Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Класс производных 1,2,4-триазола как источник новых антиаритмических и диуретических лекарственных средств



О 1 10 "

£• ' р На правах рукописи

с? ее^ 99

МУТИН ИГОРЬ НИКОЛАЕВИЧ

УДК 615.03

КЛАСС ПРОИЗВОДНЫХ 1,2,4-ТРИАЗОЛА КАК ИСТОЧНИК НОВЫХ АНТИАРИТМИЧЕСКИХ И ДИУРЕТИЧЕСКИХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ.

14.00.25 - Фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

МОСКВА-1999

Работа выполнена на кафедре фармакологии Московского медицинского стоматологического института

Научные консультанты:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Академик МАИ, доктор медицинских наук, профессор Ю.Ф. Крылов.

Академик А НТК Украины, засл. деятель науки доктор фармацевтических наук, профессор Б.А. Самура

Член-корр. РАМН, доктор медицински) наук, профессор Б.Й. Любимов

Член-корр. РАМН, доктор медицински? наук, профессор В.С.Шашхов

Доктор медицинских наук, профессор А.И. Мачула

ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РАМН

Защита диссертации состоится 22 июня 1999 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета при Московском медицинском стоматологическом институте (103473, Москва, ул. Долгоруковская, 4).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке института (Москва, ул. Вучетича, д. 10 А).

Автореферат разослан 20 мая 1999 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук,

профессор Л.Л. Кириченко

тс\ъ,о

Общая характеристика работы

Актуальность выбранной темы

Одной из важнейших проблем современной медицины является создание новых лекарственных средств с более выраженным терапевтическим действием и меньшей степенью проявления побочных эффектов, чем у препаратов, используемых в настоящее время (Luderitz В., 1989; Proter J.M., 1991; Aston W.T. и соавт., 1994; Каверина Н.В., 1995; Глезер Г.А., 1996; Катцунг Б.Г. 1998).

Отличительной особенностью совремешюго поиска лекарств является широкое использование продуктов химического и биологического синтеза в различных классах соединений.

Среди первых значительный интерес представляют производные триазола, которые обуздают широким спектром фармакологического действия, в том числе диуретической, антиоксидантной, депримирующей, антиаритмической и антигистаминной активностью (Стец В.Р. и соавт.,1993; Хвисюк С.С. и соавт., 1996; Кныгц Е.Г. и соавт.,1996). Перспективность разработки новых высокоэффективных лекарственных препаратов из группы производных триазола доказывает и недавнее внедрение в медицинскую практику гомолога 1,2,4-триазола - тиотриазолина, предназначенного для использования в качестве гепатопротекторного препарата (Беленичев И.Ф. и соавт., 1995).

Все вышеизложенное послужило основанием для фармакологического скрининга 95 новых производных 1,2,4-триазола, синтезированных на кафедре неорганической химии (зав. кафедрой - д.м.н., профессор Е.Г. Кныш) Запорожского государственного медицинского университета.

Данная работа выполнена в соответствии с планами научно-исследовательских работ ММСИ (№ гос. регистрации 01950006956).

Цель исследования Целью данного экспериментального исследования явилось изучение спектра фармакологической активности 95 оригинальных химических соединений, отобранных из 250 новых производных класса 1,2,4-триазола, для целенаправленного поиска и создания потенциальных лекарственных препаратов с высокой активностью и низкой токсичностью.

Основные задачи исследования

1. Осуществить прогноз предполагаемых видов фармакологической активности 95 новых гомологов 1,2,4-триазола.

2. Отобрать наиболее активные соединения для последующего изучения специфического действия и хронической токсичности в соответствии с требованиями Министерства здравоохранения РФ к доклиническим исследованиям новых лекарственных веществ.

3. Уточнить некоторые механизмы возможного действия перспективных лекарственных препаратов.

4. Разработать практические рекомендации для использования в учебном процессе на кафедрах различного профиля (химического и фармакологического) медицинских вузов.

Научная новизна

Научная новизна работы заключается, прежде всего, в том, что после проведенного компьютерного прогнозирования активностей 250 производных триазона отобрано 95 веществ с возможными свойствами диуретиков, антиаритмиков, брон-холитиков, противовоспалительных, антимикробных, депримирующих, гипотензивных и антиоксидантных агентов.

Скрининговые исследования подтвердили данные компьютерного прогноза. После изучения по расширенной экспериментальной программе было отобрано два перспективных соединения, первое из которых (магниевая соль З-амино-1,2,4-триазол-5-карбоновой кислоты), с условным названием триазокарбам, обладает противоаритмической активностью, второе - хлорид 1-бензацетамидо-3,5-диметил-4-п-диметиламинобеюшшденамино-1,2,4-триазолИ/Т (амидотриазол) - диуретической. Оба вещества оказались практически нетоксичными.

На основе анализа свойств изученных нами 95 дериватов 1,2,4-триазола установлены закономерности связи между структурой, действием и токсичностью в данном ряду, позволяющие сформулировать рекомендации химикам-синтетикам по направленному синтезу новых производных с заданными свойствами в названном классе химических веществ.

Впервые показано, что потенциальный антиаритмик с условным названием триазокарбам способен угнетать индуцированную агрегацию кровяных пластинок. Выявлено, что его антиаритмическое и антиагрегантное действия могут быть реализованы через способность восстанавливать нарушенный кальциевый ответ в форменных элементах крови.

Впервые установлены диуретические свойства амидотриазола и раскрыты детали механизма их проявления.

Практическая значимость полученных результатов

Экспериментальные данные, полученные нами и описанные в диссертации, позволяют рекомендовать для первой фазы клинических испытаний перспективные соединения: триазокарбам (антиаритмик) и амидотриазол (диуретик), не уступающие по эффективности, а в некоторых случаях, превосходящие таковую эталонных лекарственных препаратов.

Результаты структурно-фармакологического анализа изученных производных 1,2,4-триазола используется в педагогическом процессе для преподавания студентам фармакологии, а также на кафедре военной и экстремальной медицины при изучении токсикологии отравляющих и сильнодействующих ядовитых веществ Московского стоматологического института.

Апробация работы

Материалы диссертации обсуждались и докладывались на следующих конгрессах и конференциях:

Международной научно-практической конференции «Лекарства - человеку» (Харьков, 1996 год); Ш Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1996 год); Международной научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств «Лекарства - человеку» (Харьков, 1997 год); IV международной научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств «Лекарства - человеку» (Москва, 1997 год); V международной научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств «Лекарства - человеку» (Каунас, 1997 год); IV Российском национальном копгрессе «Человек и лекарство» (Москва,

1997 год); VI международной научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств «Лекарства — человеку» (Харьков, 1998 год); V Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1998 год); VII международной научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств «Лекарства - человеку» (Москва, 1998 год); VIII международной научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств «Лекарства - человеку» (Вильнюс, 1998 год); VI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1999 год). Апробация диссертации проведена на совместном заседании кафедры фармакологии и кафедры военной и экстремальной медицины Московского медицинского стоматологического института (Протокол от 12.04.99г.). Публикации

По материалам диссертации опубликовано 49 научных работ. Объем и структура диссертации

Диссертация изложена игАЪО страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, экспериментальной части, заключения, выводов и библиографии, включающей 55/ссылок (в том числе -//^отечественных авторов). Рукопись иллюстрирована 36 таблицами и рисунками.

На защиту выносятся:

- экспериментальные данные, позволяющие выявить закономерности связи между структурой и фармакологическим (эффективность, токсичность) действием в ряду 95 замещенных 1,2,4-триазола;

- способность триазокарбама нормализовать обмен кальция и функцию форменных элементов крови;

- возможность амидотриазола регулировать метаболическую функцию почек;

- результаты доклинического изучения специфической активности и токсичности магниевой соли 3-амино-1,2,4-триазол-5-карбоновой кислоты (триазокарбам) и хлорида 1-бензацетамидо-3,5-диметил-4-п-диметил-аминобензилиденамино-

1,2,4-триазолия (амидотриазол), показавшие перспективность использования названных соединений в качестве новых лекарственных препаратов.

