Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Исследование влияния нового противосудорожного соединения-бепродона-на репродуктивную функцию животных

На правах рукописи Для служебного пользования

Экз.М 5"1

САВИНОВА Тамара Борисовна

ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ НОВОГО ПРОТИВОСУДОРОЖНОГО СОЕДИНЕНИЯ - БЕПРОДОНА -НА РЕПРОДУКТИВНУЮ ФУНКЦИЮ ЖИВОТНЫХ

14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2000

Работа выполнена в ЦЕНТРЕ по химии лекарственных средств (ЦХЛС - ВНИХФИ)

Научный руководитель: Официальные оппоненты:

член- корр. РАМН, профессор Т. А. Гуськова

доктор биологических наук, профессор Ю. А. Ревазова

доктор медицинских наук, профессор А. В. Никитин

Ведущее учреждение:

НИИ фармакологии РАМН

Защита состоится . 2000 года в часов на заседании

Диссертационного совета Д.074.53.01 в ЦХЛС-ВНИХФИ по адресу: 119815 Москва, ул. Зубовская, дом 7.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ЦХЛС-ВНИХФИ

Автореферат разослан 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета канд. биолог, наук Л. Ю. Крылова

Общая характеристика работы

Актуальность темы

Поиск новых противосудорожных препаратов для лечения эпилепсии и других заболеваний, сопровождающихся судорожным синдромом, является актуальной проблемой .В настоящее время эпилепсией страдает 0,4 - 2% населения (Бадалян Л.О. и соавт., Delagro-Escueto A.V.1985). Для лечения предложен целый ряд фармакологических препаратов.

Длительное время наиболее широкое применение в качестве противосудорожных средств имели барбитураты, особенно фенобарбитал, а также бромиды. В дальнейшем нашли применение препараты других химических групп, в том числе гексамндин, дифенин, триметин, зтосуксимид и другие. С появлением бензодиазепиновых транквилизаторов их также стали использовать для лечения судорожных синдромов (Машковский М. 1993). В настоящее время широкое примененение в качестве противосудорожных средств нашла вальпроевая кислота и ее соли (конвулекс, ацедипрол). Однако, несмотря на имеющиеся пртивосудорожные препараты проблема терапии эпилепсии и других заболеваний, сопровождающихся судорожным синдромом, остается актуальной. Это прежде всего связано с наличием побочных эффектов у известных противосудорожных препаратов, что ограничивает их применение. Одним из таких нежелательных свойств является их эмбриотоксическое и тератогенное действие. Известно, что если частота врожденных аномалий в общей популяции составляет 1-6 % (Бадалян Л.О. 1984, Карпель-Фрониус Э. 1975 ), то у детей, рожденных от матерей, страдающих эпилепсией - в 2-5 раз выше (Клосовский В.Н.1960, German J. 1980 Spidel К. 1982 Zellweger Н . 1983). В клинических наблюдениях показано, что практически все противосудорожные препараты оказывают тератогенное действие( Koppe J.G. 1988). Врожденные аномалии у детей, рожденных от матерей, страдающих эпилепсией весьма разнообразны . Особенно часто наблюдаются черепно-лицевые деформации, деформации конечностей, внутриутробная задержка роста, врожденные пороки развития внутренних органов. Черепно -лицевые аномалии у детей представлены микроцефалией, гидроцефалией, миеломиненгоцеле, дисплазией ушных раковин, расщелиной губы и (или) неба .( Lindhout D, Omtzigt J,1994).B

экспериментальных исследованиях также показан высокий уровень врожденных аномалий у животных, получавших противосудорожные препараты: наблюдались деформации внутренних органов, опорно-двигательного аппарата, нервной системы (АЫ Я.В. 1984, \Veisz I, Загсош Ь,1989)

В связи с этим поиск противосудорожных препаратов, лишенных эмбриотоксических и тератогенных свойств является очень важной проблемой.

