Изучение фармакокинетики нового отечественного препарата содержащего клопидогрел

Рувинов, Юлий Вячеславович

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Изучение фармакокинетики нового отечественного препарата содержащего клопидогрел

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Рувинов, Юлий Вячеславович Москва 2011 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.03.06

Автореферат диссертации по медицине на тему Изучение фармакокинетики нового отечественного препарата содержащего клопидогрел

РУБИНОВ Юлий Вячеславович

ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОКИНЕТИКИ НОВОГО ОТЕЧЕСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА СОДЕРЖАЩЕГО КЛОПИДОГРЕЛ

14.03.06- фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 СЕН 2011

Старая Купавна - 2011

4852623

Работа выполнена в ГОУ ВПО Первый Московский Государственный Медицинский Университет им. И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России Научный руководитель: академик РАМН, доктор медицинских наук,

профессор Кукес Владимир Григорьевич

доктор фармацевтических наук,

профессор Бунятян Наталья Дмитриевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Яворский Александр Николаевич заслуженный деятель науки,

член-корр. РАМН, профессор Гуськова Татьяна Анатольевна

Ведущая организация: Московский государственный медико-стоматологический университет Минздравсоцразвития России

Защита состоится «___»_2011г. в_часов на заседании

Диссертационного Совета Д 217.004.01 при Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ по адресу 142450, Московская область, п. Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ. Автореферат разослан «_»_2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Яснецов В.В.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АДФ аденозиндифосфат

ЖКТ желудочно-кишечный тракт

ИАТ индуцированная агрегация тромбоцитов

ИБС ишемическая болезнь сердца

ИМ инфаркт миокарда

КБ С коронарная болезнь сердца

КЛ клопидогрел

ЛПВП липопротеиды высокой плотности

лпнп липопротеиды низкой плотности

лпноп липопротеиды очень низкой плотности

л с лекарственное средство

НЛР нежелательные лекарственные реакции

НС нестабильная стенокардия

оке острый коронарный синдром

тг триглицериды

Хс общий холестерин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы.

Профилактика и лечение тромбозов является одной из важнейших задач повседневной кардиологической и неврологической практики. Актуальность этой проблемы обусловлена высокой частотой и тяжелыми последствиями тромбозов и тромбоэболий[Парфенов В.А., 2002; Руксин В.В., 1998.]. Клопидогрел (КЛ) является препаратом, ингибирующим агрегацию тромбоцитов, вызванную аденозин дифосфатом (АДФ). Селективно и необратимо блокирует связывание АДФ с рецепторами тромбоцитов, подавляет их активацию, уменьшает количество функционирующих АДФ-рецепторов (без повреждения), препятствует сорбции фибриногена и ингибирует агрегацию тромбоцитов. С непрерывным применением терапевтических доз клопидогрела (75 мг/мл), с первого дня терапии, проявляется значительная ингибиция тромбоцитной агрегации, потом антиагрегационный эффект постепенно усиливается и достигает максимума на 3-й и 7-й день терапии. После непрерывного применения терапевтических доз, средний уровень ингибирования между 40 и 60%. После прекращения терапии, эффект клопидогрела на тромбоцитарную агрегацию и время кровотечения теряется на 5-й день [Herbert J.M., 1999.].

Наряду с тиклопедином (другой препарат с аналогичным механизмом действия) клопидогрел широко применяется для профилактики тромбов, однако по сравнению с тиклопедином клопидогрел более безопасен. Оба эти препарата по крайней мере столь же эффективны для профилактики тромбоза, как и аспирин или превосходят последний по способности снижать степень комбинированного риска инфаркта миокарда, сосудистой смерти и инсульта среди пациентов с постинфарктным кардиосклерозом, инсультом и периферическим кардиосклерозом [Diener Н.С., 2005; Mach F., 2005.]. При этом клопидогрел оказался экономически выгоднее аспирина у пациентов, недавно перенесших ишемический инсульт, инфаркт миокарда и больных

эссенциальной артериальной гипертензией [Delea Т.Е., 2003].

Повышение эффективности и безопасности лекарственной терапии возможно благодаря подробному изучению фармакокинетических и фармакодинамических показателей. Проблемы фармакокинетики: анализ скорости и интенсивности процессов всасывания, распределения по органам и тканям, направленности и количественной оценки процессов биотрансформации, путей и скорости выведения - в последние годы приобретают решающее значение при создании, испытании и разработке оптимального режима фармакотерапии лекарственными препаратами.

По литературным данным основное внимание уделено фармакокинетике и стереохимии клопидогрела, нет данных по сопоставлению фармакокинетики различных препаратов клопидогрела. Очень мало данных по определению метаболита клопидогрела. Нет данных по относительной биодоступности различных препаратов клопидогрела в плазме крови.

Создание новых генерических препаратов предусматривает проведение исследований по биоэквивалентности, что предусматривает разработку методики количественного определения изучаемого соединения в плазме крови. Используемые в настоящее время методики определения клопидогрела требуют больших затрат времени и поэтому неудобны для проведения рутинных анализов.

Цель и задачи исследования. Основной целью исследования явилось изучение фармакокинетики клопидогрела и его метаболита (клопидогрел кислоты), проведение сравнительной фармакокинетической характеристики и относительной биодоступности двух препаратов клопидогрела.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Разработать методику количественного определения клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором.

2. Определить динамику концентраций клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови добровольцев после однократного перорального приема препарата Клорель.

3. Рассчитать фармакокинетические параметры модельно-независимым

методом статистических моментов.

4. Изучить относительную биодоступность и биоэквивалентность

препаратов Клорель и Плавике.

5. Провести статистическую обработку полученных результатов.

Научная новизна.

Впервые изучена относительная биодоступность нового отечественного препарата содержащего клопидогрел.

Определена динамика концентраций клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови после перорального однократного приема препарата, содержащего клопидогрел.

Разработана доступная методика определения метаболита клопидогрела в плазме крови.

Практическая значимость.

Разработаны методики, позволяющие определять с высокой точностью концентрации клопидогрела и клопидогрел кислоты в биологических жидкостях, обеспечивающие повышение контроля качества лекарственных средств.

Определены значения основных фармакокинетических параметров после однократного приема таблеток Клорель и Плавике.

Заключение о биоэквивалентности таблеток Клорель, производитель ЗАО «ФП Оболенское» (Россия) и Плавике, производитель «Санофи-Винтроп» (Франция) позволило выпустить на отечественный фармацевтический рынок новый российский препарат, соответствующий мировым стандартам лечения и обладающий более низкой стоимостью, что делает его доступным для широкого использования населением.

Внедрение в практику.

Результаты исследования используются в аналитической и клинической

практике в Филиале «Клиническая фармакология» НЦ Биомедицинских

технологий РАМН и Институте клинической фармакологии ФГБУ НЦЭСМП Минздравсоцразвития России.

На основании исследований по биоэквивалентности препарат Клорель был рекомендован к медицинскому применению ФГБУ НЦЭСМП Минздравсоцразвития России. Апробация работы.

Диссертационная работа апробирована на совместной научно-практической конференции кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней ПМГМУ им. И.М. Сеченова и Института клинической фармакологии Федерального государственного учреждения «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Росздравнадзора (Москва, 2010 г.).

Публикации по работе. По результатам выполненных исследований опубликовано 5 работ, в том числе 3 статьи в журналах, рецензируемых ВАК РФ.

Основные положения выносимые на защиту:

1. Условия количественного определения клопидогрела и его метаболита в плазме крови методом ВЭЖХ с ЬС/МБ.

2. Динамика концентраций клопидогрела и клопидогрел кислоты после однократного перорального приема препарата Клорель.

3. Фармакокинетические параметры и результаты оценки относительной биодоступности таблеток Клорель и Плавике.

4. Оценка клинической эффективности Зилта и Аториса у больных острым коронарным синдромом.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения и выводов. Работа содержит 34 таблицы и 12 рисунков. Библиографический указатель включает

24 отечественную и 135 иностранных публикаций.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Объекты, материалы и методы исследования.

В работе использованы:

- препарат испытуемый (Т) - КЛОРЕЛЬ, таблетки покрытые оболочкой, по 75 мг ЗАО «ФП Оболенское», Россия. Серия препарата 010903;

- препарат сравнения (R) - ПЛАВИКС , таблетки, покрытые оболочкой, по 75 мг производства компании «Санофи-Винтроп», Франция.

Препараты : Зилт (клопидогрел) и Аторис (аторвастатин) фирмы KRKA, Словения.

В работе использовано следующее оборудование: жидкостные хроматографы Shimadzu с флуориметрическим детектором и Agilent 1200 с масс-спектрометрическим детектором, рН-метр MetroHm 744, водяная баня, магнитная мешалка, лабораторная центрифуга, вибровстряхиватель, роторный испаритель с вакуумным насосом.

Все реактивы, используемые в анализе, были марок «ЧДА» и «для ВЭЖХ».

Тактика исследования.

В исследование было включено 42 здоровых добровольца (средний возраст 21±лет, средний рост 181±см, средний вес кг).

Все волонтеры в период за 1-14 дней до исследования проходили углубленное врачебное исследование (сбор анамнеза, врачебный осмотр, биохимическое исследование крови, общий анализ крови и мочи).

Добровольцы были проинформированы о том, что во время всего исследования они должны соблюдать стандартный режим: не подвергаться физической и психической нагрузке, не употреблять спиртные напитки, кофе и чай, а также не принимать никакие другие лекарственные препараты. В обязанности добровольцев также входило сообщение о любых изменениях режима и самочувствия во время, и после проведения фармакокинетического исследования.