Материалы и методы исследования

В качестве объекта исследований использовали 95 новых производных 1,2,4-триазола, получешшх на кафедре неорганической химии Запорожского государственного медицинского университета доктором фармацевтических наук, профессором Кнышем Е.Г. и любезно предоставленные нам для изучения.

СТРУКТУРЫ ИЗУЧЕННЫХ СОЕДИНЕНИЙ

Хлориди 1-Н0НИЛ-4-бензилиденамино-1,2,4-триазолия

N — N — С9Н19

\ / N

а.

Хлориды 3,5-диме-тилзамегценных 1,2,4 -триазола

N — N — И,

II II

СН— \ /—СНз N

■С1.

Структура I (соединения 1-11)

Бромид -3,5-диметилзамегценные 1,2,4-триазолия

Структура II (соединения 12-22

Производные 1,2,4-триазоло-5-дитиоэтана

N — N —

II II

СН3— \ /"СНз N

I

Я

■х

N—N N1—N

II II II II

1?— \ /—Э—СН2—СН£—Э—\ /—н2 N N

I I

Из

Структура Ш (соединения 23-30)

Структура IV (соединения 31-38)

Соли З-амино-1,2,4-триазол-5-карбоновой кислоты

N — N

II II _

H2N—\ /—СОО X N

I

н

4-илиденамино-1,2,4-триазол

N — N

II II \ / N

I

R

Структура V (соединения 39-50)

Структура VI (соединения 51-61)

3,5-диметил-4-бензилиденамино-1,2,4-триазолы

Аммонийные соли 5-тио производных 1,2,4-триазола

N — N

II II

СН3—\ /— CHj N

N — N

II II х

R— \ /—SH N

I

Н

Структура VII (соединения 62-72)

1-ацетат-4-замещенные 1,2,4-триазола

Структура VIII (соединения 73-85)

N — N+-

II II \ / N

I

R

СН2—С=0

I

О'

Структура IX (соединения 86-95)

Хлорид 1-бензацетамидо -3,5-диметил -4-п-диме-тиламинобензилидена-мино-1,2,4-триазолия

N — ^— СН2— С= О

/Ч ' Н3С ' N

\ Сб^Ч 4 СН3

=\ /

С1. СНз

"=сн-<ч\ //>-Н\

Магниевая соль 3-амино-1,2,4-триазол-5-карбоновой кислоты

N — N

II II _

Н2Ы— \ / —С002 • Мд+ N

I

Н

СНз

Амидотрназол

Триазокарбам

Вещества представляют собой белые кристаллические порошки, без запаха, с горьким вкусом, растворимые в органических растворителях, а большинство их солей растворимы в воде.

Субстанции, плохо растворимые в воде, вводили лабораторным животным в виде тонкодисперсной водной суспензии, стабилизированной твином-80 (ВФС-42-167-72).

Действие изучаемых соединений сравнивали с лекарственными препаратами (фенобарбитал, аминазин, дифенин, клофелин, папаверина гидрохлорид, кофеин-бензоат натрий, анальгин, вольтарен, мидокалм, пшотиазид, фуросемид, адиурек-рин, ампициллин, фарингосепт, нистатин и др.); использовали образцы отвечающие требованиям действующих спецификаций.

Активность замещенных 1,2,4-триазола изучена в соответствии с объемом специального фармакологического скришшга. Специфический эффект отобранных соединений выявляли в соответствии с «Методическими рекомендациями» Фармакологического комитета МЗ РФ по экспериментальному и клиническому изучению новых лекарственных веществ, включающим более 20 методов.

кологического комитета МЗ РФ по экспериментальному и клиническому изучению новых лекарственных веществ, включающим более 20 методов.

Кроме того, исследовали ряд дополнительных параметров активности, не указанных в упомянутых «Рекомендациях». Так, степень физической работоспособности определяли "по тесту вынужденного плавания крыс" с дополнительным грузом (10% к массе тела) до полной невозможности удерживаться на поверхности воды и регистрацией времени плавания. Животных брали в опыт до начала введения вещества (контроль) и через 3 и 6 месяцев после курсового введения изучаемого соединения.

Агрегационную способность тромбоцитов изучали по методу Вот (1962) на агрегометре фирмы «Chrono - log» (США). Регистрацию степени изменения оптической плотности плазмы, богатой тромбоцитами, при добавлении к ней индуктора агрегации (АДФ), проводили с нативной плазмой (контроль) и через определенные промежутки времени (15 мин., 1 час, 3 часа и 6 часов) после введения исследуемых веществ (опьгг).

Количество свободного кальция [Ca"""]! в цитоплазме лимфоцитов человека определяли с использованием флуоресцентного зонда ФУРА-2АМ. Проникновение ФУРА-2АМ в клетки и степень гидролиза до кислоты контролировали по увеличению интенсивности флуоресценции эфира с помощью спектрофлюориметра «Hitachi F-4000» (Япония).

Острую токсичность оценивали при внутрибрюшинном введении исследуемых веществ интакгным мышам массой 20-22 грамма. Результаты учитывали спустя сутки. Расчет средней смертельной дозы (ЛД50) проводили по методу Кербера.

В настоящей работе было использовано 3937 животных, в том числе 2000 белых мьппей, 1800 белых крыс линии Вистар, 100 кроликов породы Шиншилла и 37 кошек.

Полученные данные обрабатывали статистически с применением коэффициента Стьюдента. Недостоверными считали различия с контролем при р > 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Прогнозирование вероятных видов фармакологического действия новых производных 1,2,4-триазола

Компьютерное прогнозирование возможных видов фармакологической активности 250 производных 1,2,4 - триазола было проведено в лаборатории автоматизации химических исследований Института Органического синтеза АН Латвии под руководством старшего научного сотрудника А.Б. Розенблита (табл. 1).

Полученные данные свидетельствуют, что для 95 отобранных новых производных 1,2,4 - триазола вероятны спазмолитическая, антиаритмическая, нейро-тропная, диуретическая, гипотензивная, противовоспалительная и другие виды активности (всего 13). Результаты прогнозирования, «выданные» компьютером, послужат основанием для проведения их первичного фармакологического скрининга с целью отбора наиболее перспективных веществ для детального изучения и последующего испытания в клинических условиях.

2. Структурно-фармакологический анализ производных 1,2,4-трназола

Острая токсичность хлоридов 1-нонил-4-бензилиденамино-1,2,4-триазола не имеет значительных изменений и колеблется в диапазоне 282,2-390 мг/кг. Наличие в структуре веществ метоксибензилиденаминового радикала (соед. 3) сопровождается наиболее выраженной токсичностью (283 мг/кг). Замена этого радикала на п-диметиламинобензилиденаминовый, п-бромбензилиденаминовый (соед. 6, 7), ок-сибензилиденовый и 2,4-диметоксибензилиденаминовый (соед. 9, 10) позволяет уменьшить токсичность до 349-390 мг/кг.

Острая токсичность хлоридов 3,5-диметилзамещенных 1,2,4-триазола варьирует в широких пределах. Так, ЛД50 соед. 12, 13 составила 76 мг/кг. Замена аминогрупп в соед. 18, 19 на п-бромбензилиденаминовую сопровождалась значимым -шестикратным - снижением токсичности (ЛД;о » 436 мг/кг).

Среди бром- и йодзамещенных солей 3,5-диметшх-1,2,4-триазола наименее токсичными оказались соед. 24, 25. Их ЛД50 составила не менее 147 мт/кг. Остальные соединения (23, 26-30) были в 2-3 раза токсичнее.

Производные 1,2,4-триазол 5-тиоэтана, содержащие пиридин и оксифенил, были менее токсичными (ЛД50 » 545 мг/кг). У других дериватов (31-35, 37) этого ряда острая токсичность колебалась в пределах 200-300 мг/кг.

Острая токсичность солей 3-амино-1,2,4-триазол-5-карбоной кислоты составляет 150-400 мг/кг. При этом, вещество 48 (содержащее бензиламмоний радикал) оказалось практически нетоксичным (ЛД50 = 405 мг/кг), а вещество 45 - напротив, достаточно ядовитым (ЛД50 = 144 мг/кг).

