Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Исследование роли эндогенных опиоидных пептидов в регуляции иммунных процессов у больных малыми формами эндометриоза страдающих бесплодием

ив о»

^ П '^СОИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР АКУШЕРСТВА, ГИНЕКОЛОГИИ И ПЕРИНАТОЛОГИИ

На правах рукописи

М ИТЬКИ Н

Вячеслав Васильевич

ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ ЭНДОГЕННЫХ ОПИОИДНЫХ ПЕПТИДОВ В РЕГУЛЯЦИИ ИММУННЫХ ПРОЦЕССОВ У БОЛЬНЫХ МАЛЫМИ ФОРМАМИ ЭНДОМЕТРИОЗА, СТРАДАЮЩИХ БЕСПЛОДИЕМ

14.00.16— Патологическая физиология 14.00.01 —Акушерство и гинекология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1993

Работа выполнена в Научно-исследовательском Центре акушерства, гинекологии и перинатологии Российской академии медицинских наук.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Т. Я. Пшеничникова, доктор медицинских наук, профессор Г. Т. Сухих.

Официальные оппопепты:

доктор медицинских наук, профессор В. П. Сметник, доктор медицинских наук А. А. Зозуля.

Ведущее учреждение — Московский государственный медицинский университет.

Защита диссертации состоится « . . . » . . . . 1993 г.

на заседании специализированного ученого совета (шифр К.074.06.01) при Научно-исследовательском Центре акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН (117815, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4).

Автореферат разослан « . . . »..... 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук

Е. А. Кириллова

- 1 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

¿ürryaJTbHOCTb тгмы: Генитальный андометрноэ является важной проблемой современной гинекологии, т. к. несмотря на совершенствование методов диагностики и лечения, продолжает занимать одно иэ ведущих ыаст в структуре гинекологических заболеваний. Принято считать, что после воспалительных эаболеваний айнских гониталий и фибромиомы матгл ондомэтриоо занимает 3-е место среди гинекологически:: паболеваний. По данным отд.'оперативной гинекологии Центра Лкушорства, Гинекологии и Перинатологии РАШ частота этого заболевания достигаэт 60Х среди пациенток подвергав мых лапврото-ига( Селезнева IL Д. и др. , 1S83; Адамян Л. В., 196о). Зарубежные исследователи считает, что эндометриоэ является самым часто встречаемым заболеванием у гиенщин репродукигвного вовраста( составляя в среднем 16-20% (Barbier» R.L. et al. ,1984; Buttram V.C. et al., 1985).

Малые формы эндометриоеа st :имают особое »«сто в классификации наружного генитального эндомэтриоза. К мзлым формам относят оч 'и эндометриоза, обнаруживаемые при лапароскопии, не вызывающие грубых анатомических изменения органов малого таза, что соответствует I-II степени распространенности согласно классиф' -лции ВОЗ 1986 г. Малые формы наружного генитального эндометрноеа являются доминирующей патологией в структуре заболеваний ленщш репродуктивного воэраста, страдающих бесплодием ( Wild R. А. et al. , 1986).

Kar. следует иэ клишгческих наблюдений эндометриоэ наиболее вероятен у женщин, имеющих раннее менархе, короткий менструальный цикл и продолжительсче, болезненные менструации, что указывает на нарушение центральной регуляции гипоталамо-гипофизарно-яичниковых взаимоотношений (Пшеничникова Т. Я. 1991). Однако, патофиэкологи-чесииэ механизмы возникновения эндометриова, несмотря на большое количество исследований посвященных этому заболеванию, остаются до конца не ясными.

В последнее время появились сообщения, указывающие на важное значение нарушений функционирования иммунной системы в развитии эндометриова (Anderson D.S. et al. 1990, Taylor P.M. et al. ,1991). При этом в наибольшей степени изменения иммунитета проявляются локально, т. е. в перитонеальной полости, где выявляют увеличение количества н функциональной активности клеток макрофагального ря-

- г -

да, повышении секреции иммуноглобулинов, цито- и ыонокинов( Hlll J.P. et al. ,1991). В го же время, интенсивность, направленность и характер функционирования иммунной системы при андометриове, особенности механивмов иммунорегуляции при данном еаболевашш дс настс дшрго времени не изучены. Кроме того, несомненный интерес представляет исследование функции иммунной системы не изолированно от целостного организма, а с учетом слоашейлшх двусторонних вэаимосвявей иммунной и нейроандокринной систем, вовлеченность последней в развитии эндометриоаа в настоящее время получает все больше подтверждений Баскаков а П. 1990).

Среди нейроэндокршшых факторов регулирующее имодпный гомэ-остаэ важное вначение, особенно в последнее время, уделяется эндогенным опиоидным пептидам, которые как известно на гипотвла-мо-гипофиварном уровне принимают участие в регуляции менструального цикла, продукции ряда половых гормонов, оказывая тем самым влияние на репродуктивный процесс(Сметник В. П. и др. 1990;).. В сеяэи с 8тим нам представляется актуальны!., изучение роли опиоид-ньк пептидов в регуляции нммунных реакций в условиях нарушения репродуктивной функции.

Таким образом, цаль» настоя^ого ксслэдозапка явилось определение роли эндогенных опиоидных пептидов в нарушении иммунных реакций при андометркове малых форм.

В процессе исследования решались следующие аадали:

1. Определить содержание эндогенных опиоидных пептидов в крови и перитонеальной жидкости у больных малыми формами эндометриоаа. Охарактеризовать особенности распределения оли-оидов в системе кровь/перитонеальная жидкость.

2. Изучить параметры клеточного и гуморального иммунитета больных малыш формами эндометриоаа в периферической крови и перитонеальной жидкости.

3. Исследовать влияние синтетического лиганда опиоидных пептидов - даларгина на иммунные реакции периферической крови и перитонеальной жидкости.

Научная новиаиа: П процессе исследования впервые было комплексно определено содержание различных эндогенных опиоидных пептидов (В-андорфин, В-липотропин, мет-энкефалин, мю-лиганды, мор-финовая иммунореактивность) в периферической крови, перито .зальной жидкости, ткани нормального эндометрия и андометриоидных ге-теротогшй б норме, у больных малыми формами андометриова и спаеч-

ным процессом. Исследованы особенности распре деления рае личных опиовдов в системе перитонеальная лшдкоегь/кровь/эндометркй/эндо-метриодные гетеротопии в норме и при зидометриоео. Изучены реакции ¡клеточного и гуморального звеньев иммунитета больных с малыми формами эндометриоэа в периферичеосой крови и перитонеальной жидкости. Исследованы гуморальные факторы иммунитета (иммуноглобулины А, и, В, ¿-интерферон, простатландкна Е) в системе кровь/перито-неальная жидкость в норме и у Сольных малыми формами эндометриоэа. Определен характер влияния синтетического лиганда опиоидньи пептидов - далвргина на уровень активности им,<унных реакций в норме н у больных малыми формами эндометрноза.

