Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Клиническая значимость некоторых сывороточных и тканевых маркеров при раке молочной железы
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.27
Автореферат диссертации по медицине на тему Клиническая значимость некоторых сывороточных и тканевых маркеров при раке молочной железы
На правах рукописи
БОГОВА Валерия Владимировна
КЛИНИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ НЕКОТОРЫХ СЫВОРОТОЧНЫХ И ТКАНЕВЫХ МАРКЕРОВ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
14.00.27 - хирургия 14.00.14 - онкология
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва-2008
003454210
Работа выполнена в Государственном институте усовершенствования врачей Министерства обороны Российской Федерации на кафедре онкологии
Научный руководитель:
лауреат Государственных премий СССР и РФ доктор медицинских наук, профессор
БРЮСОВ Павел Георгиевич
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор
РОЗАНОВ Валерий Евгеньевич
доктор медицинских наук, профессор
КИЖАЕВ
Евгений Васильевич
Ведущая организация: 2-й Центральный военный клинический госпиталь имени П.В. Мандрыка.
Защита диссертации состоится^З ноября 2008г. в 14.00 на заседании диссертационного совета Д 215.009.01 в Государственном институте усовершенствования врачей Министерства обороны Российской Федерации (107392, г. Москва, ул. Малая Черкизовская, д.7).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного института усовершенствования врачей МО РФ.
Автореферат разослан « » О/СШ-^г^ 2008 г.
Ученый секретарь диссертационного совета
доктор медицинских наук Зубрицкий В.Ф.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы
Рак молочной железы (РМЖ) в силу широкой распространенности и неуклонного роста заболеваемости в большинстве стран мира является одной из важных проблем современной онкологии и считается самой частой опухолью у женщин [Летягин В.П. и др., 2006; Давыдов М.И. и др., 2007; Sanders М. et al„ 2007; Борисов В.И., 2008]. Так, в 2007 г. в мире диагностировано более 1 млн. новых случаев РМЖ, 5 лет переживают немногим более половины (54%) из них [Переводчикова Н.И., 2005; Гарин
A.M. и др., 2006; Чиссов В.И. и др., 2006]. При этом число случаев РМЖ увеличивается в каждой стране, прибавляя ежегодно 1-2%.
Высокие показатели смертности и неудовлетворительные результаты лечения РМЖ связывают с тем, что 30-50% больных поступают в стационары с распространенным процессом [Портной С.М., 2005; Семиглазов В.Ф. и др., 2005; Гарин A.M. и др., 2006; Miller К. et al., 2008], когда лечение в ряде случаев малоэффективно. Поэтому доклиническая диагностика РМЖ с помощью таких сывороточных опухолевых маркеров как, раково-эмбриональный антиген (РЭА) [Высоцкая И.В., 2005; Mori Т. et al., 1989; Horowitz J. et al., 1989], тканевой полипептидный антигена (ТПА) [Летягин
B.П., 2000; Macolm S„ 1996], карбогидратный антиген 15-3 (СА-15-3) (Silva Е. et al., 2000), общая активность щелочной фосфатазы (ЩФ) [Любимова Н.В. и др., 2005], ферритин [Flammia М. et al., 1985], муцитоподобный или ассоциированный со слизистым раком антиген (MCA) [Novacovic S. et al., 1989; Bieglmayer С. et al., 1990] не утратили своей актуальности до настоящих дней. Оценка диагностических и прогностических возможностей вышеуказанных сывороточных маркеров при РМЖ в отечественной и зарубежной литературе далеко не однозначна [Сергеева Н.С. и соавт., 2008]. Однако клинические исследования в этой области проводятся достаточно интенсивно, с привлечением новых маркеров и их сочетаний для более эффективной своевременной диагностики данной патологии, мониторинг эффективности
лечения и выявлении раннего рецидива [Герштейн Е.С. и др., 2004; Кушлинский Н.Е. и др., 2005; Чиссов В.И. и др., 2006].
В последние годы большое внимание уделяется различным молекулярным маркерам, которые тесно связанны с фундаментальными биологическими свойства опухоли [Кушлинский Н.Е., 1999; Копнин Б.П., 2007; Gaikwad N. et al., 2008]. Крайне актуальной остается разработка молекулярно-биологических методов оценки биологического «поведения» опухоли, общего прогноза и выбора наиболее адекватных схем лечения [Зборовская И.Б. и др., 1998; Гарин A.M., 1998; Высоцкая И.В., 2005; Имянитов Е.Н. и др., 2008]. Кроме того, на основании исследования молекулярно-биологических маркеров при РМЖ может быть создана новая тактика лечения [Кушлинский Н.Е. 2002; Имянитов Е.Н. и др., 2007, 2008; Anagnostopoulos К. et al., 2008; Dass К. et al., 2008]. Знание специфических биологических характеристик опухолевого процесса может помочь не только в усовершенствовании существующих схем лечения, но и в развитии новых подходов к патогенетической терапии РМЖ, направленной на ключевые системы передачи регуляторных сигналов в клетке [Жуков Н.В. и др., 2008; Urruticoechea A. et al., 2005].
В настоящее время пристальное внимание онкологов направлено на изучение у онкологических больных продукции ряда цитокинов и, в частности, интерлейкинов, небольших пептидных информационных молекул, которые регулируют межклеточные и межсистемные взаимодействия, определяют выживаемость клеток, способны стимулировать или подавлять их рост, дифференцировку и функциональную активность [Гаджиева С.Ш. и др., 2006; Жильчук В.Е. и др., 2007]. Показано, что повышенная продукция цитокинов клетками микроокружения опухоли также может благоприятствовать ее ускоренному росту и распространению метастазов [Полайн М. Камачо и др., 2008]. Молекулярные механизмы, определяющие возникновение локомоторного фенотипа как в нормальных клетках при митогенных стимулах, так и при бласттрансформации, до конца не изучены, однако добавление
цитокинов предотвращает апоптоз [Пальцев М.А. и др., 2004; Телетаева Г.М., 2007].
Основной характеристикой злокачественных новообразований является их способность к неограниченному росту, устойчивость к действию факторов, регулирующих процессы пролиферации и дифференцировки, а также инвазии и метастазированию [Киселев В.И. и др., 2005; Копнин Б.П., 2007]. В экспериментальных исследованиях установлено, что в основе способности раковых клеток к инвазивному росту и гематогенному метастазированию может быть активация механизмов ангиогенеза в первичной опухоли и ее метастазах [Степанова Е.В. и др., 2000; Соломко Э.Ш. и др., 2007; Folkman J., 2001; Zhao Т. et al., 2008]. Кроме того, стало известно, что одним из ключевых активаторов неоангиогенеза в опухолях человека является фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) [Ким Е.А. и др., 2008].
Актуальность настоящего исследования определяется необходимостью количественного изучения одновременно роли ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови, уровней экспрессии рецепторов эстрогенов (РЭ), прогестерона (РП), белка Her-2/neu в первичной опухоли, их связь с другими сывороточными маркерами (СА-15-3, РЭА) в оценке особенностей биологического «поведения» РМЖ, позволяющих определять прогноз опухолевого процесса в каждой конкретной клинической ситуации.
Цель работы: сравнительный анализ продукции ряда сывороточных и тканевых опухолевых маркеров у больных раком и доброкачественными новообразованиями молочной железы, их связь с основными клиническими, морфологическими, биохимическими характеристиками заболевания и прогнозом.
Задачи исследования: 1. Изучить уровни СА-15-3, РЭА в сыворотке крови больных РМЖ до и после лечения, сравнить с таковыми показателями у больных доброкачественными новообразованиями молочных желез. Сопоставить исходные значения СА-
15-3 и РЭА с исходным уровнем экспрессии тканевых маркеров в опухоли (РЭ, РП, Нег-2/пеи) и ИЛ-6, УЕвР в сыворотке крови.
2. Провести сравнительное определение частоты выявления и содержания ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ и доброкачественными новообразованиями молочных желез (ДНМЖ) и сопоставить их с таковыми показателями у практически здоровых женщин (группа контроля).
3. Провести сравнительный анализ частоты выявления и уровней УЕвР в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных РМЖ и ДНМЖ.
4. Изучить связь исходных уровней ИЛ-6 и УЕСР в сыворотке крови больных РМЖ с учетом основных клинических и морфологических характеристик заболевания. Сопоставить их исходные уровни с гормональной чувствительностью опухоли (наличием экспрессии РЭ и РП).
5. Проанализировать исходные уровни ИЛ-6 и УЕвР в сыворотке крови больных РМЖ с учетом уровня экспрессии белка НЕЯ-2/пеи в первичной опухоли. Оценить связь исходных их значений с прогнозом безрецидивной выживаемости.
Научная новизна
1. Проведен одновременно анализ сывороточных (СА-15-3, РЭА, ИЛ-6, УЕвР) и тканевых (РЭ, РП, Нег-2/пеи) маркеров у больных РМЖ для оценки диагностических возможностей и прогноза этих лабораторных тестов. Обнаружено, что исходный уровень СА-15-3 в сыворотке крови больных РМЖ достоверно выше, чем у больных ДНМЖ, а после проведенной терапии снижался в 60% наблюдений. При этом, не выявлено связи СА-15-3 с отдаленными результатами лечения больных РМЖ. РЭА также не был связан с основными клиническими признаками РМЖ.
2. Показано, что ИЛ-6 выявлялся в сыворотке крови всех больных РМЖ, в 85% наблюдений при ДНМЖ и в 85,3% у практически здоровых женщин, а исходные значения цитокина не различались между больными РМЖ и ДНМЖ, но были достоверно выше, чем в контроле. При этом, исходная концентрация ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ не зависела от возраста пациенток,
гистологического варианта строения опухоли и степени ее дифференцировки, однако отражала стадию опухолевого процесса и была достоверно выше у больных РМЖ с регионарными метастазами.
3. Ключевой активатор неоангиогенеза УЕСР был обнаружен в сыворотке крови всех обследованных больных и здоровых женщин, при этом убедительно показано, что уровни УЕСР достоверно выше при РМЖ по сравнению с контролем и больными ДНМЖ, а исходные значения УБвР в сыворотке крови больных РМЖ достоверно зависели от стадии болезни и наличия метастазов в регионарных лимфатических узлах.
4. У больных РМЖ, в отличие от практически здоровых женщин, выявлена достоверная корреляционная зависимость между исходными уровнями ИЛ-6 и УЕвР в сыворотке крови. Обнаружено, что у больных РМЖ исходные показатели ИЛ-6 и УЕвР в сыворотке крови не зависели от наличия экспрессии РЭ, РП и Нег-2/пеи в опухоли. Экспрессия белка Нег-2/пеи выявлена в 22,9% опухолей и была связана со степенью злокачественности РМЖ, стадией болезни и возрастом пациенток.
5. Не обнаружено достоверной связи у больных РМЖ между частотой выявления и уровнями СА-15-3, РЭА и исходными показателями ИЛ-6 и УЕОБ в сыворотке крови.
Практическая значимость
Клинический анализ исследованных сывороточных и тканевых маркеров у больных РМЖ позволил выявить их практическую значимость, а именно: показатель 3-летней безрецидивной выживаемости больных РМЖ зависел не только от стадии болезни, но и от исходных уровней провоспалительного цитокина ИЛ-6 и ключевого активатора неоангиогенеза УЕвР в сыворотке крови. При этом наиболее низкие показатели 3-летней безрецидивной выживаемости среди больных РМЖ отмечены при высоких исходных значениях в сыворотке крови ИЛ-6 (более 5 пг/мл) и УЕвР (более 500 пг/мл), а также отмечена тенденция к снижению 3-летней безрецидивной выживаемости
среди пациенток с положительным уровнем экспрессии белка Her-2/neu в первичной опухоли
Реализация результатов исследования
Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедры онкологии ГИУВ МО РФ, в практическую работу ГВКГ им H.H. Бурденко.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту
Сывороточные опухолевые маркеры СА-15-3 и РЭА не обладают достоверной диагностической ценностью при новообразованиях молочной железы и их определение не повышает диагностические возможности выявления РМЖ.
Определение концентрации цитокина ИЛ-6 в сыворотке крови позволяет судить о наличии поражения метастазами РМЖ регионарных лимфатических узлов и высокой степени злокачественности опухоли.
Ключевой активатор неоангиогенеза VEGF можно использовать наряду с общеизвестными клинико-морфологическими характеристиками РМЖ как дополнительного маркера наличия опухоли, который также обладает высокой информативностью при оценке прогноза болезни.
У больных РМЖ имеется достоверная корреляционная зависимость между исходным уровнем ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови, которая отсутствует с другими сывороточными (СА-15-3, РЭА) и тканевыми (Her-2/neu) маркерами.
Показатель 3-летней безрецидивной выживаемости больных РМЖ можно прогнозировать при оценке исходных уровней ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови.
При исходных значениях ИЛ-6 (более 5 пг/мл) и VEGF (более 500 пг/мл) показатель 3-летней безрецидивной выживаемости пациенток при РМЖ является наиболее низким.
Апробация диссертации
Материалы исследования обсуждались на международных, всероссийских и региональных научно-практических конференциях. Результаты исследований доложены на XV Российском национальном
конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008), на Российском национальном конгрессе «Дни лабораторной медицины России» (Москва, 2008). Диссертация апробирована 26 мая 2008 г. на заседании кафедры онкологии ГИУВ МО РФ.
Публикации
По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, из них 1- в центральной печати.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав (обзор литературы, описание материала и методов исследования, собственные результаты и их обсуждение), заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы из 293 источников (90 отечественных, 203 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 28 таблицами и 12 рисунками.
СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В исследование включено 70 больных РМЖ в возрасте 29-84 лет (1-я группа) и 20 больных ДНМЖ в возрасте 31-69 лет (2-я группа), проходивших обследование и лечение в ГВКГ им. H.H. Бурденко с января 2004 г. по октябрь 2007 г. В группе контроля было 20 здоровых женщин в возрасте 27-68 лет.
