Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Влияние мелатонина на терапевтическую эффективность и токсичность комбинированной противоопухолевой терапии при экспериментальной неоплазии

005531278

На правах рукописи

ВЛШУРКИНА ИРИНА МИХАЙЛОВНА

ВЛИЯНИЕ МЕЛАТОНИНА НА ТЕРАПЕВТИЧЕСКУЮ ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ТОКСИЧНОСТЬ КОМБИНИРОВАННОЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ

НЕОПЛАЗИИ

14.03.06-Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

-4 ИЮЛ 2013

Саранск - 2013

005531278

Работа выполнена на кафедре фармакологии ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» (г. Саранск)

Научный руководитель: доктор медицинских наук доцент

Сипров Александр Владимирович

ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный

университет им. Н. П. Огарёва».

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук профессор

Кузин Владимир Борисович, заведующий кафедрой общей и клинической фармакологии ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 603005, г. Нижний Новгород, пл. Минина, 10/1

доктор медицинских наук профессор Балыкова Лариса Александровна, заведующий кафедрой педиатрии ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарева», 430005, г. Саранск, Республика Мордовия, ул. Большевистская, 68

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Казанский государственный

медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 420012, г. Казань, ул. Бутлерова, 49.

Защита диссертации состоится >> 2013 года в /У^часов на

заседании диссертационного совета Д 212.117.08 при ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» (430032, г. Саранск, ул. Ульянова, 26).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет имени Н.П. Огарева» (430005, г. Саранск, ул. Большевистская, д. 68), с авторефератом - на официальном сайте Минобрнауки.

Автореферат разослан 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук, доцент

А.Г. Голубев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Известно, что злокачественные опухоли занимают ведущее место в структуре заболеваемости и смертности населения. Использование комбинированного химиолучевого лечения злокачественных опухолей является одним из перспективных направлений в клинической онкологии (Parkin D.M. et al., 2005; Канаев C.B., 2008). Однако сочетанное применение лучевой терапии с химиопрепаратами наряду с усилением резорбции опухоли сопровождается более выраженными побочными реакциями, в том числе миелосупрессией. Незапланированные перерывы в лечении, обусловленные развивающимися осложнениями, ухудшают отдаленные результаты противоопухолевой терапии (Черниченко A.B. с соавт., 2008).

Разработка подходов к реализации максимально возможной специфической активности широко применяемых в клинике цитостатических методов терапии осуществляется по разным направлениям, в том числе путем снижения их токсичности при использовании антитоксических модификаторов (Давыдов М.И., Барышников А.Ю., 2003).

В клинической онкологии все более прочные позиции занимает поддерживающая терапия, позволяющая не только предупредить или уменьшить проявления нежелательных побочных эффектов лекарственной и лучевой терапии, но и в значительной степени уменьшить степень проявления тяжелых осложнений, обусловленных распространенным опухолевым процессом (Константинова М.М., 2002). Не менее важным является тот факт, что в процессе злокачественного роста происходит изменение показателей антиокислительной активности и окислительного статуса опухоли, что может отражаться на органах и тканях организма.

Известно, что свободнорадикальное окисление играет важную роль в процессах возникновения и развития опухоли (Лебедева В.А. с соавт., 2007; Меньщикова Е.Б. с соавт., 2008; Белоногов Р.Н. с соавт., 2009). С учетом патогенетической значимости активации свободнорадикальных реакций в развитии опухолевого процесса и многих осложнений противоопухолевой терапии (Ефремов A.B. с соавт., 2009; Свистунов A.A. с соавт., 2010) исследуется эффективность применения препаратов, обладающих антиоксидантным действием, с различным механизмом и уровнем воздействия на процессы перекисного окисления липидов в качестве антитоксических модификаторов. Вместе с тем, сведения о влиянии таких средств на специфическую активность и токсичность химио- и лучевой терапии и морфофункциональные изменения в опухолевом узле и органах-мишенях в сравнительном аспекте неоднозначны и немногочисленны.

В ранее проведенных исследованиях (Немцова Е.Р., 2006; Сипров A.B., 2009; МикулякН.И., 2011; Зорькина A.B., Скопин П.И., 2011) доказана эффективность и целесообразность включения некоторых

з

антиоксидантов в схему противоопухолевой химиотерапии. Однако поиск средств, наиболее эффективно снижающих токсические осложнения противоопухолевой химио- и лучевой терапии, и оптимизирующих терапевтический эффект лечения основного заболевания, по-прежнему остается актуальным.

Наличие у мелатонина антиоксидантных свойств, превышающих таковые у известных антиоксидантов токоферола и аскорбиновой кислоты (Арушанян Э.Б. с соавт., 2006), а также малочисленные и противоречивые сведения в литературе о возможности его применения при онкопатологии, стали основанием для исследования эффективности применения мелатонина как препарата сопровождения в сравнении с антиоксидантом мексидолом при комбинированной противоопухолевой терапии.

Цель работы: провести сравнительную оценку влияния мелатонина и мексидола на терапевтическую эффективность, миело- и гепатоксичность комбинированной химиолучевой терапии мышей с карциномой легкого Лыоис.

Задачи исследования. Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Исследовать влияние мелатонина на противоопухолевый и антиметастатический эффекты химиолучевой терапии у мышей с карциномой легкого Лыоис.

2. Оценить влияние мелатонина на некоторые показатели перекисного окисления липидов в сыворотке крови, первичном опухолевом узле и печени мышей с карциномой легкого Лыоис на фоне комбинированной противоопухолевой терапии.

3. Сравнить терапевтическую эффективность комбинаций химиолучевой терапии с мелатонином и препаратом сравнения мексидолом, а также миело- и гепатопротекторные свойства этих препаратов у мышей с карциномой лёгкого Лыоис.

4. Изучить влияние мелатонина в сравнении с мексидолом на патоморфологические изменения в тканях первичного опухолевого узла и печени у мышей с карциномой легкого Льюис при комбинированной противоопухолевой терапии.

Научная новизна работы.

