Автореферат и диссертация по медицине (14.03.11) на тему:Иммуномодуляторы в медицинском обеспечении борцов высокой квалификации

На правах рукописи

АЛПАТОВ Сергей Петрович

ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ В МЕДИЦИНСКОМ ОБЕСПЕЧЕНИИ БОРЦОВ ВЫСОКОЙ КВАЛИФИКАЦИИ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

14.03.11 - восстановительная медицина, спортивная медицина, лечебная физкультура, курортология и физиотерапия

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

005539961

21 НОЯ 2013

Москва - 2013

005539961

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

доктор медицинских наук, Полнев Борис Александрович

профессор

доктор медицинских наук, Козлов Иван Генрихович

профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, Журавлева Антонина Ивановна

профессор кафедры физической реабилитации,

спортивной медицины и здорового образа

жизни ГБОУ ДПО «Российская медицинская

академия последипломного образования»

Минздрава России

доктор медицинских наук, профессор, Тутельян Алексей Викторович

зав. лабораторией инфекций, связанных с

оказанием медицинской помощи ФБУН

Центральный НИИ эпидемиологии

Роспотребнадзора

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова» Минздрава России

Защита состоится «.........».................................2013 года в_часов на заседании

Диссертационного Совета Д 208.072.07 при ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России по адресу: 117007, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России по адресу: 117007, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.

Автореферат разослан «..........»............................2013 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Полунина В.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность. Известно, что умеренные физические нагрузки положительно влияют на иммунную систему (Першин Б.Б., 2002; Суздальницкий P.C., 2009). Однако в современном спорте высших достижений физические и психические нагрузки вызывают состояние перенапряжения и перетренированности (Афанасьева И.А., 2006; Гаврилова, Е.А., 2011). При превышении уровня резервных возможностей организма происходит нарушение адаптационных механизмов. Наиболее раннее отражение подобной дисфункции - нарушение иммунитета (Мастро, A.M., 2008; Paulsen, G., 2012). По мнению ряда исследователей (Nieman D.C., 1996; Mackinnon L.T., 1998; Pedersen В.К., 1999; Суздальницкого P.C., Левандо В.А., 2003), оправдано выделение новой нозологической единицы, самостоятельного вида иммунодефицита - спортивного стрессорного иммунодефицита. Это состояние относят к группе вторичных иммунодефицитов (ВИД). ВИД, развивающийся под влиянием неадекватных физических нагрузок характеризуется угнетением Т-клеточной системы иммунитета, нарушением межклеточной кооперации и снижением функциональной активности Т-лимфоцитов; активацией В-клеточной системы с появлением аутоагрессивных клонов B-клеток, что ведет к аутоиммунизации (Стернин Ю.И., 2008; Gunzer W., 2012). Негативные изменения показателей иммунной системы нарастают по мере увеличения спортивного стажа и на пике «спортивной формы» (Гаврилова Е.А., 2009; Northoff, Н., 2009; Nieman D.C., 2012). В соревновательный период, во время нахождения на пике формы, респираторные заболевания регистрируются у спортсменов в 40% случаев (Суздальницкий, P.C., 2009). Такие ВИД носят временный характер и обратимы при условии устранения причины отрицательного стрессорного влияния на иммунную систему (ИС). Проблема ВИД, возникающих на фоне длительных, высокоинтенсивных физических нагрузок у спортсменов является чрезвычайно актуальной (Таймазов В.А., 2008; Walsh N.P., 2011).

Таким образом, исследования, касающиеся профилактики и коррекции ВИД у спортсменов, требуют дальнейшего развития и определяют актуальность настоящей работы. Цель исследования

Динамическое изучение состояния иммунной системы борцов высокой квалификации и подбор рациональной иммунотерапии для коррекции выявленных нарушений.

Задачи исследования:

1. Изучить показатели иммунной системы борцов высокой квалификации на фоне высоких физических нагрузок

2. Изучить показатели иммунной системы борцов высокой квалификации в зависимости от уровня спортивных достижений

3. Разработать программу профилактики и коррекции выявленных нарушений показателей иммунной системы препаратами с иммунотропной активностью для борцов высокой квалификации

4. Оценить влияние неспецифической профилактической иммунотерапии на показатели иммунной системы борцов высокой квалификации

5. Оценить влияние направленной иммунотерапии на показатели иммунной системы борцов высокой квалификации.

Научная новизна исследования. В результате впервые проведенного проспективного продольного исследования лабораторных данных иммунной системы, установлены особенности системы иммунитета борцов высокой квалификации по группам достижения высших спортивных результатов.

Выявлена взаимосвязь иммунологических показателей и уровня спортивных достижений. Иммунная система борцов высших достижений, победителей и призеров чемпионатов Европы, Мира и Олимпийских Игр, характеризуется более высокой концентрацией иммунокомпетентных клеток, большей сбалансированностью клеточного иммунитета, более выраженной активацией гуморального иммунитета и отсутствием аллергического

состояния в сравнении со спортсменами без указанных достижений.

4

Предложены программы профилактической и направленной иммунотерапии для борцов высокой квалификации.

Доказана иммуностимулирующая и иммуномодулирующая эффективность предложенных программ профилактической и направленной иммунотерапии, приводящих к нормализации показателей иммунной системы.

Установлена более высокая эффективность профилактической иммунотерапии у борцов высших достижений.

Практическая значимость работы. Исследование показателей иммунной системы является одним из дополнительных критериев оценки перспективы достижения высших спортивных результатов у борцов высокой квалификации.

Предложенная программа профилактической иммунотерапии позволяет эффективно корригировать нарушения показателей иммунной системы у борцов высокой квалификации.

Курс предложенной направленной иммунотерапии позволяет нормализовать показатели иммунной системы при недостаточной эффективности профилактической иммунокоррекции. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Высокие физические нагрузки у борцов высокой квалификации вызывают нарушение баланса иммунокомпетентных клеток и концентрации иммуноглобулинов.