В исследовании преобладали (65,7%) больные РМЖ в стадиях Ti_2N0Mo. Остальные (17,2%) пациентки были в стадиях T2NiMo (17,1%) и T2-4N0.1.2M0.1 стадиях РМЖ. У большинства (65,7%) из них выявлен инфильтративный протоковый РМЖ, инфильтративный дольковый РМЖ обнаружен в 22,9% случаев, смешанный рак - в 11,4%. 25,7% опухолей имели I степень злокачественности, 51,4% - И, 21,4% - Ш и 1,4% - II-III.
Лучевую терапию до операции получили 18,6% больных РМЖ, после операции - 5,7%. При этом у 2 из 13 пациенток лучевую терапию проводили
как до, так и после хирургического удаления первичной опухоли. Неоадъювантную химиотерапию получали 11,4% больных РМЖ, адъювантную химиотерапию - 50% больных РМЖ. У 49,3% больных выполнена радикальная мастэктомия с сохранением обеих грудных мышц, у 24,6% - мастэктомия по Пейти, у 26,1% - мастэктомия по Маддену.
В группу из 20 больных ДНМЖ включили 8 пациенток с фиброаденомой, 3-е внутрипротоковой папилломой, 9-е фиброзно-кистозной болезнью. У 85% больных ДНМЖ выполнена секторальная резекция, у 15% - радикальная резекция.
Специальные лабораторные методы исследования
Уровни СА-15-3, РЭА, ИЛ-6 и VEGF определяли в сыворотке крови у 20 практически здоровых женщин, у 20 больных с ДНМЖ и 70 больных РМЖ до проведения специфического лечения (исходно). Кровь забирали из кубитальной вены женщин утром натощак в сухую пробирку, оставляли на 30 мин при комнатной температуре для формирования сгустка, затем центрифугировали в течение 30 мин при 4-8°С и 3000 об/мин. Надосадочную фракцию (сыворотку) разливали на аликвоты по 0,5 мл и хранили при -70°С до проведения иммуноферментного анализа.
Определение ИЛ-6 в сыворотке крови. Концентрацию ИЛ-6 определяли в сыворотке крови иммуноферментным методом с использованием реактивов «Human IL-6» («R&D Systems Inc.», США).
Определение VEGF в сыворотке крови. Концентрацию VEGF определяли в сыворотке крови иммуноферментным методом «сэндвичевого» типа реактивами «Quantikine human VEGF» («R&D Systems Inc.», США).
Определение уровней СА-15-3 и РЭА в сыворотке крови проводили исходно у здоровых женщин, у больных ДНМЖ до лечения, у больных РМЖ до и через 3 мес от начала специфической терапии иммуноферментным методом с использованием стандартных наборов реактивов фирмы «Hoffmann-La Roche» (Швейцария).
Определение уровня экспрессии Her-2/neu в опухоли. Уровень экспрессии Her-2/neu определяли иммуногистохимически с помощью стрептавидин-биотинового иммунопероксидазного метода [Завалишина Л.Э. и др., 2008]. Окрашивание парафиновых срезов ткани опухолей от 70 больных РМЖ проводили с использованием моноклональных антител против белка Нег-2/neu («Dako», Дания). По интенсивности экспрессии Her-2/neu в мембранах клеток опухоли больных разделили на группы: 1-я группа - отсутствие экспрессии (0 - 1+); 2-я группа - наличие экспрессии (2+ - 3+).
Уровень экспрессии РЭ и РП в ткани опухоли исследовали с помощью общепринятого иммуногистохимического метода, путем окрашивания парафиновых срезов ткани опухолей от 70 больных РМЖ с использованием соответствующих моноклональных антител («Dako», Дания). По интенсивности экспрессии РЭ и РП в цитоплазме опухолевых клеток больных разделили на группы: 1-я группа - отсутствие экспрессии рецепторов (РЭ- и РП-); 2-я - наличие экспрессии рецепторов (РЭ+ и РП+).
Статистические методы исследования. Рассчитывали среднее значение показателя и его 95% доверительные границы, ошибку среднего, а также медианы. Рассчитывали абсолютные и относительные частоты качественных и ординальных признаков. Оценку различий частот проводили непараметрическим критерием %i-2, для малых выборок - точным критерием Фишера. Для выявления наиболее характерных связей между изучаемыми показателями проводили «факторный» анализ методом выделения главных компонент с последующим вращением корреляционной матрицы. Рассчитывали точное значение р. При корреляционном анализе рассчитывали коэффициент корреляции Пирсона, а также значимость его отличия от нуля. Силу корреляционной связи определяли в зависимости от значения корреляции: г<0,25 - слабая корреляция, 0,25<г<0,75 - умеренная корреляция, г>0,75 - сильная корреляция [Реброва О.Ю., 2006]. Все вычисления проводили с помощью математических пакетов «СТАТИСТИКА» и SPSS.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Уровни СА-15-3 и РЭА в сыворотке крови больных новообразованиями молочной железы. Сывороточный маркер СА-15-3 больных РМЖ и ДНМЖ находился в пределах нормы (до 50 ед/мл). Однако его средние значения были в 2,2 раза достоверно выше при РМЖ, чем при ДНМЖ, а медианы СА-15-3 различались в 1,9 раза. Показано, что у больных РМЖ значения СА-15-3 смещены в область более высоких его показателей (более 20 ед/мл), тогда как у больных ДНМЖ, наоборот, в область более низких значений маркера (менее 10 ед/мл). Не отмечено достоверных различий в содержании СА-15-3 у больных РМЖ различных стадий. Максимальные уровни СА-15-3 выявлены у больных IIa-ПЬ стадий РМЖ (44,0 и 48,1 ед/мл соответственно). В то же время у больных в поздних (Ш-IV) стадиях опухолевого процесса обнаруживали даже более низкие значения СА-15-3. Так, частота выявления уровней СА-15-3 более 20 ед/мл составила: у 50% больных РМЖ - в I стадии, у 29,7% - во На, у 68,8% - во IIb, у 33,3% - в Illa стадии. Таковые значения маркера отсутствовали у больных с Illb и IV стадиями. Эти данные указывают на низкую клиническую значимость СА-15-3 у больных РМЖ поздних III-IV стадий.
Обнаружена тенденция к повышению медианы СА-15-3 у больных с регионарными метастазами, чем без таковых (медианы 20,2 и 15,8 ед/мл соответственно). Частота выявления значений СА-15-3 выше 20 ед/мл в этих группах составила 52,4 и 32,7% соответственно.
Отмечена также тенденция к более низким значениям СА-15-3 у больных РМЖ в возрасте до 45 лет (медиана 10,5 ед/мл) и наиболее высоким у пациенток старше 60 лет (медиана 15,8 ед/мл). Содержание СА-15-3 в сыворотке крови больных ДНМЖ не было связано с их возрастом.
Уровни СА-15-3 в сыворотке крови больных не зависели от гистологического варианта строения и степени злокачественности РМЖ, наличия экспрессии РЭ и РП в первичной опухоли.
Несмотря на то что значения СА-15-3 после лечения у больных РМЖ смещались в сторону меньших показателей, они оставались достоверно более высокими по сравнению с его уровнем у больных ДНМЖ до лечения (р=0,001). В результате проведенной терапии достоверно чаще наблюдали снижение уровня СА-15-3 в сыворотке крови при высоких исходных показателях маркера, равных более 20 ед/мл (р-0,0004). У больных РМЖ с исходным уровнем СА-15-3 в сыворотке крови менее 10 ед/мл происходило незначительное изменение его содержания. При этом обнаружено, что после проведенного лечения при распространенном РМЖ более чем у 40% больных старше 60 лет возможно повышение СА-15-3 в сыворотке крови.
Не выявлено достоверных различий в исходных уровнях РЭА в сыворотке крови больных РМЖ, ДНМЖ и здоровых женщин, то есть маркер обладает низкой информативностью в диагностике РМЖ.
ИЛ-6 выявлен в сыворотке крови всех 70 больных РМЖ, а его уровни колебались от 0,3 до 7,9 пг/мл. Статистические характеристики ИЛ-6 у больных РМЖ и у здоровых женщин приведены в табл 1.
Концентрация ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ и ДНМЖ не различалась. Среднее значение ИЛ-6 в 2 раза, а медиана более чем в 2,7 раза были выше у больных РМЖ по сравнению с контролем. Учитывая тот факт, что исходный уровень ИЛ-6 повышен в сыворотке крови 54% больных РМЖ относительно контроля, этот показатель может быть использован как дополнительный маркер при новообразованиях молочной железы.
Таблица 1
Статистические характеристики содержания ИЛ-6 _в сыворотке крови больных РМЖ_
Статистические характеристики РМЖ Контроль Р
Число наблюдений 70 41 -
ИЛ-6, пг/мл (М±т) 2,56±0,22 1,25±0,19 <0,05
ИЛ-6, пг/мл (медиана) 2,15 0,81 0,0001
ИЛ-6, пг/л (пределы колебания) 0,1-7,9 0,01-1,48
Таблица 2
Содержание ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ в зависимости _от гистологического варианта строения опухоли_
Гистологический вариант строения опухоли Число наблюдений Уровень ИЛ-6, пг/мл (М±ш) Медиана ИЛ-6, пг/мл Пределы колебания ИЛ-6, пг/мл
Инфильтративный протоковый РМЖ 46 2,65±2,0 р>0,05 2,15 0,1-7,9
Инфильтративный дольковый РМЖ 16 2,61±1,8 р>0,05 2,94 0,4-5,1
Не выявлено зависимости между уровнями ИЛ-6 в сыворотке крови и возрастом пациенток, а также гистологическим строением РМЖ (табл. 2). Отмечена связь исходных уровней ИЛ-6 со стадией РМЖ (табл. 3).
Таблица 3
Содержание ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ _с учетом стадии заболевания_
Стадия РМЖ Число наблюдений Частота повышенных значений ИЛ-6 относительно контроля, % Уровень ИЛ-6, пг/мл (М+т) Медиана ИЛ-6, пг/мл Пределы колебания ИЛ-6, пг/мл
I 8 25,0 0,86±0,28 0,5 0,1-2,2
Па 37 37,8 1,82±0,2 1,5 0,8-7,5
Ilb 16 81,3 3,49±1,6 3,45 0,2-5,1
Illa 3 100 4,87+0,82 4,1 4,0-6,5
Illb 4 100 5,52±0,86 5,2 3,8-7,9
IV 2 100 6,10±1,0 6,1 5,1-7,1
Примечание. I-(IIa-IV) р<0,0001; Ila-(IIb-IV) р<0,001.
Также обнаружена тенденция к повышению ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ с увеличением степени злокачественности опухоли (табл. 4).
У больных РМЖ с поражением метастазами регионарных лимфатических узлов медиана ИЛ-6 была почти в 3 раза выше (табл. 5). При этом у 38,1% больных РМЖ с отсутствием регионарных метастазов выявлены значения ИЛ-6, превышающие норму. При поражении метастазами регионарных лимфатических узлов повышенные уровни цитокина относительно контроля обнаружены в 85,7% наблюдений (р=0,0001).
Таблица 4
Содержание ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ с учетом степени _злокачественности опухоли_
Степень злокачественности РМЖ п Частота повышенных значений ИЛ-6 относительно контроля, % Уровень ИЛ-6, пг/мл (М+ш) Медиана ИЛ-6, пг/мл Пределы колебания ИЛ-6, пг/мл
I 18 44,4 2,26+0,46 1,75 0,2-7,9
II 36 55,6 2,55±0,32 2,1 0,1-7,5
III 16 60 2,8910,47 2,4 0,8-6,5
Примечание. ¡убШ р=0,4, п - число наблюдений.
Таблица 5
Содержание ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ с учетом поражения _метастазами регионарных лимфатических узлов_
Поражение метастазами регионарных лимфоузлов п Частота повышенных значений ИЛ-6 относительно контроля,% Уровень ИЛ-6, пг/мл (М±ш) Медиана ИЛ-6, пг/мл Пределы колебания ИЛ-6, пг/мл
Нет 42 38,1 1,89+0,2* 1,38 0,1-7,5
Есть 21 85,7 3,93+0,4** 3,8 0,8-7,9
Примечание. р<0,01.
Не обнаружено связи между исходными показателями ИЛ-6 и уровнями сывороточных опухолевых маркеров (СА-15-3, РЭА) у больных РМЖ, а также наличием экспрессии РЭ и РП в ткани опухоли.
УЕСГ. Уровни УЕОР в сыворотке крови больных РМЖ были достоверно выше, чем в контроле (табл. 6) и у больных ДНМЖ (136,7±14,4 пг/мл). Концентрации УЕОР между здоровыми женщинами и больным ДНМЖ не отличались достоверно. У 42,9% больных РМЖ обнаружены значения УЕОР, соответствующие таковым в группе контроля (менее 250 пг/мл). Таким образом, анализ полученных данных выявил, что у больных РМЖ происходит достоверное смещение содержания УЕОР в сыворотке крови в сторону больших его значений и, стало быть, этот маркер активности неоангиогенеза может использоваться как дополнительный признак при новообразованиях молочной железы.
Таблица 6
Статистические характеристики содержания УЕСЕ (пг/мл) в _сыворотке крови больных РМЖ__
Статистические характеристики РМЖ Контроль Р
Число наблюдений 70 41 -
УЕОР, пг/мл (М±ш) 301,5±18,9 126,7+11,4 <0,01
УЕОР, пг/мл (медиана) 282,5 98,5 0,002
УЕОР, пг/мл (пределы колебания) 39-780 37-349
Таблица 7
Содержание УЕвР в сыворотке крови больных РМЖ разного возраста
Возраст (годы) N Частота выявления значений УЕСР>250 пг/мл, % Уровень УЕОР, пг/мл (М±т) Медиана УЕОР, пг/мл Пределы колебания УЕОР, пг/мл
<45 10 80,0 384,5±47,7 352 170-645
45-59 28 60,7 298,0±30,4 282,5 40-681
>60 32 46,9 278,5+27,4 170 39-780
При дисперсионном анализе уровни УЕОР в сыворотке крови больных РМЖ не зависели от возраста, хотя имели тенденцию к снижению при увеличении возраста пациенток (табл. 7).
