Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммунотропные свойства бифена и промежуточных продуктов его синтеза

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РГ6 0ДРОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

1 ' ^оп :п

1 На правах рукописи

ЛУКМАНОВА ГУЛЬНУР ИШМУРЗОВНА

УДК: 612.014.46.016.001.6.

ИММУНОТРОПНЫЕ СВОЙСТВА БИФЕНА И ПРОМЕЖУТОЧНЫХ ПРОДУКТОВ ЕГО СИНТЕЗА

РКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА) 14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

УФА -1996

Работа выполнена в Башкирской государственной медицинском университете.

Научные руководители :

- доктор медицинских наук, профессор В.В.Сперанский

- кандидат медицинских наук, доцеи* Т.Р.Зуяькарнаев

Официальные оппоненты :

- доктор медицинских наук, профессор ¡0. А. Медведев

- кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник В.И.Трофимов .

Ведущая организация: Челябинская государственная медицинская академия.

Защита состоится щ // т Ш&с/^ 1996 г. в -/¿? -

часов на заседании специализированного совета К 084.71.01. при Уфимском Ордена Трудового Красного Знамени неучно-иссве-доватеяьскои инсгягуте вакцкн и сывороток вы. И.И.Кзчнккова НЮ *ймцунопрепарат", по адресу : 450024, г .Уфа, ул. Новороссийская, 105.

С диссертацией можно ознакомиться в бибякотехе Уфимского НИИ вакцин и сывороток им. Н.И.Ыешикова.

Автореферат разослан /О ■ ¿¿¿¿>лиг 1996 г.

Ученый секретарь совета кандидат медицинских наук

В.П.Головин

Актуальность теш. В настоящее время синтезировано огроыное количество химических соединений, загрязняющих окружающую среду и их ассортимент стремительно расширяется. Все бояее очевидной стеновится связь экологического неблагополучия раз-яичных регионов с уровнем заболеваемости населения, в частности, с развитием нмцунопатояогических и аллергических состояний ( Хаитов P.M., 1995 ).

Значительный вклад в этот процесс вносят предприятия химико-фармацевтической промышленности, в технологическом процессе которых, как правило, используется шогоиупенчатая схема производства с широким набором побочных и промежуточных продуктов ( Г.ФЛазовая, 1992 ).

Учитывая все возрастающую потребность сельского хозяйства страны в противопаразитарных средствах, в Институте гельминтологии им. К.И.Скрябина (ЕИШС) была разработана технология получения бкфена - перспективного антигельминтного препарата из класса бензимидазояов для применения в ветеринарной практике. Он предназначен взамен дефицитных и дорогостоящих импортных гельминтоцидных средств (В.М.Косарева, I9öd). Производство бифена освоено на опытно-экспериментальном заводе на-учно-иссяедовательского технологического института гербицидов. Е::фен прошея испытания в ряде регионов кашей страны, выявлена его высокая эффективность в дозе 10-30 мг/кг и широкий спектр антигельминтной активности против большинства нематод желудочно-кишечного тракта при отсутствии общей токсичности, тератогенного и цутагенного действия ( Оробец В.А., 1989; Волкова ГЛ., 1990; Кравченко И.А., 1990; Чукина С.И., 1990). Однако для внедрения его в широкое производство необходимо всесторонне

__ 4 - У

изучить биологические свойств«, и получить полную характеристику экологической безопасности конечного и промерточных продуктов синтеза бифена (ППСБ).

Изменение иммунной реактивности организма относится к наиболее ранним и чувствительным критериям при определении токсичности и опасности новых химических веществ (Утешав B.C., 1934; Dean J., J&t/rmnd L, 1987), поэтоцу изучение особенностей ныыунотропной активности бифена и ППСБ является актуальной задачей.

