Автореферат и диссертация по медицине (14.03.10) на тему:Клиническая значимость оценки мутационного статуса генов тирозинкиназ и факторов транскрипции при миелопролиферативных заболеваниях

На правах рукописи

САБУРОВА Ирина Юрьевна

КЛИНИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ОЦЕНКИ МУТАЦИОННОГО СТАТУСА ГЕНОВ ТИРОЗИНКИНАЗ И ФАКТОРОВ ТРАНСКРИПЦИИ ПРИ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

14.03.10 - клиническая лабораторная диагностика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

п

с :;;о,12012

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2012

005046504

Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:доктор медицинских наук ЗАРАЙСКИЙ Михаил Игоревич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО «Северо-западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации КОЗЛОВ Антон Владимирович;

доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой лабораторной диагностики института постдипломного образования ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации ГИЛЬМАНОВ Александр Жанович.

Ведущая организация: медицинский центр «ФГУЗ центр экстренной и радиационной медицины имени A.M. Никифорова МЧС России».

Защита состоится « £ » октября 2012 года в часов на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 215.002.08 при ФГВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации (194044, г. Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева дом 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова

Автореферат разослан « » июля 2012 года

Ученый секретарь совета

доктор медицинских наук профессор

МИТИН Юрий Алексеевич

Актуальность. Острый миелобластный лейкоз (OMJT) - это гетерогенная группа опухолевых заболеваний, характеризующаяся неконтролируемой пролиферацией клона лейкемических клеток-предшественниц с блокированным на различных стадиях процессом миелоидной дифференцировки. Клинически это проявляется такими признаками повреждения нормального гемопоэза, как нейтропения, анемия и тромбоцитопения (Testa U., 2007). Действующая классификация Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ) описывает достаточно большой пул нозологий, относящихся к OMJI (Schouten Н.С., 2007). На основании стандартного цитогенетического исследования бластных клеток были выявлены следующие основные патогномоничные транслокации: t(15;17), inv(16), t(8;21), inv(3) и т.д. Все они являются клинически значимыми не только для постановки диагноза, но и для оценки степени риска развития рецидива и прогноза общей и безрецидивной выживаемости (Mrózek К., 2008). Так первые три генетические аберрации относятся к благоприятным признакам течения заболевания, а две другие, наоборот, указывают на неблагоприятный прогноз (Abu-Duhier F.M., 2001). Однако серьезной проблемой диагностики течения OMJI является то, что данные цитогенетические нарушения выявляются только у 40-50% взрослых пациентов и, примерно, у 25% в группе больных детей (Mrozek К., 2004). Таким образом, формируется достаточно большая группа пациентов с нормальным кариотипом и так называемым «средним» (intermediate) риском развитии рецидива. В настоящее время данная проблема решается при помощи исследования мутационного и экспрессионного статуса различных генов. К ним относятся гены тирозинкиназ (FLT3), ядерных факторов (NPM1), факторов транскрипции (MLL, СЕВРА, ERG) и другие гены (BAALC) (Reindl С., 2004). Однако, если клиническая значимость генов FLT3 и NPM1 уже определена, то в отношении остальных генов она требует более детального выяснения. Кроме того, на наш взгляд недостаточно изучена клиническая значимость сочетанных поражений указанных генетических структур.

Приведенные данные указывают на актуальность заявляемой работы, в которой будет проведена комплексная молекулярно-генетическая оценка

функционального состояния генов, участвующих в патогенезе острого миелобластного лейкоза у пациентов не несущих цитогенетических нарушений. На основании этого будут разработаны рекомендации по клиническому использованию данной панели для оценки течения заболевания, степени риска развития рецидива и оптимального подбора необходимой терапии.

Целью исследования явилось обоснование и разработка информативной системы комплексной молекулярно-генетической оценки функционального состояния генов, участвующих в патогенезе острого миелобластного лейкоза.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи исследования:

1. Изучить встречаемость и диагностическую значимость мутационного повреждения генов РЬТЗ и ЫРМ1 у пациентов с острым миелобластным лейкозом.

