Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Изучение популяций и субпопуляций лимфоцитов и гуморального иммунного ответа у беременных с очагами инфекции урогенитальной локализации

РГо СД о 3 ФЕВ 1397

На правах рукописи

КОНОВАЛОВА Татьяна Николаевна

ИЗУЧЕНИЕ ПОПУЛЯЦИЙ И СУБПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА У БЕРЕМЕННЫХ С ОЧАГАМИ ИНФЕКЦИИ УРОГЕНИТАЛЬНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ

14. 00. 36 - аллергология, иммунология

Автореферат диссертации на сонскание учено» степени кандидата медицинских наук

Новосибирск. 1996

Работа выполнена в Институте медицинской и биологической кнберне тики СО РАМН.

Научные руководители: доктор биологических наук,

профессор Аутеншлюс А.И. кандидат медицинских наук Анастасьева В.Г.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

член-корреспондент РАМН Трунова Л.А.

кандидат медицинских наук Черных Е.Р.

Ведущая организация НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ

ИНСТИТУТ ВАКЦИН И СЫВОРОТОК

имени И.И. МЕЧНИКОВА РАМН

Защита состоится_на 'заседании диссертационного совета Д 001. 01. 01 в Институте клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, 91 Ядринцовская 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Инстптуга клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск, 91 Ядринцовская 14.

Автореферат разослан.

Ученый секретарь

диссертационного Совета "

кандидат биологических наук Кудаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Антенатальная охрана плода относится к актуальным медицинским проблемам, так как большинство причин заболеваемости новорожденных, мертворождаемостн н неонатальной смертности возникает антенатально и на первом месте среди них стоят инфекционно-воспалительные заболевания беременной женщины [Батырова А.К., Стамкулова Т.А. 1991, Киселева Т.В. 1994, Berge Р 1990]. Инфекционно-воспалительные заболевания приводят к таким осложнениям беременности как угроза самопроизвольного прерывания беременности, невынашивание п недонашивание беременности, внутриутробная гибель плода или эмбриона, развитие поздних гестозов, что приводит к осложнениям в родах и послеродовом периоде как для матери, так и для новорожденного. Особое значение при развитии патологического течения беременности имеют очаги инфекции уроге-ннтальной локализации [Кошелева Н.Г. 1989, Башмакова М.А., Калашникова Е.П1995, Ryan G. 1990].

Иммунным механизмам придается значительная роль в поддафжа-иии физиологической беременности, установлена и прямая заинтересованность системы иммунитета при ее патологии. [Billington W.D. 1993, Dudley D.J. 1993, Sabahi E 1993]. Неспособность к адекватному иммунному ответу у матери можегг быть причиной патологического течения беременностн [Gotlieb W. Н. 1992].

Под действием различных факторов происходят нарушения в иммунной системе человека, что способствует хронизации инфекции и развитию вторичного иммунодефицита у беременных женщин. Иммунопатологические реакции вызывают дестабилизацию всего гомеоста-за, что создаег основу для периодических обострений инфекционно-воспалительных заболеваний [Фейзулла М.Ф. 1990].

Изучение состояния иммунной системы у женщины при беременности, осложненной бактериальной инфекцией урогенитальноп локализации, разработка на этой основе диагностических критериев патологического процессм является актуальной задачей современно]'! медицины, а ее решение позволит оценить состояние защитных сил организма беременной и своевременно провести рад лечебных мероприятий для профилактики инфекциопно-воспалительных осложнений у матери и новорожденного.

Цель работы: Изучить состояние иммунной системы у здоровых, беременных и у беременных женщин с очагами инфекции урогени-тальной локализации, выявить иммунологические критерии наличия инфекционно-воспалительных заболеваний урогенпталыюй локализации у беременных женщин.

Задачи исследования:

1. Изучить количественные характеристики популяций и субпопуляций лимфоцитов у беременных женщин без очагов и с очагами бактериальной инфекции урогенитальнон локализации, с прогрессирующей беременностью и с неразвивающейся беременностью и патологией плодного яйца.

2. Изучить гуморальный иммунный ответ на антиг ены грамотрн-цательных энтеробактерий, стрептококка группы В, пневмококка, золотистого стафилококка у беременных женщин с очагами бактериальной инфекции с прогрессирующей беременностью, с неразвивающейся бе-ремешюстыо и патологией плодного яйца, а также у здоровых беременных.

3. Изучить гуморальный иммунный ответ на нативную и денатурированную ДНК у здоровых беременных и у беременных с бактериальной инфекцией с прогрессирующей беременностью, с неразвивающейся бд>еменностью и патологией плодного яйца.

4. На основе проведенных исследовании определить иммунологические критерии инфекционно-воспализельных заболевании урогени-талыюн локализации у беременных жешцпп.

5. Предложить комплекс методов обязательного обследования беременных женщин с целью выявления у них очагов инфекции, ослож1 непня течения и исхода беременности.

Научная пошипи.

1. Впервые проведено комплексное исследование, характеризующее популяции и субпопуляции лимфоцитов и гуморальный иммунный ответ па бактериальные антигены и ДНК у здоровых беременных и у беременных с очагами инфекции урогенитальион локализации.

2.Впервые установлено, что при повышенных уровнях антител к бактериальным антигенам и ДНК и сочетании с нормативными показателями популяций и субпопуляцнй лимфоцитов у здоровых женщин пе отмечается угрозы прерывания беременности.

3.У беременных женщин при ннфекциоино-воспалнтельных заболеваниях урогенитальной локализации происходит снижение относительного содержания СД7+ (все Т-клетки), СДЗ+ (зрелые Т-лимфоцнты), СД4+ (Т хелперы/иидукторы), СД8+(Т-супрессоры/цитотокспческне), СД16+ (натуральные киллеры) и повышение о тносительного содержания СД22+ (В клетки) - лимфоцитов на фоне высокого уровня антител к бактериальным антигенам и ДНК, что свидетельствует о развитии иммунного ответа па инфекционный агент, при котором Т-зависнмая нммуносупрессня снижается, что приводит к развитию угрозы прерывания беременности пли к неразвивающейся беременности.

