Автореферат и диссертация по медицине (14.00.19) на тему:Клиническая оценка цитологического мониторинга с помощью проточной цитометрии при лучевой и химиотерапии больных раком яичников, шейки и тела матки

1 Ь ФЕВ 1997

На правах рукописи

БУТОРИНА

Ольга Дмитриевна

КЛИНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЦИТОЛОГИЧЕСКИ О МОНИТОРИНГА С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧИ .ОЙ ЦИТОМЕТРИИ ПРИ ЛУЧЕВОЙ И ХИМИОТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ, ШЕЙКИ И ТЕЛА

МАТКИ

Специальность: 14.00.19 -лучевая диапюстика,

лучевая терапия

14.00.14- онкология АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

г. Санкт-Петербург

1997 г.

Работа выполнена в Центральном научно-исследовательском рентгено-радиологическом институте Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

о

действительный член Ныо-Иорской Академии наук, доктор медицинских наук, профессор В.Л. ВИНОКУРОВ доктор медицинских наук, профессор A.C. ЯГУНОВ

Официальные оппоненты:

доктор медицинских науку, профессор В.П.БАСКАКОВ доктор медицинских наук Г.М.ЖАРИНОВ

Ведущая научная организация:

Научно-исследовательский институт онкологии им. проф. Н.Н.Петрова

Защита диссертации состоится " " '_ 1997 г.

в " часов на заседании Диссертационного совета (Д 074.23.01) в Центральном научно-исследовательском рентгено-радиологическом институте МЗ РФ (188646, г. С.-Петербург, п. Песочный-2, ул. Ленинградская, д. 70/4).

С-диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Ученый секретарь Диссертационного совета

Л.И. КОРЫТОВА

Актуальность темы. Рак яичников, шейки и тела матки в экономически развитых странах составляют 92-95% по отношению ко всем впервые выявленным больным .гинекологическим раком (Бохман Я.В. и соавт., 1989,1992; Винокуров В.Л. и соавт., 1992; Вишневская Е.Е. 1994; Cancer Incidence in Five Continents, Lyon, 1992).

В структуре онкогинекологическои заболеваемости первое место среди всех форм злокачественных опухолей женских половых органов занимает рак эндометрия, второе ранговое место - рак шейки матки и третье - рак яичников ( Мерабишвили В.М. и соавт., 1996; Cancer Incidence in Five Continents, Lyon,1992).

Показатели заболеваемости раком шейки матки имеют тенденцию к снижению, однако заболеваемость раком тела матки и яичников продолжает увеличиваться (Старинский В В. и соавт., 1994; Konski А. et а!., 1991 ;Henzikren R.,et al„ 1994 ).

Несмотря на определенные успехи в области диагностики и лечения гинекологического рака, отдаленные результаты остаются неудовлетворительными и по' показателям смертности рак яичников стоит на первом месте. По России одногодичная летальность больных раком шейки матки составила 20,2%, раком тела матки -15,1%, раком яичников - 36,1% (Мерабишвили В.М., 1996), т.е. смертность при раке яичников превышает аналогичные показатели при раке шейки и тела матки вместе взятые. Более благоприятные результаты лечения достигнуты при раке шейки матки и эндометрия, однако не менее 35-40% больных умирают в ближайшие годы после окончания лечения or прогрессйрования заболевания (Бохман Я.В. и соавт., 1989; Вишневская Е.Е., 1994 и др.).

Рост онкогинекологической заболеваемости и высокие показатели смертности диктуют необходимость дальнейшей оптимизации методов лечения, в частности, путем динамической

оценки эффективности терапии, ее коррекции в процессе проведения, а также благодаря усовершенствованию диагностики рецидивов заболевания, частота которых, например, при раке яичников,

достигает 70-80% (Нечаева И.Д., 1987; Винокуров В.Л., 1993; Erba Е. et al.,1989; Lotze W.. 1991).

Цитологический метод исследования, каким является проточная цитофлуориметрия, может быть использован для мониторинга при проведении лучевой и химиотерапии, коррекции программы лечения, раннего выявления рецидивов заболевания и оценки прогноза жизни больных.