2. Изучить значимость уровней экспрессии генов ВААЬС и СЕВРА для диагностики острого миелобластного лейкоза.

3. Изучить клиническую значимость сочетанных повреждений генов ИРМ], РЬТЗ, ВААЬС и СЕВРА у пациентов с острым миелобластным лейкозом,

4. Разработать диагностическую тест-систему для комплексной молекулярно-генетической оценки функционального состояния генов, участвующих в патогенезе острого миелобластного лейкоза, проанализировать эффективность данной тест-системы и внедрить ее в клиническую практику.

Решение поставленных задач позволило сформулировать следующие основные положения, выносимые на защиту:

1. Показана диагностическая значимость выявления мутаций в гене РЬТЗ (ВТД и В835У) и гене ЫРМ1 у пациентов с острым миелобластным лейкозом.

2. Повышенный уровень экспрессии гена ВААЬС достоверно определяется у пациентов с острым миелобластным лейкозом, по сравнению с пациентами с острым лимфобластным лейкозом и группой контроля (доноры).

3. Супрессия активности гена СЕВРА достоверно определяется у пациентов с острым миелобластным лейкозом, по сравнению с контрольной группой (доноры).

4. Установлено, что наличие изолированных и сочетанных мутаций в генах РЬТЗ и ЫРМ1 не связаны с изменением экспрессии гена ВААЬС, в то время как мутации в этих генах, особенно сочетанные, связаны с изменениями экспрессии гена СЕВРА.

Научная новизна и личный вклад в науку. Впервые на молекулярно-генетическом уровне с помощью разработанного полуколичественного метода у пациентов с острым миелобластным лейкозом до начала лечения проведена оценка уровней экспрессии генов ВААЬС и СЕВРА. Показано, что значения исследованных генетических маркеров при ОМЛ достоверно отличаются не только от значений в группе контроля (доноры), но и от значений пациентов группы сравнения (ОЛЛ).

Установлено, что средний уровень экспрессии гена ВАЛЬС имеет нисходящий тренд в зависимости от типа ОМЛ (от МО до Мб), а экспрессия гена СЕВРА наоборот увеличивается. Также показано, что уровень экспрессии гена СЕВРА зависит от наличия у пациентов с ОМЛ внутренней тандемной дупликации (ВТД) в гене РЬТЗ и наличием мутации в гене №М1. На основании оценки уровня экспрессии исследуемых генов можно получить дополнительную прогностически значимую информацию о варианте ОМЛ.

Практическая значимость. Достоверное повышение уровня экспрессии гена ВААЬС и снижение активности гена СЕВРА по сравнению с контрольной группой (доноры) являются достоверными диагностическими маркерами наличия у пациентов ОМЛ, особенно в случаях, когда у этих пациентов не выявляются какие-либо цитогенетические изменения.

Понижение экспрессии гена СЕВРА статистически значимо коррелирует с наличием ВТД в гене РЬТЗ по сравнению с пациентами без подобной мутации.

Таким образом, использование разработанной тест-системы для оценки мутационного и экспрессионного статуса исследуемых генов у пациентов с ОМЛ

с отсутствием цитогенетических перестроек может служить дополнительным диагностическим критерием при постановке диагноза OMJ1.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на конференции с международным участием «Modern trends in human leukemia» (Вильзеде, Германия, 2008), конференции с международным участием «Modern Trends in Human Leukemia and Cancer» (Гамбург, Германия, 2010); 6-ом симпозиуме "Биологические основы терапии онкологических и гематологических заболеваний" (Москва, 2009), 3-ем мемориальном конгрессе имени P.M. Горбачевой «Трансплантация гематопоэтических клеток» (Санкт-Петербург, 2009); научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете концепции здравоохранения России до 2020 года» (Москва, 2009 г).