Согласно современным представлениям, под иыцунотоксичес-ким действием подразумевается модифицирующее влияние химических веществ на имцуногенез, проявляющееся в виде супрессии или гиперстицуляции имцунной активности (Козхюк A.C., 1937; bernafconi С I9o9; Prcchazeova ^/,1992). Такое действие приводит к снижение активности и уменьшению числа иммунокомпе-гвнтных клеток, нарушению кооперации Т- и B-лимфоцитов и макрофагов, снижению синтеза иммуноглобулинов, гипоплазии лимфоид-ных органов. Важнейшей особенностью химических соединений, обладающих имцунотоксическими свойствами, является их избирательное действие на определенные типы клеток иммунной системы, что обусловлено высокой гетерогенностью струкнурно-функциональной организации этой системы.

На основании анализа химического строения бифена и ППСБ мы предположили наличие у этих ксенобиотиков способности воздействия на иммунную систему. Бифен содержит ряд структурных элементов, сходных с таковыми у известных импортных препаратов (фенбендазола, албендазола и др.), а промежуточное продукты его синтеза представляют собой двухядеркые ароматические суль-

фопроизводные (дифениясуяьфиды). Согласно литературный- данный, яякарственные препараты, относящиеся к классу аэояов, часто обладает вырааенныа ¡шцунотропныи действием (Сибиряк C.B.,, 1990; Садыков Р.Ф., 1993}. Это аа время, следует отмотать, что подобные иесяедовення в отношении бифена немногочисленны. Так, О.И.Щишковой (19с$) выявлено, что бифен в дозе 20-30 иг/иг способствует укенызеяюэ у ыышей чисяа Т-гинфоцитов в крови и снкаешю урошя сывороточных гацуногяобуяшов, повысзнии чисяа ауто-НЖ. Однако в указщной работе и других сообщениях осталась невыясненной зависшюсть ккцунотрошой активности бифена от шеших и шутренних факторов, в частности, от дозы, сроков и способа введения, не изучена способность бифена к ыо-даф:шщш! функций макрофагов, зрелых Т-эффекторов и регуляторов кицунного ответа. Что касается икцунотропных свойств ППСБ в их логической строю при получении бифена, то в доступной литературе подобные сообщения практически отсутствует. Описена .тишь аяяергоопасность 4-аш:но-4-Ш1тродафенияеуйьфяда, подчеркнута такае необходимость поставки специальных исследований с цеяьэ выяснения особенностей структуры производных днфенил-суяьфзда с их ¡шцунотоксической актпшоетьо (Иыояьбаева Э.А., 1991, Найстреако ВЛ., 1995).

Таким образои, на основании изяояенных факторов iîosho прийти к закяэченшэ, что свойства нового отечественного высокоэффективного еятнгеяьшятного препарата бкфша и провдауточ-ных продуктов его сгатеза нзучеаы недостаточно и ш не располагаем необходимым обьенои сведшпй, позволят?« рекомендовать технологи» его производства как экологически безопаснуп.

Цель и задачи исследования»

Изучить имцунотропные свойства бифена и промежуточных продуктов его синтеза как возможных загрязнителей окружающей среды.

Для достижения поставленной цели быки решены следующие задачи:

1.Выявить потенциальные имцунотоксиканты среди исследуемых Ш1СБ на основании результатов изучения их влияния на морфологические показатели лиыфоидных органов.

2.Установить характер влияния ШСБ и бифена на ^моральный имцунный ответ к тицусзавискмоцу антигену - эритроцитам барана по изменении числа Я)К в селезенке, уровня гемаггявти-ндаов и гемолизинов в сыворотке крови.

3.Исследовать действие ШСБ на некоторые параметры Т -клеточного звена иммунной системы по степени модуляции функциональной активности зрелых Т-эффекторов (ГЗТ, РШХ, КЧ) и Т -супрессоров.

4.Оценить состояние моноци»рно-макрофагального звена иммунитета по числу моноцитов в крови и фагоцитарной активности

перитонеальных макрофагов. •

Научная новизна

I.Впервые дана оценка имцунотропной активности б новых химических веществ, образующихся последовательно в качестве промежуточных продуктов в процессе синтеза бифена-нового высокоэффективного антигеяыинтного препарата для ветеринарной практики.