В работе показано, что мелатонин не снижает терапевтическую эффективность комбинированной химиолучевой терапии. Мелатонин в сопоставимой с мексидолом степени предупреждает развитие лейкоцитоза на 14-е сутки эксперимента при химиолучевой терапии, корригирует лимфопению, но эффективнее мексидола препятствует снижению содержания гемоглобина в крови. Установлено, что мелатонин эффективнее мексидола препятствует снижению содержания полихроматофильных и оксифильных нэрмоцитов в костном мозге (на 22-е сутки эксперимента) при химиолучевой терапии.

Показано, что мелатонин в сопоставимой с мексидолом степени

оказывает гепатопротекторное действие, уменьшая концентрацию AJ1T и ACT в сыворотке крови, структурные изменения долек печени и лимфогистиоцитарную инфильтрацию портальных трактов.

Установлено, что мелатонин в сопоставимой с мексидолом степени препятствует активации процессов перекисного окисления липидов в сыворотке крови у животных при химиолучевой терапии, и не снижает интенсифицированную активность свободнорадикальных процессов в первичном опухолевом узле.

Сочетанное использование химиолучевой терапии с мелатонином и мексидолом сопровождается положительными патоморфологическими изменениями в ткани первичного опухолевого узла, что проявляется в уменьшении полиморфизма опухолевых клеток и фигур митоза, очагов некроза и рыхлом расположении клеток карциномы.

Научно-практическая ценность и внедрение результатов исследования.

Полученные данные свидетельствуют о перспективности дальнейшего исследования возможности применения мелатошша при комбинированном лечении злокачественных новообразований с целью поддержания эффективности и снижения токсичности химиолучевой терапии. Результаты исследования углубляют представления о фармакодинамике мелатошша и внедрены в научно-исследовательскую работу кафедры фармакологии, а также используются в системе послевузовского профессионального образования при подготовке аспирантов и клинических ординаторов по фармакологии в ФГБОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарева».

Положения выносимые на защиту:

1. Мелатонин не снижает терапевтическую эффективность комбинированной химиолучевой терапии, эффективнее мексидола восстанавливает эритропоэз, а также в сопоставимой с мексидолом степени оказывает гепатопротекторное действие.

2. Мелатонин в сопоставимой с мексидолом степени препятствует активации процессов перекисного окисления липидов в сыворотке крови у животных при химиолучевой терапии и не снижает интенсифицированную активность свободнорадикальных процессов в ткани первичного опухолевого узла.

3. Сочетанное использование химиолучевой терапии с мелатонином и мексидолом характеризуется положительными патоморфологическими

- изменениями в ткани первичного опухолевого узла.

Апробация работы.

Основные результаты диссертационного исследования доложены и обсуждены на X, XII Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2009, 2011); XIV научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева (Саранск, 2010г); XVIII -XIX Российском национальном конгрессе

«Человек и лекарство» (Москва 2011, 2012); VI пленуме президиума Российского общества патологоанатомов (Н.Новогород, 2012).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 10 работ, из них 3 научные работы в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего 158 источника (103 отечественных и 55 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 16 рисунками и 14 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Эксперименты выполнены на 200 мышах-самках линии С57В1/6 массой 20-22 г разводки питомника ГУ НЦБМТ РАМН «Столбовая». Все экспериментальные животные содержались в стандартных условиях вивария МГУ им. Н.П. Огарева со свободным доступом к питьевой воде на стандартном рационе брикетированных кормов. Все манипуляции с животными проводились в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (ETS N123, Страсбург, 18 марта 1986г.). В каждую экспериментальную группу входило 25 мышей. Характеристика экспериментального раздела представлена в таблице 1.

Т а б л и ц а 1.

Дизайн исследований_

Экспериментальные группы Условное обозначение групп Схема введении препаратов

X 2 3

Интактные животные (п=25) (ИК) Препараты не вводили и опухолевые клетки LLC не перевивали

1-опухолевый штамм LLC (контроль) (п=25) (LLC) 1х106 опухолевых клеток LLC внутримышечно

II- LLC, цнклофосфан (п=25) (LLC+ЦФ) 1х106 опухолевых клеток LLC внутримышечно, цнклофосфан -внутрибрюшинно, 2 раза с интервалом 96 часов, в дозе 100 мг/кг, начиная с 7-х суток

IV-LLC, цнклофосфан, мексидол 50 мг/кг (п=25) (LLC+ЦФ+М ексидол) так же, как и во II тр., мексидол ежедневно, внутримышечно, в дозе 50 мг/кг, начиная с 7-х суток в течение 14 дней

о

окончание табл. 1.

1 2 3

V—LLC, циклофосфан, лучевая терапии (п=25) (LLC+ЦФ+ЛТ) Г106 опухолевых клеток LLC внутримышечно, циклофосфан -внутрибрюшинно, в дозе 60 мг/кг, 2 раза с интервалом 120 ч, начиная с 7-х суток после имплантации опухолевых клеток, за 20-30 мин до облучения, лучевая терапия - дистанционное у-облучение локально на область первичного опухолевого узла в дозе 2 Гр, 2 раза с интервалом 120 ч (СОД 4 Гр), начиная с 7-х суток эксперимента

VI-LLC, циклофосфан, лучевая терапия, мелатонин 45 мг/кг (п=25) (LLC+4®+ ЛТ+Мелатоинн) так же, как и в V гр., мелатонин ежедневно, внутримышечно, в дозе 45 мг/кг, начиная с 7-х суток после имплантации опухолевых клеток в течение 14 дней

VII-LLC, циклофосфан, лучевая терапия, мексидол 50 мг/кг (п=25) (llc+l;®+ ЛТ+Мексилол) так же, как и в V гр., мексидол ежедневно, внутримышечно, в дозе 50 мг/кг, начиная с 7-х суток в течение 14 диен

Использовали готовые лекарственные формы препаратов - циклофосфан (порошок для приготовлеиия раствора во флаконох по 0,2 г, ОАО «Биохимик», Россия), мелатонин (мелаксен) (таблетки по 0,003 г, «Юнифарм Инк.», США, которые перед применением растворяли в изотоническом растворе натрия хлорида). В качестве препарата сравнения служил антиоксидант мексидол (5% раствор в ампулах по 2 мл, «Фармасофт», Россия).