На основании анализа полученных данных обнаружено, что содержание VEGF в сыворотке крови больных РМЖ достоверно связано со стадией заболевания (р=0,001). Так, наименьшие уровни VEGF выявлены в сыворотке крови больных РМЖ в I стадии, а наибольшие - у пациенток в Illa стадии. При дальнейшей распространенности заболевания содержание показателя несколько снижалось. Частота выявления повышенных значений VEGF относительно контроля также была минимальной у больных РМЖ в I стадии и составила 25%, в то же время уже при IIb стадии многократно увеличивалась (81,3%), а у больных поздних стадий РМЖ составила 100% (р=0,001). Следовательно, информативность показателя VEGF минимальна только при незначительной распространенности РМЖ (стадия I), а при распространении процесса VEGF может рассматриваться как опухолевый маркер.
Достоверно (р=0,001) выше был уровень VEGF в сыворотке крови больных РМЖ с метастатическим поражением регионарных лимфатических узлов как по среднему содержанию, так и по частоте выявления повышенных относительно контроля значений этого маркера (р=0,0003) (табл. 8).
Таблица 8
VEGF в сыворотке крови больных РМЖ с учетом наличия метастазов
в регионарных лимфатических узлах
Поражение метастазами регионарных лимфоузлов п Частота выявления уровней VEGF>250 пг/мл, % Уровень VEGF, пг/мл (М±т) Медиана VEGF, пг/мл Пределы колебания VEGF, пг/мл
Нет 49 38,1 р=0,001 244,7+21,0 р=0,0003 199 39-780
Есть 21 85,7 р=0,001 409,2+35,1 р=0,0003 396 67-680
Показано, что исходное содержание УЕвР у больных РМЖ не зависело от гистологического строения и степени злокачественности опухоли, ее гормоночувствительности. Однако, отмечена тенденция к увеличению исходных уровней УЕОР в сыворотке крови больных РМЖ с РЭ-опухолями. Недостоверно различалось содержание УЕйР при РП- и РП+ опухолях.
В отличие от практически здоровых женщин, у больных РМЖ выявлена достоверная корреляционная зависимость между исходными уровнями ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови (г=0,43; р=0,001). Корреляционной связи между содержанием VEGF и другими сывороточными опухолевыми маркерами (СА-15-3, РЭА) не обнаружено. Кроме того, никакой зависимости не выявлено между уровнем экспрессии белка Her-2/neu в первичной опухоли и исходной концентрацией VEGF в сыворотке крови больных РМЖ.
Таким образом, показатель VEGF, определенный в сыворотке крови у больных РМЖ до лечения, отражает стадию заболевания и наличие метастазов в регионарных лимфатических узлах.
Прогностическая значимость исходных уровней ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови больных РМЖ. Отдаленные результаты лечения прослежены у 64 (91,4%) из 70 больных РМЖ в течение 3-летнего периода. Прогрессирование обнаружено у 9 (14,1%) больных, сроки прогрессирования составили от 11 до 36 мес. Среди них преобладали пациентки с поздней стадией заболевания (2 - с IV стадией, 4 - с ШЬ стадией, 2-е Illa стадией и 1 -со IIb стадией). Стадия заболевания достоверно определяла сроки прогрессирования РМЖ (р=0,001). У больных РМЖ поздних стадий со значительным распространением опухолевого процесса после проведенного лечения на 3-м году наблюдения увеличивается вероятность риска развития прогрессирования заболевания. Следует отметить небольшое количество таких больных, включенных в настоящее исследование. В то же время у большинства пациенток с I-IIa стадиями РМЖ в первые 3 года наблюдения не было выявлено прогрессирования опухолевого процесса.
Исходные показатели ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ, прослеженных в течение 3-летнего периода наблюдения, были разделены по пороговому значению: до 2 пг/мл (п=23), от 2 до 5 пг/мл (п=24) и 5 пг/мл и более (п=17). Показатель 3-летней безрецидивной выживаемостия в группе больных РМЖ с уровнем ИЛ-6 менее 2 пг/мл (соответствующим группе контроля) составил 100%. Безрецидивная выживаемость больных РМЖ со
значениями ИЛ-6 (от 2 до 5 пг/мл) была ниже и составила 82,0±16,9%. Показатель безрецидивной выживаемости больных с повышенными исходными уровнями ИЛ-6 (более 5 пг/мл) был наихудшим и составил 65,8±23,1% (р=0,06). Таким образом, почти у 1/3 больных РМЖ с исходно высокими уровнями ИЛ-6 в сыворотке крови в течение первых 3 лет наблюдения развился рецидив заболевания. Полагаем, что исходный показатель ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ можно использовать как маркер, обладающий определенной прогностической значимостью.
Исходные показатели VEGF в сыворотке крови больных РМЖ, прослеженных в течение 3 лет, были разделены по пороговому значению до 250 пг/мл (п=28), от 250 до 500 пг/мл (п=31) и от 500 и более пг/мл (п=7). Безрецидивная выживаемость в группе больных РМЖ с VEGF менее 250 пг/мл составила 100%, при значенияях VEGF от 250 до 500 пг/мл она была ниже 84,6±19,4%, у пациенток с повышенными значениями VEGF (более 500 пг/мл) была наихудшей и составила 39,9+24,3% (р=0,036). Таким образом, у больных РМЖ с исходно высокими показателями VEGF в сыворотке крови в течение первых 3 лет наблюдения чаще развивалось прогрессирование заболевания. Таким образом, исходный уровень VEGF в сыворотке крови больных РМЖ может быть использован как показатель, отражающий распространенность, биологическую агрессивность опухоли, а также и как маркер неблагоприятного прогноза заболевания.
Экспрессия белка Her-2/neu в ткани опухоли выявлена у 22,9% больных РМЖ. При I стадии она выявлена в 12,5% наблюдений, а при IIa и IIb стадиях в 2 раза чаще (27 и 25% соответственно). У больных РМЖ в III-IV стадиях экспрессия белка Her-2/neu в ткани опухоли была обнаружена только у 1 (11,1%) из 9 пациенток. При этом уровень экспрессии белка Her-2/neu не зависел от гистологического сроения РМЖ и степени дифференцировки опухоли, исходных показателей ИЛ-6 и VEGF. Обнаружена тенденция к увеличению частоты обнаружения маркера Her-2/neu в ткани опухоли при
увеличении содержания СА-15-3 в сыворотке крови больных РМЖ (р=0,07). Выявлена также тенденция к снижению примерно на 20% показателя 3-летней безрецидивной выживаемости в группе больных РМЖ с уровнем экспрессии Нег-2/пеи в опухоли, равным 2+-3+.
Таким образом, определение экспрессии белка Нег-2/пеи в ткани опухоли больных РМЖ может быть полезным для уточнения прогноза заболевания и при выборе соответствующей таргетной терапии.
ВЫВОДЫ
1. Известные опухолевые маркеры СА-15-3 и РЭА не обладают достоверной диагностической ценностью при новообразованиях молочной железы и их определение не повышает диагностические возможности выявления РМЖ. В отличие от практически здоровых женщин, у больных РМЖ имеется достоверная корреляционная зависимость между содержанием цитокинов ИЛ-6 и УЕОР в сыворотке крови (г=0,43; р=0,001), которая отсутствует с другими сывороточными (СА -15-3 и РЭА) и тканевыми (экспрессия белка Нег-2/пеи в опухоли) маркерами.
2. Определение концентрации цитокина ИЛ-6 в сыворотке крови позволяет судить о наличии поражения метастазами РМЖ регионарных лимфатических узлов и высокой степени злокачественности опухоли. Исходная концентрация ИЛ-6 не зависит от возраста и гистологического варианта строения опухоли, однако достоверно отражает стадию опухолевого процесса и имеет определенную прогностическую ценность.
3. Маркер активности неоангиогенеза УЕвЕ может использоваться в качестве достоверного признака наличия РМЖ и обладает высокой информативностью при оценке прогноза заболевания. Исходный показатель УЕвР в сыворотке крови больных РМЖ достоверно отражает стадию болезни и наличие метастазов в регионарных лимфатических узлах.
4. Показатель 3-летней безрецидивной выживаемости больных РМЖ можно прогнозировать при оценке исходных уровней цитокинов ИЛ-6 и УЕвИ в сыворотке крови. При высоких исходных значениях ИЛ-6 (более 5 пг/мл), УЕвЕ (более 500 пг/мл) и Нег-2/пеи показатель 3-летней безрецидивной выживаемости пациенток при ПНУ стадиях РМЖ является наиболее низким.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Для улучшения диагностики и оценки активности ангиогенеза, гормоночувствительности РМЖ целесообразно дополнительно с общепринятыми клиническими, морфологическими и инструментальными методами исследований включать лабораторные тесты на определение сывороточных (ИЛ-6, УЕвЕ) и тканевых (экспрессия РЭ, РП, Нег-2/пеи в ткани опухоли) маркеров.
2. Определение в сыворотке крови СА-15-3 и РЭА до начала лечения и после не позволяет считать вышеуказанные маркеры высокозначимыми показателями в диагностике и клиническом мониторинге больных РМЖ.
3. Исходный уровень провоспалительного цитокина ИЛ-6 (>5 пг/мл) и ключевого активатора неоангиогенеза УЕвЕ (>500 пг/мл) в сыворотке крови больных РМЖ может служить критерием неблагоприятного прогноза 3-летней безрецидивной выживаемости.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Первично-множественный рак молочной железы в сочетании с другими злокачественными новообразованиями // Научные труды ГИУВ МО РФ.- М., 2007.- С.17 (соавт. Соколов Н.Ю.).
2. Прогностическое значение опухолевых маркеров РЭА, CA-15-3, СА-19-9, CA-125, ХГч, ЩФ при раке молочной железы // Научные труды ГИУВ МО РФ,- М., 2007,- С.27 (соавт. Соколов Н.Ю.).
3. Молекулярно-биологические маркеры у больных раком молочной железы. В матер. Российского нац. конгр.: Дни лабораторной медицины России; Москва, 2008 г. // Клин. лаб. диагн.-2008.-№9.- С.167 (соавт.: Катунина А.И., Ермилова В.Д., Карабекова З.К., Овчинникова Л.К., Саяпин A.B., Летягин В.П.).
4. Определение распространенности заболевания и прогноза при раке молочной железы с помощью маркера VEGF // Научные труды ГИУВ МО РФ,- М„ 2008,- С.15 (соавт.: Брюсов П.Г., Комчатова H.A.).
5. Основные компоненты системы активации плазминогена в опухолях молочной железы // Матер. XV Всерос. нац конгр.: Человек и лекарство; Москва, 14-18 апр. 2008 г. - М.,-2008.-С.247 (соавт.: Овчинникова Л.К., Воротников И.К., Герштейн Е.С., Ермилова В.Д., Ксенофонтова Е.М.).
6. Растворимый фрагмент рецептора Her-3/neu в сыворотке крови первичных больных раком молочной железы // Вопр. биол., мед. и фармацевт. химии.-2008.-№4.- С.80-83 (соавт.: Кушлинский Н.Е., Герштейн Е.С., Широкий В.П., Овчинникова Л.К., Чемерис Г.Ю., Байракова З.И., Летягин В.П.).
7. Содержание интерлейкина-1 ß в сыворотке крови больных раком молочной железы // Матер. XV Всерос. нац. конгр: Человек и лекарство; Москва, 14-18 апр. 2008 г. - М..-2008.-С.253 (соавт.: Оразбеков Б.С., Тулеуов А.Е., Карабекова З.К., Овчинникова Л.К., Харитиди Т.Ю., Мамедов У.Р., Агеева Т.В.).
Оглавление диссертации Богова, Валерия Владимировна :: 2008 :: Москва
Список условных сокращений
Введение
Глава 1. ПРОДУКЦИЯ НЕКОТОРЫХ ОПУХОЛЕВЫХ МАРКЕРОВ И ЦИТОКИНОВ В НОРМЕ И ПРИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ обзор литературы)
Раково-эмбриональный антиген
СА 15
Цитокины
Интерлейкин
Фактор роста эндотелия сосудов
Клеточные и тканевые маркеры
Рецепторы половых стероидных гормонов
Her-2/neu
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2 Л. Характеристика обследованных больных
2.2. Лабораторные методы исследования
2.3. Статистический анализ исследований
Глава 3. ПОКАЗАТЕЛИ МАРКЕРОВ СА-15-3 и РЭА У БОЛЬНЫХ РАКОМ И ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
3.1. Уровни маркера СА-15-3 в сыворотке крови больных с новообразованиями молочной железы до лечения)
3.2. Маркер СА-15-3 в сыворотке крови больных РМЖ после лечения
3.3. Содержание опухолевого маркера РЭА в сыворотке крови больных РМЖ и доброкачественными новообразованиями молочной железы
Глава 4. ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ МАРКЕРЫ ИЛ-6 и VEGF В
СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.
4.1. Уровень ИЛ-6 в сыворотке крови больных раком молочной железы
4.2. Содержание ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ с учетом основных клинических признаков
4.3. Содержание VEGF в сыворотке крови больных раком, доброкачественными новообразованиями молочной железы и в контроле
4.4. Содержание VEGF в сыворотке крови больных РМЖ с учетом клинических признаков
4.5. Прогностическая значимость исходных уровней ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови больных РМЖ
4.6. Экспрессия белка Her-2/neu в ткани опухоли больных
Введение диссертации по теме "Хирургия", Богова, Валерия Владимировна, автореферат
ВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы
Рак молочной железы в силу широкой распространенности и неуклонного роста заболеваемости в большинстве стран мира является одной из важнейших проблем современной онкологии [Давыдов М.И. и др., 2007].
Рак молочной железы (РМЖ) считается самой частой опухолью у женщин [Летягин В.П. и др., 2006; Чиссов В.И. и Дарьялова СЛ., 2006]. Статистические данные последнего десятилетия указывают на увеличение числа вновь диагностируемых случаев РМЖ у нас в стране и экономически развитых странах. Так, в 2007 году в мире диагностировано более 1 млн. новых случаев РМЖ, при этом 5 лет переживают немногим более половины из них (54%) [Переводчикова Н.И., 2005; Гарин A.M. и др., 2006; Чиссов В.И. и Дарьялова С.Л., 2006].
Стандартизованный показатель заболеваемости в западной Европе составляет 84,6/100000, в восточной Европе -42,6/100000.