2.Впервые выявлена зависимость проявления иымунотропных свойств бифена и ППСБ о* времени суток и схемы их введения лабораторным животным.

3.Показана аляергоопасность новых хрстческих веществ -промежуточных продуктов синтеза бифена.

Осношые пояодення, вьносимые на защиту.

I .Промежуточные продукты синтеза бифена в дозе 0,2 обяадаат икцунотропным действием, проявляющимся в модификации клеточного и гуморального иммунитета. На характер и степень иы-1^нотропного действия оказывают влияние химическая структура и

схема введения исследуемых веществ.

2.Проыегуточные продукты 1,2,3,4 оказывают сенсибилизирующее действие на организм крыс при накожных аппликациях. У остальных ШСБ и бифена сенсибилизнрувпнй эффект не обнаружен.

3.Бяфен изменяет шлиздтудао-фазовые отношения количества клеток в лкмфоидных органах в рамках 7 - часового периода.

Теоретическое п практическое значение работы:

Работа выполнена в соответствии с Госзаказом по теме "Токсикологическая оценка сырья и некоторых полупродуктов получения аналогов фенбендазояа" (Уфа, 1988).

Результаты исследований использованы: - при разработке во ШИТИГе лабораторного н технологического регламентов получения бифена. Данные об икцунотропных свойствах бифена шедрены в учебный процесс на кафедре медицинской

биологии и генетики Башгосмедуниверситета при изложении темы "Гельмштозы человека и животных".

- полученные материалы исследования представляет собой новые сведения об инвднотропных свойствах приоритетных соединений из класса бензимидазолов и ароматических сульфопроиз-водаых, синтезированных впервые по оригинальной отечественной технологии.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены: на научной конференции Башгосмединститута "Вопросы теоретической и практической медицины" (Уфа, 1992);- I национальном конгрессе по профилактической медицине (Санкт-Петербург, 1994); проблемной комиссии Башгосмедуаиверситета Научные основы гигиены окружающей среды" (Уфа, 1994, 1995); Республиканском совете фармакологов (Уфа, 1996).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 3 работы (2 из них в центральной печати). Приняты к печати 2 работы.

СОБСТВЕННЫЕ ИССВДВШИЯ.

Материалы ~и методы исследования.

Объектом исследования служили шесть промежуточных продуктов синтеза бифена и конечный продукт производства. - бифен (табл.1, рис.1).

9.a

COOCBg-HN NO,

NO,

NO,

СООСНз

Рис.1 Структурная формула веществ 1-6.

Таблица I

Изучаемые вещества

№ ! Название веществ Юбозначение

п/п ! • !в тексте

I. 4-амшо-4'-нитродифениясу*ьфнд вещество I

2. 4-ацетияамино-4'-нитродифениясуяьфид вепр ство 2

3. 4-ацетияамино-3,4-динитродифониясуяьфид вещество 3

4. 4-амино-З,4-динитродифониясуяьфид вещество 4

5. 3,4,4-триамин одифенилсульфид вещество 5

б. метиловый эфир 5-(4-аминофениятио)-2-б'ен-

зимидозояиякарбоминовой кислоты вещество 6

7. 5-(4-фениясульфониламинофенилтио)-I-фения-су льфонил-2-аминобензимидазоя бифен

В работе использованы половозрелые животные обоего пола полученные из питомника "Pannoлово* РАШ: белые красы линии *Вистар" массой 190+10г- 90 итук, белые беспородные мыши массой 20*4 г - 140 штук, мыши линии СВА массой 19+3 г - 1200 штук, мыши линии C57BI массой 16+2 г - 90 штук, гибриды СВАх C57BI массой Icj+2 г - 90 штук.

Накануне экспериментов животных взвешивали, тщательно осматривали, обращая етимание на их общий вид, поведение, сос- . тояние кожных покровов и температуру, позу, прибавь, массы тела, консистенцию фекалий.

