритроцитов.

2. В условиях лазерного излучения эритроциты больных васку-литами в сравнении со здоровыми .- 'щами реагируют не однотипно. Резистентность эритроцитов к кислотному гемолитику при васкули-тах достоверно ниже, чем у здоровых; при этом лазерное излучение оказывает более выраженное влияние на резистентность эритроцитов больных к лизирущим воздействиям. Низкоинтенсивное гелий-неоновое лазерное излучение оказывает различное воздействие на транспорт ионов К+ и-Л/а+ в эритроцитах больных и здоровых лиц.

Антигенный состав эритроцитов (А, В, ЛЬ- -) является наследственным фактором повшеиного риска в развития васкулитов и наклонности их к тяжелому рецидивирующему течению. В крови больных васку. лтаыи может выявляться в 36,8 + 11,25? антиэритроцитарный фактор, в связи с чем эти больные являются "опасными" донорами; противопоказана им и гетерогемотерапия.

3. Сравнительная эффективность использования аутоэритроци-тов, подвергнутых воздействию низкоинтенсивного лазерного излучения и вводимых интрафокально в комплексной терапии больных васкулитами.

Апробация работы. Материалы диссертации доложны на первой

республиканской конфере^тии "Новые физические методы в медицине", Луганск (1990), на всесоюзной научно-практической конференции "Низкоинтенсивное лазерное излучение в медицинской практи-. ке", г.Хабаровск (1990), на Всесоюзном сьездЕ дермато-венероло-гов, г.Алма-Ата (1^91).

Публикации. По теме диссер. щии опубликовано 6 работ, получены удостоверения на 19 рационализаторских предложений; подготовлены (в соавторстве) методические рекомендации Украины.

Обьем и структура работы. Диссертация изложена на/т-У страницах машинописного текста, состоит из введения, 9 глав, выводов, практических рекомендаций. Список литературы включает 243' работ отечественных 9? иностранных авторов. Работа иллюстрирована II т*о'лицами и 30 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАЕ',ТЫ

Общая характеристика наблюдавшихся больных, методы исследования и лечения. Исследог,ния проведены у 101 больного сосудистыми поражениями кожи; контрольную группу составили 63 практически здоровых"человека. В соответствии с классификацией васкули-тов больные были распределены на 4 группы: 67 человек - с аллергическими васкулитами кожи, II - кожной формой узелкового пери-артер;: .та, 18 - аллергическими узловатыми васкулитами гиподермы и 5 - хроническими капилляритами. В подавляющем большинстве это были взрослые люди (средний возраст мужчин составлял 35,1 + 1,7, а женщин г 31,9 + 1,9 года). Длительность заболевания варьировала в широких пределах - от 3 дней до 15-20 лет. У 73,5 + 3,7% больных били "сопутствующие заболевания: органов пищеварения, пояснично-крестцовый радикулит, ишиас, остеохондроз, хронический тонзиллит, фарингит, аднексит, вегетососудистая дистония, кандидоз, эпидермофития стол и др. У 37 больных в'гчулит протекал на фоне выраженной лекарственной аллергии (к пенициллину, сульфаниламидам и другим препаратам).

Наряду со специальными исследованиями проводились общепринятые клинические анализы: общий анализ крови и мочи, сахар крови, анализ кала на яйца глистов. Реакция Всерм-лна у всех больных была отрицательной. Количество эритроцмгов подсчитывали по общепринятой методике в камере Горяева (В.И.Воробьев, 1065). Определение концентрации гемоглобина производили с использованием стандартных набороз (ЧССР) на фотоэлектроколориметре. С целью изучения группового распределения эритроцитов по степени их

стойкости и влияния на этот показатель низкоинтенсивного лазерного излучения определяли кислотную резистентность по методу И.Л.Терскова и И.И.Гительэона. Из полученных данных составили эритрограммы и вычисляли показатель устойчивости эритроцитов по формуле, приведенной в работах И.Ы.Смыка:

где: %Е> - процент распавшихся на! -полуминуте эритроцитов; к - время окончания гемолиза (в мин); - время, прошедшее от начала гемолиза (в мин); 1 - число полуминут; - I - в начале гемолиза и X » 2ь - в конце гемолиза. Учитывали качало гемолиза, время появления максимума, время конца гемолиза, ширину интервала стойкости (в мин), высоту максимума (в % распавшихся эритроцитов), „ исло максимумов.

Для изучения влияния низкоинтенсивного гелий-несиового лазерного излучения на возрастной состав эритроцитов исследовались пробы 1п чХЬго до и после облучения. Ддя облучения крови испол- -зор'-я газовый оптичесхий квантовый генератор ЛГ-75-1, излучающий монохроматический когерентный свет с длиной волны 0,633 мкм, мощностью излучения 0,025 Вт (кровь в пробирках подвергалась прямому воздействию луча лазера). Экспозиция облучения составляла 2 мин.