Кроме того, показано, что РМЖ редко выявляется в возрасте женщин до 20 лет, а после 30 лет кривая заболеваемости в зависимости от возраста резко поднимается вверх, снижаясь в глубокой постменопаузе после наступления 70 лет. При этом, число случаев РМЖ увеличивается в каждой стране, прибавляя ежегодно 1-2%. Наибольший прирост заболеваемости РМЖ отмечен за последние годы в Канаде, США, Швеции, Испании, Финляндии (3-6%), а наименьший - в Дании, Норвегии (1,8%). Наиболее высокие показатели смертности отмечены в Бельгии, Франции, Германии, Италии, Португалии. При этом, распространенность РМЖ также неоднородна. Наименьшее число случаев приходится на Японию (12-15 случаев на 100000 женщин). Наибольшее число больных РМЖ выявляется у женщин высокого социального класса [Семиглазов В.Ф. и др., 2001].
Высокие показатели смертности и неудовлетворительные результаты лечения РМЖ большинство исследователей связывают с тем, что 30-50% больных поступают в стационары с распространенным РМЖ [Портной С.М., 2005; Семиглазов С.М. и др., 2005; Гарин A.M. и др., 2006], когда лечение данной категории пациенток крайне сложно, а в ряде случаев практически неэффективно [Борисов В.И., 2008]. Стало быть, разработка методов ранней диагностики, новых подходов к оценке биологического «поведения» опухоли, общего прогноза и выбор наиболее адекватных и индивидуальных схем лечения с учетом особенностей фенотипа этих новообразований крайне актуальны [Зборовская И.Б. и др., 1998; Гарин A.M. , 1998; Высоцкая И.В., 2005; Семиглазов В.Ф. и др., 2008].
Известно, что успех радикального лечения больных РМЖ во многом определяется стадией опухолевого процесса. Между тем, по данным отечественных авторов 30-50% пациенток впервые обращаются за помощью к онкологу с местнораспространенным процессом (III стадия) [Высоцкая И.В., 2005]. Поэтому, доклиническая диагностика РМЖ с помощью таких сывороточных опухолевых маркеров как раково-эмбриональный антиген (РЭА) [Высоцкая И.В., 2005; Mori Т. et al., 1989; Horowitz J. et al., 1989], тканевой полипептидный антигена (ТПА) (В.П.Летягин, 2000; Macolm S.M., 1996), карбогидратный антиген 15-3 (СА-15-3) [Silva Е. et al., 2000], общая активность щелочной фосфатазы (ЩФ) [Любимова Н.В. и др., 2005], ферритин [Flammia М. et al., 1985], муцитоподобный или ассоциированный со слизистым раком антиген (MCA) [Novacovic S. et al., 1989; Bieglmayer С. et al., 1990] не утратили своей актуальности до настоящих дней. Следует указать, что оценка диагностических и прогностических возможностей выше указанных сывороточных маркеров при РМЖ в отечественной и зарубежной литературе далеко не однозначна, однако клинические исследования в этой области проводятся достаточно интенсивно с привлечением новых маркеров и их сочетаний не только для более эффективной своевременной диагностики данной патологии, но и которые могут быть крайне полезными в мониторинге эффективности лечения и раннего выявления рецидива заболевания [Герштейн Е.С. и др., 2004].
В последние годы большое внимание в этой области уделяется различным молекулярным маркерам, которые тесно связанны с фундаментальными биологическими свойства опухоли [Кушлинский Н.Е., 1999; Копнин Б.П., 2004; Barnes D. et al., 1988; Liu E. et al., 1992; Couch F. et al., 1996]. При этом, прогностическая их ценность, а также выбор определенного вида лечения, основанный на биологических характеристиках первичной опухоли, все еще остаются затруднительными для практических врачей [Кушлинский Н.Е., 2002]. Вместе с тем, в некоторых ситуациях эти прогностические маркеры при РМЖ могут быть полезны. Так, например, у больных РМЖ в ранних стадиях необходимо выявлять пациенток с неблагоприятным прогнозом, которым требуется дополнительное адъювантное лечение, при этом настоятельно необходимо определение чувствительности опухоли к конкретным видам химио-, гормонотерапии [Герштейн Е.С. и др., 1999].
Кроме того, на основании исследования молекулярно-биологических маркеров при РМЖ, может быть создана новая тактика лечения, непосредственно влияющая на определенные молекулы и процессы [Имянитов Е.Н. и др., 2007; Klijn J. et al., 1992; Foekens J. et al., 1992]. Знание специфических биологических характеристик опухолевого процесса может помочь не только в усовершенствовании существующих схем лечения, но и в развитии новых подходов к патогенетической терапии РМЖ, направленной на ключевые системы передачи регуляторных сигналов в клетке [Чехун В.Ф., 2006; Жильчук В.Е. и др., 2007].
В настоящее время пристальное внимание онкологов направлено на изучение у онкологических больных продукции ряда цитокинов и, в частности, интерлейкинов, небольших пептидных информационных молекул, которые регулируют межклеточные и межсистемные взаимодействия, определяют выживаемость клеток, способны стимулировать или подавлять их рост, дифференцировку, функциональную активность и апоптоз [Гаджиева С.Ш. и др., 2006; Жильчук В.Е. и др., 2007].
Основная биологическая активность цитокинов - регуляция иммунного ответа на всех этапах его развития^ в котором они играют центральную роль. При этом, доказано, что не только лимфоциты, но и опухолевые клетки могут сами секретировать некоторые цитокины, например; ИЛ-IV ИЛ-2, ИЛ-6, ИЛ-10, фактор некроза опухоли (ФИО), и« использовать их в качестве аутокринных факторов роста, способствующих экспансии опухоли [Пальцев; М.А. и др., 2004; Пичугина Л.В. и др., 2008]. Показано, что повышенная продукция цитокинов клетками микроокружения опухоли также может благоприятствовать ее ускоренному "росту и распространению метастазов. Молекулярные механизмы, определяющие , возникновение локомоторного фенотипа как в нормальных клетках при. митогенных стимулах, так и при неопластической трансформации, до конца1 не изучены, однако» добавление цитокинов предотвращает клеточную гибель (апоптоз) [Хаитов Р.М.,' 2001];.
Основной характеристикой злокачественных, новообразований является их способность, к неограниченному росту,,устойчивость к действию факторов, регулирующих процессы пролиферации и дифференцировки, а также инвазии и метастазированию. [Киселев В.И. и др., 2005; Имянитов Е.Н. и др., 2008]. В экспериментальных исследованиях установлено, что в'- основе способности раковых клеток к инвазивному росту и гематогенному метастазированию может быть активация механизмов ангиогенеза в первичной опухоли: и ее метастазах [Степанова Е.В: и др., 2000; Folkman J., 2001]. Кроме того, стало известно, что одним из ключевых активаторов; неоангиогенеза в опухолях человека, является фактор роста эндотелия - сосудов (VEGF) [Ким Е.А. и др:, 2008].
Актуальность настоящего исследования; определяется необходимостью количественного изучения одновременно роли интерлейкинов и, в частности, ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ и ключевого активатора неангиогенеза — фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), факторов, определяющих биологическое «поведение» опухоли, а именно, ее агрессивность, устойчивость к химиогормонотерапии, а, стало быть, позволяющих определять прогноз опухолевого процесса в каждой конкретной клинической ситуации. Кроме того, научный и практический интерес представляет анализ уровней экспрессии рецепторов половых стероидных гормонов (рецепторов эстрогенов - РЭ и рецепторов прогестерона - РП), белка Her-2/neu в первичной опухоли и их связь с продукцией ИЛ-6, VEGF и рядом других сывороточных маркеров (РЭА, СА-15-3) в оценке особенностей биологического «поведения» РМЖ и ее прогноза.
Цель исследования - провести сравнительный анализ продукции некоторых сывороточных и тканевых опухолевых маркеров у больных раком, доброкачественными новообразованиями молочной железы и у практически здоровых женщин, установить их связь с основными клиническими, морфологическими, биохимическими характеристиками заболевания и прогнозом.
Задачи исследования
1. Изучить уровни СА-15-3, РЭА, в сыворотке крови больных РМЖ до и после лечения, сравнить с таковыми показателями у больных ДНМЖ. Сопоставить исходные значения СА-15-3 и РЭА с исходным уровнем экспрессии тканевых маркеров в опухоли (РЭ, РП, Her-2/neu) и ИЛ-6, VEGF в сыворотке крови.
2. Провести сравнительное определение частоты выявления и содержания ИЛ-6 в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных РМЖ и ДНМЖ и сопоставить их с таковыми показателями у практически здоровых женщин (группа контроля).
3. Провести сравнительный анализ частоты выявления и уровней VEGF в сыворотке крови практически здоровых женщин, больных РМЖ и ДНМЖ.
4. Изучить связь исходных уровней ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови больных РМЖ с учетом основных клинических и морфологических характеристик заболевания. Сопоставить исходные уровни исследованных цитокинов (ИЛ-6 и VEGF) в сыворотке крови с гормональной чувствительностью опухоли (наличием экспрессии РЭ и РП).
5. Проанализировать исходные уровни ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови больных РМЖ с учетом уровня экспрессии белка HER-2/neu в первичной опухоли. Оценить связь исходных их значений с прогнозом безрецидивной выживаемости.
Научная новизна
Проведен одновременно анализ сывороточных (СА - 15-3, РЭА, ИЛ-6, VEGF) и тканевых (РЭ, РП, Her-2/neu) маркеров у больных РМЖ для оценки диагностических возможностей и прогноза этих лабораторных тестов. Обнаружено, что исходный уровень СА-15-3 в сыворотке крови больных РМЖ достоверно выше, чем у больных ДНМЖ, а после проведенной терапии снижался в 60% наблюдений. При этом, не выявлено связи СА-15-3 и РЭА с отдаленными результатами лечения больных РМЖ.
Показано, что ИЛ-6 выявлялся в сыворотке крови всех больных РМЖ, в 85% наблюдений при ДНМЖ и в 85,3% у практически здоровых женщин, а исходные значения цитокина не различались между больными РМЖ и ДНМЖ, но были достоверно выше, чем в контроле. При этом, исходная концентрация ИЛ-6 в сыворотке крови больных РМЖ не зависела от возраста пациенток, гистологического варианта строения опухоли и степени ее дифференцировки, однако отражала стадию опухолевого процесса и была достоверно выше у больных РМЖ с регионарными метастазами.
Ключевой активатор неоангиогенеза VEGF был обнаружен в сыворотке крови всех обследованных больных и здоровых женщин, при этом убедительно показано, что уровни VEGF достоверно выше при РМЖ, по сравнению с контролем и больными ДНМЖ, а исходные значения VEGF и в сыворотке крови больных РМЖ достоверно зависел от стадии болезни и наличия метастазов в регионарных лимфатических узлах.
У больных РМЖ, в отличие от практически здоровых женщин, выявлена достоверная корреляционная зависимость между исходными уровнями ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови. Обнаружено, что у больных РМЖ исходные показатели ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови не зависели от наличия экспрессии РЭ, РП и Her-2/neu в опухоли. Экспрессия белка Нег-2/neu выявлена в 22,9% опухолей и была связана со степенью злокачественности РМЖ, стадией болезни и возрастом пациенток.
Не обнаружено достоверной связи между частотой выявления и уровнями СА-15-3, РЭА и исходными показателями ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови у больных РМЖ.
Практическая значимость
Клинический анализ исследованных сывороточных и тканевых маркеров у больных РМЖ позволил выявить их практическую значимость, а именно, показатель 3-х летней безрецидивной выживаемости больных РМЖ зависел не только от стадии болезни, но и исходных уровней провоспалительного цитокина ИЛ-6 и ключевого активатора неоангиогенеза VEGF в сыворотке крови. При этом, наиболее низкие показатели 3-летней безрецидивной выживаемости среди больных РМЖ отмечены при высоких исходных значениях в сыворотке крови ИЛ-6 (более 5 пг/мл) и VEGF (более 500 пг/мл), а также отмечена тенденция к снижению 3-летней безрецидивной выживаемости среди пациенток с положительным уровнем экспрессии белка Her-2/neu в первичной опухоли.
Апробация диссертации
Материалы исследования обсуждались на международных, всероссийских и региональных научно-практических конференциях. Результаты исследований доложены на XV Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008), на Российском национальном конгрессе «Дни лабораторной медицины России» (Москва, 2008).
Диссертация апробирована 26 мая 2008 г. на заседании кафедры онкологии ГИУВ МО РФ.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав (обзор литературы, описание материала и методов исследования, собственные результаты и их обсуждение), заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы из 293 источников (90 отечественных, 203 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 28 таблицами и 12 рисунками.
Заключение диссертационного исследования на тему "Клиническая значимость некоторых сывороточных и тканевых маркеров при раке молочной железы"
Выводы
1. Опухолевые маркеры СА-15-3, РЭА не обладают достоверной диагностической ценностью при новообразованиях молочной железы и их определение не повышает диагностические возможности выявления РМЖ. В отличие от практически здоровых женщин, у больных РМЖ имеется достоверная корреляционная зависимость между содержанием цитокинов ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови (г=0,43; р=0,001), которая отсутствует с другими сывороточными (СА -15-3, РЭА) и тканевыми (РЭ, РП, Hcr-2/neu в ткани опухоли) маркерами.
2. Определение концентрации цитокина ИЛ-6 в сыворотке крови позволяет судить о наличии поражения метастазами РМЖ регионарных а лимфатических узлов и высокой степени злокачественности опухоли. Исходная концентрация ИЛ-6 не зависит от возраста и гистологического варианта строения опухоли, однако достоверно отражает стадию опухолевого процесса и имеет определенную прогностическую ценность.
3. Маркер активности неоангиогенеза VEGF может использоваться в качестве достоверного признака наличия РМЖ и обладает высокой информативностью при оценке прогноза заболевания. Исходный показатель VEGF в сыворотке крови больных РМЖ достоверно отражает стадию болезни и наличие метастазов в регионарных лимфатических узлах.
