Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Изучение иммуномодулирующих эффектов кудесана

ООЗиьазо^

На правах рукописи

Шебан Любовь Ивановна

ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ

ЭФФЕКТОВ КУДЕСАНА (клиннко-эксперименталыюс исследование)

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 4 МАЙ 2007

Курск - 2007

003059962

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Конопля Евгения Никитична

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Провоторов Владимир Яковлевич кандидат медицинских наук Гуреева Елена Геннадиевна

Ведущее учреждение:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится « » мая 2007 г в IЧ часов на заседании диссертационного совета К 208 039 01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (305041, г Курск, ул К Маркса, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава

Автореферат разослан « 2.S » Си*л_ _2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. При различных формах соматической патологии наблюдается усиление генерации активных метаболитов кислорода, снижается энергетический и окислительный потенциал клеток, повышается интенсивность перекисного окисления липидов и белков в разных тканях В патогенезе ишемической болезни сердца большое значение приобретают развивающийся окислительный стресс и состояние эндотелиальной дисфункции, которые усугубляют клиническое течение заболевания и ухудшают качество жизни пациентов (Панкин В 3 и др , 2001, Голиков А П и др , 2003, Воробьева Е Н и др , 2006)

Одной из основных функций эндотелия является иммунная, включающая в первую очередь секрецию про- и противовоспалительных цитокинов, молекул межклеточной адгезии, компонентов комплимента и т д (РаЬог М , 2000) Исследования последних лет показали, что системные и локальные медиаторы воспаления, вырабатываемые эндотелием, играют значимую роль в формировании эндотелиальной дисфункции при различной патологии При этом особая роль отводится активизации провоспалительных цитокинов, в частности ФНО-о, ИЛ-1/3, ИЛ-6, подавляющим продукцию оксида азота, являющимся самым мощным эндогенным вазодилататором (Леонова И А , 2006)

В патогенезе хронической ишемической болезни сердца большое место принадлежит нарушениям со стороны иммунного статуса, выражающимися существенным дисбалансом иммунологических показателей, высокой активностью гуморального иммунитета, сопряженного с относительным дефицитом Т-клеточного звена иммунитета (Исаев В А , Самсонов М А , 2000), что требует применения в комплексной фармакотерапии препаратов с иммуномодулирую-щей направленностью Перспективным направлением является изучение соответственной активности у препаратов, не относящихся к этой группе изначально, интересным в этом отношении является кудесан, имеющий в своем составе сразу два антиоксидангных препарата токоферола ацетат и коэнзим (510 При этом если по антиоксидантным эффектам кудесана есть в доступной литературе исследования, в том числе и при ишемической болезни сердца (Коровина Н А , Руге Э К , 2002, Нордвик Б , 2002, Аронов Д М , 2003, Харченко А В , 2004, 2005), то его иммуномодулирующие эффекты остаются недостаточно изученными

Вышесказанное обусловливает необходимость дальнейшего изучения, как в экспериментальных, так и в клинических условиях, иммуномодулирую-щих свойств кудесана

Цель работы: установление иммуномодулирующих эффектов кудесана и его компонентов в эксперименте и у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса

Задачи исследования.

1 Экспериментально изучить закономерности влияния кудесана и его компонентов на развитие гуморального ответа, формирование гиперчувствительности замедленного типа

2 Выявить в условиях эксперимента воздействие кудесана и его компонентов на функциональное состояние нейтрофилов в периферической крови

3 Установить иммунокорригирующие эффекты кудесана при ИБС стабильной стенокардии напряжения II-III функционального класса

4 Изучить клинико-иммунную эффективность кудесана в комплексной фармакотерапии стабильной стенокардии напряжения И-Ш функционального класса

5 Разработать фармакологический способ коррекции нарушений иммунного статуса с включением в комплексную терапию кудесана у пациентов с ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса

Научная новизна и теоретическая значимость. В эксперименте установлено, что кудесан стимулирует формирование гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного действия Компонент препарата токоферола ацетат не обладают иммунотропной активностью, а коэнзим QI0 стимулирует только развитие гуморального иммунного ответа Выявлено, что кудесан и токоферола ацетат обладают стимулирующим влиянием на фагоцитарную и супрессирующим - на кислородзависимую активность полиморфноя-дерных лейкоцитов, а коэнзим QJ0 — угнетает кислородзависимый метаболизм нейтрофилов

Уточнены характер и степень нарушений показателей иммунного статуса у больных ИБС стабильной стенокардии напряжения II-III функционального класса Установлена клинико-иммунологическая эффективность использования кудесана у больных ишемической болезнью сердца стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса

Практическая значимость. Экспериментально обоснована целесообразность использования кудесана в качестве иммунокорригирующего средства в клинической практике Обоснована необходимость включения дополнительно в традиционное лечение ишемической болезни сердца иммунокорригирую-щих средств Доказана эффективность применения кудесана у данной категории больных для коррекции нарушенных показателей Т- и В-кпеточного звена

иммунитета, состояния функционально-метаболической активности нейтрофи-лов периферической крови и баланса про- и противовоспалительных цитоки-нов

Клинически подтверждены иммуномодулирующие эффекты кудесана при лечении больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса

Внедрение в практику. Разработанные в работе рекомендации внедрены в работу МУЗ «Городская клиническая больница № 1» и «Городская клиническая больница 3» г Курска, медицинского отдела УВД Курской области, Курской и Брянской областных клинических больниц

Материалы диссертации включены в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского, Российского, Самарского государственных медицинских университетов, Воронежской государственной медицинской академии и медицинских факультетов Белгородского и Орловского государственных университетов

Положения, выносимые на защиту.

1 Кудесан стимулирует иммунную реактивность, повышает фагоцитарную и снижает кислородзависимую активность полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови у экспериментальных животных

2 Установлено корригирующее влияние кудесана на концентрацию про-и противовоспалительных цитокинов, функционально-метаболическую активности нейтрофилов периферической крови у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса

3 Обоснована целесообразность использования кудесана в качестве им-мунокорригирующего средства у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса

4 Разработан способ иммунокоррекции у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса путем включения кудесана в традиционную схему лечения

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета и Центрально-Черноземного научного центра РАМН (2006), конференции Российской академии естествознания (Мальта, 2006), Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии иммунодиагностика и иммунотерапия» (Курск, 2006), VI Съезде аллергологов и иммунологов СНГ, Российском национальном конгрессе аллергологов и иммунологов, III Российской конференции по иммунотерапии (Моск-

ва, 2006), совместном заседании кафедр пропедевтики внутренних болезней, фармакологии, клинической фармакологии, биологической химии, внутренних болезней № 1 Курского государственного медицинского университета (2007)