Реализация результатов исследования. Результаты работы внедрены в практику лечебной работы СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова и городской поликлиники №31, а так же используются для обучения студентов и курсантов факультета последипломного образования кафедры клинической лабораторной диагностики с курсом молекулярной медицины СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова.

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 16 работ, в том числе 6 в иностранных журналах и сборниках и 4 в журналах, входящих в перечень ВАК.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методик, главы результатов собственных исследований, заключения и выводов. Текст диссертации изложен на 97 страницах стандартной печати, цифровой материал представлен в 8 таблицах, работа иллюстрирована 26 рисунками. Указатель литературы содержит 125 ссылки на публикации отечественных и зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследуемую группу составили 88 пациентов с диагнозом острый миелобластный лейкоз, группу сравнения составили 30 пациентов с диагнозом острый лимфолейкоз (ОЛЛ). Диагнозы были подтверждены по клиническим

критериям и с помощью метода многоцветной проточной цитофлюориметрии. Пациенты наблюдались в Центре лабораторной диагностики и на отделении гематологии кафедры факультетской терапии Санкт-Петербургского Государственного Медицинского Университета им. акад. И. П. Павлова в период с октября 2008 года по май 2010 года. Контрольную группу составили 32 здоровых донора крови. Средний возраст пациентов исследуемой группы составил 54+5 года, группы сравнения - 24+ 3 года, контрольной группы составил 32+3года.

Из лейкоцитов костного мозга и периферической крови выделяли ДНК и РНК с использованием готовых наборов фирмы ДНК-Технология, Москва. Из РНК получали кДНК с помощью реакции обратной транскрипции в модификации для рандомизированных олигопраймеров, с использованием обратной транскриптазы M-MLV. Качество выделенной ДНК и РНК определяли электрофоретическим способом.

Выявление ВТД в гене FLT3 проводили с помощью реакции амплификации по стандартной двухпраймерной схеме с последующим электрофорезом в полиакриламидном геле. Определение мутации D835Y в гене FLT3 проводили амплифицируя участок гена с последующей рестрикцией продукта рестриктазой EcoRV (Chang T.L. et al., 2007). Детекцию мутаций типов «А» и «В» в гене NPM1 проводили с помощью реакции амплификации по стандартной двухпраймерной схеме с последующим форезом в полиакриламидном геле (Schoch С. et al., 2005). Определение относительного уровня экспрессии гена BAALC и СЕВРА проводили амплификацией в реальном времени с использованием красителя SYBR GREEN (Bienz М. et al., 2005; Gombart A.F. et al., 2002), путем сопоставления сигнала от исследуемого гена и референц-гена - ß2m (Р2микроглобулин). Расчет проводился путем нормализации сигналов генов BAALC и СЕВРА по сигналу от референц-гена выражался в условных единицах (УЕ).

При статистической обработке данные систематизировались с помощью специальных отчетов и копировались в статистическую программу WinStat 3.1.

Оценка достоверности различий проводилась с помощью стандартных непараметрических статистических программ (Т-тест, критерий Манна-Уитни).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Для стандартизации разработанных методик использовали клинические образцы крови и костного мозга больных с диагнозом ОМЛ, ОЛЛ, доноров и клеточную линию. Специфичность методик проводили путем выборочного секвенирования.

Для определения наличия внутренних тандемных дупликаций (ВТД) в гене ИЛЗ была отобрана группа, состоящая из 56 пациентов и 30 доноров. В общей группе из 56 пациентов с ОМЛ мутация ВТД-РЬТЗ была обнаружена у 9 пациентов, что составляет 16,1% положительных результатов. Ни у одного из 30-ти обследованных доноров данная мутация выявлена не была.

В связи с тем, что одной из основных задач диссертации являлось изучение диагностической значимости данного показателя в общей структуре ОМЛ, а также специфичность данной мутации к различным типам ОМЛ, мы провели распределение пациентов общей группы согласно ФАБ классификации 1989 года. Результаты по встречаемости мутации ВТД-РЬТЗ в зависимости от варианта ОМЛ представлены в таблице 1.