По данным литературы известно, что проточная цитофлуориметрия является объективным, высокоскоростным, автоматизированным ' цитологическим методом, позволяющим осуществлять динамическое изучение количественного (до 10000 клеток в секунду) и качественного состава (ДНК, РНК) различных проб (выпоты, смывы, аспираты), содержащих опухолевые клетки. При этом оценивается относительное содержание ДНК в клетках и распределение клеток про фазам жизненного цикла. Содержание ДНК в клетках и интенсивность клеточной пролиферации являются важными параметрами, характеризующими потенцию

злокачественного роста и влияющими на "биологическое поведение" опухолевых клеток.

Однако, в настоящее время, встречаются лишь единичные сообщения, в основном в зарубежной литературе, касающиеся попыток клинического применения проточной цитофлуориметрии при гинекологических опухолях (Klenii P. et al.,1988; Britton L.C et al.,1990; Anton M., 1992; Grenman S.E. et al., 1994). До сих пор не определены возможности, роль и место проточной цитофлуориметрии при лечении больных гинекологическим раком, а также при диагностике рецидивов заболевания и оценки прогноза.

Целыо настоящей работы явилось повышение контроля за эффективностью лучевой и химиотерапии у больных раком яичников, шейки и тела матки на основе рационального применения метода проточной цитометрии.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие конкретные задачи:

1. Разработать методику получения, обработки и анализа клеточного материала (смывы, аспираты, выпоты) для проточной цитометрии у больных раком яичников, шейки и тела матки.

2. Провести сопоставление морфологических критериев и результатов проточной цитометрии с клиническим течением заболевания.

3. Оценить информативность данных проточной цитометрии для динамической оценки эффективности (мониторинга) проводимой лучевой и/или химиотерапии.

4. Определить возможности проточной цитометрии для .......

своевременной диагностики рецидивов заболевания.

5. Изучить роль проточной цитометрии в постановке прогноза у больных раком яичников.

Научная новизна. Используя возможности проточной цитофлуориметрии получены новые данные, позволяющие осуществлять динамическую оценку эффективности проводимой терапии (мониторинг) и ее коррекцию в случае неэффективности, своевременное выявление рецидивов заболевания, а также составление прогноза для онкогинекологических больных.

Практическая значимость. Представлены обоснованные практические рекомендации по рациональному использованию метода проточной цитофлуориметрии у больных раком яичников, шейки и тела матки в качестве цитологического мониторинга с целью повышения эффективности проводимой терапии. Разработаны также

рекомендации по использованию метода проточной цитофлуориметрии для своевременной диагностики рецидивов и оценки прогноза у больных раком яичников.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Анеуплоидия является надежным маркером опухолевой прогрессии у больных раком яичников, шейки и тела матки.

2. Критерии эффективности проводимой терапии - снижение пролиферативной активности и исчезновение анеуплоидных клеточных

популяций.

3. Плоидность является прогностическим фактором при раке яичников, влияющим на показатели выживаемости и средней продолжительности жизни.

Внедрение.

Результаты диссертационного исследования внедрены в практику клинической работы отделения радиохирургической гинекологии ЦНИРРИ МЗ РФ.

Апробация работы. Материалы диссертационного исследования докладывались и обсуждались на научной конференции, посвященной 75-летию основания института ( Санкт-Петербург, 1993 ), на научно-практической конференции молодых специалистов, посвященной 100-летию открытия лучей Рентгена (Санкт-Петербург, 1994), на Проблемной комиссии по клинической радиологии ЦНИРРИ МЗ РФ (24 декабря, 1996).

По материалам диссертации опубликовано 5 работ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и библиографического указателя. Работа изложена на страницах

машинописного текста, содержит И таблиц и 13 рисунков.

Библиографический указатель включает 140 источников, в том числе 29 отечественных и 111 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования.

Основными материалами для проспективного исследования послужили клшшко-морфологические данные и результаты прослеживания' 102 больных гинекологическим раком, находившихся на обследовании и лечении в клинике ЦНИРРИ МЗ РФ за период с 1989 по 1995 годы. У 60 больных диагностированы злокачественные опухоли яичников, у 24 - рак шейки матки и у 18 больных - рак эндометрия.

Среди больных раком яичников 54 женщины были госпитализированы с впервые установленным диагнозом, а 6 - с. рецидивом заболевания. Подавляющее большинство больных злокачественными опухолями яичников (95,0%) имели III ,и IV стадию заболевания; преобладающим гистологческим типом опухолей (90,0%) была серозная цистаденокарцинома яичников.