В ЦХЛС-ВНИХФИ синтезировано новое химическое соединение, названное БЕПРОДОНОМ, которое обладает высокой противосудорожной активностью (Паршин С.А. 1994)

Исследование острой, подострой, и хронической токсичности, проведенное на разлиных видах экспериментальных животных ( крысы, мыши, кролики) в широком диапазоне доз, показало, что бепродон малотоксичен, хорошо переносится при длительном введении( Савинова Т.Е. и соавт. 1994) . Все это свидетельствует, что бепродон может быть перспективным препаратом для лечения эпилепсии и других заболеваний , сопровождающихся судорожным синдромом. Поэтому изучение влияния бепродона на репродуктивную функцию животных является актуальной проблемой.

Настоящая работа выполнена в соогвегсгвии с федеральной целевой научно технической программой " Исследования и разработка по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского населения" и подпрограммой " Создание новых лекарственных средств методами химического и биологического синтеза".

. Цель исследования

Целью исследования явилось изучение влияния нового противосудорожного

средства -БЕПРОДОНА на репродуктивную функцию экспериментальных животных.

Задачи исследования

Исходя из цели исследования необходимо было решить следующие задачи.

1.Изучить влияние бепродона на потомство крыс в антенатальном периоде развития.

2.Изучить влияние бепродона на постнатальное развитие потомства крыс.

3.Изучить влияние бепродона на генеративную функцию самцов и самок крыс.

4.Изучить возможную., тератогенную активность бепродона в сравнении с известным антиконвульсантом - вальпроатом натрия.

Научная новизна работы

1. Впервые изучено влияние бепродона на репродуктивную функцию экспериментальных животных.

2. Показано, что бепродон не оказывает повреждающего действия на сперматогенез и генетический аппарат половых клеток животных.

3. Впервые установлено, что соединение, обладающее высокой противосудорожной активностью, не влияет на антенатальный и постнатальный периоды развития потомства крыс.

4. Показано, что бепродон не вызывает врожденных аномалий развития, характерных для известных противосудорожных препаратов, у потомства крыс, в дозах, значительно превышающих терапевтические.

Положения, выносимые не защиту

1. Бепродон не оказывает тератогенного действия при введении беременным животным в дозах, превышающих терапевтические в 50 раз.

2.Бепродон не влияет на антенатальное и постнаталмгое развитие потомства крыс, получавших его во время беременности

3. Бепродон не влияет на фертильность крыс-самок

4. Бепродон не повреждает гонады крыс-самцов при длительном ежедневном введении.

Научно-практическая значимость работы,

1. Отсутствие тератогенного эффекта у крыс при применении бепродона , установленное в данном исследовании, делает перспективным использование его в качестве противосудорожного средства при беременности.

2 .По влиянию на репродуктивную функцию животных бепродон имеет существенные преимущества перед вальпроатом натрия и другими противосудорожными препаратами.

3. Перспективность поиска лротивосудорожных препаратов в ряду производных пирролидиндиона.

Апробация работы и публикации.

Фрагменты диссертации обсуждены на коллоквиумах отдела

экспериментальной химиотерапии и токсикологии лекарственных средств ЦХЛС-ВНИХФИ.

Основное содержание диссертации отражено пЧ печатных работах.

Содержание работы.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 6 ти глав собственных исследований, включающих материалы , методы и обсуждение результатов , заключения, выводов, изложена на №.?стр" машинописного текста, содержит таблиц, и рисунков

Материалы и методы исследования

В исследованиях были использованы белые беспородные крысы массой 180 - 200гр, беспородные белые мыши массой 18 - 20 гр, и мыши гибриды

F 1 СВА х C57BL/6.

3-бензиламинометилен-2,4-пирролидин-диона, получившее название-БЕПРОДОН. был синтезирован в ЦХЛС-ВНИХФИ.

В ходе исследования были использованы макроскопические, цитологическ ие и физиологические методы исследования.