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста, иллюстрирована 22 таблицами и 5 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (5 глав), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 128 отечественных и 70 иностранных источников

Публикации По материалам диссертации в центральной и местной печати опубликовано 7 работ, в том числе 2 в рекомендуемых изданиях ВАК РФ, в которых содержится полный объем информации по теме диссертации

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования Экспериментальные исследования. Исследования проведены на 304 крысах Вистар массой 120-180 г В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний Все животные содержались в одинаковых условиях, на обычном пищевом режиме Для получения статистически достоверных результатов группы формировали из 8-10 животных В контрольные и опытные группы входили животные одного возраста, полученные из питомника одновременно Разброс в группах по исходной массе не превышал ±10% Все исследования проводили в одно и то же время суток с 8 до 12 часов с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г Страсбург, Франция, 1986) Животных выводили из опыта декапитацией под эфирным наркозом Исследованию подвергали плазму, сыворотку крови, эритроциты, полинуклеарные лейкоциты, лимфоциты периферической крови, ткань селезенки и подколенных лимфатических узлов

Используемые препараты, способ и кратность их введения представлены в таблице 1 Способ введения препарата соответствовал рекомендациям, приведенным в справочнике М Д Машковского «Лекарственные средства», и инструкциям по применению препаратов

Таблица 1

Применение препаратов_

Разовая доза, мг/кг Схема введения

Препарат Фирма-изготовитель Способ введения Количество введений Интервал между введениями, часы

Кудесан «Аквион», Россия внутрижелу-дочно 1 15 30 60 24

Токоферола ацетат Ай-Си-Эн «Октябрь», Россия внутрижелу-дочно 0,1 30 60 24

Коэнзим <3.0 «Вита-Лайн», США внутрижелу-дочно 1 30 60 24

Для развития гуморального иммунного ответа ЭБ вводили внутрибрю-шинно однократно из расчета 2х109 клеток на 1 кг массы тела Выраженность ГИО оценивали на пятые сутки после иммунизации путем определения в селезенке числа антителообразугощих клеток (Мальберг К , Зигль Э , 1987)

ГЗТ у крыс индуцировали внутрибрюшинным введением 108 ЭБ в 0,5 мл 0,15 М раствора натрия хлорида (сенсибилизирующая доза) Через 4 суток в подушечку стопы правой лапки вводили 106 ЭБ в 0,1 мл физраствора (разрешающая доза) Спустя 24 ч выделяли регионарный (по месту введения ЭБ) и контрлатеральный подколенный лимфоузлы О выраженности ГЗТ судили по разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и по разнице количества в них кариоцитов (Федосеева ТВ и др , 1993)

Клинические исследования Основной комплекс исследований выполнен с 2004 г по 2006 г на базе МУЗ «Городская клиническая больница № 1» г Курска Под постоянным наблюдением было 42 пациента с верифицированным по данным велоэргометрии диагнозом ИБС стабильная стенокардия напряжения П-Ш функционального класса (классификация Канадского общества сердечно-сосудистых заболеваний) Группу контроля составили 30 здоровых доноров (14 женщин и 16 мужчин), средний возраст которых составил 32,7±3,1 года

Критерии включения пациентов в исследование мужчины и женщины в возрасте 40-60 лет, наличие ИБС стабильной стенокардии напряжения П-Ш функционального класса, подтвержденной клинически (характерный болевой

синдром) и данными ВЭМ (депрессия сегмента БТ>1 мм продолжительностью более 0,08 сек)

Критериями исключения пациентов из исследования были гемодинами-чески значимые нарушения ритма и проводимости, инфаркт миокарда и прогрессирующая стенокардия или наличие указаний на них в анамнезе, артериальная ги-пертензия более II степени, хроническая сердечная недостаточность более II ФК в соответствии с классификацией Нью-Йорской ассоциации кардиологов (ОТНА), сахарный диабет или нарушенная толерантность к глюкозе, индивидуальная непереносимость препарата и побочные эффекты от данной терапии

Критериями рандомизации служили возраст обследуемых больных и функциональный класс стенокардии по данным ВЭМ

Все пациенты изначально были разделены на 2 группы, сопоставимые по возрасту, полу, клиническим данным, уровню пороговой нагрузки при ВЭМ пробе

Пациентам 1-й группы (14 человек) назначалось традиционное лечение, включающее нитраты (нитросорбид - 50,0 мг/сут), /3-блокаторы (метопролол -75±25 мг/сут) и антиагреганты (аспирин - 75±25 мг/сут) и нитроглицерин по требованию, пациентам 2-й группы (14 человек) дополнительно назначался ку-десан (60 мг/сут в течение 2-х месяцев) Подбор дозы препаратов осуществлялся путем пошаговой титрации доз препаратов

Контроль качества проводимой терапии осуществлялся на основании анализа динамики клинической симптоматики (регресс болевого синдрома, уменьшение потребности в нитроглицерине, изменение толерантности к физической нагрузке при ВЭМ) после 60 дней приема препаратов (по клиническому дневнику)

В клиническом дневнике пациентами самостоятельно ежедневно регистрировались количество эпизодов ангинозных болей и принятых таблеток нитроглицерина, частота возникновения приступообразной одышки, сердцебиения и перебои в работе сердца, другие симптомы, которые пациенты связывали с проводимой терапией

Оценку толерантности больных к физической нагрузке определяли методом парных велоэргометрий по прерывистой, ступенчатовозрастающей схеме Исследование проводили натощак или через 1,5-2 часа после приема пищи, промежуток мевду парными пробами составлял не менее 24 часов Расчет субмаксимальной нагрузки проводился с учетом пола, возраста и веса больного по номограмме Я БЬерЬаг«! Продолжительность каждого этапа и пауза между ними составляли 4 минуты, общая продолжительность нагрузки была не более 16 минут

Рассчитывали следующие показатели

- пороговая мощность нагрузки - Wnopor> Вт, по формуле Wnopor" Wnc+25*Tnc/240,

где \Vnc - мощность нагрузки последней ступени, Т„с - продолжительность последней ступени в секундах, 25 - шаг одной ступени, 240 - максимальная продолжительность одной ступени в секундах,

- общий объем выполненной работы - А, Вт, по формуле А = (W1+W2+ )*4+Wn0* Тпс/60,

где Wl, W2 - мощность ступеней в Вт, Wnc - мощность последней ступени в Вт, Тпо - продолжительность последней ступени в минутах, 4 - максимальная продолжительность ступени в минутах, 60 секунд,

- индекс двойного произведения - ИДП, балл, по формуле ИДП = Wnopor * САД/100,

■ где САД - систолическое артериальное давление на высоте пороговой нагрузки, 100 - коэффициент-делитель