Пршггичос'сл!! ипй'из'аотБ! Полугены сравнительные количествен-нш параметры содержания эндогенных опиондных пептидов в норме и у больных малыми формами эндометриоэа в крови, перитонеальной жидкости, ткани эндометрия и эндометриоидной гетеротопни. Исследовано состояние иммунной системы и характер цммунорегулирухицего действия синтетичеаадх аналогов ещноидов в норме и при эндсметри-оае. йшвленные еакономернооти могут явиться основанием для вое-шжного применения синтетических аналогов опиоидных пептидов в качестве дополнительного средства в общепринятую схему лечения вндометриова.

Пнсдрзшю: Результаты проведенного исследования внедре i в отделении диагностики и лечения женского бесплодия НИ Центра акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН.

Алробяцчя диссертации: Основные положения диссертации доложены на Всесоюзной конференции моло^чх акушеров гинекологов(Красноярск, 1988г.), на 6-ом Международном Конгрессе Европейской Ассоциации Акушеров Гинекологов(ЕА0О,1/лл2К1 .,1991), мелклкнической ютнфэренции Научно-исследовательского Центра акушерства, гинекологии и перкнатологк РАМН в феврале 1993 г. Диссертация обоувде-на на апробационной комиссии НИЦ АГП РАМН 16 марта 1993 г.

Публикации: По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Огру1стура рабст* Диссертация состоит ив введения, обеора литературы, главы "Материалы и методы", главы собственных результатов, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Работа содерлап1 страницу машинописного текста,

таблиц н рисунка. Укаеатель литературы включает источников на русском яаьл-м и - на иностранных языках.

Работа выполнена на базе лаборатории клинической иммунологии (рук. д. м. н. , проф. Г. Т. Сухих) и отделения диагностики и лечения женского бесялодня( рук. д. м. н. , проф. Т. Я Пшеничникова) Российского научно-исследовательского Центра акушерства, гинекологии и перинатологии РАМН(дир. член-корр РАМН, проф. 3. И. Кулаков).

- 4 -

Основные положения, вынос№<ые на апдиту:

Г)*'

У Солъних наружным генитальным эндометриозом малых форм отмечаются:

1. избирательный дефицит эндогенных опиоидных пептидов, взаимодействующих с мю-опиоидными рецепторами: мет-анкефа-лин, В-эндорфин, мю-лиганды, корфиновая иммунореактив-ность .

2. отклонений в иммунном гомеоотаае, проявляющиеся в крови: в снижении уровня Т-супрессоров(С0-8), пролифзратиЕиой активности Т-лимфоцитов, концентрации ии.г/ноглобудина М; в перитонеалыюй жидкости: в увеличении количества и функциональной активности перитонеальных макрофагов, в повышении уровня иммуноглобулинов 3 и М, простагландина Е, в снижении концентрации ¿- интерферона.

3. отсутствие реакции иммунной системы в ответ на скзогенное действие синтетического аналога опиоидных паитидор - да-даргина.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Материалы и методы исследования.

Для выполнения поставленных задач проведено обследование 128 женщин, наблюдавшихся в отделении диагностики и лечения женского бесплодия РНИЦ АГП РАМН ( рук. проф. Т. Я. Пшеничникова). Клиническая часть работы выполнялась с ведущим/научным сотрудником отделения, к. м. н. ЕЛ Волковым. Основную группу составили 62 х^енщи-ны с бесплодием и малыми формами наружного генитального эндомет-риоэа, что соответствует 1-П степени распространения согласно классификации ВОЗ (198Бг.). Диагноз наружного генитального зндо-метриовв ставился на основании результатов лапароскопического обследования. Группу сравнения составили 6Б пациенток с бесплодием и спаечным процессом в малом тазу. В контрольную группу вошли 11 - практически здоровых женщин с сохраненной менструальной и детородной функциями, лапароскопическое обследование которым проводилась в связи со стьриллизацией.

В работе были испольвованы методы принятые в отделении диагностики и лечения женского бесплодия для рутинного обследования пациенток. Все женщины были обследованы по общей схеме, предложенной В03(1986) для диагностики бесплодия. У всех пациенток про-

- Б -

годилось общеклиническое и гинекологическое обследование. При щоике соматического статуса определялся массо-ростовой коаффици-шт, ст'пень оволосения по шкале йеррнманв-Голвея (гироутное гисло). функциональное состояние яичников оценивалось по тестам функциональной диагностики. Пациенткам с бесплодием проводилось зпециальнсэ гинекологическое обследование: гистеросальпингогра-£ия, кимогрвфнческая пертубация (ваточных труб, гормональное збследовзние, УЗ-скенирование органов малого таза, обзорной рентгенографии . зрепа и турецкого седла, гистероскопии, гистологического исследования эндометрия,

Специальные методы исследования включали: pt иоиммунологи-теский, радиорецэпторный и метод поляривации флюоресценции для эпрэдоления активности эндогенных опиоидньк пептидов в исследуе-!<iix образцах крови, перитонеальной зкидкости, ткани нормального эндометрия ii эндомегриальной гетеротопии (предварительно проводили кислотную экстракцию образцор); методы оценки иммунного статуса - фэнотипическая характеристика лимфоцитов периферической крови методом проточной цитофлюорометрии, пролиферативная активность лимфоцитов, стимулированных полкклональными митогенами, определение иммуноглобулинов методом поляризации иммунафлюоресцеиции в крови и перитонеальной жидкости, радиоиммунное определение прос-тагландина класса Е иА- интерферона, оценка функциональной активности макрофагов перитонеальной жидгости по уровню активности мембранного фермента 6'- нуклеотидаэы.

Статистическая обработка полученных результатов проведена на компьютере "Olivetti" PC ЬЕ90(Италия). фи статистической обработки результатов использовался пакет прикладных програш "Statgraphioa", вер<_.л 2.6.

Получеюме результаты и tot обсуждение. Результаты клинического обследования.

Изучение клинических проявлений и особенностей заболевания проведено Hai.ni у 117 ленщи н; кэ них у 62 - был поставлен диагноз наружного генитального эндометриоза 1-2 степени распространения, у ББ - перитснеальная форма бесплодия, спаечный процесс в малом тазу, подтвержденных лапароскопическн,

Возрастной состав обследуемых больных колебался от 25 до 36 лет и в среднем составил 27+2. О лет.

Научение менструальной функции показало, что возраст менархе у большинства обследуемых женщин находился в пределах нормы: 13±1.2 года.

Средняя продолжительность менструации составила Б. 4+ 1.1 дна- Продолжительность менструального цикла в 28 дней у 6БХ женщин. Продолжительность менструального кровотечения более 7 дней установлена у 60.27. женщин, обильными менструациями страдали 42.77. больных с ' наружным генитальньш эндометриовом. Нарушения менструальной функции по типу олигоамзнореи выявлены лишь у 3. IX пациенток.

Дисменорея наблюдалась у 91Х женщин, страдающих генитальным вндометриозом. По характеру боли тупые, тянущие, распирающие. При этом боли локализовались вниэу живота у 40%, в поясничной области у Б9% женщин с эндометриоэом. Почти.больше чем у половины больных дисменорея наблюдалась с менархе. Таким обраэом, одним из частых клинических проявлений малых форм наружного генитального эндоыэт-риоаа является болевой синдром.