У 31 больного васкулитами было проведено гистопатологичес-кое исследование биопсированных участков, пораженной кожи. Срезы окрашены гемотоксидин-эозином, по Ван-Гиэону, резорцин-фукселимом, по Вейгерту, по Щуенинову. Кусочки биопсийной пораженной кожи больных для трансмиссионной электронной микроскопии размерами 1x1x1 мм вырезали и сразу опускали в фиксирующую смесь, согласно методике, описанной Н. Г. Районным и И.Б.Бухваловым: 0,2 М фосфатный буфер рН 7,0-7,4 - 50 мл; 25% глутаральдегид -10 мл; 2,08 М сахароза - 12 мл; 1^0 диет - мл. Фиксацию проводили в течение I часа при комнатной температуре. Затем пробы промывали в 3-х сменах изотонического раствора сахарозы по. 15 мин. Дрфиксировали 1% раствором четырехокиси осмия на I 11 фосфатном буфере, рН 7,2. Далее кусочки промывали в двух сменах дистиллированной воды по 15 мин и обезвоживали в растворах ацетона (5055, 705К, 965?, Ю0& 10056) по 10 мин. В качестве заливочной смолы

1«2к

1-1

использовали следующую смесь: Эпон 812 - 10 мл, ddsA - 22 мл, аралдит М - б мл, дибуа«л фгалат - 0,1 мл, DMP-30 - 1,0 мл. На пирамитоыеíKB (Швейцария) готовили полутонкие срезы толциной 0,25-0,5 мкм, окрашивали толуидиновым синим и просматривали в световом микроскоп® для выбора соответствующих участков. На ультратомеlКВ-Ш (Швеция) готоьили ультратонкие срезы, контрастировали их по 15 мин растворами уранилацетата и нитрата свинца Просмотр и фотографирование осуществлялось на электронном микроскопе jEM-IOOc (Япония).

Поверхностная архитектоника эритроцитов изучалась в растровом электронном микроскопе, для чего кровь в соотношении 1:5 в стерильных условиях забирали и отмывали в течение 10 мин в 1 створе Ол .ера (глюкоза 24,6 г, нитрат натрия 5,04 г, дистиллированная вода 1200 мл), подогретом до 37°С (H.Bessi3, l.s.Loasin; H.BessJ ч, R.i.Teed ). Далее к центри$>угагу добавляли фиксирующую смс-еь: 2% раствор глутаральдегида на 0,15 Ы фосфатном буфере, рН 7,2-7,4, подогретом до 37°С. Пробы хранили в холодильнике от I недели до б месяцев (Ю.А.Ровенский; О.В.Волкова и соавт.). Высушенные при помощи метода критической точки в COg эритроциты закрепляли на фольге, напыляли платиной и палладием в спуттере фирмы Е.Ы. scape Laboratories ltd. Далее образцы изучали в электронном микроскопе stereosoan s-2 (Кембр'*цж).

С целью исследования эритроцитарных антигенов определялась групповая принадлежность крови по изосерологическим системам ABO, Мн , Р и Rh. Использованы стандартные мсноспецифические анти- А, В, О, Ы, н, Ш и Р-сыворотки.

С целью, выявления антиэритроцитарных веществ (гемолизинов) в сыворотке крови учитывались рекомендации Ж.Доссе и соответствующие методические материалы.

С целью изучения влияния лазерного излучения на уровень электролитов при васкулитах кожи определялась концентрация ионов калия и натрия в эритроцитах и плазме крови по унифицированному методу фотометрии пламени (В.В.Меньшиков).

Для подсчета числа ретикулоцитов в парафинированном часовом стекле смешивали кровь с равным объемом 0,1% раствора краски бриллианткрезилблау, приготовленной на изотоническом растворе натрия хлорида. Часовое стекло (кровь + краска) помещали на 35 мин во влажную камеру, затем стеклянной парафиновой палочкой из смеси брали каплю и готовили мазок на предметном стекле ( К.К.Osgood, K.wilholn). Препарат просматривался под кымерсион-

ным объективом. Цри этом в окуляр микроскопа вставлялась бумажная блевда (для ограничения поля зрения). Число ретикулоцитов поде тывали на 100 ООО эритроцитов; результаты выражали в процентах. При анализе учитывали следующие особенности ретикулоцитов. При суправитальной окраске препарата бриллианткрезиловой синью в некоторых эритроцитах были видны синие зернистые сетеви-дные включения - такие эритроциты принимались за ретикулоциты (проэритроцигы или витально гранулированные эритроциты). Они моложе обыкновенных красных кровяных шариков. По степени зрелости ретикулоциты делили на 5 групп по L.fieiimeyer : к 0-й группе относили ядросодержащие клетки с густой ретикулярной сетью вокруг ядра; к 1-Й группе - эритроциты с густой шарообразно намотанной ретикулярной сетью в центре клетки; ко 2-й группе - с ретикулярной сетью, расположенной по всему эритроциту; к 3-й группе - эритроциты с частями ретикулярной сети; к 4-й группе - с единичными ретикулацитными зернами по периферии.