После получения полной информации о ходе проведения исследования, при наличии письменного согласия волонтера, наличии у него всех критериев включения, отсутствии критериев исключения проводилось страхование добровольца в соответствии с требованиями клинических испытаний, и затем доброволец госпитализировался в ГКБ № 23 им Медсантруд.

В день начала исследования, врач, руководящий исследованием проводил клиническое исследование добровольца и делал запись в индивидуальной карточке добровольца. Затем устанавливал разовый кубитальный катетер, через который проводился забор крови.

Исследования проводились в рамках испытаний по биоэквивалентности лекарственных средств в соответствии с методологическими указаниями МЗ РФ по испытаниям биоэквивалентности и были одобрены комитетом по этике.

Прием препаратов осуществлялся per os в часов утра. Забор проб крови осуществлялся из кубитальной вены в количестве 5 мл в гепаринизированные стеклянные пробирки до приема и спустя после приема препаратов. Пробы центрифугировали 15 мин при 3000 об/мин, отбирали 1,5 мл плазмы и хранили до анализа в морозилке при -35°С.

Концентрацию клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови добровольцев определяли с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.

Изучение фармакодинамики и клинической эффективности препаратов Зилт и Аторис проводилось у 60 больных с острым коронарным синдромом.

Полученные экспериментальные данные были подвержены статистической обработке с помощью пакета Microsoft Office Exel 2007 для персонального компьютера. Рассчитывались следующие статистические параметры: среднее значение(Меап), стандартное отклонение среднего результата (S.D), стандартная ошибка (S.E.) и коэффициент вариации (C.V.). Достоверность различий полученных параметров оценивали с помощью дисперсионного анализа (ANOVA). Для оценки параметров биоэквивалентности были рассчитаны также доверительные результаты.

2. Количественное определение клопидогрела и его метаболита в плазме крови.

Известно, что после орального применения клопидогрела в плазме крови фиксируется как действующее вещество - клопидогрел, так и его неактивный метаболит - клопидогрел кислота. Для определения концентрации клопидогрела необходима высокочувствительная методика, поскольку его концентрация в плазме очень мала.

Так как (по литературным данным) концентрация клопидогрела в плазме мала, поэтому исследуемые пробы анализировали на жидкостном хроматографе "Agilent 1100" (США) с масс-спектрометрическим детектором (электроспрей + ионизация). Разделение проводилось на колонке Zorbax SB С18 (4,6*50мм; 1,8 мкм). Температура разделения 40°С. Подвижная фаза состояла из смеси ацетонитрила и деионизированной воды с 0,1% муравьиной кислоты (15:85, v/v). Скорость потока 0.3 мл/мин. Объем вводимой пробы - 30 мкл. Детектирование проводилось по протонированному молекулярному иону клопидогрел с m/z 322,2, фрагментатор 110В, температура азота 400°С, расход газа 5,0 л/мин, давление небулайзера 60 psig.

Детектирование с использованием масс-спектрометрического детектора позволяет достичь необходимого предела обнаружения (100 пг/мл) клопидогрела с хорошей воспроизводимостью результатов.

При анализе клопидогрел кислоты подвижная фаза состояла из смеси ацетонитрила и деионизированной воды с 0,1% муравьиной кислоты (25:75, v/v). Скорость потока 0.3 мл/мин. Объем вводимой пробы - 30 мкл. Детектирование проводилось по протонированному молекулярному иону клопидогрел с m/z 308. фрагментатор 50В, температура азота 400°С, расход газа 10,0 л/мин, давление небулайзера 35 psig.

При разработке аналитической методики важная роль отводится процессу пробоподготовки. Для подготовки образцов плазмы крови более оптимальным является способ с применением жидкостной экстракции с последующим концентрированием пробы. Детальное изучение экстракции клопидогрела

провели несколькими органическими растворителями. Наилучшая степень экстракции была достигнута смесью гексан/диэтиловый эфир (80:20 v/v) в нейтральной среде, коэффициент экстракции составил 90%.

Таким образом, для извлечения клопидогрела из плазмы крови, экстракцию проводили следующим образом: к образцу плазмы крови (объемом 0,5 мл) добавляли 3 мл смеси (н-гексан/диэтиловый эфир, 80:20v/v), смесь подвергалась встряхиванию на шейкере в течение 10 минут, затем центрифугированию в течение 10 мин при 4500 об/мин. Потом органический слой переносили в колбы и экстракт упаривали на роторном испарителе при 37°С. Сухой остаток растворяли в 100 мкл подвижной фазы и 30 мкл полученного раствора анализировали на ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором.

Для извлечения клопидогрел кислоты (метаболит клопидогрела) из плазмы крови, экстракцию проводили следующим образом: к 0,25 мл плазмы крови добавляли 3 мл хлороформа, интенсивно встряхивали на шейкере в течение 10 минут и центрифугировали при 4500 об/мин 10 минут. Затем органический слой переносили в колбы для упаривания и упаривали на роторном испарителе при 37°С. Сухой остаток растворяли в 200 мкл смеси метанол/вода (50/50) переносили в виалы и далее анализировали на Agilent.

Количественное определение проводили методом абсолютной калибровки. Растворы готовили в метаноле и хранили в холодильнике при -18°С (растворы стабильны 1 месяц). Калибровочный график строили по результатам хроматографического анализа на основе измерений высот хроматографических пиков с использованием программы Chem Station LC 3D.

При регрессионном анализе выявлена линейная зависимость между концентрацией клопидогрела в интервале 10 - 10000 пг/мл. Коэффициент корреляции составил г2=0,99. Воспроизводимость метода шести повторов каждой исследованной концентрации находилась в пределах 98,5-103,5%.

Калибровочная зависимость для клопидогрел кислоты носила линейный

характер в диапазоне концентраций 0,01-10,0 мкг/мл.

3. Фармакокинетика клопидогрела и его метаболита

С помощью разработанной нами методики были изучены фармакокинетические параметры клопидогрела и его метаболита. В фармакокинетическое исследование было включено по 12 здоровых добровольцев, без патологий желудочно-кишечного тракта. Усредненная динамика концентрации клопидогрела и его метаболита в плазме крови добровольцев представлены в таблицах 1,2.

Таблица 1.

Усредненная динамика содержания клопидогрела (пг/мл) в плазме крови

добровольцев после однократного приема внутрь 150 мг препарата Клорель

№ Добр. Время, час

0.5 1 1.5 2 3 4 6 8 12

Mean 1786.4 3713.5 2885.5 1718.7 860 608.3 441.6 308.5 148.3

S.D. 879.1 736.3 771.1 592.8 166.2 146.2 155.2 121.8 140.5

C.V. 49.2 19.8 26.7 34.5 19.3 24.0 35.1 39.4 94.7

Таблица 2.

Усредненная динамика концентрации клопидогрел кислоты (мкг/мл) после однократного приема препарата Клорель в дозе 75 мг добровольцами.

№ Добр. Время, час

0.5 1 1.5 2 3 4 6 8 12 24

Mean 0.77 2.11 2.58 2.05 1.47 0.95 0.61 0.44 0.29 0.15

S.D. 0.40 0.81 0.70 0.64 0.53 0.29 0.23 0.14 0.14 0.10

C.V. 51.6 41.1 27.0 31.5 36.2 31.1 36.8 32.3 47.3 69.2

Исследования показали, что клопидогрел после приема внутрь препарата

Клорель достаточно быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте.

Максимальная концентрация достигается через 1 час после приема препарата. После 3 часов происходит медленное экспоненциальное снижение концентрации. Однако через 12 часов препарат в крови практически не обнаруживается.

Клопидогрел кислота быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте, максимум концентрации достигается через 1,5 часа и составляет 2,58±0,70 мкг/мл.

Следует отметить, что после приема исследуемого препарата имеет место значительная межиндивидуальная вариация кинетических кривых во всех точках отбора крови (коэффициент вариации от 19,3 до 94,7%).

Усредненные значения фармакокинетических параметров клопидогрела и клопидогрел кислоты представлены в табл.3,4.

Таблица 3.

Усредненные фармакокинетические параметры клопидогрела после однократного приема внутрь 150 мг препарата Клорель

AUCo-co Tmax С max kel Tl/2 MRT V

Mean 10483.4 1.12 3908 0.185 3.92 4.59 83.1

S.D. 2431,9 0,023 552,8 0,041 0,93 1,23 21,4

C.V. 23,1 20,1 8,2 22,2 23,8 27,0 25,8

Таблица 4.

Усредненные фармакокинетические параметры клопидогрел кислоты после однократного приема внутрь 75 мг препарата Клорель

AUCM T г ^max kel Tl/2 MRT V

мкг-ч/мл час мкг/мл 1/час час час л

Mean 15.06 1.46 2.76 0.09 8.24 9.96 121.6

S.D. 5.03 0.33 0.65 0.036 3.08 4.13 42.1

c.v. 33.4 22.9 23.3 38.2 37.4 41.5 34.6

Исследование фармакокинетики Клореля показало, что максимальная концентрация клопидогрела в крови составляет в среднем 3908±552,8 пг/мл и наступает через 1,12±0,023 ч. Площадь под фармакокинетической кривой в среднем составляет 10483,4±2431,9 пгхч/мл, период полуэлиминации -3,92±0,93 ч. Препарат достаточно мало удерживается в организме, среднее время удерживания составляет 4,59±1,23 ч.

Исследование фармакокинетики препарата Клорель показало, что максимальная концентрация клопидогрел кислоты в крови составляет 2,76±0,65 мкг/мл и наступает через 1,46±0,33 ч. Площадь под фармакокинетической кривой в среднем составляет 15,06±5,03мгхч/мл, период полуэлиминации - 8,24±3,08 ч, среднее время удерживания составляет 9,96±4,13 ч.