В ряду производных 4-илиденамино-1,2,4-триазола максимальную токсичность проявило соед. 52, имеющее п-диметилбензшщценаминовый радикал (ЛД50 = 285 мг/кг). Замена этого радикала на аминогруппу (соед. 51), п-метобензилиденаминовую (соед. 57), о-метоксибензилиденаминовую (соед. 58), 2,4-диметоксибензшщденамшювую (соед. 59), м-нитробензилиденами-новую (соед. 60) и о-оксибензилиденаминовую (соед. 61) значительно снижала их острую токсичность.

ЛД50 дериватов 3,5-диметил-4-бензилиденамино-1,2,4-триазола колебалась в диапазоне от 425 до 780 мг/кг: 2-окси-5-бромбензилиденовое производное (вещество 64) было наименее токсичным, а имеющее 2,4-дихлор-бензшшденаминовое -наиболее (вещ. 66).

В ряду аммонийных солей 5-тиопроизводпых 1,2,4-триазола (соединения 7385) минимальной токсичностью (ЛД50 = 322 мг/кг) обладало вещество 83, содержащее в соответствующих положениях молекулы протон и морфолин, а их замена на пиридин и пиперазин (соед. 74) в 4 раза повышала токсичность.

Весьма широко варьировала ЛД50 1-ацетатзамещенных 1,2,4-триазола. Ее наибольшие значения определялись для п-метоксибензилиденаминового (91) и о-метоксибензилиденаминового (92) соединений (517 и 578 мг/кг соответственно), а наименьшие - для хлорпроизводного (90) деривата (109 мг/кг).

Таким образом, анализ результатов изучения острой токсичности 95 новых производных 1,2,4-триазола позволил установить, что в данном ряду химических веществ высоко токсичными являются вещества, содержащие амино - и ацетила-мидную (13), дециламиновую и нонильную (26), дециламиновую и гексильную (27), пиридильную и пиперазиновую (74) группы. Введение в молекулу 2-окси-5-бромбензилиденамипового (64) или о-метокси-бензилиденового (69) радикалов приводит, напротив, к максимальному увеличению ЛД50.

Нейротропная активность

Учитывая результаты компьютерного прогнозирования, было исследовано влияние производных 1,2,4-триазола на функциональное состояние центральной нервной систем Использовали тест взаимодействия с этаминалом натрия.

Анализ полученных данных свидетельствует, что ряд веществ (27, 55, 59, 63, во, 66, 70, 72, 78) усиливают эффект барбитурата. Так, соединение 65 на фоне стандартной дозы этаминала увеличивало длительность сна до 243 мин. (в контроле - не более 89 мин), вещества 55 и 66 - до 226 мин; аминазин в этих условиях удлинял сон лишь в 1,5 раза. Выраженным депримирующим влиянием, сопоставимым с таковым аминазина, обладали производные хлоридов 1-нонил-4-бензилиденамино-1,2,4-триазола (соед. 70, 72), несколько слабее аминазина действовали соединения 27, 59, 63, 70, 78: депримирующий эффект этаминала при их со-четанном введении возрастал на 15-30% (по сравнению с контролем).

Некоторые вещества (23, 32, 33, 35, 43, 80, 82) проявляли пробуждающие свойства, укорачивая продолжительность барбитурового сна на 20-30%; следует добавить, что кофеин, снижал ее более, чем в 2 раза (на 52%).

Протнвосудорожная активность

Изучение взаимодействия производных триазола с коразолом и кордиамином показало, что одна из аммонийных солей 5-тио-1,2,4-триазола, содержащая пропильный и морфолиновый радикалы (соед. 78), уступает противосудорожному эффекту только фенобарбитала, но не мидокалма и дифенина.

Противовоспалительная активность

Антиэкссудативные свойства веществ 30, 31, 78, оцененные на модели формалинового отека, сравнимы с таковыми анальгина и вольтарена.

Анальгетическая активность

Анальгезия, вызываемая соединениями 10, 11, 28, 29, 30, 31,37,40,41, 83, по эффективности не уступала вольтарену и анальгин}': количество «корчей» снижалось до 32,9±4,3 - 41,4±4,6 % от контроля.

Влияние на физическую работоспособность

Соединения 43 и 44 повышали физическую работоспособность экспериментальных животпых, увеличивая «длительность плавания» на 35% (27,2±2,5) по сравнению с контролем, и действовали не слабее рибоксина (29,5±2,3 %).

Влияние на системное артериальное давление

В острых опытах на наркотизированных кошках наиболее эффективно и длительно снижали системное артериальное давление вещества 45 и 46: через 5,15 и 30 мин на 43, 35 и 20% от исходного соответственно; в последующие 30 и 45 мин давление нормализовалось.

Максимальное падение АД под влиянием соединения 42 достигалось к 5 минуте после введения (82,8±4,3 мм рт. ст.), что составляло 65% исходного; в последующие сроки наблюдалось его постепенное повышение до нормальных значений.

Вещество 39 действовало подобно папаверину: сначала (через 5 минут после аппликации) АД падало до 97 мм рт. ст. (76% исходного), затем (через 15 мин) -повышалось до 106 мм рт. ст. и приходило к исходным значениям через 30 мин после начала эксперимента.

Используемый нами в качестве эталона (наряду с папаверином) клофелин снижал АД к 30 мин после введения на 33% (при исходном значении -129 мм рт. ст.).

Таким образом, установлено, что некоторые производные 1,2,4-триазола способны понижать системное артериальное давление, превосходя (соед. 45 и 46) по силе и длительности эффект клофелина и папаверина.

Антиаритмнческая активность

Антиаритмическое действие производных 1,2,4-триазола испытывали на «строфантиновой модели».

Как оказалось, свойствами антиарнтмика обладает соед. 49: в дозе 5,9 мг/кг оно защищало животных от аригмогенного влияния строфантина. При этом, количество экстрасистол становилось минимальным (10,4+1,7), частота сердечных сокращений с 265 уд/мин (в контроле) через 20 минут после начала опытов снижалась до 219-203 уд/мин, гибель животных отсутствовала.

Лидокаин на этой модели также вызывал урежение ритма, наступающее че-р.;з 25 мин опыта (204,3 уд/мин), и препятствовал гибели животных.

Диуретическая активность

При изучении влияния производных 1,2,4-триазола на выделительную функцию почек установлено, что большинство исследованных веществ влияют на диурез.

Максимальный мочегонный эффект (3,3 мл), превосходящий действие гипо-тиазида в 1,5 раза, развивался через 2 часа после аппликации соединения 21. Соединения 28, 40, 41, 69 увеличивали выделение мочи менее значимо (2,2; 2,6; 2,8; 2,2 мл соответственно). В последующие два часа характер действия назвшшых веществ не изменялся. В конечном итоге, диурез на фоне соед. 21 составил 258 % по сравнению с контролем, в то время как гипотиазид повышал объем мочи лишь на 160 %. Сильнее гипотиазида действовали вещества 69 (227 % от контроля), 28 и 41 (210%).

Следует отметить, что во всех сериях опытов фуросемид стимулировал диурез более выражешю: функция почек возрастала на 270-290%.

Некоторые производные 1,2,4-триазола угнетали выделение мочи. Так, через 2 и 4 часа после введения соединения 65 диурез снижался на 28%. Антидиуретическое действие соединения 84 было сравнимо с таковым адиурекрина.

Таким образом, среди изученных веществ выявлены соединения, способные как угнетать, так и усиливать выделительную функцию почек.

Интерес представляет вещество 21 (хлорид 1-бензацетамидо-3,5-диметиламшюбензилиденамино-1,2,4-триазолия), эффект которого хотя и уступает фуросемиду, но значимо превосходит таковой гипотиазида.

Противомикробная активность

Антибактериальную активность производных 1,2,4-триазола оценивали по МПКдо - минимальным подавляющим (рост) концентрациям для пггаммов бактерий или грибов, сравнивая их с таковыми ампициллина, фарингосепта и нистатина.