Иммунологические методы исследования. При оценке гемограмм пациентов с ИБС и здоровых доноров брались за основу физиологические нормы, соответствующие международной системе единиц (СИ) в экспериментально-клинических исследованиях (Меньшиков В В , 1987) Кроме этого, определялись индексы сдвига лейкоцитов по Н И Ябучинскому и лейкоинтоксикаци-онный

В работе исследован иммунный статус больных и здоровых лиц с помощью наборов тестов I и II уровней по РВ Петрову (Караулов АВ, 1999) Фенотип лимфоцитов определялся методом иммунофлюоресцентного анализа с помощью моноклональных антител (ООО «Сорбент», г. Москва) к структурам CD3 (общие Т-лимфоциты), CD22 (В-лимфоциты), CD4 (Т-хелперы), CD8 (ци-тотоксические клетки), CD 16 (NK-клетки), CD95 (индукторный фактор апопто-за) (Чередеев А Н , Горлина Н К , Козлов И Г, 1999)

Содержание IgG, IgM, IgA, Сз и С4 компонентов системы комплемента определяли в плазме крови больных ИБС и здоровых доноров методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, используя диагностический набор ООО НПЦ «Медицинская иммунология» (г Москва) Количественная оценка уровней ФНОа, ИЛ-4, ИЛ-6, ИЛ-1/3 проводилась с помощью набора реагентов Pro-Con (ООО «Протеиновый контур», г Санкт-Петербург) методом твердофазного иммуноферментного анализа

Функционально-метаболическую активность нейтрофилов периферической крови экспериментальных животных и пациентов с ИБС оценивали по ве-

личинам фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса и индекса активности фагоцитов (Медведев А Н , Чаленко В В , 1991), показателей спонтанного и индуцированного опсонизированным и неопсонизированным зимозаном НСТ-теста, функциональным резервам нейтрофилов и степени дискретности (Зин-кин В Ю , Годков М А , 2004)

Определение биохимических параметров. Выраженность перекисного окисления липидов экспериментальных животных и пациентов с ИБС оценивали по содержанию диеновых конъюгатов и малонового диальдегида (Бенисе-вич В И , Идельсон Л И , 1973, Гаврилов В Б , Мишкорудная М И , 1983) Кроме этого, в сыворотке крови определяли активность каталазы (Подильчак М А , 1967)

Статистическая обработка материала Статистическую обработку результатов исследования проводили путем вычисления средних арифметических (М), стандартных ошибок (а) и стандартных ошибок средних (ш) (Лакин Г Ф , 1980) Существенность различий средних величин оценивали, используя непараметрические методы критерии Вилкоксона, Крускала-Уоллиса, Фишера, Фридмана и непараметрический вариант критерия Ньюмена-Кейлса, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена Статистически значимыми считали различия с р<0,05 (Гублер Б В , Генкин А А , 1973)

Степень иммунных расстройств для иммунологических показателей рассчитывали по формуле (Земсков А М и др , 1994)

Показатель конкретного больного

--1 х 100%

Показатель, принятый за норму

Если рассчитанная величина имеет знак «минус», у пациента определяется иммунная недостаточность, при знаке «плюс» — гиперфункция иммунной системы Когда полученная величина лежит в интервале от 1 до 33%, то это соответствует первой степени иммунных расстройств, от 34 до 66% — второй, ботее 66% — гретьей

По всем показателям рассчитывали коэффициент диагностической ценности (Земсков В М и др , 1996)

2(ст,2+ст22)

К]= - ,

(М, - м2)2

где Ст| о2 - среднее квадратичное отклонение, М| и Мг ■ средние арифметические величины показателей

С помощью коэффициента диагностической ценности определяли формулу расстройств иммунной системы путем выбора из всех изученных параметров трех ведущих, наиболее отличающихся от уровня нормы (Земсков В М , Земсков А М , Золоедов В И , 1993)

Рейтинговый алгоритм устанавливали по величине степени иммунных расстройств, для чего исследованные параметры иммунного статуса выстраиваются в порядке снижающейся значимости отличий от заданных значений (Земсков А М , 1986)

Степень изменения иммунологических показателей под влиянием фармакологических средств и физиотерапевтических факторов определялась по формуле (Земсков А М , Земсков В М , Полякова С Д, 1997)

% больных со 2-3 степенью расстройств показателен после лечения разработанными методами

х 100%.

% больных со 2-3 степенью расстройств показателей после базисного лечения

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Влияние кудесана и его компонентов на иммунную реактивность и антиокендантный статус у интактных животных. Введение токоферола ацетата животным в течение 30 или 60 дней, коэнзима О10 в течение 15 или 30 дней не влияет на количество иммунных АОК в селезенке и выраженность ГЗТ на ЭБ

Внутрижелудочное поступление интактным животным коэнзима <3ш в течение 60 дней стимулирует развитие ГИО на ЭБ, но не влияет на РМЛ и РКЛ

Кудесан, вводимый в течение 15, 30 или 60 дней, дозозависимо повышает иммунную реактивность на ЭБ Его внутрижелудочное поступление экспериментальным животным в течение 15 дней не влияет на выраженность ГЗТ, а введение в течение 30 и 60 дней дозозависимо повышает РМЛ и РКЛ

Изучая влияние кудесана и его компонентов на состояние ПОЛ выявлено, что лишь токоферола ацетат повышает активность каталазы в крови при введении препарата в течение 30 дней, тогда как кудесан и коэнзим <310 не влияют на активность фермента и концентрацию в сыворотке крови продуктов перекисно-го окисления липидов у интактных животных

Введение экспериментальным животным токоферола в течение 30 и 60 дней в одинаковой степени повышает показатели фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови ФИ, ФЧ и ИАФ В отношении кислород-зависимой активности клеток, напротив, установлено угнетающее влияние препарата по сравнению с контролем, причем эффект зависел от кратности введения У животных, получавших инъекции токоферола в течение 60 дней, по сравнению с группой, получавших его 30 дней, наблюдались минимальные значения спонтанного и стимулированного НСТ-тестов Функциональные резервы

полиморфноядерных лейкоцитов этих двух групп достоверно друг от друга не отличались, при этом КО оказался сниженным (незначительной была дискретность полиморфноядерных лейкоцитов), тогда как КАн и КАо были выше по сравнению с контрольной группой животных

При исследовании влияния на функциональную активность нейтрофилов у животных КоС> установлено, что на 30-е сутки он вызывает снижение ФИ, ФЧ, ИАФ, показателей спонтанного и стимулированного неопсонизированным и опсонизированным зимозаном НСТ-тестов, но повышает КАн и КАо, при этом КО не отличался от контроля На 60-е сутки поступления препарата наблюдаются по-прежнему низкие уровни ФЧ и НСТ-спонтанного, еще больше снижаются показатели НСТ-теста стимулированного, что приводит к снижению КАо до нормального, а КАн ниже нормального уровней