4.Установлено, что иммунологическими критериями инфекционо-воспалительного заболеваний урогенитальной локализации являются:

- снижение относительного содержания СД7+, СДЗ+, СД4+ , СД8+, СД25+- клеток и повышение СД22+- и СД71+ - лимфоцитов в сочетании

с повышенными уровнями АТ к бактериальным АГ (БАГ) и денатурированной ДНК.

Практическая ценность работы.

Практическая ценность работы заключается в том, что предложен комплекс иммунологического обследования беременных женщин, включающий в себя: определение относительного содержания популяций и субпопуляций лимфоцитов, а гакже определение уровня АТ к бактч^шальным антигенам (Яс гликолипиду А, тейхоевой кислоте, АГ пневмококка и стрептококка группы В) и ДНК. На основании данного обследования можно судить о наличии инфекционно-воспалительного процесса независимо от клинических проявлений заболевания.

При повышении уровня АТ к бактериальным антигенам и ДНК в сочетании со снижением количественных характеристик популяций и субпопуляций лимфоцитов необходимо провести дополнительные обследования для выявления инфекционно-воспалителыюго заболевания с последующим лечением.

Результаты исследования и основные рекомендации используются в лечебно-диагностической работе Муниципальной гинекологической больницы № 2 и родильного дома № 1 г. Новосибирска.

На защиту выносятся следующие положения :

1. У беременных женщин с очагами инфекции урогенитальной локализации происходит снижение относительного содержания СД7+, СДЗ+, СД4+, СД8+ и СД16+, СД25+ - лимфоцитов и повышение СД 22+ - клеток по сравнению со здоровыми женщинами с физиологическим течением беременности.

2. У беременных женщин с неразвивающейся беременностью и с патологией плодного яйца происходит снижение относительного количества СД7+, СДЗ+, СД4+, СД8+ и СД16+ - лимфоцитов и повышение

СД 22+ - клеток по сравнению со здоровыми женщинами с физиологическим течением беременности.

З.У беременных женщин с острыми и хроническими очагами инфекции урогениталыюй локализации, а также у женщин с неразвивающейся беременностью и патологией плодного яйца определяются повышенные уровни АТ к Яе гликолипнду А , тенхоевой кислоте, полисахариду стрептококка группы В, к нативнон и денатурированной ДНК. 4.Наличие очага инфекции в организме беременной женщины приводит к Т-клеточной иммунной недостаточности н, особенно, к снижению Т-зависимой иммуносупрессии, что является причиной патологического течения беременности.

Апробация диссертации.

Основные положения диссертации доложены на Юбилейной пятой научно- практической конференции врачей, посвященной 50-летию Победы в Великой Отечественной Войне 1941-1945 гг. /Новосибирск 1995/ ; на XI научной кож)^енции врачей "Актуальные вопросы современной медицины" /Новосибирск 1996/; на республиканской научно - практической конференции "Актуальные вопросы перинатоло-гии" /Екатеринбург 1996/; на семинарах в ИМБК СО РАМН и ИКИ СО РАМН /Новосибирск 1996/.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

Структура н объем диссертации: Диссертация содержит 107 листов машинописного текста и содержит 14 таблиц и 4 рисунка. Библиография включает 177 источников, из них 127 отечественных и 50 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Всего было обследовано 138 бq)eмeнныx женщин в сроках от 6 до 30 недель беременности.

Клиническое наблюдение за переменными проводилось па базах отделении патологии беременности г. Новосибирска. Клиническое обследование беременных включало в себя:

I. Традиционные методы исследования.

II. Специальные методы диагностики гешгтальиой инфекции.

III. Ультразвуковое сканирование.

IV. Определение иммунного статуса.

1. Определение относительного содержания популяции и субпопу-ляцни лимфоцитов проводили методом непрямой нммунофлюоресцен-цни с использованием мопоклонллышх антител, производства НПЦ "Медбиоспсктр" г. Москва. В работе использованы ИКО 87 (СД7+)-маркеры всех Т- лимфоцитов, ИКО 90 (СДЗ+)- маркеры зрелых Т-лимфоцитов, ИКО 86 (СД4+)- маркеры Т- хеллеров/нидукторов, ИКО 31 (СД8+)- маркеры Т - супрессоров/цитотоксическнх лимфоцитов, ИКО 91 (СД22+)- маркеры В- лимфоцитов, ИКО 116 (СД16+)- маркеры натуральных киллеров, ИКО 20 (СД38+)- маркеры активированных Т- лимфоцитов, ИКО 105 (СД25+)- маркеры рецепторов ннтерлейкина - 2, ИКО 92 (СД 71+)- маркеры рецепторов трапсферрпна, И ПО 4 (СД95+)- FAS антиген опосредующий arronroi. Определение популяций и субпопуляцпй лимфоцитов проводили по инструкции НПЦ "Медбиоспсктр" г. Москва.

2. ИФА с бактдлшльнымп АГ.

Для изучения гуморального иммунного ответа к бактериальным АГ . были исполыовпим следующие нммуноферментные тест-системы: Г) Для выявления AT к АГ грамотрицательных энтеробактерии -Re гликолипиду А (Re-ГЛ-А) (производство фирмы "Илья Мечников" г. Москва.

2) Для выявления AT к АГ полисахарида пневмококка (производство фирмы "Илья Мечников" г. Москва).

3) Для выявления АТ к АГ стрептококка группы В (производство ПМЦ "Снбмедприбор" г. Новосибирск \\ фирмы "Илья Мечников" г. Москва.)

4) Для выявления АТ к АГ золотистого стафилококка - тейхоевой кислоте (производство фирмы "Навила" г. Москва).