Анализ полученных данных свидетельствует, что некоторые вещества (90, 81, 13, 21, 24, 27 и 36) обладают противомикробными свойствами, однако значительно уступают эталонным препаратам.

По результатам скрининговых исследований для расширенных доклинических испытаний были отобраны соед. 36 с условным названием амидотриазол (хлорид 1-бензацетамидо-3,5-диметил-п-диметиаминобензилиден-амино-1,2,4-триазолия), обладающее диуретической активностью, и вещество 49, названное триазокарбамом (магниевая соль 3-амино-1,2,4-триазол-5-карбоновой кислоты), проявившее противоаритмические свойства.

3. Специфическая активность и токсичность амидотриазола

3.1. Влияние на водный диурез (табл. 1).

Амидотриазол вводили белым крысам-самцам линии Вистар в дозах 6,5; 13,0; 20,0 и 26,0 мг/кг. Через 2 часа после аппликации больших доз (20 и 26 мг/кг) диурез значимо - почти в 3 раза - повышался (на 168 и 176% соответственно) и оставался на этом уровне следующие 2 часа. В опытах с гипотиазидом (50 мг/кг)

увеличение мочеотделения к этому времени составило 45%, а с фуросемидом (20 мг/кг) — 122%; к 4 часу эксперимента количество мочи на фоне фуросемида увеличивалось еще на 95%, а гипотиазида - на 19%.

Полученные данные позволили рассчитать ЕД50 амидотриазола, которая составила 21 мг/кг.

Таким образом, амидотриазол усиливает водный диурез эффективнее гипотиазида, но слабее фуросемида.

3.2. Влияние на спонтанный диурез

В дозе ЕД50 (21 мг/кг) амидотриазол вызывал усиление фильтрационной способности почек экспериментальных животных: по сравнению с контролем повышал спонтанны:: диурез на 165%, потерю натрия - на 48%, экскрецию креатинина -на 15% (потребление воды и калийурез практически не менялись).

Под влиянием фуросемида все перечисленные параметры изменялись более значительно: увеличивалось количество выпитой воды на 21%, потеря жидкости -на 45%, экскреции натрия, калия и креатинина - на 57,27, и 7% соответственно.

В опытах с гипотиазидом потребление воды, экскреция креатинина и калия также возрастали (на 100%, 7 и 27% соответственно), хотя нарастание диуреза почти в 2 раза уступало таковому на фоне амидотриазола.

Таким образом, амидотриазол выгодно отличается от гипотиазида не только мощной стимуляцией мочеобразования, но и отсутствием потери калия; последнее справедливо и в отношении фуросемида.

Таблица 1.

Изменение водного диуреза у белых крыс-самцов линии Вистар после однократного внутрижелудочиого введения амидотриазола, гвпотиазида

и фуросемида (М±м)

Препараты Доза Время наблюдения

(мг/кг) 2 часа 4 часа

Контроль 1.45 ± 0.18 100 2.96 + 0.27 100

Амидотриазол 6,5 1,94 + 0,19* 133,8 4.98 + 0.21* 168,2

13,0 3,58 ±0,17* 246,9 7,84 ± 0.24* 264,8

20,0 3.89 ±0.21* 268,3 8,16 ±0.23* 275,6

26,0 3,71 ±0.22* 255,8 7.65 ±0.19* 258,4

Гинотиазид 50,0 2,12 + 0.16* 145,2 4,84 ±0,18* 163,5

Фуросемид 20,0 3.22 ±0.23* 222,1 9,38 ±0.33* 316,9

Примечание: 1) В числителе - количество мочи (в мл), в знаменателе -изменения (в % к контролю) 2) «*» - различия с контролем достоверны при р < 0,05

3.3. Влияние на диурез при хроническом введении

В этой серии экспериментов белым крысам-самцам линии Вистар массой 130 ± 15 г ежедневно внутрижелудочно вводили амидотриазол в дозе ЕД50 (21 мг/кг) и на восьмой день замеряли ранее названные параметры деятельности почек. Оказалось, что при таких условиях опыта мочеотделение повышалось в 2,6 раза (в сравнении с контролем), а экскреция натрия, калия и креатшшна возрастала соответственно на 65, 75 и 18,5; через 2 суток после прекращения введения все показатели возвращались к норме.

Полученные данные свидетельствуют, что амидотриазол, во-первых, и при курсовом назначении сохраняет высокую диуретическую активность, и, во-вторых, не обладает токсическим кумулятивным действием на функцию почек.

3.4. Влшгще на водный диурез после солевой нагрузки

В условиях предварительного введения экспериментальным животным избытка воды и ионов (Ыа, К, С1) действие амидотриазола (21 мг/кг) проявлялось также очень ярко (табл. 2): диурез повышался почти в 3 раза, экскреция натрия - в 1,7 раза; обращает на себя внимание отсутствие нарастания выброса калия.

Эталонные препараты - гипогиазид, фуросемид, как и ожидалось, при данной схеме эксперимента мощно активировали выделение мочи (в 1,9 и 3,4 раза соответственно), натрия (в 1,5 и 2,1 раза) и, в отличие от амидотриазола, калия (на 29 и 37%).

Таким образом, амидотриазол на фоне солевой нагрузки проявляет сравнимую с гипотиазидом и фуросемидом силу мочегонного действия, но не стимулирует потерю калия.

3.5. Влияние курсового введения на объем внеклеточной жидкости и концен-

трации электролитов.

В условиях ежедневного однократного введения в дозе ЕД5а амидотриазол к 8-му дню снижал по сравнению с показателями интакпшх животных объем внеклеточной жидкости на 10%, а концентрацию натрия - на 7% (изменения статистически значимы); только содержание калия оставалось на уровне контроля (р > 0,05).

Таблица 2.

Влияние амндотриазола, гипотиазида и фуросемида на экскрецию воды и электролитов у белых крыс линии Вистар под после внутрижелудочного введения солевой нагрузки.

Условия опыта Доза (мг/кг) Диурез за 4 часа (в мл) Экскреция натрия (в мкмоль) Экскреция калия (в мкмоль)

Контроль - 2.6 + 0.12 100% 107.7 ±0,28 100% 22,4 ±0,73 100%

Амидотриазол в % к контролю 21,0 6,8 ±0,16++ 261,5 132.9 ± 0,27"^ 167,5 24,1 ± 0,64^ 107,6

Гипотиазид в % к контролю 50,0 5,0 + 0.18+ 192,3 111,6±0,31+ 150,6 28,9 ± 0,59+ 129,0

Фуросемид в % к контролю 20,0 8.9 ±0.2 Г 342,3 163.3 ± 0,34+ 211,7 30,7 ±0,43" 137,0

Примечания: 1) В числителе - абсолютные значения (М±м), в знаменателе -изменения в % к контролю. 2) различия достоверны (р < 0,05) по сравнению: «+» - с контролем,

«++» - с гипотиазидом и фуросемидом.

3.6. Влияние на баланс простагландинов Щ и калликреиногена-калликреина в плазме крови.

Поскольку интенсивность диуреза и деятельность почек во многом зависит от метаболизма простагландинов и активности калликреин=кининовой системы, мы изучили динамику содержания соответствующих факторов в плазме крови под влиянием амидотриазола в условиях водной и солевой нагрузок.

Оказалось, что амидотриазол достоверно (р < 0,05) повышает уровень названных субстратов в крови экспериментальных животных (в сравнении с контрольными): калликрешюгена - на 18% , калликреина - на 15%, простагландинов Е - на 11% и 47% (после водной и солевой нагрузки соответственно).

Суммируя вышеизложенное, можно заключить, что амидотриазол по силе эффекта превосходит пшотиазид и, хотя уступает фуросемиду, но вызывает мень-

шую потерю калия. Низкая ДЦ50 (450 мг/кг), а также отсутствие видимых патологических изменений при морфогистологическом изучении органов и тканей животных, в течение трех месяцев получавши амидотриазол, позволяют отнести его к малотоксичным соединениям и рекомендовать для клинических испытаний как перспективный диуретик.