Препарат сравнения мексидол вводился в дозе 50 мг/кг (Сипров А.В.,2009), мелатонин - в эквимолярной дозе 45 мг/кг внутримышечно 14 дней, начиная с 7-х суток после имплантации опухолевых клеток.

Дистанционное у-облучение проводили на установке АГАТ-PI, локально на область первичного опухолевого узла в дозе 2 Гр, дважды с интервалом 120 ч (СОД 4 Гр), начиная с 7-х суток эксперимента.

Противоопухолевую эффективность химиолучевой терапии изучали на сингснной опухолевой системе из банка опухолевых штаммов РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН - карциноме легкого Льюис (LLC). Опухолевую ткань LLC трансплантировали мышам линии С57В1/6 внутримышечно в бедро задней лапки слева в количестве 1x10б клеток в растворе Хенкса (ООО «Биолот», Россия).

Материалами исследования явились костный мозг, кровь, ткани первичного опухолевого узла, печени, легких мышей.

Противоопухолевое и антиметастатическое действие химиолучевой

7

терапии оценивали в соответствии с существующими «Методическими указаниями по изучению противоопухолевой активности фармакологических веществ» и «Методическими указаниями по доклиническому изучению средств, обладающих способностью ингибировать процесс метастазирования и повышать эффективность цитостатической терапии злокачественных опухолей» (Хабриев Р.У., 2005).

Противоопухолевый эффект оценивали по объему первичного опухолевого узла на 7-е, 12-е, 14-е, 16-е, 18-е, 20-е сутки опыта и в конце эксперимента (на 22-е) - по его массе. Антиметастатический эффект оценивали по следующим показателям: процент животных с метастазами (частота метастазирования), среднее число поверхностных метастазов в легких на одно животное. Вычисляли индекс ингибирования процесса метастазирования (ИИМ).

Для оценки гематологической токсичности дважды производился забор крови под эфирным наркозом: на 14-е сутки опыта (у 6-ти мышей из каждой группы) и в конце эксперимента на 22-е сутки, также у 6 мышей в каждой группе, с последующим определением содержания эритроцитов, гемоглобина, тромбоцитов и лейкоцитов (с помощью камеры Горяева, подсчет лейкоформулы производили в мазках крови, которые фиксировали в растворе Май-Грюнвальда, затем окрашивали по методу Романовского). Костный мозг у животных выделяли из бедренной кости и на предметном стекле приготавливали мазок с последующей оценкой миелограмм. Фиксацию и окраску препаратов проводили по Паппенгейму-Крюкову.

На 22-е сутки после трансплантации опухолевых клеток животные выводились из эксперимента под эфирным наркозом.

В сыворотке крови определяли содержание АлТ и АсТ (по Райтману-Френкелю), общего белка (биуретовой реакцией), альбуминов (по реакции с бромкрезоловым зеленым), а также уровень МДА, Fe-МДА с использованием набора реактивов для определения ТБК-активных продуктов фирмы «Агат-Мед» (Москва), активность каталазы (по М.А. Королюк), а в гомогенатах тканей - МДА, Fe-МДА, активность каталазы и СОД (по С. Чевари).

Для гистологического исследования структуры печени и опухолевого узла кусочки соответствующих тканей фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Зафиксированные образцы после промывки в проточной воде подвергались обезвоживанию путем помещения исследуемого материала в спирты возрастающей концентрации. После дегидратации материал по общепринятой методике заливали в парафин, а затем на санном микротоме получали срезы, окрашивали их гематоксилином и эозином с последующим исследованием светооптическим методом в световом микроскопе "Микмед II" при увеличении хЮО и х400.

Статистическую обработку полученных результатов проводили на персональном компьютере Pentium IV с помощью пакета прикладных программ «Microsoft Excel». Статистическая обработка включала расчет средних

арифметических значений (М), ошибок средних арифметических (±ш), определение достоверности различий средних арифметических (р) с помощью ^критерия Стыодента и и-критерия Манна-Уитни. Различия считались достоверными при значении р< 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В группе с совместным использованием циклофосфана и мелатонина объем первичного опухолевого узла на протяжении всего периода наблюдения был достоверно меньше, чем в контрольной группе, и составил на 12-е сутки эксперимента 2133,37±387,87 мм3 против 3500,25±70,98 мм3 (в контроле), на 14-е сутки - 2311,16±320,29 мм3 против 4583,13±79,22 мм3, на 16-е сутки -3519,54±119 мм3 против 5748,12±107,68 мм3, на 18-е сутки - 3607,27±291,63 мм3 против 6467,29±162,77 мм3, на 20-е - 5397,12±206,78 мм3 против 7207,3±176,6 мм3.

На 22-е сутки эксперимента масса первичного опухолевого узла у мышей в группе ЦФ+мелатонин составила 6,69±0,3г, что не отличалось от таковой в группе с одним ЦФ (6,45±0,18г). Препарат сравнения мексидол при совместном применении с ЦФ также не влиял на рост первичного опухолевого узла по сравнению с использованием одного цитостатика.

мм3

—♦— Контроль(1ХС) —1ХС+ЦФ+ЛТ

-в- ЬЬС+ЦФ+ЛТ+мел атонии -Ж- ЬЬС+ЦФ+ЛТ+мексидол

Рис. 1. Влияние мелатонина и препарата сравнения мексидола на динамику роста первичного опухолевого узла у мышей с карциномой легкого Льюис при комбинированной химиолучевой терапии.

Частота и интенсивность метастазирования в группе ЦФ+мелатонин не отличались от таковых в группе с одним ЦФ (100%, 8,86±6,0 против 100%, 5,0±1,25, соответственно), а в группе с мексидолом достоверно снижалась интенсивность метастазирования (до 1,0±0,45).

При совместном использовании химиолучевой терапии и мелатонина объем первичного опухолевого узла в течение всего периода наблюдения был достоверно меньше, чем в контроле, и составил на 12-е сутки эксперимента 2643,2±211мм3, против 3500,25±70,98 мм3 (в контроле) (рис. 1), на 14-е сутки -2646,27±127,32 мм3 против 4583,13±79,2 мм3, на 16-е сутки - 2938,72±71,98 мм3 против 5748,12±107,68 мм3, на 18-е сутки - 3565,81±105,55мм3 против 6467,29±162,77мм3, на 20-е сутки - 4537,22±226,51 мм3 против 7207,32±176,61 мм3 (рис. 1).