Несмотря на то, что полученные группы больных получились не большие, можно отметить что у пациентов с ОМЛ, у которых тип лейкоза невозможно было определить методом проточной цитометрии (8 человек), а также у пациентов с типом М1 (11 человек) данная мутация нами не была выявлена. Однако в схожих по численности группах пациентов с ОМЛ М2 (15 человек) и ОМЛ М4 (12 человек, соответственно) данная мутация была выявлена у трех и двух пациентов соответственно.

Таким образом, полученные нами данные о распределении мутации ВТД в гене ИЛЗ согласуются с литературными данными. Хотелось бы подчеркнуть, что хотя и исследуемые группы при распределении по типам ОМЛ были

невелики, отмечалась тенденция к более частой встречаемости данной мутации у пациентов с типами М2 и М4 ОМЛ.

Для определения наличия мутации Э835У в гене РЬТЗ была отобрана группа, состоящая из 56 пациентов и 30 доноров. В общей группе из 56 пациентов с ОМЛ мутация 0835У-РЬТЗ была обнаружена у 4 пациентов, что составляет 7,1% положительных результатов.

Таблица 1

Встречаемость мутации ВТД-РЬТЗ в зависимости от варианта ОМЛ по

классификации РА В

Диагноз Количество пациентов ВТД - БЬТЗ мутация присутствует ВТД - РЬТЗ мутация отсутствует

ОМЛ? 8 0 8

ОМЛ, МО 3 2 1

ОМЛ, М1 11 0 11

ОМЛ, М2 15 3 12

ОМЛ, МЗ 4 2 2

ОМЛ, М4 12 2 10

ОМЛ, М5 2 0 2

ОМЛ, М7 1 0 1

ИТОГО: 56 9 47

Диагностическая значимость данного теста была изучена путем формирования общей группы пациентов по типам ОМЛ согласно классификации ФАБ от 1989 года (таблица 2).

Несмотря на то, что встречаемость мутации Б835У гена РЬТЗ не велика, хотелось бы подчеркнуть некоторые особенности этой генетической поломки. При сравнении групп пациентов с различными типами ОМЛ сопоставимыми по численности нами была выявлена тенденция возрастанию частоты выявления данной мутации у пациентов с типами ОМЛ М2 и М4.

Для определения наличия мутаций типа «А» и «В» в гене №М1 была отобрана группа, состоящая из 74 пациентов и 30 доноров.

В общей группе из 74 пациентов с ОМЛ мутации типа «А» и «В» гена ИРМ1 были обнаружены у 45 пациентов, что составляет 60,8% положительных результатов. При анализе частоты мутации типа «А» и «В» гена ИРМ1 в сравнимых по численности группах пациентов (ОМЛ М1, М2 и МЗ) максимальная встречаемость отмечалась в группе М2 - 79%, затем в группе М1 -65%, затем в МЗ - 60% и М4 - 50%.

Уровень относительной экспрессии гена ВААЬС был изучен в трех группах пациентов. В первую исследуемую группу вошли пациенты с различными типами ОМЛ (п=75). Группу сравнения составили пациенты с ОЛЛ (п=15). В качестве контрольной группы использовались образцы крови здоровых доноров (п=32). Данные, отражающие средний уровень относительной экспрессии гена ВААЬС в указанных группах, представлен на рисунке 1.