В связи с тем, что изучаемые вещества плохо растворимы в воде и при введении внутриброшинно иногда инкапсулируются, их

вводили животным шутрюкеяудочно при помощи металлического зонда, предяоненного О.И.Еяизарьевой (1962). Водные эмульсии готовили путем тщательного растирания с дистиллированной водой в фарфоровой ступке. Для наивного применения- вещества измельчали, смешивали с вазелином и наносили на выстргаениую козу боковой поверхности кнвотных, которых фиксировали на время опыта во избежание сяизывения тестируемого соединения.

Для исследования юд<унотропных свойств ШСБ использовали 2 дозы: ДЯ^субтоксическая) и 0,2 Д1^(нетоксическая). При выборе доз мы исходили из того, что безопасность химических веществ яучше оценивать по субтоксической дозе, при которой токсические эффекты начинают проявляться, но еще выкивают 90 % животных (Альберт А., 1989; Красовский ГЛ., 1989). Токсическая доза для бифена ке достигнута, поскольку перораяьное введение вещества до 6000 иг/кг и более не приводит к смерти животных. Для иммунизации использовали тимусзависимый ентиген-эритроциты барана, трияды отыыгые забуференньпл физиологическим раство-

Гу

ром. Антиген вводили шутрнбрмшино в дозе 5 х 10 кя/мышь.

В работе применяли унифицированный подход к оценке иммуно-токсических свойств ксенобиотиков, схема которого приведена в методических рекомендациях по экспериментальному изучению кн-цунотоксических свойств химических факторов окружающей среды (19в9). Схема представляет собой ступенчатую форлу постановки Экспериментов, предусматривающую последовательное выполнение исследований при обнаружении положительных результатов. Нами, после предварительного анализа химической структуры исследуемых соединений (I этап), на животных определены потенциальные иыыу-

нотоксиканты, влияющие на массу тела, клеточность и массу центральных и периферических органов имцунной системы, лейкоцитарную формулу крови лабораторных животных.

На втором этапе исследований изучали влияние бифена и Ш1СБ на функциональную активность имцунокомпетентных клеток, ввдеяили наиболее чувствительные звенья иммунитета и установили зависимость иммунного ответа от условий эксперимента.

В экспериментах использованы следующие модели: .

I.Титр гемагглютинов ,и гемолизинов в сыворотке крови ыик-ромегрдом.

2.Число антителообразующих клеток методом локального гемолиза в жидкой фазе.

3.Реакция гиперчувствительности замедленного типа к эритроцитам барана.

4.Контактная чувствительность к бифену и промежуточным продуктам его синтеза.

5.Реакция "трансплантант против хозяина" (локальный вариант).

6.Функциональная активность специфических Т-супрессоров гуморального имцунного ответа.

7.Фагоцитарная активность перитонеальных макрофагов.

Результаты исследования подвергнуты статистической обработке на ЭШ МК-5. Достоверность различий между опытными и контрольными показателями оценивали с помощью критерия Стыо-дента.

. .РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДЗВШЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Поиск нццуноактишых химических соединений среди промежуточных продуктов синтеза бифена.. Исследования показали, что ишуннал система мышей и крыс весьиа чувствительна к воздействию бифена и ППСБ при внутриаелудочном введении. Выявлены существенные изменения в морфологической картине лнкфондных органов (тнцуса, селезенки, крови), установлены также нарушения антигенспецифического реагирования к тнцусзависимоцу антигену - эритроцитам барана.

Все исследуемые нами вещества в дозе сниаали процент жизнеспособных клеток в селезенке. Подсчет клеточной форцулы в мазках-отпечатках селезенки показал, что все ППСБ уменьшали число линфобяастов, в то время как введение 4-анино-4-ннтродн-фенилсульфзда приводило, такае к значительному уменьшению количества средних лимфоцитов (в 2,5 раза). В ответ на поступление вешества 2 более чем в 5 раз уменьшалось число лиыфобластов. А в тнцусе мышей, получавших вещество I, выявлено снижение доли больших (в 2 раза) и средних (в 3 раза) лимфоцитов. Еще более резко (в 4 раза) снижало число больших лимфоцитов вещество 6. Пероральное поступление 4-ацетиламино-4'-нитродифшилсуяьфида привэло к повышению числа макрофагов.

