Автореферат и диссертация по медицине (14.03.11) на тему:Клиническая эффективность восстановительного лечения при использовании клеточных технологий (клинико-экспериментальное исследование)

На правах рукописи

ИВАНОВ Денис Викторович

КЛИНИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВОССТАНОВИТЕЛЬНОГО ЛЕЧЕНИЯ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ КЛЕТОЧНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ

14.03.11 - Восстановительная медицина, спортивная медицина, лечебная физкультура, курортология и физиотерапия (медицинские науки)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

2 8 АПР 2011

Москва-2011

4844667

Работа выполнена в медицинском институте Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Тульский государственный университет».

Научный консультант:

доктор медицинских наук,

профессор Хадарцев Александр Агубечировнч

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Репин Вадим Сергеевич

доктор медицинских наук Олейникова Марина Михайловна

доктор медицинских наук,

профессор Цогоев Алан Сергеевич

Ведущая организация: I Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова.

Защита диссертации состоится « 25 » мая 2011 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 208.001.02 при ФГУ «Всероссийский научно-исследовательский и испытательный институт медицинской техники» по адресу: 129301, г. Москва, ул. Касаткина, д. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ФГУ «Всероссийский научно-исследовательский и испытательный институт медицинской техники» по адресу: 129301, г. Москва, ул. Касаткина, 3.

Автореферат разослан « »

2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Т.Н. Цыганова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Разработка новейших корригирующих технологий, направленных на сохранение и восстановление функциональных резервов организма человека, восстановление его оптимальной работоспособности является основной стратегией современной восстановительной медицины (Разумов А.Н., 2003; Косорлукова Т.В., 2005). В последние десятилетие активно разрабатывается возможность применения клеточных технологий в клинической медицине. На них возлагаются большие оптимистические надежды в лечении социально-значимых заболеваний. Взлет научного интереса к данной теме стал возможен после получения эмбриональных стволовых клеток в 1998 году (Thomson J.А., 1998).

В научных исследованиях активно разрабатываются все типы и виды клеток (Репин B.C., 2007; Бокерия JI.A., 2009). На лабораторных животных исследованы эффекты после применения клеток в коррекции повреждений внутренних органов, таких как печень (Киясов А.П., 2008; Ярыгин К.Н., 2008), поджелудочная железа (Noguchi Н., 2007), сердце (Кругляков П.В., 2008), сосуды (Потапов И.В., 2007), а также поражение спинного (Сухих Г.Т., 2007) и головного мозга (Цыб А.Ф., 2006).

Для оценки эффективности лечения и темпов восстановления пациентов используется интегральный показатель - качество жизни, который оценивается с помощью стандартизированных опросников (Новик A.A., 2007). Однако не достаточно изучено изменение качества жизни после применения клеточных технологий.

Почти не изучены сроки возникновения изменений в организмах пациентов после применения различных видов клеток. Также не проводилось сравнения между эффективностью и выраженностью клинических эффектов при применении аутологичных и аллогенных типов клеток у пациентов с одной нозологией.

До настоящего времени не определены возможности применения клеточных технологий у спортсменов. Учитывая подготовку к Олимпийским играм 2014 года, это становится чрезвычайно актуальным. Не

изучено влияние клеточных технологий на устойчивость спортсменов и лиц экстремальных профессий к интенсивным нагрузкам.

В литературе имеются единичные сообщения о применении клеточных технологий в восстановительной медицине и возможности оценки результатов применения, таким образом в рамках данной работы нам представлялось актуальным определение роли и места клеточных технологий в комплексе лечебно-восстановительных мероприятий социально-значимых заболеваний.

и связи с изложенным, целью настоящего исследования явилась системная программа по экспериментальной разработке, теоретическому обоснованию и оценке результатов клинического использования клеточных технологий в восстановительной медицине. В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи исследования:

1. Изучить морфофункциональные особенности восстановления, обусловленные клеточными технологиями, на модели хронического повреждения миокарда.

2. Разработать и оценить эффективность принципиально новых технологий, направленных на улучшение качества жизни у различных групп пациентов с социально-значимыми заболеваниями.

3. Выяснить различия в клинических эффектах и сроках их появления после применения различных видов клеток у пациентов.

4. Выявить изменения центральной и периферической гемодинамики у пациентов во время проведения процедур с использованием клеточных технологий.

5. Разработать показания к применению и унифицированный алгоритм проведения процедур с использованием клеточных технологий

6. Изучить системные эффекты у различных групп пациентов после применения клеточных технологий.

7. Выявить изменения в биохимических показателях у различных групп пациентов и спортсменов после использования клеточных технологий.

8. Оценить изменения качества жизни и продолжительность изменений у различных групп пациентов.

Научная новизна. Впервые на основании исследований осуществлено теоретическое обоснование необходимости использования клеточных технологий в восстановительной медицине, позволяющее эффективно корректировать социально-значимые заболевания.

Впервые установлены системные эффекты использования клеточных технологий у больных с различной патологией и доказан более выраженный эффект после применения фетальных клеток по сравнению с аутологичными клетками.

Впервые разработан унифицированный алгоритм проведения манипуляций при осуществлении клеточной коррекции морфофункцио-нальных соотношений.

Впервые показана эффективность применения клеточных технологий при гиперхолестеринемии, что приводит к снижению потребления препаратов статинового ряда на 30-50%.

Впервые проведена оценка качества жизни пациентов с различными заболеваниями (печени, сердечно-сосудистой системы, сахарного диабета) после использования клеточных технологий.

Впервые на основе системного анализа и системного синтеза разработаны оптимальные сроки для применения клеточных технологий не только у пациентов с хроническими заболеваниями, но и у спортсменов. Установлены сроки оптимального применения клеточных технологий у спортсменов при подготовке к спортивным соревнованиям, что позволяет скорректировать физиологические процессы.

Научно-практическая значимость. Теоретическое обоснование применения различных видов клеток как у относительно здоровых людей, так и у пациентов с заболеваниями печени, сердечно-сосудистой и эндокринной систем, позволило объяснить положительные результаты клинического применения клеточных технологий. Полученные результаты применимы для дальнейших научных исследований в биологии и медицине.

Выявленные изменения во время проведения манипуляций по вве-дегаш клеток позволили разработать алгоритм проведения лечения с ис-

пользованием клеточных технологий в условиях амбулаторного режима или стационара одного дня.

Выявленные математические изменения, полученные при использовании стандартизированных опросников, позволили разработать наиболее эффективную схему применения клеточных технологий у пациентов с заболеваниями сердечно-сосудистой системы.

Полученные результаты воздействия аутологичных и аллогенных клеток могут использоваться при разработке способов предупреждения возрастных изменений, а также как профилактическое средство б восстановительной и реабилитационной медицине.

Выявленные эффекты применения клеточных технологий у высококвалифицированных спортсменов позволяют разработать оптимальные схемы их применения для подготовительного цикла перед соревнованиями и восстановительных периодов после соревновательного сезона.

Изучение клинических эффектов после применения клеточных технологий открывает возможности экономически оправданного, простого в исполнении способа коррекции различных по степени тяжести тех или иных заболеваний.

Установленная результативность применения аутологичных и аллогенных клеток позволяет использовать их в широкой врачебной практике.

Разработанные способы коррекции различных заболеваний сердечно-сосудистой, эндокринной систем, а также заболеваний печени могут внедряться в деятельность лечебно-профилактических учреждений различного уровня.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований используются в работе сотрудников МУЗ «Городская больница № 10 г. Тулы», ГУП ТО НИИ новых медицинских технологий (г. Тула), ФГУ 3 ЦВКГ им. А.А.Вишневского Министерства Обороны РФ, в педагогическом процессе на кафедрах внутренних болезней и медико-биологических дисциплин Тульского государственного университета, курсе лекций на кафедре Организации здравоохранения и общественного здоровья РМАПО (2005-2006 гг.).

Апробация материалов работы. Основные положения диссертации доложены на ученом совете ФГУ ВНИИФК (Москва, март 2005), научно-практических конференциях ФГУ 3 ЦВКГ им. А. Вишневского (Красногорск, 2006, 2007, 2008), Объединенном съезде кардиологов и кардиохирургов СФО с международным участием (Томск, май 2009), международной научной школе для молодежи «Клеточные исследования и технологии в современной биомедицине» (Тула, ноябрь 2009), IV Всероссийском симпозиуме с международным участием «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии» (Санкт-Петербург, апрель 2010), Российском конгрессе с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины - возможное и реальное», (Санкт-Петербург, июнь 2010), 9-ой международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (Бенидорм, октябрь 2010), V Национальный конгресс терапевтов (Москва, ноябрь 2010). Апробация работы состоялась на совместном заседании кафедры внутренних болезней и кафедры медико-биологических дисциплин медицинского института (Тула, 2011).

Публикации. По материалам исследований опубликовано 46 печатных работы, из них 1 монография, 1 патент на полезную модель, 27 статей, из которых 21 в рекомендованных ВАК журналах. По теме диссертации поданы заявки на изобретения: № 2010125762 от 24.06.2010 г. и№ 2009147929 от 24.12.2009 г.

Объем и структура диссертации. Диссертация имеет общепринятую структуру, состоит из введения; шести глав, в которых представлен обзор литературы, объект и методы исследования, результаты собственных исследований и их обсуждение; заключения; выводов; практических рекомендаций; списка литературы; приложения. Работа изложена на 258 страницах, иллюстрирована 33 таблицами и 13 рисунками. Список литературы представлен 344 источниками (96 отечественных и 248 зарубежных авторов).

Основные положения, выносимые на защиту: 1. Восстановительный эффект клеточных технологий наблюдается у пациентов с различными заболеваниями,

2. Аллогенные клетки (фетальные) клинически более эффективны, чем аутологичные.

3. Сроки применения клеточных технологий обоснованы благодаря математическому анализу.

4. Разработана схема оптимального применения клеточных технологий у высококвалифицированных спортсменов.

Работа выполнена в рамках реализации Государственного контракта №02.512.12.2058 от 22 мая 2009 года

ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Объект исследования

Всего в клинических исследованиях приняло участие 167 чел. Из них в основные группы вошло 134 чел. (80,2 %), в контрольные - 33 (19,8 %).

Лабораторные животные крысы линии 8рга£*ие-Ба\¥1еу в общем количестве 25 штук, вес 200-250 грамм, возраст 7-9 недель.

1.1. Клинические исследования

Изучение влияний клеточных технологий на больных с заболеваниями сердечно-сосудистой системы, включая дилятационные кардиомио-патии, ишемическуго болезнь сердца и осложнения ишемической болезни сердца, нарушения ритма, гаперхолестеринемию осуществлялось у 92 пациентов, из них - 80 мужчин (87%) и 12 женщин (13%). Основную группу составили 77 чел. (83,7%), контрольную - 15 (16,3%).

Изменения в течении болезни у больных с заболеваниями печени, включая вирусное поражение, цирротические изменения различной степени выраженности оценивались у 40 чел. Из них основную группу составили 32 (80%) контрольную - 8 (20%).

Группу пациентов с эндокринологическими заболеваниями составили пациенты с сахарным диабетом 1 типа. Основная группа 10 (66,7%) и контрольная группа 5 (33,3%) чел.

На группе спортсменов из 20 чел. изучалось влияние различных видов клеток. Основная группа составила 15 (75 %) чел., контрольная 5 (25 %).

1.2. Экспериментальные исследования

Экспериментальные исследования выполнялись на крысах породы SD. Использовали механическую модель создания инфаркта миокарда. Культуру клеток, меченная флуоресцентной меткой, вводилась интрамиокардиальпо с помощью катетера через 30 суток после моделирования инфаркта миокарда. У животных регистрировались изменения в ЭКГ, системном и левожслудочковом давлении, толерантность к физическим нагрузкам.