5) Для выявления АТ к нативной и денатурированной ДНК (производство ПМЦ "Снбмедприбор" г. Новосибирск).

ИФА проводили согласно прилагаемым к тест-системам инструкциям. Результаты учитывали с помощью нммуноферментпого анализатора АИФ - Ц - 01 С (ПО "Витязь" г. Витебск). При обработке результатов ИФА использовался коэффициент К = До/Дк, где До- оптическая плотность продукта реакции исследуемой сыворотки, Дк - оптическая плотность продукта реакции серонегативпой (контрольной) сыворотки. Положительными считались результат!,! при К>1, 20 для ИФА с АГ золотистого стафилококка , стрептококка группы В, на-Т1ГВНОН и денатурированной ДНК, при К>2,0 для ИФА с А Г пневмококка п при К> 1, 10 для ИФА с ЯеГЛ-А.

Данные обработаны статистически, дocгoвq)нocп> различий между средними арифметическими значениями сравниваемых показателей определяли с помощью критерия Стыодента , коэффициент корреляции определялся методом рангов по формуле:

6]Г (Кх-ЯуУ-

Р= I - —. -,-:- , [Лакин Г.Ф. 1980].

п(п - 1)

На основании ведущего клинического диагноза все обследованные женщины были разделены на следующие группы:

Женщины с прогрессирующей беременностью:

1. Здоровые женщины с физиологическим течением беременности -контрольная группа (11) человек.

2. Беременные женщины с хроническим пиелонефритом в стадии ремиссии без генитальной инфекции в период обследования составили 2-ю группу (29 человек).

3. В 3-ю группу вошли 20 женщин с обострением хронического и с острым гесгационным пиелонефритом.

4. Беременные женщины с генитальной инфекцией без признаков внутриматочной инфекции (ВМИ) (34 человека) вошли в 4-ю группу.

5. Бq)eмeпныe женщины с ВМИ (27 человек) составили 5-ю группу.

Ввиду того, что при обследовании бдэеменных встречалась нqJaз-

внвающаяся бq)eмeннocть и патология плодного яйца, была сформирована особая группа № 6 , которая, в свою oчq)eдl>, на основании состояния здоровья беременных подразделялась на 3 подгруппы:

6А - клинически здоровые женщины (без проявления генитальной и эксграгенитальной инфекции во время настоящей беременности) - 6 человек . У беременных этой подгруппы диагностирована: атмбрио-ния II типа и внутриутробная гибель эмбриона .

6Б. - беременные с острыми генитальными и экстрагенитальными воспалительными заболеваниями - 5 человек, Среди беременных этой подгруппы была выявлена внутриутробная гибель эмбриона, пузырный занос и прогрессирующая отслойка плодного яйца.

6В. - Беременные женщины с хроническими очагами инфекции генитальной и эксграгенитальной локализации - 6 человек. У беременных выявлялись: прогрессирующая отслойка плодного яйца, внутриутробная гибель зародыша, анэмбриония II типа, пузырный занос. По отягощенности акуц^)ского анамнеза женщины 6 группы практически не отличались между собой. Все женщины 6 группы находились в первом триместре бq>eмeннocти. Им произведено выскабливание сте

мок полости матки и произведен цитогенетический анализ ворсин хориона. Хромосомная патология в этой группе отсутствовала.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

(.Количественные характеристики популяций и субпопуляций лимфоцитов у беременных женщин.

Данные, полученные при определении относительного содержания популяций и субпопуляций лимфоцитов представлены в таблице № 1. Из этой таблицы видно, что по относительному содержанию СД7+ лимфоцитов (Все Т- клетки), СДЗ+ клеток (зрелые Т- лимфоциты) и СД4+ лимфоцитов (Т- хелперы/индукторы) отмечаются различия в зависимости от состояния здоровья беременных женщин.

Так при хроническом пиелонефрите вне обострения генитальной инфекции без признаков В МИ происходит достоверное снижение относительного количества СД7+ клеток и СДЗ+ клеток по сравнению со здоровыми беременными женщинами. Еще большее снижение этих показателей происходит при обострении хронического или развитии острого гестационного пиелонефрита, а также при ВМИ, которое достоверно отличается от аналогичных как у здоровых женщин, так и у женщин с хроническим пиелонефритом в стадии ремиссии и генитальной инфекцией без ВМИ .

По относительному- содержанию СД8+ (Т- супрессоры I цито-токсические) бq)eмeнныe характеризуются следующим: самые высокие значения относительного содержания СД8+ клеток отмечены у женщин 1 (контрольной) группы . Выраженное снижение СД8+ клеток отмечено у женщин 2, 3, 4 и 5 групп, достоверно отличающееся от показателей в 1 группе.

Что касается СД22+клеток (В-лимфоциты), то у беременных женщин с острыми или хроническими очагами инфекции урогенитальной

Относительное содержание популяций и субпопуляций лимфоцитов

№ л/п Группы обследовании:; женщин Лимфоциты

СД7" сдз+ СД4" сдз +

1. Здоровые женщины с физиологическим течением беременности п= 11 72,0±1,5 (60—76) р1,2<0,001 р1,3<0,001 64,8±0,4 (58—72) р1,2<0,001 р1,3<0,001 47,6±2,3 (32—52) р1,2<0,001 р1,3<0,001 39,8±2,9 (38—46) р1,2<0,001 р1,3<0,001

2. Беременные с хроническим пиелонефритом вне обострен, п = 29 53,6±2,5 (46—69) р2,3<0,01 53,3+0,9 (50—57) р2,3< 0,001 34,9±1,0 (22—44) р2,3< 0,001 24,8±1,0 (20—32)

3. Беременные с обострением хронического и о. гестационным пиелонефритом п = 20 46,0±1,2 (30—50) рЗ,4< 0,001 44,6+1,1 (30-48) рЗ,4<0,02 29,4±1,2 (20—40) рЗ,4<0,02 22,9±1,3 (10—32) рЗ,4 <0,05