Таблица 2

Встречаемость мутации Б835У в гене РЬТЗ в зависимости от варианта ОМЛ по классификации БАВ

Диагноз Количество пациентов Б8Э5У-РЬТЗ мутация присутствует Б835У-РЬТЗ мутация отсутствует

ОМЛ? 8 0 8

ОМЛ, МО 3 0 3

ОМЛ, М1 11 0 11

ОМЛ, М2 15 2 13

ОМЛ, МЗ 4 1 3

ОМЛ, М4 12 1 11

ОМЛ, М5 2 0 2

ОМЛ, М7 1 0 1

ДОНОРЫ 30 0 30

ИТОГО: 56 4 52

У.Е. / А

*

--■(■•К' Уровень жспрксии гам ВААЬС -Г-'

'■ шммт«

Рисунок 1. Уровень относительной экспрессии гена ВАЛЬС в исследуемых группах (* - Р<0,01).

Из данных диаграммы видно, что уровень экспрессии гена ВААЬС в

исследуемой группе пациентов с ОМЛ является максимальным, уровень его в группе сравнения (пациенты с ОЛЛ) был немного ниже и минимальный уровень определялся в контрольной группе (доноры).

При статистической обработке результатов были получены достоверные различия между исследуемой группой и контрольной групой (Р<0,01).

Важным моментом, определяющим диагностическую ценность предлагаемой методики, был вопрос о взаимном влиянии исследуемых генов друг на друга. Была изучена относительная экспрессия гена ВААЬС в зависимости от мутационного статуса генов РЬТЗ и №М1.

Результаты показали, что активность гена ВААЬС не связана с изолированным мутационным поражением генов РЬТЗ и ИРМ1.

Данные по относительным уровням экспрессии гена ВААЬС в зависимости от сочетанного мутационного статуса генов №М1 и ВТД РЬТЗ, а так же ЫРМ1 и Б835У РЬТЗ так же не показали достоверных различий (Р>0,05).

Из представленных диаграмм следует, что сочетанное повреждение генов ИРМ1 и ЬЬТЗ не связано статистически с изменением экспрессии гена ВААЬС. Однако, мы считаем небезынтересным факт наличия тенденции к увеличению экспрессии указанного гена в группах с сочетанным повреждением гена ЫРМ1 и ВТД РЬТЗ и ЫРМ1 и Б835У РЬТЗ.

Таким образом, было показано, что уровень экспрессии гена ВААЬС более 1УЕ является диагностически значимым для выявления пациентов с ОМЛ по сравнению не только с контрольной группой, но и группой сравнения. Изолированное поражение генов ИРМ1 и РЬТЗ не приводило к значимым изменениям в экспрессионном статусе гена ВААЬС. Однако, наличие у

пациентов сочетанного мутационного повреждения этих генов определяло тенденцию к повышению экспрессии гена ВААЬС.

Уровень относительной экспрессии гена ВААЬС был изучен в трех группах пациентов: исследуемую группу составили пациенты с различными типами ОМЛ (п=74), группу сравнения - пациенты с ОЛЛ (п=25) и контрольную группу -здоровые доноры крови (п=32). Расчет относительного уровня экспрессии гена СЕВРА велся путем нормализации уровня экспрессии исследуемого гена по референсному гену (Р2-микроглобулин). Данные, отражающие средний уровень относительной экспрессии гена СЕВРА в указанных группах представлены на рисунке 2.

Рисунок 2. Уровень относительной экспрессии гена СЕВРА в исследуемых группах (* - Р<0,05 по отношению к группе доноров).

Из данных представленных на диаграмме видно, что во всех трех группах уровни экспрессии расположены в отрицательной области диаграммы. Это указывает на тот факт, что исследуемый ген находится в разной степени супрессии. Причем различия в степени супрессии гена СЕВРА у пациентов с ОМЛ и доноров были статистически значимы. При исследовании уровней экспрессии исследуемого гена у пациентов в зависимости от типа ОМЛ был выявлен положительный тренд, с минимальным значением для типа МО и максимальным, для типа Мб. При статистической обработке полученных данных были выявлены значимые различия (Р=0,039) в экспрессии гена СЕВРА у пациентов с ОМЛ МО и ОМЛ М5. Как и в случае с геном ВААЬС мы изучили феномен влияния мутационного статуса генов РЬТЗ и МРМI на экспрессию гена СЕВРА. Было показано, что активность гена сочетается с наличием у пациентов ВТД в гене РЬТЗ. Так, в группе пациентов с данной мутацией уровень

экспрессии исследуемого гена был почти в 2 раза ниже группы пациентов без таковой (Р=0,02). Данные по относительным уровням экспрессии гена СЕВРА в зависимости от сочетанного мутационного статуса генов №М1 и ВТД РЬТЗ, представлены на рисунке 3.