2. Методы исследования

2.1. Общеклинические методы

Общеклинические исследования включали: сбор анамнеза, результаты объективного обследования, применение лабораторных, инструментальных и функциональных методов диагностики.

2.2. Биохимические методы

Биохимические показатели измерялись на системе ARCHITECT ci8200 (Abbott, США) а также на анализаторе FP-901 фирмы «Labsystems» (Финляндия) с использованием реактивов фирмы «Boehringer Mannheim» (Германия) и стандартными наборами реактивов фирмы «Lahema» (Чехия). Кровь для исследований забиралась из локтевой вены в количестве не менее 10 мл. В плазме исследовали следующие биохимические показатели: общий анализ крови (гемоглобин, гематокрит, эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, эритроцитарные индексы); лейкоцитарная формула (дифференцированный подсчет лейкоцитов); СОЭ, АЧТВ (активированное частичное тромбопластиновое время); протромбин, MHO (INR); альбумин; общий белок; белковые фракции; креатинин; мочевина; мочевая кислота; глюкоза; холестерол общий (холестерин); холестерол-ЛПВП (холестерин липопротеинов высокой плотности); холестерол-ЛПНП (холестерин липопротеинов низкой плотности); билирубин общий; билирубин прямой; АлАТ (аланинаминотрансфераза); АсАТ (асиартатамино-трансфераза); гаммаглутамилтранспептидаза; холипэстераза; вирус гепатита В, определение ДНК (качественное) (HBV-DNA); вирус гепатита С,

определение РНК (качественное) (HCV-RNA); вирус гепатита D, определение РНК (HDV-RNA); С-пептид; альфа-фетопротеин; раково-эмбриональный антиген; ПСА общий (простатический специфический антиген общий); ПСА свободный (простатический специфический антиген свободный); Са 15-3 (углеводный антиген 15-3); Са-125 (углеводный антиген 125); Са 19-9 (углеводный антиген 19-9); антитела к инсз'лину; антитела к бета-клеткам поджелудочной железы.

2.3. Оценка клеточного материала

2.3.1. Биобезописносгпь Весь клеточный материал проверялся с помощью метода полиме-разной цепной реакции (ПЦР) на отсутствие следующих бактерий и вирусов: вирус герпеса 1 и 2 типа, цитомегаловирус, вирус Эпштейн-Барр, вирусы гепатита В, С, Д, хламидии, уреаплазма, микоплазма, токсоплазма, бледная трепонема.

2.3.2. Оценка жизнеспособности и количества клеток Производилась с помощью трипанового синего. В дальнейшем в микроскопе происходит подсчет клеток и определение жизнеспособности в камере Горяева.

На автоматическом счетчике клеток «Countess™» фирмы Invitro-gen (США) результаты получаются в виде визуальных и графических рисунков (рис. 1).

Ceil Size Graph

О If) 28 38 «J

Сей Sil« (Um)

»a «9

, » 8 О

9« ■ в

9 9 о 0 3 e

: % <*» в о t a 9 e

* * e

Рис. 1. Результат тестирования клеток 1 - живые клетки, 2 - нежизнеспособные. По вертикали количество, по горизонтали размер

2.3.3.Иммупофенотипирование Проводилась на проточном цитометре FACScan (Becton Dickinson, США) и результаты получались в виде 1рафических данных (рис. 2).

¡Aiauoyiuuo лос

Э1 D2

- 0.0% 0.6%

-г D3 . . И

20.1% , : 70.3% N \ _______

' "ГЪ, ' 1 "•"'I. ' \ i-,

сш-тс

Рис. 2. Графические данные иммунофенотипирования:

1 - клетки с фенотипом СВ45+; 2 - клетки с фенотипом СБ 14+

2.4. Специальные методы исследования

2.4.1. Инструменты оценки качества жизни Дизайн исследования был разработан с помощью сотрудников Научно-методического центра мониторинга качества жизни Минздрава России. Качество жизни больных исследовалось с помощью русскоязычных версий опросников: общий опросник оценки качества жизни - MOS SF-36 и общий опросник оценки качества жизни - EuroQol - EQ-5D.

2.4.2. Спсртивный комплекс упражнений Комплекс упражнений был разработан совместно с сотрудниками кафедры биохимии Российского Государственного Университета Физической Культуры, Спорта и Туризма и представлял собой специальный тест. Тест включал три упражнения (разгибание ног сидя для мужчин с постоянным весом для всех, сгибание ног лежа для женщин с постоянным весом для всех; подтягивание на перекладине с собственным весом, отжимание на брусьях без отягощений).

2.4.3. Исследования экспериментальных животных

Наблюдения и измерения в ходе исследования. Внешний вид, смертность. Наблюдение за животными для выявления отклонений в состоянии здоровья и смертности проводили ежедневно в первой половине дня.

Клинический осмотр каждого животного проводили еженедельно.

Масса тела. Животных взвешивали перед операцией моделирования инфаркта миокарда, перед трансплантацией клеток и перед эвтаназией. Масса тела, определенная после ночи голодания перед некропси-ей, использовалась для подсчета относительной массы органов.

Толерантность к физическим нагрузкам. Толерантность животных к физическим нагрузкам была изучена в тесте плавания перед трансплантацией клеток и перед выведением животных из эксперимента.

ЭКГ регистрировали с помощью системы мониторирования «HemoDynamics» v. 1.1. (ИБК РАН, Россия) при наложении электродов на правую переднюю лапу, на грудь и на правую заднюю лапу.

При некропсии исследовали внешнее состояние тела, внутренних поверхностей и проходов. При проведении некропсии фиксировали органы печень, сердце, легкие, селезенку.

2.5. Статистическая обработка

Обработка результатов проведенных исследований проведена с оценкой различий по методу Стьюденга (Excel 7.0), Статистический анализ проводился программой Statistica 6.0. Различия определяли при Р<0.05%. При расчетах использовали программу Biostat for Windows.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Предпосылки клинического применения клеточных технологий

Стволовые клетки (СК), полученные из костного мозга пациента, клинически используются в лечении гематологических заболеваний более 40 лет. В последние годы стали получать СК из крови пуповин-ного канатика.

СК обладают отличительными от других клеток свойствами - они недифференцированные, незрелые, способны к пролиферации, самообновлению, превращению в дифференцированные клетки и регенерирующие ткани, при делении - всегда дают себеподобную клетку. Имеются два основных вида клеток: эмбриональные и неэмбриопальные, к которым относятся, например фетальные клетки. Эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) являются плюрииотентными, потому что они могут дифференцироваться во все типы клеток. В отличие от ЭСК неэмбриопальные СК являются мультипотентными, так как их потенциал дифференцироваться в различные типы клеток ограничен. Различие между ЭСК и неэмбриональными клетками - также в превалировании и большем потенциале к спонтанной дифференцировке у ЭСК, чем у неэмбрионалъпых клеток.

ЭСК получают из внутренней клеточной массы бластоцисты, которая формируется на седьмой день после фертилизащш. Если на данной стадии бластоциста имплантируется в ткани матки, то внутренняя клеточная масса развивается в фетус с окружающим трофобластом, который превращается в плаценту. Первые линии человеческих ЭСК были получены из внутренней клеточной массы эмбриона в 1998 году (Thomson J.A. et al., 1998). С того времени было получено, как минимум 225 линий человеческих ЭСК. Линии ЭСК создаются с помощью размещения клеток на фидерных слоях из фибробластов. Фидерные слои помогают поддерживать ЭСК в недифференцированном состоянии. Теоретически линии человеческих ЭСК могут быть получены нефизиологическим способом, известным как терапевтическое клонирование, когда происходит перенос ядра из одной клетки в другую. Например, ядро донорской соматической клетки (клетки кожи) переносится в цитоплазму яйцеклетки без ядра. В дальнейшем, благодаря находящимся в данной гибридной яйцеклетки факторам, она дифференцируется в бластоцисту. Линии ЭСК, которые получают из внутренней клеточной массы данной бластоцисты, имеют такую же ядерную ДНК, как и донор. Зрелые клетки, полученные из этой линии, не должны отторгаться, если вводятся донору.

Неэмбриональные СК известны также как взрослые СК, потому что получают их из развитого организма, обычно костного мозга. Этот источник имеет два типа СК: гемопоэтические, которые дифференцируются в клетки крови и являются СЭ34+ (положительны) и мезенхималъные (стромальные) клетки, которые дифференцируются в клетки костной, хрящевой ткани и являются СБ34— (отрицательные). Другие источники получения неэмСриональных СК являются носовая полость, мышцы, печень, кожа, головной мозг, сетчатка и лимбус глаза, жировая ткань. Начались разработки плчучгчтоя эндомртрияттт,щ.тх СК. К неэмбриОИО.ЛЪИЬ'М СК также можно отнести клетки из менее зрелых источников, включая кровь пуповинного канатика при рождении, плаценту и фетальные соматические ткани, такие как печень и поджелудочная железа.

В связи с увеличивающимся интересом к клиническому применению СК, практикующим врачам необходимо знать при каких заболеваниях эти клетки применяются. Поэтому для целей клинической практики нами была разработана собственная классификация различных видов клеток, обусловленная возможностью их практического применения в клинике.

Вид клеток

1.По срокам развития:

a. Эмбриональные

b. Фетальные

c. Постнатальные

¡. Пуповинная кровь и. Клетки взрослого организма

2. По отношению к реципиенту

a. Собственные (аутологичные)

b. Донорские

1. Аллогенные (фетальные, пуповинной крови и др.) п. Ксеногенные

3. По фенотипу

a. Гемопоэтические

b. Мезенхимальные (стромальные)

c. Нейрональные

В своей работе мы опирались на данную классификацию, что позволило четко разбираться в тех видах клеток, которые применялись у пациентов.

2. Применение клеточных технологий

2.1. Заболевания печени

2.1.1. Клеточные технологии при вирусном поражении печени

Мы акцентировали свое внимание на применении клеточных технологий у больных вирусным гепатитом В и С, так как вирус гепатит А очень редко (менее 2 % случаев) переходит в хроническую форму и вызывает цирротические изменения в печени. Вирус гепатита Д как правило идет совместно с ХГБ. Встречаемость вируса гепатита Е в настоящее время крайне мала. Учитывая, что вирусы гепатита имеют внепеченочные источники локализации, мы не использовали у пациентов аутологичные клетки и применяли только аллогенные клетки. В качестве аллогенных клеток использовались фетальные клетки. Материалом для получения клеток служила фетальная печень 2-го триместра гестации. Весь клеточный материал проходил проверку для исключения вирусной, бактериологической и микологической контаминации. В дальнейшем клеточный материал криоконсервировался. Непосредственно перед введением клетки размораживали и проверяли жизнеспособность, которая составляла не менее 92 %. В исследование были включены пациенты, которые не могли пройти полностью курс ле-чегшя пегилировапными иптерферонами и прервали его из-за осложнений (депрессии, лейкопении, диспепсии, аритмии). В группе было 25 человек, из которых 5 человек (2 женщины и 3 мужчины) - контрольная группа и 20 человек, из которых 18 мужчин и 2 женщин - основная. Возраст в основной группе составил 43±5,6 лет. В анамнезе у каждого из основной группы было не менее 2 попыток проведения курса лечения пегилированными интерферонами.

Из 15 человек с ВГС - 10 пациентов было с подтипом ЗЬ, 5 пациентов с подтипом вируса 1а.

Клетки вводили системно после установки внутривенного катетера. Во время процедуры введения проводился постоянный мониторинг витальных функций. Осложнений во время введения и в периоде наблюдения не выявлено. Все процедуры пациенты перенесли без особенностей. Перед введением клетки реконсервировались и в асептических условиях подготавливались. Клетки вводились минимум за месяц до начала курса противовирусной терапии.