Для оценки эффективности лаэероэритротерапии (ЛЗГ) больные были распределены на 2 группы. В первую (контрольную) сошли 50 больных васкулитами, получавших общепринятую терапию; вторую группу составил 51 пациент, которые получали аналогичное лечение, но с использованием аугоэритроцитаркой массы, подвергнутой лазерному облучению.

Для приготовления эритроцитариой массы использована кровь, взятая из вены у самого больного в количестве 5 мл. После добавления I капли гепарина производилось центрифугирование крови в течение 5 мин цри 1200 об/мин, после чего отсасывалась надосадочная плазма. В дальнейшем аутоэритроцитарная касса подвергалась прямому воздействию сфокусированного луча гелий-неонового лазера (так, чтобы поверхность облучаемых эритроцитов была ему перпендикулярна) с экспозицией облучения 2 мин (генератор лазерного излучения ЛГ-75-1, длина волны излучения 0,633 мкм, плотность мощности излучения 3 мВт/см^, которая регулируется с помощью индикатора ИПМ-1, выходная мощность - 0,025 Вт\ Полученная аутоэритроцитарная масса, подвергнутая воздействию лазерного излучения, вводилась в количестве I мл в область очага поражения. В зависимости от распространенности и степени тяжести кожного процесса на I сеанс приходилось 1-3 инъекции (по I мл). Процедуры поверялись через 3-5-7 дней, всего 3-7 раз. Наряду с оценкой клинической эффективности производились трижды исследования периферических показателей эритрона - при поступлении больных в

клинику, через 9-10 дней лечения и после регресса сыпи.

Результаты клинико-лабораторных исследований подвергнуты обработке с использованием общепринятых методов статистики. Пока- ' затели, приведенные в таблицах, даны в соответствии с СИ (В.В.Меньшиков и сиавт.; H.Lirpert).

. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В качестве показателя, суммирующего многие свойства структуры мембран и цитоплазмы, избрали резистентность эритроцитов к ли-зирующим воздействиям. Результаты исследований представлены в • табл. I. Сравнительное исследования показали, что показатель суммарной стойкости эритроцитов у больных васкулитами кожи достоверно ниже такового здоровых людей. Вместе с тем, у больных отмечено достоверное укорочение времени сферуляции, длительности гемолиза и сужение интервала стойкости. Высота максимума распавшихся эритроцитов в крови больных достоверно превышала данные контрольных лиц; при исследовании крови больных положение максимума было достоверно ниже, чем у здоровых. Следовательно, максимум распада эритроцитов в крови больных превышал достоверно данные контрольных лиц и был смещен влево, в сторону менее стойких эритроцитов. Это свидетельствует о преобладании в циркуляции больных васкулитами малостойких клеток.

Согласно данным литературы и нашим наблюдениям, проявления васкулитов кожи весьма разнообразны по клинической картине, степени выраженности симптомов, этиопатогенетическим факторам. Однако статистически значимых различий резистентности эритроцитов при различных клинических вариантах сосудистых поражений кожи (аллергические васкулиты, кожная форма узелкового периартериита, аллергические узловатые васкулиты гиподермы, хронические капил-ляриты) не выявлено. Это свидетельствует о том, что несмотря на клиническое разнообразие проявлений, эти заболевания имеют многие сходные механизмы развития.

При прямом 2-х минутном облучении in vitro крови больных показатель суммарной стойкости эритроцитов достоверно уменьшался; при этом время сферуляции также статистически значимо уменьшалось, а длительность гемолиза укорачивалась. Однако ширина интервала стойкости, высота максимума распавшихся эритроцитов и положение максимума достоверных колебаний не претерпевали. Следовательно, укорочение длительности гемолиза свидетельствует об умень-

ТаСлицз I

Показатели кислотной рсэистснткз'гти эр'лтроцитоа до и после облучения лучом лазера крови бо.-ьких васкулитами и здсрогюс г.;1.«.

Статистиче- Здсроше лица . Больные васкулитами

Показатели ские пар1»- -------------------------------

метры до облучения после облучения до облучения после облучения

Показатель суммарной Пя, 476,3 * 7,90 423,6 + II,60 421,0 + 8,20 381,0 + 11,40

стойкости Р <0,02 <0,02

Р1 <0,01 <0,01

Время сферуляции, мин. Ы ±Ш 2,89 + 0,07 2,44 + 0,09 2,55 + 0,08 2.13 + 0,10

Р * . ~ ' ¿0,01 <0,01

Рх <0,01 <0,05

Длительность гемолиза, М *гП 7,57 + 0,13 6.77 + 0,19 6,90 + 0,20 6,20 + 0,20

мяк. Р <0,01 ~ 4,0,05

Р! <0,01 Не дост.

Ширина интервала стой- Н ±т 4,23 + 0,10 3,77 + 9.12 3,80 + 0,10 3,50 + 0,20.

кости, мин. Р ¿1С,0£ Не дост.

Р1 <0,01 Не дост..