При оценке относительного уровня экспрессии гена СЕВРА в зависимости от сочетанного мутационного статуса генов №М1 и Ш35У РЬТЗ статистически значимых различий нами не было выявлено.

Из представленных диаграмм следует, что мутации генов ЫРМ] и ВТД-РЫЗ сочетаются со статистически значимыми различиями в уровнях экспрессии гена СЕВРА. Так, отсутствие мутаций в обоих генах приводит к активации (Р=0,07) экспрессии гена СЕВРА. Изучение влияния сочетанного мутационного процесса в генах №М1 и П835У-РТТЗ не выявило статистически значимых различий в уровнях экспрессии гена СЕВРА.

Таким образом, было показано, что уровень экспрессии гена СЕВРА, так же как и ген ВААЬС является диагностически значимым для выявления пациентов с ОМЛ по сравнению с контрольной группой, но не с группой сравнения. Причем, несмотря на малочисленность групп пациентов по типам ОМЛ, была выявлена статистически значимые различия в экспрессии указанного гена между группами пациентов с ОМЛ МО и ОМЛ М5.

Наличие у пациентов изолированной мутации ВТД-РРТЗ коррелировало с почти в 2-х кратным увеличением супрессии гена СЕВРА, по сравнению с таковой у пациентов без мутации. Кроме того, была определена тенденция, согласно которой отсутствие сочетанного

ж

Уровень экспрессии гена СЕВРА

■ ИРМ 1 "-" ВТД П.ТЗ

П ИРМ 1 "-" ВТД П-ТЗ

о №м 1 "+■■; втд рьтз "-

□ ИРМ 1 ; втд (тлз

Рисунок 3. Относительные уровни экспрессии гена СЕВРА в зависимости от сочетанного мутационного статуса генов №М1 и ВТД-Р! ,ТЗ (Р=0,07).

мутационного поражения в генах №М1 и ВТД-РЬТЗ у пациентов с ОМЛ было связано с повышением экспрессии гена СЕВРА

Подводя общий итог полученным данным, следует отметить, что диагностическую ценность для выявления случаев ОМЛ имеют все исследуемые гены. Описанные изменения не выявляются с помощью цитогенетических методик, а, следовательно, будут крайне полезны в диагностике ОМЛ у пациентов у которых отсутствуют патогномоничные критерии заболевания, такие как транслокации. Причем крайне важное значение в диагностике ОМЛ имеет факт наличия сочетанных поражений:

мутаций в генах ИРМ1 и РЬТЗ с одной стороны и экспрессионного статуса

генов СЕВРА и ВААЬС, с другой.

В результате проведенного исследования нам удалось разработать диагностическую систему для оценки патогенетических механизмов ОМЛ у пациентов не несущих цитогенетических поломок. Данная система была разработана с использованием отечественных реактивов и оборудования для детекции различных типов мутаций в генах БЬТЗ и ИРМ1, а так же для оценки уровней относительной экспрессии генов ВААЬС и СЕВРА.

ВЫВОДЫ

1. Мутации 0835У и ВТД в гене БЬТЗ и мутации типа «А» и «В» в гене №М1 являются важными диагностическими маркерами патогенетических механизмов при остром миелобластном лейкозом, особенно в случаях, когда цитогенетические изменения не выявляются стандартными методиками.

2. Уровень экспрессии гена ВААЬС достоверно повышен (Р<0,01) у пациентов с острым миелобластным лейкозом по сравнению с пациентами с острым

лимфобластным лейкозом и донорами.