Введение веществ I и 2 в дозе 0,2 мышам линии СВА вызывало увеличение массы селезенки и увеличение кариоцитов в ней, вещества 3 и 6 повышали такае кяеточность этого органа, хотя на ищус они практически не влияли. Характерной особенностью

была определенная зависимость иммунной реактивности животных от времени введения исследуемых соединений. Так, в крови мышей, получавших вещество 2 в 10 часов утра, статистически дос-товерю увеличивалось общее число лейкоцитов и относительное количество нейтрофилов и моноцитов. Под действием вещества 5 число лейкоцитов также повышалось, однако это было характерно в большей степени при вечерней (в 16 часов) затравке. Эти данные указывают на определенные изменения чувствительности организма экспериментальных тавотных к воздействию Ш1СБ в течение суток.

Таким образом, можно прийти к заключению, что производные дифенилсульфнда обладают выраженным тропизмом к ликфоид-ной ткани в субтоксичной и нетоксичной дозах. По-видимому, указанное явление не связано с повышением пролифоративной активности клеток, поскольку выявлено, что ППСБ уменьшают число лимфобластов и больших лимфоцитов в тицусе, селезенке, в то же время увеличивают процент малых лимфоцитов. Среди всех изучаемых ППСБ вещество 5 было единственным продуктом, способным статистически достоверно снижать долю жизнеспособных клеток в селезенке при поступлении как в субтоксичной, так и нетоксичной дозах. Поэтоцу можно уверенно считать, что оно обладает иыцунотоксично стью. Мы полагаем, что это свойство связано с особенностями его химического строения, в отличие от других производных дифенилсуяьфида в его молекуле произведена замена ^нитрогрупп на три аминогруппы.

В дальнейшем, при изучении имцунотропных свойств ППСБ при различных условиях их введения нами установлено, что би--фен влияет на лимфоидные органы животных, выведенных из им-

цунного равновесия введением антигена^ но практически не оказывая на них действия без предварительной антигенной нагрузки. Так, если у контрольных пивотных после введения ЭБ в имцуноком-петентных органах количество спленоцитов возрастало в 2 раза, то под действием бифена в диапазоне доз 5-250 мг/кг активность этого процесса достоверно повышалась. Известно, что этот процесс обуславливается интенсивной пролиферацией и ыиграцией клеток (Петров Р.В., 1981). У леванизола, такпе содерзащего в структуре имидазольнуп группу, выявлена способность к стимуляции пролиферации и миграции клеток (Спитяи Л., I960).

На основании полученных результатов лы приходим к предположению, что в ответ на введение бифена активизируется миграция лимфоцитов, которое подкрепляется фактащ, полученными в хронобиологическои эксперименте. Было установлено, что бифен в дозе 250 иг/кг в ранках 7-часового суточного ритна нарушая ам-пзгитудн о-фазовые отношения количества дашфоцнтов в селезенке, тицусе и крови. Известно, что'постоянный обмен клетками иеяду различными лицфоидныии органами обеспечивает эффективное функционирование ищунной систеыы как единого целого и обуславливает его высокие адаптивные возкояности. Наприиер, число анти-телопродуцентов находится в прямой зависимости от числа Т-кле-ток, мигрирующих их тицуса (Хаитов P.M., 1975). Икмунокоше-тентные клетки, перемещаясь из одного органа в другой, проходят отдельные стадии своей дифференцировки (Козлвк A.C., и др., I9ci9), что свидетельствует о вагности нормально протекавших процессов «миграции лимфоцитов при различных воздействиях. Регуляция этих процессов осуществляется гормонами-факторами, соатав-

лязощими ее центральное звено и местными факторами (кейяоны, простагяандины). На основании изложенного можно считать , что изучение характера влияния бифена на динамику имцунокомпетент-ных клеток имеет важное теоретическое и практическое значение. Нами установлены различное влияние бифена на число лимфоцитов в течение суток. Эти данные позволяют думать о модификации им гормональных ре^уляторных механизмов, поскольку циркадиан-ные колебания числа лимфоцитов и их субпопуляций в значительной мере определяются колебаниями глюкокортикоидов (Труфа-кин В.А., 1990, Баркова ЭЛ., 1992).