4. Беременные с генитальной инфекцией без ВМИ п = 34 56,4±1,0 (50—66) р4,1 <0,001 р4,5< 0,001 53,7+1,1 (48—64) р4,1 <0,001 р4,5 <0,001 35,3±1,8 (28—50) р4,1 <0,001 р4,5 <0,001 26,6±1,1 (18—36) р4,1< 0,001

5. Беременные с ВМИ п = 27 43,5±0,9 (38—50) р5,1 <0,001 р5,2<0,01 41,4+1,0 (36—51) р5,1 <0,001 р5,2< 0,001 26,5±1,1 (20—38) р5,1 <0,001 р5,2< 0,001 24,5±1,7 (12—28) р5,1 <0,001

Примечание: в таблице приведены значения р только при достоверном различии

локализации (2, 3, 4, 5 группы) происходит достоверное увеличение этого показателя по-сравнению со здоровыми беременными (1 групп;:).

При сравнении относительного количества СД16+ лимфоцитов (МК-клетки) отмечено достоверное снижение этого показателя у женщин 2-5 групп по сравнению с женщинами 1 q)yппы.

Относительное содержание СД38+-клеток (маркеры активированных Т-лимфоцитов) было самым высоким у женщин с острой гени-тальной инфекцией, но различия с контрольной группой не были достоверными.

У беременных с острой генитальной инфекцией и, особенно, у женщин с внутриматочной инфекцией отмечалось достоверное снижение относительного содержания СД25+- лимфоцитов (маркеры рецепторов ИЛ-2) по сравнению с контрольной группой женщин.

у беременных женщин 1—5 групп (М±ш) (min—шах) (р)

ЛимфоЩГП.1

СД4<7СД8 + СД22" СД16* СД38* СД25 + СД71 + СД95+

1,19+0,09 5,2±0,9 (3-8) pi ,2 <0,001 pl,3<0,001 20,0±0,9 (12—32) pl,2<0,02 pl,3<0,01 17,2+3,6 (10—22) 6,8+0,8 (4-8) 5,0+0,6 (3-6) pl,2<0,05 5,0±1,3 (2-8)

1,4±0,08 11,5±0,9 (6—20) р2,4<0,01 16,2± 1,1 (6—24) 15,1+0,8 (12—20) р2,4<0,02 5,5±0,6 (0-11) 7,2+0,7 (2-16) 5,0+0,8 (3-8)

1,3±0,09 10,5+0,9 (4—16) 15,8+1,1 (4—20) 15,6+0,9 (2—28) 6,7±0,9 (2—16) рЗ,5<0,02 7,3+0,8 (2—24) рЗ,1 <0,05 6,3+1,0 (2-10) рЗ,5<0,001

1,3+0,09 8,1 ±0,8 (4-16) р4,1 <0,001 16,5±1,2 (8-28) р4,1 <0,01 19,1+1,3 (6-32) 4,8±0,5 (0-12) р4,1 <0,05 7,9±0,8 (2-16) р4,1 <0,01 р4,5<0,01 5,7+1,1 (2-8) р4,5<0,01

1,25±0,09 9,5±0,9 (4—18) р5,1 <0,001 15,9+1,0 (8—28) р5,1 <0,01 15,3+0,8 (2—26) 4,3±0,5 (0—10) р5,1 <0,01 4,8±0,7 (0-8) р5,2<0,05 2,0+0,01 (0-5) р5,1 <0,01 р5,2<0,01

между средними величинами.

При анализе соотношения СД4+/ СД8+ достоверных ра зличий между группами не выявлено.

При анализе относительного количества популяций и субпопуляций лимфоцитов у женщин 6А, 6Б и 6В подгрупп получены результаты, представленные в таблице № 2, из которой видно, что по q>aBHe-ииго с ко1гг]1ольной щуплой беременных женщин отмечается снижение относительного содержание СД7+, СДЗ+, СД4+ и СД8+ лимфоцитов у женщин 6А, 6Б и 6В групп, причем наиболее выраженные различия отмечены по субпопуляциям СД8+. По данным литературы известно, что в предотвращении отторжения эмбриона особую роль играют Т- супрессоры, количество которых увеличивается с 8 недели беременности [Валецкпй В.А. 1988, ЧернышовВ.П, Радыш Т.В., Валец-кий В.П. 1989, ШломаД.В., Терпиляяс О.И., Созанский O.A. 1991]. При

Относительные показатели клеточного иммунитета у женщин с неразвивающейся беременностью и патологией

плодного яйца (М±т) (min— max) (р)

№ Группы обследованных Лимфоциты

п/п женщин СД7 + сдз' СД4 + СД8 + СД4д / СД8 + СД22 + СД16 +

1. Здоровые женщины с физиологическим течением беременности п = 11 72,0±1,5 (60-76) pl,2<0,01 pl,3 <0,001 64,8+0,4 (58—72) pl,2<0,01 pl,3<0,001 47,6+2,3 (32—52) р 1,2 <0,01 pl,3 <0,001 39,8 + 2,9 (38—46) pl,2 <0,001 pl ,3 <0,001 1.19±0,09 5,2±0,9 (3-8) 20,0±0,9 (12—32)

2. (6А) Клинически здоровые беременные с патологией плодного яйца п = 6 62±2,4 (48-68) р2,3<0,01 57,3±2,2 (50—58) р2,3 <0,01 34,8+3,1 (21-46) р2,3 <0,001 24,4+2,5 (22—30) р2,3<0,05 1,42+0,23 7,0+0,9 (3—12) 18,0±2,9 <6—28)

3. (6Б) Женщины с острыми генитальными и экстрагенитальными восп. заболеваниями и патологией плодного яйца п =5 43,4+4,4 (28—52) рЗ,4<0,05 29,6±6,0 (24—32) рЗ,4<0,02 27,6+1,9 (22—34) рЗ,4<0,05 16,5+1,7 (14—18) рЗ,4<0,02 1,06±0,1 6,4+1,8 (4—12) 22,0+2,0 (12—32) рЗ,4<0,05

4. (6В) Женщины с очагами хронической экстрагениталыюй инфекции и патологией плодного яйца п = 6 56,3±3,7 (50-66) pl ,4 < 0,01 52,0±4,1 (48-56) pl,4<0,02 30,0±4,7 (24-42) pl ,4 <0,01 28,0±3,7 (16-36) pl ,4<0,01 1,07±0,22 4,5±0,7 (3-5) 14,0±2,9 (10-20)

Примечание: в таблице приведены значения р только при достоверном различии между средними величинами.