4.Исследование биоэквивалентности препаратов клопидогрел.

Для проявления оптимального терапевтического действия активная часть лекарственного средства должна быть доставлена к месту действия в эффективной концентрации в течение желаемого периода времени. Для того чтобы подтвердить наличие терапевтического эффекта, необходимо всесторонне исследовать действие ЛФ.

Главным образом, это относится к дженерикам, содержащим одно и то же действующее вещество в одинаковой дозировке и используемым вместо оригинального ЛС. При этом в клинических условиях генерический препарат должен оказывать такой же терапевтический эффект, как и оригинал.

Сравнительное изучение биоэквивалентности клопидогрела проводили для препаратов с обычным высвобождением действующего вещества, на примере препаратов Клорель и Плавике, таблетки покрытые оболочкой 75мг.

Исследование проводили в соответствии с требованиями Методических указаний Минздравсоцразвития РФ «Проведение качественных исследований биоэквивалентности лекарственных средств» (2004г.) по перекрестной, рандомизированной схеме на 18 здоровых добровольцах. В случайном порядке

9 волонтеров принимали сначала препарат Клорель, а затем, спустя 14 дней -препарат Плавике. Другая группа добровольцев принимала препараты в обратном порядке. Решение, будет ли доброволец первоначально принимать препарат испытуемый или сравниваемый, было принято случайно.

Концентрацию клопидогрел кислоты в плазме крови определяли с помощью ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором. На рис. 1. Представлены усредненные фармакокинетические кривые клопидогрел кислоты (в линейных координатах).

Рис. 1. Усредненные кинетические кривые после однократного приема препаратов Плавике (Ряд 1) и Клорель (Ряд 2) добровольцами.

Показано соответствие профилей значений концентрации на фармакокинетических кривых при приеме обеих анализируемых препаратов клопидогрела. Установлено, что при приеме как таблеток Клорель, так и референс-препарата Плавике, препарат быстро всасывался из ЖКТ, достигая максимального значения концентрации клопидогрел кислоты через 1 час, с близкими значениями максимальных концентраций.

В таблицах 5,6. представлены средние значения основных фармакокинетических параметров, характеризующих относительную биодоступность изученных лекарственных форм клопидогрела.

Таблица 5

Усредненные фармакокинетические параметры препарата Клорель (Т)

№ Параметр

Тта\ АиСо-з2 АиСо-оо Стах/АиСо-32 Тш МЯТ

мкг/мл час мкг*ч/мл мкгхч/мл час"1 час час

Меап 3.79 1.39 17.62 18.15 0.224 6.62 7.24

БЛЭ 3.72 1.34 16.92 17.41 0.220 6.59 7.19

Б.Е. 0.77 0.37 5.02 5.26 0.045 0.65 0.90

0.18 0.09 1.18 1.2 0.011 0.15 0.21

С.У. 20.3 26.6 28.5 28.9 20.1 9.8 12.4

3.414.18 1.21-1.57 15.12+20.12 15.54-20.76 0.202+0.247 6.29+6.9 6.80+7.69

Таблица 6

У средненныефармакокинетические параметры препарата Плавике Я

№ Параметр

Стах» Тщах АиСо-зз АИСо-о, Ста.1/АиСо-32 Тш МЯТ

мкг/мл час мкгхч/мл мкгхч/мл час"' час час

Меап 3.80 1.31 18.14 18.63 0.215 6.27 7.20

БЛЭ 3.69 1.26 17.47 17.92 0.211 6.15 7.13

8.Е. 0.88 0.35 4.88 5.09 0.038 1.29 1.04

0.21 0.08 1.15 1.20 0.009 0.30 0.25

С.У. 23.2 26.7 26.9 27.3 17.7 20.6 14.4

Значение отношений максимальной концентрации к площади под фармакокинетической кривои Cmax/AUCo-32 для двух исследуемых лекарственных форм метаболита клопидогрела статистически достоверно не различаются и составляют в среднем соответственно 0,224±0,045 и 0,215±0,038 l/ч, а индивидуальный разброс значений невелик (C.V.=17-20%).

Разности между значениями Ттах для тестируемого препарата и препарата сравнения близки к нулю. Среднее значение составляет Ттах -1,39±0,37 и 1,31±0,35 часа (CV=26,7%); период полуэлиминации Тш -6.62±0,65 и 6,27±1.29 часа; среднее время удержания в организме MRT -7,24±0,90 и 7,20±1,04 часа соответственно.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что скорость всасывания препаратов Клорель и Плавике статистически достоверно не различаются

Таблица 7

Параметры биоэквивалентности препаратов Клорель и Плавике

Параметры f f"

Средние значения 0.998 1.021

Средние геометрические значения 0.969 1.007

Стандартное отклонение 0.252 0.168

Стандартна ошибка 0.059 0.040

Коэффициент вариации 25.25 16.45

Интервальные значения 0.872-1.123 0.937-1.105

Среднее значение относительной степени всасывания метаболита (Г') для изучаемого препарата составляет 1,021±0,168. Наблюдается незначительный разброс индивидуальных значений относительной степени всасывания (С.У.=16%).

Дисперсионный анализ значений АиС^,, Сшах, Стах/АиС0-(, проведенный

после их логарифмического преобразования не выявил статистически значимых

различий между препаратами (таблица 8).

Таким образом, не выявлено статистически достоверных различий в процессе всасывания (как по полноте, так и по скорости) клопидогрел кислоты после приема препаратов Кпорель и Плавике.

Таблица 8

Результаты дисперсионного анализа 1п-преобразованных значений фармакокинетических параметров клопидогрела

Параметр Источник вариаций Число степеней свободы Сумма квадратов отклонений Средний квадрат отклонений Б Р

АиСо-зг Добровольцы 17 2.4660 0.1450 4.6475 0.0014

Препараты 1 0.0091 0.0091 0.2942 0.5945

Периоды 1 0.0066 0.0066 0.0732 0.7885

с Добровольцы 17 0.4666 0.0862 5.9010 <0.001

Препараты 1 0.0004 0.0004 0.0330 0.8579

Периоды 1 0.0011 0.0011 0.0231 0.8801

Г / Добровольцы 17 1.1493 0.0676 3.9059 0.0038

АиС0., Препараты 1 0.0138 0.0138 0.8019 0.3830

Периоды 1 0.0133 0.0133 0.2986 0.5885

5. Взаимодействие клопидогрела и аторвастатина у больных с ОКС

Нами проведено клиническое исследование, посвященное изучению

клинического значения взаимодействия клопидогрела (Зилт, КИКА) и

аторвастатина (Аторис, КЯКЛ) в различных дозах (10 мг/сутки, 20 мг/сутки, 40

мг/сутки, 8- мг/сутки) у больных с нестабильной стенокардией и

гиперлипидемией (ГЛП) II А и II Б типов: влияние аторвостатина на

антиагрегантное действие клопидогрела по динамике показателей

индуцированной агрегации тромбоцитов (ИАТ). Пациенты составили 2 группы,

по 30 человек в каждой. I группа - терапия клопидогрелем 300 мг в первые

сутки, далее по 75 мг в течение месяца без липидснижающей терапии,

продолжительностью наблюдения в течение месяца. II группа - терапия

клопидогрелем 300 мг в первые сутки, далее 75 мг в сочетании с аторвостатином, с подбором дозы 10-80 мг.

В 1 группе наблюдения до начала лечения, отмечались заметно выраженные дислипидемические нарушения в обследованной группе больных. Так, например Общ. Хс в среднем составил 7,08±0,13 ммоль/л, концентрация Хс ЛПНП составила в среднем 4,92±0,13 ммоль/л. Поскольку в группе присутствовали пациенты со II Б типом ГЛП, средняя величина ТГ была повышена и составила в среднем 2,16±0,12 ммоль/л. Отмечалось также повышение Хс ЛПОНП и КА, которые в среднем составили соответственно 0,98±0,07 и 5,0±0,09 ммоль/л.

Отмечено также снижение антиатерогенных Хс ЛПВП, в среднем составивших 1,18±0,14 ммоль/л. На фоне терапии Зилтом, через 1 месяц выше указанные показатели практически остались без существенных изменений.

В группе больных, получавших Зилт (I группа), в начале исследования концентрация МЕвХ находилась в пределах нормы, составляя в среднем 46,2± 1,86 нг/мл, в дальнейшем на фоне лечения, отмечалась тенденция к увеличению концентрации МЕйХ в целом, хотя колебания отдельных концентраций продолжали находится в пределах нормы.

В конце исследования концентрация МЕвХ составила в среднем 75,0±1,68 нг/мл. Изменение концентрации \4EGX было статистически достоверно. Полученные данные говорят о хорошей активности изофермента ЗА4, которые метаболизирует Зилт сообразованием активного метаболита, чем объясняется положительный антиагрегантный эффект.

На фоне лечения Зилтом отмечена значительная положительная динамика ИАТ, которая была в начале исследования повышена у всех больных данной группы (19,5±0,07). Уже на 15 день, агрегация тромбоцитов снизилась на 43,8%. В дальнейшем сохранялась заметная тенденция к снижению, достигнув максимальной величины 5,42±0,12 (-72,2%) на 30 день терапии.

Во II группе наблюдения (терапия Аторисом и Зилтом) данные липидного спектра, биохимическое исследование крови, агрегация тромбоцитов и МЕйХ -

тест у больных II группы осуществлялись до начала лечения и через 1,2,3,4 месяца терапии.

До начала лечения, отмечались заметно выраженные дислипидемические изменения. Общ. Хс, ТГ, Хс ЛПНП, Хс ЛПОНП составили соответственно: 7,12±0,13 ммоль/л; 2,08±0,11 ммоль/л; 4,94±0Д4 ммоль/л; 0,94±0,05 ммоль/л. КА составил 4,82±0,12 ммоль/л. Концентрация ХСЛПВП была снижена и составила 1,22±0,12 ммоль/л.