4. Показатель 3-летней без рецидивной выживаемости больных РМЖ можно прогнозировать при оценке исходных уровней цитокинов ИЛ-6 и VEGF в сыворотке крови. При высоких исходных значениях ИЛ-6 (более 5 пг/мл), VEGF (более 500 пг/мл) и белка Her-2/neu показатель 3-летней без рецидивной выживаемости пациенток при III-IV стадиях РМЖ является наиболее низким.
Практические рекомендации
1. Для улучшения диагностики и оценки активности ангиогенеза, гормоночувствительности РМЖ целесообразно дополнительно с общепринятыми клиническими, морфологическими и инструментальными методами исследований включать лабораторные тесты на определение сывороточных (ИЛ-6, VEGF) и тканевых (экспрессия РЭ, РП, Her-2/neu в ткани опухоли) маркеров.
2. Определение в сыворотке крови СА-15-3, РЭА до начала лечения и после не позволяет считать выше указанные маркеры высокозначимыми показателями в диагностике и клиническом мониторинге больных РМЖ.
3. Исходный уровень провоспалительного цитокина ИЛ-6 (> 5 пг/мл) и ключевого активатора неоангиогенеза VEGF (> 500 пг/мл) в сыворотке крови больных РМЖ может служить критерием неблагоприятного прогноза 3-летней безрецидивной выживаемости.
110
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2008 года, Богова, Валерия Владимировна
1. Абраменко И.В., Фильченков А.А. Оценка параметров апоптоза в диагностике онкологических заболеваний, их прогнозе и оптимизации схем терапии // Вопр. онкол.:-2003.-том 49, №1.-С.21-30.
2. Абрамов В.В., Абрамова Т.Я. Интерлейкин-1 в цитокиновой сети: фундаментальные и прикладные аспекты // Успехи совр. биол.:-2007.-Т.127, №6.-С.570-579.
3. Альберте Б., Брей Д., Льюис Д., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Д. Молекулярная биология клетки //М.-Мир.-1994.~Т. 3.- 452с.
4. Бассалык Л.С. (под ред.). Рецепторы стероидных гормонов в опухолях человека // М.-Медицина.-1987.-224с.
5. Бережная Н.М., Чехун В.Ф. Система интерлейкинов и рак // Киев.-«ДИА».-2000.-224с.
6. Берштейн Л.М. (под ред.) Гормоны, возраст и рак // «Наука».-СП6.-2005 .-254с.
7. Берштейн Л.М., Левина В.В., Порошина Т.Е., Цырлина Е.В. Исследование содержания 8-гидрокси-2-дезоксигуанозина в стероид-рецепторпозитивных и рецепторнегативных клетках рака молочной железы // БЭБМ.-2005.-Т.140, №7.-С.100-103.
8. Борисов В.И. Современные тенденции в лечении метастатического рака молочной железы // Опухоли женской репродуктивной системы.-2008.-№2.-С.27-32.
9. Ю.Гаджиева С.Ш., Полосухина Е.Р., Николаева Т.Г. и соавт. Цитодифференцирующие агенты в онкологии // Вопр. онкол,-2006.-Т. 52, №3.-С.267-274.
10. П.Галактионов В.Г. Иммунология // М.-Академия.-2004.-520с.
11. Гарин A.M. Эндокринная терапия и гормонозависимые опухоли // М.- «Триада».-2005.-238с.
12. Гарин A.M., Базин И.С. Десять наиболее распространенных злокачественных опухолей // М.-2006.-С.70-99.
13. Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. Биохимические критерии активности ангиогенеза в опухолях человека. В материалах конгресса «Национальные дни лабораторной медицины России-2004» (Москва, 20-22 октября 2004г.) // Клин. лаб. диагностика.-2004.-№9.-6 с.
14. Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. Тканевые маркеры как факторы прогноза при раке молочной железы. В кн.: «Практическая онкология: избранные лекции». Под ред. С.А.Тюляндина и В.М.Моисеенко // СПб.- «Центр ТОММ».-2004.-С.41-50.
15. Головизин М.В. Вмешательство раковых клеток в процессы созревания и селекции Т-лимфоцитов как фактор опухолевой прогрессии // Иммунология.-2001.-№6.-С.4-10.
16. Грачева Л.А. Цитокины в онкогематологии // М.-1996.-168 с.
17. Давыдов М.И., Летягин В.П., Кузнецов В.В. Опухоли женской репродуктивной системы // М.-Медицинское информационное агенство.-2007.-373с.
18. Долгих Т.И., Бычкова Е.Ю., Галиулин Р.Х. Содержание цитокинов и лактоферрина у онкологических больных // Медицинская иммунология.-2008.-Т. 10, №1.-С.67-70.
19. Зборовская И.Б., Татосян А.Г. Молекулярно-генетические исследования при раке молочной железы // В кн.: «Рак молочной железы» (под ред. Н.Е.Кушлинского, С.М.Портного, К.П.Лактионова).- Редакционно-издательский совет Президиума РАМН.-М.-2005.-С.27-38.
20. Иванов В.Г. Эпидемиологические факторы риска, ранняя диагностика рака молочной железы. В кн.: «Практическая онкология: избранные лекции». Под ред. С.А.Тюляндина и В.М.Моисеенко // СПб.- «Центр ТОММ».-2004.-С.15-21.
21. Иванов В.Г., Семиглазов В.Ф., Семиглазов В.В. и соавт. Таргетная (целевая) терапия рака молочной железы. Миф или реальность // Русский медицинский журнал.-2007.-Т. 15, №14.-C.l 118-1122.
22. Иванов С.Д., Ямшанов В.А., Корытова Л.И., Хазова Т.В. Прогнозирование длительности безрецидивного периода при лучевой и химиолучевой терапии больных раком молочной железы // Вопр. онкол.-2008.-Т. 54, Ш.-С.34-39.
23. Ивашкин В.Т., Шульпекова Ю.О., Лукина Е.А. Классические провоспалительные цитокины и их биологические эффекты призаболеваниях печени // Молекулярная медицина.-2003.-№3.-С.34-43.
24. Имянитов Е.Н., Хансон К.П. Молекулярная онкология: клинические аспекты // СПб.- СП6МАПО.-2007.-211с.
25. Имянитов Е.Н., Моисеенко В.М. Применение молекулярно-генетического анализа для выбора противоопухолевой терапии // Вопр. онкол.-2008.-Т. 54, №2.-С. 121-132.
26. Кадагидзе З.Г. Модификаторы биологических реакций. Глава в «Руководстве по химиотерапии опухолевых заболеваний» (Под ред. Н.И.Переводчиковой) // М.-Практическая медицина.-2005.-С.66-75.
27. Ким Е.А., Высоцкая И.В., Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. Экспрессия VEGF и VEGFR-2 в опухолях в процессе неоадъювантного лечения бльных раком молочной железы // БЭБМ.-2008.-Т. 145, №2.-С.206-209.
28. Ким Е.А., Платова A.M., Высоцкая И.В. и соавт. Клиническое значение VEGFR-2 в опухолях и сыворотке крови больных раком молочной железы // Опухоли женской репродуктивной системы.-2008.-№1 .-С.28-32.
29. Киселев В.И., Ляшенко А.А. Молекулярные механизмы регуляции гиперпластических процессов // М.-«Димитрейд График Групп».-2005.-348с.
30. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза//Биохимия.-2000.-Т. 65.-С.5-33.
31. Копнин Б.П. Основные свойства неопластической клетки и базовые механизмы их возникновения. Под ред. Заридзе Д.Г. // М.-Медицина.-2004.-С.86-102.
32. Крючков А.Н., Фрейнд Г.Г. Неоангиогенез и плотность сети микрососудов в раке молочной железы // Архив патологии.-2008.-Т. 70, №1.-С.62-65.
33. Кушлинский Н.Е. Возможности, неудачи и перспективы исследования опухолевых маркеров // Клин. лаб. диагн.-1999.-№3.-С.25-32.
34. Кушлинский Н.Е. Общие представления о клеточных маркерах // Медицинская кафедра.-2005.-№5 (17).-С. 18-21.
35. Кушлинский Н.Е., Бабкина И.В., Соловьев Ю.Н. и соавт. Интерлейкин 6 в сыворотке крови больных новообразованиями костей // Кремлевская медицина.-2001.-№4.-С.62-64.
36. Кушлинский Н.Е., Герштейн Е.С. Рецепторы эпидермального фактора роста при раке молочной железы: от эксперимента к клинике//Бюлл. эксп. биол. мед.-1998.-Т. 129.-С.485-496.
37. Кушлинский Н.Е., Широкий В.П., Герштейн Е.С. и соавт. Растворимый фрагмент рецептора HER-2/neu в сыворотке кров больны раком молочной железы с уровнем экспрессии этого белка в опухоли // БЭБМ.-2007.-Т. 143, №4.-С.427-430.
38. Лавин Н. Эндокринология // М.-Практика.-1999.-1128с.
39. Летягин В.П. Опухоли молочной железы (клиника, диагностика, лечение, прогноз) // М.-2000.-С.64-74.
40. Летягин В.П., Давыдов М.И. (Под ред.) Семинар по клинической маммологии // М.-2006.-104с.
41. Личиницер М.Р. Фазлодекс (фулвестран) новый антиэстроген с универсальным механизмом действия // Современная онкология (экстравыпуск).-2006.-С.7-10.
42. Личиницер М.Р., Степанова Е.В. Направленная терапия новое направление лечения злокачественных опухолей // В кн.: «Этюды химиотерапии» (под ред. В. А.Горбуновой).-М.-Издательство «Литтерра».-2006.-С.31-38.
43. Маршутина Н.В., Сергеева Н.С. Серологические опухолевые маркеры в первичной диагностике и мониторинге больных раком молочной железы//Рос. онкол. жур.-2002.-№4.-С.45-48.
44. Молчанов О.Е. Цитокинотерапия злокачественных опухолей интерлейкином-2 // СПб.-2002.-39с.
45. Никулин Б.А. Оценка и коррекция иммунного статуса // Издательство группа «ГЭОТАР-Медиа».-М.-2(Ю7.-376с.
46. Новик А.А., Камилова Т.А., Цыган В.Н. Введение в молекулярную биологию канцерогенеза (под ред. академика РАМН Ю.Л.Шевченко) //М.- «ГЕОТАР-МЕД».-2004.-222с.
47. Павликова Е.П., Мерай И.А. Клиническое значение интерлейкина-6 и фактора некроза а опухоли при ишемической болезни сердца // Кардиология.-2003.-№ 8.-С.68-71.
48. Пальцев М.А., Иванов А.А. Межклеточные взаимодействия // М.-Медицина.-1995.-224с.
49. Пальцев М.А., Иванов А. А., Северин С.Е. Межклеточные взаимодействия. Издание второе, переработанное и дополненное // М.-Наука.-2003.-287с.
50. Пальцев М.А. (под редакцией). Введение в молекулярную медицину. М.-Медицина.-2004.-496с.
51. Переводчикова Н.И. (Под ред.). Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний // М.-Практическая медицина.-2005.-704с.
52. Пичугина JI.B., Пинегин Б.В. Внутриклеточные цитокины: проблемы детекции и клиническое значение // Иммунология.-2008.-том 29, №1.-С.55-63.
53. Проценко С.А. Поиски путей индивидуализации противоопухолевой терапии // Практическая онкология.-2007.-том 8, №4.-С.173-181.
54. Рабсон А., Ройт А., Делвз П. Основы медицинской иммунологии // М.-Издательство «Мир».-2006.-302с.
55. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология // М.-Мир.-2000.-С.376-392.
56. Семиглазов В.Ф., Семиглазов В.В., Клецель А.Е. Инвазивные и неинвазивные опухоли молочной железы // СПб.-2005.-350с.
57. Сергеева Н.С., Маршутина М.В. Серологические опухолевые маркеры. В кн.: Онкология. Клинические рекомендации. Под ред. В.ИЛиссова, С.Л.Дарьяловой // М.-ГЕОТАР-Медиа.-2006.-С.55-92.
58. Сергеева Н.С., Маршутина Н.В. Клиническая значимость серологических опухолевых маркеров // Вместе против рака.-М.-2008.-№2.-С. 10-21.
59. Симбирцев А.С. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма // Цитокины и воспаление.-2002.-Т. 1, №2.-С.9-17.
60. Симбирцев А.С. Цитокины: классификация и биологические функции //Цитокины и воспаление.-2004.-Т. 3, №2.-С. 16-22.
61. Соломко Э.Ш., Степанова Е.В., Личиницер М.Р., Барышников А.Ю. Оценка антиангиогенной активности in vitro: опыт Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН // Российский биотерапевтический журнал.-2007.-Т.6, №3.-С.3-7.
62. Стахеева М.Н., Бабышкина Н.Н., Чердыицева Н.В. Цитокины и злокачественный рост // Сибирский онкологический журнал.-2003.-Ж2.-С.79.
63. Стенина М.Б. Рак молочной железы: некоторые важные научные обытия и выводы последних лет // Практическая онкология.-2006.-Т. 6, №1.-С.26-32.
64. Степанова Е.В., Барышников А.Ю., Личиницер М.Р. Оценка ангиогенеза опухолей человека // Успехи современной биологии.-2000.-Т. 120, №6.-С.599-604.
65. Таранов А.Г. Диагностические тест-системы (радиоиммунный и иммуноферментный методы диагностики) // М.-Мокеев.-2002.
66. Ткачева Г.А., Юлохина Н.Г., Ожерельев А.С. и соавт. Применение радиоиммунологического теста на раково-эмбриональный антиген в онкологии. (Методические рекоменд.) //Москва.-1986.-С.42.
67. Ткачева Г.А., Иванов В.М., Полевая Е.Б. Тканевой полипептидный и раково-эмбриональный антиген у больных раком молочной железы // Вопр. онкол.-1984.-№ 3.-С.9- 13.
68. Телетаева Г.М. Цитокины и противоопухолевый иммунитет // Практическая онкология.-2007.-Т. 8, №4.-С.211-218.
69. Титов В. Н. Роль макрофагов в становлении воспаления, действие интерлейкина-1, интерлейкина-6 и активность гипоталамо-гипофизарной системы (обзор литературы) // Клиническая лабораторная диагностика.-2003:-№12.-С.З-12.
70. Тотолян А.А., Фрейдлин И.С. Клетки иммунной системы // «Наука». Санкт-Петербург.-2000.-231с.