Исследования проводили по следующей схеме:

Схема исследования I этап

Действие бепродона на антенатальное развитие потомства крыс

II

этап

Сравнительное исследование-тератогенной активности Бепродона и Вальпроата натрия_

Для изучения влияния бепродона на антенатальный период развития потомства проводили отбор самок с датированной беременностью. Для этого виргинных самок подсаживали к самцам в соотношении 2:1 и по наличию сперматозоидов во влагалищном мазке определяли первый день беременности. Бепродон вводили в различные периоды беременности ( 1 - 7, 7 -16, 16 - 20 дни) в дозах 60 и ЗООмг/кг, что превышает терапевтические дозы в 10 и 50 раз. После декапитации беременных самок на 20 день беременности проводили анализ эмбрионального матерьяла: подсчитывали эмбриональную смертность, методом

сагитальных срезов оценивали состояние внутренних органов (Wilson W. 1965) и состояние костной системы плодов (Дыбан.Л.П. и соавт. 1970).

Так как нарушение эмбриогенеза может находится в зависимости от проникновения препаратов через плацентарный барьер и воздействия на плод, проводилось фармакокинетическое исследование трансплацентарной способности бепродона. Определялось содержание бепродона в крови матери и плода через 10, 20, и 360 минут после перорального введения его крысам на 20 день беременности в дозе 300мг/ кг с использованием высокоэффективой обращенно-жидкостной хроматографией с УФ-детектированием.

Оценку состояния и развития потомства после рождения проводили по динамике выживаемости новорожденных крысят, нарастании массы тела, функциональном созревании. В 1 и 2х месячном возрасте проводили определение двигательной активности на приборе "Digiskan analiscr" и мышечной работоспособности с подвешиванием крысят на горизонтальном стержне с фиксацией времени удерживания передними лапками.

Состояние генеративной функции крыс оценивали после введения бепродона самкам в течение 15 дней и самцам в течение 70 дней в дозах 60 и ЗООмг/кг с последующим спариванием с интактными крысами. Способность самцов к оплодотворению и самок к зачатию оценивали с помощью расчета индексов плодовитости и беременности, а также по состоянию потомства подопытных животных.

Так как причиной нарушение оплодотворяющей способности самцов может быть повреждающее действие препарата на гонады исследовали влияние бепродона на гонады самцов , которое оценивали по состоянию сперматогенеза( на препаратах мазков семенников подсчитывалась сперматограмма, во взвеси сперматозоидов из эпидимиса проводили исследование их состояния) и генетического аппарата зародышевых клеток самцов ( методом доминантных летальных мутаций).

Исследование потенциальной тератогенной активности бепродона в сравнении с вальпроатом натрия проводили на крысах при пероральном введении их в период органогенеза в широком диапазоне максимально-перенносимых доз( 300,600,900мг/кг).

Так как мыши являются более чувствительны к воздействию тератогенов (Методы биологии развития, 1974) было проведено исследование тератогенной

активности бепродона в сравнении с вальпроатом натрия на мышах в жестком режиме воздействия: при внутрибрюшинном введении бепродона и вальпроата натрия в дозе ЗООмг/кг мышам в критический период (9-10 дни беременности).

Результаты исследований обрабатывались статистически с использованием метода Стьюдента, критерия еленький М.Л. 1963)

Результаты исследования и их обсуждение.

Исследование влияния бепродона на антенатальный период развития потомства.

Проведение изучение влияния бепродона на антенатальное развитие потомства крыс показало, что бепродон в дозе бОмг/кг не оказывал повреждающего действия на эмбриогенез ( Таблица № 1). При введении в дозе ЗООмг/кг также не выявлено повышенной эмбриональной смертности , однако наблюдалось торможение развития плодов , выражающееся в уме- ньшении массы тела и проявляющееся лишь у плодов самок, получавших

бепродон в период органогенеза. Таблица № 1

Влияние бепродона на эмбриогенез крыс при пероральном введении в различные периоды беременности.

показатели периоды беременности ( дни) контр.