На фоне терапии отмечена положительная динамика показателей липидного спектра. Так уже через 1 и 2 месяца отмечены заметные позитивные изменения, которые заключались в уменьшении Общ. Хс, ТГ, Хс ЛПНП, КА. Через 3 и 4 месяца терапии, динамика вышеуказанных показателей, нося статистически достоверный характер, стала гораздо более выраженной, что так же сопровождалось достоверным снижением Хс ЛПОНП. Что касается концентрации Хс ЛПВП, то существенной динамики не отмечалось, и последняя была статистически не достоверна.

В группе больных, где проводилась сочетанная терапия препаратами Аторис и Зилт (II группа) отличалось колебание концентрации М1ЮХ от 20 до 40 нг/мл , что указывало о небольшом снижении активности изофермента ЗА4. Поэтому, по всей вероятности, в отдельных случаях наблюдается недостаточное образование метаболита Зилта, что объясняет более слабый антиагрегантный эффект. Через 4 месяца от начала лечения, в среднем, отмечается, в целом по всей группе, уменьшение концентрации МЕОХ (до 26,8±1,36 нг/мл) по отношению к исходным данным (31,5±0,73 нг/мл). При детальной оценке данной группы оказалось, что у части больных (16 человек), у которых суточная доза Аториса была в пределах от 40 до 80 мг, отмечалось значительное снижение концентрации МЕвХ по отношению к исходным данным. На основании ретроспективной оценке всей группы в целом были выделены: подгруппа А (14 человек), у которых доза Аториса на протяжении всего исследования не превышала 20 мг и подгруппа Б (16 человек), у которых к концу исследования доза Аториса колебалась от 40 до 80 мг. При оценке

динамики концентрации МЕСХ в пределах каждой подгруппы было отмечено, что в подгруппе А отмечалась умеренная тенденция к повышению концентрации МЕвХ, на протяжении всего исследования, тогда как в подгруппе Б на фоне увеличения дозы Аториса (суточные дозы от 40 до 80 мг) отмечалось резкое падение концентрации МЕОХ (суточные дозы от 40 до 80 мг) отмечалось резкое падение концентрации МЕвХ.

При оценке ИАТ, которая была повышена в начале исследования, на фоне сочетанной терапии Зилтом и Аторисом отмечена достоверная динамика, хотя степень снижения агрегации тромбоцитов, будучи весьма заметной, все же была не так выражена, как на фоне изолированного применения Зилта (ИАТ % - 16,±0,09% до начала лечения; 11,53±0,06 через 4 месяца).

Таким образом, при проведении МЕйХ теста у больных на фоне терапии Зилтом, концентрация МЕвХ колебалась в пределах нормы, что указывает на достаточное количества активного метаболита препарата и высокую его эффективность. При сочетанной терапии Зилтом и Аторисом отмечается подавление активности изофермента ЗА4, особенно в случаях, когда суточная доза Аториса находится в пределах от 40 до 80 мг. По всей вероятности это связанно с уменьшением образования активного метаболита Зилта, что способствует более слабому его антиагрегантному эффекту. Изолированное применение препарата Зилт показало его выраженную эффективность как дезагреганта. Сочетанное применение Зилта с Аторисом показывает менее выраженное действие Зилть как дезагреганта, при этом эффективность его, не будучи идентичной таковой при изолированном применении препарата, всё же остается достаточно выраженной.

выводы

1. Разработаны чувствительные, воспроизводимые методики количественного определения клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови добровольцев с помощью ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором: подобраны оптимальные условия экстракции, хроматографического разделения и детектирования. Предел обнаружения в плазме крови для клопидогрела составляет пг/мл, а клопидогрел кислоты мкг/мл.

2. Изучена фармакокинетика и определены основные фармакокинетические параметры клопидогрела после однократного перорального приема таблеток Клорель. Фармакокинетика клопидогрела характеризуется низким содержанием препарата в крови. Показано, что клопидогрел быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте и также быстро выводится из организма.

3. Оценены основные фармакокинетические параметры (С шах, Tmax, AUC о-со, Tl/2, MRT, V) клопидогрел кислоты (метаболита клопидогрела). Метаболит клопидогрела быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте.

4. Проведены анализ и оценка сравнительной биодоступности клопидогрел кислоты при пероральном приеме таблеток Клорель (Россия) и Плавике (Франция). Установлено, что фармакокинетические показатели, характеризующие всасывание, распределение и элиминацию после приема препаратов одинаковы. Исследованные лекарственные препараты биоэквивалентны.

5. Установлено, что клопидогрел без сочетанного применения с аторвастатином практически не оказывал никакого влияния на состояние липидного спектра крови у больных с ГЛП II А и II Б типов. При проведении MEGX теста у больных на фоне терапии клопидогрелем, концентрация MEGX колеблется в пределах нормы, что указывает на достаточное количество активного метаболита и высокой его эффективности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сычев Д.А., Дмитриев В.А., Цветов В.М., Ташенова А.И., Заева В.В., Рувинов Ю.В., Кукес В.Г. Значение для клинициста информации из раздела «Побочное действие» инструкции по медицинскому применению лекарственного средства //Фармацевтическая промышленность - 2010. -№ 3. - С. 84-87.

2. А.С.Сивков, C.B. Пауков, Ю.В. Рувинов, И.В. Кукес. Индивидуальная безопасность фармакотерапии при оценке активности изофермента цитохрома Р-450 ЗА4 (СУРЗА4)//Клиническая медицина - 2010. - № 2. -С. 61-67.

3. Основы клинической фармакогенетики: пособие для студентов медицинских вузов- В.Г.Кукес, Н.А.Гасанов, Д.А.Сычев, Ю.В.Рувинов -М.:МТ ,2006,-30с.

4. Горошко О. А., Чеча О. А., Пахомов В. П., Рувинов Ю. В., Исмагилов Т. Д. Сорбенты для тонкослойной хроматографии в фармацевтическом анализе//Химико-фармацевтический журнал. - 2010. - Том 44, № 9. - С. 53-56.

5. Рувинов Ю.В., Бунятян Н.Д., Василенко Г.Ф. Исследование биоэквивалентности препаратов клопидогрела//Фармация. - 2011. - №2. -С. 44-46.

Заказ № 22-Р/08/2011 Подписано в печать 15.08.2011 Тираж 50 экз. Усл. п.л. 1

ООО "Цифровичок", тел. (495) 649-83-30 Оч *}) Mrmv.cfr.ru ; е-таИ:info@cfr.ru

Оглавление диссертации Рувинов, Юлий Вячеславович :: 2011 :: Москва

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Тиклопидин и клопидогрел - тиенопиридины разных поколений.

1.2. Клопидогрел против ацетилсалициловой кислоты : исследование САРМЕ.

1.3. Фармакокинетика клопидогрела.

1.4. Оценка активности изофермента цитохрома.

1.5. Методы оценки активности СУРЗА4.

1.6. Взаимодействие клопидогрела и статинов на уровне СУРЗА4.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Препараты, средства измерений, вспомогательные устройства.

2.2. Реактивы и их приготовление.

2.3. Выбор добровольцев.

2.4. Проведение исследования.

2.5. Расчет фармакокинетических параметров.

2.6. Оценка фармакокинетики и клинической эффективности Зилта и Аториса.

2.7. Определение концентрации МЕОХ методом ВЭЖХ.

2.8. Статистическая обработка результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИСЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Количественное определение клопидогрела в плазме крови.

3.2. Изучение фармакокинетики клопидогрела после однократного приема внутрь.

3.3. Количественное определение клопидогрел кислоты в плазме крови.

3.4. Изучение фармакокинетики клопидогрел кислоты после однократного приема внутрь.

3.5. Сравнительное фармакокинетическое исследование биоэквивалентности препаратов Клорель и Плавике.

3.6. Взаимодействие клопидогрела и аторвастатина у больных ИБС.

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Рувинов, Юлий Вячеславович, автореферат

Актуальность темы. Профилактика и лечение тромбозов является одной из важнейших задач повседневной кардиологической и неврологической практики. Актуальность этой проблемы обусловлена высокой частотой и тяжелыми последствиями тромбозов и тромбоэболий[13Д9]. Клопидогрел (КЛ) является препаратом, ингибирующим агрегацию тромбоцитов, вызванную аденозин дифосфатом (АДФ). Селективно и необратимо блокирует связывание АДФ с рецепторами тромбоцитов, подавляет их активацию, уменьшает количество функционирующих АДФ-рецепторов (без повреждения), препятствует сорбции фибриногена и ингибирует агрегацию тромбоцитов. С непрерывным применением терапевтических доз клопидогрела (75 мг/мл), с первого дня терапии, проявляется значительная ингибиция тромбоцитной агрегации, потом антиагрегационный эффект постепенно усиливается и достигает максимума на 3-й и 7-й день терапии. После непрерывного применения терапевтических доз, средний уровень ингибирования между 40 и 60%. После прекращения терапии, эффект клопидогрела на тромбоцитарную агрегацию и время кровотечения теряется на 5-й день [77].

Наряду с тиклопедином (другой препарат с аналогичным механизмом действия) клопидогрел широко применяется для профилактики тромбов, однако по сравнению с тиклопедином клопидогрел более безопасен. Оба эти препарата по крайней мере столь же эффективны для профилактики тромбоза, как и аспирин или превосходят последний по способности снижать степень комбинированного риска инфаркта миокарда, сосудистой смерти и инсульта среди пациентов с постинфарктным кардиосклерозом, инсультом и периферическим кардиосклерозом [55,95]. При этом клопидогрел оказался экономически выгоднее аспирина у пациентов, недавно перенесших ишемический инсульт, инфаркт миокарда и больных эссенциальной артериальной гипертензией [51].

