Автореферат и диссертация по медицине (14.00.03) на тему:Качественные и количественные изменения иммуноглобулина G сыворотки крови у больных диффузным токсическим зобом

1 5Ю 9 0

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ УССР КИЕВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭНДОКРИНОЛОГИИ И ОБМЕНА ВЩЕСТВ

На правах рукописи ГЛУШКОВА Ольга Васильевна

КАЧЕСТВЕННЫЕ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЖМУНОГЛОБУЛИНА 6 СЬШОРОТКИ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ДИФФУЗНЫМ ТОКСИЧЕСКИМ ЗОБОМ

14.00. 03 - Эндокринология

Автореферат диссертации на соиснание ученой степени кандидата медицинских наук

Нйев - 1990

Работа выполнена в Крьшском ордена Трудового Атасного Знамени медицинском институте.

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор К.©.Селиванова

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

Олейник В. А.

доктор медицинских наук, профессор Зелинский Б.А.

Ведущее учреждение - '

Харьковский научно-исследовательский институт эндокринологии и хшвш гормонов ИЗ УССР

Заката диссертации состоится " » О/оТА^р^ 1991)

(Г

часов на заседании специализированного совета

Д. 088»14.01 при Киевской научно-исследовательской институте эндокринологии и обиеия веществ ЦЗ УССР / 252114 , Киев, ул. Белгородская, 69 /.

С диссертацией иожно ознакомиться в библиотеке Невского научно-исследовательского института эндокринологии и оСыена веществ.

Автореферат разослан " & " (ЛКмА^р.1990 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских, наук

И. Ц. Шостак-Пасечник

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБСШ

альноеть темы. Диффузный токсический зоб /ДХЗ/ относится к наиболее распространенный заболеваниям щитовидной железы /Спесивцева В-Г.,1981 ; Старкова Н.Т.,1983; Балаболкин М.И.,1988; Панков Ю.А.,1988/. ДТЗ болеет 0,4% всех женщин, среда которых заболевание встречается в 5-8 раз чаще, чем среди мужчин /Blecher, 1981; Meng, 1988/. Огыечаешй в последнее время рост заболеваемости ДТЗ, отсутствие стойкой компенсации после консервативной терапии / Murakaoi et al., 1988/, частое оперативное лечение, рецидивы дтз, не имеыцие тенденции к уменьшению /Цариковская Н.Г. я соавт. ,1988,1989; Schleusener at al., 1988; de Bruln et al.,1988/', участившиеся случаи сочетания ДТЗ с аутоиммунным тиреоидитом /Катаров В.В. и соавт.,1985/, нейроофтальыологическими нарушениями /Одейник ВоА.,1986,1987,1988/ требуют уточнения патогенетических звеньев ДТЗ .

I Важную роль в развитии заболевания, по современным представлениям, играют тиреоидстимулнрующие аутоантитела к рецептору ТТГ тиреоцитоа /Щ>уни С.С. и соавт.,Î988; Tolpe et al., 1987; Dower at al., 1988/. Эти уникальные аутоантитела, относящиеся к иммуноглобулинам G /Igt}/, при взаимодействии с антигеном действуют на щиговвднуэ se лезу подобно ТТГ / Goretzki ot al., ISS?» Schleusen«? et ca., 1988; Uno et al», 1988/, и вызывают развитие тиреотоксикоза /Балаболкин М.И.,1988; Туракулов Я.X. ,1986,1989; ïaaashlta et al., 1986/. В литературе при большом количестве работ, посвященных изучению уровня основных классов иммуноглобулинов g,â,h в сыворотке крови больных ДТЗ, имеется очень мало сведений о качественных изменениях Xgtt при данной патологии, хотя отмечаются выраженные нарушения гуморального иммунитета, которые далеко не всегда

- -г-

можно объяснить только изменением количественного содержания имму-• ноглобулинсв. Впервые в работах Селивановой КЖ, Троицкого Г.Б. /1970-1913/, обнаруживших увеличение сС- и ^-глобулинов сыворотки крови у больных ДГЗ и изменение спектрололяриметрических характеристик ^-глобулина, находившихся в зависимости от степени тяжести заболевания, были высказаны предположения об изменении Фракционного состава ¡^-глобулина и его структурных характеристик. Б настоящее время не решен вопрос, насколько важны изменения в молекуле Хе^ при Д'ИЗ; данные о физико-химических свойствах сыворотки крова у больных тиреотоксикозом малочисленны. Для понимания молекулярных механизмов функционирования иммуноглобулинов больаое значение имеет исследование информационных изменений в этих белках, являющихся центральным звеном гуморального ншункте-та. Вышеизложенные сведения свидетельствуют о необходимости изучения структурных особенностей 1е<з , строения антигенсвязывашцего центра и фракционного состава этого иммуноглобулина, наиболее активно участвующего в иммунопатологических механизмах ДТЗ, для оценки клиншю-кмыунологических особенностей различных вариантов болезни и влияния на них проводимой терапии.