Большинство прослеженных больных раком яичников(75,0%) получали комбинированное лечение, включающее хирургическое вмешательство, системную лучевую терапию в виде субтотального облучения и химиотерапию. Субтотальное облучение проводилось, на аппаратах Рокус-М и ЛУЭ-15 МэВ в двух дозно-временных режимах с суммарной дозой 1 Гр и 9 Гр (по 0,1 Гр два раза п неделю и по 3 Гр через день соответственно). Поглощенные дозы рассчитывали на срединную плоскость тела. В связи с обширным распространением опухолевого процесса у 11 больных (18,3%) лечение было ограничено только химиотерапией. Химиотерапию проводили с использованием в основном следующих препаратов: тиофосфамид, 5-фторурацил, метотрексат, циклофосфан, платидиам, фарморубицин, винбластин, диоксадэт в качестве моно- или

полихимиотерапии (CAP, CMF, CMV) в стандартных режимах и дозировках.

Больные раком шейки матки имели преимущественно II и III стадию заболевания. По гистологическому типу опухолей больные распределялись следующим образом: у 22 (91,7%) был! выявлен плоскоклеточный рак, у 2 (8,3%) - аденокарцинома. В качестве стандартного лечения все прослеженные больные получали сочетанную лучевую терапию. Внутриполостное облучение гцгаводилось на аппаратах АГАТ-В и АГАТ-ВУ, при этом разовые дозы в точке А составляли 7 Гр, суммарные очаговые дозы в точке А колебались от 42 до 56 Гр, ритм облучения- один раз в неделю. Дистанционная гамма-терапия проводилась на аппаратах Рокус-М и ЛУЭ-15 МэВ в статическом режиме с двух противолежащих полей, разовые дозы в точках В составляли 2 Гр, ритм облучения - 4 раза в неделю, суммарные очаговые дозы в точках В колебались от 40 до 44 Гр.

Больные раком андометрия в 77,8% наблюдений имели I и II стадию заболевания; у всех 18 больных диагностирована аденокарцинома.

Больные раком тела матки получали комбинированное лечение или (при наличии противопоказаний к операции) сочетанную лучевую терапию с использоваением стандартных методик. Комбинированное лечение включало в себя: предоперационное внутриполостное облучение на аппаратах АГАТ-В и АГАТ-ВУ с разовой очаговой дозой 10 Гр в опорной точке, суммарная доза 30 Гр, ритм облучения - один раз в неделю; расширенную экстирпацию матки с придатками и послеоперационную лучевую терапию выполняли по показаниям.

Больным, не подлежавшим комбинированному лечению, проводили сочетанную лучевую терапию. Внутриполостное облучение

на аппаратах АГАТ-В и АГАТ-ВУ; доза в опорной точке составляла 5 Гр, ритм облучения - два раза в неделю, суммарная поглощенная доза в точках учета составляла 50-60 Гр; дистанционную гамма-терапию проводили на аппаратах Рокус-М в статическом режиме с двух встречных противолежащих полей и ЛУЭ-15 МэВ с помощью полей сложной пространственной конфигурации, при этом разовая доза в точках В составляла 2 Гр, суммарная доза в точках В - 40-50 Гр. При эндовагинальном облучении вдоль оси влагалища, суммарная доза на поверхность слизистой влагалища составила 25-30 Гр.

С помощью метода проточной цитофлуориметрии исследовали опухолевые клетки, содержащиеся в асцитической и плевральной жидкостях, выпотах из дугласова пространства у больных раком яичников, смывах с шейки матки у больных раком шейки матки и в аспиратах из полости матки у больных раком эндометрия. Для оценки эффективности проводимой терапии взятие материала осуществлялось до начала лечения, в процессе проведения и после его окончания. Всего было исследовано 285 проб. Исследуемые клетки приготавливали в виде взвеси в количестве 10 мкл. Полученный клеточный материал центрифугировали, фиксировали в 1 мл 25% этанола на физиологическом растворе, содержащем 2 мкг ДНК-специфичного красителя Н-33258 (Hoechst), который флуоресцирует в области 480 нм при возбуждении светом с длиной волны 350-365 нм. Анализ выполняли на цитофлуориметре, разработанном в лаборатории "Отдаленной лучевой патологии" ЦНИРРИ МЗ РФ (Ягунов A.C.,1973), позволяющем регистрировать до 1500 клеток в секунду.