Высота максимума рас- И+т. 23,1 + 0,51 25,6 + 1.0 28,3 + 1,1 30,0 + 1,5

Памвосся эритроцитов, % Р <0,05 Не дост.

Р1 <0,01 <0,05

Положение максимума, 11 + т. 4,30 + 0,17 г 06 + 0,08 3,40 + 0,10 3,60 + 0,10

мин. Р <0,05 Не дост.

Р2 <0,01 Не дост.

г - достоверность различий в группе, Р( - достоверность различий между группами.

шении популяции высокорезистентных эритроцитов в крови больных васкулитами кожи после прямого воздействия на нее низкоинтенсивного лазерного излучения. Это совпадало с изменением морфологических свойств эритроцитов, выявленных при электронно-шисроско-пическом исследовании (появление эритроцитов со стомами, пойии-лоцитов, единичных шизоцитов, фрагментированных форм, а также гипохромных и гиперхроыных дискоцитов).

Сравнительные исследования показали, что лазерное облучение крови здоровых людей (в таком же режиме) приводит также к общему "постарению" эритроцктарной массы, к увеличению количества эритроцитов с низкой устойчивостью к кислотному гемолитику. Об этом свидетельствовало уменьшение показателя суммарной стойкости, укорочение времени сферуляции и длительности гемолиза, ширины интервала стойкости; максимум возрастал и был сдвинут в сторону мало стойких эритроцитов, т.е. влево.

Однако сравнение показателей, характеризующих кислотную резистентность эритроцитов после прямого облучения крови здоровых и больных показало значительные отличия. Нами впервые установлено, что ннзкоинтенсивное гелий-неоновое лазерное воздействие вызывает более выраженные изменения эритроцитов крови больных по сравнению со здоровыми лицами. Так, время сферуляции, длительность гемолиза уменьшались в большей степени, показатель суммарной стойкости эритроцитов - также, высота максимума распавиихся эритроцитов возрастала в большей мере.

Следовательно, низкоинтенсивное лазерное излучение отмеченных параметров при воздействии на кровь больных васкулитами нарушает устойчивость эритроцитов к кислотному гемолитику в большей степени, чем это происходит в сходных условиях с эритроцитами здоровых лиц. •

Таким образом, исходный уровень стойкости эритроцитов статистически различный у больных а здоровых лиц. Резистентность эритроцитов к кислотному гемолитику при васкулитах достоверно ниже, чем у здоровых людей, что свидетельствует об изменении соотношения в крови больных эритроцитов разного возраста с уменьшением фракций, обладающих высокой резистентностью. При этом лазерное излучение оказывает более выраженное влияние на резистентность эритроцитов к лизирующим воздействиям при васкулитах по сравнению со здоровыми лицами.

Постоянство концентрация электролитов в клетках и во вне-точной среде, в первую очередь ионов К4" и Уа+ в крови является

важнейшим условием нормального функционирования организма. При этом электролитный состав внутри- и внеклеточного пространства совершенно различен, хотя осмотическое давление,с обеих сторон клеточной мембраны остается одинаковым. В доступной литературе мы не встретили сведений о содержании ионов К+ и-Ла+ в эритроцитах и плазме больных васкулитами кожи.

Согласно нашим исследованиям, в крови больных васкулитами по сравнению со здоровыми лицами имеются отклонения метаболизма электролитов, выражающееся в достоверном повышении ионов Jfk+ в эритроцитах (23,2 + 0,5 ммоль/л и 20,4 + 0,2 ммоль/л, Р^.0,01) и « более высоком уровне ионов К+ в плазме крови (5,5 +0,04 ммоль/л и 4,8 + 0,03 ммоль/л, Р<£0,01). Известно, что перераспределение электролитов между внутри- и внеклеточными пулами, даже незначительное отклонение от содержания ионов К+ иЛ/а+ могут приводить к изменению клеточного метаболизма. Полученные нами результаты о повышении в плазме крови больных васкулитами кожи количества конов К+ совпадают с данными других авторов,,отмечавших при аллергических заболеваниях увеличение количества ионов К+ и снижение ио-нов-Л^4" в плазме крови (В.Б.Меньшиков).

Следовательно, эритроциты больных и здоровых лиц исходно обладают разными свойствами в связи с различным содержанием в них ионов,Уа+: как отмечено, у больных количество этого электролита достоверно повышено, что может быть одной из причин их гемолиза. , Вместе с тем, эритроциты больных и здоровых лиц могут по разному реагировать на действие физических факторов.

После воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения на кровь больных васкулитами коки и здоровых лиц in vitro нами получены не однотипные данные о перераспределении ионов К+ иЖа+. После прямого лазерного облучения крови больных из плазмы в эритроциты поступают и достоверно накапливаются в этих клетках крови (по сравнению с исходными данными) ионы К+ (83,0 +1,1 ммоль/л и ответственно 91,0 + 0,7 ммоль/л, P<i0,GI), а ионы/Уа+ уменьшаются внутри эритроцитов (23,2 + 0,5 и 20,4 + 0,5 ммоль/л, P<i0,0I), В плазме этих же больных после воздействия лучом лазера наблюдалась обратная тенденция - уменьшение ионов К+ (5,5 + 0,04 ммоль/л и 4,3 + 0,09 миоль/л, P<i0,01) и увеличение ионов Уа.+ (139,0 + 0,2 ммоль/л и 151,0 + 0,6 ммоль/л, Р^0,01). Изменение показателей содержания электролитов К+ к yVa+ в эритроцитах и плазме больных васкулитами при лазерном воздействии можно объяснить изменением ионной проницаемости эритроцигарных мембран, транспортных

ее свойств для ионов, нарушением химического состава и энергетического обмена клетки, изменением структуры плазматической мембраны и ее свойств (А.К.Кондакова). Возникшее достоверное перераспределение ионов, и как следствие, ослабление осмотических свойств эритроцитов, по-видимому, лежит в основе уменьшения их способности противостоять повреждающему действию гемолитмков.

Известно, что калий является основным внутриклеточным ионом, обладающим особым биологическим действием. Даже незначительные его колебания могут приводить к выраженным функциональным изменениям. Так, накопление ионов К+ внутри эритроцитов, возникшее после лазерного облучения, может приводить к их частичному гемолизу; при этом продукты распада эритроцитов оказывают лечебное воздействие прежде всего за счет возросшего количества ионов калия, обладающего противовоспалительным дейсгзием. АЬжно полагать, что частичному гемолизу эритроцитов, наблюдаемому при васкулитах кожи, предшествует ионная перегрузка их, набухание; в большей степени это связано с повышенным содержанием ионов .//а+ (что обнаружено нами при исследовании крови больных васкулитами). Действие лазерного излучения приводит к накоплению ионов калия в эритроцитах, что усиливает и дополняет влияние предшествующем ионной перегрузки ионами Л'а+.

По антигенному составу тканей можно составить прогноз о генетической предрасположенности и наиболее вероятных заболеваниях, ожидающих человека в течение жизни (В.Н.Шабалин, Л.Д.Серова). При этом антигенный состав эритроцитов и других клеток организма одинаков (И.А.Кассирский). Исследования показали, что у больных васкулитами кожи преобладают А(П) и АВ(1У) группы крови (62,3 + 4,8% и 29,7 + 4,6%). Поскольку АВ(1У) группа крови встречается среди населения значительно реже (8,1%), чем А(П) - (37,8%), лица с АВ(1У) группой крови имеют большую наследственную предрасположенность к появлению аллергических сосудистых заболеваний кожи. У больных васкулитами чаще встречался сильный эритроцитар-ный антиген Ар Среди больных васкулитами достоверно преобладали лица с резус-отрицательной принадлежностью крови и уменьшением эритроцитарных антигенов группы мУ. Разницу в преобладании клинической формы васкулита кожи (аллергические васкулиты, кожная форма узелкового периартериита, аллергические узловатые васкулиты, хронические капнлляриты) в зависимости от групповой принадлежности крови выявить не удалось. Однако у больных с А^В(ЗУ) и резус-отрицательной группой крови чаще возникали рецидивы васкули-

та, протекавшие более тяжело.

Следовательно, лица с А|В(1У), резус отрицательной и реже А^Ш) группой крови имеют большую' готовность к появлению сосудистых заболеваний кожи (врожденный фактор повышенного риска), которая может реализоваться при неблагоприятных условиях - стрессы, иммунологические нарушения, переохлаждения, очаги инфекции. При развитии васкулита они (особенно лица с РВ(1У),ЛЯ-} нуждаются в более тщательном и длительном наблюдении с проведением лечебно-профилактических мероприятий.

В связи с наблюдаемым а! осп1ив явлением частичного ге\' "ш-за (сыворотка крови больных васкулитами нередко имеет розовый цвет) исследованы антиэритроцитарные вещества (гемолизины). В контрольной группе здоровых лиц (53 исследования) гемолизины не были обнаружены ни в одном случае. При васкулитах кожи установлено, что в сыворотке крови в 36,8 + II, 256 выявляются антиэритроцитарные вещества (гемолизины), которые отличаются наибольшей агрессивностью у больных с АВ(£ . групповой принадлежностью крови, сильным эритроцитарным антигеном А| (их сыворотки вызывали полный гемолиз 25и Й взвеси эритроцитов). У людей с группой крови АВ(1У) в норме не может быть гемолиза', т.к. изоантител аС и £ , которые могли бы вступить в реакцию с эритроцитами А и В, нет. В связи с этим выявленные у больных васкулитами антиэритроцитарные вещества не идентичны и не являются разновидностями естественных изогемагглютининов Ы. и £ . Ввиду возможности появления в крови больных васкулитами противоэритроцитарных веществ им противопоказана гетерогемотерапия; эти лица не могут быть также донорами (независимо от клинической формы сосудистого поражения). Прямое облучение крови (экспозиция 2 мин) приводит к полному разрушению антиэргттроцитарного фактора.