4. Специфическая активность и токсичность триазокарбама

4.1 .Исследование антиаритмических свойств триазокарбама

В этой серии экспериментов триазокарбам вводили внутривенно, в дозе 1/20 ЛД50 (16,8 мг/кг) за 1 минуту до аритмогенного фактора (хлорид кальция, строфантин, аконитин).

4.1.1. Влиячие триазокарбама па аритмии, вызванные хлоридом кальция

Хлорид кальция (табл.№ 3) вводили белым крысам внутривенно в дозе 250400 мг/кг. Фиксировали частоту сердечных сокращений (ЧСС), количество экстрасистол, время их возникновения и исчезновения (если животные выживали).

Уже на 1 мин ЧСС значимо возрастала. Максимальное учащение деятельности сердца наблюдалось на 5 минуте. В дальнейшем, в связи с возникновением экстрасистол - это происходило, как правило, через 1,5 мин после инъецирования СаСЬ, мы фиксировали относительное урежение сердечного ритма, которое к 32-35 мин переходило в фибрилляцию желудочков и приводило к гибели животных.

Триазокарбам (16,8 мг/кг), примененный за 1 минуту до СаС12, существенно ослаблял его аритмогенный эффект (табл.№3): ЧСС не достигала 300 уд. в минуту, фибрилляция желудочков и гибель крыс наступала на 20-25 минут позже (так же, как и экстрасистолия). Общее количество экстрасистол снижалось на 25%.

Полученный эффект практически совпадает с таковым панангина (рис.1), отличаясь от него только отсроченным на 30% появлением экстрасистол.

Таким образом, триазокарбам обладает протективным влиянием при хлорид-кальциевой аритмии. Его выраженность сравшша с панагином.

Влияние триазокарбама и панангина на развитие и течение аритмии, вызванной хлоридом кальция (М±м)

Препараты Доза мг/кг Время после введения аритмогенных препаратов (в мин) Общее Количество Экстрасистол

1 5 10 20 30 40 50 60 70 Экстрасистолия

Частота сердечных сокращений Начало Конец

Хлорид кальция (контроль) 250,0 335,2 ±4,5 360,6 ±5,1 350,0 ±6,2 344,0 ±5,6 336,8 ±6,2 XX XX XX XX 1,4 ± 0,1 XX 27,8 ±2,1

Панангин 20,0 280,0 ±7,8 270,0 ±8,2 274,0 ±9,4 214,0 ±9,7 214,0 ±9,8 294,0 ±10, 2 340,0 ±11, 4 XX XX 1,6 ±0,2 XX 20,2 ± 1,8

Триазо-Карбам 16,8 291,7 ±8,2 294,5 ±7,7 281,1 ±8,3 210,5 ±8,4 221,1 ±8,4 281,8 ±7,9 321,6 ±8,5 XX XX 2,1 ±0,3 XX 21,2 ± 1,8

Примечание: знаком «+» обозначена достоверность различий по сравнению с контролем при р < 0,05; хх - данные отсутствуют из-за гибели животных.

4.1.2. Влияние триазокарбама на аритмогеипое действие строфантина.

Строфантин в дозе 250 мкг/кг вводили внутривенно кроликам. В этой дозе он уже через 2-2,5 минуты вызывал экстрасистолию. После инъекции кролики жили не более получаса и погибали на фоне тахисистолических нарушений ритма.

Триазокарбам в дозе 1/20 ЛД50 (16,8 мг/кг) ослаблял (вплоть до полной ликвидации) токсический эффект сердечного гликозида (рис.2, табл.4): значительно позднее начинается экстрасистолия (к 5-ой минуте), тахиаритмия не развивается (например, к 20-ой минуте ЧСС в контроле на 70% превышает таковую в опыте) и, самое главное, ни один кролик не погиб.

Время после введения (в мин) -Хлорид кальция "Папавггш — —Триазокарбам

Рис. № 1. Изменение ритма сердечной деятельности у наркотизированных крыс при в/в введении триазокарбама и панангина на моделях аритмий, вызванных хлоридом кальция.

Влияние триазокарбама и лидокаина на развитие и течение аритмии, вызванной строфантином (М±м)

Препараты Доза мг/кг Время после введения аритмогенных препаратов (в мин) Общее Количество Экстрасистол

1 5 10 20 30 40 50 60 70 Экстрасистолия

Частота сердечных сокращений Начало Конец

Строфантин (контроль) 0,25 311,2 ±8,8 321,7 ±9,4 328,8 ±10,5 337,9 ±9,9 351,4 ±8,7 XX XX XX XX 2,3 + 0,2 XX 29,8 ± 1,7

Лидокаин 0,7 281,7 ±9,1 261,6 ±8,8 265,7 ±8,6 218,4 ±8,4 221,6 ±9,3 226,4 ±9,2 228,5 ±7,9 227,6 ±6,8 221,7 ±7,5 4,6 ± 0.3 20,4 ± 0,9 8,4 ± 1,2

Триазо-карбам 16,8 271,2 ±5,9 266,4 +6,4 251,6 ±7,2 205,7 ±8,1 218,2 ±8,2 228,1 ±8,6 229,9 ±8,8 236,7 ±9,1 229,1 ±8,3 4,8 ± 0,4 18,7 ± 0,3 4,3 ± 0,9

Примечание: знаком «+» обозначена достоверность различий по сравнению с контролем при р <0,05; хх - данные отсутствуют из-за гибели животных.

1 5 10 20 30 40 50 60 70

Время после введения (в м к н )

С троф » и т и в Лиаоинн —— — т р и» а о к *р 6 а ы

Рис. № 2. Изменение ритма сердечной деятельности у наркотизированных кроликов при в/в введении триазокарбама и лидокаина на моделях аритмий, вызванных строфантином.

Как показывают данные, приведенные в таблице № 4, характер действия триазокарбама практически совпадает с эффектом лидокаина по всем регистрируемым параметрам.

Таким образом, в условиях строфантиновой модели подтвердилась высокая антиаритмическая активность триазокарбама.

4.1.3. Влияние триазокарбама на аритмии, вызванные аконитином Аконитин вводили белым крысам линии Вистар в дозе 20 мг/кг внутривенно. Уже на 1-ой минуто возникала тахикардия, которая, постепенно возрастая, приводила к смерти животных. Характерным является быстрое развитие экстрасистолии; проследить ее длительность пе представлялось возможным, поскольку все крысы погибли в течение первых 20-30 минут.

Триазокарбам защищал животных на фоне аконитина, обеспечивая 100%-ю выживаемость животных, поскольку тахисистолия, характерная для данной модели в первые 20 минут, в дальнейшем сменялась относительным урежением ЧСС. Обращает на себя внимание сравнительно позднее появление экстрасистолии (только на 7-й минуте) и ограниченное их число. Как показано в табл. № 5 и рис. 3. качественно и количественно эффект триазокарбама совпадает с таковым эталонного препарата (лидокаин) - нет ни одного параметра, статистически значимо отличаю-

щегося друг от друга, при весьма существенной разнице по сравнению с контролем (аконитин).

Таким образом, на фоне аритмии, вызванной аконитином, триазокарбам действует по силе и характеру аналогично препарату сравнения.

400

150 -1-.-1-1-1-1-1-1

1 5 10 20 30 40 50 60 70

■Аконитин — -Лидокаин -Триазокарбам

Время после введения (в мин.)

Рис. № 3. Изменение ритма сердечной деятельности у наркотизированных крыс при в/в введении триазокарбама и лидокаина на моделях аритмий, вызванных аконитином.

4.2. Влияние на системное артериальное давление

Триазокарбам в дозах 20 и 25 мг/кг снижал системное артериальное давление у кошек (острые опыты) через 5 мин после внутривенного введения на 35% исходного - до 90 - 95 мм рт ст, затем оно постепенно повышалось и достигало к 60 минуте опыта контрольных значений (138 мм рт. ст.).