Результаты измерения анализировали с помощью разработанной компьютерной программы и были представлены в виде гистограмм распределения ДНК по фазам клеточного цикла.

Статистическую обработку полученных результатов проводили общепринятыми методами вариационной статистики. Достоверность различия основных показателей определяли с помощью критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение Проведенное исследование позволило установить, что при III стадии заболевания у 28 из 35 больных раком яичников (80,0%) количество ДНК в клетках представляло типичное распределение, характерное для быстрорастущих популяций с содержанием клеток в фазе G0+I - 90-95%, в фазе S- 2-5% и в фазе G2+M - 3-7% (рис. 1).

Рис. 1. Распределение клеток в асцитической жидкости по

содержанию ДНК у больных раком яичников III стадии. По оси абсцисс - содержание ДНК в клетках (отн.ед.) По оси ординат - число клеток

При IV стадии заболевания (22 наблюдения) отмечалось повышение пролиферативной активности, при этом процентное содержание клеток в фазе S + Gj + М составляло 9-25%, у 3 больных (5,0%) оно достигало 44-51%, что коррелировало со степенью распространенности опухолевого процесса (рис. 2).

А

Б

2

1

Л.

лоо

Рис. 2. Распределение клеток по содержанию ДНК в

асцитичсской жидкости у больных раком яичников. А - III стадия; Б - IV стадия

По п( и абсцисс - содержание ДНК в клетках (отн.ед.) По оси ординат - число клеток

У всех больных I и , II.. стадии отмечалась низкая пролиферативная активность, при этом процентное содержание клеток в (разах Б + С2 + М составляло не более 4-5% (рис. 3).

Другим неблагоприятным признаком, подтверждающим запущенность заболевания, явилась анеуплоидия, отмеченная у 24 больных (41,0%), выражающаяся в появлении второго пролиферирующего клона в популяции и полиплоидии (рис.4, 5). Анеуплоидия при раке яичников была выявлена; только у больных III и IV стадии заболевания, причем у больных IV стадии она наблюдалась в два раза чаще.

N

2 1

т ш

Рис, 3. Распределение клеток по содержанию ДНК в асцитической жидкости у больных I и II стадии По оси абсцисс - содержание ДНК в клетках (отн.ед.) По оси ординат - число клеток

Н

ХЮ1*

По оси абсцисс - содержание ДНК в клетках (отн.ед.) По оси ординат - число клеток

■100 2<Ю >00

Рис. 5. Полиплоидия у больных раком яичников

По оси абсцисс - содержание ДНК в клетках (отн.ед.) По оси ординат - число клеток

Таблица 1

Распределение опухолевых клеток по содержанию ДНК в асцитической жидкости у больных раком яичников

Число Доля клеток в фазах цикла (%)

Тип распределения наблю-

дений С.+1 э+йг+м сЖ

Диплоидный 30 94,9+0,5 5,1±0,5 -

Анеуплоидный 24 65,4+6,2 23,0+6,8 11,6+3,7

Таким образом, при анеуплоидном распределении процентное содержание клеток в фазах Б + С 2 + М в 4,5 раза выше, чем при диплоидном распределении (р < 0,05), т.е. анеуплоидные опухоли отличаются более высокой пролиферативной активностью и агрессивным ростом.

При анализе клеточности было установлено, что данный показатель варьировал в широком диапазоне от 10000 клеток в 1 мл до 300000 и не коррелировал со степенью распространенности опухолевого процесса.

При сравнении содержания ДНК в клетках первичных больных и с рецидивами заболевания у последних наблюдалось увеличение клеточности и усиление пролиферативной активности, при этом доля клеток в фазе С0 + I снижалась до 45-55 %, а в фазе Б + С2+ М повышалась до 25-30% и отмечалось также появление анеуплоидных клеточных популяций (табл.2).

Таблица 2

Распределение опухолевых клеток в асцитнческой жидкости по содержанию ДНК у первичных больных раком яичников и при

рецидивах заболевания

Группа Число Доля клеток в фазах цикла (%)

больных наблюд

ений сп+1 Б+Сг+М Сп+1 ' Р

Первичные 28 92,2±2,2 7,8+2,2 - -

С рециди- 16* 44,7+9,8. 22,7+6,6 29,6+7,8 3,0+0,5

вом

*В группу больных с рецидивом включены дополнительно 10 больных, у которых прогрессироваиие заболевания возникло на фоне проводимого лечения.