Результаты оценивали ежемесячно. Данные представлены в табл. 1 и 2.

Таблица 1

Динамика изменения лабораторных показателей у больных с

гепатитом С в основной группе

Сроки/ показатели РО Р1 Р2 РЗ Р4 Р5 Р6 Р7

АлАТ 123±23,5 12ШЗ,5 83±3,5 86,3±6,5 102*21,1 96,9*3,5 87,1*6,5 102,7*13,5

АсАТ 148±13,4 159*14,8 82±23,5 110*22,1 106±17,3 125,7*13,7 100±3,6 109*3,9

Эритроциты 4,5±0,5 4,2±0,4 4,2±1,1 4,5±0,9 4,1*0,3 4,1±0,1 4,2*0,3 4,5*0,1

Лейкоциты 4,1±0,4 4,5±0,5 5,9±3,5 3,2±0,2 5*1,3 2,9*0,2 3,9*0,3 3,8*0,5

Тромбоциты 170±22,6 173±23,7 147±22,2 152±16,6 126*19,3 120*11,5 115*9,9 121*7,5

МНО 1,2±0,1 1,3±23,5 1,2*23,5 1,4*23,5 1,5*23,5 1,5*23,5 1,4±23,5 1,4*0,1

Примечание'. Здесь и далее по тексту РО - до введения клеток; Р1 - начало противовирусной терапии через месяц после введения клеток; Р2 - 2 месяца; РЗ - 3 месяца; Р4 - 4 месяца; Р5 - 5 месяцев; Р6 - бмесяцев; Р7 - через месяц после завершения курса противовирусной терапии.

Таблица 2

Результаты исследования биоптатов у больных с гепатитом В

Сроки/группа РО Р1

Основная 12* 10,4*

Контрольная 11,5* 12*

Примечание: * - оценка результатов проводилась по методике Кпо(1е11, количество пациентов п = 7. РО - до введения клеток и начала терапии; Р1 - после завершения противовирусной терапии

Все пациенты смогли пройти курс противовирусной терапии. Отмены препаратов не понадобилось. Пациентами отмечено, что курс противовирусной терапии они перенесли намного лучше, чем попытки предыдущих курсов. У пациентов с ВГС ЗЬ после завершения курса противовирусной терапии в периферической крови при повторных измерениях не обнаруживался вирус, что позволило трактовать как излечившиеся.

У больных с ВГС генотип 1а положительного результата удалось достигнуть у 50 %. В ситуации с гепатитом В, который как правило проходам совместно с гепатитом Д излечения не достигнуто. Однако отмечено выраженное уменьшение синдрома цитолиза.

2.1.2. Клеточные технологии при невирусном поражении печени

Объектом исследования были пациенты с токсическим поражением печени вследствие злоупотребления алкоголем.

В данной группе исследовались 15 человек, из которых 12 - основная группа и 3 - контрольная группа (табл. 3). У всех обследуемых отмечалось хроническое поражение печени после длительного злоупотребления алкоголем (стаж не менее 3 лет). Возраст пациентов основной группы 51±5,5 года. Основное требование по включению в группу - прекращение употребления алкоголя. Противопоказаний дня проведения лечения с применением клеточных технологий не выявлено.

Все пациенты основной группы дали письменное согласие на проведение клеточных технологий. На биопсию печени дали согласие только 2 пациента (1 - контрольной и 1 - основной группы). Пациентам основной группы проводилось однократное введение аллогепных (фетальных) клеток в дозе 100 млн. Введение проводилось системное (внутривенное) под контролем основных витальных функций.

Все обследуемые основной и контрольной группы проходили стандартное обследование на контрольных точках: до введения (Р0) через 1 (Р1), 3(Рг) и 6(Р3) месяцев после введения клеток. Основные показатели, которые контролировались на контрольных точках -

АсАТ, АлАТ, ГГТП, ХЭ, билирубин, общий анализ крови, УЗИ печени (Ро и через 6 месяцев), опросники (БЕ-Зб, Е<3-5). Динамика изменений лабораторных показателей представлена в табл.6. Все пациенты получали стандартное лечение включающее элиминацию этиологического фактора, высокоэнергетическую диету с большим содержанием белка, эссенциальные фосфолипиды, витамины группы В. На препаратах, полученных при биопсии - гистологические изменения, соответствующие воспалению в отсутствие признаков цирротической трансформации.

Таблица 3

Динамика изменения лабораторных показателей у пациентов

основной и контрольной групп

Показатели/сроки РО Р1 Р2 РЗ

АсАТ Осн 59±3,5 56±1,8 52±3,2 54±0,7

Кон 53±2,4 56±2,5 52±3,1 61±0,2

АлАТ Осн 45±2,5 40±1,4 43±1,1 39±2,1

Кон 47±1,3 46±1,5 48±0,9 46±1,4

ГГТП Осн 85±1,5 60±4,8 54±3,6 45±2,3

Кон 74±2,7 68±1,3 59±3,4 90±0,2

ХЭ Осн 11500±2300 9500±460 10000±1500 6500±760

Кон 12900±1400 11500±1300 13500±280 10500±3243

Билирубин Осн 32,4±0,3 28,2±0,9 26,1±1,1 24,3±1,2

Кон 28,4±0,6 26,4±0,2 24,4±0,3 22,4±0,8

Эритроциты Осн 4,4±0,5 4,9±0,4 4,2±1,1 4,5±0,9

Кон 4,8±0,3 4,2±0,7 4,4±1,6 4,7±0,2

Гемоглобин Осн 126±13,4 146±5,7 142±7,3 151±4,6

Кон 130±5,2 132±4,6 134±3,8 132±4,3

Лейкоциты Осн 4,1±0,4 4,5±0,5 6,9±0,8 8,2±0,8

Кон 4,5±0,2 4,8±0,5 5,9±3,5 7,2±0,2

Примечание: Осн - основная группа; Кон - контрольная группа.

При оценке результатов по опроснику Е0-5О было установлено, что на начальной точке, до проведения терапии пациенты как контрольной, так и основной группы оценивали своё состояние на 60 условных единиц, то после проведения терапии в основной группе, где использовались фетальные клетки уже через месяц пациенты оценива-

ли своё состояние в районе 80 единиц, в то время как в контрольной группе данный показатель не превышал начальных значений - 60 единиц. В последующий период наблюдения в основной группе оценка качества жизни сохранялась в районе 80,3±5,4, в то время как в контрольной группе данный показатель находился на уровне 68,5±3,6.

При анализе лабораторных и инструментальных данных, а также контрольных осмотров и опросников мы выяснили, что не все пациенты прекратили потребление алкоголя. Наиболее четко это проявлялось в контрольной группе.

2.1.3. Гиперлипидемия и применение клеточных технологий

При применении клеточных технологий у пациентов с различными заболеваниями печени (чаще невирусного поражения), сердечнососудистыми заболеваниями и сахарными диабетом мы обратили внимание, что у пациентов с высоким содержанием в периферической крови ЛПНП, ЛПОНП, триглицеридов, холестерина, через определенное время происходили процессы стабилизации данных показателей. В результате в данную группу вошли 54 пациента, из которых женщин было 9 человек, соответственно 45 - мужчин. Средний возраст составил 54±1,5 лет.

Все пациенты подписали информированное согласие на применение клеточных технологий в лечении их болезней, 49 пациентам проводилось введение аллогенных (фетальных) клеток в дозе 100 млн. Введение проводилось системное (внутривенное) под контролем основных витальных функций, 5 пациентам внутривенно вводились аутологичные клетки. Получение аугологичных клеток производилось с помощью пункций костей таза и последующим! культуральными работами. Количество введенных аугологичных клеток было не менее 120 млн. Осложнений при заборе аугологичных клеток и после введения отмечено не было.

Тестирование пациентов проводилось через месяц после первичного введения клеток как аллогенных (фетальных), так и аугологичных. Данные изменений динамики липидного профиля крови представлены в табл. 4. Было отмечено, что у всех пациентов происходило

не только снижение уровня ЛПНП, холестерина, но и происходило повышение уровня ЛПВП. В среднем снижение ЛПНП, холестерина в течение первого месяца составляло около 6,5 %, повышение ЛПВП не превышало 40 %. В дальнейшем группе пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями выполнялись повторные введения клеток, которые не позволяют экстраполировать результаты на всех пациентов. Достоверно показано, что корректировка дислипидемии проходит в течение первого месяца и наиболее выражена была у пациентов с применением фетальныл КЛсХОК, ПО СраБНсНйЮ С ПыЦКСНТйтП у которых применялись аутологичные клетки.

Таблица 4

Динамика изменения липидного профиля крови у пациентов

Ауто Алло

Р0 Р1 Р2 РЗ Р0 Р1 Р2 РЗ

ЛПНП 6,2±0,6 5,9±0,4 5,8±0,3 5,8±0,2 6,3±0,6 5,8±0,5 5,2±0,6 5,1 ±0,2

ЛПОНП 1,1=1=0,2 1,0±0,2 0,9±0,1 1,1=1=0,2 0,9±0,3 о,т,2 0,7±0,1

ЛПВП 0,6±0,15 0,6±0,2 0,7=1=0,2 0,8±0,2 0,6±0,1 1,1 ±0,2 1,3±0,2 1,1±0,1

Тг 3,6±0,2 3,5±0,3 3,5=1=0,3 3,5±0,1 3,7±0,2 3,6±0,2 3,4±0,3 3,4±0,1

Холестерин 8,2±1,1 8,0±0,9 7,9±0,8 7,8±0,8 8,3±1,2 7,9±0,6 6,7±0,5 6,6±0,2

После первичного однократного введения эффекты по снижению и нормализации дислипидемии продолжались в течение 3-х месяцев. В дальнейшем происходила стабилизация процесса, в некоторых случаях отмечено повышение ЛПНП, холестерина и снижение уровня ЛПВП.

2.2. Сердечно-сосудистые заболевания и клеточные технологии

2.2.1. Ишемическая болезнь сердца В данную группу были включены пациенты, имеющие в анамнезе осложнения ИБС, в частности инфаркт миокарда (ИМ), а также пациенты после выполненных операций: аортокоронарное шунтирование (АКШ) и стентирование артерий сердца. Общее количество пациен-

тов 69 человек, из них контрольная группа - 11 человек (4 женщины и 7 мужчин) и основные группы: с применением аллогенных клеток - 53 (5 женщин и 48 мужчин) и аутологичных клеток - 5 мужчин. Средний возраст пациентов 57±4,3 лет. При отборе использованы следующие критерии: 1) выполненное в анамнезе оперативное пособие (АКШ, степти-рование) срок давности не менее 1 года; 2) появление клиники стенокардии; 3) невозможность выполнения повторного оперативного вмешательства; 4) отсутствие противопоказаний; 5) добровольное согласие.

Введение клеток в данной группе пациентов было системное, т.е. через кубитальную вену под контролем витальных показателей. Повторное введение повторяли через 1 месяц. Проведено сравнение с эффективностью способа введения в подключичную вену после установки подключичного катетера.

Оценка результатов проводилась при помощи лабораторных тестов, инструментальных (Эхо-КГ) и европейских стандартизированных опросников. Контрольные точки: до введения (Р0) через 1(Р]), 3(Рг) и 6(Р3) месяцев после введения клеток. В лабораторных показателях оценивались биохимические маркеры липидного обмена, функции печени, системы свертывания крови, общие анализы крови. На контрольных точках оценивалась толерантность к физической нагрузке. Отмечено, что у большинства пациентов клиническая картина ангинозных болей возникает практически без изменения в биохимических показателях крови. При анализе опросника ЙР-36 у пациентов контрольной группы не отмечено особых изменений как по физическому компоненту здоровья (РН 58,84±8,6), так и по психологическому компоненту здоровья (МН 64,34±4,8), что отличается от основной группы, где отмечено изменение психологического компонента здоровья уже с первого месяца до 73,44±5,7, в последующие месяцы наблюдения происходит снижение за счёт увеличения физического компонента здоровья до 68,42±2,1.