На 22-е сутки эксперимента масса первичного опухолевого узла у мышей в группе ЦФ+ЛТ+мелатонин составила 7,24±0,3 г, что не отличалось от таковой при использовании одной химиолучевой терапии (6,97±0Д8 г) и было достоверно меньше контрольного значения (9,18±0,19 г). В группе с ЦФ+ЛТ+ мексидол масса первичного опухолевого узла составила 7,28±0,17 г, что также меньше, чем в контроле (р<0,05)(рис.2.).

Примечание:

1- Контроль с LLC;

2- LLC+ЦФ+ЛТ;

3- LLC+ЦФ+ЛТ +мелатонии;

4- LLC+ЦФ+ЛТ+мексидол.

* -достоверность отличий по отношению к контрольной группе при р<0,05.

Рис. 2. Влияние мелатонина и мексидола на массу первичного опухолевого узла при комбинированной химиолучевой терапии у мышей с карциномой легкого Льюис.

Частота и интенсивность метастазирования в группе с химиолучевой терапией и мелатонином не отличались от таковых в группе ЦФ+Л'Г (табл. 2).

ю

Аналогичная картина отмечалась и в группе с мексидолом (табл. 2).

Таблица 2

Показатели антимстастатичсской эффективности сочетанного применения хнмиолучевой

Группа % животных с метастазами Среднее число метастазов НИМ, %

KoнтpoльLLC 100 95,7±8,23 -

LLC+ЦФ+ЛТ 100 8,17±2,21 Pi<0,05 91,46

LLC+IJ«I>+J1T+ мслатоннн 85,7 11,3+4,3 Pi <0,05 89,88

LLC+LJcI>+JIT+ мексндол 100 8,4+2,9 Pi <0,05 91,21

Примечание:

рг достоверность различий с группой LLC

У животных всех экспериментальных групп (кроме интактных) в месте имплантации суспензии клеток развивались опухолевые узлы карциномы Льюиса.

При микроскопическом исследовании первичных опухолевых узлов у мышей I экспериментальной группы (LLC) ткань узла была представлена скоплением крайне полиморфных клеток. Значительная часть клетки была занята ядром с крупными ядрышками и конденсированными зернами хроматина. В связи с конденсацией зерен хроматина в крупные глыбки, встречались светлоокрашенные участки кариоплазмы. Обнаруживались также гигантские полиморфные клетки.

В отдельных опухолевых клетках наблюдались фигуры митоза (анафаза), что отражает их высокую пролиферативную активность.

У животных экспериментальной группы LLC+ЦФ+ЛТ в ткани карциномы Лыоиса опухолевые клетки характеризовались плотным расположением, выраженным атипизмом и полиморфизмом, со смещением ядерно-цитоплазматического соотношения в сторону увеличения размеров ядер. В ткани опухоли обнаруживалось большое количество гигантских клеток с крупными ядрами, содержащими полиплоидный набор хромосом. Кроме того, отмечалось наличие многоядерных клеток, ядра которых имели округлую, полигональную, бобовидную, палочковидную форму, встречались клетки с сегментированными ядрами. Строма опухоли была выражена недостаточно, с немногочисленными гиперемированными капиллярами. В опухолевой ткани выявлялись множественные массивные очаги некроза с перифокальными воспалительными инфильтратами. Наблюдалась инвазия опухолевых клеток в поперечнополосатую скелетную мышечную ткань, с деструкцией миофибрилл.

В ткани перевиваемых неоплазий у мышей экспериментальной группы LLC+ЦФ+ЛТ+мелатонин, при микроскопическом исследовании узлов опухолевые клетки имели преимущественно округло-овальную форму,

•г п

небольшие размеры, встречались клетки с сегментированными ядрами, состоящими из 3-4 фрагментов.

В опухолевых узлах выявлялись гигантские клетки с округлыми и бобовидными ядрами. Отмечалось рыхлое расположение клеток, в отдельных участках опухолевая ткань имела ячеистое строение. Фигуры митоза выявлялись редко. Строма опухоли представлена тонкопетлистой соединительнотканной сетью, с участками склероза. В ткани карциномы обнаруживались обширные очаги некроза. Воспалительно-клеточная реакция выражена умеренно.

Гистологическая картина ткани опухолей экспериментальных животных группы ЬЬС+ЦФ+ЛТ+мексидол была представлена рыхло расположенными, округлыми клетками. Заметно снижался полиморфизм опухолевых клеток. Встречались единичные гигантские клетки.

Стромальный компонент опухолевой ткани был представлен тонкими прослойками соединительной ткани с небольшим количеством сосудов микроциркуляторного русла. В ткани неоплазий выявлялись отдельные небольшие очаги некроза.

При оценке состояния процессов перекисного окисления липидов у животных установлено, что в группе с химиолучевой терапией (ЦФ+ЛТ) в сыворотке крови достоверно снижался уровень МДА на 31% и повышалась активность катапазы на 176,5% по сравнению с контрольной группой. У животных с сочетанным применением химиолучевой терапии и мелатонина концентрация МДА в сыворотке крови снижалась на 53,3% (р<0,01) и повышалась активность каталазы на 176,5% (р<0,001) по отношению к контролю. В группе с мексидолом содержание МДА достоверно снижалось на 38,2%, активность каталазы повышалась на 229,4% в сравнении с контролем (табл. 3).

В печени у животных в группе ЦФ+ЛТ отмечалось снижение уровня МДА и Ре-МДА на 41,8% и 78,2% соответственно (р<0,001), снижение активности каталазы на 79,5% (до уровня показателя у интактных животных), а также активности СОД на 24,5% (р<0,05) по отношению к контролю (табл. 3). При этом активность СОД была достоверно ниже на 31% и по сравнению с интактными мышами. В группе ЦФ+ЛТ+мелатонин регистрировалось достоверное снижение концентрации МДА на 51,5% и повышение активности каталазы на 331% по сравнению с группой ЦФ+ЛТ, а также снижение активности СОД по отношению к контролю и интактным животным на 39,5% и 44,7% соответственно (табл. 3). При совместном использовании химиолучевой терапии и мексидола концентрация МДА достоверно снижалась, а активность каталазы - повышалась на 35,7% и 337% соответственно по сравнению с группой ЦФ+ЛТ, однако активность СОД не отличалась от таковой у интактных животных.