Всем женщинам производилась лапароскопия во вторую фаэу менструального цикла не ранее, чем аа 7 дней до менструации. Дри лапароскопии эндометриоидные гегеротопии обнаружены на поверхности яичников у 21(35%) женщин, на маточных трубах - у 9(16%), на крестцово-маточных связках - у 43(71%), на широких связках - у 35(69%), на брюшине поаадиматочного пространства - у 46(7Б%). Ц пациенткам прозводилась биопсия вндометриоидных имплантатов.

Из общего числа обследованных больных, "первичным бесплодием страдали 89(75%), вторичным - 28(26%).

Таким образом, результаты обследования 62 больных, страдающих наружным генитальным андометриоаом, подтвердили основные клинические симптомы ваболевания: болевой синдром, бесплодие.

Результаты лаЗораз-орного обследования.

Различными методами определение эндогенных опиоидов проведено как в периферической крови, та!: и в перитонеальной жидкости. Предварительно исследуете образцы подвергались уксуснокислой экстракции. Результаты исследования андогенных опиоидов в кради представлены в Табл. 1.

Радиорецэпторным методом, позволяющим определять суммарное содержание опиоидных пептидов, специфически взаимодействующих с

Табл,'1. Ссщарзяив«» ЗШ л гЕзргй^вркч-гспои кровотоко Оолышя Ь£ЗТр!501К»в

I Оснопяая группа I

Пептиды Контрольная группа I- -------------I- -----------------1

(п-11) . I Эндомлтрис» 1 В»е ондсм*тр»1соа1

I (п-24) I Сп-21) I

!.тг>- .1ИГ0ЛДЫ I I I

( НМОЛЬ/МЛ) Я. 4+0. 1 I 1.9+0. Ё* I 2. 2+0.1 1

дельта-лигаяды I I I

(имо ль/мл) 1.0Й.1 I 1.4±0. 1 I ' 1. 4+0. 3 I

соотношение! I 1 I

' Д'.* льта 1.В+0.1 I 1. 4+0. 2 1 1. 6+0. 2 I

морфиновая !1><г.!у- ! I

норешстивность 12. 0±4. 3 I 9. 3±Б. 2 I 10. 5+6.1 1

(иг/мл) I I I

Лей-энкефалин 66. 0±6. 3 I 40. 5+8. 2 I 62. 4+7. 6 1

(пг/мл) I I

15эт-анквфзлин 32. 1+12. Я I 49.6+19.2' I 30. 9±17.1 I

'1г/ил) I I

В-эндорф:ш 0.2±0. 03 I 0. 08+0. 04**I 0. 2Б+0. 12 'I

(пью ль/л) I I I

В-дипотропин 1. 4Б+0. 6 I 0. 7Б+0. 4 л I . 1. 23±0. 6 • I

(нг/мл) I I

I ** . I

а Р<0. 05 Р<0. 01

(и сравнении с контролен)

определенным классом опиатных рецепторов (в данном случае с мзо- и дельта-рецепторами), было установлено, что при ендом®трноее наблюдается некоторое снижение уровня пептидов, взаимодействующих с мх>-рецепторами, соответственно, 1.9±0. 2 нмоль/мл против 2. 4±0.1 в контроле(Р<0. ОБ). При этом соотношение м»/дельта лигандов не отменялось при эндомет; :озе. Аналогично, и методом флюоресцентной поляригации у больных зндоматриоеом отмечен более низкий уровень морфиноьой иммунореактнвности,т. е. эндогенных пептидных аналогов морфина, соответственно, 9. 3±Б. 2 нг/мл против 12. 0±4. 3 в контроле. Однако, выявленное для данного класса ЭОП снижение не является статистически достоверным (Р>0. ОБ).

Проведенное раднорецептсрное исследование поаволяет оценить лишь суммарную активность лигандов опиатных рецепторов в образцах сыворотки крови и не способно ответить на вопрос - какой ив лигандов обуславливает регистрируемую активность. В свяеи с этим, на следующем этапе исследования было проведено радиоиммунологн-ческое определение в образцах сыворотки крови некоторых ЭОП.

Радиоиммунным методом были определены наиболее охарактеризованные на сегодняшний день пептиды: лей- и мет-аккефалины, В-эн-дорфин и В-липотропнн(Табл. 1). Установлено, что при вндометриоое в крови снижается содержание всех вышенаеванных пептидов, ва исключением мат-анкефаиина. Однако наиболее -значимо снижается уровень В-эндорфина, соответственно, 0.0в± 0.04 пмоль/д против 0. 2±0. 03 в контроле (Р< О. 01) и В-липотропина: О. 7б±0. 4 и 1.45±0. б нг/мл, соответственно (Р<0. ОБ).

Обращает на себя внимание, что по сывороточному содержанию большинства ЭОП группа бесплодных женш;лн бее эндометриова практически не отличалась от контроля.

Таким образом, концентрация как отдельных опиоидных пептидов (Б-эндорфин, В-липотропин), так и суммарных фракций лигандов опиатных рецепторов (мю-лиганды) несколько снижена в периферическом кровотоке ендометриоеных больных. Следует отметить, что та^ " снижение наиболее характерно для опиоидов, специфически ваанн: действующих с мю-опиатными оецепторами. Отмеченный дефицит мо-лигандов в крови эндометриоеных больных может иметь еначение а определении клинической картины еаболевания.

В пермтшгсалыгаЯ нидгсостн определялась как концентрация опи-)идов, так и с учетом оО'ема ПЖ их абсолютное содержание.

"абл. 2: Оодврканкэ ЗОП в перитонеолыгоД имдкости больных андо-иэтриоаом:

Пептиды

I I

1 Контрольная группа!-

Осиовная группа

I

_I.

Объеы ПЖ (мл) I

(п-11)

7. Б±3. Б

I Эндомегриоэ

.1_(п-24)_

I 10. 4±3. 1

Бее зндомегриоеа _(п-21)_

9. б_2. О

ию-лиганды С нмоль/мл)

дельта-лиганды I

(имог*>/ид)

соотношение: мю/ дельта

I

I

з. е±о. г

28. 6*2. 9

2. 2±0. 2 1?. 3+Э. 7

2. 0+0.1 1.7+0. 1

2.640. 24.113. 2*

I 2. 3±0. 4

I 23. 2+2. 9 I

I 1.1+0. 2*

1 1.0x0.2

3. 4+0. 2 32. 6+2. Б

2.1+0. 2 20. Е+2. О

1. 9+0. 3 1. 7+0. 2

морфиновая имму-I нореактивноат1 1I (нг/мл) 21

30. 0+6. 3 230. 6+91. О

I 1Э. Б+а*-* 1144. 6+62.7

29. 8+7. 4 266. 6+101. 4

Лгй-энкефаднн 1 I (пг/мл) 2 I Шт-энкефалин 1 I

> :г/ыл) В-эндорфин

( п!,(оль/л) В-липотрошш (нг/мл)

63. 0±10. 3 48Б. 2+80. б 82.2+12.6 646. Б+97.1 0. 34+0. 06 2. 7+0. 4 2. 0+0. 4 1Б. 9+3. 4

Г 61. 1+10. 2 1661. 6+60. 3 I БО. 5+14.4* 1606. 2+81. 4 I О. 140. О&АА 1 О. 94+0. 1а*

I о. е±о. зл I а 4+2.8*

во.6+11.Б 580. 8+72. О 89. 4+13. 8 820. 8+164. 1 0. 44+0. 08 4. 4+0. Б 1. 6+С. Б 14. 1+2. 1

л Р<0. ОБ Р<0. 01

(по сравнению с контрольной группой)

1 - концентрация опиоида

2 - абсолютный уровень - концентрация х объем ПК

I

!