Таким образом, указанные изменения по данным проточной цитометрии свидетельствовали о прогрессировании опухолевого процесса. Следует отметить, что изменения характерные для рецидива заболевания по результатам проточной цитофлуориметрии могли наблюдаться и у больных, находящихся в клинической ремиссии при контрольном взятии смывов из дугласова пространства. Важно подчеркнуть, что указанные изменения выявлялись за 1,5-2 месяца до клинических проявлений рецидива, что свидетельствовало о наличии субклинического рецидива

заболевания и позволило своевременно назначить противорецидивное лечение.

При исследовании смывов у больных раком шейки матки с помощью проточной цитофлуориметрии было установлено, что у 22 из 24 больных (91,7%) отмечалось анеуплоидное содержание ДНК в клетках опухоли, за счет появления полиплоидной клеточной популяции. При этом процентное содержание клеток в фазе G0 + I колебалось от 55 до 65%, в (разе S от 5 до 8%, в фазе G2 + М от 7 до 12%. В среднем суммарно доля клеток в фазах S+ G2 + М составила 13-17%. Количество полиплоидов варьировало от 1,8% до 10,7% и в среднем составило 5,2%.

В 12,5% наблюдений полиплоидия сочеталась с появлением второго пролиферирующего клона клеток в популяции. Следует отметить, что полиплоидия была характерна для всех стадий заболевания, а анеуплоидия в виде второго пролиферирующего клона клеток чаще встречалась при III и IV стадии. При этом доля анеуплоидной клеточной субпопуляции составила 3,2-6, 3%. Диплоидный тип распределения наблюдался только у 2 из 24 больных (8,3%).

При исследовании асииратов у больных раком тела матки методом проточной цитофлуориметрии было установлено, что у 15 больных (83,3%) опухоли были анеуплоидными и только у 3 (16,7%) - диплоидными. Процентное содержание клеток в фазе G0 + I при анеуплоидном типе распределения составило 55-60%, в фазе S+G2+M 6-12%, в фазе G0+I - 24-30%.

При диплоидном типе распределения доля клеток в фазе G0+ I составила 80-85%, в фазе S+G2+M - 4-5%, с содержанием ДНК < 2 С - 15%.

Для больных раком шейки и тела матки по данным проточной цитофлуориметрии были характерны высокие показатели

клеточности ( 8 ' 105 - 1 " 106 ), которые также не коррелировали со степенью распространенности опухолевого процесса, а также увеличение количества клеток с содержанием ДНК < 2 с (25%-40%), что свидетельствовало о появлении большого числа разрушенных клеток.

При раке яичников, шейки и тела матки по данным проточной цитофлуориметрии было отмечено, что с увеличением клинической стадии заболевания чаще выявляется анеуплоидия и наблюдается усиление пролиферативной активности.

Для всех изученных локализаций опухолей не былс установлено корреляции между плоидностыо и гистологическим типом опухоли, а также между фракцией клеток в Б фазе V. гистологическим типом опухоли.

Об адекватности проводимой лучевой или химиотерапия свидетельствовали такие факторы как уменьшение клеточности с пробе и уменьшение доли клеток в фазах Б+С2+М, что указывало на снижение пролиферативной активности, а также исчезновение анеуплоидных клеточных популяций ( рис. 6, 7 ). В ряде случаев ( 12,7% ) снижение клеточности не всегда свидетельствовало с положительном эффекте терапии, , . поскольку снижения пролиферативной активности в популяции при этом может и не наблюдаться.

Иллюстрацией неэффективности проведенной терапии, пс данным проточной цитофлуориметрии, явилось повышение пролиферативной активности, т.е. увеличение доли клеток в фазах 5 . + С>2 + М, а также появление новых анеуплоидных клеточных популяций или прогрессирование уже имеющихся.

У 5 из 60 больных раком яичников (8,3%) на фоне снижения пролиферативной активности наблюдалось появление полиплоидии, а у 3 (5,0%) исчезновение полиплоидии сочеталось с повышением

Рис. 6. Распределение клеток по содержанию ДНК в асцитической жидкости у больных раком яичников. А - до лечения; Б - после лечения.

Рис. 7. Распределение клеток по содержанию ДНК в асцитической жидкости у больных раком яичников. А - до лечения; Б - после лечения

пролиферативной активности; то и другое также являлось признаком неэффективности терапии.