целью настоящей работы явилось изучение качественных и количественных характеристик иммуноглобулина б сыворотки крови у больных ДТЗ в сравнительном аспекте для уточнения иммунологических особенностей .заболевания и выявления роли нарушении иммунного статуса в развитии и поддержании аутоиммунных реакций при данной ПаТОЛОГИИ.

Задачи исследования:

Изучить уровень!еС сыворотки крови у больных ДТЗ в динамике, а также у больных гипотиреозом.

- з -

2. Исследовать фракционный состав сыворотки крови, соотношение его кислой и щелочной Фракции при дТЗ а зависимости от степени тяжести тиреотоксикоза, возраста больных и длительности заболевания, а также у больных гипотиреозом.

3. Исследовать доступность хромофоров щелочной фракции 1ео и 1 гаыма-гдобулиновой фракции сыворотки крови у больных дТЗ в сопоставления с гязестьэ тиреотоксикоза.

4. Изучить изоздектрические спектры сыворотки крови у больных дТЗ и изменения, возникающие в них под влиянием проводимой терапия.

Положения. выносимые на защиту

- при дТЗ наблюдается поЕшение содержания щелочной фракции

сыворотки крови,, характеризующейся увеличением жесткости молекулы в области ангигенсвязывавдёго центра, нарастащее парал -лельно тяжести заболевания и свидетельствующее о накоплении высокоаффинных, т.е. наиболее специфичных к антигенам антител. Образование высокоаффинных антител при ДГЗ является одним из механизмов иммунизации и аутоиммунизации;

- изоэлекгрические спектры 150 сыворотки крови у больных ДТЗ имеют более широкий диапазон рН, чем у здоровых, характеризуются преобладанием фракций со «елочными изоэлектричесшши точками и увеличением фракции Хей с р! 8,5-9>0, наиболее выраженным при рецидиве тиреотоксикоза, с которой,связывают основное тиреоидсти-ыулируадее действие 1йО . Лечение мерказолилоц незначительно смягчает эти нарушения и не позволяет достигнуть нормализации фракционного состава 1§а • -

Научная новизна работы.

В данной работе впервые для изучения 150 сыворотки крови

-

больных ДТЗ применен метод дифференциальной температурно-пертурба тонной спектрофотомегряи. Сочетание этого метода с ионообменной хроматографией на ДЕАЕ-целлюлозе позволило обнаружить при ДТЗ новый факт - повышение содержания щелочной фракции сыворотки крови, характеризующейся увеличением жесткости молекулы в области антигеневязыванщего центра, нарастающее параллельно тяжести заболевания. Полученные результаты позволяют по-новому рассматривать механизмы нарушения гуморального иммунитета гари ДТЗ.

Впервые проведено изоэлектрическое фокусирование сыворотки крови при ДТЗ с учетом степени тяжести заболевания в динамике лечения, обнаружившее, что изоэлектрические спектры у

больных имеют более широкий диапазон рН, характеризуются преобла-. ^

данием фракций со щелочными изоэлектрическими точками /р1/ и увеличением фракции с р1 8,5-9,0 , наиболее выраженным Яри рецидиве тиреотоксикоза. Лечение церказолилом не позволяет достигнуть нормализации фракционного состава .

Теоретическая и практическая ценность работы.

. Полученные в работе результаты о наличии качественных и код! чественных изменений 1еО сыворотки крови при ДТЗ имеют непосредственное отношение к выяснению механизмов нарушения гуморального иммунитета при данном заболевании. Использованный подход позволи. выявить информационные изменения в молекуле Хе& , касающиеся третичной и четвертичной структур исследованных иммуноглобулинов находящиеся в зависимости от тяжести тиреотоксикоза, которые явл: ются следствием нарушения иммунного ответа и одним из факторов а, тоиммунизации при ДТЗ.

Обнаруженные в ходе работы данные об изменениях качественны и количественных характеристик иммуноглобулинов о сыворотки кро

ви больных ДТЗ, нарастающих параллельно тяжести заболевания, и отсутствие норыализущего влияния на них проводимой антитиреоид-ной терапии необходимо учитывать при лечении тиреотоксикоза, как показатель сохракящихся иммунных нарушений, которые могут влиять на исход болезни /рац.предложения JSfi 1629 и 1636/. В комплексе лечебных мероприятий при ДТЗ, наряду с мерназолилом, следует шире попользовать методы шмукокоррекции. для внедрения в работу профильных учреждений здравоохранения одного из наиболее информативных методов электрофореза опубликовано информационное письмо "йзазлекхркческое фокусирование иммуноглобулина а сыворотки крови у больных диффузным токсичесшш зобом". Выводы работы используются в практике эндокринологического отделения областной больницу к».H.A.Семашко. Материалы диссэртации излагаются при чтении лекций и в процессе преподавания курса эндокринологии на кафедре факультетской терапии Б&ымского ордека Трудового фасного Знамени медицинского института.

I Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены II, Iii, 17 Республиканских съездах эндокринологов /г.Киев , 1977; г.Винница,1982; г.Львов,1387/, И Всесоюзном съезде эндокринологов /г. Ленинград, 198С/, П1 Украинском биохимическом съезде /г.Донецк,1977/, ка заседаниях фыыских научных обществ биохимиков, эндокринологов и терапевтов /197^> 1934, 1988/«

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, отражающих ее основные положения.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 155 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 таблицами а 23 рисунками и состоит из введения, главы обзора литературы, двух глав собственных исследований, заключения, выводов, рекомендаций для

практического применения. Библиографический указатель включает 369 источников, в том числе 144 работы отечественных и 2<5 - иностранных авторов. Имеется 7 приложений.

Приносу глубокую благодарность заслуженному деятели науки УССР, члену-корреспонденту. Академии Наук УССР, доктору биологических наук, профессору Герману Васильевичу .Троицкому за консультативную помочь при выполнении данной работы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Материалы и методы исследования. Для выполнения поставленных задач было обследовано 128 больных ДТЗ. Из них тиреотоксикоз средней тяжести диагностирован у 83 больных /64,8?./ и тяжелая форма тиреотоксикоза - у 45 больных /35,2/У- Среди обследованных 89, составили женщины и 10,9$ - мужчины в возрасте от 18 до 62 лет. Для сопоставления обследовано 14 больных гипотиреозом /у б из них гипотиреоз развился яосле операции по поводу ДТЗ, у 8 - причиной болезни, вероятно, явился аутоиммунный процесс/. Контрольную группу составили 77 практически здоровых лиц обоего пола в возрасте от 18 до 62 лет без отягощенного по ДТЗ анамнеза.

Наряду с общепринятыми мимическими обследованиями больных /расспрос, данные объективных, радиологических и лабораторных методов/, в работе использован ряд специальных исследовательских методик: определение содержания сывороточного 1еЗ с помощью радиальной иммунодвдфузии по щанчини в модификации Карюхиной Д.Н. и соавт. , изучение фракционного состава методом ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-целлюлозе и изоэлектряческого фокусирования /МЗФ/ в 1% растворе амфоликов. Лзнформация антигенсвязыващего центра щелочной фракции и ¿'-глобулина сыворотки крови изучалась методом дифференциальной температурно-пертурбационной спек-

трофотометрин /Д2ЛС/ на двухлучевом спектрофотометре "Зрссога ШГ таз «/Карл Цейс, ;;эна, ГДР/.

Полученные в процессе исследования цифровые данные обрабатывались по программе на ЗВ!1 ЕС 1060 методом вариационной статистики по Стьюденту /Лашш Г. ф. ,1980/.

Результата исследования и их обсуждение. Изучение соотноиения кислой и щелочной фракций 1й5 сыворотки крови методом ионообменной хроматографии на Д&АЕ-целлюлозэ у больных ДГЗ и рецидивом ДТЗ с тиреотоксикозом средней тяжести показало преобладание щелочной фракции, увеличенной по сравнении со здоровыми соответственно в 1,29 и 1,3 раза /Р<0,05 и £<0,001/. исследование щелочной фракции с помощью ДТДС выявило отсутствие конформационного перехода при температуре 28°-37°С л увеличение яеогкостн молекулы 1ев , о чем свидетельствует уменьшение количества пертурбируемых температурой тирозкнов /30,0-1,9% или 16,8-1,1 аминокислотных остатков/. Аналогичная, статистически достоверная/Р< 0,01/ закономерность отмечена при тиреотоксикозе средней тяжести и для ^-глобулинов: количество пертурбируекых температурой тирозинов уменьшилось до 2?,9-2,6% /15,6-1,5 аминокислотных остатков/.

Проведенное для уточнения характера изменений фракционного состава сыворотки крови у больных дТЗ с тиреотоксикозом средней тянести пзоэлектрическое фокусирование обнаружило, что изо -спектры /ИЭС/З^З имела более широкий, чем у.здоровых ладей, диапазон рН /на 3 рН/ и такхе характеризовались сдвигом в целочную гону. При этом наблюдалось увеличение фракция с р1 8,5-9,0 до 12,7-0,6%, превыЕакщее норму в 1,3 раза /Р-С0,0Ь/ и уменьиение фракции с р1 6,0-6,5 в 1,84 раза /до 8,^0,755, Р< 0,001/. Так как больные дТЗ при консервативном лечении длительно принимают антити-

реоидные препараты, ш сравнили исходные И5С Хеа в подгруппах -больных с впервые выявленным ДГЗ и ранее леченных, которые принимали мерказолил от 6-8 месяцев до 1,5-2 лет. ИЭС ХеО больных с впервые выявленным тиреотоксикозом средней тяжести имели несколько более,выраженный щелочной сдвиг, а фракция с р1 8,5-9,0 у них была увеличена до 14,2-0,955 /в 1,4 раза, Р<с0,01/. У больных ранее леченных мерказолилом, ИЭС ^е5 при поступлении в стационар имели несколько менее выраженный щелочной сдвиг, содержание франции с р! 8,5-9,0 было несколько ниже, чем при впервые выявленном ДТЗ, а фракция с р! 6,0-6,5 содержала белка больше, чем во всей группе /9,''1-0,Р< 0,001/.