В ткани опухолевого узла у животных группы ЦФ+ЛТ отмечалось достоверное увеличение концентрации МДА на 118%, снижение содержания

Ре-МДА и активности каталазы на 48,5% и 68,5% соответственно, повышение активности СОД на 245,5% (табл. 3). При комбинированном применении химиолучевой терапии и мелатонина содержание МДА достоверно возрастало на 98,2%, а активность каталазы снижалась на 60,7%, что не отличалось от соответствующих показателей в группе ЦФ+ЛТ. При этом концентрация 1'е-МДА не отличалась от таковой в контроле, а активность СОД резко снижалась и была на 74% меньше, чем в контрольной группе, и на 92,5% меньше, чем в группе ЦФ+ЛТ (табл. 3).

ТаблицаЗ

Влияние комбинированного применения химиолучевой терапии и мелатонина на процессы перекненого окисления липидов у мышей с карциномой легкого Лыонс, __ (М±т)_

Показатели Субстрат Пнтактныс животные Экспериментальные группы

Ь1Х (контроль) ЫХ+ЦФ + лт ЬЬС+ЦФ+ ЛТ+ мексидол ЬЬС+ЦФ+ ЛТ+ мелатонин

МДА, мкмоль/л сыворотка 3,52±0,38 6,1±0,44 Р1<0,01 4,2±0,74 р2<0,05 3,77±0,45 р2<0,01 2,85±0,55 р2<0,01

печень 8,7+0,96 18,4±0,93 р,<0,001 10,7±1,17 р2<0,001 6,88+1,07 р2.з<0,05 5,18+0,76 р2.з<0,01

опухолевый узел - 5,04±0,62 10,99±2,2 р2<0,01 12,6+1,02 р2<0,001 9,99+2,79 р2<0,05

Ре-МДЛ, мкмоль/л сыворотка 4,69+0,48 4,6+0,6 3,68±0,67 5,3±0,52 4,2±0,66

печень 8,82±1,64 23,9±2,28 Р1<0,001 5,2±1,04 р2<0,001 5,89+0,88 р2<0,001 5,99+0,87 р2<0,001

опухолевый узел - 9,4±0,88 4,84±0,77 р2<0,01 3,6+0,92 р2<0,01 8,4±1,38 р4<0,05

катал аза, мккат/л сыворотка 0,4±0,08 0,17+0,01 р2<0,05 0,47+0,07 Р2<0,01 0,56+0,08 р2<0,001 0,47+0,05 р2<0,001

печень 0,19+0,02 0,78+0,03 Р1<0,001 0,16+0,03 р2<0,001 0,7+0,07 ри<0,001 0,69+0,05 р,.з<0,001

опухолевый узел - 0,89+0,02 0,28+0,05 р2<0,001 0,5+0,04 Р2.3<0,01 0,35+0,05 Р24<0,05

сод, ед.акг/г ткани печень 39,4+2,93 35,87+0,4 8 27,17+3,8 Р1,2<0,05 28,54+4,67 21,77+2,65 Р!.2<0,01

опухолевый узел - 13,4±1,2 46,3±6,67 р2<0,01 3,27+0,95 р2.з<0,001 3,49+0,63 р2.з<0,001

Примечание:

Р1 -достоверность различий рассчитана по отношению к интактным животным;

Р2 - к группе И.С;

рз - к группе 1ХС+ЦФ+ЛТ;

Р4 - к группе ЕХС+ЦФ+ЛТ+мексндол.

При сочетанном применении химиолучевой терапии и мексидола концентрация МДА и Ре-МДА не отличалась от таковой в группе ЦФ+ЛТ, а активность каталазы возрастала на 78,5% (р<0,01), однако оставалась ниже, чем в контроле, на 43,8% (р<0,01). Активность СОД не отличалась от таковой в группе с мелатонином и была достоверно ниже на 75,6% по сравнению с

13

контролем и на 93% по отношению к группе ЦФ+ЛТ (табл. 3).

Анализ перефирической крови показал, что на 14-е сутки эксперимента на фоне опухолевого роста развивалась анемия и лейкопения с выраженной лимфопенией (табл. 4). Введение ЦФ усиливало анемию и лейкопению у животных: содержание эритроцитов и гемоглобина снижалось на 23,9% и 17,1% соответственно (р<0,05), а количество лейкоцитов - на 65%, по сравнению с нелеченными животными. Мелатонин эффективнее мексидола препятствовал снижению содержания гемоглобина после введения ЦФ: его уровень увеличивался на 49,9% по отношению к группе с монотерапией ЦФ. При этом мелатонин не предупреждал развития лейкопении, однако достоверно повышал количество лимфоцитов на 220,8%. Мексидол препятствовал развитию анемии после введения ЦФ, увеличивая уровень гемоглобина и эритроцитов на 25,4% и 31,13% соответственно (р<0,05) и, в отличие от мелатонина, уменьшал выраженность лейкопении, достоверно повышая количество лейкоцитов на 52,8% по сравнению с группой с монотерапией ЦФ (табл. 4).