патологии плодного яйца у женщин 6А q>yппы было получено примерно 2- кратное снижение относительного количества СД8+ клеток. Учитывая, что женщины 1 группы и женщины 6А группы отличались между собой только тем, что у последних имелась патология плодного яйца, выявленные изменения в иммунном статусе можно рассматривать как нарушение способности организма женщины адекватно реагировать на появление функционально новой системы - "мать-плацента-плод", причиной которого можно предположить наличие латентно протекающего инфекшюпно-воспалителъного заболевания.

У беременных 6Б подгруппы отмечены самые низкие показатели субпопуляций Т-лимфоцнтов, достоверно отличающиеся как от показателей женщин 1 группы, так и от показателей женщин 6А подгруппы. Низкий процент клеток, имеющих маркеры СД7+, СДЗ+ и СД8+, можно объяснить наличием у женщин патологии плодного яйца, при которой, на примере 6А группы, происходит снижение относительного содержания популяций и субпопуляций Т- лимфоцитов, а также наличием острых инфекционно- воспалительных заболеваний, при которых отмечается развитие иммуно дефицитных состояний.

Достоверных различий по СД22+ клеткам у женщин 1 группы, 6 А и 6Б подгрупп не выявлено, так же как и по СД16+ лимфоцитам.

У беременных, входящих в 6В подгруппу, сохранялось достоверно низкое относительное содержание СД7+, СДЗ+, СД4+ и СД8+ лимфоцитов по сравнению с женщинами 1 группы, но в то же время оно было достоверно более высоким по сравнению с женщинами 6Б подгруппы (беременные с острыми гениталыгыми и экстрагенитальными инфек-ционно-воспалительными заболеваниями). Относительное содержание натуральных киллеров у женщин 6Б подгруппы было самым высоким.

Соотношение СД4+/ СД8+ было самым высоким в 6А подгруппе, но различия между группами были недостоверными.

Средние значения ИФА (К) с бактериальными антигенами у женщин с прогрессирующей беременностью (М±ш) (р)

№ Группы обследованных Бактериальные антигены

п/л женщин АГ пневмококка Re ГЛ-А Тейхоевая кислота Полисахарид стрептококка группы В

1. Здоровые женщины с физиологическим течением беременности п= 11 0,92+0,05 pl ,2< 0,001 pl ,3 <0,02 0,95+0,08 pl,3<0,05 1,08+0,07 pl,3<0,001 0,99±0,08 pl ,2 <0,01 pl,3<0,01

2, Беременные с хроническим Пиелонефритом вне обострения п = 29 1,50+0,11 1,14+0,05 1,24+0,08 р2,3<0,05 1,31+0,08

3. Беременные с обострением хронического и о. гестационным пиелонефритом п = 20 1,51 ±0,15 1,20+0,07 1,50±0,09 1,39+0,10

4. Беременные с генитальной инфекцией без ВМИ п = 34 1,52±0,10 р4,1 <0,001 1,14+0,06 1,40±0,07 р4,1 <0,001 1,23+0,06 р4,1 <0,02

5. Беременные с ВМИ о = 27 1,36+0,11 р5,1 <0,01 1,15+0,05 р5,1 <0,05 1,47+0,09 р5,1 <0,001 1,24+0,06 pl,5<0,02

Примечание: в таблице приведены значения р только при достоверном различии между средними величинами.

При определен™ абсолютного содержания популяций и субпопуляций лимфоцитов достоверных различий ни в одной группе и подгруппах ни по одному показателю не получено.

При изучении результатов ИФА с БАГ у женщин с прогрессирующей беременностью получены данные, представленные в таблице № 3, из которой видно, что самые низкие средние значения К со всеми БАГ отмечались у женщин 1 группы, у них же реже всего выявлялись повышенные уровни АТк БАГ (рис. I). С АГ пневмококка повышенных значений ИФА у женщин контрольной группы не было вообще, с 11е-ГЛ- А и тенхоевой кислотой они встречались в 28,6% случаев, с полисахаридом стрептококка группы В в 2 раза реже - в 14,3% случаев. Диагностически значимые величины К с АГ пневмококка чаще всего отмечались у жеицщн с хроническим пиелонефритом вне обост

1 группа 2 группа Эгруппа ¿группа бгруппд.

□ АГ Пневмококка

В ИеГЛ-А

□ Тейхоевая кислота

□ Полисахарид стрептококка группы В

Рисунок 1

Частота встречаемости повышенных уровней АТ к БАГ у женщин 1 - 5 групп

рения (2 гр.) - в 20% случаев. Беременные этой q)yппы значительно чаще имели очаги хронической инфекции орг анов дыхания. В 3 группе женщин с хроническим пиелонефритом в стадии обострения и с острым гестационным пиелонефритом повышенные уровни АТ к АГ пневмококка встречались в 2 раза реже, чем у женщин 2 группы - в 10,5% случаев.

У беременных 4 и 5 групп повышенные значения ИФА с АГ пневмококка также встречались в небольшом проценте случаев - в 18,8 и 11,5% соответственно, средние значения К не достигали диагностически значимой величины, но достоверно отличались от показателей у беременных контрольной группы, различия же по средним значениям К между 2,3,4 и 5 группами были не достоверными.