Отдельно было проведено сравнение результатов между группой пациентов, которым применялись аутологичггые клетки и пациентами с ал-логенными клетками. При анализе опросников отмечено, что в группе

пациентов, которым применялись фетальные клетки, изменения в оценке качества жизни как по опроснику ЕО-5, так и по опроснику БРЗб, отмечены через месяц, в то время как в группе пациентов с аутологичньтми клетками такие же изменения обнаружены только к 3 месяцу.

При сравнении методов введения клеток (подключичная и куби-тальная вены) выяснилось, что разницы в наступлении, выраженности и длительности клинических эффектов не обнаружено. Замечено, что длительность проведения процедуры увеличивалась и субъективно пациентами процедура переносилась хуже. На основании обработки опросников была разработана методика применения клеточных технологий у больных с поражением миокарда, которая заключалась в повторном введении клеток через 1 месяц.

Отмечено, что практически у всех пациентов к 3-му месяцу после первичного введения страх возникновения стенокардии практически отсутствовал. Частота и выраженность приступов аритмии уменьшилась, «светлые промежутки» между приступами увеличились, изменился характер ощущений пациентов при аритмиях. Если до терапии они их характеризовали как «тягостные ощущения дискомфорта», то через 1 месяц у 40 % пациентов и через 3 месяца у 85 % они интерпретировались как «незначительный дискомфорт».

2.2.2. Кардиомиопатии

В эту группу пациентов вошли 13 человек: из них 9 человек - основная группа и 4 - человека контрольная. Средний возраст пациентов составил 35±9,3 лет. В основной группе было 7 мужчин и 2 женщины, в контрольной - 1 женщина и 3 мужчин. У всех больных заболевание возникло после вирусной инфекции. Критерии включения: 1) связь заболевания с вирусной инфекцией; 2) фракция выброса (ФВ) менее 35 по данным Эхо-КГ; 3) отсутствие онкологических и аутоиммунных заболеваний; 4) добровольное согласие.

Введение клеток в данной группе пациентов выполнялось системно через кубигальную вену под контролем витальных показателей. Повторное введение клеток выполнялось через 1 месяц. 22

Во всех случаях, с учётом характера и тяжести заболевания использовались только фетальныс клегки, которые являются более эффективными по сравнению с аутологичными. Достаточно молодой возраст и тяжелая патология не внушали оптимизма от использования аутологичных клеток, что явилось также определяющим в выборе только фетальных клеток. По причинам тяжести заболевания и повторности выполнения процедуры мы отказались от других способов введения клеток: интракоронарпого, иптра-миокардиального и эндокардиального, остановившись на минимально травматичном методе введения. Все процедуры (как первичные, так и вторичные) пациенты перенесли без особенностей. Осложнений не выявлено. Диагностика проводилась с использованием оборудования, которое имеется практически во всех стационарах. В частности, на контрольных точках до введения (Р0) через 1(Р]), 3(Р2) и 6(Рз) месяцев выполнялись исследование биохимических показателей крови, общие анализы крови и мочи, Эхо-КГ, нагрузочные пробы, опрос по стандартизированным европейским опросникам. Достоверно значимых изменений в общих анализах крови и мочи не выявлено. В биохимических показателях отмечено уменьшение белков воспаления, в частности С- реактивного белка, коррекция измененных показателей печени, если таковые имелись. Результаты Эхо-КГ показали достоверное увеличение ФВ от 5 до 12 абсолютных единиц, что составило в относительных единицах улучшение сократительной функции сердца до 43 %. У некоторых пациентов отмечено уменьшение размеров сердца, оцениваемое по Эхо-КГ, однако достоверность из-за небольшого количества наблюдений - низка. К 3-м месяцам увеличилась устойчивость к физической нагрузке и её продолжительности. К 6 месяцу ни у одного из пациентов основной группы ухудшения состояния не зафиксировано. Дополнительных госпитализаций не потребовалось.

2.2.3. Атеросклероз

В данной фуппе пациентов преобладало дистальное поражение артерий Ш1ЖИИХ конечностей, что и определяло клиническую картину. Наблюдалось 17 мужчин, средний возраст которых составил 59±6,4

лет. Практически все пациенты имели многолетний стаж табакокурения. Критерии включения в данную группу: 1) выраженная клиническая картина поражения дистальных отделов периферических артерий; 2) отсутствие онкологических и аутоиммунных заболеваний; 3) результаты ангиографического исследования сосудов нижних конечностей; 4) добровольное согласие.

Использовались аллогенные (фетальные) клетки. Введение клеток было однократно, системно через кубитальную вену под контролем

В1ГТ£иТ1»П1/л' ттАттотототт

Пациенты проходили обследования, включающие: биохимические показатели крови, общий анализ крови и мочи, ультразвуковое исследование сосудов на контрольных точках до введения (Ро), через 3(Рг), и 6(Р3) месяцев. Выполнялось ангиографическое исследование сосудов нижних конечностей через 6 месяцев после введения клеток и сравнивалось с исследованием до процедуры. На всех контрольных точках, а также через 1 месяц после введения клеток, проводилась оценка качества жизни пациента с использованием стандартизированных опросников. При обработке результатов опросника Е<3-5В было выявлено увеличение изменения оценки качества жизни по аналоговой шкале на 15-20 единиц и составило 78±5,3 через месяц после введения клеток и сохранение на уровне 81±2,2 в течение 6 месяцев после первичного введения. Также отмечено увеличение психологического компонента здоровья в течение первого месяца со значений 47,73±4,24 до 64,87±3,21. На контрольной точке Р2, через 3 месяца после первичного введения отмечено увеличение физического компонента здоровья.

Основным критерием оценки эффективности клеточных технологий считали нагрузочный тест - расстояние, проходимое пациентов до возникновения болевого симптома. Отмечено, что первичные положительные сдвиги в виде увеличения расстояния до возникновения симптомов «перемежающейся хромоты» появились к 1 месяцу, к 3-му месяцу все пациенты увеличили дистанцию по сравнению с точкой (Ро). К 6 месяцу ухудшений у пациентов не отмечено. Важно заметить, что

в течение всего периода наблюдений у пациентов не было госпитализаций и фармакологическая поддержка не увеличилась. Ни один из пациентов не отказался от табакокурения, только 3 пациента умень-пгали количество выкуриваемых сигарет. Достоверных изменений по данным УЗИ сосудов нижних конечностей и ангиографии не получено.

2.3. Сахарный диабет и возможности клеточных технологий 2.3.1. Применение клеточных технологий при сахарном диабете 1 типа Группа пациентов, состоящая из 15 человек: 10 человек - основная (9 мужчин и 1 женщина) и 5 (1 женщина и 4 мужчин) - контрольная группа. Средний возраст составил 24±4,1 года. Все пациенты имели длительный анамнез заболевания, не менее 7 лет, 3 пациента находились на гемодиализе по причине ХПН от 6 до 12 часов в неделю.

Способ введения был малоинвазивный и производился системно, после пункции вен предплечья и установки бранюли. Введение клеток было однократное под контролем витальных функций. Введение клеток у пациентов, находящихся на гемодиализе, проводилось в день завершения процедуры диализа, следующая процедура пропускалась. Осложнений при выполнении процедуры введения клеток и в ближайший период не отмечено. Все пациенты перенесли процедуру без особенностей. У 3 пациентов перед введением был забран аспират костномозговой взвеси для последующих культуральных работ за 14 дней до введения. Осложнений после забора аспирата и в последующем периоде наблюдения выявлено не было.

Все пациенты тестировались на контрольных точках - до введения (Р0), через 1(Р0, 3(Р2) и 6(Р3) месяцев. Выполнялись исследование биохимических показателей крови (табл. 5), общие анализы крови и мочи. Определялось изменение количества антител к инсулину (см.диаграмму). Выявлено, что в основной группе, где применялись аллогенные (фетальные) клетки уровень антител к инсулину практически не изменялся, у пациентов в группе где использовались аутоло-гичные клетки отмечена тенденция к повышению антител к инсулину.

Особое внимание было уделено С-пептиду (табл. 6). Пациенты проходили тестирование на стандартизированных опросниках (Ware J.E., 1993; Siebert U., 2002).

Таблица 5

Исследование изменения биохимических показателей у

основной группы пациентов

Группа/сроки РО PI Р2 РЗ

Ауто Креатин и н 110*3,5 112*2,4 109*4,2 108*2,6

мочевина 3,2*1,1 3,8*2,1 J,0"ti,/ 3,8*1,1

Белок 68*2,3 69*2,1 67*1,3 68*0,3

Алло Креатинин 109*2,7 107*1,2 105*4,5 104*3,6

Мочевина 5,6*0,5 5,2*1,1 4,8*1,4 4,7*1,9

белок 65*1,5 68*2,4 75*1,1 71*0,3

PO PI Р2 РЗ

L_______________________________i

Рис. 3. Исследование изменения аутоантител к инсулину основной группы

Таблица 6

Динамика изменения С-пептида* основной и контрольной групп

Группа/сроки Р0 PI Р2 РЗ

Основная Ауто 0,23*0,2 0,24*0,2 0,24*0,1 0,25*0,2

Алло 0,2*0,3 0,23*0,3 0,26*0,2 0,27*0,3

Контрольная 0,22*0,3 0,23*0,2 0,22*0,3 0,22*0,2

Примечание: * - Измерение в нг/мл

В результате применения клеточных технологий у пациентов с сахарным диабетом 1 типа мы отметили, что уровень С-пептида поднялся не выше 30 % от начальных значений. У всех пациентов достоверно произошло повышение к 3-му месяцу. Однако к 6-му месяцу отметилась тенденция к стабилизации и даже снижению уровня С-пептида. Объясняется данный факт однократным введением суспензии клеток и исчерпанием их стимулирующего действия. У пациентов с длительным, тяжелого течения заболеванием - необходимо выполнять повторные введения клеток, как поддерживающий компонент для замедления процессов гибели клеток поджелудочной железы.

Отмечено также, что у всех пациентов изменилось психоэмоциональное состояние в положительную сторону и составило через 1 месяц на уровне 45,25±5,3, через 3 месяца - 61,02±3,4 и к 6 месяцу было уже на уровне 68,ЗА4,4.

Изменения в психоэмоциональном состоянии пациентов мы расцениваем, как результат снижения интоксикации в результате коррекции функций печени, а также улучшением энергообеспечения нервной ткани - за счет улучшения кровоснабжения и скорости окислительно-восстановительных реакций в клетках головного мозга.

Изменений в паренхиме тканей поджелудочной железы, почек и печени с помощью УЗИ не обнаружено. В биохимических показателях крови отчетливо в первые 3 месяца происходило снижение уровня креатинина, мочевины не более 35 % от первоначальных значений. В дальнейшем отмечена тенденция к увеличению данных показателей.

Более выражено, среди своей группы, откликнулись на клеточные технологии пациенты с более тяжелым состоянием. Данное наблюдение объясняется практически полным исчерпанием собственного регенераторного потенциала и практически полным истощением, или, выраженным снижением активности собственных СК. Эту гипотезу подтверждает количество времени, затраченное на культивирование ауто-логичных клеток, полученных от самих пациентов. Возросло и количество стимулирующих факторов для увеличения пролиферативного потенциала аутологичных клеток.