2. Анализ показателей иммунной системы позволил разделить обследуемых спортсменов по группам достижения высших спортивных результатов.

3. Предложенные программы профилактической и направленной иммунокоррекции обладают высокой эффективностью в нормализации показателей системы иммунитета.

4. Эффективность профилактической иммунотерапии взаимосвязана с уровнем спортивных достижений.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования используются в процессе медицинского обеспечения спортсменов сборных команд России по дзюдо и профессиональных клубов Континентальной хоккейной лиги.

Материалы диссертации используются в лекционном курсе и практических занятиях, проводимых на кафедре реабилитации и спортивной медицины ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России.

Апробация диссертации. Результаты исследования были доложены: 10-й международный конгресс «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», Казань, 20-23.05.2009 г.; 9-я научно-практическая конференция «Самбо для всех», РГУФКСиТ, Москва, 05.06.2009 г.; конференция «Медицинская реабилитация в спорте высших достижений» ФГУ «Центр реабилитации» Управления делами Президента РФ 28-29.10.2009 г.

Материалы диссертации были доложены и рекомендованы к защите на совместном заседании кафедр реабилитации и спортивной медицины и фармакологии ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова 25.06.2013 г.

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них 3 статьи в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста, иллюстрирована 1 схемой, 25 рисунками, содержит 36 таблиц. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных данных, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 162 источника, из которых 81 отечественный и 81 зарубежный.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы Характеристика исследуемой выборки и схема исследования. В

исследование было включено 79 практически здоровых лиц мужского пола, профессионально занимающихся спортом, регулярно подвергающихся высокоинтенсивным тренировочно-соревновательным нагрузкам, прошедших углубленное медицинское обследование в соответствии с приказами МЗ № 337 от 2001г. и МЗСР № 613 от 2010 года. Критериями исключения являлись отсутствие на момент исследования данных УМО и/или наличие острой бактериально-вирусной инфекции. Количество обследованных спортсменов составило 79 человек, средний возраст 25,2 лет (95%ДИ 21,5-28,9 лет), средний вес 76,9 кг (95%ДИ 68,4-83,4 кг). Уровень спортивной квалификации

-мс, мсмк, змс.

Исследование включало в себя 3 этапа. На первом этапе исследования оценивались исходные показателей клеточного и гуморального иммунитета. На втором этапе спортсменам, у которых показатели ИС выходили за пределы референтного интервала (РИ) и/или межквартильного размаха РИ, были проведены курсы ПИТ. Для этого использовались препараты, обладающие (по заявленным свойствам) неспецифическим стимулирующим воздействием на ИС. ПИТ проводилась 2 раза в год по 3 месяца в осенний и весенний период УТС препаратами вобэнзим, ново-пассит, убиголд (210, Ь-карнитин, алфавит биоритм. Показатели ИС оценивались через 21 сутки после окончания терапии. На третьем этапе для спортсменов, у которых после ПИТ отсутствовала положительная динамика показателей ИС, была подобрана и проведена направленная терапия иммуномодуляторами. Направленная иммунокоррекция ронколейкином и ликопидом по стандартным схемам, рекомендуемым в аннотации к препаратам, была проведена 1 раз в течение 10 дней в весенний период учебно-тренировочных сборов с оценкой показателей ИС через 21 день 14 спортсменам (17,7% от общего количества включенных в исследование спортсменов). Средний

7

возраст составил 26,1 лет (95%ДИ 19,8-32,4 лет), средний вес 78,3 кг (95%ДИ 66,2-90,4 кг), что по доверительным интервалам не отличалось от демографических характеристик общей выборки.

Лабораторные исследования. Исследование клеточного иммунитета проводилось с определением фагоцитарной активности нейтрофилов микроскопическим методом оценки поглощения стафилококков, а также абсолютного и относительного содержания лимфоцитов несущих CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ и CD 19+ маркеры методом лазерной проточной цитометрии на анализаторах FACScan (Becton Dickinson) и CyAn (Dako). Использовались реагенты Simultest (Becton Dickinson) и IOTest (Beckman Coulter) с двухцветной меткой (FITC/PE), трехпараметрические реагенты MultiMix (Dako), меченые FITS, РЕ, РЕ-Су5 и четырёхпараметрические реагенты линии Cyto-Stat (Beckman Coulter), меченые FITC, РЕ, РЕ-Су5, и РЕ-Texas Red.

Определение иммуноглобулинов сыворотки крови проводили с использованием моноспецифических антител против IgA, IgM, IgG, IgE, методом простой радиальной иммунодиффузии по Манчини.

Статистический анализ. Статистический план для настоящего

исследования был разработан в соответствии с принципами надлежащей

статистической практики при проведении клинических исследований

[Банержи А., 2007]. Статистическая обработка данных исследования

проведена с использованием программного обеспечения SPSS 18.0, Microsoft

Excel 2010 и Microsoft Access 2010. Описательная статистика непрерывных

количественных данных представлена в виде среднего значения (М),

стандартного отклонения (±SD) и/или 95% доверительного интервала (через

дефис), или в виде медианы (Md) и значений 25% нижнего и 75% верхнего

квартилей (через точку с запятой) при ненормальном распределении.