1-7 | 7-17 | 17-19

доза, мг/кг

300 300 60 300

количество беременных самок 14 17 16 7 15

предимплан-тационная смертность, % 8.3 12.75 11.8 2.6 10.5

постимплан-тациониая смертность, % 4.4 7.2 7.9 5.1 5.4

масса тела плодов, гр ±2.3 0.03 ± 1.7 * 0.05 ± 2.2 0.06 ±2.4 0.04 ±2.3 0.05

* - достоверно при Р < 0.05 Исследование влияния бепродона на костную систему плодов выявило

замедлении скорости оссификации зачатков костей скелета при введении

его беременным самкам в период органогенеза в дозе ЗООмг/кг

(Таблица № 2).

Таблица № 2

Влияние бепродона на костную систему плодов при пероральном введении

срок введения (дни)

показатели 7- 7 1-7 17-19 конт-

доза , мг/кг •

300 60 300 300

обследовано плодов 62 57 60 56 55

из них с абс 54 26 25 23 20

нарушениями % 87.1 * 45.6 41.6 41.6 36.4

ко- мета- 2 абс 51 15 20 17 18

ли- тар- % 82.25* 26.3 33.3 30.3 32.7

че- заль- 3 абс 5 3 3 2 -

ст- ные % 8.1 5.3 5.0 3.6

во кости 4 абс 28 7 5 4

пло % 45.2 * 12.3 8.3 7.1 -

дов 2 абс 45 И 12 11 10

У мета- % 72.6 19.3 20.0 19.6 18.2

ко- кар- 3 абс 28 6 5 3 -

то- паль- % 45.2* 10.5 8.3 5.3

рых ные 4 абс 33 11 7 5

кости % 53.2* 19 11.6 8.9 -

от- подъязы- абс 14 3 2 1

сут чная % 22.7 5.3 3.3 1.8 -

ст- седалищ- абс 12 4 4 1 2

во- ная % 19.35 7.0 6.7 1.8 3.6

ва- лонная абс 34 12 10 8 7

ли. % 54.8* 21 16.7 14.2 12.7

* - достоверно при Р< 0.05 Ни в одной из подопытных групп не обнаружены плоды с врожденными

пороками развития, уродствами.

Следует подчеркнуть , что при введении бепродона беременным самкам в

дозе ЗООмг/кг наблюдалось достоверное снижение нарастания их массы тела (

на 10% , по сравнению с контролем) , что свидетельствует о некотором

общетоксическом действии бепродона в этой дозе на самок. Возможно этим

обясняется снижение массы тела и замедление скорости оссификации скелета

эмбрионов.

Исследование влияния бепродона на постнатальное развитие потомства 8 результате проведенного исследования не выявлено нарушения физического

и функционального созревания крысят от самок, получавших бепродон во время

беременности в дозе бОмг/кг. При введении в дозе ЗООмг/кг отмечено

некоторое снижение выживаемости новорожденных крысят , однако отличия от контрольной группы недостоверны.(Таблица №3)

Таблица № 3

Влияиие бепродона на развитие потомства в постнатальном периоде.

показатели доза, мг/кг контроль

300 60

количество пометов 8 8 10

количество средн. новорожденных, /М±м/ 8.5 ± 0.4 8.125 ±0.5 9.3 ±0.5

индекс выживаемости, % 91.8-1 100 98.9

количество кр тавленных к4м лсят, осу ДНЮ, °/о 6.25+ 1.0 7.6 ± 0.25 7.7 + 0.1

количество живых крысят в О 3 Р д а н с и т, 7 6.0 ± 1.0 96.0 7.3 ±0.25 96.05 7.7 + 0.1 100

14 6.0 ± 1.0 96.0 7.3 ± 0.25 96.05 7.7 + 0.1 100

21 5.6 ± 1.0 89.6 7.3 ±0.25 96.05 7.7 ±0.1 100

масса крысят, гр , / М ± м/ 1 5.3 ±0.31 6.05 ±0.23 5.96 + 0.4

4 7.6 ±0.6 8.7 ± 0.5 8.8 ± 0.4

7 12.2 ±0.65 12.3 ±0.7 12.6 + 0.7

14 21.4+1.9 22.6 ±1.4 23.75+ 1.9

21 31.1 + 2.9 26.7 ± 1.7 30.7 ±1.5

В этой же группе крысят выявлены достоверные различия отдельных показателей двигательной активности (снижение горизонтальной и вертикальной) по сравнению с контрольным потомством в 1 месячном возрасте. К 2-месячному возрасту крысят эти различия исчезают^ Таблица №4). Обследование крысят тестом мышечной работоспособности не выявило различий между подопытными и контрольными животными.