I

Радиорецепторным методом у андометрновных яинисш выявлено снижение мх>-описидных лигвндов как в сравнении с контролем, так и с группой бесплодных женщин бев вндомотриова, ■ соответственно, г. 610.1 нмоль/мл, Э. 4+ О. г и 3. 6+0. Е \Р<0, 01). Уровни дельта-ди-гандов не различались между обследуемыми группами пациенток. Аналогичные еакономернооти, но выраженные в меньшей степени характерны и для абсолютного содержания ЭОП. Соотношение м»/дельта достоверно (Р<0.06) снижено и составило при ендомотрноее -1.1 ±0. 2, против 2.0+0.1 в контроле.

Определение суммарного содержания аналогов морфина методом поляривации флюоресценции также выявило более нивкий уровень пептидов этого класса у ондометриоеных больных в оравнении о контролем, соответственно, 13±8. 4 нг/ыд против 30. 0±6. 3 (Р<0. 01). Рав-дичия в абсолютных уровнях были статистически не достоверны. О помощью втого метода были тестированы обреюцы содержимого гид-росадьпннкса и обнаружено приаутствие морфиновык аналогов в следовых количествах.

Радиоиммунным методом установлено отатиотичеоки достоверное онижение и относительного и в меньшей степени абоодютного уровней некоторых опиоидов в обраецах ГШ ондометриоеных больных. Это наиболее характерно для В-эндорфина, ' В-дипотропина и мет-внкефалина (Табл. 2). Содержание леП-онкефалина не отличалось от уровня в контроле. Группа бесплодных женщин бее ендометрнова по концентрации большинства опиоидов бливка к ка1 .тр.олъной группе. Однако, абсолютное содержание в этой группе несколько выше, чем в контроле, что, ъсвможно, объясняется увеличением объема Ш.

Радиоиммунным методом определялось также содержание опиокда принадлежащего к м»-лигандам - мет-ошмфалина в ткани биоптате. нормального эндометрия матки и ендометриовной гетеротопии. Полученные данные сопоставлялись с уровнем ЭОП в соответствующем образце перитонеальной жидкости. Всего подобное определение было проведено у 11 женщин о ендометриовом и у Э в группе бео зндомет-риово. Подученные ревультаты представлены на Рис. 1.

следует ив полученных ревультатов между содержанием ыет-энкефадина в андометрии и в перитонеальной жидкости существует вначимая свяеь! коэффициент корреляции составил у больных эн-дометриоеом - Н-0. 96±0. 3, в группе сравнения - [3-0.81+0.6. Подтверждены выше приведенные данные о том, что при андометрнове ва-

Рис.I.Распределение иклунорепктивнсго мет-онкефалина в крови(1), леригонеальной жвдкости(2), эндометрий 3), ондометрпаль-ноЯ гетеротоп!ш(4):

| | - эндсметойоз Sffl- без эгиометриозо

дотно снижен уровень мет-энкефалина в Ш, соответственно, 66.6*19.1 против 117. 4±20.1 пг/мл в группе сравнения. Нет различий среди групп обследуемых больных в содержании опкоида в ткани биопгата нормального эндометрия. В ткани эндометриоидной гетеро-то-чи, напротив, содержится в 2тЗ раза больше мет-энкефалина, чем в нормальном эндометрии.

Шлученныз данные могут свидетельствовать с одной стороны о возможном источника секреции опиоидов в ткани ендометрия, а с другой указывать на то, что степень секреции пептидов при эндо-иетриоае может даже превышать таковую в группе сравнения, и тем не менее уровень данных опиоидов в ГО£ может быть снижено. Не исключено, что это происходит по двум причинам, во-первых Еследствии более высокой метаболической активности ГЕК больных эндометриозом, что приводит к быстрому разрушению упомянутых пептидов, а кроме толэ, вовможно, при эндометриозе существует некий блок выброса пептидов в ГЕК или наоборот нак. .ление опиоидов в ткачи эндометри-альноЛ гетеротопин.

Представляет несомненный интерес сопоставление относительных уровней огшоидоь в периферическом кровотоке и перитонеалыюй жидкости (Рис 2):

l»u-ENK M«l-ENK B-END B-UP

MU-

DZLTA МОЯРИШК

CD -контрши ЕИ -

.эндомег{

* P<S.05 ** P<P.0I

Рис.2. Соотношение уровней эндогенных спиовдшпс пептадов в пе-ритонеальной жидкости/периферический кровоток у обследуемых женщин.

Как следует из представленных на Рис.2, диаграмм, соотношение уровней в крови и ПЖ некоторых классов опиоидных пептидов имеет свои особенности у больных андоыетриоаом. Так, например, соотношение уровней мет-энкефалина в ПЖ и крови в контроле и в группе беэ эндометриоза составило 2. БгЗ. О, тогда как у эндометри-озных Сольных - это соотношение не превысило 1. О. Такое различие в

>тносительном содержании опиоида объясняется главным образом его ¡изким уровнем в ПК, и нес только повышенным содержанием в крово-окэ.

Аналогично соотносятся уровни В-эндорс^лна и В-липотропина. >днако в данном случае наблюдается одновременное снижение концентрации отнх опиоидов и в крови и более ваметное а ГС-К.

Соотношение их>-.шгандов и эндогенных аналогов морфина у юлъных эндометриовом колеблется в пределах 1.0, тогда как в двух [ругнх группах обследуемых это соотношение составляет 1.Б для оо-лигандов и около 3.0 для морфиновсй-иммунореактивкоети. Сниже-ше соотношения при зндометриозе происходит за счет резкого паде-[ия определяемых пептидов в ПЙ при одинаковом о контролем содержании в периферической крови.

Распределение других классов опиоидов (лей-энкефалин и дедь-•а-лиганды) не отличалось существенно между обследуемыми группами (енщин.

Анализируя полученные результаты следует сказать, что кон-^нтрация в ПК отнюдь не всех класоов опиоидо1 превышает таковую I кровотоке. Вероятно, что такой избирательный дефицит пептидов, •лавным образом взаимодействующих с мю-опиоидными рецепторами, :арактерное для вндометриэонык больных овяеан либо о нарушенной юкальной секрецией описидов или с повышенны)-! их метаболизмом. В исЛ случае, ато трудно объяснить эффектом разведения вследствие гаедиченил объема Ш, ибо в этом случае следовало бы наблюдать ¡адение уровней всех определявши в исследовании опиоидоз.