Аналитическая статистика выполнялась с использованием дисперсионного

анализа ANOVA, t-теста Стьюдента для количественных данных с

нормальным распределением или критерия суммы рангов/знаков Уилкоксона,

8

Манна-Уитни для количественных данных с распределением отличным от нормального. Качественные и порядковые переменные сравнивались с помощью теста % (хи-квадрат) или критерия суммы рангов/знаков Уилкоксона, Манна-Уитни. Значение вероятности (р) менее 0,05 (двухсторонняя проверка значимости) демонстрировало статистическую достоверность. Анализ рисков проводился методом «латинского квадрата» с расчётом отношения шансов и дополнительных рисков. Точность количественных тестовых переменных оценивалась рабочей характеристической кривой. Выбор точек деления подтверждался оценкой достоверности расхождения концентрационных кривых Каплана-Мейера по преваленсу стратификационного признака. Ассоциации между переменными выявлялись с помощью коэффициента корреляции Пирсона и Спирмена, а также совокупных коэффициентов корреляции и многофакторного анализа корреляционной матрицы. Значимость переменных в моделях их влияния на бинарные страты исследовалась методом пошагового логистического регрессионного анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Оценка показателей иммунной системы (первый этап исследования). Показатели клеточного и гуморального иммунитета оценивались по распределению значений относительно популяционных границ РИ согласно требованиям ГОСТ Р 53022.3-2008. Учитывались меры центральной тенденции и доверительные интервалы (ДИ) значений в выборке в соответствии с типом распределения данных по результатам лабораторных исследований ИС, их процентильное расположение относительно ПИ и сдвиги от центрального значения (ЦЗ) РИ. Сдвиг значений показателей ИС за пределы РИ свидетельствовал о наличии ВИДС или активации ИС, за пределы квартального размаха ПИ - о тенденции к развитию ВИДС или тенденции к активации ИС.

Анализ распределения количественных показателей ИС по критерию Колмогорова-Смирнова показал преобладание нормального типа

9

распределения переменных. Ненормальный тип распределения наблюдался по результатам, процентилям и сдвигам от центрального значения РИ палочкоядерных нейтрофилов, базофилов, концентрации ^М и 1§Е.

Количественная оценка содержания лейкоцитов и лейкоцитарной формулы представлена в таблице 1. Количество лейкоцитов и ДИ совпадал с ЦЗ и границами РИ показателя, однако отмечался дисбаланс процентного соотношения сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов в сторону увеличения относительного содержания лимфоцитов и снижения относительного содержания нейтрофилов.

Таблица 1. Количественная оценка концентрации лейкоцитов и лейкоцитарной формулы у борцов высокой квалификации

Значение Процентиль от ПИ Сдвиг от ЦЗ РИ, %

Лейкоциты, *10(9)/л 6,55 (4,6-8,3) 50,93(15,8-88,4) 0,79 (-29,23-48,46)

Нейтрофилы палочкоядерные, % 3 (0 2-4) 41 (С? 23-59) -14,29 (С? -42,8614,29)

Нейтрофилы сегментоядерные, % 51,3(38-65) 32,9 (-7-74) -10 (-33,33-14,04)

Нейтрофилы сегментоядерные, *10(9)/л 3,4 (1,96-5,58) 27,2 (5,9-59,32) -31,23 (-60,3812,76)

Эозинофилы, % 3,04 (0-8) 59,66 (5-149) 21,47 (-100-220)

Базофилы, % 0,2 (0 0-0,4) 23 (0 5-41) -60 (0 -100/-20)

Моноциты, % 6,27 (3-10,9) 41,75 (5-93,88) -10,47 (-57,1455,71)

Лимфоциты, % 36,63 (22,9-50,8) 93,16(24,5-164) 30,83 (-18,2181,43)

Лимфоциты, *10(9)/л 2,35(1,33-3,71) 62,66(11,5-130,42) 12,06 (-36,6776,59)

Частотный баланс ИКК, содержание которых находилось за границами РИ, характерен для вторичной иммунологической недостаточности 1 типа и представлен дисбалансом клеточного иммунитета - относительным уменьшением СБЗ+ клеток, относительным и абсолютным уменьшением СЮ4+ клеток, увеличением относительного и абсолютного содержания СБ16+ клеток, большим разбросом индекса регуляции, снижением активности фагоцитоза и активацией гуморального иммунитета - увеличением абсолютного содержания СО!9+ клеток (рис. 1).

С016+, СР8+,

*10(9}/л *10(9)/л

С01&)-, % ..........ниже 2,5 лроцентиля ПИ

— — - выше 97,5 лроцентиля ПИ

Рисунок 1. Частотный баланс ИКК, содержание которых находится за границами РИ, у борцов высокой квалификации.

По группам борцов СВД и ВСС выявлены статистически значимые

отличия по абсолютному содержанию СП4+ клеток и С019+ клеток (табл. 2).

Таблица 2. Содержание ИКК по группам борцов с наличием и отсутствием высших достижений _

СР19+, *10(9)/л

С04+, *10(9)/л

СО 19+, %

С08+, %

Фагоцитоз,

%

СРЗ+, *10(9}/л

Индекс регуляции

С04+, %

С03+, %

25

Борцы высокой квалификации Р51 разности средних

СВД, п=31 (39,2%) ВСС, п=48 (60,8%)

СЭЗ+, % 68,74 (51-79) 68,67 (58-78) 0,963

СОЗ+, 109/л 1,73 (0,83-2,51) 1,55 (0,92-2,37) 0,088

С04+, % 39,06 (26-50) 38,44(29-51) 0,715

СЭ4+, 109/л 0,98 (0,44-1,42) 0,85 (0,53-1,26) 0,048

С08+, % 26 (19-36) 25,81 (17-38) 0,894

С08+, 109/л 0,65 (0,34-1,05) 0,59(0,28-1,04) 0,266

СО 16+,% 14,26 (6-25) 14,77 (7-25) 0,702

СЭ16+, 109/л 0,36 (0,15-0,69) 0,34 (0,13-0,69) 0,654

СЭ19+, % 11,74 (7-21) 10,94(6-17) 0,366

СО 19+, 109/л 0,3 (0,14-0,62) 0,24 (0,13-0,43) 0,026

Индекс регуляции 1,55 (0,86-2,19) 1,66 (0,81-2,75) 0,510

Фагоцитоз, % 72,11 (58-89) 72,91 (46-93) 0,800

Концентрация СЮ4' клеток была выше в группе СВД в 1,15 раза (р=0,048), в этой же группе была выше концентрация СБ19+ клеток в 1,25 раза (р=0,026). Полученные данные характеризуют большую сбалансированность клеточного иммунитета за счёт повышения содержания СБ4+и СБ19+клеток.