Таблица № 4

Влияние бепродона на двигательную активность крысят.

срок обследования (возраст крысят)

показатели 1 месяц 2 месяца

доз а,мг/кг

300 60 контр. 300 60 контр.

горизон- о 3593.7 * 2011.2 1929.1 2522.4 2733.4 3266.6

таль- 30 ± 276.7 ± 231.2 ±192.2 ±314.8 ±419.9 ±335.5

ная, о 2683.2* 1734.5 1307.0 3296.0 2663.7 2754.3

имп/15мин 30 + 195.25 + 231.2 + 179.1 + 319.6 + 110.3 + 341.9

верти- о 108.9 * 463.5 498.6 133.6 174.5 237.6

каль- 30 + 9.2 ±18.35 ± 65.7 + 20.9 ± 56.9 ±50.2

ная о 150.0* 360.95 338.0 160.0 122.1 153.9

имп/мин 30 ±9.3 ±19.9 ±44.5 ±27.7 ± 17.2 ±25.4

общий о 1537.4 1678.6 1495.9 782.2 891.9 999.8

путь 30 + 112.9 + 203.9 + 51.8 + 86.9 + 202.6 ±89.6

см/ 15 мин о 989.4 1589.8 1568.6 939.9 769.6 69.3

М±м 30 ± 105.1 ± 125.2 ± 109.1 ± 127.4 ± 55.5 ± 123.7

стерео- 2029.2 1768.5 1331.4 1526.7 1482.6 1697.8

типия ±141.3 ± 148.8 ±122.4 ±145.5 ±245.8 ±214.6

кол/15мин 1597.5 1568.6 1488.8 1867.0 1450.7 1501.8

М + м ± ¡48.6 ± 109.1 ± 173.7 ± 172.1 ±111.7 ±232.8

* - достоверна при Р< 0.05

Таким образом, на основании проведенного исследования можно сделать вывод, что физическое развитие и функциональное созревание крысят при введении бепродона в испытуемых дозах соответствовало нормальному развитию, а обнаруженное снижение вертикальной и горизонтальной двигательной активности крысят самок, получавших бепродон в дозе, превышающей терапевтическую в 50 раз, вероятно является следствием его фармакологической активности, направленной на ослабление процессов возбуждения в центральной нервной системе (Машковский М. Д. 1993 )

Исследование генеративной функции

В результате проведенного исследования не выявлено снижения фертильности ни в одной из подопытных групп самок, о чем свидетельствует отсутствие нарушений в способности к зачатию и внутриутробном развитии их потомства.

Рисунок 1

Влияние бепродона на фертильность крыс

3

1 - контроль

2- доза бОмг/кг

3- доза ЗООмг/кг

81 - Индекс плодовитости самцов

8 2 - Индекс беременности

интактных самок, спренных с подопытными самцами

Б 3 - Индекс плодовитости подопытных самок Э 4 - Индекс беременности

подопытных самок.

У подопытных самцов, получавших бепродон в дозе 60 мг/кг также не выявлено нарушений генеративной функции. В то же время у самцов, получавших бепродон в дозе 300 мг/кг обнаружена тенденция к снижению оплодотворяющей способности, о чем свидетельствует снижение количества оплодотворенных интактных самок, спаренных с подопытными самцами (63.1% ,в контроле-84%). ( Рисунок №1). При этом у забеременевших самок не наблюдалось эмбриотоксического действия бепродона.