2.3.2. Применение клеточных технологий г.ри сахарном диабете 2 mima Выделить отдельно пациентов с изолированным сахарным диабетом 2 типа мы не стремились. Как правило, данный диагноз был сопутствующим у больных с ИБС. Поэтому мы выбрали небольшую группу пациентов в количестве 12 человек (6 мужчин и 3 женщины) из группы больных с осложнениями ИБС. Средний возраст составил 57±4,4 лет.

Вводили клетки системно через кубитальную вену под контролем витальных показателей. Повторное введение выполняли через 1 месяц.

Все пациенты тестировались па контрольных то'-псах до введения (Ро), через l(Pi), 3(Р2) и 6(Р3) месяцев. Выполнялись исследование биохимических показателей крови, общие анализы крови и мочи. Проверка С-пептида проводилась только на точке Ро. Учитывая, что у всех пациентов данный показатель был в пределах лабораторных норм, в дальнейшем контроль его не осуществлялся. Пациенты проходили тестирование на стандартизированных опросниках. Пациенты самостоятельно фиксировали ежедневные колебания уровня глюкозы в крови в амбулаторных условиях с помощью домашних глюкометров. Собранные данные представлены на рис. 4. Таким образом, удалось отследить динамику изменений уровня глюкозы в крови за весь период наблюдения, потому что он выполнялся на одном и том же оборудовании.

Уровень глюкозы в крови

10

0 .....■«"■»>......я»-......

РО Р1 F2 РЗ

Рис. 4. Динамика изменения уровня глюкозы в периферической крови

Диетологических рекомендаций пациентам не давали и коррективы в режим питания не вносили. Отмечено, что в период от 1 месяца до 3 после первичного введения фетальных клеток, все пациенты, находящиеся на экзогенном инсулине, уменьшили его дозировку в среднем на 30±5%, без ухудшения состояния и уровня глюкозы в крови.

2.4. Использование СКу высококвалифицированных спортсменов

Нами были поставлены следующие задачи:

1. Определить исходный уровень подготовки спортсменов к нагрузке на длительную физическую выносливость.

2. Подобрать наиболее оптимальный курс клеточной терапии направленный на улучшение устойчивости организма спортсмена к тренировочному стрессу.

3. Определить период максимального действия выбранной терапии.

4. Определить длительность действия выбранного курса терапии.

5.Определить результативность воздействия данного курса клеточной терапии на спортсменов по результатам диагностических тестов.

6. Оценить влияние выбранного курса клеточной терапии на изменения мышечной массы, объема, силы.

Исследование проводилось на двух группах спортсменов, которые находились в режиме интенсивного тренинга. Первая группа -контрольная, в данной группе не применялись клеточные технологии, вторая группа - основная, в которой применялись клеточные технологии. Возраст от 24 до 38 лет, средний возраст 32 года, имеющих тренировочный стаж не менее 5 лет. Уровень подготовки - высококвалифицированные спортсмены (ВКС). В основной группе разделили на 3 подгруппы: 1) применялись только аллогенные клетки; 2) применялись аллогенные и аутологичные; 3) только аутологичные клетки.

Перед проведением терапии спортсмены прошли стандартизированные тесты, оценивающие их физическую подготовленность.

Контрольные точки, на которых проводилось тестирование: 14 дней, 1 месяц, 2 месяца. Мониторирование ВКС выполнялось каждые 48 часов.

Забор аспирата костномозговой взвеси проводился за 14 дней до начала эксперимента. Введение клеток проводилось по отработанной методике системно, через пункцию кубитальпой вены под постоянным контролем витальных функций. Осложнений при заборе аспирата костномозговой взвеси и при введении клеток не было.

Результат выполнения тестов представлен на рис, 5, данные суммируют 3 теста. Отмечено, что наибольшее количество тюнтопений выполнено в группе спортсменов с комбинацией клеток (аутологич-ных и аллогенных). Время восстановления после тестов показано на рис. 6, где четко видно, что сроки восстановления у группы спортсменов, где применялась смесь аутологичнътх и аллогенных клеток через 2 месяца после первичного введения самое низкое, что говорит о быстром восстановлении после нагрузки.

При изучении изменения жировой массы и активной клеточной массы спортсменов не отмечено достоверных различий.

200 180

® Намяло «.4 д;кж

Через месяц « Через 2 месяца

Рис. 5. Суммарные результаты выполнения тестов

40 у;;;;;.............................................................................................

30 | , ' .. "" ш Начало 20

10 Л ~Ж ~ ~1 А / «14 дней

о

А'" А

Через месяц

V

^ ® Через 2 месяца

Рис. 6. Время восстановления после выполнения тестов (в секундах)

Первичные эффекты повышения работоспособности, выносливости, снижения периода восстановления - отмечены у спортсменов ко второй неделе. Наиболее ярко они проявлялись у спортсменов при использовании аллогенных клеток. При сравнении результатов у ВКС разных возрастов отмечено, что более выраженные эффекты наблюдались у спортсменов более старшего возраста. После повторного введения клеток через 1 месяц от первичного, субъективные ощущения у ВКС и результативность росла около 14 дней, после чего наступила стабилизация.

Выявить закономерность в изменениях активной мышечной массы или жировой ткани не удалось. Также не обнаружено изменений в лабораторных показателях (табл. 7).

Таблица 7

Динамика изменений у спортсменов контрольной и основной групп в общем анализе крови

Показатель Основная группа Контрольная группа

Р0 Р1 Р2 РЗ Р0 Р1 Р2 РЗ

Эр-ты 4,5±0,5 4,4±0,6 4,5±0,3 4,5±0,4 4,8±0,3 4,8±0,4 4,7^0,6 4,7±0,4

Гем-н 143±6,3 144±3,4 143±6,2 145±1,6 139±6,8 142±2,6 141±4,1 140±0,8

Лей-ты 6,2±1,4 6,5±1,3 6,6±1,1 6,4±1,3 6,8±2,4 6,4±2,1 6,5±1,4 6,6±0,6

соэ 8±3,2 8±3,5 8±2,9 8±2,8 5±1,2 6±2,2 6±0,2 6±0,5

Примечание: РО - до применения КТ; Р1 - через 14 дней; Р2 - через 1 месяц; РЗ - через 2 месяца

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате экспериментальных работ были получены убедительные данные о том, что трансплантированные клетки предположительно дифференцируются в кардиомиоциты, фибробласты и участвуют в формировании рубца в зоне инфарктного повреждения миокарда; при этом наблюдается улучшение функциональных показателей сердечно-сосудистой системы.

При применении клеточных технологий в комплексном лечении пациентов с вирусным поражением печени, результаты проведённой работы стали возможны вероятно благодаря следующим механизмам:

1. Восстановление гепатоцитов. Вводимая суспензия аллогенных (фетальных) клеток содержит печёночные прогениторы, которые стимулируют образование и дифференциацию клеток от овальных через гепатоциты 1 порядка ко 2-му и полностью дифференцированным ге-патоцитам 3-го порядка.

2. Усиление выработки интерферонов. Интерферон-Р ключевой компонент, среди семейства интерферонов, в клеточной защите против ХГС и благодаря паракринному эффекту ограничивает распространение вируса от клетки к клетке.

3. Стимуляция иммунной системы. Происходит через опосредованные эффекты. В гетерогенной суспензии находятся ГСК Данные клетки стимулируют активизацию внутренних макрофагов печени. В данном случае успех после применения интерферонов у больных с ХГС связывается с активизацией НК.

4. Депонирование в нишах стволовых клеток. Сохранение в нишах прогениторных клеток присутствующих в суспензии позволяет пациентам перенести курс тяжёлой противовирусной терапии. По-видимому, клетки постепенно выходят в кроветворное русло и запускаются в работу.

5. Каскад ауто и параиринных эффектов. При запуске данного механизма идёт активная борьба между отложением нитей фибрина и резорбцией нитей коллагена. В данном механизме активное участие принимают клетки Ито (звездчатые), а также матрикспые металлопро-теиназы. Активно участвуют цитокины и ростовые факторы.

При токсическом поражении печени, в частности, алкоголем, проводимая лекарственная терапия принесла свой положительный эффект и возможно важным фактором в восстановлении основных функций печени было элиминация токсического агента. Однако достоверно отмечено, что скорость наступления положительных эффектов и их выраженность превалировала именно в основной группе, где вводились фетальные клетки. По нашему мнению, данный эффект связан со стимуляцией процессов восстановления клеток печени цитокинами и ростовыми факторами, которые в большом количестве присутствуют в клеточной суспензии, полученной из феталыюй печени. На фоне снижения интоксикации улучшается психоэмоциональный фон, повышается физическая активность, что отражается на самостоятельной оценке пациентов своего здоровья выполненной с помощью специализированных опросников.

КТ влияют на метаболизм липидов. Клинический эффект объясняется органотропностью или хоумингом фетальных клеток, способностью их тканеспецифично заселять печет,, нормализовать метаболизм ЛПОНП, ЛПНП и ХС повреждённых клеток, а также способствовать восстановлению нормальной рецепции ЛП на поверхности гепа-тоцитов. Другой возможный механизм действия фетальных клеток -неспецифический. Введённые клетки, будучи малодифференцирован-ными, с помощью биологически активных веществ (цитокины, факторы роста) активизируют собственные эндогенные механизмы регуляции восстановительных процессов в печени, путём регуляции диффе-репцировки клеток макрофагально-моноцитарного ряда и выделения ими собственных (эндогенных) регуляторных пептидов. Регуляторные свойства аллогенных фетальных клеток могут быть воспроизведены

аутологичными клетками костного мозга, в популяции которых присутствуют плюрипотентные клетки.

КТ в настоящее время являются мощным и эффективным средством для коррекции пациентов с ИБС. КТ с использованием различных типов клеток обеспечивают следующие механизмы:

- дифференцировка в кардиомиоциты, гладкомышечные клетки, эндотелиальные клетки;

- паракринные эффекты.

и результате диффе^^ЬчЬриоКп я ии^шсрнипого Бсзденетвля по ~ лучены следующие эффекты:

- активация эндогенных СК;

- неоангиогенез;

- непосредственное влияние на сократимость миокарда;

- коррекция электрической проводимости;

- коррекция зоны поражения;

- улучшение механических свойств рубца;

- коррекция экстрацеллюлярного матрикса.

Подтверждение положительных эффектов после применения клеток отражается на субъективных оценках состояния своего здоровья пациентами, которые считают наиболее эффективными фетальные клетки по сравнению с аутологичными. Это подтверждается более ранним наступлением клинических эффектов, оцениваемых инструментально и с помощью опросников.

Механизмы коррекции патофизиологических нарушений при кардиомиопатиях при помощи клеточных технологий вытекают из особенностей повреждения миокарда. Преимущества вводимых нами клеток являлась их гетерогенность, т.е. в своём составе они содержали не только гемопоэтические прогениторы, но также и мезенхимальные. Таким образом, удалось одномоментно воздействовать практически на все звенья восстановления сократительной способности миокарда и стимулировать целый каскад реакций - уменьшение оксидативного

стресса, увеличение экспрессии паракринных, антиапоптозных и ан-гиогенных факторов.

Целесообразность применения клеточных технологий при атеро-склеротическом поражении сосудов обусловлена тем, что при прогресси-ровании мультифокального атеросклероза происходит повреждение интимы сосудов В настоящее время известно, что эндотелиальныс прогени-торпые клетки играют важную роль в репарации сосудов. Восстановление интимы сосудов - это один из механизмов защиты и борьбы с прогресси-рованием атеросклероза. Второй важный механизм - это нормализация синтетической функции печени и коррекция липидного состава крови. Положительные эффекты у пациентов с поражением артерий нижних конечностей связаны именно с этими двумя механизма™.

