Автореферат и диссертация по медицине (14.00.41) на тему:Иммуномодулирующие эффекты экстракорпоральных методов иммунокоррекции

'

': На правах рукописи ПЕРЕКОСОВА ЩЙЯ аэдашовнА

удк [^612.017.1:57.04] :616-77

«и ' ; •'

'' #!ШСГЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР Ш«1|0_ИСШЩОВАТИ1ЬСЙЙЙ ИНСТШЭТ? ТРЛНСГШЛНГОЛОГИИ и ИСЖСТВЕНШХ ОРГАНОВ

ишноюдошкгавр: эшш эщграюрйоРМШЖ

МЕТОДОВ ИШБОШРРЕЩИИ

14,00,41 • Трансплантология и ис$дгсственкый органы

Автореферат ,диссертации на соисксше ученой степени кандидата медицинских наук

Моекла _ 1991

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте трансплантологии и искусственных органов Минздрава СССР.

Неучнке руководители: доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук В.С.Оускова

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор И.В.Петрова,

доктор медацинсилх наук,'профессор Э. Р. Левицкий

Велущее учревдуэде.:, Всесоюзный научный Центр хирургии ЯМН СССР'.

<~> № V/ С &&

Защита состоится

7 г. в I 7 час, на васеданяи Специализированного Учсчого совета Д.074.34.01 Научно-исследовательском институте трансплантологии и исодссч!венных органов Минздрава СССР (123436, Москва, у л .Щукинская;,, д..!).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке? довательского института трансплантологии и исодсст.щшйй Й1нздрава СССР..

Автореферат* р&зорлан; "Ж^А^-^у^Р Тщ/ г.

Ученый секретарь Епециаладироваадюрб. совета

доктор ывдацинакда псу к-, профессор; А.А.Писе-ровский

: "' | ОБЩАЯ ХЛРАОТЕРИШИА РАБОТЫ

¿-^'Актуальность работы. Одной из перзооч&редаас задач практической медицины является разработка- современных принципов и подходов к целенаправленной коррекции нарушений июфштета. Несмотря на рос-тущее число фармакологических агентов с июукомэдодохуядаии свойствами препараты с селективным действием еще не создены. Способы использования иммуномодуляторов остаются традиционными, цреягсвизри-вагащими в большинстве случаев введение лекарственны:-: средств б организм больного, что обусловливает непредсказуемость конечного яф?:а;-г;а препарата и большой риск нежелательных последствия ( spreafico I"., Veccbi A.,1984; 1Удин И.С., Лесков В.П. и др., 1987; ¡'.¡кринсккк З.С., Ну к Е.А., 1991). Принципиально кошм направлением в имцунокоррехции является щшенение экстракорпоральных методов, ко'хорае ногу? рассматриваться как искусственные системы, заыещотдае л вссполняхжхе нарушенные функции иммунитеха (Дмитриев А,А., 1934; Лопаткин Н.Л., Лопухин S.H., IS39). Техническое совершенствование этих методов з виде ищуносорбции, цитафереза и до. создают принцип,¡ально ноьые основы экстракорпорального разделения и обработки ксч.члонентоЕ крови с их последующей реин^зией в организм Зольного с лечебной целью ( Waldrnan S,, 1975; McCuUouch G. ,1979; Гаврилов O.K.. ISS3; ^чалкн А.Г» и др., 1989). ¡¿етодцитаферезг. предоставляет уникальное возможности для воздействия на изолированные от внутренней ероде ор~ . ганизма имцуиокомпетеншые клетки Вида обработки клеток при этом могут быть различными; фармакологическими црешфатеки, кедааяорвиц игл-цунной системы} существенному расширении зозкоаносхеЗ цита$ерсза .«сак методе кмггу но коррекции служит создание удобной при клиническом прякс-нении аппаратуры для квантовой имэдноторсгош (Попов Ю.Б, .Лазарев Д.Н. ISS6).

Первые результаты практического применения цитсфреза о OKCipa-корпоральной обработкой лейкоцитов отечественным Я1адисйоде;ц5торсм дауцифонок (Прозоровский Н.С., 1935; Лесков Б.П., 1936; Зэдснко E.G., 1937;.Латышева Т.В. идо.. 1933), а.такте облучением дейковзвеси гелий-неоновым лазером (Ifymw. В.П., 1984; Кажтоза-Долевея 2.Б., 1939} показали их клииичесную эффективность к принципиальную возможность непосредственного воздействия ка изолированные имодноко.млетектныа клетки. В настоящей время появляются новые ижунонодуляторы, потенциально эффективные для экстракорпорального применения, такие, как препарат интерферона-/.« лейкшферон (фокецоь В.П., Беляев Д.Л. и др., 1989). Возможно так ;кз использование квантовых источников других