У крыс, получавших кудесан 15 и 30 дней, выявлено повышение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови, но отмечено снижение и спонтанного и стимулированного НСТ-тестов, при этом функциональные резервы менялись по-разному На 15 день введения препарата только КАо был повышенным, а остальные коэффициенты не отличались от здоровых животных, на 30-й и на 60-й день КАо и КАн повышались, а КО - не отличался от животных, не получавших препараты

Таким образом, кудесан дозозависимо у интактных экспериментальных животных стимулирует выраженность ГИО и ГЗТ на ЭБ, фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови и угнетает кислородзависимую активность полиморфноядерных лейкоцитов, не влияя на состояние ПОЛ, прием его компонентов в дозах, входящих в цельный препарат, обладают различными эффектами, иногда разнонаправленного действия, что свидетельствует об отсутствии суммации фармакологических эффектов компонентов кудесана (табл 2)

Таблица 2

Влияние кудесана и его компонентов на иммунную реактивность, антиоксидантный статус и функцию нейтрофилов

Ингактные животные ГИО ГЗТ ФМА нейтрофилов периферической крови Продукты ПОЛ Активность ката чаты

Фагоцитарная активность Кнслородзави-симая активность

Кудесан Г п - -

Токоферсла ацетат - - т 14- - т

Коэнзич С>10 т - 4. 4- -

Изучение иммунного статуса у больных ишсмической болезнью сердца: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса под влиянием комплексной фармакотерапии с включением куде-сана. У больных ИБС при первичном обращении выявлено повышение общего содержания в крови лейкоцитов за счет повышения абсолютного содержания сегментоядерных нейтрофилов, тогда как абсолютное и относительное количество палочкоядерных лейкоцитов снижено У таких пациентов наблюдается эо-зинопения, моноцитопения, повышение ЛИИ, ИСЛ остается в пределах нормы

При изучении иммунофенотипированных лимфоцитов у больных стабильной стенокардией напряжения по сравнению со здоровыми донорами установлено уменьшение относительного и абсолютного содержания общего количества Т-лимфоцитов (CD3) и Т-хелперов (CD4) и повышение относительного содержания NK-клеток (CD 16) и клеток-индукторов фактора апоптоза (CD95), при этом количество CDS-лимфоцитов (цитотоксических Т-клеток) не изменяется (рис 1)

CDз

Рисунок 1. Показатели иммунного статуса у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса

Обозначения 1 - радиус окружности - показатета у здоровых доноров добровэтьцев (1 группа),

2 _ - _ показатели у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса до лечения (2 группа),

3 - О - Р < 0,05 между показатетами обеих групп

При исследовании показателей B-системы иммунитета у пациентов, страдающих ИБС, по сравнению с группой здоровых доноров выявлено повышение относительного (в 1,6 раза) и абсолютного (в 2,0 раза) содержания В-лимфо-

цитов (CD22) и концентрации Ig класса G (на 15,6%) Концентрация иммуноглобулинов класса А и М остается без изменений (рис 1)

По сравнению со здоровыми донорами при ИБС наблюдается значительное повышение концентрации провоспалительных цитокинов концентрация ФНОа повышается в 3,6 раза, ИЛ-Iß - в 2,9 раза, а ИЛ-6 - на 26,0% При этом концентрация противовоспалительного цитокина ИЛ-4 снижается на 30,0% При ИБС повышается активность системы комплемента, что проявляется повышением концентрации в сыворотке крови Сз и Ca компонентов системы комплемента (в 2,2 и 2,0 раза соответственно) (рис 1)

Традиционная фармакотерапия у пациентов, страдающих ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса, мало влияет на показатели общего анализа крови После проведенного лечения у таких пациентов снижается количество клеток-индукторов фактора апоптоза (CD95), но остается на прежнем уровне количество CD3, CD4 и СШ6-лимфоцитов, снижается (не до уровня нормы) представительность С D22 - л им ф о цито в (В-лимфоци-ты), но нормализуется в сыворотке крови концентрация IgG

Традиционное лечение позволяет снизить, но не до контрольных значений, содержание в плазме крови ИЛ-10, ИЛ-6, С3 и С4 компонентов системы комплемента Концентрация ИЛ-4 и ФНОа в данной группе после лечения остается без изменения

Включение в комплексную фармакотерапию у пациентов с ИБС кудесана, по сравнению с традиционной фармакотерапией, повышает содержание в крови Т-хелперов, снижает количество CD 16, CD95, С022-лимфоцитов, концентрацию в плазме крови ФНОа, ИЛ-Iß, С4 компонента системы комплемента, но повышает концентрацию ИЛ-6 и ИЛ-4 (рис 2)

Включение кудесана также приводит к нормализации содержания в крови CDlö-лимфоцитов, B-лимфоцитов, концентрации Ig класса G и ИЛ-4 (рис 2)

Таким образом, традиционное лечение у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса корригирует лишь малое число нарушенных показателей иммунного статуса, тогда как включение кудесана в комплексное лечение данной категории пациентов позволяет достаточно эффективно корригировать или нормализовать нарушенные показатели клеточного и цитокинового звена иммунной системы и системы комплемента

CD3

Рисунок 2. Показатели иммунного статуса у больных ИБС стабильнои стенокардией напряжения II-III функционального класса после традиционной фармакотерапии, дополненной кудесаном

Обозначении 1 - радиус окружности - показатели у больных ИБС стабипьиой стенокардией напряжения II-III функционального класса после традиционного лечения (1 группа), 2---показатели у больных ИБС стаби и.пой стенокардией напряжения II-III функционального класса после традиционного лечения + кудесан (2 группа), 3 -О - р < 0,05 между показателями обеих групп, 4 - все исследованные показатечи 2 группы достоверно отличаются от здоровых доноров за исключением CD16, С022-лимфоцитов, IgG и ИЛ-4

Состояние нентрофилыюго звена и антноксидантного статуса у больных ншемичсской болезнью сердца без и с включением в фармакотерапию кудесана. При анализе показателей видового иммунитета на системном уровне у больных ИБС установлено неоднозначное изменение показателей фагоцитарной активности снижение ФЧ и ИАФ и повышение ФИ (табл 3)

При изучении кислородзависимого метаболизма нейтрофилов периферической крови у пациентов с ИБС по сравнению со здоровыми донорами установлено повышение показателей НСТ-теста НСТ-теста спонтанного и стимулированного опсонизированным и неопсонизированным зимозаном, при этом коэффициенты, отражающие функциональные резервы нейтрофилов остаются в пределах нормы (табл 3)