Г а 6 л и ц я 4

Влияние мелатоиина на клеточный состав периферической крови мышей с карциномой легкого Льюис при введении пнклофосфаиа

Показатели Экспериментальные группы

Пнтактные Контроль (ЬЬС) ЬЬС+ЦФ ЬЬС+ЦФ+ мелатонин 1ХС+ЦФ+ мексидол

Гемоглобин г/л 143,4±3,15 61,17±1,9 р1<0,05 50,7±3,08 р1.2<0,05 76Ь2,5 р,,„<0,001 63,613,06 Р1.Л.4 <0,05

Эритроциты х1012/л 8,23±0,18 3,97±0,09 р,<0,05 3,02±0,2 Р1.2<0,05 3,05±0,22 р..2<0,01 3,96±0,2 Р 1.3.4 <0,05

Тромбоциты хЮ'/л 376,7±14,7 356,7±18,6 428±24,98 р2<0,05 406,7±51,4 442±27,5 р1.2<0,05

Лейкоциты хЮ'/л 5,84±0,48 3,52±0,3 р1<0,05 1,23±0,2 Р1.2<0,05 2,1±0,4 р1.2<0,05 1,88±0,2 Р1.2.з<0,05

Пентрофилы хЮ'/л 1,7±0,21 2,26±0,21 0,9610,18 Р1.2<0,05 1,13±0,25 р2<0,05 1,27±0,11 р2<0,05

Лимфоциты хЮ'/л 4,1±0,32 1,28±0,15 Р.<0,05 0,24±0,04 Р1.2<0,05 0,77±0,22 р1.з <0,05 0,51 ±0,0 6 Р1.2.3<0,01

Примечание:

Р1 — достоверность отличий рассчитана по отношению к интактной группе;

Рг - по отношению к контролю;

рз - по отношению к группе ЕХС+ЦФ;

Р4 - по отношению к группе 1ХС+ЦФ + мелатонин.

В костном мозге при химиотерапии ЦФ наблюдалось снижение количества сегментоядерных нейтрофилов в 5,2 раза в сравнении с нелеченными животными и полихроматофильных нормоцитов п 2 раза по сравнению с интактными мышами. В группах с сочетанным введением ЦФ с мелатонином и мексидолом отмечалось достоверное увеличение числа

сегментоядерных нейтрофилов в 2,8 и в 2,3 раза соответственно. В группе с мексидолом, в отличие от мелатонина, отмечалось увеличение числа полихроматофильных нормоцитов в 1,6 раза по сравнению с группой ЬЬС+ЦФ.

К 22-м суткам эксперимента у нелеченных животных развивалась тромбоцитопения: количество тромбоцитов снижалось на 31% по сравнению с интактной группой. Терапия ЦФ приводила к сокращению числа тромбоцитов в крови на 24,6% по отношению к контролю. Мелатонин и мексидол в сопоставимой степени препятствовали усилению тромбоцитопении после введения ЦФ. Мелатонин, в отличие от мексидола, уменьшал степень тяжести анемии и достоверно увеличивал уровень гемоглобина и эритроцитов на 60% и 47,8% соответственно по сравнению с группой с одним ЦФ.

В контрольной группе к 22-м суткам отмечались лимфопения и нейтрофиллез без изменений общего количества лейкоцитов по сравнению с интактными животными. В группе с ЦФ регистрировался лейкоцитоз с нейтрофиллезом и сохранением лимфопении. В группах с мелатонином и мексидолом на фоне лейкоцитоза происходили существенные изменения в лейкоформуле: отмечалось достоверное увеличение числа лимфоцитов на 97,8% и 76,4% соответственно по сравнению с группой с ЦФ.

В костном мозге у мышей, получавших монотерапию ЦФ, регистрировалось увеличение в 2 раза количества сегментоядерных нейтрофилов и сокращение числа базофильных нормоцитов в 2,9 раза и полихроматофильных нормоцитов в 5,8 раза по сравнению с контролем. Мексидол, в отличие от мелатонина, увеличивал количество базофильных нормоцитов в 2,19 раза по сравнению с группой с монотерапией ЦФ.

Сочетанная химиолучевая терапия приводила к усилению эритроцитопении у животных на 14-е сутки эксперимента - количество эритроцитов достоверно снижалось на 22,7% по сравнению с нелеченными животными, и развитию лейкоцитоза за счет увеличения числа нейтрофилов на 271% (р<0,01, табл. 5), вероятно, в связи с развитием асептического воспаления в ткани опухоли. Мелатонин и мексидол достоверно предупреждали развитие лейкоцитоза после химиолучевой терапии: количество нейтрофилов не отличалось от такового у интактных животных и в группе без лечения. Число лимфоцитов при этом оставалось ниже, чем у интактных животных, и не отличалось от такового у мышей, не получавших лечения (табл. 5). Кроме того, мелатонин, в отличие от мексидола, способствовал увеличению содержания гемоглобина на 17% по отношению к группе с химиолучевой терапией.

В клеточном составе костного мозга мышей группы с химиолучевой терапией к 14-м суткам наблюдалось достоверное увеличение количества сегментоядерных нейтрофилов на 33,7%, снижение числа базофильных и полихроматофильных нормоцитов в 3,2 раза (р<0,05) и увеличение количества моноцитов в 2 раза по отношению к интактным животным.

В группах с сочетанием химиолучевой терапии с мелатонином и мексидолом отмечалось достоверное снижение содержания палочкоядерных

нейтрофилов на 64,4% и 40% соответственно по отношению к группе LLC, а также сокращение количества полихроматофильных нормоцитов в 2,2 и 3,4 раза по сравнению с группой с использованием одной химиолучевой терапии. Однако, в отличие от последней, в группах с мелатонином и мексидолом содержание базофильных нормоцитов не отличалось от такового у интактных животных.

Т а б л и ц а 5

Влияние мелатопина и мекеидола на клеточный состав периферической крови

мышей с карциномой легкого Льюис при химиолучевой терапии __(14-е сутки эксперимента )_

Показатели Ннтактные животные Экспериментальные группы

LLC 1ХС+ЦФ+ JIT LLC+H®+ ЛТ+мслатонин LLC+UO+ ЛТ+мексидол

Гемоглобин г/л 143,4±3,15 61,17+1,9 Pi<0,05 66,83+2,91 Pi <0,05 78,2+3,94 PI.2.3<0,05 74,25+6,5 pi <0,05

Эритроциты х1012/л 8,23±0,18 3,97+0,09 р,<0,05 3,07±0,1 Pl.2<0,01 3,36+0,26 Pi.2<0,05 3,46+0,2 p,.2<0,05

Тромбоциты х109/л 376,7+14,7 356,7±18,6 373,3+76,5 342,0+61,8 407,5+54,5

Лейкоциты х109/л 5,84+0,48 3,52+0,3 Pi<0,05 11,28+2,04 Pl.2<0,01 3,54+0,3 Pu<0,01 3,0+0,5 Pu<0,01

Нейтрофилы х109/л 1,7+0,21 2,26±0,21 8,4+2,07 Pi.2<0,05 2,36+0,29 Рз<0,05 2,1+0,44 Рз<0,05

Лимфоциты х109/л 4,1+0,32 1,28+0,15 Pi<0,05 2,42+0,26 Pu<0,01 0,92+0,1 Pu<0,01 0,79+0,15 Pu<0,01

Примечание:

pi - достоверность отличий рассчитана по отношению к интактной группе;

Р2 - по отношению к контролю;

рз - по отношению к группе LLC+ЦФ+ЛТ.