При тяжелой форме тиреотоксикоза у больных ДТЗ и рецидивом ДТЗ содержание щелочной фракции по сравнении со здоровыми бы ло увеличено максимально - в 1,5 раза и составило 82,7-0,8% /Р^0,05/ и 84,7-3,001/. По данным дТГО, щелочная фракция 1еС у этой группы больных характеризовалась меньшим количеством пертурбируешз? температурой тирозинов, чем при ДТЗ с тиреотоксикозом'средней тяжести /Р<0,05/, свидетельствующим о ещё большей жесткости молекулы.

Исследование фракционного состава сыворотки крови у больных ДТЗ с тяжелой формой тиреотоксикоза показало, что изозлект-рофореграмш имеют более широкий диапазон рН, чем у здоровых, и обладают выраженным сдвигом в щелочную зону. При этом фракция 1еС с р1 8,5-9,0 была увеличена до 13,2^0,7% /в 1,3 раза, Р^0,05/, I фракция с р1 6,0-6,5 уменьшилась в 1,64 раза /Р<с0,01/, Следует отметить, что у больных с впервые выявленным ДТЗ исходные изо -спектры имели более узкий диапазон рН /4,5-10,0 рН/, сохраняли тенденцию к щелочному сдвигу; содержание во фракции с

- У-

р1 8,5-9,0 было таким ле, как во всей группе, но уровень фракции с р) 6,0-6,5 оыл несколько выше /10,5-0,6%, Р<0,0?/. У больных, леченных ранее мерказолилом, при поступлении в стационар И5С Хдс-характеризовались более широким диапазоном рН /5,0-12,0 рН/, аы-рахешюать щелочного сдвига была несколько больше, чей при впсЕые Быявхеннон ДГЗ, фракция с р1 8,5-9,0 увеличилась в 1,4 раза /до 13,6-0,8%, Р<0,05/, а фракция с р] 6,0-6,5 была меньше нормы в 1,9 раза /Р^0,01Д

У больных с рецидивом ДТЗ изменения фракционного состава х^л , по данным ИЭФ, практически не зависели от степени выраженности клинических проявлений тиреотоксикоза, я ИЗО отмечалось преобладание фракций со щелочными изоэлектрическшш свойствами. Однако содержание в 1б<1 Фракции с р! 8,5-9,0 у них было максимальным -15,3-0,855, что в 1,52 раза выше нормы /Р-С0,01/.

Анализ результатов проведенных исследований показал, что при ДТЗ увеличение содержания щелочной фракции сыворотки нрози связано только с тяжестью тиреотоксикоза и не зависит от длигеяь -ности заболевания и возраста больных. Данные ДТПС, свидетельствующие о статистически достоверном уменьшении количества пертурбируе-шх температурой мрозиаов по мере нарастания тяжести клинических проявлений.тиреотоксикоза /?< 0,05/, и отсутвие конформацаонного перехода в интервале температур 230-37°С, позволяют предположить, что при ДТЗ происходит накопление иммуноглобулинов с жесткой структурой, и узкой щелью антигенсвязывающего центра. Так как большинство тирозяновых остатков расположено в частично гидрофобной полости меаду вариабеяькшга доменами, участвующими в обрьзойлнии тигенсвязываэдего центра, а из 31 тирозинового остатка 88 рассоложено в Рав-фрагменте и только 2 - в Гс-фрагменте, то яирозчны йр. -

- ю -

ляются'хорошей естественной меткой на жесткость структуры в этой части молекулы /Ерр &Ь аХ. ,5 975; Завьялов В.П. ¡1978/. Чем узе ан-ткгенсвязывавдий центр, тем больше контактов между вариабельными доменами, образующими этот центр, и тем жестче структура этой части молекулы. Завьялов В.Г1./1978/ считает, что такими свойствами обладают наиболее специфичные /аффинные/ к определенным антигенам антитела. Объясняется это тем, что чем уже и глубже центр связи -вашш, тем больше возможностей взаимодействия между вполне опре ~ дбленныма шсокоаффкнньшн антителами и антигенами. Вааеизлокенные сведения интересны в том отношении, что в тиреоидстимулирующкх лев тиреоидсхимулирущий сайт формируется комбинацией тяжелой и легкой цепей в Рав-фрагмзате молекула / е* а!., 1976/, а 1ее ,