Повышение эффективности и безопасности лекарственной терапии возможно благодаря подробному изучению фармакокинетических и фармакодинамических показателей. Проблемы фармакокинетики: анализ скорости и интенсивности процессов всасывания, распределния по органам и тканям, направленности и количественной оценки процессов биотрансформации, путей и скорости выведения — в последние годы приобретают решающее значение при создании, испытании и разработке оптимального режима фармакотерапии лекарственными препаратами.

По литературным данным основное внимание уделено фармакокинетике и стереохимии клопидогрела, нет данных по сопоставлению фармакокинетики различных препаратов клопидогрела. Очень мало данных по определению метаболита клопидогрела Нет данных по относительной биодоступности различных препаратов клопидогрела в плазме крови.

Цель исследования:

Основной целью исследования явилось изучение фармакокинетики клопидогрела и его метаболита (клопидогрел кислоты), проведение сравнительной фармакокинетической характеристики и относительной биодоступности двух препаратов клопидогрела.

Задачи исследования. 1. Разработать методику количественного определения клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови методом ВЭЖХ методом ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором.

3. Рассчитать фармакокинетические параметры модельно-независимым методом статистических моментов.

4. Изучить относительную биодоступность и биоэквивалентность препаратов Клорель и Плавике.

5. Провести статистическую обработку полученных результатов.

Научная новизна. Впервые изучена относительная биодоступность нового отечественного препарата, содержащего клопидогрел.

Разработана доступная методика определения метаболита клопидогрела в плазме крови.

Практическая значимость. Разработаны методики, позволяющие определять с высокой чувствительностью и точностью концентрации клопидогрела и клопидогрел кислоты в биологических жидкостях, обеспечивающие повышение контроля качества лекарственных средств. Разработанные методики могут быть использованы при проведении фармацевтического анализа, для контроля качества препарата в процессе производства и хранения.

Внедрение в практику. Результаты исследования используются в аналитической и клинической практике в Филиале «Клиническая фармакология» НЦ Биомедицинских технологий РАМН и Институте клинической фармакологии ФГБУ НЦЭСМП Минздравсоцразвития РФ.

На основании исследований по биоэквивалентности препарат Клорель был рекомендован к медицинскому применению ФГБУ НЦСЭМП Минздравсоцразвития РФ.

Основные положения выносимые на защиту:

1. Методики количественного определения клопидогрела и клопидогрел кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором.

2. Динамика концентраций клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови после однократного приема препарата Клорель.

3. Результаты фармакокинетических исследований.

4. Относительная биодоступность двух лекарственных препаратов Клорель и Плавике.

Апробация работы. Диссертационная работа апробирована на совместной научно-практической конференции кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней ПМГМУ им. И.М. Сеченова и Института клинической фармакологии Федерального государственного учреждения «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Росздравнадзора (Москва, 2010 г.).

Публикации. По результатам диссертационного исследования опубликовано 5 работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рецензируемых ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описание материалов и методов исследования, 3 глав результатов собственных исследований, заключения и выводов. В работе представлены 35 таблиц и 12 рисунков. Библиографический указатель включает 24 отечественных и 135 зарубежных публикаций.

Заключение диссертационного исследования на тему "Изучение фармакокинетики нового отечественного препарата содержащего клопидогрел"

выводы

1. Разработаны чувствительные, воспроизводимые методики количественного определения клопидогрела и клопидогрел кислоты в плазме крови добровольцев с помощью ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектором: подобраны оптимальные условия экстракции, хроматографического разделения и детектирования . Предел обнаружения в плазме крови для клопидогрела составляет пг/мл, а клопидогрел кислоты мкг/мл.

3. Оценены основные фармакокинетические параметры (С max, Tmax, AUC о-оо, Т1/2, MRT, V) клопидогрел кислоты (метаболита клопидогрела). Метаболит клопидогрела быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Как показал анализ литературных данных, наряду с тиклопидином( другой препарат с аналогичным механизмом действия) клопидогрел широко применяется для профилактики тромбозов, однако по ставнению с тиклопидином КЛ более безопасен. Применение тиклопидина ограничивается более частыми побочными эффектами и его более высокой стоимостью по сравнению с апирином. КЛ оказался экономически выгоднее аспирина у пациентов, недавно перенесших ишемический инсульт, инфаркт миокарда и больных эксенциальной артериальной гипертензией.

В настоящее время в практике количественного определения содержания лекарственных веществ в биологических субстанциях все большее применение находят так называемые «гибридные» методы. Под этим подразумевается сочетание масс-спектрометрии с хроматографическими методами разделения. По той же причине, что и ВЭЖХ все больше вытесняет газовую хроматографию из фармацевтического анализа, так и в «гибридных» подходах сочетание с масс-спектрометрией (ЬС-МБ) становится преобладающим методом анализа биологических образцов. Дело в том, что LC-MS позволяет анализировать нелетучие и термонестабильные вещества.

В клинической фармакокинетике главным преимуществом LC-MS по сравнению с традиционными методами жидкостной и газовой хроматографии является более высокая чувствительность количественного определения концентрации лекарственных веществ. Таким образом масс-спектрометрия является мощным орудием идентификации и количественного определения органических соединений.

Разработанные в ходе решения поставленных задач оригинальные аналитические методики с применением ВЭЖХ с масс-спектрометрическим детектированием позволили с высокой точностью определить концентрации клопидогрела и его неактивного метаболита на всем интервале наблюдения.

После приема внутрь KJI быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте, через 3 часа в крови практически не определяется.

У 18 добровольцев исследована относительная биодоступность препарата Клорель (действующее вещество — клопидогрел) производства ЗАО «ФП Оболенское» (Россия) после перорального приема 2 таблеток, содержащих суммарно 150 мг клопидогрела. В качестве препарата сравнения использовали аналогичный препарат Плавике, таблетки по 75 мг, производства компании «Санофи-Винтроп» (Франция). Оценка биоэквивалентности проводилась путем определения концентрации неактивного метаболита клопидогрела - производного карбоксиловой кислоты, в плазме крови добровольцев после однократного приема сравниваемых препаратов (доза 150 мг), которую определяли с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Установлено, что полнота и скорость всасывания клопидогрела из препаратов производства ЗАО «ФП Оболенское» и фирмы «Санофи-Винтроп» практически одинаковы. Сделан вывод: сравниваемые лекарственные препараты биоэквивалентны.

При проведении исследований по изучению сравнительной фармакокинетики и биоэквивалентности препаратов клопидогрела ни один доброволец не выбыл из исследования. Анализ лабораторных и инструментальных исследований добровольцев до и после приема таблеток клопидогрела показал, что параметры были в пределах нормы. Таким образом, не было обнаружено проявлений нежелательного действия препаратов на состояние добровольцев.

Таким образом, изменением активности ферментов биотрансформации, и, в частности СУРЗА4, можно объяснить многие проблемы, связанные с «не адекватным» фармакологическим ответом при применении того или иного ЛС: развитие нежелательных лекарственных реакций или недостаточная эффективность ЛС. При этом, оценка активности СУРЗА4, может использоваться не только в клинических исследованиях для решения тех или иных клинико-фармакологических проблем, но и в реальной клинической практике для персонализированного подхода к выбору ЛС и его дозы в зависимости от активности СУРЗА4. И в настоящее время разработаны тесты для оценки активности СУРЗА4, позволяющие использовать для персонализации фармакотерапии. Ожидается, что в будущем и для оценки других ферментов биотрансформации появятся удобные и безопасные методы, которые скорее всего будут использоваться в комплексе как один из элементов персонализированной медицины.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Рувинов, Юлий Вячеславович

1.Аверков O.A. Тиклопидин и клопидогрел — есть ли поводы для противостояния? //Клин, фармак. и терап. — 2007. — Т. 33, № !. - С.33-40.

2. Агафонов A.A., Пиотровский В.К. Программа M-IND оценки системных параметров фармакокинетики модельно-независимым методом статистических моментов//Хим-фарм.журнал — 1991. №10. — С. 16-19.

3. Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. Геном человека и гены «предрасположенности». Введение в предиктивную медицину .//СПб.: Интермедика.- 200.-272 с.

4. Безверхая И.С. Фармакокинетика при старении. — Киев: Здоровье, 1991. -168с.

5. Дупляков Д.В. Клопидогрел и статины, или еще раз об опасности прямого переноса результатов экспериментальных исследований в клиническую практику //Кардиология. 2008. - Т.48, № 2. - С.65-66.

6. Жердев В.П., Литвин A.A. Роль и организация фармакокинетических исследований // Клиническая фармакокинетика. — 2005. №2(3). — С. 1-3.

7. Кашаева О.В. Состояние метаболической функции печени и оптимизация фармакотерапии у больных хронической сердечной недостаточностью.//Автореферат. дис.канд.мед.наук. — М. — 2002. — 19 с.

8. Кукес В.Г. Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты.//М.:Издательство «Рефарм» — 2004. -186 с.

9. Кукес В.Г., Сычев Д.А., Ших Е.В. Изучение биотрансформации лекарственных средств путь к повышению эффективности и безопасности фармакотерапии.//Врач. - 2007. - №1. - С. 6-8.

10. Ю.Мирошниченко И.И. Основы фармакокинетики. М.: Изд.д. «Геотар-мед», 2002. — 186с.

11. П.Мирошниченко И.И., Тюляев И.И., Зуев А.П. Биодоступность лекарственных средств — М.: «Грамотей», 2003.-101с.