К 22-м суткам эксперимента у нелеченных животных развивалась тромбоцитопения, которая сохранялась и в группе с мелатонином. В группах с химиолучевой терапией и ее сочетанием с мексидолом количество тромбоцитов не отличалось от такового у интактных животных. Однако, мелатонин, в отличие от мекеидола, уменьшал степень тяжести анемии после химиолучевой терапии, достоверно увеличивая уровень гемоглобина на 11,6% по отношению к животным в группе с одной химиолучевой терапией. При этом количество эритроцитов не отличалось от такового у животных-опухоленосителей без лечения.

В группе LLC к 22-м суткам отмечались лимфопения и нейтрофиллез без изменений общего количества лейкоцитов по сравнению с интактными животными. В группе с ЦФ+ЛТ регистрировался лейкоцитоз с нейтрофиллезом и увеличением числа лимфоцитов на 88,9% (р<0,05) по отношению к группе без лечения. В группах с мелатонином и мексидолом на фоне лейкоцитоза с нейтрофиллезом количество лимфоцитов превышало таковое в группе ЦФ+ЛТ на 107% и 135% соответственно (р<0,05).

В костном мозге на 22-е сутки в группе LLC+ЦФ+ЛТ отмечалось выраженное угнетение эритроидного ростка кроветворения - полностью отсутствовали базофильные нормоциты и снижалось количество полихроматофильных нормоцитов в 24,7 раза (р<0,05) по сравнению с группой без лечения и интактными животными.

В группе с мелатонином в костном мозге сохранялись базофильные нормоциты, достоверно увеличивалось содержание полихроматофильных нормоцитов в 4,54 раза и оксифильных нормоцитов в 18 раз по сравнению с группой LLC+ЦФ+ЛТ. При использовании мексидола в сравнении с мелатонином регистрировались менее четкие изменения в эритроидном ростке кроветворения - также сохранялись базофильные нормоциты и их количество не отличалось от такового в группе без лечения, отмечалась тенденция к росту числа полихроматофильных нормоцитов, однако эти изменения не оказались статистически значимыми по сравнению с группой LLC+ЦФ+ЛТ.

Опухолевый рост у животных сопровождался снижением содержания в сыворотке крови общего белка и альбуминов на 22% и 30% соответственно (р<0,05), и ростом уровня АЛТ и ACT на 62,6% и 70,2% соответственно (р<0,05), по сравнению с интактными мышами (табл. 6).

Таблицаб

Влияние мелатонииа и мексидола на биохимические показатели сыворотки крови у

мышей с карциномой легкого Лыонс при хнмнолучевой терапии, (М±т)

Группы животных Показатели

Общий белок, г/л Альбумины, г/л АЛТ, мкм оль/л ACT, мкм оль/л

Интакгные 47,3±1,41 30,8+1,93 1,07±0,05 0,88+0,09

Контроль (LLC) 37,1+1 pi <0,05 21,3+1,02 pi<0,05 1,74±0,14 pi<0,05 1,5±0,06 pi<0,05

LLC+ЦФ+ЛТ 43,8±1,38 рг<0,05 21,8 ±1,66 pi <0,05 1,48±0,15 pi<0,05 1,182+0,07 pi,2<0,05

LLC+ЦФ+ЛТ мсксидол 50мг/кг 51,3±1,74 Р24<0,05 21±1,26 pi <0,05 0,902+0,12 рг,з<0,05 1,096±0,06 р2<0,01

LLC+ЦФ+ЛТ мслатонин 45м г/кг 39,6 ±3,1 pi,4<0,05 26,4±2,4 рг<0,05 1,19 ±0,19 рг<0,05 1,16+0,07 рг<0,05

Примечание:

Р1 - достоверность отличий рассчитана по отношению к интактной группе;

Р2 - по отношению к контролю;

р.1 - по отношению к группе [ХС+ЦФ+ЛТ;

Р4 - по отношению к группе 1ХС+ЦФ+ЛТ+мексидол.

Химиолучевая терапия приводила к увеличению содержания общего белка на 18,1% и снижению концентрации АСТ на 21% (р<0,05) по сравнению с контрольной группой.

В группе с мелатонином отмечалось достоверное снижение содержания общего белка на 16,3% по отношению к интактным животным, увеличение концентрации альбуминов на 14,3%, уменьшение уровня АЛТ и АСТ на 31,6%

и 22,5% соответственно по сравнению с контролем (табл. 6).

В группе с мексидолом достоверно повышалось содержание общего белка на 38,3% и снижалась концентрация ACT на 26,8% по сравнению с контролем. При этом содержание AJIT снижалось на 39% по отношению к группе ЦФ+ЛТ (р<0,05).

При микроскопическом исследовании ткани печени животных контрольной группы (LLC) отмечалось выраженное нарушение балочного строения долек. В портальных и перипортальных трактах отмечались явления лимфогистиоцитарной инфильтрации. Наблюдалась глубокая баллонная дистрофия и участки колликвационного некроза гепатоцитов.

В ткани печени животных в группе с сочетанным применением ЦФ и лучевой терапии отмечалось нарушение балочного строения долек. Наблюдалась выраженная лимфогистиоцитарная инфильтрация в области портальных и перипортальных трактов. В отдельных гепатоцитах развивалась паренхиматозная белковая вакуольная дистрофия. Обнаруживались единичные гепатоциты с явлениями кариолизиса и деструкции клеточных мембран.