шделенные из сыворотки крови больных ДТЗ, связываются с тяреоэд-екш мембранами через Р/ав/^-фрагменгы /Ретрег в!., 19В1/. Кроме того, установлено, что Г/ав^-Фрагменгы, полученные при ДТЗ из , стимулируют накопление цМФ изолированными клетками щитовидной железы и могут влиять на образование тиреоидных гормонов /'СгеасЬ «ъ а1., 1985/. Следовательно, обнаруженные нами различия в количестве пертурбирусмых температурой тирозинов щелочной фракции 1е<5 сыворотки крови яри ДТЗ с различной степенью тяжести клинических проявлений тиреотоксикоза позволяют предположить наличие патогенетически обусловленных конформационных изменений з области антигенсвязывакдего центра молекулы, которые, вероятно, влияют на тяжесть патологического процесса и могут служить пусковых! механизмом для дальнейших изменений в структуре антитела. В настоящее время появляется все больые сведений о том, что связнва ние антитела с антигеном сопровождается конформационныыи измене -ш» антитела /Завьялов В.П. и соавг.,1979; Лйтман Г. и соавт.

1931/. Комбинация молекулы антигена со специфическим антителом, создаваемая нековалочтныш связями, исяет вызвать появление антигенных детерминант на ыолзкулз антитела, способных играть загнул роль в привлечении мздиагорных систем /Аяьбики Б. и соавт., 1982/. Ifc>:tbop:-iainioï:niis изменения в области аотигенсвязываэдего центра мрлзку.-л могут служить пусковым механизмом для дальнейших изменений в структуре антитела, результатом которых .таится активация оффекторкых цектроз, локализованных в Fc-фрагменте молекулы /Завьялов З.П.,1976/. Таким образом, изменение конформации антитела мозст привести к появлению на его поверхности новых антигенных детерминант, что, в своэ очередь, послухах основой аутоиммунных процессов з организма. Накопление антител с шразенньш аффинитетом к спрэделешатл антигенам uokst быть одет из- путей иммунизации -i аутс:п:муниз:эдга /Завьялов В.Л. ,1978/.

Учитывая шеедаеся литературные данные о том, что при ДОЗ тпрзо1ДО2имуА".фущима свойствами обладают фракции igG , ииеэдие лссоаекхрлческие точки /р1/ в пиронси диапазоне рН - от 6,0 до Ю,0 рН /АйеГйоГог et al., 1973; Bleoher, 1984/, КОННО предположить, что сбиаруаешме нами изменения язоэ лектрических спектров IsG з данной диапазоне рН, вероятно, связаны с основным патологически процессом. Увеличение содержания в IgS Фракции с р1 8,5 -9,0, максимально варгженное у больных с рецкднзоа ДТЗ, может быть обусловлено'тем, что именно с указанной фракцией связывают основное тпреопдетимулируядее действие ïgG при ДТЗ /2akaria , 1980; Groaoh et ni., 1986/. В области рН вьше 7,2, как известно, могут находится только два подкласса ГсО : rgci и isc2 /Глин Д и соавт.,1933/, к которым, главным образом, относятся тиреоидстп-лфлярувдпе адкгхела, направленные к рецептору ТТГ тиреоцитоз

- f 2 - .

/Parken, 1981; ÄIcLachlan et al., 198?; ffee-taaaet- ali, . 19S7A-Нельзя исключить, что причина обнаруженных наш при ДТЗ изменений фракционного состава Igß связана с переключением синтеза различных по своим свойствам подклассов иммуноглобулина Q . Полагают, что изменения в распределении подклассов igG у больных ДТЗ является результатом дисфункции Т-супрессоров, проявляющейся пониженной, по сравнению.со здоровыми, способностью подавлять секрецнэ общего подкласса IgGI /Davies et al., 1986/.

Преобладание щелочных фракций в XgG сыворотки крови, по сравнению с их содержанием в норне, при гипотиреозе как послеоперационном /71,9-2,5%, Р<0,001/, так и идаопатическоы /69,57-2,98% , Р <0,001/ , подтверждает определенную роль нарушений амунного ответа в исходах лечения ДТЗ. Действие тиреовдкых гормонов на га.щ -1ттб% опосредуется Т-систеыой, так как тирокскн ыодулирует вффекгы и содержание типических горыонов внутри ишуса /Безвэршенко И.А., 1988; Гриневич Ю.А. и ооавт«,1989/. В эксперименте установлено, что удаление щитовидной нелезы или введение тироксина характеризуются почти полной неспособностью Т-супрессороз проявлять сбои биологическую активность /¿йлыкев В.А. и соавт.,193?/» В основе недостаточное?!!Т-супрессоров у больных с аутокхиуцньаа заболеваниям щитовидной железы леаит косительство антигенов шл-Щ /АНад-а±о ,1984;1987/. За кынукорегуляторную функции щитовидной железы ответственны генетические факторы /зеЫсизепах', 1988/« При послеоперационном гипотиреозе после хирургического лечения по поводу ДТЗ, ло данный Оязйника В.А. и соавт./198?/, при нормальной содержании З-люлроцаяов уменьшено абсолютное а относительное кол!гчество Т-лиифоцитов, а уровень циркулируэдих иммунных комплексов повшен в 2 раза. Вэнфорнадаонно аутоантитела как стимулирующие, так и