12. Моисеев C.B. Перспективы антитромбоцитарной терапии //Клиническая фармакология и терапия. 2003. - Т.12, №4ю — С.18-22.

13. З.Парфенов В. А. Лечение и профилактика ишемического инсульта//Соп8Шиш Medicum. 2002 г. Т. 4, №2.

14. Преображенский Д.С., Сидоренко Б.А., Батыралиев Т.А. Тиенопиридины в лечении и профилактике сердечно-сосудистых заболеваний. Часть II. Клиническая фармакология клопидогрела //Кардиология. 2009. - Т.49, №10. - С. 88-96.

15. Применение MEGX-теста для оценки активности изофермента цитохрома Р-450 ЗФ4: Методические рекомендации / В.Г.Кукес, Г.В.Раменская, А.А.Игонин и др. М.: ООО КПСФ «Спецстройсервис-92», 2004. - 22с.

16. Проведение качественных исследований биоэквивалентности лекарственных средств.// Метод.указания. 2004.

17. Раменская Г.В. Хроматографическое определение лекарственных средств и их метаболитов для фенотипирования изоферментов цитохрома Р-450.//Химико-фармацевтический журнал: научно-технический и производственный журнал. 2005. — Том 39,№ 2. — С. 53-56.

18. Раменская Г.В., Светый Л.И., Кулинченко A.A. Влияние флуконазола на концентрацию блокаторов медленных кальциевых каналов в плазме крови.// Клиническая фармакология и терапия. 2002. - №5. - С. 54-56.

19. Руксин В.В. Тромбозы в кардиологической практике. СПб.: Невский диалект, М.: Бином, 1998. - 126с.

20. Серебряный В.Л., Малинин А.И., Макаров Л.М. Резистентность к клопидогрелу: миф или реальность? //Кардиология — 2007. Т.47, № 10. - С. 69-72.

21. Соколов Ф.В. Правила исследования биоэквивалентности лекарств.// Клиническая фармакокинетика. 2004. - №1. - С. 5-13.

22. Страчунский JI.C., Фирсов А.А., Белоусов Ю.Б. и др. Правила проведения биоэквивалентности лекарственных средств. //М. 1995. ч.2. - 16с.

23. Сычев Д.А., Раменская Г.В., Игнатьев И.В., Кукес В.Г. Клиническая фармакогенетика./Под редакцией Кукеса В.Г., Бочкова Н.П.//М.:Гэотар-медиа. 2007. - 248с.

24. Abbracchio М.Р., Burnstock G. Purinoreceptors: are there families of P2X and P2Y purinoreceptors? // Pharmacol Ther. 1994.- №64-P.445-475.

25. Aspinal M.G., Hamermesh R.G. Realizing the promise of personalized medicine.//Harv Bus Rev. 2007. - 85(10). P. 108-117, 165.

26. Ayalasomayajula S.P., Vaidyanathan S., Kemp C. et all.Effects of clopidogrel on the steady state pharmacokinetics of fluvastatin//Journal of Clinical Pharmacology. 2007.-47. - P. 613-619.

27. Bahrami G., Mohammadi B. and Sisakhtnezhad S. High performance liquid chromatographic determination of inactive carboxylic acid metabolite of clopidogrel in human serum: Application to a bioequivalence study.//J.Chromatogr.-2008.-V.864.-P. 168-172.

28. Beitelshees A.L., McLead H.L. Clopidogrel pharmacokinetics, promising steps toward patientt care? //Arterioscler Thromb. 2006. - V. 26. - P. 1681-1683.

29. Belal F., El-Brashy A., Eid M. and Nasr J.J. Stability-Indicating Micellar Liquid Chromatographic Method for the Determination of Clopidogrel/

30. Application to Tablets and Content Uniformity Testing.//J.of Liquid Chromatog. — 2009. V.32, №20. - P.2993-3008.

31. Benedetti M.S, Whomsley R., Canning M. Drug metabolism in the paediatric population and in the elderly.//Drug Discovery Today. 2007. -12(15-16).- P.599-610.

32. Bennett C., Weinberg P., Rozenberg-Ben-Dror K. et al . Thrombotic thrombocytopenic purpura associated with ticlopidine: a review of 60 cases.// Ann Intern Med. 1998. - V. 128 - P. 541 -544.

33. Beom S.S. and Sun D.Y. Determination of Clopidogrel in human plasma by liguid chromatography/tandem mass spectrometry: application to a clinical pharmacokinetic study // Biomed. Chromatogr.- 2007.-V.21.- P. 883-889.

34. Bhatt D., Marso S., Hirsch A. et al. Amplified benefit of Clopidogrel versus aspirin in patients with diabetes mellitus.// Am J Cardiol. 2002. - V. 90 - P. 625628.

35. Boneu B., Desteile G. Platelet anti-aggregating activity and tolerance of Clopidogrel in atherosclerotic patients.// Thromb Haemost. 1996. - V.76 - P. 939-943.

36. Brandt J.T., Close S.L., Itturia S.J. et all. Common polymorphisms of CYP2C19 and CYP2C9 affect the pharmacokinetic and pharmacodynamic response to Clopidogrel not prasugrel//Journal of Thrombosis and Hemostasis 2007. 5. - P. 2429-2436.

37. Brandt J.T., Payne C.D., Wiviott S.D. et al. A comparison of prasugrel and Clopidogrel loading doses on platelet function: magnitude of platelet inhibition isrelated to active metabolite formation.//Amer.Heart J. 2007. - V.153, №l. -P.66-69.

38. Braunwald E., Antman E.M., Beasley J.W. et al. ACC/AHA Guideline Update for the management of patients with unstable angina and non-ST elevation myocardial infraction-2002. Summary article.// Circulation. 2002. — V.106, №14. - 1893 p.

39. Brophy J.M., Babapulle M.N., Costa V., Rinfret S. A pharmacoepidemiology study of the interaction between atorvastatin and clopidogrel after percutaneous coronary intervention.//Am Heart J. 2006. - V.152, №2. - P. 263-269.

40. Caplain H., Donat F., Gaud C., Necciari J. Pharmacokinetics of clopidogrel.// Semin Thromb Hemost.- 1999.- V.25 suppl 2 P. 25-28.

41. Carlo Patrono, Barry Coller, James E. Dalen et. al. Platelet-Active Drugs. The relationships Among Dose, Effectiveness, and Side Effects .//Chest. 2001. -V.119.-P. 39S-63S.

42. Cattaneo M., Akkawat B., Lecehi A. et al. Tichlopidine selectively inhibits human platelet responses to adenosine diphosphate//Thromb. Haemost 1991.-V.66.-P.694-699.

43. Chen K.W., Chow S.C., Li G/ A note on sample size determination for studies with high-order crossover designs.//J.Pharmacokinet.Biofarm. 1997. -Vol.25,No.6.-P.753-765.

44. Chen M.L., Lee S.C., Ng M.J. et al Pharmacjkinetic analysis of bioeguivalence trials: implications for sex-related issues in clinical pharmacology and biopharmaceutics.//Clin.Pharmacol.Ther. 2000. - Vol.68, No5.- P.510-521.

45. Chirhard M., Lalan Keraly, Delautier D. et al. Reduced sensitivity of human platelets to PAF-acether following tichlopidine intake.//Haemostasis 1989.-V.19-P.213-218.

46. Clarke T.A., Waskell L.A. Clopidogrel is metabolized by human cytochrome P450 3A and inhibited by atorvastatin. Drug Metab. Dispos. 2003. - V.31, №1.1091. P. 53-59.

47. Coukell A.J., Markham A. Clopidogrel.// Drugs. 1997. - V.54 -P. 745-750.

48. Daniel J., Dangelmaier C., Jin J. at al. Molecular basis for ADP-induced platelet activation: evidence for three distinct ADP receptors on human platelets.// J Biol Chem. 1998. - 273 - P.2024-2029.

49. Darius H., Rupprecht H.J., Kreb P. et al. Accelerated inhibition of platelet activity by Clopidogrel loading dose in patients following coronory stent implantation//Eur. Heart J.- 1999. V.20. - P.252-254.

50. Delea T.E., Edelsburg J.S., Richardson E. et al. Cost-effectivness of Clopidogrel in patients with ishemic stroke, myocardial infraction or peripheal arterial disease.// Value in Health. vol. 6 no. 3 may/june 2003 - p. 184-185.

51. Denninger M.H., Necciari J., Serre-Lacroix E., Sissmann J. Clopidogrel antiplatelet activity is independent of age and presence of atherosclerosis.// Semin Thromb Haemost. 1999.- 25, Suppl 2- P.41-50.

52. Desager J.P. Clinical pharmacokinetics of ticlopidine.// Clin Pharmacokinet. -1994.-26-P. 347-355.

53. Defreyn G., Gachet C., Savi P. et al. Ticlopidine abd Clopidogrel (SR 25990C) selectively neutralize ADP inhibition of PGE1-activated platelet adenylate cyclase in rats and rabbits.// Thromb Haemost. 1991. - V.765. - P.186-190.

54. Diener H.C, Ringleb P.A., and Savi P. Clopidogrel for the secondary prevention of stroke//Expert Opinion n Pharmacotherapy . 2005. - 6. — P. 755-764.

55. Farid N.A., Payne C.D., Small D.S. et al. Cytochrome P450 3A inhibition by ketaconazole affects prasugrel and Clopidogrel pharmacokinetics andpharmacodynamics differently .//Clin Pharmacol Ther. 2007. - V.81, №5. - P. 735-741.