При совместном использовании мелатонина и химиолучевой терапии отмечалось сохранение балочной структуры долек. Наблюдалось значительное расширение синусоид. Обнаруживалась лимфогистиоцитарная инфильтрация в области портальных трактов и по ходу синусоид. Размеры гепатоцитов были незначительно увеличены, цитоплазма клеток гомогенная. В отдельных гепатоцитах выявлялись пузырьковидные ядра.

При патоморфологическом исследовании ткани печени у мышей при сочетанном использовании химиолучевой терапии и мексидола отмечалось сохранение балочной структуры долек, синусоиды были незначительно расширены. Наблюдались единичные лимфогистиоцитарные инфильтраты в области портальных трактов. В отдельных гепатоцитах обнаруживались пузырьковидные ядра.

В результате проведенных исследований показано уменьшение миело- и гепатотоксичности химиолучевой терапии при совместном ее использовании с мелатонином, что свидетельствует о целесообразности его включения в комбинированную схему лечения злокачественных новообразований.

ВЫВОДЫ

1. Мелатонин не снижает терапевтическую эффективность комбинированной химиолучевой терапии у мышей с карциномой легкого Льюис.

2. Мелатонин эффективнее мексидола восстанавливает эритропоэз и снижает тяжесть анемии после химиолучевой терапии, а также в сопоставимой с мексидолом степени корригирует лимфопению.

3. Мелатонин в сопоставимой с мексидолом степени препятствует активации процессов перекисного окисления липидов в сыворотке крови у животных при химиолучевой терапии. Мелатонин в меньшей степени, чем

препарат сравнения мексидол корригирует активность супероксиддисмутазы в печени. Мелатонин и мексидол не снижают интенсифицированную активность свободнорадикальных процессов в первичном опухолевом узле.

4. Сочетанное использование химиолучевой терапии с мелатонином и мексидолом сопровождается положительными патоморфологическими изменениями в ткани первичного опухолевого узла, что проявляется в уменьшении полиморфизма опухолевых клеток и фигур митоза, очагов некроза и рыхлом расположении клеток карциномы.

5. Мелатонин оказывает гепатопротекторное действие при комбинированной химиолучевой терапии. При этом снижается выраженность патоморфологичсских изменений в ткани печени, что выражается в сохранении балочной структуры долек, уменьшении очагов некроза гепатоцитов и лимфогистиоцитарной инфильтрации портальных трактов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего исследования эффективности применения мелатонина при комбинированном и комплексном лечении злокачественных новообразований с целыо поддержания эффективности и снижения токсичности противоопухолевой терапии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Вашуркина И.М. Оценка эффективности мексидола в профилактике и комбинированной с цитостатиком терапии экспериментальных неоплазий / И.М. Вашуркина, A.C. Крутских, A.B. Сипров, H.A. Плотникова // Сборник научных статей и тезисов X Международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» -М.,2009. - С.856.

2. Вашуркина И.М. Оценка клеточного состава периферической крови при использовании комбинаций циклофосфана с мелатонином и мексидолом у мышей с экспериментальной неоплазией / И.М. Вашуркина, A.B. Сипров, М.В. Галов // Материалы XIV научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева. Часть 1.-Саранск, 2010. -С.171-174.

3. Вашуркина И.М. Влияние мелатонина на свободнорадикальные процессы у животных с экспериментальной неоплазией при химиотерапии циклофосфаном. / И.М. Вашуркина, A.B. Сипров, М.В. Галов // XVIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» : сборник материалов конгресса. - М., 2011. - С.424-425.

4. Вашуркина И.М. Исследование миелопротекторных свойств мелатонина при противоопухолевом лечении у мышей с карциномой легкого Льюис / И.М. Вашуркина, H.A. Плотникова, A.B. Сипров, П.М. Канаев // Сборник научных статей и тезисов XII международного конгресса «Здоровье и

образование в XXI веке» — М.,2011. — С.296.

5. Вашуркина И.М. Сравнительная оценка влияния мелатонина и производного З-гидроксипиридина на гсматотоксичность и противоопухолевую эффективность алкнлирующего цнтостатика у мышей с карциномой легкого Лыоис / И.М. Вашуркина, ILA. Плотникова, A.B. Сипров // Современные технологии в медицине. -Н.Новгород, 2011. - №4. -С.158-161.

6. Вашуркина И.М. Возможности мелатонина в коррекции свободнорадикальных процессов у мышей с карциномой легкого лыоис при химиолучевой терапии / И.М. Вашуркина, A.B. Сипров, H.A. Плотникова // XIX Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» : сборник материалов конгресса. - М., 2012. - С. 570-571.

7. Вашуркина И.М. Патоморфология карциномы Льюса при сочетанном использовании комбинированного лечения и антиоксидантной терапии / И.М. Вашуркина, H.A. Плотникова, С.П. Кемайкин, Т.В. Харитонова // Ремедиум Приволжье: Материалы VI пленума президиума Российского общества патологоанатомов. - Н. Новгород, 2012. - №5.- С.

8. Вашуркина И.М. Морфогенез первичного узла карциномы Льюиса при коррекции антиоксидантами/ И.М. Вашуркина, H.A. Плотникова, С.П. Кемайкин, Т.В. Харитонова // Материалы XVI-юбилейной межрегиональной научно-практической конференции ГБОУ ДПО ПИУВ Минздравсоцразвития России. - Пенза, 2012. - С. 94-96.

9. Вашуркина II. М. Сравнительная оценка влиянии средств с антиоксидантньш действием на терапевтическую эффективность химиолучевой терапии и оксидантный статус у мышеи / А. В. Сипров, П. ¡VI. Вашуркина, В. А. Масягин // Саратовский научно-медицинский журнал. — Саратов, 2012. - Т. 8, № 4.-С. 906-910.

10. Вашуркина И. М. Сравнительная оценка эффективности мелатонина и производного 3-гидрокснниридина в снижении гематотоксичности комбинированной химиолучевой терапии у мышей с карциномой легкого Льюис / А. В. Снпров, И. М. Вашуркина // Известия Высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские наукин. -Пенза, 2012. -№ 4(24) - С. 49-55.

Подписано п печать 17.05.13. Объем 1,25 и. л. Тираж 100 экз. Заказ № 734. Типография Издательства Мордовского университета 430005, г. Саранск, ул. Советская, 24