Таким образом , установлено, что бепродон не оказывает отрицательного влияния на фертильность самок , но в некоторой степени вызывает снижение оплодотворяющей функции самцов. Генеративная функция самцов оказалась более чувствительна к воздействию бепродона, чем самок.

Снижение оплодотворяющей способности подопытных самцов может быть обусловлено как прямым влиянием на гонады, так и снижением полового инстинкта в силу сиецефического фармакологического эффекта бепродона. Влияние бепродона на гонады оценивалось по состоянию сперматогенеза и генетического аппарата зародышевых клеток самцов.

Исследование состояния сперматогенеза выявило достоверное

изменение лишь одного показателя - обратимое снижение концентрации сперматозоидов в 1мл эйякулята( 24,6 ± 3.6 млн. , в контроле 52,8+3.5млн. к окончанию воздействия ). Однако этот показатель нормализовался через месяц после окончания воздействия( 46.7.± 4.2млн., в контроле 45.3 ± 7.6млн.). Таким образом эти изменения носили обратимый характер, кроме того имеются

сведения, что этот фактор не имеет большого значения для способности к оплодотворению. Так, по данным С.Л.Коган, количество сперматозоидов в 1мл эйякулята еще не определяет плодородия. Выявлено, что при численности сперматозоидов равным 16 ООО ООО ( при норме 60 ООО ООО ) происходит оплодотворение. Наряду с этим известно, что нередко при нормальном содержании сперматозоидов оплодотворение не происходило. Это согласуется с нашими данными, показавшими, что снижение количества сперматозоидов не влияло на оплодотворение самок и рождение нормального потомства.

Изучение влияния бепродона на генетический аппарат половых клеток самцов позволило установить отсутствие способности вызывать доминантные летальные мутации в зародышевых клетках подопытных самцов, о чем свидетельствует отсутствие повышение эмбриональной смертности при спаривании подопытных самцов с интакгными самками на стадии зрелых сперматозоидов (8.1%, в контроле- 6.8% ), поздних сперматид (5.6%, в контроле - 6.8% ), ранних и поздних сперматид (5.9%, в контроле- 6.8%).

Таким образом, можно сделать вывод, что бепродон не оказывает повреждающего действия на гонады самцов крыс.

Изучение фармакокинетики бепродона при введении беременным крысам.

Исследование показало, что при пероральном введении самкам на 20 день

беременности в дозе ЗООмг/кг бепродон быстро всасывается в кровь беременных самок и через 20 минут достигает максимального уровня, затем постепенно выводится их организма. Бепродон быстро преодолевает плацентарный барьер и проникает в плод, Через 10 минут после введения самкам количество его в плодах в 9,4 раза меньше содержания в крови самок. Максимальное содержание бепродона в крови плодов наблюдается через 20 минут после введения , но в 2 раза меньше, чем у самок. В последующие сроки экспримента происходит снижение уровня содержания бепродона в плодах ( Рисунок № 2 ).

Рисунок № 2

Содержание бепродона в крови беременных крыс и их плодов.

с; Г

£

Б 1 - содержание бепродона в крови плодов Б 2 - содержание бепродона в крови самок

1 - через 10 минут

2 - через 20 минут

3 - через 6 часов

3

Таким образом, исследования показали, что бепродон обладает трансплацентарной способностью , достигает максимального уровня содержания в крови плодов в те же сроки, что и в крови самок и постепенно выводится из организма плодов.

Для сравнительной оценки эбриотоксических и тератогенных свойств

бепродона и вальлроата натрия были проведены исследования на крысах и мышах

Исследования на крысах. В результате исследования возможной тератогенной активности бепродона в сравнении с вальпроатом натрия на крысах установлено, что бепродон оказывает эмбриотоксический эффект только в дозе 900мг/кг, которая составляет 1/3 от 1Х)50, в то время как вальпроат натрия вызывает более высокий уровень эмбриональной смертности , чем бепродон при всех вводимых дозах (табл. 5).