Проблема лечения больных васкулитами продолжает оставаться актуальной и социально значимой ввиду возрастающего уровня заболеваемости, прежде всего среди лиц наиболее трудоспособного возраста.

Учитывая выявленные отклонения в периферических показателях эритрона (падение количества эритроцитов, изменение их морфологических свойств, снижение концентрации гемоглобина, повышение СОЭ), которые в период регресса сыпи нарастали, нами впервые использована аутоэритроцитарнад масса, подвергнутая лазерному облучению, в комплексном лечении больных васкулитами кожи. Для сравнительной оценки эффективности лазероэритротерапии (ЛЭГ) больные васкулитами

были разделены на 2 группы. Первую (контрольную) - составили 50 больных, прлучавших общепринятую терапию (санация очагов инфекции, гемодез внутривенно капельно, производные салицилкой кислоты. пиразолона, метилурацил; при гиперергических реакциях на туберкулин и сниженных показателях клеточного иммунитета ту-беркулинотерапия; при тяжелых проявлениях васкулита - кортико-стероидные препараты; аскорбиновая кислота, рутин, фитотерапия). Во вторую (опытную) группу вошли 51 человек, которым проводилось аналогичное лечение, но с дополнительным использованием аутоэри-троцитарной массы, подвергнутой лазерному облучению и вводимой интрафокально. При этом учитывалось влияние проводимого лечения на клиническое течение и периферические показатели эритрона (исследования проводились при поступлении больных в клинику, через 9-10 дней лечения и после регресса сыпи). Больные для проведения анализа были разделены на группы в соответствии с клиник -сними формами сосудистых поражений кожи (1-я гр. - аллергические вас-кулиты, 2-я гр. - кожная форма узелкового периартериита, 3-я гр.-аллергические узловатые васкулиты).

Независимо от нозологической формы васкулита мы получили сходные данные: достоверно меньше была у лиц опытной группы в сравнении с контрольной длительность общих симптомов - недомогание, слабость, нарушение сна, головная боль; повышение температуры тела (1-я гр. - 13,2 +0.1, 16,5 + 0,2 дней, Р^0,01; 2-я гр. - 24,5 + 0,2, 30,2"*+ 0,4, Р<£0,01; 3-я гр. - 1^,4 + 0,2, 17,1 + 0,3 дня, Р<0,01). Достоверно меньше у больных, получавших новый метод лечения, была и продолжительность болевых и других неприятных ощущений в суставах, костях, мышцах (1-я гр. -11,6 + 0,1, 16,3 + 0,2 дней, Р^.0,01; 2-я гр. - 21,8 + 0,4, 26,8 + 0,2 дней, Р<0,01; 3-я гр. - 11,3 + 0,2, 16,6 + 0,2 дня, Р/10,01). При изучении длительности периода регресса высыпаний та же закономерность: сыпь быстрее исчезала у больных опытной группы (1-я гр. - 15,5 + 0,1, 20,0 + ОД дня, Р<0,01; 2-я гр. 25,3 + 0,2, 30,2 + 0,4 дня, Р<0,01; 3-я гр. - 13,2 £ 0,1, 19,6 + 0,2, Р< 0,01).

Положительная клиническая динамика у больных, получавших ЛЭГ, совпадала достоверно с ускоренной нормализацией нарушенных периферических показателей эритрона - количества эритроцитов (у больных опытной группы - 4,1.Ю /д - 3,8Л012/л - 4,2Л012/л; контрольной - 4,4Л012/л - 4,0Л012/л - 3,7.1 12/л),а также их морфологических свойств; концентрации гемоглобина (в опытной

группе - 135,3 + 1,2 г/л - 124,7 + 1,3 г/л - 138,4 + 1,7 г/л; в контрольной - 138,7 + 1,5 г/л - 125,9 + 0,7 г/л - 115,1 + 0,8г/л), уровня СОЭ (опытная группа - 20,4 + 1,5 мм/ч - 18,1 + 1,0 мм/ч -10,6 ±0,6 км/ч; контрольная - 20,2 ± 1,7 мм/ч - 20,4 + 1,6 мм/ч-18,4 ± 1,4 мм/ч).

При набх-'",ении течения васкулета на протяжении 2-3 лет у больных опытной группы по сравнению с контролем выявлено достоверное снижение числа рецидиг.ов (1-я гр. - 3,4 + 0,1, 6,6 + 0,2 раза в год, Р4.0,01; 2-я гр. - 5,3 + 0,2, 6,4 + 0,4 случая в год, Р^.0,01; 3-я гр. - 3,3 + 0,2, 6,4 + 0,2 раза в год, Р<0,01), !';>и этом наряду с удлинением периода ремиссии отмечено уменьшение тяжести рецидивов у больных с различными клиническими формами сосудистых поражений кожи.