56. Farid N.A., Kurihara A., Wrighton S.A. Metabolism and Disposition of the Thienopyridine Antiplatelet Drugs Ticlopidine, Clopidogrel and Prasugrel in Humans.//! of Clin.Pharmac. 2010. - V.50, No2. - P. 126-142

57. Fontana P., Dupont A., Gandrille S. et al. Adenosine diphosphate-induced platelet aggregation is associated with P2Y12 gene sequence variations in healthy subjects.// Circulation. 2003. - 108 - P.989-995.

58. Foster C.J., Prosser D.M., Agans J.M. et al. Molecular indentification and characterization of the platelet ADP receptor targeted by thienoptridine antithrombotic drugs.// J Clin Invest. 2001. - 107 - P.1591-1598.

59. Fox K.A. and Chelliah R. Clopidogrel: an updated and comprehensive review//Expert Opinion Drug Metabolism and Toxicology. 2007. - 3. - P. 621631.

60. Frelinger A.L. and Michelson A.D. Clopidogrel: Linking Evaluation of Platelet Response Variability to Mechanism of Action.// J. Am. Coll. Cardiol. -August 16, 2005.- 46(4) P. 646-647.

61. Galteau M.M., Shamsa F. Urinary 6-beta-hydroxycortisol: a validated test for evaluating drug induction or drug inhibition mediated through CYP3A in humans and in animals.//Eur J Clin Pharmacol. 2003. - 59(10). - P. 713-733.

62. Gawaz M., Ruf A., Neumann F.J. et al. Effect of glycoprotein Ilb-IIIa receptor antagonism on platelet membrane glycoproteins after coronary stent placement.// Thromb Haemost. 1998. - 80 - P.994-1001.

63. Gerbel P.A., Bliden K.P., Hiatt B.L. et al. Clopidogrel for coronary stentingAresponse variability, dgur resistance and the effect of pretreatment platelet reactivity.// Circulation. 2003.- 107 - P.2908-2913.

64. Gill S., Majumdar S., Brown N.E., Armstrong P.W. Ticlopidine -associated pancytopenia: implications of an acetylsalicylic acid alternative.// Can J Cardiol. -1997. 13 - P.909-913.

65. Girolamo D., Czernuk P., Bertuola R., Keller G. Bioequivalence of Two Tablet Formulations of Clopidogrel in Healthy Argentinian volunteers: A Single-Dose, Randomized-Sequence, Open-Label Crossover Study.//Clin.Therap. -2010. — V.32, No 1. -P.161-170.

66. Gulec S., Ozdol C., Rahimov U.et al. Myonecrosis after elective percutaneous coronary intervention: effect of clopidogrel-stain interaction.// J Invasive Cardiol. -2005.-17(11).-P. 589-593.

67. Han Y.L., Li C.Y., Li Y. et al/ The antiplatelet effect of Clopidogrel is not attenuated by statin treatment in patients with acute coronary syndromes undergone coronary stenting.//Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi. 2007. -35(9).- P. 788-792.

68. Hass W.K., Easton J.D., Adams H.P. et al/ A randomized trial comparing ticlopidine hydrochloride with aspirin for the prevention of stroke in hight-risk patients: Ticlopidine Aspirin Stroke Study Group.// N Engl J Med. 1989. - 3211121. P. 501-507.

69. Hechler B., Leon C., Vial C.et al. The P2Y1 receptor is necessary for adenosine 5 '-diphosphate-induced platelet aggregation.//Blood-1998.-92-P. 152-159/

70. Heptinstall S., May J.A., Glenn J.R. et al. Effects of tichlopidine administered to healthy volunteers on platelet function in whole blood.//Thromb Haemost 1995.-V.74.-P.1310-1315.

71. Hertbert J., Dol F., Bernat A. et al. The antiaggregating and antithrombotic activity of clopidogrel is potentiated by aspirine in several experimental odels in the rabbit.// Thromb Haemost. 1998. - 80 - P. 512-518.

72. Herbert J.M., Savi J.P. Biochemical and pharmacological properties of clopidogrel: a new ADP receptor antagonist // Eur. Heart J.-1999-№1 (Suppl A).-A31-A-40.

73. Jin J., Daniel J., Kunapuli S. Molecular basis for ADP induced platelet aggregation: the P2Y1 receptor mediates ADP-induced intracellular calcium mobilization and shape change in platelets.//J Biol Chem. 1998. - V.273-P.2030-2034.

74. Jin J., Kunapuli S.P. Coactivation of two different G protein-coupled receptors is essential for ADP-induced platelet aggregation.// Proc Natl Acad Sci USA. -1998. V.95 - P. 8070-8074.

75. Kachhadia P.K., Doshi A.S., Joshi H.S. Validated Column High-Performance Liguid Chromatographic Method for Determination of Aspirin and Clopidigrel in Combined Tablets in the Presence of Degradation Product Formed Under ICH

76. Recommended Stress Conditions.//! of AOAC International. 2009. - V.92, №l. -P.152-157.

77. Kazui M., Ishizuka T., Yamamura A. et al. Mechanis of production of pharmacologically active metabolites of CS-747, a new pro-drug ADP-receptor antagonist.// XVIIIth Congress of the International Society of Thrombosis and Haemostasis.- 2001.- P.1916.

78. Kolwankar D., Vuppalanchi R., Ethell B. et al. Association between nonalcoholic hepatic steatosis and hepatic cytochrome P-450 3A activity .//Clin Gastroenterol Hepatol. 2007. - V.5,N°3. - P. 388-393

79. Ksycinska H., Rudski P., Bukowska-Kiliszek M. Determination of Clopidogrel metabolite (SR26334) in human plasms by LC-MS.// J Pharm Biomed Anal. -2006 . V.41, №2. - P. 533-9. .

80. Lagorce P., Perez Y., Ortiz J.et al. Assay method for the carboxylic acid metabolite of Clopidogrel in human plasma by gas hromatography-mass spectrometry.// J Chromatogr B Biomed Sei Appl. 1998. - V.720, № 1-2. - P. 107-117.

81. Lainesse A., Ozalp Y., Wong H. and Aplan R.S. Bioequivalence study of Clopidogrel bisulfate film-coated tablets//Arzneimittlforschung. — 2004. — 54. — P. 618-624.

82. Lau W.C., Waskell L.A., Watkins P.B. et al. Atorvastatin reduces the ability of Clopidogrel to inhibit platelet aggregationA a new drug interaction. // Circulation. -2003. -V.107 — P.32-37.

83. Lau W.C., Gurbek P.A., Watkins P.B. et all. Contribution of hepatic cytochrome P450 3A4 metabolic activity to the phenomenon of Clopidogrel resistance.//Circulation. 2004. - 109, №2. - P. 166-171.

84. Lau W.C. and Gurbek P.A. Antiplatele drag resistance and drug-drug interactions: role of cytochrome P450 3A4//Pharmaceutical Research. — 2006. — 23.-P. 2691-2708/

85. Leon C., Hechler B., Vial C., Leray C., Cazenave J.P., Gachet C. The P2Y1 receptor is an ADP receptor antagonized by ATP and expressed in platelets and megakaryoblastic cells.//FEBS Lett. 1997. -V. 403 -P.26-30.

86. Lingpunsakul S., Kolwankar D., Pinto A., Gorski J.C., Hall S.D., Chalasani N. Activity of CYP2E1 and CYP3A enzymes in adults with moderate alcohol consumption: a comparison with nonalcoholics./ZHepatology. — 2005. — 41(5). P. 1144-1150.

87. Mach F., Senouf D., Fontana P. et al. Not all sMins- htterfere with Clopidogrel during antiplatelet therapy.//Eur.J.Clin. Invest. 2005. - V.35. - P. 476-481.

88. Mani H., Toennes S.W.,Linnemann B. et al. Determination of Clopidogrel main metabolite in plasma: a useful tool for monitoring therapy?//Therapeutic Drug Monitoring 2008. - V.30. - P.84-89.

89. Martin J. Quinn and Desmond J. Fitzgerald. Tclopidine and Clopidogrel// Circulation- 1999.-V. 100.-P.1667-1672.

90. McEwen J., Strauch G., Perles P.et al/ Clopidogrel bioavailability: absence of influence of food or antacids.// Semin Thromb Hemost.- 1999.- V.25 suppl 2 P. 47-50.

91. Meyers K.M, Holmsen H., Seachord C.L. Comparative study of platelet densegranule constituents. Am J Physiol. 1982.243: R454-R461.

92. Minno G., Cerbone A.M., Mattioli P.L. et al. Functionally thrombathenic state in normal platelets following the administration of ticlopidine//J. Clin. Ivest. 1965-V.75-P.328-338.

93. Mohan A., Hariharan M., Vikraman E. et al. Identification and characterization of a principal oxidation impurity in Clopidogrel drug substance and drug product.// J. of Pharmac. and Biomed. Anal. 2008. - V.47, №l. -P.183-189.

94. Moliterno D.J., Topol E.J. Meta-analysis of platelet GP Ilb/IIIa antagonist randomized clinical trials in ischeic heart disease: consistent, durable salutary effects.// Circulation. 1997. - 96 (Suppl I) - P. 1-475.

95. Moussa I., Oetgen M., Roubin G. et al. Effectiveness of Clopidogrel and Aspirin Versus Ticlopidine and Aspirin in Preventing Stent Thrombosis After Coronary Stent Implantation.// Circulation. 1999. - 99 - P. 2364-2366.

96. Muller I., Besta F., Schulz C. et al. Prevalence of Clopidogrel non-responders among patients with stable angina pectoris scheduled for elective coronary stent placement.// Thromb. Haemost. 2003. - V. 89 - P. 783-787.

97. Neubauer H., Gunesdogan B., Hanefeld C. et al. Lipophilic statins interfere with the inhibitory effects of Clopidogrel on platelet function a flow cytometry study .//Eur Heart J. 2003. - V.24, №19. - P.1744-1749.