Основные направления действия КТ при восстановлении функции поджелудочной железы - это формирование новых сосудов (неоангиоге-пез) и стимулирование образования гормонпродуциругощих клеток в поджелудочной железе. В гетерогенной суспензии клеток, которые мы вводили, полученных из фетальной печени первого триместра гестации, содержались клетки, отвечающие за формирование новых сосудов, и стимулирующие регенерацию клеток поджелудочной железы. Аутологичные клетки пациентов содержали в себе популяции как ГСК, так и МСК.

Важны результаты применения клеточных технологий у спортсменов в период предсоревновательной подготовки. Они объясняются - восстановлением мышечной ткани, за счёт ускорения процессов ангиогенеза, миоге-неза. Другие механизмы эффективности связаны с коррекцией синтетических процессов в печени, с усилением окислительно-восстановительной системы клеток, с активизацией клеток моноцитарно-макрофагалыюго ряда.

ВЫВОДЫ

1. Разработанная теоретическая возможность клинического применения клеточных технологий для восстановления и реабилитации была подтверждена как в эксперименте, так и в клинике. При соблюдении показаний и противопоказаний, неукоснительном выполнении методики

процедуры введения клеток, клеточные технологии могут использоваться в клинической практике, не только тогда, когда другие способы и методы уже не эффективны. Наиболее важным показателем является качество клеточного материала, которое зависит от источника получения, сроков, жизнеспособности клеток перед введением.

2. При сравнении клинической эффективности - наиболее выраженный эффект отмечен у фетальных клеток, по сравнению с аутологичными клетками. Сроки появления первичных эффектов после использования фетальных клеток наступают раньше, чем при использовании аутологач-ных клеток. При некоторых состояниях аутологичные клетки не могут использоваться. Фетальные клетки могут использоваться у одного пациента неоднократно, в отличие от аутологичных, что связано с процессин-гом и первоначальным получением клеточного материала.

3. При процедуре введения клеток у пациентов отмечается повышение артериального давления до 20 мм рт.ст., что связано в большей степени с психоэмоциональным воздействием. Коррекция происходит быстро и это необходимо учитывать при выполнении первичных процедур, особенно у пациентов с высоким артериальным давлением. Изменений периферической гемодинамики не происходит.

4. Разработанный унифицированный алгоритм подготовки к выполнению процедуры по введению клегок, а также самой процедуры позволяет избежать различного рода осложнений. Положительные эффекты после применения фетальных клеток наступают в период с 10 по 14 день после первичного введения и достоверно отмечены у всех пациентов к 30-32 дню. Эти данные необходимо учитывать при выборе тактики применения клеточных технологий у различных групп пациентов.

5. Системное воздействие клеточных технологий, вне зависимости от источника получения клеточного материала, заключается в стимулировании нейроэндокринной системы, которая в свою очередь запускает кор-рекционные процессы, происходящие в пораженных органах. Применение клеточных технологий у ВКС целесообразно с использованием фетальных клеток и в сроки от 14 до 21 дня до начала соревнований для

коррекции физиологического состояния подготовительного периода и для реабилитации после соревновательного периода в кратчайшие сроки.

6. Изменения биохимических показателей крови отмечаются в течение первого месяца в сторону нормы и продолжают сохраняться в течение длительного периода, совпадающего по продолжительности у пациентов с улучшением качества их жизни. Однако при тяжелой соматической ца-тологии отмечается коррекция измененных показателей ие более чем на 30 % от исходных. У пациентов с биохимическими показателями в рамках нормы, а также у ВКС не выявляются отклонения от допустимых границ в анализах после применения клеточных технологий.

7. Клеточные технологии являются эффективным способом коррекции состояний человека при использовании в периоде реабилитации после тяжелых и серьезных нагрузок любого вида (психоэмоциональных, физических, послеоперационном периоде и т.п.), что в результате приводит к улучшению качества жизни конкретного пациента. Продолжительность изменения качества жизни в положительную сторону после применения клеточных технологий даже у больных с тяжелой соматической патологией не ухудшается в течение минимум 6 месяцев.

8. Клеточные технологии - универсальное средство саморегуляции организма, позволяющее мобилизовать внутренние резервы для регенерации поврежденных органов и тканей, а также восстановить утраченные функции поврежденных, или функционирующих на пределе физиологических возможностей, систем организма.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Использование клеточных технологий, медицинских технологий, где применяются живые клетки и клеточно-инженерные конструкции -необходимо для оптимизации новых методов лечения и реабилитации, усиления их эффективности, где фармакологические или иные медицинские технологии исчерпали свои возможности.

Выявленная взаимосвязь между клиническими эффектами и качеством клеточного материала, в частности, сроки получения материала, источник получения материала, и особенно жизнеспособность перед вве-

дением необходимо учитывать перед применением клеточных технологий у конкретного пациента.

Установленная взаимозависимость между сроками введения и первичными положительными клиническими эффектами после использования клеточных технологий позволяют более осознано начинать комплексную терапию, а также должны найти практическое применение в реабилитации и лечении заболеваний, обусловленных психоэмоциональным стрессом, в системе здравоохранения.

Выявленные эффекты различного наступления положительной клинической симптоматики после применения фетальных и аутоло-гичных клеток должны учитываться при подборе способа и метода применения у каждого конкретного пациента с учетом особенностей его организма и наличием противопоказаний.

Установленные эффекты и сроки их наступления при применении клеточных технологий у высококвалифицированных спортсменов должны учитываться при подготовке к соревнованиям и в восстановительном периоде.

Результаты полученных исследований, в частности воздействие клеточных технологий на функционирование нервной системы в виде устойчивости к различного рода раздражителям, нуждаются в дальнейшем осмыслении и реализации в виде новых технологий.

Выявленная клиническая значимость воздействия клеточных технологий при различных видах патологий позволяет рекомендовать их для применения в широкой врачебной практике - в реабилитационно-восстановительных и лечебно-профилактических учреждениях различного уровня.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Монографии:

\. Клеточные технологии в восстановительной медицине: Монография/Иванов Д.В., Хадарцев A.A. - Тула, 2011 - 180 с.

Патенты:

2. Иванов Д.В., Хадарцсв A.A., Хадарцев В.А., Коржук H.JI. Комплект для выделения из влагалищного тампона менструальной крови и ее хранение // Патент на полезную модель № 93268,- Бюл. 12 от 27.04.2010 г.

Статьи в журналах, рекомендованных ВАК:

3. Иванов Д.В., Хадарцев A.A. Клеточные технологии - в лечении патологии печени // Вестник новых медицинских технологий.- 2006 - Т. ХП1, № 2. - С. 185-187.

4. Иванов Д.В., Корниенко А.Н., Лшцук А.Н., Немытин Ю.В., Станков Д.С., Хадарцев A.A. Безопасность проведения трансплантаций клеток фетальной печени плода 2-го триместра гестации у больных кардиохирургаческого профиля // Вестник новых медицинских технологий. - 2006. - Т. ХШ, № 2. - С. 187.

5. Корниенко А.Ы., Иванов Д.В., Лшцук А.Н., Немытин Ю.В., Станков Д.С. Профилактика осложнений при трансплантации клеток фетальной печени кардиохирургическим больным // Вестпик новых медицинских технологий. - 2006. - Т. ХШ, № 2. - С. 187-188.

6. Иванов Д.В., Рязанов А.И., Хадарцев А.А.Трансплантация ге-патоцитов в лечении заболеваний печени - настоящее и будущее // Вестник новых медицинских технологий. - 2006. - Т. XIII, № 3. - С. 122-125.

7. Хадарцев A.A., Иванов Д.В., Шаталов A.B., Потапов И.В. Качество жизни у пациента с подагрой после аутотрансплантации клеток костного мозга (клиническое наблюдение) У/ Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - Т. 1, № 3(5), 2006 - С. 73-75.

8. Хадарцев A.A., Иванов Д.В., Степанова Т.В., Станков Д.С., Горбаков В.В. Эффективность клеточной терапии у больных хроническим гепатитом С, не ответившим на курс противовирусной терапии пегилированными интерферонами и рибавирином // Вестник новых медицинских технологий - 2007. - Т. XIV, № 3. - С. 107.

9. Иванов Д.В. Ишемическая болезнь сердца и клеточные технологии // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. - Т. XVI, № 2. -С. 177.

10. Иванов Д.В. Качество жизни при кардиомиопатиях после воздействия стволовых клеток // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. -Т. XVI, № 2. - С. 177.

п. Хадарцев A.A., Иванов Д.В., Наумова Э.М., Хасая Д.А. Эн-дометриальные стволовые клетки менструальной крови и возможность их применения в заместительной терапии // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. -Т. XVI, № 3. - С. 147-151.

12. Иванов Д.В. Клеточные технологии при алкогольном поражении печени // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. - Т. XVI, № 3. -С. 177-178.

13. Иванов Д.В. Клеточные технологии при вирусном поражении печени // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. - Т. XVI, № З.-С. 178.

14. Иванов Д.В. Клеточные технологии при гиперлипидемиях // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. - Т. XVI, № 3. - С. 178-179.

15. Иванов Д.В., Хадарцев A.A. Влияние клеточных технологий на физическое и психическое здоровье высококвалифицированных спортсменов // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. - Т.

XVI, № З.-С. 200-201.

16. Хадарцев А.А, Еськов В.М., Хадарцев В.А., Иванов Д.В. Клеточные технологии с позиции синергетики // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. - Т. XVI, № 4. - С. 7-9.

17. Иванов Д.В., Хадарцев A.A., Хадарцев В.А., Седова O.A., Митюшкина O.A. Клиническое использование стволовых клеток // Вестник новых медицинских технологий. - 2009. - Т. XVI, № 4. - С. 3133.

18. Иванов Д.В., Хадарцев A.A. Клеточные технологии в лечении подагры как системного заболевания // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2009. - Т. 8, № 3. - С. 573-577.

19. Иванов Д.В., Хадарцев A.A. Клеточные технологии и синергетика // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2009. - Т. 8, № 3. - С. 751-754.

20. Станков Д.С., Иванов Д.В., Хадарцев A.A., Субботина Т.И. Влияние эндометриальных клеток на хроническое ишемическое повреждение миокарда // Вестник новых медицинских технологий. - 2010. -Т. XVII, № 1.-С. 47-49.

21. Иванов Д.В., Ленников Р.В., Морозов В.Н., Савин Е.И., Субботина Т.И., Хадарцев A.A., Яшин A.A. Эффект допор-акцептерного переноса проходящим электромагнитным излучением сано- и патогенных характеристик биообъекта и создание новых медицинских технологий // Вестник новых медицинских технологий. - 2010. - Т. XVII, № 2. - С. 1015.

22. Иванов Д.В., Чабаненко A.B. Некоторые вопросы законодательного регулирования клеточных технологий: Российский и зарубежный опыт // Вестник новых медицинских технологий. — 2010. - Т.

XVII, № 2. - С. 286-290.

23. Алексеева Ю.А., Иванов Д.В. Метод оценки результатов при применении клеточных технологий у больных после кардиохирурги-ческих операций // Вестник новых медицинских технологий. - 2010. - Т. XVII, №4.-С. 176-178.

Статьи в сборниках материалов Всероссийских конференций:

24. Колтунов А.Н., Иванов Д.В., Корниенко А.Н., Лищук А.Н., Хадарцев A.A. Оценка влияния клеточных технологий на больных с кардио-

миоиатией // Сборник материалов Всероссийской конференции с элементами научной школы для молодежи «Клеточные исследования и технологии в современной биомедицине» (Тула, 9-10 ноября 2009) / Под ред. A.A. Хадарцева и Д.В. Иванова. - Тула: Тульский полиграфист, 2009. - С. 41-43.