Следовательно, положительная клиническая динамика у больных, получавших лазероэритротерапию, совпадала с ускоренным восстановлением измененных периферических показателей эритрони. Анализ наших и данных литературы свидетельствует о том, что снижение хо-лит"?ства эритроцитов является неблагоприятным фактором для прогноза заболевания. У больных со сниженным количеством эритроцитов периферической крови васкулит протекал бо„эе длительно, достоверно чаще наступали рецидивы заболевания, обычно более тяжелые, чем предыдущие проявления болезни.

Полученные результаты свидетельствуют о высокой терапевтической эффективности использования аутоэритроцитов, получивших энергию лазерного излучения. Это можно в определенной мере объяснить и тем, что в эритроцитах содержатся естественные фотосвн-сибилизаторы - порфирины. При воздействии лазерного луча на эритроциты происходит усиленное поглощение энергии молекулами пор-фярина и перех в возбужденное синглетное, а затем более активное триплетное состояние. Далее имеет место перенос энергии молекулярному кислороду и переход его в возбужденное состояние, обедающее большим биологическим действием. Следствием этих реакций может быть инактивация цитотоксических клеток в очаге воспаления, торможение реакций клет';ыого иммунитета, снижение концентрации ЦИК, ослабление переноса кальция через мембрану (что замедляет дегракуляцию баэофилов и выброс ими биологически активных веществ), и другие эффекты, приводящие к подавлению аллергической реакции и связанного с этим воспалительного процесса. При этом достигается комбинация эффектов (иимунодепрессивного, противоаллергического) активированных лазерным лучом эритроцитов и renale

рина.

Таким .образом, для успешной терапии больных васкулитами необходимой является и нормализация периферических показ-;-элей эритр^на, в первую очередь количества и морфологических особенностей эритроцитов, концентрации гемоглобина, что может быт- достигнуто при использовании в комплексном лечении аутоэритроцитов, подвергнутых лазерному облучению и вводимых интрафокально.

ВЫВОДИ

1. Цри васкулитах кожи по сравнению со здоровыми лицами выявлены морфофункциональные различия эритроцитов периферической крови, что имеет значение в патогенезе заболевания; при воздействии низкоинтенсивного лазерного излу* тя клетки красной крови больных и здоровых людей реаь.руют не однотипно.

2. Резистентность эритроцитов к кислотному гемолитипу при васкули' х кожи достоверно ниже, чем у здоровых людей, что указывает на изменение соотношения в крови таких больных эритроцитов разного возраста с уменьшением фракций, обладающих высокой резистентностью.

Ниэкоинтенсивное гелий-неоновое лазерное излучение оказывает более выраженное влияние на резистентность эритроцитов к ли-зирующим воздействиям при облучении крови, больных васкулитами кожи по сравнению с таковыми - г здоровых лиц.

3. Эритроциты крови при васкулитах и у здоровых лиц исходно обладают разными свойствами в связи с достоверно повышенным количеством ионов натрия, что может быть одной ..з причин их низкой устойчивости по отношению к гемолитику.

4. При лазерном облучении крови 1п тНго у больных в отличие от здоровых в эритроциты из плазмы поступают и достоверно накапливаются в них ионы калия; >.ри этом предшествующая ионная перегрузка и набухание, связанные с повышенным содержанием ионов натрия усиливается и дополняется ионами калин; это может приводить к их частичному гемолизу, а выделяющиеся "продукты распада" эритроцитов оказывают лечебное действие превде всего за счет возросшего количества калия, обладающего противовоспалительным действием.

5. Васкулита кояи развиваются преимущественно у лиц с А|Ш) и А^ВОУ) групповой принадлежности крови. При этом преобладают больные с А,(П) группой крови. Поскольку АВ(Б ) группа крови

встречается среди населения значительно реже, чем А(П), лица с АВ(1У) группой крови имеют большую наследственную предрасположенность к появлению аллергического сосудистого заболевания кожи.

6. Разницу в преобладании.клинической формы васкулитов кожи в зависимости от групповой принадлежности крови выявить не удалось. Однако лица с группой крови А^В(ХУ), нь(-)чагце страдают рецидивами васнулита, протекающего иолее тяжело, в связи с чем чуждаются в более тщательном и длительном наблюдении с проведением лечебно-профилактических мероприятий.

7. При васкулитах кожи в 36,8 + 11,236 случаев в крови вихляются антиэритроцитарные вещества (гемолизины), отличающиеся наибольшей агрессивностью у лиц с АВ(1У) группой крови и сильным эритроцитарным антигеном А^ (сыворотки их вызывали полный гемолиз 2% и 556 взвеси эритроцитов лиц с А и В).

8. Ввиду возможности появления в крови антиэритроцитарных веществ больным васкулитами противопоказана гетероге: отерапия; они не могут быть также донорами - независимо от клинической фор-ми сосудистого поражения, особенно лица с группой крови А^П), БЫ), А1В(1У).