На следующем этапе нашей работы проводилось изучение особен-юстейкпаттнага и гуыоральиого авенаев юшуюгтетл обслед/емых 'рупп пациенток. Исследование проводилось как на системном уров-1е, т.е. б периферическом кровотоке, так и локально - в перитоне-злыюй ллдкости.

Результаты изучения субпопулляционного состава лимфоцитов :ериферической крови обследуемых групп женщин представлены в Габл. 3.

- 13 - .

Твбл.2. Фе:ютипическая характеристик!! лж^офсгоа перифоричгсга крови обследуемых яенцин:

I I Основная группа

Субпопуляции I Контрольная rpynnal-------------1----------------

лимфоцитов I I Эндометриоэ I Бее зндометриог _I_I_I_

Абсолютное число 1. 9±0. 4 1. 7±0. Б 2.1±0. Б

лимфоцитов, х10 /мл (п-9) (п-35) (п-39)

CD3, X 68. 8+6. 6 60.1+8.4 63. 4±6. 6

(П-9) (п-40) (п-46)

CD4, X 43. 6±6. 7 43. 7±6. 8 42. 2+7. 4

(п-9) (п-41) (п-39)

CD8, 7. 24. 4+4. 9 19. 2+Б. 4* 22. 7+4. 8

(П-9) (п-41) (п-39)

CD2, X 77. 4+7. 4 67. 4+9. 0 68. 2+8. 3

(п-9) (п-Зб) (п-35)

В-Клетки, X 13. 4+2.6 14.4+2.1 12. 4+3. 0

(П-9) (п-23) (п-29)

CD4/CD8 1.8+0.3 г. 4±о. 6 2. 0±0. 7

* Р<0.06 (в сравнении с контролем)

Как следует из таблицы, количественное4распределение феноти-пических маркеров лимфоцитов в периферической крови свидетельствует об отсутствии существенных различий в обеих группах наблюдавшихся женщин как между собой, так и в сравнении с контролем. Отмечено лишь некоторое снижение общего количества лимфоцитов, а также процента лимфоцитов CD3- и CD8-фенотипа у больных с эндомзтриозом в сравнении с контролем, что составила соответственно: 60.17. и 68. 8Х, 19. 2% и 24. 4Х. При этом в случае CD8-лимфоцитов ато различие было достоверным - Р<0. Об. Выявлено некоторое увеличение процента В меток: при эндометриоее - 14.4t2.17. , в контроле -13. 4+2. 6Х. Однако, в сопоставлении с известными литературными данными, втипараметры находятся в области физиологической нормы для субпппугяции клеток изучаемого фенотипа.

Известно, что величшть "иммунорегулирукщего" индекса, т. е.

соотношение иммунокомпетентных клеток двух типов - Т-хелпе-ры/Т-супрессоры (или CD4/CDВ) - является важным показателем гармоничной функции иммунной системы. В настоящее время принято считать физиологическим это соотношение для здоровых взрослых людей равное примерно 2. Как следует ив представленных да,-ных (Табл. О) величина индекса у наблюдаемых больных соответствует нормальным 8качениям. Однако у больных андометриовом отмечается тенденция к увеличению этого соотношения до 2. 4±0. б против 1.6+0.3 в контроле, еа счет некоторого снижения процента CD8 позитивных клеток.

Следует отметить, что сходные ревультаты в распределении субпопулляций лимфоцитов были получены нами при использовании как метода иммунофлюресценции, так и мэтода проточной цитофляоромет-рии.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о достаточно сбалансированном составе субпопулляций иммуиокомпе-тентных клеток периферической крови у. обследуемых .женщин с тенденцией к снижению процента CD8-позитивных Т лимфоцитов в группе эндометриозных Сольных.

Исследование фушсцжшальной активности лимфоцитов периферической крови обследуемых групп женщин, в реакции ФГА-стимулированной 1 мкг/мл) бласттрансформации показало, что в группе эндометриозных больных пролифератнвный ответ достоЕерно(Р<0. ОБ) сни-•хяи в сравнении с женщинами с бесплодием Сев эндометрзюва или контрольной группой и составил соответственно: ИО - 4.7±2.2, 1Б. Б+4.1 и 10. 643. 2. При этом величина спонтанной пролиферации не различалась между группами обследуемых,' соответственно, у эндо-метриоэных больных - 67+16 орт, бев эндометриова - Б7+21 ори и в контроле - 92. 0±2в орт. Эти данные, свидетельствующие о сниженной пролиферативной активности лимфоцитов периферической крови у эн-домэтриоаных больных при относительно небольших изменениях фено-типиччеких хараетеристик, покаеывавт, что среди вовможных причин таких отклонений могут быть нарушения в механизмах иммунорегуля-ции.

В исследованиях гу»яорилы!Ьк факторов ю&уиихвта ведущую роль отводят определению сывороточных иммуноглобулинов. Результаты определения основных классов иммуноглобулинов G, А и М у обследуемых групп женщин представлены в Табл. 4.

- 16 -

Тай л. 4. Концентрация >;ыыуио глобулинов О, Л и У в феричвекай кропи обсладуеыьи ¡групп «¡Ницше

Класс

ш,[муноглобу-линов

А

1,1

Содержание иммуноглобулинов, мгХ

I

I Основная группа

Контрольная группа1-------------1-----------------

(п-11) I Эндоыегриоэ I Без ендометриова

_I_(п-Б8)__I_( п-БО)_

1 I

1227+141. 2 231. 4+63. 7 141. 7+63. 8 * Р<0. 06 ( в спавнении с контролем)

I 1260.3+378.71 1170. 9±342. 4 I I

I 196.6+71.2 I 181. 0±78.3 I 1

I 218.6+93.1*1 174.3+80.4

• .■ленивая представленные результаты можно отметить прежде всего высокий рвг">рос значений концентраций иммуноглобулинов во всех группах, что тем не менее находится в пределах известных норм, а также не отличается достоверно от соответствующего уровня контрольной группы. Однако, отмечается невначительное, но статистически достоверное увеличение концентрации иммуноглобулина • класса И в группе женщин с эндометриоеом: 231.6+63.1 ыгХ против 141. 7+БЗ. 8 мгХ в контроле (Р<0.01).

При сравнении между собой групп женщин с бесплодием в еа-висимости от наличия эндометриоза не обнаруживается существенных различий. Однако при эндометриозе отмечается тенденция к увеличению всех классов иммуноглобулинов, достоверно вначимое для иммуноглобулина М: 213. 6+93.1 мгХ при эндометриозе и 174. 3+80. 4 игХ беа ндометриова (Р<0. ОБ).

В перитонеальной жидкости, напротив, концентрация иммуноглобулинов все: грех классов снижается у эндометриовных больных (Табл. Б). При этом статистичэски достоверно это снижение для 1еА и 1ем, в сравнении как с контролем, так и с бесплодными женщинами бев эндометриоза.