Повышенные уровни АТ к КеГЛ- А встречались значительно чаще у женщин 2-5 пэупп по сравнению с женщинами 1 группы. Во всех группах беременных (кроме 1) средние значения ИФА с ЯеГЛ-А достигали диагностически значимых величин, хотя достоверные различия по сравнению с женщинами 1 группы получены только у женщин 3 и 5 групп (имеющих острые очатл инфекции урогеиитальной локализации и ВМИ).

Повышенные уровни АТ к тейхоевой кислоте чаще всего встречались у женщин 3 , 4 и 5 групп - в 73,7%, 71,9% и 69,2% соответственно, тогда как во 2 группе их было 41,4%, а в контрольной -группе всего 28,6% случаев. В этих же группах отмечались и самые высокие средние значения ИФА, достоверно отличающиеся от показателей у беременных контрольной группы. Получены достоверные различия и между женщинами 2 и 3 групп, имеющих заболевания почек в стадии обострения и ремиссии.

Повышенные уровни АТ к полисахариду стрептококка группы В значительно чаще выявлялись у женщин с заболеваниями почек (2 и 3 группы) - соответственно в 57,7% и 63,2% случаев, несколько реже

(38,5%) они отмечались у беременных с ВМИ. У женщин 4 п 1 групп повышенные значения ИФА с полисахаридом стрептококка группы В выявлялись лишь в 13% п 14,3% случаев. Самые высокие средние значения ИФА с АГ стрептококка группы В, достоверно отличающиеся от показателей у беременных контрольной группы, также отмечались у женщин 2 и 3 групп, в 4 и 5 группах средние значения К были ниже, чем во 2 и 3 группах, по вместе с тем они были „чиагностическн значимыми и дocтoвq)HO отличались от показателей у беременных 1 группы.

Результаты изучения гуморального иммунного ответа к БАГ в 1руппе женщин с неразвивающейся беременностью и патологией плодного яйца представлены в таблице № 4 и па рисунке № 2.

Таблица 4

Средние значения ИФА (К) с бактериальными антигенами у женщин с неразвивающейся беременностью и патологией плодного яйца (М±т) (р)

м? Группы обследованных Бактериальные антигены

п/п женщин АГ пневмококка Кс ГЛ-А Тейхоевая кислота Полисахарид стрептококка группы В

1. Здоровые женщины с физиологическим течением беременности п= 11 0,92+0,05 р1,2<0,05 0,95±0,08 1,08±0,07 0,99±0,08

2. Клинически здоровые беременные с патологией плодного яйца п = 6 1,46+0,20 р2,3<0,05 1,07±0,08 р2,4 <0,01 1,16±0,03 1,14±0,15

3. Женщины с острыми генитальными и экстра-генитальными восп. заболеваниями 0,93+0,07 рЗ,4<0,01 1,17±0,12 1,25±0,2 0,99±0,07

4. Женщины с очагами хронической экстра-генитальной инфекции и патологией плодного яйца п = 6 1,6±0,20 р4,1 <0,02 1,35±0,02 р4,1 <0,001 1,30±0,20 1,11 ±0,22

Примечание: в таблице приведены значения р только при достоверном различии между средними величинами.

1 группа бАгрулла бБгрлпа ^ бЗгруппэ

Рисунок 2

Частота встречаемости повышенных уровней АТ к БАГ у женщин 6 группы

Частота выявления повышенных уровнен АТ к АГ пневмококка была самой высокой (40%) у женщин 6В подгруппы, имеющих хронические экстрагенитальные очаги инфекции, чем объясняется также и самые высокие средние значения ИФА в этой группе, достоверно отличающиеся от показателей у бqзeмeнныx 1 группы и 6Б группы. Чаще всего повышенные значения ИФА отмечались с ИеГЛ-А, причем у женщин 6В подгруппы они встречались в 100% случаев, а в 6Б - в 60% случаев, что объясняется наличием острых и хронических геннталь-пых и жстрагенитальных заболеваний. У беременных 6А подгруппы в 60 % случаев также определялись повышенные значения ИФА с ЯеГЛ-А, хотя клинические признаки какого-либо воспалительного процесса у них отсутствовал!. Данные ИФА у этой подгруппы женщин дают возможность предположить наличие у них в 60 % случаев очагов инфекции, имеющих латентное течение. Средние значения К в подгруппе беременных без клинических проявлений воспалительного процесса были ниже диагностического уровня, тогда как в группах с острыми геннтальными инфекциями и с хроническими заболеваниями половых органов относились к положительным значениям. Средние значения К с ЛеГЛ-А в

6В подгруппе достоверно отличались от показателей контрольной группы п от таковых у беременных 6А подгруппы, не имеющих клинических признаков воспалительного заболевания.

Повышенные уровни АТ к тейхоевой кислоте встречались реже, чем к ЯеГЛ-А.. Самый высокий процент положительных значений ИФА с тейхоевой кислотой отмечался в подгруппе женщин с острыми экстрагенитальными и геннтальными заболеваниями - 60%, а также в 6В подгруппе, в которой женщины имели хронические экстрагенитальные заболевания - 50% , в этих же группах отмечались и самые высокие средние значения ИФА, достигающие диагностически значи-

мои величины, но достоверно не отличающиеся от показателей у беременных 1 группы и 6А подгрупп.

Повышенные уровни АТ к стрептококку q>yпггы В чаще всего выявлялись у беременных 6А подгруппы - в 40% случаев, хотя средние значения ИФА были диагностически не значимыми. Столь высокий процент повышенных значений ИФА со стрептококком группы В указывает на наличие латентных очагов инфекции, которые и могут являться причиной патологии плодаого яйца и анэмбрионии II типа в частности.