9. Использование интрафокально аутоэрит^оцитов, подвергнутых лазерному облучению, в комплексном лечении больных васкулитами существенно улучшает клиническое течение и вызывает ускоренное восстановление измененных периферических показателей эритрона (количество и морфологические свойства эритроцитов, концентрация гемоглобина, СОЭ); в результате достоверно снижается число рецидивов, увеличивается продолжительность ремиссии (по сравнению с общепринятыми способами лечения)..

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

I. В комплексном лечении больных васкулитами кожи предлагается использовать аутоэритроцигарную массу, подвергнутую лазер-чому облучению и вводимую интрафокально. Дня ее приготовления берется кровь из вены у самого больного в количестве 5 мл. После добавления I капли ге1..рина производится центрифугирование крови . в течение 5 мин при 1200 об/мин, после чего отсасывается надоса-дочнйя плазма. В дальнейшем аутоэритроцитарная масса подвергается прямому воздействию сфокусированного луча гелий-неонового лазера (так, чтобы поверхность облучаемых эритроцитов была ему перпендикулярна - генератор лазерного излучения ЛГ-75-1, длина волны излучения 0,633 мхм, плотность мощности излучения 3 мВт/см2, кото-

1Ь

рая регулируется с помощью индикатора ИПИ-1, выходная мощность -0,025 Вт), .экспозиция облучения 2 мин.

Полученная аутоэритроцитарная масса и подвергнутая воздействию низкоинтенсивного лазерного излучения вводится в количестве 1 му в область очага поражения. В зависимости от распространенности и степени тяжести кожного процесса на I сеанс приходится 1-3 инъекции по I мл. Процедуры повторяются через 3-5-7 дней, всего 3-7 раз.

Использование шттрафокалько лазероэритротерапии (ЛЭТ) в комплексном лечении больных способствует более быстрому регрессу проявлений сосудистого поражения: существенно сокращается длительность общих симптомов (недомогание, нарушение сна, слабость), болевых и других неприятных ощущений в костях, суставах, мышцах; высыпания регрессируют в более короткие сроки. При этом положительная клиническая динамика у больных, получающих ЛЗГ, совпадает с ускоренным восстановлением измененных периферических показателей эритрона (количество и морфологические свойства эритроцитов, концентрация гемоглобина, СОЭ). Как результат, отмечается снижение числа рецидивов васкул-.-.та, увеличение продолжительности ремиссии (по сравнению с общепринятыми способами лечения).

2. С целью прогнозирования вероятности возникновения рецидивов васкулита, более тяжелого их течения, следует обращать внимание на антигенный состав эритроцитов и периферические показатели эритрона. Больные васкулитами с А^В(1У), резус-отрицателыюй принадлежностью крови (составляющие группу повышенного врожденного риска при сосудистых поражениях кожи), со стрясенным количеством эритроцитов и концентрации гемоглобина нуждаются в более тщательном и длительном наблюдении с проведением лечебно-профилактических мероприятий.

3. Ввиду возможности появления в крови акгиэритроцитарных веществ, больные васкулитами на могут бмть донорами (категория "опасных" доноров). Им противопоказана также гегерогеиотералия.

СПИС® ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Лазероэритротерапия при сосудистых поражениях кожи // Новые физические методы н медици е: Тез.докл.I Респ.конф. - Луганск, 1990. - С.203-204.

2. Некоторые особенности действия лазерного света на кровь //Низкоинтенсивное лазерное излучение в медицинской практике:

Тез.докл.научи.-практич.конф. - Хабаровск, 1990. - С.79-80. (Соавторы: Шварева Т.И.).

3. Особенности клинических проявлений васкулитов кожи и групповой состав крови больных //Дерматология и венерология: Респ.межвед.сб. - К., "Здоров'я", 1991. - Вып.26. - С.41-45.

4. Использование аугокрови и ее компонентов в лечении сосудистых поражений кожи //IX съезд дерматовенерологов: Тез.докл. -Ы.,. 1991. - С.252. (Соавторы: Кулага В.В., Шварева Т.И., Сердюк П.В., Артамонова И.А.).

5. Особенности течения и лечения васкулитов кожи у рабочих промышленных предприятий Донбасса //Влияние промышленных загрязнений на состояние организма человека: Сб.научн.гр. (под ред. проф.В.Г.Ковешникова). - Луганск, 1991. - С.135-138. (Соавторы: Шварева Т.И., Сердюк П.В.).

6. Противорецидивное лечение больных узловатыми васкулитами //IX съезд дерматовенерологов: Тез.докл. - Ы., 1991. - С.379-380. (Соавторы: Шварева Т.И.).

ПОДПИСАНО В ПЕЧАТЬ 2.03.02. ФОРМАТ 60x84/16. БУМАГА ТИП. № 3. ПЕЧАТЬ ОФСЕТНАЯ. УСЛ. ПЕЧ. Л. 1,16. ТИРАЖ 100. ЗАКАЗ 1333. ОБЛТИЛОГРАФИЯ. 346040, ЛУГАНСК. УЛ. ВАТУТИНА, 8В-А