- 18 -

Табл. Б. Концентрация иммуноглобулинов G, А « И a пэри-токвальиой жидютсти оОслэдувмь« групп »егечшс

I

Клааа I

и>лмуноглобу- I линов

Содержание иммуноглобулинов, мгХ

I

I I

¡Контрольная группа!-

Основная группа

-------I---------

(п-11)

I Эидометриов I Бее вндометрнова

Б70. 2±1Б2. 4

4272+602 100. 9i23. 6 7Б0Ц40 23. 1+9. 6 173. 2+45. 7

_I_(n-68)_I.

I I

I Б01.7+17Б. 0 I I Б22Б±701 I I 65. Б+23. 9* I I 6811124 I I 18.9110. S* I 1 144. 1±ЗБ. 8 I

_( п-Б9).

Б9Б. 1±1бБ. 6 Б712±4Б6 9Б. 0±49. 9

9181214 2Б. 219. 7 240. 31Б6. 0

G

А

M

1 - концентрация иммуноглобулинов

2 - абсолютное содержание - Концентрация к Объем ПЖ * Р<0. 05 ( в сравненшг с контролем)

Абсолютное содержание иммуноглобулинов также имеет тенденцию к снижению при эндометрнове. Однако в сочетании о большим раеб-росом данных рааличия между группами статистически не достоверны.

Таким обраеом, представленные нами данные свидетельствуют о снижении антителопродукции в перитонеальной полости андометриоэ-иых больных, что отчасти можно объяснить эффектом разбавления ^следствии увеличения объема ГПК.

Исследование соотношения уровней соответствующих им»йуногло-булинов в кровотоке и ПЖ представляет определенный интерес о точки зрения выявления вовможного источника секреции иммуноглобулинов в перитонеальной полости. Как следует ив Рис.З. сывороточная концентрация иммуноглобулинов превышает таковую в ГШ а группе бесплодных женщин беэ эндометриова и контроле: для IgG - в 2, для IgA - в 2. 2, для IgM - в 6г7 рав. Среди эндометриовных женшин вти соотношения увеличиваются и достигают! для IgG - 2. Б , для IgA -3. О и для IgM - 16 рав.

Рис.3. Соотношение уровней иммуноглобулинов в крови(1) и пери-тонеал! ой жвдкости(<;):

10А

1

■

1 1 181

1 в .... Ми^З_

1§М

1№

Г 1 Т Шй!..

□ • контроль .эндометрием

•8ндбй1трио1

Полученные рееудьтаты выявили особениоотн в гуморальном иммунном статусе при вндометриоэе малых форм, выражающееся в не-доотс кв иммуноглобулинов главным обрааом класса и в перитонеадь-ной жидкости, в сочетании с повышенным содержанием в периферическом крове ">ке. Причины вывивающие такой дисбаланс могут быть различными. Это и подавление антителопродукции в перитонеальной полости и/или нарушение транспорта иммуноглобулинов но крови в ПЖ, особенно с учетом особенностей биохимического строения молекулы 1£М, и/или повышенный локально в перитонеальной полости мэ-таболивм иммуноглобулинов.

' - 18 - »

Методом радиоммунного анализа было определено содержание ¿-кнторфзраю. и суммарное содержание прсстзг.лгЦ!ДМЗ!оз группы Е в ' сиворо'пю крови обследуемых групп кэнщни:

I Основная группа I

Определяемое!Контрольная группа -------------1-

вещество I Сп-11) Зндомэтриоз I Бе о зндомэтрио8а1

I (п~19) I (п-ЕЗ) I

I й|-интерферон1 (Ед/мл) I простаглан- I дин Е( пг/ил) I I 0. В±0. 4 341¿72 I 1. 2±0. 3 I I 390±91 I I I 1. 610. 4 I 2871103 I

Как следует ш подученных рввультатов - сывороточный уровень ¿-интерферона и простагландина Е не изменяется существенно при эндо-штршве. Однако имеется тенденция к увеличэншэ, особенно значимей, для простагландина 2.

В перигоневдьной жидкости уровень простагландина Е у больных зндсыетриозом сос-хавдяет 7464±1042 пг/мл, что достоверно превьпает соответствующий уровень в контроле - 3890±Б60 (Р<0.01) и в группе женщин Зев эндометриова - 4669± 670 (Р<0. 06). Большой рааброс значений, вероятно, свидетельствует о наличие других кроме макрофагов источников секреции простагландинов в перитонеальнуи полость:

I Основная группа I

Определяемое1Контрольная группа -------------1-

вещество I Сп-11) Эндометриоэ I Бев эндометриоза1

I (п-34) I Гп-31) I

I ¿-интерферон I (Ед/мл) I простаглан- I дин Е(пг/мл) I ............1— 9. 7±0. 4 3890*660 I а 7±о. а* I I 74Б4±1042**1 I -------------1- 9. 2±0. Б I 4659+670 I

* Р<0. 05

** Р<0. 01 (по сравнению с контролем)

Содержание ПЖ другого продукта макрофагального происхождения ¿-интерферона изменяется не столь значительно и дали несколько снижается при андометриове(Р<0. ОБ), составляя 8. 7± 0.2 Ед/мл, у бесплодных без эндометриоза - 9.2+0. Б, в контрольной группе - 9.7±0.3 Ед/мл.

Соотношение уровней простагландина Е в системе КХ/кровь составило в контрольной группе - 10.9, в группе бесплодных без андоштри-оза - 16. 8, с эндометриозом - 19. Б. Таким образом, ПЖ андоыетриоэиых больных представляет своего рода депо простагландина Е; который может иметь значение в патогенезе болевой реакции, иммунных нарушений, бесплодия. Наиболее вероятные источником секреции простагландина Е являются макрофаги, количество которых резко возрастает в перитоне-алькой полости эндометриоэных больных.

В процессе исследования перитонеальной жиджзсти определялось также ее обьем и клеточный состав; функциональная шстивпость перито-неальных макрофагов определялась по активности мембранного фермента Б' -нуклеотидадьг

Концентрация

макрофагов

(х10в/мл)

Абсолютное содержание макрофагов

( хю")

Как следует из полученных данных объем ПЖ увеличивается у бесплодных женщин, особенно заметно при эндометриоэе, составляя 10. 4+3.1 мл пр- ¿ив 7. Б±3. Б мл в контроле. Однако это повышение статистически не достоверно.

У эндометриоэных больных (значительно вовросгает концентрация

в

макрофагов в пяритонеальной полости до 1.3 i 0. 2 х 10 /мл, против 0.8 + 0.1 х 106/мл в контроле (Р<0. 01) или 0.95 ±0. 08 (Р<0. ОБ)-'0 в группе бесплодных женщин бев эндометриова. Абсолютное содержание^ макрофагов составило! в группе с эндометриосом 1^ 043.8 х 10 (Р<0. 01), бев ондометриов-л - 9.1 + 2. 4 х 10 (Р<0. ОБ), в контроле - 6. 1 + 2. 4 х ю".

Важное вначение для понимания особенностей воспалительных и иммунодефицитных состояний в перигоиеальной полости имеет научение функционального состояния мононуклеарных фагоцитов. В качестве маркеров мы определяли активность Б'-вуклеотидвеы (3.1. ЗБ) одного ив основных ферментов пуринового катаболивма.