Исследование концентрации продуктов перекисного окисления и активности каталазы - ключевого фермента антиоксидантной системы защиты организма у пациентов, страдающих стабильной стенокардией напряжения, выявило развитие окислительного стресса, проявляющегося повышением концентра-

ции диеновых конъгогатов (на 66,6%) и малонового диальдегида (в 2,9 раза) и снижением активности каталазы (на 26,2%)

Таблица 3

Влияние кудесана и его производных на функционально-метаболическую активность нейтрофнлов периферической крови у больных ИБС: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса

1 2 3 4

Показатели Больные

Здоровые До лечения Традиционное Традиционное

лечение лечение + к>десан

ФИ 45,4+4,8 5б,8±3,2*1 50,Ш,9 45,6±4,6'2

ФЧ 5,7+0,3 2,6±0,16'' 3,0*0,18*' 4,78±0,3'iJ

ИАФ 2,6±0,2 1,5±0,09*' 1,5±0,Г" 1,72±0,17*'

mOD-cn 1,31±0,14 1,52±0,09*' 1,42±0,09'' XZliüfi?.'1

mOD-ст (н/з) 1,41±0,10 1,61±0,08*' 1,54±0,07'' 1,33±0,09'^

mOD-ст (о/з) 1,54±0,07 1,72±0,10"' 1,69*0,08'' 1,48±0,08'2

КАо 1,18±0,15 1,13±0,15 1,19±0,12 1,17±0,13

КАн 1,08±0,07 1,05±0,13 1,08±0,11 1,05±0,10

КО 1,09±0,23 1,07±0,13 1,10±0,13 1,11±0,17

Примечание звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (р < 0,05), а цифры рядом со звездочкой указывают, по отношению к показателям какой группы эти различия

Таким образом, у больных стабильной стенокардией напряжения наблюдается нарушение ФМА ПЯЛ, сопровождающееся повышением кислородзависи-мой и в целом фагоцитарной активности, кроме этого, наблюдается снижение активности каталазы, что, в свою очередь, возможно, является причиной повышения концентрации продуктов ПОЛ в сыворотке крови Традиционная фармакотерапия больных с ИБС не влияет на измененные функции нейтрофилов периферической крови, активность каталазы и концентрацию продуктов ПОЛ (ДК и МДА) в сыворотке крови Применение дополнительно кудесана позволяет нормализовать некоторые показатели фагоцитарной активности ПЯЛ (ФЧ) и показателей НСТ-тестов, значительно снизить концентрацию ДК и МДА в сыворотке крови и нормализовать активность каталазы

Рейтинговый алгоритм иммунологических показателей у пациентов с ИБС до лечения со II-III СИР включает 12 показателей из 21 исследованных (6 из которых имеют III СИР, 6 остальных - II СИР) ФРИС составила ФНОа/, CD953+ и ИЛ-1/33+ (табл 4)

Тогда как рейтинговый алгоритм иммунологических показателей у пациентов ИБС на фоне традиционной фармакотерапии со II-III СИР включает 10 показателей (4 показателя имеют III СИР, а 6 - II СИР) ФРИС составила ФНОа3+, CD953+ и CD163+ (табл 4)

Таблица 4

Рейтинговый алгоритм иммунологических показателей больных ИБС: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса до и после различных схем лечения

Больные Рант

До лечения ФИО/ CD95/ ИЛ-1Д* CD16/ CV С4/ CD222* ФЧ/ mOD-ст (о/з)2+ mOD-ст (н/з)2+ CD4j" CD3," ФИ/

mOD- СП 2 ИЛ-4, ИЛ-6,+ IgG,+

После традиционного лечения ФНО«3+ CD953+ СШб/ ИЛ- W сз/ ФЧ2- С4Г mOD- СТ (о/з)2+ mOD-cr (»/3)2* mOD-сп i CD3, CD4," ИЛ- 6,+

Ш1-4," ФИ,+

После традиционного лечения + ху-десап ФНОа/ CD952+ CD162+ сз2+ ИЛ-б2+

После добавления в традиционную схему лечения ИБС кудесана рейтинговый алгоритм иммунолог ических показателей у пациентов ИБС со II-III СИР включает 5 показателей (5 показателей имеют II СИР) ФРИС составила. ФНОа2+, CD952+ и CD162+ (табл 4)

Таким образом, использование кудесана позволило максимально улучшить состояние иммунного статуса у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса по сравнению с традиционной фармакотерапией, что проявляется снижением количества показателей, требующих коррекции, т е имеющих II и III СИР

При определении собственных иммуномодулирующих эффектов схемы лечения, включающей дополнительно кудесан, по сравнению с традиционной терапией установлено, что практически по всем показателям иммунного статуса данная схема эффективнее традиционной, так как средняя степень коррекции оказалась положительной величиной Сумма показателей коррекции составила 266 баллов по показателям клеточного и цитокинового звеньев иммунного статуса и 700 по показателям неспецифического звена антиинфекционной защиты организма

Влияние терапии кудесаном на клиническое течение ишемической болезни сердца. У пациентов, страдающих ИБС, на фоне традиционной терапии наблюдается снижение частоты приступов стенокардии с 2,81±0,21 эпизодов в сутки до 1,62±0,26, при этом потребность в нитроглицерине в среднем снизилась с 2,17 таблетки в сутки до лечения до 1,54 таблетки после лечения

Традиционная терапия, включающая пролонгированные нитраты, ß-бло-каторы и антиагреганты, дополненная кудесаном, оказалась более эффективна в отношении данных субъективных показателей

Так, включение кудесана позволило уменьшить частоту приступов стенокардии в сутки до 0,92±0,28 случая (на 67,3% меньше, чем до лечения) и снизить количество принимаемого нитроглицерина сублингвально до 0,83 таблетки в сутки (более чем в 2 раза меньше, чем до терапии)

Таким образом, включение кудесана - препарата, обладающего антиок-сидантнои активностью, в комплексную терапию ИБС способствовало улучшению качества жизни больных, приводило к уменьшению частоты приступов стенокардии и снижению потребности в сублингвальных нитратах

Выявленная субъективная антиангинальная эффективность кудесана подтверждалась и количественными параметрами толерантности к физической нагрузке при ВЭМ пробе (табл 5)

Таблица 5

Дшгамнка изменения показателей ВЭМ у больных ИБС: стабильной

стенокардией напряжения II-III ф к. на фоне терапии кудесаном (Mim)

Показатечи До лечения После традиционного лечения После традиционного лечения + кудесан