Влияние триазокарбама и лидокаина на развитие и течение аритмии, ьызванной аконитином (М+м)

Препараты Доза мг/кг Время после введения аритмогениых препаратов (в мин) Общее Количество Экстрасистол

1 5 10 20 30 40 50 60 70 Экстрасистолия

Частота сердечных сокращений Начало Конец

Аконитин (контроль) 20,0 271,4 ±8,4 311,7 ±8,3 341,4 ±8,1 361,2 ±7,3 371,3 ±7,4 XX XX XX XX 1,3 + 0,1 XX 34,6 ±2,8

Лидокаин 20,0 276,9 ±9,8 269,2 ±9,4 257,9 ±9,3 221,3 ±9,2 207,9 ±8,4 206,3 ±8,3 221,1 ±8,2 225,7 ±8,4 221,2 ±8,4 5,9 ± 0,4 16,9 ± 0,6 10,5 ±2,1

Триазо-карбам 16,8 256,6 ±9,4 259,7 ±9,3 248,2 ±9,2 245,9 ±9,1 231,2 ±8,4 227,9 ±8,2 201,9 ±6,9 229,1 +6,6 225,9 +6,4 6,8 ± 0,3 16,5 ± 0,5 9,7 ± 1,9

Примечание: знаком «+» обозначена достоверность различий по сравнению с контролем при р <0,05; хх - данные отсутствуют из-за гибели животных.

Меньшие дозы (15, 10, 5 мг/кг) действовали не столь выраженно. Так, под влиянием триазокарбама в дозе 10 и 15 мг/кг через 5 минут после начала эксперимента артериальное давление падало до 105 - 108 мм, и еще через 40 мин нормализовалось (132-138 мм рт ст).

При дозе 5 мг/кг эффект был наиболее слабым и, к тому же, развивался значительно позже. Только к 50 минуте после инъекции АД уменьшалось на 15% исходного с возвратом к первоначальным значениям в последующие 25 минут.

Выраженное снижение артериального давления под влиянием клофелина происходило через 30 мин после введения (34% от контроля), папаверина - через 5 минут опыта (28 % от исходного). Следует добавить, что на фоне клофелина в первые минуты наблюдался подъем АД.

В опытах на кошках обнаружена способность триазокарбама (20 мг/кг) значимо понижать частоту сердечных сокращений. Так, уже через 5 минут после введения она уменьшалась в 2 раза. Восстановление до нормы наблюдалось только к 60 минуте эксперимента.

Меньшие дозы триазокарбама давали менее выраженный и продолжительный эффект, составляющий около 60% от максимума Интересно, что в условиях наших экспериментов ни клофелин, ни, тем более, папаверин либо не вызывали изменений частоты сердечных сокращений, либо эти изменения были весьма незначительны.

Таким образом, гипотензивный эффект триазокарбама превосходит таковой папаверина и сопоставим с клофелином; обращает на себя внимание отсутствие гииертешии в ранние сроки после инъекции (столь характерное для клофелина) и значимое - двукратное - урежение сердечных сокращений.

4.3. Влияние на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов.

Учитывая, что нарушение гемостаза тесно связано с возникновением патологии сердечно-сосудистой системы, в частности, аритмиями, мы сочли целесообраз-

ным изучить влияние триазокарбама на функцию тромбоцитов в условиях in vitro и in vivo.

В опытах in vitro триазокарбам в концентрации 2х10'3М подавлял АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов кроликов на 18% от контроля. В концентрациях 10'3, 2x1o-4, 10"4, 10"5 М процент падения оптической плотности плазмы, обогащенной тромбоцитами, колебался в пределах 77 - 80 % по сравнению с исходными цифрами. Дальнейшее уменьшение в плазме концентрации исследуемого соединения (10"6 М) сопровождалось резким ослаблением анггиагрегационного эффекта, который составил лишь 8%. В концентрации 10"7М данное вещество уже не действовало.

Поскольку триазокарбам в диапазоне концентраций от 2x10"3 до 10"5 М в опытах in vitr"» угнетал функцию тромбоцитов в среднем на 20%, что для «пробирочных» условий является значимой величиной, мы посчитали целесообразным изучить его способность влиять на склеиваемость кровяных пластинок в условиях живого организма кроликов (in vivo).

В дозе 20 мг/кг триазокарбам начинал действовать через 15 минут после внутривенного введения: эффект был слабым и составлял лишь 8% от исходных значений (табл.6). Через 1 час после начала опыта фупкция тромбоцитов угнеталась значительно сильнее (15%). Максимум антиагрегационной активности изучаемой субстанции регистрировался через 3 часа после

инъекции и составил 21% от контроля. К шестому часу опытов способность тромбоцитов к склеиванию (под влиянием АДФ) восстанавливалась до исходных цифр.

Таким образом, эти эксперименты подтвердили, что триазокарбам обладает не только антиаритмическим действием, но и способен угнетать функцию кровяных пластинок в одинаковой степени как в условиях in vitro, так и in vivo. Нам представляется, что такое сочетание свойств (антиагрегант и антиаритмик) в одном препарате может оказаться чрезвычайно полезным для клинической практики.

Влияние однократного внутривенного введения триазокарбама (20 мг/кг) на АДФ — индуцированную агрегацию тромбоцитов кроликов при (М±м)

Контроль Через 15 мин. после в/в введения Через 1 час после в/в введения Через 3 часа после в/в введения Через 6 часов после в/в введения

49,75 ± 1,36 п = 24 N=12 45,58 ± 1,73 * п — 12 N = 6 42,36 ±1,15 * п = 25 N=12 39,03 ± 0,95 * п = 29 N=12 51,30 ± 1,68 п= 13 N = 6

Примечание: *

различия с контролем достоверны (р < 0,05);

N - число кроликов; п - число проб

4.4. Влияние на кальциевый ответ нейтрофилов человека.

Общеизвестно, что ионы кальция являются фактором, регулирующим функцию плазменного и клеточного гемостаза. Учитывая этот факт, мы изучили влияние триазокарбама на перераспределение свободного кальция [Са2+]1 в нейтрофи-лах человека. Данные форменные элементы крови были выбраны в связи с высокой стабильностью в процессе эксперимента.

Установлено, что триазокарбам позволяет различным по своей природе химическим агентам (ионол, миконазол) эффективно блокировать кальциевые каналы и снижать содержание ионов Са2+ в цитоплазме нейтрофилов человека, возможно, подавляя различные процессы, сопряженные с высокой концентрацией даппого иона.

Рассчитанная методом Кербера ЛД50 составила 345 мг/кг; патоморфологиче-ские исследования мышей и крыс, получавших триазокарбам ежедневно в течение 3 месяцев, не обнаружили повреждения внутренних органов; Следовательно, данный потенциальный препарат можно отнести к малотоксичным и предложить его для клинических испытаний в качестве аптиаритмического средства.

ВЫВОДЫ:

1. Проведенный фармакологический скрининг 95 новых производных 1,2.4-триазола подтвердил результаты компьютерного прогнозирования и позволил выявить соединения, обладающие депримирующим, противовоспалительным, анальгезирующим, антиаритмическим, гипотензивным, диуретическим и антимикробным видами активности.

2. Хлорид 1 -бегоацетамвдо-3,5-диметил-4-п-диметилашшобензилиденамшю -1,2,4-триазолия с условным названием амидотриазол, по диуретической активности превосходит гипотиазид, но вызывает меньшую потерю калия.

3. Амидотриазол повышает в плазме крови содержание простагландинов Е и активирует калликреин-кининовую систему.

4. Магниевая соль 3-амино-1,2,4-триазол-5-карбоновая кислота (триазокарбам) обладает антиаритмическнм действием, сопоставимым с таковым лидокаина.

5. Триазокарбам снижает системное артериальное аналогично клофелину, не вызывая его предварительного повышения.

6. Триазокарбам угаетает индуцированную агрегацию тромбоцитов и нормализует кальциевый обмен в клеточных элементах крови (нейтрофилы).