Факторный анализ корреляционной матрицы взаимосвязи относительного (первый компонент) и абсолютного (второй компонент) содержания ИКК показал, что существует прямая сильная зависимость между уровнем достижений спортсмена и относительным и абсолютным содержанием СБ19+ клеток, а также абсолютным содержанием всех лимфоцитов несущих СБ-маркеры (3,4,8,16), рисунок 2.

Уровень_достижений, 1-нет/2-СВД СОЗ+, 10(9)/л С08+, 10(9 )/л СС4+, 10(9)/л С019+, 10(9)/л С016+, 10(9)/л Индекс регуляции Фагоцитоз, %

>,506

0,529

эй Компонент 1 О Компонент 2

Рисунок 2. Результаты факторного анализа взаимосвязи уровня спортивных достижений и содержания иммунокомпетентных клеток у борцов высокой квалификации.

Выводы факторного анализов логично взаимосвязаны между собой и свидетельствуют о нормализации баланса ИКК и увеличении их концентрации у борцов высших достижений.

Количественный анализ содержания иммуноглобулинов показал, что меры центральной тенденции изучаемых аналитов не выходят за пределы РИ

(табл. 3), но наблюдается сдвиг от ЦЗ РИ в сторону низких значений по концентрации ^М на 28,2% и значительный по концентрации ^Е на 78,5% по нижней границе интервала сдвига. Незначительный сдвиг от ЦЗ РИ в сторону высоких значений отмечался по концентрации на 56,5% и значительный сдвиг - по концентрации ^А на 149% по верхней границе интервала сдвига.

Таблица 3. Концентрация иммуноглобулинов у борцов высокой квалификации___

Иммуноглобулин Значение Сдвиг от ЦЗ РИ, %

^М, мг/мл 1,31 (0 0,97-1,53) -2,96 (0-28,15-13,33)

^А, мг/мл 2,3 (0,92-4,11) 39,48 (-44,24-149,09)

мг/мл 12,3 (7,8-18) 6,93 (-32,17-56,52)

^Е, мЕ/мл 37,5 (016,1-84,4) -50(0 -78,53-12,53)

Доверительный интервал значений концентрации иммуноглобулинов в выборке находился в пределах референтных значений для ^М и ^Е, ниже РИ разброс концентрационных значений не был сдвинут для всех иммуноглобулинов, выше РИ - для ^О в 1,13 раза, для ^А в 1,64 раза.

Факторный мультипараметрический анализ взаимосвязи высших достижений у борцов высокой квалификации позволил выявить по матрице неповёрнутых компонентов прямую средней силы взаимосвязь наличия высших достижений с концентрацией иммуноглобулинов ^А, и сильную обратную - с концентрацией 1§Е. Матрица повёрнутых компонентов, усиливающая значимость факторной модели, показала прямую сильную взаимосвязь отсутствия высших достижений с концентрацией ^Е и средней силы - с концентрацией ^О. Проведённый анализ свидетельствует о важной отрицательной роли аллергического состояния борцов в достижении высоких спортивных результатов.

Уровень достижений, 1-нет/2-СВД

глг/глл

1§А, мг/глл

мг/мл

1§Е, мЕ/мл

•0,616 ......................; ' ЖМшУ'^"'""'^' 0,41. """0,653

1 0. 185 ■ 1 02

-0,627 ....... —И®"««*"" °'4 ...... 15 —0,753

Рисунок 3. Результаты факторного анализа взаимосвязи уровня спортивных достижений и концентрации иммуноглобулинов у борцов высокой квалификации (1-матрица неповёрнутых компонентов, 2-матрица повёрнутых компонентов).

Оценка показателей ИС у после проведения ПИТ (второй этпа исследования). Сравнение с исходными значениями концентрации лейкоцитов и лейкоцитарной формулы после проведения ПИТ у БВК не выявило по ДИ статистически значимых различий (табл. 4). Анализ разности средних выявил статистическую значимость изменений всех вышеуказанных показателей. Таким образом, количественный анализ переменных показал, что ПИТ у БВК привела к относительному моноцитозу и ещё большему сдвигу лейкоцитарной формулы по относительному содержанию основных типов лейкоцитов - сегментоядерных нейтрофилов в сторону уменьшения и лимфоцитов в сторону увеличения.

Таблица 4. Количественная оценка концентрации лейкоцитов и лейкоцитарной формулы после проведения ПИТ у борцов высокой квалификации____

Значение Процентиль от ПИ Сдвиг от ЦЗ РИ, %

Лейкоциты, *10(9)/л 6,33 (4,3-9,93) 46,93 (10,4-111,7) -2,62 (-33,85-52,77)

Нейтрофилы сегментоядерные, % 48,04 (35,7-59,8) 23,13 (-13,9-58,4) -15,71 (-37,37-4,91)

Нейтрофилы сегментоядерные, *10(9)/л 3,08(1,9-5,26) 24,53(6,51-57,84) -35,15 (-60,0210,82)

Эозинофилы, % 2,23 (0-6,3) 45,14(5-118,4) -10,81 (-100-152)

Базофилы, % 0,4 (<3 0,2-0,5) 41 ((3 23-50) -20 (<2 -60-0)

Моноциты, % 9,82 (6,4-13,1) 81,68(43,25-118,63) 40,22 (-8,57-87,14)

Лимфоциты, % 39,47 (25,7-50,9) 107,34 (38,5-164,5) 40,96 (-8,21-81,79)

Лимфоциты, *10(9)/л 2,46(1,56-3,41) 68,14(23-115,43) 17,28 (-25,71-62,31)

Между группами ВСС и СВД не выявлено статистически значимых различий по концентрации лейкоцитов и лейкоцитарной формулы после проведения ПИТ, но оценка динамики по группам показала иные результаты

(рис. 4).