1 2 3

порог, I^T 74,3±2,9 87,5±2,б'' 106,3±1,6''1

^■^общпч, Г 448,9±37,5 711,8±49,4"1 764,5±45,Г'

Время нагрузки мин 6,4±0,4 9,3±0,4*' Ю,5±0,3"11

ИДП, уел ед 174,5±3,5 190,7±5,3М 209,9±5,Г'1

У включенных в исследование больных при ВЭМ пробе выявлено снижение толерантности к физической нагрузке Среднее значение Wnqx)r составило 77,3 Вт Помимо этого уменьшился общий объем выполняемой работы (W„-mrl;,) в среднем до 448,9 Вт и резко уменьшилось время нагрузки и достигло в набтюдаемой группе больных в среднем 6,4 мин ИДП составил в 174,5±3,5усл ед (табл 5)

Использование традиционной фармакотерапии у таких пациентов позволило повысить пороговую мощность нагрузки на 17,8%, общий объем выполняемой работы на 58,6% по сравнению показателями до лечения При этом увеличивается время выполнения нагрузки до 9,3±0,4 минуты, а ИДП возрастает в среднем до 190,7 уел ед (табл 5)

Добавление к традиционной схеме терапии у больных ИБС кудесана позволяет повысить Wnopor до 106,3±1,6 Вт (на 43,0% больше, чем в группе до лечения) и Wog,ш» ДО 764,5±45,1 (на 70,3% выше, чем до лечения) (табл 5)

Наряду с повышением уровня пороговой мощности и общего количества выполненной работы, в группе пациентов с ИБС, получавших дополни 1елыю кудесан, наблюдался достоверный прирост продолжительности нагрузки (повысился на 64,0% по сравнению с показателями до лечения) и коэффициента двойного произведения (на 20,3%, соответственно) (табт 5)

Стоит заметить, что все изучаемые показатели в группе больных, получавших кудесан, были достоверно выше, чем у пациентов, получавших только традиционную терапию, за исключением \¥1)6щая (табл 5)

Таким образом, применение кудесана на фоне традиционной антианги-налыюй терапии пролонгированными нитратами, /3-блокаторами и антиагре-гантами приводило к повышению показателей физической толерантности у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III ф к

Эффективность проведенной терапии подтверждена анализом количества пациентов, у которых на фоне терапии изменился функциональный класс стенокардии За основу брали показатели ВЭМ пробы (уровень пороговой мощности)

Как видно из таблицы использование кудесана позволило снизить функциональный класс стенокардии у 12 из 21 пациентов, тогда как традиционная фармакотерапия позволила достичь снижения класса стенокардии у 8 из 21 пациента

Можно заключить, что применение кудесана (60 мг/сут) у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса на фоне антиангинальной терапии /3-адреноблокаторами, антиагрегантами и пролонгированными нитратами приводит к повышению физической толерантности, снижению частоты ангинозных приступов и суточной потребности в нитроглицерине и позволяет у многих больных снизить функциональный класс стенокардии

ВЫВОДЫ

1 Кудесан (1 мг/кг/сут) при 15, 30 и 60-кратном введении дозозависимо стимулирует развитие гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа у экспериментальных животных Токоферола ацетат (0,1 мг/кг/сут) не влияет на иммунную реактивность интактных животных, ко-энзим Q10 (1 мг/кг/сут) при 60-кратном введении стимулирует развитие гуморального иммунного ответа

2 Кудесан (1 ,мг/кг/сут) и токоферол (0,1 мг/кг/сут) в эксперименте обладают стимулирующим влиянием на фагоцитарную и супрессирующим на ки-слородзависимую активность полиморфноядерных лейкоцитов крови, а коэн-зим Qi0 (1 мг/кг/сут) угнетает фагоцитарную и кислородзависимую активность нейтрофилов

3 У больных ишемической болезнью сердца стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса повышены в крови содержание B-лимфоцитов, показатели функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови, концентрация Сз и С4 компонентов системы комплемента, провоспалительных цитокинов при сниженных показателях Т-звена иммунитета и концентрации противовоспалительного интерлейкина-4

4 Традиционная фармакотерапия у больных ишемической болезнью сердца стабильной стенокардией напряжения Н-Ш функционального класса существенно не влияет на измененные показатели функционально-метаболической активности нейтрофилов, снижает, но не до уровня нормы, концентрацию компонентов системы комплемента, ИЛ-lß, ИЛ-6 и содержание СБ95-лимфоцитов

5 Включение в комплексную фармакотерапию у пациентов с ишемической болезнью сердца стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса кудесана (60 мг/сут в течение 60 дней), по сравнению с тради-

ционной фармакотерапией, повышает в крови количество Т-хелперов, нормализует содержание B-лимфоцитов и концентрацию интерлейкина-4, снижает содержание CD16 и С095-лимфоцитов, концентрацию ФНОа, ИЛ-1/3 и С4 компонента системы комплемента

6 Применение кудесана у больных ишемической болезнью сердца стабильной стенокардией напряжения II-III функциональных классов на фоне традиционной фармакотерапии позволяет частично нормализовать функциональную активность полиморфноядерных лейкоцитов.

7 Кудесан у больных ишемической болезнью сердца стабильной стенокардией напряжения II-III функциональных классов повышает физическую толерантность, снижает частоту ангинозных приступов и суточную потребность в нитроглицерине, и у 57,1% больных снижает функциональный класс стенокардии

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Использовать кудесан в дозе 60 мг/сут в течение 60 дней в составе комплексной антиангинальной терапии больных ишемической болезнью сердца стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса для коррекции нарушенных показателей иммунного статуса

2 Использовать показатели иммунного статуса в крови концентрацию ФНОа, количество CD95, С016-лимфоцитов для оценки степени выраженности и эффективности коррекции иммунного воспаления у больных ИБС стабильной стенокардией напряжения

3 Изучить эффективность использования кудесана в клинической практике при патологии, характеризующейся развитием иммунного воспаления, с целью коррекции нарушений иммунного статуса

4 Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания об имму-нокорригирующих свойствах кудесана у больных ишемической болезнью сердца стабильной стенокардией напряжения

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Шебан, J1И Влияние кудесана и его компонентов на функционально-метаболическую активность нейтрофилов у экспериментальных животных /ЛИ Шебан, В П Гаврилюк, А Л Локтионов // Молодежная наука и современность 71-я итог межвузовская конф студентов и молодых ученых -Курск КГМУ, 2006 - Ч I -С 31-32

2 Шебан, Л И Иммунокорригирующие и антиоксидантиые свойства кудесана и его компонентов / Л И Шебан, В П Гаврилюк//Молодежная наука и современность 71-я итог межвузовская конф студентов и молодых ученых - Курск КГМУ, 2006 - Ч 1 - С 32-33