В таблице № 5 представлены средние значения ИФА с нативной и денатурированной ДНК у беременных женщин 1 - 5 грушт Из данных таблицы видно, что самые низкие величины, не, достигающие диагностических значений, отмечены в 1 группе. Достоверное увеличение этого показателя отмечено во всех остальных .группах, в которых оно превышает 1, 20. Такая же зависимость отмечена и при изучении средних значений К с денатурированной ДНК. Самые высокие средние значения показателя ИФА с нативной ДНК отмечены у беременных 3 группы, а с дена турированной ДНК - у беременных 4 группы.

На рисунке 3 видно, что повышенные значения показателей ИФА с нативной и денатурированной ДНК встречались чаще всего у беременных 3 группы, реже у женщин 4 и 5 группы и реже всего во 2 группе.

При изучении средних значений коэффициента К при ИФА с ДНК у женщин с неразвивающейся беременностью и патологией плодного яйца получены данные, представленные в таблице № 6, из ко юрой видно, что по АТ к нативной ДНК самые низкие значения получены у женщин 1 группы и 6А подгруппы. Достоверное повышение этого показателя по сравнению с женщинами 1 группы отмечено у беременных 6Б и 6В подгрупп.

Средние значения ИФА (К) с ДНК у женщин с прогрессирующей беременностью (М±т) (р)

N0 Группы обследованных ДНК

п/'п женщин Иативная Денатурированная

I. Здоровые женщины с физиологическим течением беременности п= 11 1,03±0,006 pl ,2 <0,001 pl,3< 0,001 1,03±0,07 pl ,2<0,001 pl,3<0.001

2. Беременные с хроническим пиелонефрит, вне обострен, п = 29 1,31 ±0,06 р2,3<0,02 1,37±0,08

3. Беременные с обострением хронического и о. гестационным пиелонефритом п = 20 1,61 ±0,10 1,40±0,03

4. Беременные с генитальной инфекцией без ВМИ п = 34 1,47±0,10 р4,1 <0,001 1,53±0,12 р4,1 <0,001

5. Беременные с ВМИ п = 27 1,35±0,1 р5,1 <0,001 1,36±0,09 р5,1 <0,01

Примечание: в таблице приведены значения р только при достоверном различии между средними величинами.

Таблица 6

Средние значения ИФА (К) с ДНК у женщин с неразвивающейся беременностью и патологией плодного яйца (М±т) (р)

№ Группы обследованных ДНК

п/'п женщнн Натпвная Денатурированная

1. Здоровые женщины с физиологическим течением беременности п = 11 1,03±0,006 pl,3<0,01 1,03±0,07

2. (6А) Клинически здоровые беременные с патологией плодного яйца п = 6 1,11 ±0,07 1,20±0,11

3. (6Б) Женщины с острыми генитальиыми и экстрагенитальными восп. заболеваниями п = 5 1,30±0,08 1,08±0,07

4. (6В) Женщины с очагами хронической экстрагенитальной инфекции и патологией плодного яйца п = 6 1,26±0,11 р4,1 <0,05 1,27±0,08 р4,1 <0,02

Примечание: в таблице приведены значения р только при достоверном различии между средними величинами

Рисунок 3

Частота встречаемости диагностически значимых величин АТ к ДНК у женщин 1- 5 групп.

Что касается средних значений показателя ИФА с денатурированной ДНК, то достоверно высокие результаты, достигающие положительных значении , отмечаются только у женщин 6В подгруппы.

На рисунке 4 показано, что положительные значения ИФА с наганной ДНК в 80% случаев отмечаются у женщин 6Б и 6В подгрупп и в 2 раза реже (в40%) у беременных 6А подгруппы. В 1 группе частота выявления повышенного значения этого показателя составила 20%. Повышенные значения ИФА на денатурированную ДНК отмечены в 6 В подд-руппе (65%) ив 20 - 30 % у женщин 1 группы, 6 А и 6Б подгрупп.

При наличии инфекционно-воспалительного процесса в иммунной системе происходят изменения, характеризующиеся снижением абсолютного и относительного содержания Т-лимфоцитов, увеличение количества Т-хелперов и снижение Т- супрессоров др. [Лебедев К.А., Понякпна И.Д., 1990]. Именно такие изменения в той или иной степени выявлены п у беременных женщин с острыми или хроническими очагами инфекции. Опасность таких изменении для беременных заключается в том, что снижение Т-зависимой клеточной супрессии приводит к угрозе невынашивания беременности или к развитию патологии плодного яйца.

В таблице № 7 представлена частота встречаемости показателей относительного количества популяций и субпопуляции лимфоцитов, отличающихся от показателей нормы (ниже минимального или выше максимального значения в контрольной труппе), частота встречаемости диагностически значимых показателен ИФА с БАГ и ДНК и частота угрожающего самопроизвольного прерывания беременности (угрожающий самопроизвольный выкидыш и угрожающие преждевременные роды) у женщин 1 - 5 групп. Из данных таблицы видно, что в тех случаях, когда отмечается Т-зависимая иммунная недостаточность

о\

Таблица 7

Частота встречаемости (в %) показателей относительного количества популяций и субпопуляций лимфоцитов отличающихся от нормативных значений, частота встречаемости диагностически значимых показателей ИФА с БАГ и ДНК и их взаимосвязь с частотой угрозы прерывания беременности у женщин 1 —5 групп

№ Группы обследованных Лимфоциты БАГ ДНК УС в

п/п Женщин СД7 + <60 сдз+ <58 СД4 + <32 СД8 + <38 СД22 + >8 АГ пневм. ИгГЛА Тейхоевая кислота Полисахарид стр. группы натив-ная дена-турир.