7. Амидотриазол и триазокарбам относятся к малотоксичным соединениям и пр! длительном применении не влияют на функции и структуру жизненноважны> органов.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Полученные результаты зависимости фармакологической активности от хи мической структуры замещенных 1.2.4 - триазола используются в учебном процес се при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедре фармаколо гии и кафедре военной и экстремальной медицины Московского медицинског« стоматологического института

Результаты доклинического изучения специфической активности, острой I хронической токсичности амидотриазола и триазокарбама использованы для под готовки материалов с целью представления в МЗ РФ и получения разрешения н; клинические испытания.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Изменение системы плазменного и клеточного гемостаза под влиянием новы: К-М§ комбинаций / Ю.Ф.Крылов, И.Н.Мутин, Е.В.Зорян, Е.И.Карамышева И.Ю.Ларионова // "Патология гемокоагуляии" Часть IV, М., 1995 - с.80-81.

2. Специфическая активность новых соединений - доноров калия и магния / Ю.Ф Крылов, И.Н. Мутин, А.Г. Муляр, Е.И. Карамышева, Е.Г. Лобанова // «Совре менные аспекты создания, исследования и апробации лекарственных средств» Сб. научн. статей. Харьков, 1995,- С. 101-102.

3. Влияние производных 1,2,4-триазола на агрессивность поведения животных / И.Н. Мутин, Б.А. Самура, В.Л. Курочка, О.М. Литарова, Е.Г. Кныш // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.2.-Харьков, 1996,- С. 217 -219

4. Влияние в-замещенных 1,2,4-триазола на артериальное давление и дыхание Б.А. Самура, И.Н. Мутин, М.Г. Бакуменко, Е.В. Тарусина, А.И. Панасешсо / «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию и апробации новьг лекарственных средств.Т.2.-Харьков, 1996.- С. 276-280.

5. Действие замещенных 1,2,4-триазола на тонус скелетной мускулатуры / И.Н. Мутин, Ю.Ф. Крылов, М.Г. Бакуменко, Б.Б. Самура, О.М. Литарова // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.2.-Харьков, 1996.- С. 219-223.

6. Доклиническая оценка фармакологического действия новых производных пан-тотеновой кислоты /Е.А. Филина, Е.И. Асташкин, Ю.Ф. Крылов, А.Г. Муляр, И.Н. Мутин, A.A. Останин // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию и апробации новых лекарственных средств.'Г.2.-Харьков, 1996.- С. 334-341.

7. Исследование антикоахулянтной активности новых доноров калия и магния / И.Н. Мутин, A.C. Берлянд, Н.П. Моряков // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.2.-Харьков, 1996,-С. 212-217.

В. Исследование влияния новых регуляторов электролитного баланса на свертываемость крови и агрегацию тромбоцитов / И.Н. Мутин, А.Г. Муляр, Е.И. Кара-мышева, Н.В. Новикова, Н.П. Моряков // Ш Российский пац. конгресс «Человек и лекарство». -Москва,1996. -С.38.

9. Новые производные глутаминовой кислоты как потенциальные лекарственные средства / Ю.Ф. Крылов, A.C. Берлянд, И.Н. Мутин, А.Г. Муляр, A.A. Михайлов // "Лекарства-Человеку". Межд.сб. научн. тр. По созданию и апробации новых лек. Средств. Т.2 - Харьков, 1996. - с. 153-158.

10. Поиск перспективных антиагрегантов среди новых глутаминатов калия и магния / И.Н. Мутип // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.2.-Харьков,1996.-С. 207-212.

11. Поиск перспективных антиагрегантов среди новых производных никотиновой кислоты / A.A. Останин, Ю.Ф. Крылов, А.Г. Муляр, И.Н. Мутин, Е.А. Филина // Ш Российский нац. конгресс «Человек и лекарство». -Москва, 1996. -С.41.

12.Противоаритмическая активность производных 1,2,4-триазола / И.Н. Мутин, A.B. Дралкин, О.Н. Литвинова, Е.Г. Кныш // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.2.-Харьков, 1996.- С. 223 -224.

13.Регуляция агрегации тромбоцитов с помощью новых производных никотиновой кислоты / A.A. Останин, Е.А. Филина, И.Н. Мутин, Ю.Ф. Крылов, А.Г. Муляр // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.2.-Харьков, 1996.- С. 224-229.

14. Экспериментальное изучение антиагрегационной активности новых производных ксантина / Ю.Ф. Крылов, Б.А. Самура, Е.И. Карамышева, А.Г. Муляр, И.Н. Мутин // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.2.-Харьков,1996.-С. 158-162.

15. Анальгетическая активность производных 1,2,4-триазола / М.Г. Бакуменко, И.А. Титов, И.Н. Мутин, Е.В. Тарусина, С.А. Зарицкий, А.И. Панасенко, Е.Г. Кныш // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.З .-Харьков, 1997.- С. 4-8.

16. Влияние новых производных никотиновой кислоты на базальный уровень Ca ~ i цитоплазме лимфоцитов человека / Ю.Ф. Крылов, Е.И. Асташкин, A.A. Останин, И.Н. Мутин, Е.А. Филина // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.З.-Харьков, 1997.- С 116-125.

17. Влияние новых солей калия и магния на свертываемость крови / И.Н. Мутин Ю.Ф. Крылов, А.Г. Муляр // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. пс созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.З.-Харьков, 1997.- С 182- 187.

18. Влияние фенотриазола на активность протеолитических ферментов кининово! системы у лабораторных животных / И.Н. Мутин, И.А. Титов, О.М. Гладченко М.Г. Бакуменко, Е.В. Тарусина, О.Н. Литвинова, А.И. Панасенко, Е.Г. Кныш С.А. Зарицкий // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию i апробации новых лекарственных средств.Т.З.-Харьков, 1997.- С. 190-193.

19. Исследование острой токсичности перспективного антиагреганта из группь производных никотиновой кислоты / A.A. Останин, А.Г. Муляр, И.Н. Мутин Е.И. Карамышева // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. по созданию i апробации новых лекарственных средств.Т.З.-Харьков, 1997.- С. 193-196.

20. Исследование противовоспалительной активности производных 1,2,4-триазола, И.Н. Мутин, Б.А. Самура, М.Г. Бакуменко, Е.В. Тарусина, И.А. Титов, .Н. Лиг винова, А.И. Панасенко, Е.Г. Кныш // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн тр. по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.З.-Харьков, 1997. С. 187-190.

21. Компьютерное прогнозирование видов фармакологической активности амино замещенных производных 1,2,4-триазола / И.Н. Мутин, И.А. Титов, E.H. Золо тарева, Е.Г. Кныш, А.И. Панасенко // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн тр. IV научно-практической конференции по созданию и апробации новых ле карственных средств.Т.4.-Москва, 1997.- С. 291-295.

22. Поиск эффективных комбинаций лекарственных препаратов для лечения забо леваний системы гемостаза и нарушения микроциркуляции / Ю.Ф. Крылов М.Г. Гришкина, Е.А. Филина, И.Н. Мутин, А.Г. Муляр // «Лекарства - человс ку». Межд. сб. научн. тр. IV научно-практической конференции по созданию i апробации новых лекарственных средств.Т.4.-Москва, 1997.- С. 240-251.

23. Перспективы поиска новых лекарственных препаратов среди производим; триазола / И.Н. Мутин, Б.А. Самура, Ю.Ф. Крылов, А.Г. Муляр // «Лекарства -человеку». Межд. сб. научн. тр. IV научно-практической конференции по соз дашпо и апробации новых лекарственных средств.Т.4.-Москва, 1997.- С. 286 291.

24. Изменение базального уровня кальция под влиянием новых производных нико тиновой кислоты / A.A. Останин, Ю.Ф. Крылов, И.Н. Мутин, А.Г. Муляр, Е.А Филина // Сб. научн. работ «Моск. мед. стом. институту - 75 лет». - Моек ва,1997. -С.156-157.

25.Поиск эффективных противоаритмических средств среди новых производных 1,2,4-триазола / И.Н. Мутин, Б.А. Самура, A.B. Дралкип, Е.А. Филина // Ш Российский нац. конгресс «Человек и лекарство». -Москва,1997. -С.278.