блокирующие цШЬ-олосредованные процессы продукции тиреоадшх гормонов должны быть похожи, так как реагируют с одной и той же субъединицей рецептора ТТГ и обладают общей способностью угнетать связывание ТТГ с тиреоидшдш мембранами / БаЗ/Ш е* а!., 1986/.

Содержание в сыворотке крови больных ДТЗ при поступ-

лении в стационар было вьте, чем у здоровых лиц /11,3-0,44 г/л/, как при тиреотоксикозе средней тяжести /13,24^0,52 г/л, Р< 0,01/, так и при тяжелом /13,72-1,06 г/л, Р< 0,05/. После достижения медикаментозной компенсации, через 3-4 недели от начала лечения в стационаре, при тяжелой форме тиреотоксикоза и тиреоток -сикозе средней тяжести уровень практически не изменился,

а при рецидиве ДТЗ - незначительно увеличился. Аналогичные данные получены ТЗЪ-Ьегаал. е! а1. /1987/, показавшими, что и в течение шести месяцев лечения,тиреоататиками содержание общих

и 1еМ не меняется. Объясняется это, в определенной степени, особенностями метаболизма / АЦагшгшиь et а1.,

1967; Под У. и соавт.,1988/. Статистический анализ результатов, проведенный разностным методом при повторном обследовании больных ДТЗ в эутиреоидном состоянии, не выявил достоверных изменений в изоэлектрических спектрах 1г<? внутри сравниваемых групп. Фракционный состав XgG оставался измененным, достоверно отличаясь от такового у здоровых лиц. Следует также отметить, что после длительной терапии с применением мерказолила разница в изоспектрах 156 при тиреотоксикозе средней тяжести и тяжелом практически отсутствовала. У больных, которым по поводу ДТЗ после продолжительного применения тиреостатиков проведено хирургическое лечение, изменения в изоэлектрических спектрах выражены в большей степени, но и у них фракционный состав нор-

иализации не достигал. Таким образом, при ДГЗ в изоспектрах IgG и после достижения медикаментозной компенсации преобладали фракции со щелочными изоэлектрическими свойствами, что такае позволяет отнести эти антитела к шсокоаффинныы.

Отсутствие,значительных изменений в изоэлектрических спектрах igG под влиянием лечения ыерказолилоы, очевидно, закономерно. У части больных мерказолил лишь смягчает иммунологические на-руиения, и изменения, возникшие в клеточном звене иммунитета, сохраняются /Гаспарян Э.И. и соавт.,1977; Allanrtie et al., 1937, Murakani et al.,1988/. У такой категории больных в популяции лимфоцитов, инфильтрирующих щитовидную железу, по наблюдениям Tottersan et al. /1987/, через б месяцев от начала лечения про -должают преобладать ДВ+-полои1тельные т-хелперы. Дефицит Т-суп -рессорой во время проводимой терапии моз:ет даже нарастать, а доля активированных клеток - увеличиваться /Нгунанова Д.В. и соавт. 1986; Ludgate et al., 1984/. Несмотря на почти полную нормализацию в эутиреозе уровня В-лимфоцитов на переферпи /Каменецкая U.C. и соавт.,1979; кабаций Н.П.,1985/, среди них присутствуют клетки лаыяти, которые могут быстро обеспечить синтез высокоспз-цифичных антител / McXachlan et al., 1985/. Поюасеше цитотокси-ческой активности натуральных киллеров и подобных км клеток в щитовидной железе больных ДГЗ, не нормализуидееся под влиянием лечения, может служить причиной устойчивой активации В-клеток к избыточной продукции тиреоидстимулирувдих антител / Tezuka et al., 1988; Wang et al., 1988/. Образование тиреоидстиыулирующих антител в щитовидной железе больных остается повышенным и в зу- . ТИреОИДНОМ СОСТОЯНИИ /ïayloГ et al., 1984; de Bruin et al., 1988/. йти антитела, по данным Uno et al. /1988/ продолжают