Рисунок 4. Процентиль среднего содержания различных типов лейкоцитов формулы крови после проведения ПИТ у борцов высокой квалификации по группам СВД и ВСС (*статистическая двухсторонняя значимость отличий от значений до терапии р<0,05).

Анализ динамики указанных показателей в каждой группе, до и после проведения ПИТ, позволил выявить статистически значимое отличие по относительному содержанию сегментоядерных нейтрофилов только в группе ВСС и отсутствие таковых по относительному содержанию эозинофилов и лимфоцитов в обеих группах.

Таким образом, ПИТ вызывала сдвиг лейкоцитарной формулы по относительному и абсолютному содержанию всех типов лейкоцитов, из которых наиболее выраженным являлось увеличение относительного содержания моноцитов и снижение относительного содержания эозинофилов. Менее выраженным являлось повышение относительного содержания базофилов и относительного и абсолютного содержания лимфоцитов. Снижение относительного содержания нейтрофилов было характерно для спортсменов группы ВСС.

Сравнение с исходными значениями содержания ИКК после проведения ПИТ у БВК не выявило по ДИ статистически значимых различий (табл. 5).

Таблица 5. Относительное и абсолютное содержание ИКК после проведения ПИТ у борцов высокой квалификации __

Значение Процентиль от ПИ Сдвиг от ЦЗ РИ, %

CD3+, % CD3+, 10% 68,6 (51-79) 1,68(1,08-2,42) 43,69 (-35,5-90,5) 67,95 (45,37-95,67) -2 (-27,14-12,86) 39,88 (-10,29-101,48)

CD4+, % CD4+, 10% 39,45 (29-51) 0,96 (0,6-1,47) 39,17 (-16,18-100,29) 34,57 (5-75,98) -4,93 (-30,12-22,89) -16,4 (-47,83-27,61)

CD8+, % CD8+, 10% 24,64 (17-35) 0,61 (0,29-0,93) 38,79 (8,91-79,35) 44,29 (3,83-86,23) -10,41 (-38,18-27,27) -6,83 (-55,25-43,35)

CD16+, % CD16+, 10% 16,03 (5-31) 0,4(0,12-0,89) 73,96(15,59-153,24) 76,16(22,23-169,68) 39,36 (-56,52-169,57) 51,56 (-54,72-235,85)

CD19+,% CD19+, 10% 12,44 (6-20) 0,31 (0,13-0,55) 44,4 (10,29-84,41) 72,36 (28,3-132,5) -7,84 (-55,56-48,15) 40,65 (-39,45-150)

Индекс регуляции 1,67 (0,9-2,48) 57,52 (-28,75-148,8) 4,18 (-43,75-54,89)

Фагоцитоз, % 79,95 (60-93) 61,14(16,25-90,5) 6,6 (-20-24)

Однако, прослеживалась тенденция к повышению абсолютного содержания CD3+ клеток на 13,4%, относительного и абсолютного содержания CD4+ клеток на 4,1% и 4,67%, CD16+ клеток на 7,66% и 10,2%,

СБ19+ клеток на 6,3% и 10,8%, снижению относительного содержания СБ8+ клеток на 4,9%, повышению индекса регуляции на 5,82 и повышению активности фагоцитоза на 16,8%. Анализ разности средних показал статистическую значимость повышения абсолютного содержания С 03 клеток (р<0,001), абсолютного содержания СБ19+ клеток (р=0,036) и активности фагоцитоза (р=0,002), (рис. 5). Разность относительного содержания СЭ19+ клеток была очень близкой к статистической значимости, р=0,060.

Рисунок 5. Разность средних процентилей содержания ИКК до и после проведения ПИТ у борцов высокой квалификации (* статистическая значимость различий от исходных значений).

Сравнение показателей содержания ИКК по группам выявило, в группе СВД, статистически значимое увеличение относительного содержания СБЗ+ клеток с разностью средних 5,42% (95%ДИ 1,28-9,56, р=0,011), СЭ8+ клеток с разностью средних 3,66% (95%ДИ 1,01-6,3, р=0,007) и снижение относительного и абсолютного содержания СЭ16+ клеток с разностью средних, соответственно, -6,46% (95%ДИ -10,4 / -2,54, р=0,002) и -0,15*109/л (95%ДИ -0,26 / -0,04, р=0,010) (табл. 6).

Таблица 6. Содержание ИКК после проведения ПИТ по группам СВД и ВСС

Борцы высокой квалификации р" разности средних

СВД, п=31 (39,2%) ВСС, п=48 (60,8%)

СОЗ+, % 69,86 (54-81) 64,44 (51-77) 0,011

СОЗ+, 109/л 1,71 (1,16-2,42) 1,57 (0,99-2,42) 0,182

С04+, % 39,97 (29-51) 37,78 (28-65) 0,287

С04+, 109/л 0,98 (0,59-1,47) 0,9 (0,63-1,49) 0,306

СП8+, % 25,49 (19-35) 21,83 (11-32) 0,007

СЭ8+, 109/л 0,63 (0,37-0,94) 0,54 (0,25-0,93) 0,066

СО 16+. % 14,51 (5-30) 21 (9-37) 0,002

СБ 16+, 109/л 0,37 (0,1-0,73) 0,52 (0,16-0,89) 0,010

СО 19+,% 12,81(8-20) 11,22(4-24) 0,141

СБ 19+, 109/л 0,32 (0,13-0,59) 0,27 (0,08-0,51) 0,132

Индекс регуляции 1,59(0,86-2,23) 1,91 (1-5,9) 0,073

Фагоцитоз, % 80,57(61-92) 77,93 (53-93) 0,396

Учитывая, что до проведения ПИТ статистически значимая разница между стратифицированными группами наблюдалась по абсолютному содержанию С041 и С019+ клеток, выявленные изменения показателей ИС свидетельствуют о различной реакции спортсменов СВД и ВСС на проведение ПИТ.