Оба соединения снижали массу тела плодов, однако вальпроат натрия в большей степени оказывал неблагоприятное воздействие на состояние внутренних органов. Так, количество плодов с подкожными гематомами, кровоизлияниями в грудную и брюшную полости при воздействии бепродоном в дозе 900мг/кг составило 80.3%, в дозе бООмг/кг - 62.0%, в дозе ЗООмг/кг - 37.2% , при воздейстивии вальпроатом натрия соответственно-84.0%, 81.8% и 70.0% , в контроле -26.3% (Рисунок № 3)

Таблица №5

Влияние бепродона и вальпроата натрии на эмбригеиез при пероральном введении крысам с 1 по 17 дпи беременности.

Бепродон Вальпроат натрия

Показатели Дозы , мг/кг конт

900 600 300 900 600 300

количество беремен- 11 12 14 И 10 15 13

ных самок

эмбрио- общая 39.1* 18.5 18.8 76.4* 39.9* 28.6 11.6

нальная

доипланта- 3.9 13.1 10.5 2.1 17.0 9.1 7.7

смерт- ционная

ность, постимплан 35.6* 9.9 7.2 74.5* 23.1* 20.9* 4.5

% тационная

масса тела 1.7* 2..6 1.8 * 1.6 * 2.3 1.8* 3.3

плодов, гр- М ±м ±0.25 ±0.2 ±0.5 ± 0.3 ± 0.2 ±0.5 ±0.2

* - достоверно при Р<0.05

Рисунок Л» 3

Влияние Бепродона и Вальпроата натрия на состояние внутренних

1 - Обшее количество плодов с кровоизлияниями 2- плоды с кровоизлияниями в грудную полость

3 - плоды с кровоизлияниями в брюшную полость

4 - плоды с подкожными гематомами.

I

Изучение влияния исследуемых соединений на костную систему плодов обнаружило замедлением скорости оссификации скелета. Бепродон вызывал этот эффект только у плодов самок, получавших 900мг/кг препарата, в то время как вальпроат натрия -во всех изученных дозах. При введении вальпроата натрия во всех испытуемых дозах (900, 600 и ЗООмг/кг) обнаружено - наличие 14го ребра, что не наблюдалось при введении бепродона. Зго свидетельствует

органов

8 1- контроль 8 2- Бепродон, доза 900мг/к Б 3 - Бепрподон, доза бООмг/кг 8 4 - Бепродон, доза ЗООмг/кг Б 5 - Вальпроат натрия, 900мг/кг Э 6 - Вальпроат натрия, бООмг/кг Э 7 - Вальпроат натрия, ЗООмг/кг.

о значительно менее выраженном отрицательном воздействии бепродона на костную систему плодов даже в дозе ,равной 1/3 от 1Х)50, чем вальпроата натрия в значительно более низких дозах (Таблица № 6 ).

Таблица № 6

Влияние бепродона и вальпроата натрия на костную систему плодов крыс.

показатели вальпроат натрия | бепродон конт

доза, мг/кг

900 600 300 900 600 300

общее количество плодов 35 60 41 44 54 56 42

из них с нарушениями 25 71.4* 36 60.0* 23 56.1* 25 56.8* 14 25.9 13 23.2 5 11.9

т и п на РУ ше ний наличие 14го ребра абс % 25 71.4* 26 43.3* 5 12.2* - - -

замедление оссификаци грудины абс % 19 54.2* 38 63.3* 23 56.0* 25 56.8* 6 11.1 4 7.2 5 4.8

замедление оссификаци фаланг абс % 25 71.4* 28 46.7* 23 56.0* 25 56.8* 14 25.9* 13 23.2 5 11.9

* - Достоверно при Р< 0.05

Следует особо отметить, что при введении бепродона ни в одной группе подопытных животных не обнаружены плоды с врожденными аномалиями развития , в то время как при введении вальпроата натрия в Дозе бООмг/кг обнаружены плоды с мозговой грыжей.

Таким образом , установлено значительное преимущество бепродона по сравнению с вальпроатом натрия по влиянию на эмбриогенез крыс.