71. Трапезников Н.Н., Аксель Е.М. Статистика рака молочной железы // Новое в терапии рака: Сб. трудов. М.-1998.-С.6-10.
72. Тупицын Н.Н. Иммунофенотип рака молочной железы. В кн.: «Рак молочной железы» (Под ред. Н.Е.Кушлинского, С.М.Портного, К.П.Лактионова) // М.-Редакционно-издательский совет Президиума РАМН.-2005.- С. 174-196.
73. Уоррел Р.П. Индукторы клеточной дифференцировки. Биологические методы лечения онкологических заболеваний. (Под ред. Де Вита В.Т., Хэллмана С., Розенберга С.А.) // М.-Медицина.-2002.-936с.
74. Фаллер Д.М., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки // М.-Бином-Пресс.-2004.-245с.
75. Хаитов P.M. Физиология иммунной системы // М.-ВИНИТИ РАН.-2001.-219с.
76. Хансон К.П. Молекулярная онкология: фундаментальные достижения и практические перспективы // Тезисы Российской конференции по фундаментальной онкологии «Петровские чтения-2005».-СПб:-2005.-С.З-4.
77. Хансон К.П. Молекулярная, онкология: фундаментальные достижения и практические перспективы // Тезисы Российской конференции по фундаментальной онкологии «Петровские чтения-2005».- СП6.-2005.-С.З-4.
78. Чиссов В.И., Сергеева Н.С., Маршутина Н.В., Мишунина М.П. Опухолеассоциированные маркеры в скрининговых программахпо выявлению злокачественных новообразований: реальность и перспективы // Молекулярная медицина.-2006.-№1.-С.З-11.
79. Шаманский С.В. Диагностическое и прогностическое значение сывороточного интерлейкина 6 у больных острым лейкозом // Автореф.дисс. .канд.мед.наук.-М.-1997.
80. Швецова Г.Н. Морфо-биологические маркеры (sFas, интерлейкин-6, VEGF, Ki-67) при раке молочной железы и их связь с прогнозом заболевания // Автореф.дисс. докт.мед.наук.-М.-2002.
81. Ярилин А.А. Основы иммунологии // М.-Медицина.-1999.-594с.
82. Ярилин А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и патологии // Иммунология.-1997.-№5.-С.7-14.
83. Abelev G.I., Sell S. Seminar Cancer Biology Tumour Markers // 1999.-Vol.9.-P.61-66.
84. Adams J., Carder P.J., Downey S. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) in breast cancer: comparison of plasma, serum, and tissue VEGF and microvessel density and cffects of tamoxifen // Cancer Res.-2000.-Vol.60, N.11.-P.2S98-2905.
85. A1 Niami Amjad., Al Bassam Mohammad N., Al Zubaidi abdul Rahamam. Serum Levels of CA 15 -3 in patients with breast cancer. A follow up stady // Hum. Tumor. Markers; Proc. Int. Symp., Taipei. 1988,-Amsterdam etc., 1989.-P.331.
86. Alo F.P., Gavicchi A., Carbonari L. et al. Antigene cea e rediciva di cancro della memmela// Soc. Italasenol. Roma.-1988.-P.7-10.
87. Anan К., Morisaki Т., Katano M. et al. Vascular endothelial growth factor and platelet-derived growth factor are potential angiogenic and metastatic factors in human breast cancer // Surgery.-1996.-Vol. 119, N.3.-P.333-339.
88. Barak V., Carlin D., Sulkes A. et al. CA 15-3 serum levels in breast cancer et other malignancies-correlation with clinical course. // J. Med. Sci. 1988. Vol. 24, N.9. P. 95.
89. Bartel U., Sohanser В., Reib Helma et al. Erste Erfahrungen mit Mammakarzinom//Lbl. Gynocol.-1989.-Vol.Ill, N.21.-P.1417-1424.
90. Beiglmayer C., Szepesi Т., Neuntcufel W. et al. MCA, a monoclonal antibody defined breast tumor associated antigen and its relation to CA 15-3 //Tumor Biol.-1989.-Vol. 10, N.5.-P.239-242.
91. Behr W., Barnert J. Quantification of bone alkaline phosphatase in serum by precipitation with wheat-germ lectin: a simplified method method and its clinical plausibility // Clin. Chem.-1986.-Vol.32.-P.1960-1966.
92. Bendre M.S., Gaddy-Kurten D., Mon-Foote T. et al. Expression of interleukin 8 and not parathyroid hormone-related protein by human breast cancer cells correlates with bone metastasis in vivo II Cancer Res.-2002.-Vol.62.-P.5571-5579.
93. Berruti A., Piovesan A., Torta M. et al. Biochemical evaluation of bone metastases // Br. J. Cancer.-1996.-Vol.73.-P.1581-1587.
94. Bieglmayer C., Szepesi Т., Neuntuefel W., Nowotny C. MCA, a monoclonal-antibody-defined breast-tumor-associated antigen and its relation to CA 15-3 // Tumor Biol.-1989.-Vol. 10, N.5.-P.239-242.
95. Bieglmayer C., Szepesi Т., Nucin like tumor markers for metastatic breast cancer // J. Tumor Marker 0ncol.-1990.-Vol.5, N.3.-P.214.
96. Boockfor F.R., Wang D., Lin Т., Nagpal M.L., Spangelo B.L. Interleukin-6 secretion from rat Leydig cells in culture // Endocrinology.-1994.-Vol.l34.-P.2150-2155.
97. Brown M., McFerlane M.P. // Hum. Tumor Markers: Proc.Int Symp., Taigei, 3-5 Sept., 1988. Amsterdam etc.-1989.-P.332.
98. Brown L.F., Guidi A.J., Schnitt S.J. et al. Vascular stroma formation in carcinoma in situ, invasive carcinoma, and metastatic carcinoma of the breast // Clin. Cancer Res.-1999.-Vol.5, N.5.-P.1041-1056.
99. Brugada R., Wenger N.K., Jacobson T.A., Clark W.S., Cotsonis G., Iglesias A. Changes in plasma cholesterol levels after hospitalization for acute coronary events // Cardiology.-1996.-Vol.87.-P. 194-199.
100. Caponigro F., Iaffaioli R.V., Battaglia C.S. et al. CEA test as a prediction of response to therapy in advanced breast cancer // Folia Oncol.-1988.-Vol.ll, N.4.-P.407-409.
101. Chabner B.A. The miracle of Iressa // Oncologist.-2004.-Vol.9.-P.245-246.
102. Chabner B.A., Roberts T.GJr. Timeline: Chemotherapy and the war on cancer // Nat. Rev. Cancer.-2005.-Vol.5.-P.65-72.
103. Chattopadhyay U. Tumour immunotherapy: Developments and strategies // Immunology Today.-1999.-Vol.20.-P.480-482.
104. Chelouche-Lev D., Miller C.P., Tellez C. et al. Diffetent signalling pathways regulate VEGF and IL-8 expression in breast cancer: implications for therapy // Eur. J. Cancer.-2004.-Vol.40.-P.2509-2518.
105. Chrapusta S.J., Giermek J., Pienkowsky T. Long-term survival in primary breast cancer: correlation with estrogen and progesterone receptor assay results and adjuvant tamoxifen therapy // Med. Sci. Monit.-2004.-Vol.l0.-P.577-586.
106. Chu T.M., Nemoto T. Evaluation of carcinoembryonic antigen in human mammary carcinoma // J. Natl. Cancer Inst.-1973.-Vol.51, N.4.-p.1119-1122.
107. Ciardiello F., Tortora G. A novel approach in the treatment of cancer: targeting the epidermal growth factor receptor // Clin. Cancer Res.-2001 .-Vol.7, N. 10.-P.2958-2970.
108. Cohen H.J., Pieper C.F., Harris Т., Rao K.M., Currie M.S. The association of plasma IL-6 levels with functional disability in community-dwelling elderly // J. Gerontol.-1997.-Vol.52.-p.201-208.
109. Colomer R., Ruibal A., Genolla J. et al. Circulating CA 15-3 antigen levels in non- mammary malignancies // Brit. J. Cancer.-1989.-Vol.59, N.2.-P.9.
110. Colomer R., Ruibal A., Salvador L. Circulation tumor marker levels in advanced breast carcinoma, correlate with the extent of metastatic disease // Cancer.-1989.-Vol.64, N.8.-P.1674-1681.
111. Cooper E.H., Forbes M.A. Hancock A.K. ct al. Serum bone alkaline phoshatase and CA 549 in breast cancer with bone metastases // Biomed. Pharmacother.-1992.-Vol.46.-P.31-36.
112. Cooper E.H., Whelan P., Purves D. Bone alkaline phosphatase and prostate-specific antigen in the monitoring of prostate cancer // Prostate.-1994.-Vol.25.-P.236-242.
113. Coradini D., Boracchi P., Daidone M.G. et al. Contribution of vascular endothelial growth factor to the Nottingham prognostic index in node-negative breast cancer // Br. J. Cancer.-2001.-Vol.85, N.6.-P.795-797.
114. Dalen A. van, Dupree H.W., Heering KJ. et al. Bone scintigrafie and the marker С A 15-3 during therapy monitoring of breast cancer patients //Eur. Nucl. Mad. Congr. N.Y.-1988.-P.538-541.
115. Dass K., Ahmad A., Azmi A.S. et al. Evolving role of uPA/uPAR system in human cancers // Cancer Treat. Rev.-2008.-Vol.38.-P.122-136.
116. De Benedetti F., Massa M., Pignatti P., Albani S., Novick D., Martini A. Serum soluble interleukin-6 (IL-6) receptor and IL-6/soluble IL-6 receptor complex in systemic juvenile rheumatoid arthritis // J. Clin. Invest.-1994.-Vol.93.-P.2114-2119.
117. De Laurentiis M., Cancello G., Zinno L. et al. Targeting HER2 as a therapeutic strategy for breast cancer: a paradigmatic shift of drug development in oncology // Ann. Oncol.-2005.-Vol. 16 (Suppl. 4).-P.7-13.
118. Demers L.M., Costa L., Chinchilli V.M. et al. biochemical markers of bone turnover in patients with metastatic bone disease // Clin. Chem.-1995.-Vol.41, №10.-P. 1489-1494.
119. Dinarello C. Proinflammatory cytokines // Chest.-2000.-Vol. 118.-P.503-508.
120. Dirix L.Y., Vermeulen P.B., Pawinski A. et al. Elevated levels of the angiogenic cytokines basic fibroblast growth factor and vascular endothelial growth factor in sera of cancer patients // Br. J. Cancer.-Vol.76, N.2.-P.238-243.
121. Donovan D. Harmey J.H., Toomey D. et al. TGF beta-1 regulation of VEGF production by breast cancer cells see comments. // Ann. Surg. Oncol.-1997.-Vol.4, N.8.-p.621-627.
122. Duffy M.J. Evidence for the clinical use of tumour markers // Ann. Clin. Biochem.-2004.-Vol.41 .-P.370-377.
123. Dunn G.P., Old L.J., Schreiber R.D. The three Es of cancer // Annual Review of Immunology.-2003.-Vol.22.-P.329-360.
124. Eppenberger U., Kueng W., Schlaeppi J.M. et al. Markers of tumor angiogenesis and proteolysis independently define high- and low-risksubsets of node-negative breast cancer patients // J. Clin. Oncol.-1998.-Vol.16, N.9.-P.3129-3136.
125. Eriksen E F., Brixen K., Charles P. New markers of bone metabolism: clinical use in metabolic bone disease // Eur. J. Endocrinol.-1995 .-Vol. 132.-P.251 -263.
126. Eure D.R. Biochemical markers of bone metabolism // Klin. Lab.-1995.-Vol.41.-P.429-430.
127. European Group on Tumor Markers: Consensus recommendations // Anticancer Res.-1999.-Vol.l9(4A).-P.2789-2819.
128. Farley J.R., Baylink D J. Skeletal alkaline phosphatase activity as a bone formation index in vitro // Metabolism.-1986.-Vol.35.-P.563-571.
129. Fasquelle D. et al. La marqucr tumor CA 15-3 dans la cancer du sein. Dosage immunoenzumatique. Interpretation des resultants. // Fertill. Biol.-1989.-Vol.30, N.166.-P.51-54.
130. Ferrara, N. The role of vascular endothelial growth factor in pathological angiogenesis // Breast Cancer Res. Treat.-1995.-Vol.36, N.2.-P. 127-137.
131. Finn O.J. (ed.) Section on tumor immunology // Current Opinion in Immunology .-2004.-Vol. 16.-P. 127-162.
132. Fischer O.M., Streit S., Hart S., Ulrich A. Beyond Herceptin and Gleevec // Curr. Opn. Chem. Biol.-2003.-Vol.7.-P.490-495.
133. Fleisher M. Practice guidelines and recommendations for use of tumor merkers in the clinic // Clin. Biochem.-2002.-Vol.15.-P.l-56.
134. Flammia M., Ascarpini M., Gallo A. et al. Valutasionc del comportamento della ferritina carca nella pathologia mammaria // G. Ital. Senol.-1985.-Vol.6, N.1.-P.57-60.
135. Foekens J.A., Peters H.A., Grebenchtchikov N. et al. High tumor levels of vascular endothelial growth factor predict poor response to systemic therapy in advanced breast cancer // Cancer Res.-2001.-Vol.61, N.14.-P.5407-5414.
136. Folkman J. Angiogenesis. In: Harrison's Textbook of Internal Medicine, 15th Edition. Braunwald E., Fauci A.S., Kasper D.L., Hauser S.L., Longo D.L., Jameson J.L., eds. New York: McGraw-НП1.-2001.-Р.517-530.
137. Francini D., Bonelli P., Ugolotti G. Role of CA 15-3 serum levelsin monitoring of breast canccr patients who already underwent surgical operation. // J. Nucl. Med. and Allied Sci.-1989.-Vol.33, N.2.-P.130-131.
138. Fujino N., Haga Y., Sakamoto K. et al. Clinical evaluation of an immunoradiometric assays for CA 15-3 antigen associated with human mammary carcinomas: comparison with carcinoembryonic antigen // Jpn. J. Clin. Oncol.-1986.-Vol. 16, N.4.-P.335-346.