26. Доклиническая оценка фармакологической активности смешанного глутамата калия и магния / И.Н. Мутин, А.С.Берлянд, Ю.Ф. Крылов, А.Г. Муляр // Экспериментальная и клиническая фармакология, 1997. Т 60, № 2 - с. 16-19.

27. Анальгетическая активность замещенных 1,2,4-триазола / И.Н. Мутин, А.Г. Муляр, И.А. Титов, В.В. Шикова, А.И. Панасенко, Е.Г. Кныш, Ю.М. Мошура, О.В. Борисенко // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. V научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. T.V.- Каунас, 1997.- С.281-286.

28. Анальгетическая активность замещенных 1,2,4-триазола / И.Г. Бакуменко, В.В. Шикова, И.Н. Мутин // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. V научно-практической конференции по создапию и апробации новых лекарственных средств. T.V.- Каунас, 1997.- С. 36.

29. Влияние замещенных 1,2,4-триазола на диурез / А.Г. Муляр, И.Н. Мутин, И.А. Титов, В.В. Шикова, E.H. Золотарева, А.И. Панасенко, Е.Г. Кныш, О.В. Борисенко // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. V научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.ЛЛ-Каунас, 1997,- С.268-273.

30. Взаимодействие замещенных 1,2,4-триазола с аналептиками / И.Н. Мутин, И.А. Титов, А.Г. Муляр, В.В. Шикова, А.И. Панасенко, Е.Г. Кныш, Ю.М. Мошура, О.В. Борисенко // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. V научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. T.V.- Каунас, 1997.- С.277-278.

31. Взаимодействие замещенных 1,2,4-триазола с барбитуратами / И.Н. Мутин, И.А. Титов, В.В. Шикова, Е.В. Тарусина А.И. Панасенко, Е.Г. Кныш, Ю.М. Мошура, И.Н. Шевченко // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. V научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств.Т.У.-Каунас, 1997.- С.273-277.

32. Действие тиопроизводных триазола на ноцицепторы у белых крыс / И.Н. Мутин, И.А. Титов, А.Г. Муляр, А.И. Панасенко // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. V научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. T.V.- Каунас, 1997,- С.263-264.

33.Нооглютил - как перспективный антиа1регант / A.A. Останин, И.Н. Мутин, Ю.Ф. Крылов, А.Г. Муляр, Е.А. Филина // «Лекарства - человеку». Межд. сб. паут. тр. V научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. T.V.- Каунас, 1997,- С.294-304.

34. Первичная оценка фармакологической активности замещенных 1,2,4-триазола / И.Н. Мутин, ILA. Титов, В.В. Шикова, Е.В. Тарусина, А.И. Панасенко, Ю.М. Мошура, О.В. Борисенко, И.Н. Шевченко // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. V научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. T.V.- Каунас, 1997.- С.286-294.

35.Противовоспалительная активность замещенных 1,2,4-триазола / А.Г. Муляр И.А. Титов, И.Н. Мутин, Е.Н. Золотарева, А.И. Панасенко, Е.Г. Кныш, О.В. Бо-рисенко, И.Н. Шевченко // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. V научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т.V,-Каунас, 1997.- С.264-268.

36. Влияние амидотриазола на экскрецию воды и электролитов у крыс после водной и солевой нагрузок / И.Н. Мутин, И.А. Титов, В.В. Шикова, А.И. Панасенко, Е.Г. Кныш // «Лекарства - человеку». Межд. сб. паучн. тр. VI научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т.VI - Харьков,1998,- с. 159 -160.

37. Влияние производных 1,2,4 - триазола на агрессивность поведения животных / М.Г. Бакуменко, И.Н. Мутин, В.В. Шикова, А.И. Панасенко, Е.В. Кныш, Ю.М Мошура, И.Н. Шевченко // // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. V] научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т.VI - Харьков, 1998.- с. 7-9.

38. Влияние тио-замещенных 1,2,4 - триазола на деятельность почек / М.Г. Бакуменко, И.Н. Мутин, Е.В. Кныш, В.В. Шикова, А.И. Панасенко, Ю.М. Мошура // II «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. VI научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т.VI - Харьков,1998,- с. 14 -17.

39. Диуретическая активность конденсированных производных триазола / В.В. Шикова, И.Н. Мутин, Е.В. Тарусина, А.И. Панасенко, Е.Г. Кныш, И.Н. Шевченко, Ю.М. Мошура, О.В. Борисенко // // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. VI научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т.VI - Харьков,1998.- с.242 - 243.

40. Исследование противовоспалительной активности тио-замещенных 1,2,4 -триазола / М.Г. Бакуменко, И.Н. Мутин, Е.В. Кныш, В.В. Шикова, А.И. Панасенко, Ю.М. Мошура, О.В. Борисенко // // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. VI научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т.VI - Харьков,1998.- с. 9 -14.

41.Нооглютил - потенциальное противотромботическое средство / И.Н.Мутин. И.А. Титов, А.Г. Муляр, Ю.Ф. Крылов // V Российский нац. конгресс "Человек и лекарство", Москва, 21-25 апреля 1998 г. Тез. докладов, с.108.

42. Перспективы поиска высокоэффективных и малотоксичных лекарственных препаратов среди новых производных триазола / И.Н.Муган, И.А. Титов, А.Г. Муляр, Ю.Ф. Крылов // V Российский нац. конгресс "Человек и лекарство", Москва, 21-25 апреля 1998 г. Тез. докладов, с. 594.

43.Изучение фармакологических свойств новых антикоагулянтов и антиа1регантов / Ю.Ф. Крылов, А.Г. Муляр, Е.Г. Лобанова, Е.А. Филина, Е.И. Карамышева, А.А. Останин, И.Н. Мутин // Материалы научной конференции "Поиск и создание средств для фармакологической регуляции плазменного и клеточного гемостаза", Москва, 1998 г. с. 2 -6.

44. Поиск и создание перспективных антикоагулянтов, антиагрегантов и местных гемостатиков / Ю.Ф. Крылов, И.Н. Мутин, А.Г. Муляр, Е.А. Филина, А.А. Оста-

нин // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. VI научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т.VII -Харьков, 1998,-с. 152 - 157.

45.Производные 1,2.4 - триазола, как перспективный класс новых соединений с диуретической активностью / Ю.Ф. Крылов, И.А. Титов, И.Н. Мутин, А.Г. Му-ляр, Е.А. Филина / «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. VI научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т.АЛН - Харьков,1998.- с.103 - 107.

46. Перспективы поиска новых антиагрегантов среди производных 1,2,4 - триазола / «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. VI научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т. VIII - Харьков,1998.- с.100 -103.

47. Нейротропная активность 3,4.5 - тризамещенных 1,2,4 - триазола / И.А. Титов, В.В. Шикова М.Г. Бакуменко, И.Н. Мутин, Б.Б. Самура // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. VI научно-практической конферетщи по созданию и апробации новых лекарственных средств. Т.VIII - Харьков, 1998.- с. 223 - 230.

48. Первичная фармакологическая оценка активности производных 3,4.5 - тризамещенных 1,2.4 - триазола / И.А. Титов, В.В. Шикова М.Г. Бакуменко, И.Н. Мутин, Б.Б. Самура, А.И. Панасенко, Ю.М. Мошура, И.Н. Шевченко, Е.Г. Кныш // «Лекарства - человеку». Межд. сб. научн. тр. VI научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств . Т.УШ - Харьков,1998.- с. 215 -223.

49. Производные триазола - возможность создания новых лекарственных средств для кардиологии / Муляр А.Г., Мутин И.Н., Крылов Ю.Ф., Лобанова Е.Г., Гаса-нов М.Т. // Тезисы докладов VI Российского национального конгресса "Человек и лекарство". Москва, 19-23 апреля 1999 г., с. 444.

Формат А - 4

Бумага офсетная N 1-80 г/м£ Усл. печ. л Тираж 1(?0 экз. Заказ N Ц

Отпечатано в УИО ММСИ Изд. лицензия ЛР N 040369

от 3.04.97 г. Москва 103473 Делегатская ул. 20/1