Так как значительное число сведений о тератогенных эффектах противосудорожных препаратов в экспериментах получены на мышах при внутрибрюшинном введении высоких доз, нами были проведено исследование влияния бепродона и вальпроата натрия на мышей при сходных условиях воздействия.

Проведенные исследования показали, что при введении бепродона достоверных различий эмбриональной смертности (10.0%) по сравнению с контрольной группой( 6.6%) нет, в то время как вальпроат натрия вызывал достоверное повышение постимплантационной эмбриональной смертности

(23.6% ) по сравнению с контролем( 6.6%) . При ведении вальпроата натрия самкам обнаружено значительное количество плодов с мозговой грыжей и аномалиями конечностей, в то время как при применении бепродона аномалии конечностей не обнаружены ( Таблица № 7)

Таблица № 7

Влияние бепродона и вальпроата натрия на беременных мышей при введении в дозе'мг/кг на 9-10 дни беременности.

Показатели Бепродон Вальпроат натрия Контр.

Количество обссле 60 64 58

дованных плодов

Из них с наруше -ниями абс % 12 20 28 43.7* 7 12.1

Т и п подкожные гематомы абс % 9 15.0 11 17.2 7 12.7

на умненьшен ная масса тела абс % 8 13.3 28 43.75 * -

РУ ше ний мозговая грыжа абс % 2 3.3 12 18.7* -

отсутствие фаланг абс % - 8 12.5 * -

* - Достоверно при Р < 0.05

Таким образом, в экспериментах на крысах и мышах установлено, что бепродон является более безопасным по влиянию на развитие потомства, чем вальпроат натрия.

Выводы:

1. Бепродон при введении крысам-самкам в дозе бОмг/кг, что соответствует Юкратному превышению терапевтичесой дозы ,не влияет на репродуктивную функцию крыс.

2. Бепродон, в дозе ЗООмг/кг, превышающей терапевтическую в 50 раз, оказывает токсическое действие на самок и на развитие потомства в антенатальном периоде развития , что выражается в уменьшении массы тела и замедлении скорости оссификации скелета крысят.

3. Бепродон не влияет на физическое развитие потомства в постнатальном периоде, но несколько снижает двигательную активность крысят в дозе ЗООмг/кг.

4. Бепродон не обладает тератогенной активностью при введении его в дозах, превышающих терапевтические в 10 и 50 раз.

5. Бепродон не оказывал отрицательного влияния на генеративную функцию крыс-самок.

6. Бепродон не оказывает повреждающего действия на гонады крыс-самцов.

7. Бепродон преодолевает плацентарный барьер, определяется в крови плодов в максимальном количестве (50% от содержания в крови самок) через 20 минут и в минимальном - через 6 часов после введения беременным крысам-самкам.

8. Исследованиями эмбриотоксической и тератогенной активности бепродона в сравнении с вальпроатом натрия установлена большая безопасность бепродона по влиянию на эмбриогенез крыс и мышей.

9. Бепродон является перспективным соединением для лечения эпилепсии и других заболеваний , сопровождающихся судорожным синдромом.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Савинова Т.Б, Голованова И.В. Оценка общотоксических и эмбриотоксических свойств нового противосудорожного соединения

ОФ-6435. Химико фармацевтический журнал. Москва. Медицина 1999 г, Том 33 №.10, стрЗ-б.

2. Савинова Т.Б. Гуськова Т.А. Исследование тератогенного эффекта вальпроата натрия на крысах и мыщах. Токсикологический вестник Москва. 1999г. №6, стр23

3 Савинова Т.Б. .Голованова И.В. Доклиническвя токсикологическая оценка нового противосудорожного средства. V Российский национальный конгресс "Человек и лекарство", Москва , 1998, стр 613.

4. Голованова И.В., Шарова С.А. , Чичерина A.A., Савинова Т.Б., Либерман С.С. Влияние комбинированного приема лекарственных препаратов на их токсичность в эксперименте. I Всероссийская конференция токсикологов. Санкт-Петербург, 1995. Вып. 4, стр 10.