Анализ иммунотропной активности ППСВ и бифена.

Согласно полученным материалам в ходе экспериментов, исследуемые вещества отличаются между собой по степени выраженности имцунотропного действия. у

Биологическая активность органических соединений в значительной мере зависит от их строения. Как было показано выше, промежуточные продукты синтеза бифена представляют собой производные дифениясульфвда с различными радикалами. По предварительно^ анализу химической структуры Ш1СБ можно было ожидать, что они будут иметь сходные между собой свойства. Однако фактически мы не наблюдали полного совпадения в направленности действия и степени выраженности имцунотропных свойств ППСБ. Эффект этот, видимо, частично связан с использованием неэквивалентных доз в расчете на единицу массы тела животных. Например, у вещества I минимальная токсическая доза составляет 600 мг/кг, в то время как у вещества 4 она достигает

13500 иг/кг, а вещества б не превышает 240 мг/кг. Видно, что величина исследуемых веществ имеет размах 20-50 раз, что, вероятно, имеет немаловажное значение для проявления нмцуно-тропных свойств.

При оценке свойств ППСБ мы обратили внимание на их структурою близость к признанным аллергенам. Так, основным сырьем для начальных стадий производства бифена является нитрохнор-бензол. Динитрохяорбензол широко используется в различных отраслях химической индустрии, являетя одним из самых сильных промышленных аллергенов (Алексеева 0.Г., Дуева Л.А., 1976). Часто сенсибилизация этим веществом происходит даже при однократной аппликации на кожу. Считается установленным факт, что соединения динитрохлорбензола с белком являются полными антигенами, где сам по себе белок - носитель становиться-аллергеном, а дшитрохлорбензоя служит - гаптеном (Адо В.А., Горяч-ккна Л. А., 1971).

Анализ эффектов, вызываемых веществами 1-4 при накожном применении,- позволил нам связать характер имыуномодуляции с проявлением их гаптенных свойств. Мы наблюдали реакцию контактной чувствительности при накожной аппликации ППСБ. Прослежены также проявления общих признаков антигенной стимуляции организма: увеличение лимфоидных органов, лейкоцитоз, ускорение ООЭ, изменение температуры, нарушение фагоцитоза. Эти данные согласуются с литературными, где показано, что организм способен создавать конъюгированные антигены из* токсичных низ-комоле^лярных соединений, особенно выбросов промышленного производства, сельскохозяйственных удобрений и прочих ксено-

биотиков, при условии, если они обладают достаточной реманент-ностьо в организме и стабильной конфигурацией (Александр Д.У., 1974, Месробяну И., 1977). Как показали результаты специальных исследований, ШСБ обладают стабильной конфигурацией и сохраняются в водной среде довольно длительное время без разрушения (Р.З.Цустаев , 1995).

Характер действия бифена и вещества 6 иы связываем с до -зозависимой модуляцией Т-клеточного звена иммунитета. Доказательством могут служить полученные результаты, свидетельствующие о повышении функциональной активности специфических Т-су-прессоров. Известно, что повышение активности Т-супрессоров приводит к ингибированию первичного имцунного ответа. По нашим данным, бифен, в терапевтической дозе у мышей линии СБА достоверно снижал титр гемаггяютинов, хотя число АОК в селезенках по сравнению с контрольными группами изменялось незначительно. Мы наблюдали у крыс,на фоне,введения бифена, небольшое увеличение уровня гемолизинов, тогда как титр гемагглютининов достоверно снижался. Поскольку антитела, продуцируемое в ходе имцунного ответа, характеризуются гетерогенностью, то, по-види-моцу, препарат не способен блокировать продукцию всех типов антител, вырабатываемых АОК. В данном случае, возможно, имеет значение и неоднозначное по степени выраженности действие бифена на имцунокомпетентные органы.