Концентрация иммуноглобулинов, после проведения ПИТ, не значимо снижалась по всем классам иммуноглобулинов (табл. 7).

Таблица 7. Концентрация иммуноглобулинов после проведения ПИТ у борцов высокой квалификации___

Центральная тенденция Разность средних р от исходного

мг/мл 1,34 (0,57-2,51) -0,11 (-0,32-0,10) 0,289

процентиль 49,55 (13,05-104,95) -5,31 (-15,18-4,56) 0,289

сдвиг от ЦЗ РИ, % -0,7 (-57,78-85,93) -8,31 (-23,74-7,12) 0,289

мг/мл 2,3 (0,92-4,09) 0,00 (-0,29-0,28) 0,990

процентиль 84,44(11,35-179,18) -0,09 (-15,18-14,99) 0,990

сдвиг от ЦЗ РИ, % 39,43 (-44,24-147,88) -0,11 (-17,37-17,16) 0,990

мг/мл 12,1 (7,8-16,9) -0,41 (-1,18-0,37) 0,301

процентиль 55,95 (13-104) -4,08 (-11,84-3,69) 0,301

сдвиг от ЦЗ РИ, % 5,18 (-32,17-46,96) -3,55 (-10,30-3,21) 0,301

МЕ/мл 36,2 (О 17,4-72,05) -20,71 (-47,46-6,05) 0,128

процентиль 26,72 (<3 15,44-48,23) -12,43 (-28,48-3,63) 0,128

сдвиг от ЦЗ РИ, % -51,73 ((2 -76,8-3,94) -27,61 ((2 -63,29-8,06) 0,128

Однако, факторный анализ взаимосвязи динамики концентрации иммуноглобулинов и динамики содержания СБ19+ клеток, выявленной в качестве наиболее значимого показателя при проведении ПИТ, показал в первом, наиболее значимом, компоненте с суммой квадратов нагрузок извлечения равной 2,0, обратную сильную зависимость содержания СЭ19+ клеток и концентрации 1§А (рис. 6).

п Компонент 1 Компонент2

Динамика С019, *10(9)/л Динамика СР19, % Динамика мг/мя Динамика мг/мя Динамика ^Е, МЕ/мя Динамика tgM, мг/мя

Рисунок 6. Результаты факторного анализа взаимосвязи уровня динамики концентрации иммуноглобулинов с динамикой содержания СБ19+ клеток при проведении ПИТ у борцов высокой квалификации.

Сравнение концентрации иммуноглобулинов, по группам наличия высших спортивных достижений, выявило статистически значимое снижение ^М в группе ВСС при отсутствии разницы между группами (табл. 8).

Таблица 8. Концентрация иммуноглобулинов после проведения ПИТ по

гт/ттгталл напнцня погтгтну ппгтнмгриий V (^г>пиг»и пигпупй к-пяггмгЪик-япмы *

Борцы высокой квалификации

СВД, п=31 (39,2%) ВСС, п=48 (60,8%) Р

мг/мл динамика от исх 1,38 (0,66-2,51) -0,07 (-0,68-0,46)0,548 0,97 (0,36-1,5) -0,11 (-0,43-0,08)°'°37 0,014 0,757

1§А, мг/мл динамика от исх 2,37(1,04-4,09) -0,2 (-3-2,59)0-84' 2,05 (0,5-3,52) -0,76 (-3,72-3,.5)0'642 0,188 0,420

мг/мл динамика от исх 12,09 (8,55-15,22) 0,01 (-0,29-0,35)0,571 11,25 (7,27-15,1) -0,05 (-0,8-0,59)0,216 0,156 0,611

1§Е, МЕ/мл динамика от исх 36,5 (д 17,4-71,2) -0,5 (д -9,7-0)°'386 24,6 (д 13,6-42,4) 0 (д -42-0)0'160 0,669 0,233

* надстрочным индексом указана статистическая значимость динамики изменения от исходных значений

Таким образом, ПИТ у БВК обладает стимулирующим и иммуномодулирующим эффектом. Реакция на ПИТ различается по группам достижения высших спортивных результатов.

Оценка показателей ИС после проведения НИТ (третий этап исследования). Количественная оценка концентрации лейкоцитов и лейкоцитарной формулы после проведения НИТ у БВК, представленная в таблице 9, не выявила по 95%ДИ статистически значимых отличий от значений после ПИТ. Наблюдалась тенденция к повышению концентрации лейкоцитов, относительного и абсолютного содержания сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов, и статистически значимое снижение (р=0,063) относительного содержания моноцитов.

Таблица 9. Количественная оценка концентрации лейкоцитов и лейкоцитарной формулы после проведения НИТ у борцов высокой квалификации____|__

Показатель Значение Процентиль от ПИ Сдвиг от ЦЗРИ,%

Лейкоциты, *10(9)/л 6,54 (3,5-9,2) 50,77 (-4-98,6) 0,66 (-46,15-41,54)

Нейтрофилы сегментоядерные, % 49,5 (40-58) 27,5 (-1-53) -13,16 (-29,82-1,75)

Нейтрофилы сегментоядерные, *10(9)/л 3,26(1,89-5,06) 27,31 (6,37-54,73) -31,31 (-60,21-6,53)

Моноциты, % 8,36 (6-11)ии" 65,27 (38,75-95) 19,39 (-14,29-57,14)

Лимфоциты, % 42,14(34-53) 120,71 (80-175) 50,51 (21,43-89,29)

Лимфоциты, *10(9)/л 2,72 (1,33-3,6) 81,07(11,5-125) 29,59 (-36,67-71,43)

* надстрочным индексом указана статистическая значимость динамики изменения от значений после ПИТ

В результате проведения НИТ у всех спортсменов, имевших сдвиги по относительному содержанию моноцитов, значения показателя оказались в пределах РИ (100% нормализация, 95%ДИ 89,3-100%, р<0,001). Статистически значимо нормализовались также показатели по относительному содержанию сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов.