139. Fukata Т., Hibi M., Yamanaka J. et al. Two signals are necessary for cell proliferation induced by a cytokine receptor gpl30 // Immunity.-1996.-Vol.5.-P .449-460.
140. Galien R., Evans H.F., Garcia T. Involvement of CCAAT/enhancer-binding protein and nuclear factor-kappa В binding sites in interleukin6 promoter inhibition by estrogens // Mol. Endocrinol.-1996.-Vol.10, N.6.-P.713-716.
141. Gasparini G. Clinical significance of determination of surrogate markers of angiogenesis in breast cancer // Crit. Rev. Oncol. Hematol.-2001.-Vol.37, N.2.-p.97-114.
142. Gasparini G. Prognostic value of vascular endothelial growth factor in breast cancer // Oncologist.-2000.-Vol.5 (Suppl. l).-P.37-44.
143. Gasparini G., Toi M., Biganzoli E. et al. Thrombospondin-1 and -2 in node-negative breast cancer: correlation with angiogenic factors, p53, cathcpsin D, hormone receptors and prognosis // Oncology.-2001.-Vol.60, N.1.-P.72-80.
144. Gasparini G., Toi M., Gion M. et al. Prognostic significance of vascular endothelial growth factor protein in node-negative breast carcinoma // J. Natl. Cancer Inst.-1997.-Vol.89, N.2.-P.139-147.
145. Geiger Т., Andus Т., Klapproth J. et al. Induction of rat acute phase proteins interleukin-6 in vivo II Eur. J. Immunol.-1988.-Vol.18.-P.717-721.
146. Gold F., Freedman S.O. Specific carcinoembrionic antigens of the human digestive system // J. Exp. Med.-1965 .-P.467-481.
147. Greb R.R., Maier I., Wallwiener D., Kiesel L. Vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) mRNA expression levels decrease aftermenopause in normal breast tissue but not in breast cancer lesions // Br. J. Cancer.-1999.-Vol.81, N.2.-P.225-231.
148. Guidi A.J., Schnitt S.J., Fischer L. et al. Vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) expression and angiogenesis in patients with ductal carcinoma in situ of the breast // Cancer.-1997.-Vol.80, N.10.-P. 1945-1953.
149. Hager K., Machein U., Krieger S. et al. Interleukin-6 and selected plasma proteins in healthy persons of different ages // Neurobiol. Aging.-1994.-Vol. 15.-P.771-772.
150. Hamilton A., Piccart M. The contribution of molecular markers to the prediction of response in the treatment of breast cancer: a review of the literature on HER-2, p53 and BCL-2 // Ann. Oncol.-2000.-Vol.l 1, N.6.-P.647-663.
151. Hayes F.D., Tondini C., Kufe D.W. CA 15-3 a sensitive and reliable marker in patients with breast cancer // Int. J. Biol. Markers.-1989.-Vol.4.-P.509-512.
152. Heer K., Kumar H., Speirs V. et al. Vascular endothelial growth factor in premenopausal women indicator of the best time for breast cancer surgery? // Br. J. Cancer.-1998.-Vol.78, N.9.-P. 1203-1207.
153. Heinrich P.C., Castell J.V., Andus T. Interleukin-6 and the acute phase response //Biochem. J.-1990.-Vol.265.-P.621-636.
154. Hirano Т., Abira S., Taga T. et al. Biological and clinical aspects of interleukin-6 // Immunol. Today.-1990.-№1 l.-P.443-449.
155. Hirata Y., Taga Т., Hibi M. et al. Characterization of interleukin-6 receptor expression by monoclonal and polyclonal antibodies // J. Immunol.- 1989.-Vol. 143.-P.2900-2906.
156. Hoborin J.M., Browning M.C.K., McFarlane N.F. et al. Preliminary results from the tumor marker CA 15-3 suggest that it is useful in the detection of bone metastases in patients with breast carcinoma // Int. J. Biol. Markers.-1989.-Vol.4, N.4.-P.224.
157. Horowitz J.D., Au F.C., Tang C.K. et al. Tissue carcinoembryonic antigen levels in bening and malignant diseases of the breast // J. Surg. Oncol.-1989.-Vol.40, N.l.-p.58-60.
158. Hyder S.M., Stancel G.M. Regulation of VEGF in the reproductive tract by sex-steroid hormones // Histol. Histopathol.-2000.-Vol.15, N.1.-P.325-234.
159. Imyanitov E.N., Hanson K.P. Mechanisms of breast cancer // Drug Discov. Today: Dis. Mech.-2004.-Vol.l.-P.235-245.
160. Imyanitov E.N., Hanson K.P. Mechanisms of breast cancer // В материалах II Международной ежегодной конференции «Проблемы диагностики и лечения рака молочной железы» (Санкт-Петербург, 22-24 июня 2005г.).-Санкт-Петербург.-2005.-с.20-29.
161. Imyanitov E.N., Hanson К.Р., Zhivonovsky В. Polymorphic variations in apoptotic genes and cancer predisposition // Cell Death Differ. -2005.-Vol. 12.-P. 1004-1107.
162. Ishikawa Т., Tanaka Y., Sugihara K. et al. The immunohistochemical localization of CA 15-3 in human breast and their tumors // Gan. No Rinsho.-1988.-Vol.34, N.3.-P.277-282.
163. Jilka R.L., Weinstein R.S., Bellido T. et al. Osteoblast programmed cell death (apoptosis): modulation by growth factors and cytokines // J. Bone Miner. Res.-1998.-Vol.l3.-P.793-802.
164. Juaji H., Yayoi E., Maeura Y. et al. Carcinoembryonic antigen estimation in nipple discharge as an abjuctive tool in the diagnosis of early breast cancer// Cancer.-1987.-Vol.60, N.12.-P.3008-3012.
165. Kallioniemi O.-P., Oksa H., Aaran R.-K. et al. Serum CA 15-3 assay in the diagnosis and fallow-up breast cancer // Brit. J. Cancer. -1988.-Vol.58, N.2.-P.213-215.
166. Kameda Т., Matsuzaki N., Sawai K., Okada Т., Saji F., Matsuda T. et al. Production of interleukin-6 by normal human trophoblast // Placenta.-1990.-Vol. 11 .-p.205-213.
167. Kaptain S., Tan L.K., Chen B. Hcr-2/neu and breast cancer // Diagn. Mol. Pathol.-2001.-Vol.10, N.3.-P.139-152.
168. Kishimoto Т., Akira S., Narazaki M., Taga T. Interleukin-6 family of cytokines and gpl30//Blood.-1995.-Vol.86.-P. 1243-1254.
169. Klein В., Wijdenes J., Zhang X.G., Jourdan M., Boiron J.M., Brochier J. et al. Murine anti-interleukin-6 monoclonal antibody therapy for a patient with plasma cell leukemia // Blood.-1991.-Vol.78.-P.1198-1204.
170. Klijn J.G.M., Berns E.M.J.J., Bontenbal M., Alexieva-Figusch J.A. Clinical breast cancer, new developments in selection and endocrine treatment of patients // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol.-1992.-Vol.43.-P.211-221.
171. Kraft A., Weindel K., Ochs A. et al. Vascular endothelial growth factor in the sera and effusions of patients with malignant and nonmalignant disease // Cancer.-1999.-Vol.85, N.1.-P.178-187.
172. Kranz A., Mattfeldt Т., Waltenberger J. Molecular mediators of tumor angiogenesis: enhanced expression and activation of vascular endothelial growth factor receptor KDR in primary breast cancer // Int. J. Cancer.-1999.-Vol.84, N.3.-P.293-298.
173. Kurebayashi J., Otsuki Т., Kunisue H. et al. Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) family members in breast cancer // Jpn. J. Cancer Res.-1999.-Vol.90, N.9.-P.977-981.
174. Kurtzman S.H., Anderson K.H., Wang Y. et al. Cytokines in human breast cancer: IL-8 and IL-lfJ expression // Oncol. Rep.-1999.-Vol.6.-P.65-70.
175. Langub M.C. Jr., Koszewski N.J., Turner H.V., Monier-Faugere M.C., Geng Z., Malluche H.H. Bone resorption and mRNA expression of IL-6 and IL-6 receptor in patients with renal osteodystrophy // Kidney Int.-1996.-Vol.50.-P.515-520.
176. Laurence V., Jones W.C., Cooper M.H. Mucin-like carcinoma-associated antigen (MCA) a new marker in breast cancer management //Br. J. Cancer.-1990.-Vol.62.-P. 13-16.
177. Lee A.H., Dublin E.A., Bobrow L.G., Poulsom R. Invasive lobular and invasive ductal carcinoma of the breast show distinct patterns of vascular endothelial growth factor expression and angiogenesis // J. Pathol.-1998.-Vol.185, N.4.-P.394-401.
178. Leek R.D., Hunt N.C., Landers RJ. et al. Macrophage infiltration is associated with VEGF and EGFR expression in breast cancer // J. Pathol.-2000.-Vol. 190, N.4.-P.430-436.
179. Liautard J., Sun R.X., Cotte N. et al. // Cytokine.-1997.-Vol.9, N.4.-P.233-241.
180. Lichtenbeld H.C., Barendsz-Janson A.F., van Essen H. et al. Angiogenic potential of malignant and non-malignant human breast tissues in an in vivo angiogenesis model // Int. J. Cancer.-1998.-Vol.77, N.3.-P.455-459.
181. Lin Y., Huang R., Chen I. et al. Identification of interleukin-8 as estrogen receptor-regulated factor involved in breast cancer invasion and angiogenesis by protein arrays // Int. J. Cancer.-2004.-Vol. 109.-P.507-515.
182. Linderholm В., Lindh В., Tavelin В., Grankvist K., Henriksson R. p53 and vascular-endothelial-growth-factor (VEGF) expression predicts outcome in 833 patients with primary breast carcinoma // Int. J. Cancer.-2000.-Vol.89, N.1.-P.51-62.
183. Linderholm В., Tavelin В., Grankvist K., Henriksson R. Does vascular endothelial growth factor (VEGF) predict local relapse and survival in radiotherapy-treated node-negative breast cancer? // Br. J. Cancer.-1999.-Vol.81, N.4.-P.727-732.
184. Locopo N., Fanelli M., Gasparini G. Clinical significance of angiogenic factors in breast cancer // Breast Cancer Res. Treat.-1998.-Vol.52, N.1-3.-P.159-173.
185. Loppnow H., Libby P. Proliferating or interleukin 1-activated human vascular smooth muscle cells secrete copious interleukin-6 // J. Clin.Invest.-1990.-Vol.85.-P.731-738.
186. Lynch T.J., Bell D.W., Sordella R. et al. Activating mutations is the epidermal growth factor receptor underlying responsiveness of non-small-cell lung cancer to gefitinib // N. Engl. J. Med.-2004.-Vol.350.-P.2129-2139.
187. Macolm S. Mitchell. Immunology and immunotherapy of the breast cancer // Diseases of the breast. Philadelphia.-1996.-P.298-300.
188. Marie P.J., Travers R. Continuous infusion of 1,25-dihydroxyvitamin D3 stimulates bone turnover in the normal young mouse // Calcif. Tissue Int.-1983.-Vol.35.-P.418-425.
189. Marks V. Differential diagnosis by laboratory medicine // Springer Verlag.-2002.-P.234-240.
190. Matsuoka J. Chemical and antigenic structure of CEA antialyzed by using recombinant CEA peptides and monoclonal antibodies // Human. Tumor Markers: Proc. Int. Symp. Taipei, 3-5 Sept., 1989. Amsterdam, 1989.-P.185-198.
191. Mastorakos G., Chrousos G.P., Weber J.S. Recombinant interleukin-6 activates the hypothalamic-pituitary-adrenal axis in humans //J. Clin. Endocrinol. Metab.-1993.-Vol.77.-P.1690-1694.
192. Mastoracos G., Chrousos G.P., Weber J.S. Recombinant interleukin-6 activates the hypothalamic-pituitary-adrenal axis in humans // J. Clin. Endocrinol. Metab.-1993.-Vol.77.-P. 1690-1694.
193. Matsuoka J. Chemical and antigenic structure of CEA analyzed by using recombinant CEA peptides and monoclonal antibodies // Human Tumor Markers: Proc. Int. Symp. Taipei, 3-5 Sept., 1989, Amsterdam, 1989.-P.185-198.
194. McGee D.W., Beagley K.W., Aicher W.K., McGhee J.R. Transforming growth factor-beta and IL-1 beta act in synergy to enhance IL-6 secretion by the intestinal epithelial cell line, IEC-6 // J.Immunol.-1993.-Vol.l51.-P.970-978.
195. Mignatti P., Rifkin D.B. Plasminogen activators and matrix metalloproteinases in angiogenesis // Enzyme Protein.-1996.-Vol.49.-P.l 17-137.
196. Miller W.R. Biologycal rationale for endocrine therapy in breast cancer // Best Pract. Res. Clin. Endocrinol. Metab.-2004.-Vol.18.-P.l-32.
197. Miller K., Wang M., Gralow J. et al. Сравнение терапии лаклитакселом и бевацизумабом и монотерапии паклитакселом у пациенток с метастатическим раком молочной железы // Фарматека.-2008.-С.60-68.
198. Mori Т., Inaji Y. Detection of nonpalpable breast cancer by determing carcinoembrionic antigen (CEA) in nipple discharge // Human Tumor Markers: Proc. Int. Symp. Taipei, 3-5 Sept., 1989, Amsterdam, 1989.-P.211-218.
199. Moss D.W. Diagnostic aspects of alkaline phosphatase and its isoenzymes // Clin. Biochem. -1987.-Vol.20.-P.225-230.
200. Moss D.W., Edvards R.K. Improved electrophoretic resolution of bone and liver alkaline phosphatases resulting from partial digestion with neuraminidase // Clin. Chim. Acta.-1984.-Vol. 143.- P.177-182.
201. Moss D.W., Whitby L.G. A simplified heat-inactivation method for investigating alkaline phosphatase esoenzymes in serum // Clin. Chim. Acta.-1975.-Vol.61.- P.63-71.