У 15 из 102 больных (14,7% ) до начала лечения можно было наблюдать два и даже три опухолевых клона в популяции. После

Г ^

проведения лечения регрессировал лишь один из них, тогда как остальные продолжали прогрессировать, что требовало изменения тактики ведения больной!

Как показали результаты исследования, изменение клеточности не может служить критерием эффективности терапии.

Следует отметить, что при раке яичников в случае эффективности терапии наблюдалось увеличение доли клеток в фазе С0 + 1 . а при раке шейки и тела матки - увеличение количества клеток с содержанием ДНК < 2 с. Важно подчеркнуть, что данные изменения, свидетельствующие об эффективности или неэффективности проводимой терапии, появлялись за 30-45 дней до возникновения соответствующих клинических признаков.

В случае неэффективности терапии проводилась коррекция программы лечения: у 7 больных раком яичников - замена схемы химиотерапии, а у И больных раком шейки и тела матки -дополнительно проведение регионарной внутриартериальной химиотерапии.

Для оценки прогноза больных раком яичников сопоставлялись данные проточной цитофлуориметрии (плоидность, клеточность, количество клеток в фазах С0+1, Б, С2+М) с продолжительностью жизни больных. Для определения прогностической значимости результатов . проточной цитофлуориметрии использовали статистическую компьютерную программу "М^говШ", на основе которой был проведен корреляционный анализ, результаты которого представлены в таблице 3.

Таблица 3

Данные проточной цитофлуориметрии и продолжительность жизни

больных CORRELATION MATRIX

Header DATE for: A:UBY LABEL: Cancer Ovarium Number of Case: 23 Number of Variables: 8

Days N Cellss C0+ Cl S C2+M (G0+ C1) S c2+ M

Days 1.0000

N cells -.3724 1.0000

CulCj .3851 -.3693 1.0000

S -.3118 .3692 -.3878 1.0000

с2+м -.1087 .2260 -.6674 .0991 1.0000

(C.+G,)' -.3732 .7518 -.5469 .1374 .1072 1.0000

(S) -.1885 -.1086 -.4748 -.1249 .6510 .0336 1.0000

(c'?+M) .3768 -.6460 .1029 .8407 .2155 .3823 1.0000

G+S+G?. -.3954

Critical Value (1-Tail. .05) = +Or - . 35214 Critical Value (2-TaiI, .05)= +/- .41228

Таким образом, на основании представленных данных, наибольшей прогностической ценностью из показателей, полученных с помощью проточной цитофлуориметрии, обладает плоидность (С+Б+С2). При возникновении в популяции анеуплоидных клеточных субпопуляций значительно уменьшается

продолжительность жизни. На основании этого признака больные раком яичников в процессе проспективного исследования были разделены на две группы: 28 наблюдений с диплоидными опухолями и 24 - с анеуплоидными опухолями.

Оценку отдаленных результатов лечения проводили по критериям продолжительности жизни и выживаемости больных. Показатели двухлетней выживаемости больных определяли в соответствии с рекомендациями ВОЗ (1979 г.). По указанным выше критериям две группы больных были сопоставлены между собой.

Средняя продолжительность жизни больных с анеуплоидными опухолями составила 11,8+2,1 мес. а с диплоидными опухолями-20,8 + 2,7 мес. т.е. увеличилась в 1,8 раза (р< 0,05). Указанные группы больных были прослежены в течение полных двух лет (табл.4).

Таблица 4

Выживаемость больных раком яичников с учетом плоидности

опухоли

Группы больных Выживаемость , (% + т).

0-5 мес : 6-11 мес 12-17 мес 18-24мес

С диплоидными опухолями (п=28) 92,9+4,9 78,6+7,9 50,0+9,6 35,7+9,2

С анеуплоидными опухолями (п=24) 71,0±9,5 37,6+10.1 21.0+8,5 16,8+7,8

Приведенные данные позволяют заключить, что показатели

2- летней выживаемости больных с диплоидными опухолями в 2,1 раза выше, по сравнению с выживаемостью больных, имеющих анеуплоидные опухоли (р<0,05). Следует отметить, что показатели выживаемости больных с диплоидными опухолями выше во всех указанных временных интервалах .