областей спектра, в маетнее:', ^-излучения» градационно применяю«®-гос.ч в кжтоохой цракгакв- £ «враги» тафкодофадетя: состояний ( йлЫвоп Г.., 1Ш7; Рбгей К. г* ОЬ,1Ш&5',

«:сдр0НПе а клшичзоцую иракти^ геысфрайциоиаторо& е непрерывным фоком краж создает г©аицигк}йла>но иоше возможности сбъдошйьга прахакснйя различных способов шдар&йоряорвльной коррекции »«муйШбтг а тгиао совместного ух иеяользоавж# <? методами экстракорпоральной" детокоикщ:?й. В то «е время,. успешное црпиеяение подобных методов Еоэиоздо только цри на.ия«ш подробны* сведений об их влиянии на им~ мунный гомеос-газ» & «ыие четко" сфорцуяированнах имцуиологаческих показаний к их. проведет?»,. что м определила, йыбор стели и задач тою. ящего исследования.

.Ц^ь^иеедедов.ан;;я. Цель» исследования жшвь- изучение иицуйэ-иодулирувднх оф^ктоз цитадеоеоа с зкетракоршральной обработкой лей', коцотог, • фармакологическими сгеячемл,. медаафораий икш^шой системы, квгдаовкмк тдейагвияма к обоомоваше- йшуйояопмескнх показаний к применений д&пшх методов экстракорпоральной- имцунокоррекций» В связи с г-?им были поставлены следующие задачи?

1. Изучить ьяияние экстракорпоральной' имфнофарйакотерапйй дпу-цифоном (ЭИ'ЗТдц) не. количественные и функциональнее' показатели точного и гуморального иммунитета, а также ■ ке'саецифичйеии» ^айторс®-

зС'^уь;.

2. Оценить влияний экстракорпоральной иммунотерапии- препаратом", относящимся к классу медметоров Нщунной системы - лейкйнфероном-(ЗИГлф) на показатели пшенного етьтуса,

3. Исследовать данэмику з ¡«¡просо»; маркеров йшуйокошетентных клеток ин витро на различных этапах процедуры цитафереза;' оцёни^ь-значимость стих параметров для прогнозирования ккцунотроЯНоГй'Дёйсяи вия ЭИЗГдц и ЭЙТлф ин пиво.

4. Изучить динамику показателей иммунного статуса В процёййё"-применения квантовых методов ищунокоррекции - адецтиаиой лазерной' к ультрафиолетовой иммунотерапии (АЛИГ и АУЗЙХ).

5. Да-^ь еравнительщгсо оценку имлгуномодулируюнехпо действия указанных методов экстракорпоральной имщунокоррекции и обосновать иммунологические показания к их применению.

Научная невлзна. Впервые с использованием широкого спектра иммунологических тестов, предусматривающих оценку как количественных, та* п еункциональных показателей клеточного и гуморального имууни-

тета и неслецифичоеких факторов защити проанализироврна ивцунологи-чесиая эффвктивносгь экстракорпоральной и^нофармакотерг.жй диуци-фоном, экстракорпоральной, иммунотерапии лейккнфзроном, адоптивной лазерной и ультрафиолетовой иммунотерапии и обоснована возможность их использования для целенаправленной коррекции иьаунных нарушений.

Показано, что ЗЙ5Тдц является методом ургентной коррекции недостаточности клеточного иммунитета при условии индивидуальной чувствительности больного к препарату. ЗЯЗГдд оказывает быстрое и устойчивое стимулирующее действие при недостаточности нейтрофилького звена неспецифической защиты независимо от реакции показателей клеточного иммунитета на процедуру.

Щмменен метод цит&фереза с экстракорпоральной обработкой лейкоцитов препаратом медиаторного типа действия - лейкинфероноа. Показано, что ЭНГлф является катодом ургентной иммунокорозкцяи широкого спектра действия.

Применен метод цитафереза с УЗ-облучекием сепррированнис лейкоцитов (АУЗИТ). Показано, что АУ5ИГ является методом ургентной мм~ Мунокоррекции при недостаточности клеточного иммунитета и неспеци-фичееких факторов защиты. У больных с активацией клеточного иммунитета АУЖ оказывает избирательное ннгабируюшее действие на количество активных Т-лимфоцитов, Т-келперов и повывает число Т-супрсс-соров.

Показано, чтЬ- АЛЙГ является методом ургентной м.<муког<оррекцк;< при низких уровнях сывороточных иммуноглобулинов и недостаточности неспецифических факторов защиты.