25. Иванов Д.В., Хадарцев A.A. Влияние клеточных технологий на качество жизни больных кардиологического профиля // Сборник материалов Всероссийской конференции с элементами научной школы для молодежи «Клеточные исследования и технологии в современной биомедицине» (Тула, 9-10 ноября 2009) / Под ред. A.A. Хадарцева и Д.В. Иванова. - Тула: Тульский полиграфист, 2009. - С. 4-6.

26. Хадарцев В.А., Хасая Д.А., Иванов Д.В., Субботина Т.И., Наумова Э.М. Современные способы получения эндометриальных стволовых клеток // Сборник материалов Всероссийской конференции с элементами тучной школы для молодежи «Клеточные исследования и технологии в современной биомедицине» (Тула, 9-10 ноября 2009) / Под ред. АА. Хадарцева и Д.В. Иванова. - Тула: Тульский полиграфист, 2009. -С. 13-15.

27. Хадарцев В.А., Хасая Д.А., Иванов Д.В., Субботина Т.И., Наумова Э.М., Хадарцев A.A. Свойства эндометриальных стволовых клеток и перспективы их использования // Сборник материалов Всероссийской конференции с элементами научной школы для молодежи «Клеточные исследования и технологии в современной биомедицине» (Тула, 9-10 ноября 2009) / Под ред. A.A. Хадарцева и Д.В. Иванова. -Тула: Тульский полиграфист, 2009. - С. 24-26.

28. Хадарцев В.А., Хасая Д.А., Иванов Д.В., Субботина Т.И., Наумова Э.М., Хадарцев A.A. Разработка способа получения эндометриальных стволовых клеток из менструальной крови // Сборник материалов Всероссийской конференции с элементами научной школы для молодежи «Клеточные исследования и технологии в современной биомедиципе» (Тула, 9-10 ноября 2009) / Под ред. A.A. Хадарцева и Д.В. Иванова. - Тула: Тульский полиграфист, 2009. - С. 33-35.

29. Иванов Д.В., Хадарцев В.А., Хасая Д.А. Устройство получения эндометриальных стволовых клеток из менструальной крови (научные руководители: Коржук H.JL, Субботина Т.И., Хадарцев A.A.) // Материалы XXIII Всероссийской научно-технической конференции студентов, молодых ученых и специалистов «Биотехнические, медицинские и экологические системы и комплексы» (Биомедсистемы -2010) (Рязань, 2^4 декабря 2010).- Рязань, 2010,- Ч. 1.- С. 42-43.

Тезисы докладов:

30. Иванов Д.В., Рязанов А.И., Субботина Т.И., Хадарцев A.A., Яшин A.A. Теоретическая возможность управления дифференциацией стволовых клеток электромагнитным излучением крайне высокого диана-

зона // Тез. докл. IV конференции «Проблема качества жизни в здравоохранении» (Москва, 11-13 октября 2006). - М., 2006. - № 4. - С. 16.

31. Зубрицкий В.Ф., Иванов Д.В., Конёнкова М.А. Применение гемопоэтических стволовых клеток в комплексном лечении больных с печеночной недостаточностью // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии: тез. конференции (Москва, 15-19 апреля 2007). - М., 2007. - Т. XVII, № 2. - С. 187.

32. Зубрицкий В.Ф., Иванов Д.В., Конёнкова М.А. Оценка качества жизни после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у больных с печеночной недостаточностью // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии: тез. конференции nV/W^uo KJüonnonn м 1г\г\п т vim т f 107

VMWMJ XW i.^ wti^ woui \J I у« ITllJ f > i, | f XJ.} V> i U / t

33. Зубрицкий В.Ф., Иванов Д.В. Сравнение больных с печеночной недостаточностью после применения ГСК разных сроков гестации в комплексном лечении // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии: тез. конференции (Москва, 15-19 апреля 2007). - М„ 2007. - Т. XVII, № 2. - С. 187.

34. Хадарцев A.A., Иванов Д.В., Степанова Т.В., Станков Д.С. Эффективность клеточной терапии у больных с декомпенсированным циррозом печени различной этиологии.// Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии: Материалы Тринадцатой Российской Гастроэнтерологической Недели (Москва, 22-24 октября 2007). - М„ 2007. - Том XVII, № 5. - С. 196.

35. Хадарцев A.A., Иванов Д.В., Степанова Т.В., Станков Д.С., Горбаков В.В. Эффективность клеточной терапии у больных хроническим гепатитом «С», не ответивших на курс противовирусной терапии пегилированными интерферонами и рибавирином // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии: Материалы Тринадцатой Российской Гастроэнтерологической Недели (Москва, 22-24 октября 2007). - М., 2007. - Том XVII, № 5. - С. 196.

36. Иванов Д.В., Корниенко А.Н., Лищук А.Н., Хадарцев A.A. Применение клеточных технологий у больных с кардиомиопатией // Сб. тез. Объединенного съезда кардиологов и кардиохирургов СФО с международным участием (Томск, 20-23 марта 2009). - Томск, 2009. -С. 226.

37. Иванов Д.В., Корниенко А.Н., Лищук А.Н., Хадарцев A.A. Оценка качества жизни больных кардиохирургического профиля после применения клеточных технологий // Сб. тез. Объединенного съезда кардиологов и кардиохирургов СФО с международным участием (Томск, 20-23 марта 2009). - Томск, 2009. - С. 226.

38. Хадарцев A.A., Иванов Д.В., Субботина Т.И., Савин Е.И., Иванов В.Б. Электромагнитные поля и излучения в клеточной технологии // I Международная научно-практическая конференция «Инно-

вационные технологии управления здоровьем и долголетием человека» (Санкт-Петербург, 8-9 апреля 2010 г.).- СПб., 2010,- С. 395-397.

39. Иванов Д.В., Корниенко А.Н., Лищук А.Н., Хадарцев A.A., Станков Д.С. Клеточные технологии как поддерживающая терапия у больных с кардиомиопатией // Сб. тез. IV всероссийского симпозиума с международным участием «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии» (Санкт-Петербург, 21-24 апреля 2010). - СПб.: Изд-во «Человек и его здоровье», 2010. - С. 334.

40. Иванов Д.В., Станков Д.С., Лищук А.Н., Хадарцев A.A., Корниенко А.Н. Влияние применения клеточных технологий на качество жизни больных кардиохирургического профиля // Сб. тез. IV всероссийского симпозиума с международным участием «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии» (Санкт-Петербург, 21-24 апреля 2010). - СПб.: Изд-во «Человек и его здоровье», 2010. -С. 334.

41. Иванов Д.В., Хадарцев A.A., Хадарцев В.А., Станков Д.С., Субботина Т.И., Сабурина И.Н., Кошелева Н.В., Горкун A.A. Возможности дифференцировки стволовых клеток эндометрия // Клинико-лабораторный консилиум: Российский конгресс с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины - возможное и реальное» (Санкт-Петербург, 6-9 июня 2010 г.).- 2010 — № 2-3 (33-34).- С. 144.

42. Станков Д.С., Субботина Т.И., Хадарцев A.A., Хадарцев В.А., Иванов Д.В. Эндометриальные стволовые клетки в восстановлении миокарда // Сб. тез. Российского конгресса с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины - возможное и реальное» (Санкт-Петербург, 6-9 июня 2010). - СПб.: Изд-во «Человек и его здоровье», 2010,- № 2-3 (33-34).- С. 145.

43. Иванов Д.В., Лищук А.Н., Корниенко А.Н., Хадарцев A.A., Станков Д.С., Алексеева Ю.А. Дилятационная кардиомиопатия и клеточные технологии как поддерживающая терапия // Сб.тез. 9-ой международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (Бенидорм, Испания, 24-31 октября 2010).- Москва, 2010. - С. 75.

44. Алексеева Ю.А., Иванов Д.В., Лищук А.Н., Хадарцев A.A., Станков Д.С. Качество жизни - инструмент оценки результатов применения клеточных технологий // Сб.тез. 9-ой международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (Бенидорм, Испания, 24-31 октября 2010).- Москва, 2010. - С. 75.

45. Иванов Д.В., Хадарцев A.A., Станков Д.С., Сабурина И.И., Кошелева Н.В., Пулин A.A., Горкун A.A., Субботина Т.И., Наумова Э.М. Эндометриальные стволовые клетки как новый источник для восстановления миокарда // Сб.тез. 9-ой международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (Бенидорм, Испания, 24-31 октября 2010).- Москва, 2010. - С. 75.

46. Чабаненко A.B., Иванов Д.В. Законодательство в РФ и клеточные технологии // Сб.тез. 9-ой международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (Бенидорм, Испания, 24-31 октября 2010).- Москва, 2010. - С. 75.

Заявки на патенты:

Сабурина И.Н., Кошелева Н.В., Пулин A.A., Горкун A.A., Станков Д.С., Иванов Д.В., Хадарцев А. А Способ получения кардиомиоцитарных клеток // Заявка на изобретение № 2010125762 от 24.06.2010 г.

Иванов Д.В., Хадарцев A.A., Хадарцев В.А., Коржук Н.Л. Комплект для выделения из влагалищного тампона менструальной кровн и ее хранения // Заявка на изобретение 2009147929 от 24.12.2009 г.

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АКШ — аортокоронарное шунтирование

ВГС - вирусный гепатит С

ВКС - высококвалифицированные спортсмены

ГГТП - гаммаглутамилтранспептидаза

ГЦК - гепатоцеллюлярная карцинома

ДКМП - дилятационная кардиомиопатия

ИБС - ишемическая болезнь сердца

ИЛ - интерлейкин

ИМ - инфаркт миокарда

KT - клеточные технологии

ЛИ - липопротеиды

ЛПВП - липопротеиды высокой плотности ЛПНП - липопротеиды низкой плотности ЛПОНП - липопротеиды очень низкой плотности

НК - «натуральные киллеры» клетки, относящиеся к лимфоидным клеткам

CK - стволовые клетки

ФВ - фракция выброса

ФИО - фактор некроза опухоли

ХГБ - хронический гепатит Б

ХГС - хронический гепатит С

ХЭ - холинэстераза

ЦП - цирроз печени

ЭСК - эмбриональные стволовые клетки CD - cluster designation (обозначение кластера) PH - physical health (физическое здоровье) МН - mental health (психологическое здоровье)

ЛР № 040905 от 22 июля 1998 г. ПД № 00188 от 3 декабря 1999 г. Формат бумаги 60x84/16. Бумага офс. Гарнитура «Times New Roman». Печать риз. Усл. печ. л. 2,56. Уч.-изд. л. 2,4. Тираж 100 экз. Заказ № 229 Отпечатано в ОАО «Тульский полиграфист». 300600, г. Тула, ул. Каминского, 33.

Актуальность проблемы. Разработка новейших корригирующих технологий, направленных на сохранение и восстановление функциональных резервов организма человека, восстановление его оптимальной работоспособности является основной стратегией современной восстановительной медицины [69]. В последние десятилетие активно разрабатывается возможность применения клеточных технологий в клинической медицине. На них возлагаются большие оптимистические надежды в лечении социально-значимых заболеваний. Взлет научного интереса к данной теме стал возможен после получения эмбриональных стволовых клеток в 1998 году [324].

В научных исследованиях активно разрабатываются все типы и виды клеток [11, 71]. На лабораторных животных исследованы эффекты после применения клеток-в коррекции повреждений внутренних органов, таких как печень [41, 96], поджелудочная железа [247], сердце [48], сосуды [66], а также поражение спинного [80] и головного мозга [94].

Для оценки эффективности лечения и темпов восстановления пациентов используется интегральный показатель - качество жизни, который оценивается с помощью стандартизированных опросников [56]. Однако не достаточно изучено изменение качества жизни после применения клеточных технологий.