Количественная оценка содержания лимфоцитов несущих СБ-маркеры показала выраженную тенденцию к нормализации всех показателей при проведении НИТ (табл. 10).

Таблица 10. Относительное и абсолютное содержание ИКК по после проведения НИТ у борцов высокой квалификации__

Значение Процентиль от ПИ Сдвиг от ЦЗ РИ, %

CD3+, % CD3+, 107л 68,43 (59-79) 1,87 (0,79-2,41) 42,93 (0,5-90,5) 75,18(34,63-95,38) -2,24 (-15,71-12,86) 55,95 (-34,17-100,83)

CD4+, % CD4+, 107л 40,64 (32-56) 1,1 (0,53-1,71) 45,46 (-0,29-126,76) 46,2 (-0,73-95,82) -2,06 (-22,89-34,94) -4,04 (-53,91-48,7)

CD8+, % CD8+, 107л 23,86(14-31) 0,66 (0,19-0,97) 35,75 (-2,83-63,7) 51,47 (-9,14-91,14) -13,25 (-49,09-12,73) 1,76 (-70,77-49,23)

CD16+, % CD16+, 107л 12,64 (4-23) 0,34(0,12-0,8) 56,05 (10,29-110,88) 65,05 (22,23-152,45) 9,94 (-65,22-100) 29,65 (-54,72-201,89)

CD19+, % CD19+, 107л 14,14(7-21) 0,4(0,17-0,65) 53,4(15,59-89,71) 95,18(37,5-157,5) 4,76 (-48,15-55,56) 82,14 (-22,73-195,45)

Индекс регуляции 1,8 (1,16-2,9) 71,94(0,5-196,25) 12,19 (-27,5-81,25)

Анализ разности средних процентилей по Т-критерию выявил повышение абсолютного содержания СБ19+ клеток (р=0,029), повышение относительного содержания СШ9+ клеток (р=0,099) и абсолютного содержания С04+ клеток (р=0,081), а также снижение относительного содержания СЭ16+ клеток (р=0,067).

Количественная оценка содержания иммуноглобулинов показала снижение концентрации ^М (р=0,046) и (р=0,019) после проведения НИТ (табл. 11). Динамика концентрации 1£А и ^Е также имела тенденцию к снижению.

Таблица 11. Концентрация иммуноглобулинов после проведения НИТ у борцов высокой квалификации __

Значение Процентиль от ПИ Сдвиг от ЦЗ РИ, %

IgM, мг/мл 1,01 (0,4-1,89)°'и46 33,73 (5-75,58) -25,45 (-70,37-40)

IgA, мг/мл 1,95 (0,3-3,82) 65,96 (-21,47-164,88) 18,27 (-81,82-131,52)

IgG, мг/мл 10,64 (6,45-12,89)0-0'9 41,41 (-0,5-63,9) -7,47 (-43,91-12,09)

IgE, МЕ/мл 44,28(2,1-130,9) 31,57(6,26-83,54) -40,96 (-97,2-74,53)

Анализ разности средних процентилей по Т-критерию показал снижение концентрации всех иммуноглобулинов, кроме 1§Е. Наибольшее снижение наблюдалось по концентрации 1§А на -21,8 процентилей (95%ДИ -30,1/ -13,5, р<0,001) и на -17,1 процентилей (95%ДИ -25,2 / -8,97, р=0,001).

Таким образом, НИТ у БВК обладает выраженным нормализационным эффектом, централизуя сдвиги показателей клеточного и гуморального иммунитета в границах референтного интервала.

ВЫВОДЫ

1. Динамическое наблюдение за состоянием ИС борцов высокой квалификации позволяет своевременно диагностировать тенденцию к развитию ИДС и провести своевременную коррекцию препаратами профилактической и направленной иммунотерапии.

2. Показатели ИС у борцов высокой квалификации, в процессе мониторинга, характеризовались: тенденцией к нейтропении, повышенной концентрацией всех классов иммуноглобулинов, особенно ^А, дисбалансом показателей клеточного иммунитета — уменьшением относительного содержания СЭЗ+ клеток, уменьшением абсолютного и относительного содержания СЭ4+ клеток, увеличением абсолютного и относительного содержания Э16+ клеток, увеличением относительного содержания СЭ19+ клеток, большим разбросом индекса регуляции и снижением активности фагоцитоза.

3. Борцы высших достижений - победители и призёры чемпионатов Европы, Мира и Олимпийских игр, обладают большей устойчивостью иммунной системы, проявляющейся более высоким абсолютным содержанием лимфоцитов, высокими значениями С04+ и СЭ19+ клеток и меньшими концентрациями ^Е.

4. Профилактическая иммунотерапия препаратами алфавит биоритм, вобэнзим, Ь-карнитин, ново-пассит, убигодц (310 — показала высокую эффективность: повышая активности фагоцитоза, увеличивая относительное содержание моноцитов, лимфоцитов и снижая относительное содержание эозинофилов. Увеличилась общая популяция СЭЗ+ клеток, абсолютное содержание СБ4+ и СО!6+,

относительное содержание CD19+ клеток, снизились абсолютные значения CD8+.