98. Nguyen T.A., Diodati J.G. and Pharand C. Resistance to Clopidogrel: A rewiew of the evidence.// J. Am. Coll. Cardiol. 2005. - V.45, №8 - P. 11571164.

99. Nirogi R.V.S., Kandikere V.N. and Mudigonda K. Effect of Food on

100. Bioavailability of a Single Oral Dose of Clopidogrel in Healthy Male Subjects.//Arzneim.-Forsch./Drug Res. 2006. -V.56, Nol 1. - P.735-739.

101. Pal D., Mitra A.K. MDR and CYP3A4-mediated drug-drug interactions.//! Neuroimmune Pharmacol. 2006. - V.l, №3. - P. 323-339.

102. Pereillo J-M., Maftouh M., Andrieu A. et al. Structure and Steriochrmistry of the Active Metabolite of Clopidogrel.// Drug Metabolism and Deposition.- 2002. -Vol.30, Issue 11. P.1288-1295.

103. Piorkowsky M., Weikert U., Schwimmbeck P.L., Martus P., Schultheiss H.P., Rauch U. ADP induced platelet degranulation in healthy individuals is reduced by

104. Clopidogrel after pretreatment with atorvastatin.//Thromb Haemost. -2004. 92(3). -P. 614-620.

105. Rajput S.J., George R.K., Ruikar D.B. Chemometric Simultaneous Estimation of Clopidogrel Bisulphate and Aspirin from Combined Dosage Form.//Indian J. of Pharmaceut. Scinces. 2008. - V.70, No4. - P.450-454.

106. Ramesh Mullangi and Nuggehally R.Srinivas. Clopidogrel: reviw of bioanalytical methods, pharmacokinetics/pharmacodynamics, and update on recent trends in drug-drug interaction studies//Biomed.Chromatogr. 2009.-V.23.-P.26-41.

107. Robinson A., Hills J., Neal C. and Leary A.C. The validation of a bioanalytical method for the determination of Clopidogrel in human plasma.// J. of Chromatography B. 2007. - V.848.- P.344.

108. Rouini M.R., Ardakani Y.H., Foroumadi A et al. Sensitive Quantification of Carboxylic Acid Metabolite of Clopidogrel in Human Plasma by LS with UV Detection// Chromatographia. 2009. - V.70, № 5-6. - P.953-956.

109. Quinn M.J., Fitzgerald D.J. Ticlopidine and Clopidogrel. Circulation — 1999. -V.1000. -P.1667-1672.

110. Saber A.L., Elmosallamy M.A., Amin A.A. and Killa H.M.A. Liquid chromatographic and Potentiometrie method for determination of clopidogrel.//J. of Food and Druq Anal. 2008. - V.16, №2. - P.l 1-18.

111. Savcic M., Hauert J., Bachmann F. at al. Clopidogrel Dose Regimens: Kinetic Prifile of Pharmacodynamic Response in Healthy Subjects.//Semin Thromb Hemost-1999.-V.25.-P. 15-19.

112. Savi P., Beauverger P., Labouret C. et all. Role of P2Y1 purinoreceptor in ADP-induced platelet activation.//FEBS Lett. 1998. - 422 - P.291-295.

113. Savi P., Pereillo J.M., Uzabiaga F. et al Identification and biological activity of the active metabolite of Clopidogrel.// Thromb Haemostasis. 2000. -V.84 - P. 891-896.

114. Savi P., Labouret C., Delesque N. et all. (2001) P2Y12, a new platelet ADP receptor, target of Clopidogrel.//Biophys Biochem Res Commun.- 2001. V.283 -P.379-383.

115. Savi P. and Herbert J.M. Clopidogrel and ticlopedine: P2Y12 adenosine diphosphate-receptor antagonists for the prevention of atherothrombosis//Seminars in Thrombosis and Haemostasis. — 2005. — 31.—P. 174-183.

116. Saw J., Brennan D.M., Steinhubl S.R. et al/ CHARISMA Investigators. Lack of evidence of clopidogrel-statin interaction in the CHARISMA trial.//J Am Coll Cardiol. 2007. - 50(4). - P. 291-295.

117. Shah J., Fratis A., Ellis D.et al. Effect of food and antacid on absorstion of orally administered ticlopidine hydrochloride.// J Clin Pharmacol. 1990. — V.30 -P.733-736.

118. Shakeri-Nejad K., Stahlmann R. Drug interactions during therapy with three major groups of antimicrobial agents.//Expert Opin Pharmacother. 2006. - 7(6). -P. 639-651.

119. Shin B.S., Yoo S.D. Determination of Clopidogrel in human plasma by liquid chromatography/tandem mass spectrometry: application to a clinical pharmacokinetic study .//Biomedical Chromatography. 2007. - V.21. -P.883-889.

120. Singh S.S., Sharma K., Barot D. et al. Estimation of carboxylic acid metabolite of Clopidogrel in wistar rat plasma by HPLC and its application to pharmacokineticstudy.// J of Chromatogr. B. 2005. - V.821. - P.173.

121. Sippel J., Sfaip L.L., Schapoval E.S., Steppe M. New high-performance liquid chromatographic method for determination of clopidogrel in coated tablets //J. of AOAC International. 2008. - V.91, №l. - P.67-72.

122. Smith S.M., Judge H.M., Peters G., Storey R.F. Multiple antiplatelet effects of clopidogrel are not modulated by statin type in patients undergoing percutaneous coronary intervention.//Platelets. 2004. - 15(8). - P. 465-474.

123. Souri E., Jalalizadeh H., Kebriaee-Zadeh A. et al. Validated method for determination of carboxylic acid metabolite of clopidogrel in human plasma and its application to a pharmacokinetic study.//Biomed. Chromatogr. 2006. - V.20. -P.1309-1314.

124. Sugidachi A., Asai F., Ogawa T.et al The in vivo pharmacological profile of CS-747, a novel antiplatelet agent platelet ADP receptor antagonist properties.// B J Pharmacol. 2000,- 129 - P. 1439-1446.

125. Sugidachi A., Asai F., Yoneda K. et al/ Antiplatelet action of R-99224, an active metabolite of a novel thienopyridine-type Gi-linked antagonist, CS-747.// B J Pharmacol. -2001.-132- P.47-54.

126. Sultana N., Arayne M.S., Nawas M., Ali K.A. Development and validation of liquid chromatographic method for the determination of clopidogrel from pharmaceutical dosage form.//J. of the Indian Chemical Society. 2009. — V.86, №4. - P.406-409.

127. Sun, B., Li J., Okahara K., Kambayashi J. P2X1 purinoreceptors in human platelets: molecular cloning and functional characterization after heterologous expression.// 1998.-V.273.-P.11544-11547.

128. Takahashi M., Pang H., Kawabata K. et al. Quantitative determination of Clopidogrel active metabolite in human plasma by LC-MS/MS.// J. of Pharmac. And Biomed. Anal. 2008. - V.48, №4. - P. 1219-1224.

129. Taubert D., Kastrati A.,Harlflnger S. et al. Pharmacokinetics of Clopidogrel after administration of a high loading dose.// Thrombosis and Haemostasis 2004. - V.92. -P.311-316.

130. Taubert D., von Beckerath N., Grimberg G. et all.Impact of P-glycoprotein on Clopidogrel absorption//Clinical Pharmacology and Therapeutics. — 2006. 80. — P.486-501.

131. Traub S.U., Johnson C.E. Comparison of methods of estimating creatinine clearance in children// Am.J.Hosp.Pharm.- 1980.-Vol.37.-P. 195-201.

132. Vocilkova L., Opatrilova R., Sramek V. Determination of Clopidogrel by Chromatography .//Current Phamaceutical Analysis 2009. - V.5, No4. - P.424-431.

133. Wada M., Nishiwaki J., Yamane T. et all. Interaction study of aspirin or Clopidogrel on pharmacokinetics of dopenezil hydrochloride in rats by HPLC-fluorescence detection/ZBiomedical Chromatography. 2007. - 21. - P. 616-620.

134. Wang T.H., Bhatt D.L.and Topol E.J. Aspirin and Clopidogrel resistance: an emerging clinical entity.// Eur. Heart. J. March 2, 2006. - 27 (6) - P. 647-654.

135. Wenaweser P., Windecker S., Billinger M. et al. Effect of atorvastatin and pravastatin on platelet inhibition by aspirin and Clopidogrel treatment in patients with coronary stent thrombosis.//Am J Cardiol. 2007. - 99(3). - P. 353-356.

136. Wildt S.N., Berns M.J., van der Anker J.N. 13C-erythromycin breath test as a noninvasive measure of CYP3A activity in newborn infants: a pilot study.//Ther-Drug Monit. 2007. - 29(2). - P. 225-230.

137. Yang X.L., Liu S.Q., Sun J. Et al. UPLC for the Determination of Clopidogrel in Dog Plasma by Tandem Quadrupole MS: Application to a Pharmacokinetic Study.//Chromatographia 2009. - V.70, № 1-2. - P.259-263.

138. Yim H.B., Lieu P.K., Choo P.W. Ticlopidine induced cholestatic jaundice.// Singapore Med J. 1997 . - 38 - P. 132-133.

139. Yousef A.M., Arafat T., Bulatova N.R. and Al-Zumyli R. Smoking behaviour modulates pharmacokinetics of orally administered clopidogrel//Journal of Clinical Pharmacology and Therapeutics. 2008. - 33. - P. 439-449.

140. Zhou S.F., Xue C.C., Yu X.Q., Wang G. Metabolic activation of herbal and dietary constituents and its clinical and toxicological implications: an update.//Curr Drug Metab. 2007. - 8(6). - P. 526-553.