В ходе экспериментов нами обнаружена неоднозначная модуляция бифвном имцунной реактивности у мышей линий СВА и С57В1. По шению Р.В.Цетрова (1981), разная степень выраженности первичного имцунного ответа низкореагируюцей и высокорегирующей

на эритроциты барана'линий ыышзй связана с неодинаковой интенсивностью миграции стволовых клеток в химфоидаые оргены. По данным Р.М.Хаитова (1975), клетки костного мозга быстрее мигрируют у мышей ниакореагирующей на ЭБ линии, следовательно иммунный ответ ингибируется у них в более выраяенной форсе. Поэтому ускорение этого процесса вызываемое при помощи лекарственных средств, способствует имцуносупрессии. Действительно, бпфен в дозе 50 мг/кг подавлял ГЗТ и уменьшал число АОК у ыышей линии C57BI. Значит, бифен может осуществлять фенотипачзскую модаяяцшэ иммунного ответа у низкореагирующих на ЭБ линий мышей.

Исследование функциональной активности эффекторов реакций ГЗТ и РШХ показало, что малые дозы бифена достоверно стимулируют эти реакции. Однако увеличение дозы меняет направление действия - ГЗТ угнетается. В связи- с тем, что фагоцитарная активность макрофагов бифеном в дозах от 50 и 250 мг/кг стимулируется, есть основание предполагать, что кнгибирующее действие бифена ограничивается влиянием на Т - клеточное звено иммунитета.

Таким образом проведенные комплексные исследования свойств шести ППСБ показали, что они обладают неодинаково выраженной'' инцунотропной активностью, несмотря на наличие объединяющих их общих структур«« компонентов - дифениясуяьфидного ядра и амшо- и нитрогрупп в качестве радикалов в различных пояояе-ниях. Нами устсновлено, что активность изучаемых веществ зависит от цеяого ряда факторов, в том числе, от дозы, схемы и сроков затравки яивотных и последующего тестнровшия. Направление ннцунотропного действия веществ 1-5 менялось в завнси-

кости от времени их введения по отношению к антигенной нагрузке. Мы наблюдали, что генерация ДОК '.к ЭБ достоверно увеличивалась при даче ППСБ после контакта животных с ЭБ по сравнению с введением веществ до имцунизации. Возможно, здесь имеет значение ташке сокращение интервала времени между введением веществ в организм и сроком регистрации результатов имцунизации. Не исключается проявление стрессового воздействия самого процесса инъекции в момент, предшествующий пику имцунного ответа. •

Действие стресса на имцунитет широко известно и описано в литературе (Зимин Ю.И., 1979; Зальцман С., 1989). Наиболее вероятной реакций стресса является стимуляция первичного иммунного ответа на поступление различных антигенов. Учитывая, что в более высокой степени подвержены стрессорноцу влиянию мыши гибриды, а менее всего линии СВА, нами исследования были проведены на животных разных генотипов.

Мы наблюдали у мышей под действием ППСБ и бифена определенное несоответствие числа ЛОК в селезенке к антигензависи-мому накоплению ядросодернсащих клеток (ЯСК) в этом органе. У контрольных животных эта связь имела прямой характер: при сравнительно невысоких значениях клеточности селезенки наблюдался слабый имцунный ответ, а при увеличении количества спхеноцитов соответственно повышалось и число АОК. Введение ППСБ (вещества I и 2; в меньшей степени вещество 3) показало, что при достоверном увеличений ЯСК иммунный ответ повышался в гораздо меньшей степени, чем ожидалось.