Таким образом, надежным фактором прогноза, по нашим данным, является только плоидность. Количество клеток в Э фазе (показатель скорости пролиферации) не может считаться прогностическим признаком. Анеуплоидия является неблагоприятным

фактором прогноза, так как сопровождается снижением показателей выживаемости в 2,1 раза. Следовательно, при планировании лечения прежде всего необходимо учитывать плоидность опухоли. Как показал наш опыт, больным с анеуплоидными опухолями показана более агрессивная терапия.

ВЫВОДЫ

1. Проточная цитофлуориметрия является высокоинформативным, безопасным, скоростным, автоматизированным цитологическим методом, который может быть использован многократно в качестве мониторинга в процессе лечения больных раком яичников, шейки и тела матки.

2. Анеуплоидия и высокая пролифератинная активность являются достоверными маркерами опухолевой прогрессии при раке яичников, шейки тела матки.

3. Анеуплоидные опухоли отличаются более высокой пролиферативной активностью и агрессивным опухолевым ростом, так процентное содержание клеток в фазах Б+С2+М при анеуплоидных опухолях составило 23,0%, при диплоидных - 5,1%.

4. Не отмечается корреляция между плоидностью, содержанием клеток в Б-фазе и гистологическим типом опухоли при раке яичников, шейки и тела матки.

5. Рациональное применение цитофлуоримегрии позволяет диагностировать субклинические рецидивы рака яичников и своевременно назначать адекватное лечение.

6. Критериями эффективности проводимой терапии являются исчезновение анеуплоидных клеточных популяций и снижение пролиферативной активности.

7. Плоидность можно рассматривать как объективный прогностический фактор, влияющий на показатели выживаемости и средней продолжительности жизни больных раком яичников. Так,

средняя продолжительность жизни при диплоидных опухолях составила 20,8 мес., а при анеуплоидных - 11,8 мес. (р < 0,05), двухлетняя выживаемость - соответственно 37,5% и 16,8% ( Р< 0,05).

ФОРМА ВНЕДРЕНИЯ

( Практические рекомендации)

1. Метод проточной цитофлуориметрии целесообразно применять для объективной оценки эффективности проводимой д-ерапии у больных раком яичников, шейки и тела матки с целью коррекции программы лечения.

2. Рекомендуется применение проточной цитофлуориметрии для своевременного выявления субклинических рецидивов рака яичника.

3 Метод проточной цитофлуориметрии успешно может быть использован для оценки прогноза заболевания у больных раком яичников.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Исследование клеток рака яичников методом проточной цитофлуориметрии.//В сб. "Восстановительные и компенсаторные процессы при лучевых поражениях".-Теэ.докл. Всесоюзн.научи.конф.-СПб .-1992, С.195-196. (в соавт. с В.Л.Винокуровым, А.С.Ягуновым, С.В.Токаловым, А.Е.Юрковой, Н.Ю.Некласовой).

2. Метод ' проточной цитофлуориметрии в контроле за эффективностью лечения больных раком яичников. //В сб. "Современные достижения медицинской радиологии".-Тенз.докл.научн.конф. посвящ. 75-летию, основания института.- СПб .-1993.С.109-111 (в соавт. с В.Л.Винокуровым, А.С.Ягуновым, С.В.Токаловым, Л.Е. Юрковой).

3. Применение ДНК-цитометрии с целью повышения эффективности лечения больных раком яичников. //В сб. "Новые медицинские технологии в области лучевой диагностики, лучевой терапии

и интервенционной радиологии".- Теэ.докл. научн.конф. молодых специалистов, посвящ. 100-летию открытия лучей Рентгена. СПб .1994, С.89-90.

4. Проточная цитомстрия в диагностике, оценке эффективности лучевой терапии и комбинированного лечения рака яичников и матки. //В сб. "Скрининг и новые подходы к лечению начального гинекологического рака".-Матер.Росс.симп. с международным участием. СПб.-1994.- С.30 (в соаит. с В.Л.Винокуровым, А.С.Ягуновым, Л.Е.Юрковой, C.B. Гокаловым, Л.М.Джумаевой).

5. Применение ДНК.-цитометрии для оценки прогноза и в качестве цитологического мониторинга при лечении больных раком яичников. //В сб. 'Новые технологии в радиационной медицине".-Тез.докл. научн.конф., посвящ. 100-летию открытия лучей Рентгена. СПб.-1995.- С. 107-109 (в соавт. с В.Л.Винокуровым, Л.Е.Юрковой, А.С.Ягуновым, С.В.Токаловым).