определяться у 803 больных тиреотоксикозом в стадии медикаментозной компенсации. Характер распределения тиреовдстимулирующих антител по подклассам 1£й остается постоянным на протяжении 6-24 месяцев лечения антитлреоидныш препаратами, отражая реакцию организма на аутоантиген / МсЬасЫал. е* ах., 1987/. Общий уровень иммуноглобулинов сыворотки крови не отражает динамику ти-реоидстймулирупцих иммуноглобулинов /Олейник В.А. и соавт.,1989/. Образование антител —процесс, управляемый антигеном, а не запрограммированный з онтогенезе; и переключение классов и подклассов имеет огромное значение для иммунных механизмов / ТеаХс et ах., 1981/. "Созревание иммунного ответа" отражает отбор клеток, образующих более аффинные антитела, что очень важно для получения антител с высокой степенью сродства к антигену /Пол У. и соавт., 1939/» Сохраняющиеся на фоне приема гиреостатиков дефицит Т-суп-рессоров, высокое содержание активированных Т-клеток и не изменяющийся уровень тиреовдспшулирувдих иммуноглобулинов характеризую!; тяжелую форму ДТЗ /VoXpв et аХ., 1937; Олейник В.А. и соавт. 1989/- Нарушения иммунного ответа лежат в основе рецидивов ДТЗ, процент которых,по данным ряда авторов весьма еысок - от 12,5% до 70% /А1Хйгш2.о е-Ь аХ., 198?| Мигекаа! ейаХ., 1988; БсЬХеизе-пег et а1.,1988/. ' .

-- Таким образом, проведенное комплексное исследование качественных и количественных характеристик иммуноглобулина а сыворотки крови у больных ДТЗ позволило обнаружить изменения т^ , обусловленные, вероятно, особенностями иммунологического взаимодействия на различных этапах я исходным иммунным статусом, заявленные изменения структурных характеристик количественно увеличенной щелочной фракции 1еО , обусловлен, очевидно, активным участием

антител в развитии заболевания. Полученные данные дозволяют по-новому рассматривать механизмы нарушения гуморального иммунитета при ДТЗ и представляют значительный интерес для понимания патогенетических механизмов развития болезни.

ВЫВОДЫ

1. У больных диффузным токсический зобом изменяемся соотношение кислой и щелочной фракций иммуноглобулина а сыворотки крови, параллельно степени тяжести тиреотоксикоза увеличивается содержание щелочной фракции Хей . так, при тиреотоксикозе сред -ней гякести она, в среднем, была равна '12,1-0,1$, а при тагаелон-82,7-0,8%. У больных гипотиреозом, вне зависимости от шзвавшей его причины, преобладает щелочная фракция /11,9-2,5% и 69,57-2,93% соответственно при послеоперационном и идаопатичес -ком/.

2. Щелочная фракция сыворотки крови у больных диффузным токсический зобом по данным дифференциальной температурно-пертурбационной спектрофотометрии в диапазоне температур 20°~45°С характеризуется изменением физико-химических свойств в области антигенсвязываицего центра мояенулы: уменьшается количество пер-турбируешх температурой тирозкнов в зависимости от гякесзи заболевания; что свидетельствует об увеличении жесткости молекулы.

3. Проведенные исследования показали, что диффузный токаи -ческий зоб сопровождается модификацией третичной и четвертичной структуры Хев , в основном, затрагивающей центр связывания ан -тител.

4. У больных диффузным токсическим зобом методом изоэлект-рического фокусирования в амфолинах выявляется более широкий диа-

пазон нзозлектрнческих спектров сыворотки крова, /от 1,5 до 12,0 рН/ по сравнение со здоровыми лвдьш /5,5-10,0 рЦ/. Отмечается статистически достоверное увеличение содержания в об -ласти рН 8,0-10,0 при уменьшении его в области рН 6,0-8,0 . Нарастание фракции 1еЗ с р1 8,5-9)0, с которой связывает основное тиреоидстимулирувдее действие при ДТЗ, было максимально выражено при рецидиве ДГЗ с тиреотоксикозом средней тяжести и тяжелом.

5» Отсутствует корреляция между клинической компенсацией тиреотоксикоза после проведенного лечения мерказолилом и данными изоэлектрических спектров сыворотки крови, что позволяет использовать последние как показатель стабильности иммунологических нарушений, возможно, обуславливающих рецидив болезни, и тре-бувдих длительного применения антитиреоидной терапии в сочета -нии с ишунокоррегируицими средствами.

6. У больных диффузным токсическим зобом содержание в сыворотке крови достоверно увеличивается как при тиреотоксикозе средней тяжести, так и при тяжелом /13,24^0,52 г/л и 13,72-1,06 г/л соответственно/ по сравнению со здоровыми /11,3-0,44 г/л/ и не изменяется под влиянием проводимого лечения.