Далее, с целью выяснения пршим модуляции гуморального иммунного ответа при даче ППСБ, нами было проведено исследо-

вание активности специфических Т-супрессоров. Как показали полученные нами данные, вещества 2 и 3 статистически достоверно кнгибировали активность этих клеток, а вещества 1,4,5 незначительно понижали этот показатель. В то же вреыя обращает на себя внимание тот факт, что вещество 6 вызвало значительное увеличение индекса супрессии. Поскольку вещество 6 по химическому строению отличается от остальных ШСБ наличием бензимидазоль-ного кольца в своей структуре, мы связываем изменение направленности действия этого соединения с приобретением им свойств, присущих классу азолов.

На клеточно-опосредовгнные реакции к тицусзависимому антигену вещества 1.и 4 оказывали стимулирующее действие. Эти же вещества обладали способностью индуцировать реакции типа контактной чувствительности к себе при накожных аппликациях по методу 0.Г.Алексеевой (1978). Наш данные позволяют присоединиться к мнению о том, что оргснизм в основном реагирует только на те структуры, которые полностью не расщепляются клеточными ферментами. Вещества, распадающиеся в клетках под действием энзимов, уже не распознаются в качестве чужеродных и не" сти-цулиргуют иммунные реакции (Ковале в, И. Е., Полевая 0.0., 1985). В этом контексте следует рассматривать довольно выраженную шлфгнотропную активность ППСБ, связанную , видимо, со стабильность» их молекулярной конфигурации.

ВЫВОДЫ:

I.Промежуточные продукты синтеза бифена 1-6, введенные внутри-, яеяудочно лабораторным животным (мышам и крысам) в дозах ДЛ16

- 21 -

и 0,2 Дп 16, обладают имцунотропным действием, модифицируя качественный и количественный состав иммунокомпетентных клеток в лимфойдных органах. В дозе 0,02 ДЯ6 ШСБ не влияют на иммуногенез.

2.ППСБ в дозе 0,2 стимулируют функциональную активность клеток Т- и В- звеньев иммунитета, что проявляется в виде активации ГЗТ (вещества 1,4,5), увеличения числа ЮК (вещества 2,3,4) реакции контактной чувствительности (вещества 1-4). В то же время ППСБ № 6 в"дозе 0,2 ДП16 пода«ляет гуморальный иммунный ответ, повышает активность специфических Т-супрессоров. При увеличении вводимой дозы до ДП.6 подавляется фагоцитарная активность перитонеаяьных макрофагов (вещества 1,2).

3.Вифен в дозе 250 мг/кг обладает иммуносупрессивным действием, обусловленным активацией Т-супрессоров. Введение бифена в дозах 5-250 мг/кг не подавляет фагоцитарную активность перито-неальных макрофагов.

4.Установлена зависимость между химической структурой и имцу-нотропным действием производных дифениясульфида. Введение азольной группы в химическую структуру карбоцикяических производных днфзнилсуяьфида приводит к супрессии первичного именного ответа на тимусзависимой антиген-ЭБ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ :

Выявлена сенсибилизирующая активность ППСБ 1-4, что позволяет отнести эти соединения к аллергоопасным веществам. На основании полученных денных нами рекомендовено использование индивидуальных защитных средств (спецодежда, резиновые пер-

чатки, респираторы, строгое соблюдение правил яичной гигиены) для предупреждения поступления их в организм.

Для шднкации шгцуиотропного эффекта ППСБ наиболее рациональным временем суток является 10 часов, для бифена 16 часов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИЮВЯИЫХ ВО ТЕИЕ ДИССЕРТАЦИИ:

'I.Экспериментальная оценка кицуноцодуяиртющих свойств промежуточных продуктов синтеза бифена // I национальный конгресс по профилактической медицине: тез.докя.- Петербург, 1994.- С.9. 2.Вляяние промежуточных продуктов сштеза бифена на суточные колебания числа карвоцитов в ликфоидных оргсяах //. П национальный конгресс по профилактической медицине: тез докл.- Петербург, 1995.-С.П.(Т.А.Зулькармаев, Л.А<(1&гатряева.) З.Определение токсического влияния на таенную систему соединений, содержащих ДЕфениясульфад // 60-Й научная конф. студ. и молодых ученых ЕМУ: тез.докя.- Уфа.-1995.-С.57.