3 Шебан, Л И Влияние кудесана и его компонентов на иммунную реактивность и ан-тиоксидантныч статус /ЛИ Шебан, Е Н Конопля, А И Конопля // Russian journal of immunology материалы Рос науч -практ конф «Современные технологии в иммунологии иммунодиагностика и иммунотерапия» - 2006 - Vol 9, Supplement 3 - Р 131

4. Шсбаи, JIM. Иммуионодулирующие и антиоксидантные эффекты кудесана и его компонентов / Л И. Шсбаи, В П Гаврилюк, Е Н Конопля // Аллерголошя и иммунология - 2006 - Т 7, № 3 - С 436

5 Шебаи, Л И Функциональная активность нейтрофилов у животных в условиях приема кудесана и его компонентов /ЛИ Шебан, Е Н Конопля // Russian journal of immunology материалы Рос науч -практ конф «Современные технотогии в иммунологии иммунодиагностика и иммунотерапия» - 2006 - Vol 9, Supplement 3 - Р 131

6 Шебан, Л И Иммуномодулирующие и антиоксидаитные эффекты кудесана и его компонентов (токоферола ацетата и коэшима Q) / Л И Шебан // Современные наукоемкие технологии -2006 - № 6 - С 100-101

7 Шебан, ЛII Нарушения антиоксидантиого и цитокннового статусов и ах коррекция у пациентов, страдающих вше«ической болезнью сердца /ЛИ Шебан, E.H. Конопля // Вестник новых медицинских технологий - 2007. - Т XIV, JS» 2. -С 88-90

Принятые сокращения

АОК - антителообразующие клетки, 103/селезенка

АПФ - аш иотепзштревращающий ферчет

ВЭМ - вечоэргочетрня

ГИО — гуморальный иммунный ответ

ГЗТ - гиперчувствитсльность замедленного типа

ДК - диеновые конъюгаты ненасыщенных жирных кислот, нмоль/л

ИАФ - индекс активности фагоцитов

ИБС - ишемическая ботезнь сердца

ИДП - индекс двойного произведения, уел ед

ИСЛ - индекс сдвига лейкоцитов по Н И Ябучинскочу

КАо - функциональный резерв в ответ на опсонизированный зимозаном ИСТ-тест, абс

КО - степень дискретности ответа на опсонизироваиный и неопсонизированный зимозаном НСТ-тест

КАн - функциональный резерв в ответ на неопсонизированный зимозаном НСТ-тест, абс

ЛИИ - лейкоинтоксикационный индекс

МДА - малоновый диальдегид, мкмоль/л

НСТ-тест - гест восстановления шпросипего тетразолия

ПОЛ - перскисное окисление липидов

ПН - потребность в нитроглицерине, таблеток в сутки

ПЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты

РКЛ - разница количества кариоцигов в регионарных и контрлатеральных лимфатических узлах,106

РМЛ - разница массы регионарных и контртатеральных лимфатических узтов, мг

СИР - степень иммунных расстройств

СМН - субмаксимальная нагрузка, Вт

ФИ - фагоцитарный индекс, %

ФМА - функционально-метаболическая активность

ФРИС - формула расстройства иммунной системы

ФЧ - фагоцитарное чисто

ЧПС - частота приступов стенокардии, число случаев/сутки ЭБ - эритроциты барана

Лицензия ЛР № 020862 от 30 04 99 г Сдано в набор 27 04 2007 г Подписано в печать 27 04 2007 г Формат 30х42'/8 Бумага офсетная Гарнитура Times New Rom Печать офсетная Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ № 161А Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г Курск, ул К Маркса, 3

Актуальность проблемы. При различных формах соматической патологии наблюдается усиление генерации активных метаболитов кислорода, снижается энергетический и окислительный потенциал клеток, повышается интенсивность перекисного окисления липидов и белков в разных тканях. В патогенезе ишемической болезни сердца большое значение приобретают развивающийся окислительный стресс и состояние эндотелиальной дисфункции, которые усугубляют клиническое течение заболевания и ухудшают качество жизни пациентов (Панкин В.З. и др., 2001; Голиков А.П. и др., 2003; Воробьева Е.Н. и др., 2006).

Одной из основных функций эндотелия является иммунная, включающая в первую очередь секрецию про- и противовоспалительных цитокинов, молекул межклеточной адгезии, компонентов комплимента и т.д. (Pahor М., 2000). Исследования последних лет показали, что системные и локальные медиаторы воспаления, вырабатываемые эндотелием, играют значимую роль в формировании эндотелиальной дисфункции при различной патологии. При этом особая роль отводится активизации провоспалительных цитокинов, в частности ФНО-а, ИЛ-ip, ИЛ-6, подавляющим продукцию оксида азота, являющимся самым мощным эндогенным вазодилататором (Леонова И.А., 2006).

В патогенезе хронической ишемической болезни сердца большое место принадлежит нарушениям со стороны иммунного статуса, выражающимися существенным дисбалансом иммунологических показателей, высокой активностью гуморального иммунитета, сопряженного с относительным дефицитом Т-клеточного звена иммунитета (Исаев В.А., Самсонов М.А., 2000), что требует применения в комплексной фармакотерапии препаратов с иммуномодулирую-щей направленностью. Перспективным направлением является изучение соответственной активности у препаратов, не относящихся к этой группе изначально, интересным в этом отношении является кудесан, имеющий в своем составе сразу два антиоксидантных препарата: токоферола ацетат и коэнзим Qi0. При этом если по антиоксидантным эффектам кудесана есть в доступной литературе исследования, в том числе и при ишемической болезни сердца (Коровина Н.А., Руге Э.К., 2002; Нордвик Б., 2002; Аронов Д.М., 2003; Харченко А.В., 2004, 2005), то его иммуномодулирующие эффекты остаются недостаточно изученными.

Вышесказанное обусловливает необходимость дальнейшего изучения, как в экспериментальных, так и в клинических условиях, иммуномодулирую-щих свойств кудесана.

Цель работы: установление иммуномодулирующих эффектов кудесана и его компонентов в эксперименте и у больных ИБС: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса.

Задачи исследования.

1. Экспериментально изучить закономерности влияния кудесана и его компонентов на развитие гуморального ответа, формирование гиперчувствительности замедленного типа.

2. Выявить в условиях эксперимента воздействие кудесана и его компонентов на функциональное состояние нейтрофилов в периферической крови.

3. Установить иммунокорригирующие эффекты кудесана при ИБС: стабильной стенокардии напряжения II-III функционального класса.

4. Изучить клинико-иммунную эффективность кудесана в комплексной фармакотерапии стабильной стенокардии напряжения II-III функционального класса.