Были исследованы макрофсги пернтоиеального экссудата больных ендометрновом и в качестве группы сравнения - бев эндометриова. Контрольную группу составили 9 фертильных, вдоровых женщин.

В реоультате проведенных исследований установлено, что уровень активности Б'-нуклеотидавы в макрофагах перитонеального экссудата снижен у больных ендометрновом и составляет 72±13Х-от уровня в контроле, тогда как у бесплодных женщин бее эндометриова -132±21Х (Р<0. ОБ).

Выявленные метаболические различия в активности Б'-нуклеотидавы обследуемых пациенток могут свидетельствовать с одной стороны о рввлнчной функциональной активности цАЫФ, а с другой - об отличии в субпопулляционном составе макрофагов перитонеального экссудата эндометриовных больных.

Следующим этапом нашего исследования было ивучение роли опи-оидных пептидов в тех изменениях иммунитета, которые были выявлены у больных малыми формами эндометриова. О этой целью мы оценивали действие синтетического аналога опиоидов - даларги-на(Тир-Д-Ала-Гли-ССен-Лей-Арг) на иммунные "реакции больных в системе in vitro.

Действие даларгнна на. фенолсгмгчес.тое распределение лимфоцитов периферической кропи. На первом этапе на 9 вдоровых донорах была получена зависимость аффекта от довы добавляемого вещества Как установлено наиболее выраженные ивменения в фенотипической картине

-6 -ю

лимфоцитов были обнаружены в диапазоне концентраций 10 -10 Ц. В

свпви с этим рабочей довой наших исследований мы ввяли концентра--9

цию двларгина равную 10 М.

Твким образом, исследуемый пептид в дове 10 и был добавлен г: свежевыделенкым ликфоцотам 10 больных вкдометриовом, 18 с перито-неальной формой бесплодия и 12 одоровым донорам. • Время инкубации составило 1 час при 4вС с последующей отмывкой и обработкой соответствующий моноклонапьнымн антителами фирмы "Орто". [Шмонание фзнотипичеоких хнг<- • гротик лимфоцитов под зовдейотвнэы даларги-но. представлена

Обеде дуемые группы:

CD3S

CD4X

CDBZ

•Дал I +Дод I-Дал I -»Дай I — I-

•I-

I-

1СООТНОШ-ЭНИ9

____1_ОКТ4/0!П'8_

-Дзд I +Дал I-Дад I +Дод

-I-------

I-

I-

Контро-дьная группа (п-в)

I I I I I I I

62.01 БЗ. 0*1 39.41 38.8 I 23. О I 10.0*1 1.6 I 2.8л ¿Б. 11 ±3.4 I ¿1.61 ±4.2 I ±1.0 1 *1.2 1 ±0.21 ¿0. S III I I II

I II I I II

-- I-

-I-

■I-

I-

'I-

I-

I-

Зндо-

мегрнс»-(п-16)

I I 1 I I I I

60.41 Б8.1 I 43.71 41.2 I 10.2 I 19.6 I 2.41 2.1

±1.91 ±3.0 I ±1.01 ±3.1 I ±1.3 I ±2.1 I ±0.21 ±0.3

I II I III

•I-

Без

зндомет-

риоэа

(п-18)

I-

•I-

I-

I-

-1-

I

I I I I

I I 1 I I II'

63.01 64.1*1 42.21 40.1 I 22.7-1 19.1*1 2.0 I 2.1 ¿3.01 -К.Б I ±2.21 ¿1.7 I ±1.3 I ±1.0 I ±0.21 ±0.1

I_I_I_I_

I

I

I

*Р<0. ОБ

> сравнении с контролем) Как видно ив подученных данных, под влиянием даларгина изменяется распределение субпоиулляций Т лимфоцитов периферической крови: у здоровых доноров снижается уровень ОКТЗ лимфоцитов с 62. О' S. 1 до БЗ. 8±3. 4£ (Р<0. Об), 0КТ8 с 23. 0±1. О до 18. 0±1. 27., при возрастании соотношения 0КТЗ/0КТ4 с 1.Б±Щ2. до 2. 3±ПЛ Сходным образом под "лиянием даларгина изменялся фенотип лимфоцитов женщин с перитонеальной формой бесплодия: ОКТЗ снижался с 63. 0±3. О до 64.1±4. Б, OKI8 с 22.7+1.3 до 19.1+1. 0. Однако соотношение

Т-хелперов/Тсупрессоров существенно при атом не менялось, главным образом эа счет того, что несколько падал урогень 0КТ4 по воздействием даларгина.

У больных эндометриоэом фенотипическая картина лимфоцитов на добавление опиоида пратнчески не ивменялась. Вероятно это вызвано тем, что олиоиды действуют в основном на фенотипические характеристики Т-суппрессоров (ОКТ8). Как. это видно на примере доноров или в группе с перитонеальной формой бесплодия, чем выше уровень ОКТВ ( 19.2+1.3 при эндометриозе, 22.7±1. 3 при перитонеальком бесплодии и 23. 0+1. О у доноров), тем ваметнее реакция на добавление в инкубационную среду даларгина. Это согласуется с данными литературы,' когда иммуномодулирующие воздействия аналогов эндогенных опиоидов эависели от исходного иммунного статуса.

Кроме того, ивменение фенотипической картины лимфоцитов достаточно сложный и длительный по времени процесс, когда ва счет многокомпонентных взаимодействий на поверхности лимфоидной клетки появляется уникальная антигенная структура, выявляемая спецкфи- > ческш антнтелом( ). Вероятно, что добавление даларгина вызывает не изменение синтеза каких-либо уникальных антигенов, а скорее реагирует с уже имеющимися рецепторами, изменяя тем самым их количество. Таким образом по нашему мнению даларгин оказывает воздействие в условиях данного опыта главным обравом на процесс ре-цепторного связывания моноклональных антилимфоцитарных антител.

Дейзти» даларгина на пралифераянвную активность лимфоцитов пвркфернмвсгсой крашг. При инкубации лимфоцитов с даларгином у.всех обследуемых пациенток наблюдалось усиление пролиферативного ответа на ФГА(Рис. 4). Однако степень реакции лимфоцитов больных малыми формами эндометриоеа была выражена слабее: отношение индексов стимуляции ФГА+ДАЛАРГИН/ФГА составило 1.2 при эндометриове, против 2.2 при спаечном процессе или 2. 98 в контроле (доза ФГА в пределах субоптимальных - 1 миг/мл ). Следует отметить, что эффект даларгина на спонтанную пролиферацию лимфоцитов проявлялся в Биде подавления ее активности. При атом, ингибиция спонтанной пролифератив-ной активности в наибольшей степени была выражена в контрольной группе и у бесплодных женщин бев эндометриоэа. Спонтанная пролиферация лимфоцитов больных эндометриозом «вменялась слабо под действием опиоида.