3. Уровень экспрессии гена СЕВРА достоверно снижен (Р<0,05) у пациентов с острым миелобластным лейкозом по сравнению с группой доноров..

4. Наличие изолированных и. сочетанных мутаций в генах ИЬТЗ и ЫРМ1 не связано с модуляцией экспрессии гена ВААЬС у пациентов с острым миелобластным лейкозом.

5. Наличие у пациентов с острым миелобластным лейкозом внутренних тандемных дупликаций в гене ПЛЗ достоверно связано с 2-х кратным увеличением супрессии гена СЕВРА, а отсутствие этого типа мутаций, сочетающееся с наличием нормального гена ЫРМ1, наоборот коррелирует с активацией гена СЕВРА.

6. Использование при первичной диагностике острого миелобластного лейкоза диагностической тест-системы, учитывающей мутационные повреждения генов №М1 и РЬТЗ и экспрессионный статус генов ВААЬС и СЕВРА, может служить для дополнительной диагностики данного заболевания, особенно в случаях, когда у пациентов при стандартных методиках не выявляются цитогенетические нарушения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендовано определять наличие у пациентов с острым миелобластным лейкозом мутации типа ВТД или 0835У в гене РЬТЗ, а так же типа «А» или «В» в гене ЫРМ1, что является достоверным диагностическим маркером, особенно в случаях, когда цитогенетические изменения не выявляются стандартными методиками.

2. Оценка уровней экспрессии гена ВААЬС и СЕВРА рекомендуются как самостоятельное исследование при первичной диагностике острого миелобластного лейкоза для выбора оптимальной терапии.

3. Рекомендовано у пациентов с острым миелобластным лейкозом при наличии ВТД в гене БЬТЗ проводить исследование уровня экспрессии гена СЕВРА для оценки прогноза течения заболевания

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зарайский М.И. Динамика уровня экспрессии гена субъединицы теломеразы (hTERT) у пациентов с хроническим миелолейкозом на фоне монотерапии Гливеком / A.B. Сипол, Д.И. Бутлицкий, И.Ю. Сабурова, Б.В. Афанасьев // Материалы V симпозиума «Биологические основы терапии онкологических заболеваний» (Москва). - Вопросы гематологии, онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2006. - Т.5, №4. - С. 11-12.

2. Zarayskiy М. Investigations of FLT3 gene status in patients with AML diseases /

I. Saburova, Y. Onikiychuk // XVII Wilsede Meeting. Modern Trends in Human Leukemia. Hamburg. June 18-22, 2008. - P. 85.

3. Onikiychuk Y. M. HOX-genes expression as a prognostic factor in acutc leukemia patients / I. Saburova, M. Zarayskiy // XVII Wilsede Meeting. Modern Trends in Human Leukemia. Hamburg. June 18-22, 2008. - P. 86.

4. Saburova I. The V617F Mutation of JAK2 Gene in Patients with Myeloproliferative Disorders / Y. Onikiychuk, M. Zarayskiy // XVII Wilsede Meeting. Modern Trends in Human Leukemia. Hamburg. June 18-22, 2008. - P. 87.

5. Зарайский М.И. Уровень экспрессии гена теломеразы (¡hTERT) у пациентов с

хроническим миелолейкозом на фоне монотерапии Гливеком / Д.И. Бутлицкий, И.Ю. Сабурова, B.J1. Эмануэль // Клинико-лабораторный консилиум. - 2008. - Т. 21, №2. - С. 26-29.

6. Сабурова И.Ю. Определение мутации V617F в гене Jak2 у пациентов с хроническими миелопролиферативными заболеваниями / Я.В. Оникичук, И.И. Зотова, Г.Н. Сологуб, М.И. Зарайский // Ученые записки. - 2008. — Т. 4. - С.32-35.