5. Борцы высших достижений отличаются более выраженным ответом на ПИТ. В результате ПИТ, в группе СВД, повышалась активность фагоцитоза, увеличивалось абсолютное содержание CD3+ клеток, относительное и абсолютное содержание CD4+ клеток, снижалось содержание CD8+. Отличительной особенностью спортсменов без высших достижений после проведения ПИТ являлось снижение относительного содержания нейтрофилов и повышение содержания CD16+ клеток.

6. Направленная иммунотерапия препаратами: ронколейкин и ликопид -обладает высокой эффективностью в отношении нормализации всех исследованных показателей ИС, позволяя сбалансировать содержание ИКК и снизить концентрации иммуноглобулинов, в том числе концентрацию IgA, которая была стабильно высокой как до так и после проведения ПИТ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Лабораторные исследования иммунной системы борцов высокой квалификации, для своевременной диагностики развития иммунодефицитных состояний, профилактики инфекционных заболеваний и адекватности физических нагрузок, рекомендуется проводить не менее 4-х раз в год.

2. Исследование лабораторных показателей иммунной системы рекомендуется использовать, как один из дополнительных критериев оценки перспективы достижения высших результатов у борцов высокой квалификации.

3. С целью коррекции выявленных нарушений показателей иммунной системы, рекомендуется курсовое применение программы профилактической иммунотерапии.

4. Проведение курса специфической иммунотерапии рекомендуется при недостаточной эффективности профилактической иммунокоррекции.

5. Лабораторные исследования состояния ИС спортсменов рекомендуется внедрять в других видах спорта, с целью определения специфических особенностей нарушения иммунной системы характерных для других видов спорта, своевременного выявления тенденции к развитию и наличия ВИДС, и их своевременной коррекции.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Алпатов, С.П. Диагностическое значение некоторых параметров в исследовании иммунного статуса спортсменов высшей квалификации. Материалы Объединенного иммунологического форума, Санкт-Петербург, 30 июня - 5 июля, 2008 г. / С.П. Алпатов, Б.А. Подливаев, М.А. Рыгалов и др. // -Российский иммунологический журнал. - 2008. - 2(11). - №2-3. - С. 174.

2. Алпатов, С.П. Мониторинг сезонных изменений иммунного статуса у спортсменов высокой квалификации. Материалы Объединенного иммунологического форума, Санкт-Петербург, 30 июня - 5 июля, 2008 г. / С.П. Алпатов, И.Г. Козлов, Б.А. Поляев, и др. // Российский иммунологический журнал. - 2008. - 2(11). - №2-3. — С. 272.

3. Алпатов, С.П. Опыт применения препаратов поддерживающей иммунотерапии для профилактики нарушений иммунитета у спортсменов-единоборцев высокой квалификации / С.П. Алпатов, М.А. Рыгалов, Б.А. Подливаев, и др. // Вестник уральской медицинской академической науки. - 2009. - т. 24. - № 2/1. - С. 194-195.

4. Алпатов, С.П. Опыт применения неспецифической иммунотерапии для профилактики иммунодефицитных состояний у спортсменов единоборцев высокой квалификации / С.П. Алпатов, М.А. Рыгалов, Б.А. Подливаев и др. // Материалы 9-й научно-практической конференции «Самбо для всех», РГУФКСиТ, Москва. - 2009. - С. 134-137.

5. Алпатов, С.П. Коррекция иммунодефицитиых состояний, вызванных длительными и высокоинтенсивными нагрузками, иммуномодуляторами ликопид и ронколейкин. Сборник трудов X Международного конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии», Казань, 20-23 мая, 2009 г. / С.П. Алпатов, Б.А. Подливаев, М.А. Рыгалов и др. // Российский аллергологический журнал. - 2009. - №3. - С.229.

6. Алпатов, С. П. Диагностическая значимость уровня иммуноглобулинов классов А, М, G и Е в исследовании иммунного статуса спортсменов высшей квалификации / С.П. Алпатов, Б.А. Подливаев, М.А. Рыгалов и др. // Материалы VIII международной научной конференции студентов и молодых ученых «Актуальные вопросы спортивной медицины, лечебной физической культуры, физиотерапии и курортологии». - 2010. - С. 220.

7. Алпатов, С.П. Опыт применения иммуномодуляторов ликопид и ронколейкин для коррекции нарушений иммунитета у спортсменов-единоборцев высокой квалификации / С.П. Алпатов, Б.А. Подливаев, М.А. Рыгалов и др. // Лечебная физкультура и спортивная медицина. -2011.-№10(94)-С. 12-16.

8. Алпатов, С.П. Особенности динамики сывороточного уровня иммуноглобулина класса А у спортсменов-борцов высокой квалификации при проведении иммуномодулирующей терапии / Алпатов, С.П. М.А. Рыгалов, Б.А. Подливаев и др. // Российский иммунологический журнал. - 2013. - том 7 (16), №4. - С. 403-411.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БВК - борцы высокой квалификации

ВИДС - вторичное иммунодефицитное состояние

ВИД - вторичный иммунодефицит

ВСС - входящие в состав сборной

ДИ - доверительный интервал

ЗМС - заслуженный мастер спорта

ИКК - иммунокомпетентные клетки

ИС - иммунная система

МС - мастер спорта

МСМК - мастер спорта международного класса

НИТ - направленная иммунотерапия

ПИ - популяционный интервал

ПИТ - профилактическая иммунотерапия

РИ — референтный интервал

СВД — сверхвысокие достижения

УМО - углубленное медицинское обследование

УТС - учебно-тренировочный сбор

ЦЗ - центральное значение

Подписано в печать: 07.11.2013 Объем: 1,0 пл. Тираж: 100 экз. Заказ № 218 Отпечатано в типографии «Реглет» 119526, г. Москва, пр-т Вернадского, д. 39 (495) 363-78-90; www.reglet.ru