1. Здоровые женщины с физиологическим течением беременности п = 11 0 0 0 0 0 0 28,6 28,6 14,3 14,3 14,3 0

2. Беременные с хроническим пиелонефрит, вне обострен, п = 29 75,9 82,7 82,7 100 75,9 20 51,7 41,4 57,7 58,6 55,2 65,5

3. Беременные с обострением хронического и о. гестационным пиелонефритом п = 20 100 100 90 100 80 10,5 57,9 73,7 63,2 70 70 81,8

4. Беременные с гениталь-ной инфекцией без ВМИ п = 34 82,3 91,2 67,6 97 61,8 18,8 43,6 71,9 13 56 62,5 61,7

5. Беременные с ВМИ п = 27. 100 100 86,2 100 74 11,5 65,3 69,2 38,5 48,1 48,1 66,6

1 группа

бАгруппа

бБгоулла

бВгрулпэ

Рисунок 4

астота встречаемости диагностически значимых величин АТ к ДНК у женщин с неразвивающейся беременностью и патологией

плодного яйца.

на фоне выраженного гуморального иммунного отпета, у женщин в 65,5 - 81,8 % случаев наблюдается угроза прерывания беременности.

Получена высокая коррелятивная зависимое п. между снижением относительного содержания Т-супрессоров/цитотоксических лимфоцитов и увеличением уровня АТ к БАГ и ДНК у беременных 2 - 5 групп (Р= 0,5429 — 0,9899).

Таким образом, проведенное исследование показало, что у женщин с очагами инфекции, в зависимости от активности и клинических проявлении инфекционно-воспалительного, процесса на фоне изменений в относительном содержании популяций и субпопуляцнй лимфоцитов в сочетании с диагностически значимыми величинами показателей ИФА с БАГ и ДНК повышается вероятность невынашивания пли недонашивания беременности.

ВЫВОДЫ:

1.У беременных женщин при инфекцппнно-воспалптельиых заболеваниях урогенитальпой локализации происходит снижение относительного содержания СД7+ (все Т-клетки), СДЗ+ (зрелые Т-лимфоцитм), СД4+ (Т хелперы/нпдукторы), СД8+(Т-супрессоры/цитогоксические), СД16+ (натуральные киллеры) и повышение относительного содержания СД22+ (В клетки) - лимфоцитов на фоне высокого уровня антител к бактериальным антигенам и ДНК, что свидетельствует о развитии иммунного ответа па инфекционный агент, при котором Т-завпсимая нммуносупрессия снижается, что приводит к развитию угрозы прерывания беременности или к неразвивающейся беременности.

2. У беременных женщин с острыми и хроническими очагами инфекции урогенитальной локализации, в том числе и с ВМИ определяются повышенные уровни АТ к ЯеГЛ-А, тейхоевой кислоте и полисахариду стрептококка группы В, нативной и денатурированной ДНК.

3. Установлено, что при повышенных уровнях АТ к БАГ и ДНК в сочетании с нормативными показателями популяции и субпопуляций лимфоцитов У здоровых женщин не отмечается угрозы прерывания беременности.

4. Комплекс обязательного иммунологическог о обследования для беременных женщин должен включать определение относительного содержания СД7+, СДЗ+, СД4-, СД8+ , СД16+и СД22+ - лимфоцитов и определение уровней АТ к ЯеГЛ-А, тейхоевой кислоте , полисахариду стрептококка группы В и ДНК.

5. Установлено, что иммунологическими критериями инфекционо-воспалнтельпого заболевания урогенитальной локализации у беременных женщин являются:

значения относительных показателей СД7+ , СДЗ+, СД4+и СД8+-клеток ниже норматившлх значении и повышение СД22+- лимфоцитов выше нормативных величин в сочетании с повышенными показателями ИФА к БАГ п денатурированной ДНК.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Результаты проведенного исследования указывают на необходимость обязательного иммунологического обследования бq)eмeнныx женщин в ранние сроки бq)eмeннocти и не реже 2-х раз в триместр при отсутствии у них клинических признаков иифекцноино-воспалптельпого заболевания , а при наличии хронических очагов инфекции , независимо от активности процесса, обследование должно проводиться ежемесячно, причем при остром инфекционно-воспалительном заболевании иммунологическое обследование должно проводиться и после курса лечения, с целью своевременного проведения профилактических мероприятий во время беременности и в раннем поагеродовом периоде.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Анастасьева В.Г., Аутеншлюс А.И., Иванова О.В., Крылова М.И., Коновалова Т.Н. "К вопросу о причинах возникновения анэм-брионнй".// Тезисы докладов юбилейной пятой научно- практической конференции врачей, посвященной 50-летию Победы в Великой Отечественной Войне 1941-1945 гг. Новосибирск 1995,- т.2, с. 154.

2. Аутеншлюс А.И., Иванова О.В., Анастасьева В.Г., Михайлова Е.С., Коновалова Т.Н. "Иммунный статус у женщин с.ипфекционпо-воспалительными заболеваниями при патологии плодного яйца в ранние сроки беременности". // Акуш. и гинекология 1996, № 1.- с. 42-44.

3. Иванова О.В., Коновалова Т.Н., Аутеншлюс А.И., Анастасьева В.Г. "Иммунный статус беременных женщин с внутрнматочной инфекцией и новорожденных с внутриутробным инфицированием".// Бюллетень Сибирского отделения Российской Академии Мед. Наук.-1996.-№ 1,с. 85-89.

4. Иванова О.В., Коновалова Т.Н., Аутеншлюс А.И., Анастасьева В.Г. "Иммунный статус беременных женщин с внутрнматочной инфекцией".// Актуальные вопросы современной медицины,- тез. докл. XI научной конференции врачей. Новосибирск 1996.-т. 1, с. 402-403.

5. Коновалова Т.Н. "Иммунный статус беременных и пренагальная диагностика иммунодефицитных состояний новорожденных"// Матер, республиканской научно - практической конференции "Актуальные вопросы перинатологии". Екатеринбург 15-17 апреля 1996г., с. 94-96.

6.Иванова О.В., Гаузер В.В., Коновалова Т.Н., Аутеншлюс А.И. " Антитела к бактериальным антигенам у женщин с невынашиванием беременности"// Бюллетень Сибирского Отделения Российской Акаде-

мии Мед. Наук.- 1995.- № "

Соискатель

Т.Н. Коновалова