ис-

Рис.4. Действие даларгина на ФГА-стишшг- чванный пролиферотивный ответ лимфоцитов периферической крови:

роль омэтриоз евдометраоБа

(+даларгин)

(-даларгин)

Дайатвиа дзларгшш. на активность Б'-пулвэоткдааы napifxoimojsb-кил макрофигоЕ. Дадаргин был добавлен в конечной концентрации 1СГ Ii Инкубация продолжалась 1 час при 37"0. В контроле добавлялоп оабуфорепный физраствор. Пооде отмывки оцвнивагаоь Б'-нуклеотидная активность клеток. Pi вульгаты в X относительно контроля ( бео вое-дейотаия и при добавлении даларгина) представлены на Рис. Б.

200

100

без

эндометриозе

Рис.5. Действие далппгина иа бунуклеотидазную активность пери-тонеалыых ыакрофагов.

Как следует из полученных данных реа)сция на действие опиоида наиболее выражена среди бесплодных женщин без эндометриоза - уровень ферментной активности снн.кается со 137±117. беэ даларгина до 104±7% при добавлении опиоида, у больных зндомэтриозом - 74±9% и 81±107., соответственно. Таким образом, даларгина но оказывает заметного влияния на активность мембранного фермента Б'-нуклеотидазы пернтонеальных макрофагов больных малыми формами эндометриоза, т. з. при исходно низкой ферментной активности. Поскольку э группе пациенток с бесплодием без эндометриоза наблюдается выраженная реакция Б'-нуклеотидазы на действие даларгина, то вероятно эффект опиоида зависит в значительной степени от исходного состояния функциональной активности перитсиеальных макрофагов. Направленность действия опиоида выражается в снижении ферментной активности макрофагов, что соответственно приводит к усилению метаболической актиннссти клеток.

Таким образом, на основании анализа полученных результатов исследований сделаны следующие выводы и практические рекомендации:

ВЫВОДИ

1. Исследование содержания эндогенных опиоидных пептидов показало:

а) при эндометриозе малых форм имеет место избирательный дефицит пептидов, взаимодействующих с мю-опиоидкыми рецепторами - мет-энкефалин, В-энДорфин, м»-лиганды, морфи-новая-иммунореактивность, При атом наибольшее снижение(в 2-3 раза) наблюдается в перитонеальной жидкости.

б) содержание ыет-энкефалина в ткали эндометриоидных ге-теротопий в Зг4 раза выше, чем в эндометрии ив 2 раза выше, чем в перитонеальной жидкости.

2. Оценка иммунного статуса повволила установить, что у больных малыми формами эндометриоза наблюдаются выраженные изменения иммунитета, проявляющиеся в кроше в снижении уровня T-cynpeccopoc(CD-8), пролиферативной активности Т-лимфоцитов, концентрации иммуноглобулина М, з перотонэ-олькоЯ килкоетгс в увеличении количества и функциональной активности перитонеальных макрофагов, в повышении уровня иммуноглобулинов G и М, простагландина Е, в снижени' концентрации d.-интерферона.

3. Восстановление уровня ЭШ г гем введения ин витро экзогенного ошюида - даларгияа не оказывало влияния на активность шдлунной систеш больных малыми '*ч>р-

эндометтаюза, как было установлено в реакции бласттшис^ошации, щ>и оценке 'Тенотппмческого распределения лимфоцитов периферической крови, при изучении 5-нувлеотмдазкой активности макрофагов пер.^о-неальной зшдноети.

4. Выраженность и направленность иммунных реакций в ответ на введение огшопда зависят как от ушеционпль-г ''о состояния им^аюконпетсютнюс клеток, так п от состава и роцепторгоГ специфичности ондогенных опио-идных пептидов.

Практические рекомендации.

I. Изучение вкдогенннх огтоидни. пептидов у болышх малыми Лошаки андометвиоза позволило выявить особеин-ности в распределении опиопдных лкгандов гж-ткпа, что уо -сг :о.:еть значен?;е в проявлении клинической касатш саболс-ашя.

Г:; г,.- V- гси-д-Д'.ч г-лш и:.мунного статуса болышх ш.-л»ми фсома.'н пвде .:етт>поза выявили дисбаланс в .;унк-иУ.хс.слъият 1шцунш& систеш, что г.окех бить поло::е-но в основу рекомендации возмотзюго применения ю:му-но;.!о,цул1;с.;даи,ей т<"хшш Дании I больней под контролем спсш.т пг-гунаого сп/гуса.

3. ;!сслр.довс:н:е вго:шыя синтрцпчесгого аналога саноид-и;!:>: Т:еп?гл&1! - на у^сл:-

> ' гагг;; с~1;;;!.т :."Ь:-'л-уст о \осг с>4-

учел:« о~1о:^»,(ч. ; г;1 ляд;:;: и.: \'о

1ГЛЛС5СС рсгогаков ,цля гез'-'оазюого ¿«/¿рюш* сгню-ткчсских упадогев онкопдов в качестве дополнительного средства в общепиинлтус а- уу лечения зпдометриоза.

Список опубликованная работ по теме диссертации:

.. Пшеничникова Т. Я. , Волков Н. JL , Штькш В. Е ,Сухих Г. Т. Endometriosis and opioid peptides./ In: 6-th ..3rld Congress of Human Reproduction. Tokyo. 1987. P. 121. !. Митьгаш В. В. Опиоидиыэ пептиды в регуляции иммунных процессов у больных ендометрновом. / В сб. " Итоги и достижения научных исследований и гинекологии",ред. Е. ¡1 Вихляе-ва. Москва. 1SC8. с. 29-34. i. Митышн В. В., Матвеева Н. 1С. , Сухих Г. Т. Влияние опиоидяых пептидов на февотипическне характеристики ли.лфоцитов периферической крови/ В сб. "ССакторы клет. и гумор. иммунитета при различи!«; фиэиол. и патол. состояниях". Челябинск. 1988г. с. 46-46.

Штькзга В. К Роль Бндогенкых опиоидных пептидов в регуляции репродуктивной функц:«1/ В сб. "Диагностика и лечение бесплодного брата" ред. Т. Я. Птаничникова. Москва. 1988. с. 43-47.

. Матвеева Н. К. , Волков Н. И. , Митькин В. а , Петренко Е. П. , ГЬпеничнгаюга Т. Я , Сухих Г. Т. Иммунолопгсеские исследова-' ния периферической крови Сольных с бесплодиям н наружным

гениталыпл.< андсметриовои/ ж. Aiiyus. Гин. НЗ.1990. с. 48-51. . Нитьшш а В. .Кулаков В. И., Сухих Г. Т. 1!м).г/но ло г иче с iu :з особенности перитонеаяьной жидкости у больных ондометрио-аом/ х. Лкуи. и Гинек. N6, 1991, с. 2-4. '. Ыитькин К В. , Ео-аюв Е И. , Пшеничникова Т. Я. , Сухих Г. Т. The activity or 6'-nucleotidase in peritoneal macrophages of endometriosis patients/ In: 6-th Meeting

£ASO. l.fcaoow. 1991. c. 67.________' ______

. 1,'итькин В.В., C-fXJiX Г.Т. Эндогенные опиоидные пгптпда при бецемвшюоти и родах/ ;к.Акуш. и Шгек, №3, IS93,c,2-3,