5. Разработать фармакологический способ коррекции нарушений иммунного статуса с включением в комплексную терапию кудесана у пациентов с ИБС: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса.

Научная новизна и теоретическая значимость. В эксперименте установлено, что кудесан стимулирует формирование гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного действия. Компонент препарата токоферола ацетат не обладают иммунотропной активностью, а коэнзим Qi0 стимулирует только развитие гуморального иммунного ответа. Выявлено, что кудесан и токоферола ацетат обладают стимулирующим влиянием на фагоцитарную и супрессирующим - на кислородзависимую активность полиморфноядерных лейкоцитов, а коэнзим Q10 — угнетает кислородзависимый метаболизм нейтрофилов.

Уточнены характер и степень нарушений показателей иммунного статуса у больных ИБС: стабильной стенокардии напряжения II-III функционального класса. Установлена клинико-иммунологическая эффективность использования кудесана у больных ишемической болезнью сердца: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса.

Практическая значимость. Экспериментально обоснована целесообразность использования кудесана в качестве иммунокорригирующего средства в клинической практике. Обоснована необходимость включения дополнительно в традиционное лечение ишемической болезни сердца иммунокорригирую-щих средств. Доказана эффективность применения кудесана у данной категории больных для коррекции нарушенных показателей Т- и В-клеточного звена иммунитета, состояния функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови и баланса про- и противовоспалительных цитоки-нов.

Клинически подтверждены иммуномодулирующие эффекты кудесана при лечении больных ИБС: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса.

Внедрение в практику. Разработанные в работе рекомендации внедрены в работу МУЗ «Городская клиническая больница № 1» и «Городская клиническая больница 3» г. Курска, медицинского отдела УВД Курской области, Курской и Брянской областных клинических больниц.

Материалы диссертации включены в учебные рабочие программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях ряда кафедр Курского, Российского, Самарского государственных медицинских университетов, Воронежской государственной медицинской академии и медицинских факультетов Белгородского и Орловского государственных университетов.

Положения, выносимые на защиту.

1. Кудесан стимулирует иммунную реактивность, повышает фагоцитарную и снижает кислородзависимую активность полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови у экспериментальных животных.

2. Установлено корригирующее влияние кудесана на концентрацию про-и противовоспалительных цитокинов, функционально-метаболическую активности нейтрофилов периферической крови у больных ИБС: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса.

3. Обоснована целесообразность использования кудесана в качестве им-мунокорригирующего средства у больных ИБС: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса.

4. Разработан способ иммунокоррекции у больных ИБС: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса путем включения кудесана в традиционную схему лечения.

Апробация полученных результатов. Основные положения диссертации представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета и Центрально-Черноземного научного центра РАМН (2006), конференции Российской академии естествознания (Мальта, 2006), Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия» (Курск, 2006), VI Съезде аллергологов и иммунологов СНГ, Российском национальном конгрессе аллергологов и иммунологов, III Российской конференции по иммунотерапии (Москва, 2006), совместном заседании кафедр пропедевтики внутренних болезней, фармакологии, клинической фармакологии, биологической химии, внутренних болезней № 1 Курского государственного медицинского университета (2007).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста, иллюстрирована 22 таблицами и 5 рисунками, состоит из введения, обзора литературы (2 главы), описания методов исследования, изложения собственных результатов (5 глав), заключения, выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя, включающего 128 отечественных и 70 иностранных источников.

ВЫВОДЫ

1. Кудесан (1 мг/кг/сут) при 15, 30 и 60-кратном введении дозозависимо стимулирует развитие гуморального иммунного ответа и гиперчувствительности замедленного типа у экспериментальных животных. Токоферола ацетат (0,1 мг/кг/сут) не влияет на иммунную реактивность интактных животных, коэнзим Qio (1 мг/кг/сут) при 60-кратном введении стимулирует развитие гуморального иммунного ответа.

2. Кудесан (1 мг/кг/сут) и токоферол (0,1 мг/кг/сут) в эксперименте обладают стимулирующим влиянием на фагоцитарную и супрессирующим на ки-слородзависимую активность полиморфноядерных лейкоцитов крови, а коэнзим Qio (1 мг/кг/сут) угнетает фагоцитарную и кислородзависимую активность нейтрофилов.

3. У больных ишемической болезнью сердца: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса повышены в крови содержание В-лимфоцитов, показатели функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови, концентрация Сз и С4 компонентов системы комплемента, провоспалительных цитокинов при сниженных показателях Т-звена иммунитета и концентрации противовоспалительного интерлейкина-4.

4. Традиционная фармакотерапия у больных ишемической болезнью сердца: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса существенно не влияет на измененные показатели функционально-метаболической активности нейтрофилов, снижает, но не до уровня нормы, концентрацию компонентов системы комплемента, ИЛ-ip, ИЛ-6 и содержание CD95-лимфоцитов.

5. Включение в комплексную фармакотерапию у пациентов с ишемической болезнью сердца: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса кудесана (60 мг/сут в течение 60 дней), по сравнению с традиционной фармакотерапией, повышает в крови количество Т-хелперов, нормализует содержание В-лимфоцитов и концентрацию интерлейкина-4, снижает содержание CD 16 и С095-лимфоцитов, концентрацию ФНОа, ИЛ-1р и С4 компонента системы комплемента.

6. Применение кудесана у больных ишемической болезнью сердца: стабильной стенокардией напряжения II-III функциональных классов на фоне традиционной фармакотерапии позволяет частично нормализовать функциональную активность полиморфноядерных лейкоцитов.

7. Кудесан у больных ишемической болезнью сердца: стабильной стенокардией напряжения II-III функциональных классов повышает физическую толерантность, снижает частоту ангинозных приступов и суточную потребность в нитроглицерине, и у 57,1% больных снижает функциональный класс стенокардии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Использовать кудесан в дозе 60 мг/сут в течение 60 дней в составе комплексной антиангинальной терапии больных ишемической болезнью сердца: стабильной стенокардией напряжения II-III функционального класса для коррекции нарушенных показателей иммунного статуса.

2. Использовать показатели иммунного статуса в крови: концентрацию ФНОа, количество CD95, СБ16-лимфоцитов для оценки степени выраженности и эффективности коррекции иммунного воспаления у больных ИБС: стабильной стенокардией напряжения.

3. Изучить эффективность использования кудесана в клинической практике при патологии, характеризующейся развитием иммунного воспаления, с целью коррекции нарушений иммунного статуса.

4. Использовать в учебном процессе медицинских вузов знания об имму-нокорригирующих свойствах кудесана у больных ишемической болезнью сердца: стабильной стенокардией напряжения. t