202. Nagata S., Golstein P. The Fas Death Factor // Science.-1995.-Vol.267.-P. 1449-1456.
203. Naitoh Y., Fukata J., Tominaga T. et al. Interleukin-6 stimulates the secretion of adrenocorticotropic hormone in conscious, freely-moving rats//Biochem. Biophys. Res. Commun.-1988.-Vol.l55.-P.1459-1463.
204. Namer M., Негу M., Ramaidi A. et al. Value of CA -15-3 assay for nonmetastic breast cancer // Int. S. Biol. Markers.-1989.-Vol,4, N.4.-p.505.
205. Nash M.A., Ferrandina G., Gordinier M. et al. The role of cytokines in both the normal and malignant ovary // Endocr. Relat. Cancer.-1999.-Vol.6, N.l-P.93-96.
206. Novacovic S. Mucin-like carcinoma assotiated antigen (MCA) in patients with breast carcinoma // Tumor Diagn. And Ther.-1989.-Vol.10, N.4.-P.136-141.
207. Obermair A., Kucera E., Mayerhofer K. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) in human breast cancer: correlation with disease-free survival//Int. J. Cancer.-1997.-Vol.74, N.4.-P.455-458.
208. Papanicolaou D.A., Tsigos C., Torpy D.J., Defensor R., Thompson В., Chrousos G.P. Recombinant interleukin-6 effects on pituitary secretion in humans // J. Invest. Med.-1996.-Vol.44.-P.266.
209. Paul W.E., Kishimoto Т., Melchers E. et al. Nomenclature for secreted regulatory proteins of the immune system (interleukins). WHO-IUIS Nomenclature Subcommittee on Interleukin Designation // Clin. Exp. Immunol.-1992.-Vol.88.-P.367.
210. Paul W.E., Seder R.A. Lymphocyte responses and cytokines // Cell.-1994.-Vol.76.-P.241-251.
211. Pidgeon G.P., Barr M.P., Harmey J.H. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) upregulates BCL-2 and inhibits apoptosis in human and murine mammary adenocarcinoma cells // Br. J. Cancer.-2001.-Vol.85, N.2.-P.273-278.
212. Pintucci G., Bikfalvi A., Klein S., Rifkin D.B. Angiogenesis and the fibrinolytic system // Semin. Thromb. Hemost.-1996.-Vol.22, N.6.-P.517-524.
213. Pons- Anieet D.M.F., Krebs B.F., Mira R. et al. Value of CA 15-3 in the follow up of breast cancer patients // Brit. J. Cancer.-1987.-Vol.55, N.5.-P.567-569.
214. Poupart P., Vandenabeelc P., Cauphas S. et al. B-cell growth modulating and differentiating activity of recombinant human 26-kd protein // EMBO J.-1987.-Vol.6, N.5.-P. 1219-1224.
215. Power M.J., Fottrell P.F. Osteocalcin: diagnostic methods and clinical applications // Crit. Rev. Clin. Lab. Sci.-1991.-Vol.28.-P.287-335.
216. Price C.P. Multiple forms of human serum alkaline phosphatase: detection and quantitation // Ann. Clin. В iochem.-1993.-Vol.30.-P.355-372.
217. Purohit A., Newman S.P., Reed M.J. The role of cytokines in regulating estrogen synthesis: implications for the etiology of breast cancer // Breast Cancer Res.-2002.-Vol.4.-P.65-69.
218. Reed M.J., Purohit A. Breast cancer and the role of cytokines in regulating estrogen synthesis: an emerging hypothesis // Endocrinol. Rev.-1997 .-Vol.18.-P.701-715.
219. Risteli L., Risteli J. Biochemical markers of bone metabolism // Ann. Med.-1993.-Vol.25.-P.3 85-393.
220. Roodman G.D., Kurihara N., Ohsaki Y. Et al. Interleukin 6 a potential autocrine/paracrine factor in Paget's disease of bone // J. Clin. Invest.-1992.-Vol.89.-P .46-52.
221. Rosaki S.B., Foo Y.A. Two new methods for separating and quantifying bone and liver alkaline phosphatase isoenzymens in plasma // Clin. Chem.-1984.-Vol.30.-P. 1182-1186.
222. Rusinko R., Yin J.J., Yee J., Saad Т., Mundy G.R., Guise T.A. Parathyroid hormone (PTH) excess is associated with increased interleukin-6 (IL-6) and soluble IL-6 receptor (sIL-6r) production // J. Bone Miner. Res.-1995.-Vol. 10.-P.500.
223. Salven P., Perhoniemi V., Tykka H., Maenpaa H., Joensuu H. Serum VEGF levels in women with a benign breast tumor or breast cancer // Breast Cancer Res. Treat.-1999.-Vol.53, N.2.-P.161-166.
224. Salven P., Manpaa H., Orpana A., Alitalo K., Joensuu H. Serum vascular endothelial growth factor is often elevated in disseminated cancer // Clin. Cancer Res.-1997.-Vol.3, N.5.-P.647-651.
225. Sanders M.E., Scrogging Т., Ampil F.L., Li B.D. Ускоренное частичное облучение при ранних стадиях рака молочной железы // J. Clin. Oncol, (русское издание).-2007.-Уо1.1, N.2.-P.133-140.
226. Sato Y. Transcription factor ETS-1 as a molecular target for angiogenesis inhibition // Hum. Cell.-1998.-Vol.11, N.4.-P.207-214.
227. Sawyer E.J., Hanby A.M., Poulsom R. et al. Beta-catenin abnormalities and associated insulin-like growth factor overexpression are important in phyllodes tumours and fibroadenomas of the breast // J. Pathol.-2003.-Vol.200.-P.627-632.
228. Scaramuzzi M., Amorotti C., De Palma M. et al. Clinical evaluation of CA 15-3 in the post-operative follow-up of breast cancer patients // Int. J. Biol. Markers.-1990.-Vol.5, N.1.-P.22-26.
229. Scott P.A., Smith К., Poulsom R. et al. Differential expression of vascular endothelial growth factor mRNA vs protein isoform expression in human breast cancer and relationship to eIF-4E // Br. J. Cancer.-1998.-Vol.77, N. 12.-P.2120-2128.
230. Silva E., Lurrida S. Breast cancer. A practical guide. Amsterdam-Lauzanne-New York-0xford.-2000.-p.70-271; P.370-372.
231. Skobe M., Hawighorst Т., Jackson D.G. et al. Induction of tumor lymphangiogenesis by VEGF-C promotes breast cancer metastasis // Nat. Med.-2001.-Vol.7, N.2.-P.192-198.
232. Speirs V., Atkin S.L. Production of VEGF and expression of the VEGF receptors Flt-1 and KDR in primary cultures of epithelial and stromal cells derived from breast tumours // Br. J. Canccr.-1999.-Vol.80, N.5-6.-P.898-903.
233. Stahl N., Yancopoulos G.D. The alphas, betas, and kinases of cytokine receptor complexes // Cell.-1993.-Vol.74.-P.587-590.
234. Stempfle H.U., Birner H., Ellinger M. et al. Free pyridinoline crosslinks predict early bone loss after heart transplantation // J. Bone Miner. Res.-1995.-Vol. 10, Suppl.-P.500.
235. Taga Т., Kawanishi Т., Hardy R.R., et al. Receptors for В-cell stimulatory factor 2 (BSF-2): Quantitation, specificity distribution and regulation of their expression // J. Exp. Med.-1987.-Vol.2.-P.967-981.
236. Tam I., Cardinale I., Lrueger J. et al. Interleukin-6 decreases cell-cell association and increaseases motility of ductal breast carcinoma cells // J. Exp. Med.- 1989.- Vol.l70.-P.1649-1669.
237. Theriault R.L., Hortobagyi G.N., Fritsche H.A. et al. The role of serum CEA as a prognostic indicator in stages II and III breast cancer patients treated with adjuvant chemotherapy // Cancer.-1989.-Vol.63, N.5.-P.828-835.
238. Toi M., Hoshina S., Takayanagi Т., Tominaga T. Association of vascular endothelial growth factor expression with tumor angiogenesis and with early relapse in primary breast cancer // Jpn. J. Cancer Res.-1994.-Vol.85, N. 10.-P. 1045-1049.
239. Toi M., Inada K., Hoshina S. et al. Vascular endothelial growth factor and platelet-derived endothelial cell growth factor are frequently coexpressed in highly vascularized human breast cancer // Clin. Cancer Res.-1995.-Vol.l, N.9.-P.961-964.
240. Toi M., Inada K., Suzuki H., Tominaga T. Tumor angiogenesis in breast cancer: its importance as a prognostic indicator and the association with vascular endothelial growth factor expression // Breast Cancer Res. Treat.-1995.-Vol.36, N.2.-P. 193-204.
241. Toi M., Kondo S., Suzuki H. et al. Quantitative analysis of vascular endothelial growth factor in primary breast cancer // Cancer.-1996.-Vol.77,N.6.-P.l 101-1106.
242. Toi M., Yamamoto Y., Taniguchi T. et al. Regulation of endothelial growth factor expressions in breast cancer // Gan To Kagaku Ryoho.-1996.-Vol.23 (Suppl. l).-P.75-79.
243. Tsigos C., Papanicolaou D.A., Defensor R., Mitsiadis C.S., Kyrou I., Chrousos G.P. Dose-effects of recombinant human interleukin-6 on pituitary hormone secretion and energy expenditure // Neuroendocrinology.-1997.-Vol.66.-P.54-62.
244. Valtola R., Salven P., Heikkila P. et al. VEGFR-3 and its ligand VEGF-C are associated with angiogenesis in breast cancer // Am. J. Pathol.-1999.-Vol.154, N.5.-P.1381-1390.
245. Van Straalen J.P., Sanders E., Prummel M.F., Sanders G.T.B. Bone-alkaline phosphatase as indicator of bone formation // Clin. Chim. Acta.-1991.-Vol.201. -P.27-34.
246. Vandenbunder В., Wernert N., Queva C., Desbiens X., Stehelin D. Does the transcription factor c-etsl take part in the regulation of angiogenesis and tumor invasion? // Folia Biol. (Praha).-1994.-Vol.40, N.5.-P.301-313.
247. Vankelecom H., Carmeliet P., Van Damme J., Billiau A., Denef C. Production of interleukin-6 by folliculo-stellate cells of the anterior pituitary gland in a histiotypic cell aggregate culture system // Neuroendocrinology.-1989.-Vol.49.-P. 102-106.
248. Vink A., Conlie P.C., Warnier G. et al. Mouse plasma cytoma growth in vivo: Enhoucement by interleukin-6 and inhibition by antibodies directed against interleukin-6 or its receptor // J. Exp. Med.-1998.-Vol.172.-P.997-1000.
249. Vizoso F., Allende M.T., Fuevo A. et al. CA 15-3 behaviour in cystic breast disease // Int. J. Biol. Markers.- 1989.-Vol.4, N.3.-P.181-182.
250. Wang G., Dong Z., Xu G. et al. The effect of antibody against vascular endothelial growth factor on tumor growth and metastasis // J. Cancer Res. Clin. Oncol.-1998.-Vol.124, N.11.-P.615-620.
251. Xie В., Tam N.N., Tsao S.W., Wong Y.C. Co-expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors (flk-1 and flt-1) in hormone-induced mammary cancer in the Noble rat // Br. J. Cancer.-1999.-Vol.81, N.8.-P. 1335-1343.
252. Yamamoto Y., Toi M., Kondo S. et al. Concentrations of vascular endothelial growth factor in the sera of normal controls and cancer patients // Clin. Cancer Res.-1996.-Vol.2, N.5.-P.821-826.
253. Yamasaki K., Taga Т., Hirata Y. et al. Cloning and expression of the human interleukin-6 (B2ЯFN beta 2) receptor // Science.-1998.-Vol.241 .-P.825-828.
254. Yang Y.C., Tsai S., Wong G.G., Clark S.C. Interleukin-1 regulation of hematopoietic growth factor production by human stromal fibroblasts // J. Cell Physiol.-1988.-Vol.l34.-P.292-296.
255. Yarden Y. Her 2 and VEGF: signaling mechanisms ana targets for anti-cancer therapies // In abstracts XXXIII meeting of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine (Rhodes, Greece, 24-28 September, 2005).-2005.-P.2.
256. Yasukavva K., Hirano Т., Watakabe Y. et al. Structure and expression of human B-cell stimulatory factor 2 (BSF - 2/ II 6) gene //EMBO J.-1987.-Vol.6, N. 10.-P.2939-2945.
257. Yoshiji H., Gomez D.E., Shibuya M., Thorgeirsson U.P. Expression of vascular endothelial growth factor, its receptor, and other angiogenic factors in human breast cancer // Cancer Res.-1996.-Vol.56, N.9.-P.2013-2016.
258. Zaninotto M., Secchiero S., Rubin D. et al. Serum bone alkaline phosphatase in the follow-up of skeletal metastases // Anticancer Res.-1995.-Vol.-15.-P.2223-2228.
259. Zebrowski B.K., Yano S., Liu W. et al. Vascular endothelial growth factor levels and induction of permeability in malignant pleural effusions // Clin. Cancer Res.-1999.-Vol.5, N.11.-P.3364-3368.
260. Zhang H.T., Craft P., Scott P.A. et al. Enhancement of tumor growth and vascular density by transfection of vascular endothelial cell growth factor into MCF-7 human breast carcinoma cells // J. Natl. Cancer Inst.-1995.-Vol.87, N.3.-P.213-219.
261. Zhao Т., Xia W.H., Zheng M.Q. et al. Surgical excision promotes tumor growth and metastasis by promoting expression of MMP-9 and VEGF in a breast cancer model // Exp. Oncol.-2008.-Vol.30, N.I.-P.60-64.
262. Zilberstein A., Ruggieri R., Korn J. N., Revel M.Structure and expression of cDNA and genes for human interferon-beta-2, a distinct species inducible by growth stimulatory cytokines // EMBO J.-1986.-Vol.5, N.10.-P.2529-2537.
263. Zito G.A., Callipari S., Capuano S. et al. CA 15-3 e cancro della mammela specita potenzia lita diagnostiche // Boll. Soc. Ital. boil. Sper.-1988.-Vol.64, N.7.-P.667-670.