Почти не изучены сроки возникновения изменений' в организмах пациентов после применения различных видов клеток. Также не проводилось сравнения между эффективностью и выраженностью клинических эффектов при применении аутологичных и аллогенных типов клеток у пациентов с одной нозологией.

До настоящего времени не определены возможности применения клеточных технологий у спортсменов. Учитывая подготовку к Олимпийским играм 2014 года, это становится чрезвычайно актуальным. Не изучено влияние клеточных технологий на устойчивость спортсменов и лиц экстремальных профессий к интенсивным нагрузкам.

В литературе имеются единичные сообщения о применении клеточных технологий в восстановительной медицине и возможности оценки, результатов применения, таким образом в рамках данной работы нам представлялось актуальным определение роли и места, клеточных технологий в комплексе лечебно-восстановительных мероприятий социально-значимых заболеваний.

В связи с изложенным, целью настоящего исследования явилась системная программа по экспериментальной разработке; теоретическому обоснованию и оценке результатов клинического использования клеточных технологий в восстановительной медицине. В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи исследования:

1. Изучить морфофункциональные особенности восстановления, обусловленные клеточными технологиями, на модели хронического повреждения миокарда.

2. Разработать и оценить эффективность принципиально новых технологий, направленных на улучшение качества жизни у различных групп пациентов с социально-значимыми заболеваниями.

3. Выяснить различия в клинических эффектах и сроках их появления после применения различных видов клеток у пациентов.

4. Выявить изменения центральной и периферической гемодинамики у пациентов во время проведения процедур с использованием клеточных технологий.

5. Разработать показания к применению и унифицированный алгоритм проведения процедур с использованием клеточных технологий

6. Изучить системные эффекты у различных групп пациентов после применения клеточных технологий.

7. Выявить изменения в биохимических показателях у различных групп пациентов и спортсменов после использования клеточных технологий.

8. Оценить изменения качества жизни и продолжительность изменений у различных групп пациентов.

Научная новизна. Впервые на основании исследований осуществлено теоретическое обоснование необходимости использования клеточных технологий в восстановительной медицине, позволяющее эффективно корректировать социально-значимые заболевания.

Впервые установлены системные эффекты использования клеточных технологий у больных с различной патологией и доказан более выраженный эффект после применения фетальных клеток по сравнению с аутологичными клетками.

Впервые разработан унифицированный алгоритм проведения манипуляций при осуществлении клеточной коррекции морфофункциональных соотношений.

Впервые показана эффективность применения клеточных технологий при гиперхолестеринемии, что приводит к снижению потребления препаратов статинового ряда на 30-50%.

Впервые проведена оценка качества жизни пациентов с различными заболеваниями (печени, сердечно-сосудистой системы, сахарного диабета) после использования клеточных технологий.

Впервые на основе системного анализа и системного синтеза разработаны оптимальные сроки для применения клеточных технологий не только у пациентов с хроническими заболеваниями, но и у спортсменов. Установлены сроки оптимального применения клеточных технологий у спортсменов при подготовке к спортивным соревнованиям, что позволяет скорректировать физиологические процессы.

Научно-практическая значимость. Теоретическое обоснование применения различных видов клеток как у относительно здоровых людей, так и у пациентов с заболеваниями печени, сердечно-сосудистой и эндокринной систем, позволило объяснить положительные результаты клинического применения клеточных технологий. Полученные результаты применимы для дальнейших научных исследований в биологии и медицине.

Выявленные изменения во время проведения манипуляций по введению клеток позволили разработать алгоритм проведения лечения с использованием клеточных технологий в условиях амбулаторного режима или стационара одного дня.

Выявленные математические изменения, полученные при использовании стандартизированных опросников, позволили разработать наиболее эффективную схему применения клеточных технологий у пациентов с заболеваниями сердечно-сосудистой системы.

Полученные результаты воздействия аутологичных и аллогенных клеток могут использоваться при разработке способов предупреждения возрастных изменений, а также как профилактическое средство в восстановительной и реабилитационной медицине.

Выявленные эффекты применения клеточных технологий у высококвалифицированных спортсменов позволяют разработать оптимальные схемы их применения для подготовительного цикла перед соревнованиями и восстановительных периодов после соревновательного сезона.

Изучение клинических эффектов после применения клеточных технологий открывает возможности экономически оправданного, простого в исполнении способа коррекции различных по степени тяжести тех или иных заболеваний.

Установленная результативность применения аутологичных и аллогенных клеток позволяет использовать их в широкой врачебной практике.

Разработанные способы коррекции различных заболеваний сердечнососудистой, эндокринной систем, а также заболеваний печени могут внедряться в деятельность лечебно-профилактических учреждений различного уровня.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований используются в работе сотрудников МУЗ «Городская больница № 10 г. Тулы», ГУЛ ТО НИИ новых медицинских технологий (г. Тула), ФГУ 3 ЦВКГ им. А.А.Вишневского Министерства Обороны РФ, в педагогическом процессе на кафедрах внутренних болезней и медико-биологических дисциплин Тульского государственного университета, курсе лекций на кафедре Организации здравоохранения и общественного здоровья РМАПО (2005-2006 гг.).

Апробация, материалов работы. Основные положения-диссертации доложены на ученом совете ФГУ ВНИИФК (Москва; март 2005), научно-практических конференциях, ФРУ 3 ЦВКГ им. А. Вишневского (Красногорск, 2006, 2007, 2008), Объединенном съезде кардиологов и кардиохирургов СФО с международным участием (Томск, май 2009), международной научной школе для молодежи «Клеточные исследования и технологии в современной биомедицине» (Тула, ноябрь 2009), IV Всероссийском симпозиуме с международным участием «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии» (Санкт-Петербург, апрель 2010), Российском конгрессе с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины - возможное и реальное», (Санкт-Петербург, июнь 2010), 9-ой международной конференции «Высокие медицинские технологии XXI века» (Бенидорм, октябрь 2010), V Национальном конгрессе терапевтов (Москва, ноябрь 2010). Апробация работы состоялась на совместном заседании кафедры внутренних болезней и кафедры медико-биологических дисциплин медицинского института (Тула, 2011).

Публикации. По материалам исследований опубликовано 47 печатных работ, из них 1 монография, 1 патент на полезную модель, 1 патент на изобретение, 27 статей, из которых 21 в рекомендованных ВАК журналах. По теме диссертации подана заявка на изобретение № 2010125762 от 24.06.2010 г.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Восстановительный эффект клеточных технологий наблюдается у пациентов с различными заболеваниями.

2. Аллогенные клетки (фетальные) клинически более эффективны, чем аутологичные.

3. Сроки применения клеточных технологий обоснованы благодаря математическому анализу.

4. Разработана схема оптимального применения клеточных технологий у высококвалифицированных спортсменов.

Работа выполнена в рамках реализации Государственного контракта №02.512.12.2058 от 22 мая 2009 года.

выводы

1. Разработанная теоретическая возможность клинического применения клеточных-технологий для восстановления и-реабилитации была подтверждена-как в эксперименте, так и в клинике. При соблюдении показаний-и противопоказаний, неукоснительном выполнении методики процедуры введения клеток, клеточные технологии могут использоваться в клинической практике, не только тогда, когда другие способы и методы уже не эффективны. Наиболее важным показателем является качество клеточного материала, которое зависит от источника получения, сроков, жизнеспособности клеток перед введением.

2. При сравнении клинической эффективности — наиболее выраженный эффект отмечен у фетальных клеток, по сравнению с аутологичными клетками. Сроки появления первичных эффектов после использования фетальных клеток наступают раньше, чем при использовании аутологичных клеток. При некоторых состояниях аутологичные клетки не могут использоваться. Фе-тальные клетки могут использоваться у одного пациента неоднократно, в отличие от аутологичных, что связано с процессингом и первоначальным получением клеточного материала.

3. При процедуре введения клеток у пациентов отмечается повышение артериального давления до 20 мм рт.ст., что связано в большей степени с психоэмоциональным воздействием. Коррекция происходит быстро и это необходимо учитывать при выполнении первичных процедур, особенно у пациентов с высоким артериальным давлением. Изменений периферической гемодинамики не происходит.

4. Разработанный унифицированный алгоритм подготовки к выполнению процедуры по введению клеток, а также самой процедуры позволяет избежать различного рода осложнений. Положительные эффекты после применения фетальных клеток наступают в период с 10 по 14 день после первичного введения и достоверно отмечены у всех пациентов к 30—32 дню. Эти данные необходимо учитывать при выборе тактики применения клеточных технологий у различных групп пациентов.

-2085.- Системное воздействие клеточных технологий, вне зависимости от источника получения клеточного материала, заключается в стимулировании нейроэндокринной системы; которая в свою очередь, запускает коррекцион-ные процессы, происходящие в пораженных органах. Применение клеточных технологий у ВКС целесообразно с использованием» фетальных клеток и в сроки от 14'до 21 дня до начала соревнований для коррекции физиологического состояния подготовительного периода и для-реабилитации после соревновательного периода в кратчайшие сроки.

6. Изменения биохимических показателей крови отмечаются в течение первого месяца в сторону нормы и продолжают сохраняться в течение длительного периода, совпадающего по продолжительности у пациентов с улучшением качества их жизни. Однако при тяжелой соматической патологии отмечается коррекция измененных показателей не более чем на 30-% от исходных. У пациентов с биохимическими показателями в рамках нормы, а также у ВКС не выявляются отклонения от допустимых границ в анализах после применения клеточных технологий.

7. Клеточные технологии являются эффективным способом коррекции состояний человека при использовании в периоде реабилитации после тяжелых и серьезных нагрузок любого вида, (психоэмоциональных, физических, послеоперационном периоде и т.п.), что в результате приводит к улучшению качества жизни конкретного пациента. Продолжительность изменения качества жизни в положительную сторону после применения клеточных технологий даже у больных с тяжелой соматической патологией не ухудшается в течение минимум 6 месяцев.

8. Клеточные технологии - универсальное средство саморегуляции организма, позволяющее мобилизовать внутренние резервы для регенерации поврежденных органов и тканей, а также восстановить утраченные функции поврежденных, или функционирующих на пределе физиологических возможностей, систем организма.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Использование клеточных технологий, медицинских технологий, где применяются живые клетки и клеточно-инженерные конструкции — необходимо для оптимизации новых методов лечения и реабилитации, усиления их эффективности, где фармакологические или иные медицинские технологии исчерпали свои возможности.

Выявленная взаимосвязь между клиническими эффектами и качеством клеточного материала, в частности, сроки получения материала, источник получения материала, и особенно жизнеспособность перед введением необходимо учитывать перед применением клеточных технологий у конкретного пациента.

Установленная взаимозависимость между сроками введения и первичными положительными клиническими эффектами после использования клеточных технологий позволяют более осознано начинать комплексную терапию, а также должны найти практическое применение в реабилитации и лечении заболеваний, обусловленных психоэмоциональным стрессом, в системе здравоохранения.

Выявленные эффекты различного наступления положительной клинической симптоматики после применения фетальных и аутологичных клеток должны учитываться при подборе способа и метода применения у каждого конкретного пациента с учетом особенностей его организма и наличием противопоказаний.

Установленные эффекты и сроки их наступления при применении клеточных технологий у высококвалифицированных спортсменов должны учитываться при подготовке к соревнованиям и в восстановительном периоде.

Результаты полученных исследований, в частности воздействие клеточных технологий на функционирование нервной системы в виде устойчивости к различного рода раздражителям, нуждаются в дальнейшем осмыслении и реализации в виде новых технологий.

Выявленная клиническая значимость воздействия клеточных технологий при различных видах патологий позволяет рекомендовать их для применения в широкой врачебной практике - в реабилитационно-восстановительных и лечебно-профилактических учреждениях различного уровня.

-211