7. Сабурова И.Ю. Детекция мутации V617F в гене Jak2 - основа диагностики

хронических миелопролиферативных заболеваний / Я.В. Оникичук, И.И. Зотова, Г.Н. Сологуб, М.И. Зарайский // Клинико-лабораторный консилиум. - 2008. - Т.25, №6. - С. 23-26.

8. Saburova Y. Detection the V617F Mutation of Jak2 Gene in Patients with Myeloproliferative Disorders / Y. Onikiychuk, Y. Zotova, G. Sologub, M. Zarayskiy // Cellular Therapy and Transplantation. - 2008. - V.l, No2. - P. 5456.

9. Зарайский М.И. Исследование статуса гена FLT3 у пациентов с острым миелобластным лейкозом / Я.В. Кувалкина, И.Ю. Сабурова // Онкогематология. - 2008. - Т4. - С.46-47.

10. Сабурова И.Ю. Определение мутации V617F в гене Jak2 у пациентов с неверифицированными хроническими миелопролиферативными заболеваниями / Я.В. Оникичук, И.И. Зотова, Г.Н. Сологуб, М.И. Зарайский //Онкогематология. - 2008. -Т.4. - С.71.

11. Слободнюк К.А. Диагностическая значимость мутации FLT3-ITD у пациентов с острым миелобластным лейкозом. / И.Ю. Сабурова, М.Н. Горчакова, М.В. Русанова, А.Н. Рыжак, М.И. Зарайский, Е.Е. Зуева // Труды научно-практической конференции «Лабораторная медицина в свете концепции здравоохранения России до 2020 г.». Москва. 28-30 сентября, 2009. - С. 193-194.

12. Slobodnyuk К. Determination of FLT3-ITD and D835Y mutations as a factor of prognosis in immunophenotypically verified diagnosis of patients with acute myeloid leukemia in Saint Petersburg / Y. Saburova, M. Gorchakova, E. Rusanova, A. Kurtova, M. Zaraiski, E. Zueva // Cellular Therapy and Transplantation. ISSN 1866-8836. - 2009. - V. 5. - P.109.

13. Saburova Y. Investigation of СЕВРА and BAALC genes expression status as additional genetics features for acute myeloid leukemia (AML) diagnostics / A. Gorbunova, M. Ivancenko, K. Slobodnyuk, M. Gorchakova E. Rusanova, A. Kurtova, D. Cherednichenko, Y. Zueva, M. Zaraiski // XVIII Wilsede Meeting. Modern Trends in Human Leukemia and Cancer. Hamburg. June 19-23, 2010. -P. 89.

14. Сабурова И.Ю. Выявление внутренних тандемных дупликаций и мутации D835Y в гене FLT3 у пациентов с острым миелобластным лейкозом / А.В

Горбунова, К.А. Слободнюк, М.Н. Горчакова, М.В. Русанова, A.C. Куртова, Е.Е. Зуева, М.И. Зарайский // Ученые записки. - 2010. - Т. 17, № 3.-С. 48-51.

15. Сабурова И.Ю. Исследование уровня экспрессии гена СЕВРА у пациентов острым миелобластным лейкозом / К.А. Слободнюк, М.Н. Горчакова, Е.Е. Зуева, Д.В. Чередниченко, В.Л. Эмануэль, М.И. Зарайский // Ученые записки.-2011. - Т.З. - С.52-54.

16. Сабурова И.Ю. Разработка методов оценки мутационного статуса гена FLT3 и уровня экспрессии генов СЕВРА и BAALC, включенных в патогенез острого миелобластного лейкоза / A.B. Горбунова, К.А. Слободнюк, М.Н. Горчакова, Е.Е. Зуева, Д.В. Чередниченко, В.Л. Эмануэль, М.И. Зарайский // Уральский медицинский журнал. - 2011. - Т. 81, №3. - С.90-94.

Формат 60x84/16 Заказ №351

Подписано в печать 02.07.12.

Обьем 1 пл. Тираж 100 экз.

Типография ВМедА, 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6.