7» Полученные с помощью методов дифференциальной темпера-турно-пертурбационной спектрофотометрии, ионообменной хромато -графии на ДЕДЬ'-целлюлозе и изсэлектрического фокусирования данные об изменении качественных и количественных характеристик иммуноглобулина й сыворотки крови у больных диффузным токсическим зобом, по-видимому, связаны с патогенетическими особенностями процесса и позволяют по-новому рассматривать механизмы нарушения гуморального иммунитета, с которыми, возможно, связано отсутст-

- 18 -вне эд&екта от проводимой терапии при ДТЗ с тяжелой дорыой тирео токсикоза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РШМЕВДАЩИ Полученные данные об изменении качественных и количественны характеристик иммуноглобулинов G сыворотки крови больных ДТЗ, нарастающих параллельно тяжести заболевания, и отсутствие норма-лизуюдего действия на них антитиреоидной терапии необходимо учи» тывать при лечении тиреотоксикоза кап показатель сохраняющихся иммунных нарушений, которые могут оказать влияние на исход боле: ни /рад.предложение Ь® 1629 и- 1636/. Б комплексе лечебных мероприятий при ДТЗ, наряду с мерказолилоы, необходимо шире использовать возможные методы идаунокоррекции.

Проведенные исследования позволяют рекомендовать для внедрения в работу профильных учреждений здравоохранения один из Hat более информативных методов электрофореза - изоэлектрическое' фокусирование igG сыворотки крови для уточнения характера шмунож гических нарушений. Данные о применении указанного метода приведены в информационном письме "Изозлекгрическое фокусирование иммуноглобулина G сыворотки крови у больных диффузным токсически зобом", утвержденном республиканской проблемной.комиссией, прок кол ШЗ от 01.07.88 г.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТШЗ ДИССЕРТАЦИИ 1. Структурные характеристики гамма-глобулина и иммуноглоб, лина G сыворотки крови при некоторых патологических состояниях // III Украинский биохимический съезд.Тез. докл.- Донецк,1977»-С.-306-30?/соавт.; Селиванова К.Ф., Корниенко Н.В,/

2- Структурные изменения белков крови при нарушении фуняци щитовидной железы7/ иехаиизм действия гормонов, патогенез, леч

шш, профилактика а эпидемиология эндокринных заболеваний / П съезд эндокринологов УССР. Тез. докл.- Киев, 1977. - С.270-271. /Соавт. Селиванова К.Ф., Прикуп A.B./

3» Сопоставление качественных характеристик белков сыворотки крови, морфологических изменений миокарда и печени у кроликов // Физиология и патология органов дыхания и кровообращения. - Уарысов, 1977.- С.40-44./Труды Крым.иед.инст.- Т.74 /Соавт.: Галахин H.A., Павлик В.Г./

4» Изучение субфракционного состава и структурных характеристик иммуноглобулина G при некоторых патологических состоя -ниях // Вопросы мед,химии.- 1979, 182.- С. 123-128. /Соавт..-Троицкий Г.В., Селиванова К.Ф., Корниенко Я.В., Завьялов В.П./

5- Молекулярные аспекты патологии щитовидной железы // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической зндокриноло -гии./Тез.Респ.конф.- Харьков, 1979. - С.280-281 /Соавт.Селиванова К.'й.; Троицкий Г.В., Прикуп A.B./

б. Изучение изменчивости альбумина и иммуноглобулина С сыворотки крови у больных с нарушением функции щитовидной железы // II Всесоюзный съезд эндокринологов. Тез. докл.- Ленинград, 1281. ~ С.517-518. /Соавт.¡Селиванова Я.Ф., Троицкий Г.В., Прикуп A.B., Забашта В.М./

7- Кэцформационкые изменения иммуноглобулина G и гамма -глобулина сыворотки крови в генезе'диффузного токсического зоба // III съезд эндокринологов УССР. Тез. докл!- Винница, 1982. -С.267-268. /Соавт.: Селиванова К.Ф./

8. Изменение свойств альбумина и ишуноглобулшов й сиво -ротки крови у больных диффузным токсическим зобом // эндокринология: Респ.мекведомств.сб.- Выл. 15>- Киев, 1985.- С.72-75.

/Соавт.:Селиванова К.Ф., Прикуп A.B./

9. Изменения изоэлектрического спектра иммуноглобулина G сыворотки крови у больных диффузным токсическим зобом в динамике лечения // 1У съезд эндокринологов УССР. Тез. докл.- Львов, 1987. - С.87 /Соавт.:Селиванова К.Ф., Косик О.Г./

10. Изоэлектрические спектры иммуноглобулина g сыворотки крови у больных диффузным токсическим зобом в динамике лечения // Эндокринология: Респ.межведомств, сб.- Шд. 18.- Киев, 1988.-С.92-95.

11. Изоэлектрическое фокусирование иммуноглобулина G сыворотки крови у больных диффузным токсическим зобом: Информ. письмо - Киев, 1988. - 3 с. /Соавт.:Косик О.Г., Селиванова К.Ф., Троицкий Г.В./