Практическая значимость работы.

Выявлено, что иэученше методе экстракорпоральной иьшунокоррекции оказывают как стш^л^рукщеа, так и кнгибируюяее действие ка показатели иммунного статуса в зависимости от направлзнноств их исходных изменений; таким образом обашоэана необходимость комплексной оценки состояния иммунной системы в процессе экстракорпоральной иммунотерапии.

Определены особенности действия изученных экстракорпоральных методов на различнее звенья им^иитета а на згой основе разработаны и{/дунояогиче.еи№ гоказения а их применению в зависимости от ют— кратких нарушений шмуяаого статуса.

ВЬювогена различная; эффективность ЗМГдц и ЭИТлф в зависимости' от предаестзуюэде!? имцуносупрэссианой терапии. Показано, что ЭЙЗГдц

не эффективна для стимуляции клеточного иммунитета ь течегаге 26 ¿'Hei: после применения шцуносупрессавных црепаратов, но может быть использована в эти сроки для эффективной стимуляции нейтро-фкльного звене неслецифическай зеяити организма. ЭИТлф может быть применена доя быстрой имоднокодрекции при недостаточности всех звеньев иммунного статуса спустя 4 дня после химиотерапии.

Определены наиболее информативные тесты ин витро для прогнозирования действия ЭЩГдн к ЭЙГлф ин виво.

В1.явяе:ю, что индукция ин витро субпоцуляции ауто-РОД^." отменяет сгицуляруицее действие ЗЕЗГдц на клеточный им»фнитег и снижает выраженность к длительность действия ЗИГлф. Определение прирос- . та гута-РОй t" ин витро рекомендовано в качестве дополнительного теста ди црогноэировслия эффективности экстракорпоральных методов иммунотерапии.

Знедпет-mq, дРазработанные шмунологические показания к применению ьшенаэванккх методов экстракорпоральной имцуга-коррекции (ЭИйТда, ЭИТлф, АЛ® и АУФИТ), а также способы прогнозирования ин витро но л о гмче с ко й а^фективности ЭИ$Гдц и ЗЙГлф внедрены э хлинико-экспериыентальном отделешш гемосорбцйи НЖГиИО МЗ СССР и хирургическом Л0?-отделении 67 ГКБ г.Моеквы.

По теме диссертации подготовлены методические рекомендации для МЗ СССР "Использование цитафереза с экстракорпоральной обработкой лейкоцитов б качестве метода имцунокоррекции при вторичной иммунологической недостаточности" и внесено рацпредложение "Использование теста ауторозетнообразованяя в прогнозировавши эффективности некоторых методов экстракорпоральной коррекции иммунитета" (удост. ¡й?. от II.I0.SI г. ).

Агтаобазия работы. Материалы диссертации апробированы на научной конференции отдела искусственных органов (зав. проф. .Дмитриев A.A.) и обсуждены на научной конференции лаборатории имцуносупрес-сии Сзав. проф. Шальнев Б.И.) НШГийО МЗ СССР. Основные положения диссертации доложены на II Международном симпозиуме "Реабилитация иммунной системы" (Дагомыс, 19Ш), Международной конференции "Новое в лазерной медицине и хирургии" (Переяславль-Залесский, 1990), Ке:кдунарс,пкой конференции " Biomedical Optics' 91" (Лос-Анкелес, С£А, IS9I), IX Всесоюзном симпозиуме по целенаправленно^' изысканию лекарственных веществ (Рига, 1991), Международной конференции фирма "Зрезениус" (Москва, 1991), Конгрессе Международного общест-

ва патофизиологов (Москва, I9SI).

Публикация результатов исследования. Йо материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ в сборничех и центральных ;.ty риалах.

Объем и структура диссертации, ¿дассертецил изложена на страницах машинописного текста и состоит из обзора литературы, 5 .глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и описка литературы, содержащего 2S9 отечественных и зарубежных источников. Работа иллюстрирована 8 рисункам и 35 таблицами.

Место выполнения работы. Работа выполнена в клинико-окспери-ментальном отделен™ гемосорбции (зав. проф. Дмтриев A.A.) и лаборатории иммуиосупрессии (зав. проф.И'&льнеа З.И.) HiEÎLiIIO 112 СССР (директор акад. АМН СССР ¡цу маков В.й.). 3 работе испольсо,. ни препараты: диуцкфон, полученный из лаборатория йнеямук*. 11мм,унодог.;и МЗ СССР на базе Межобластного лепрозория, г.Загорск (зав. ц?о$. Голощапов Н.М. ) и лейкинферон, полученный в отделении биосинтеза препаратов интерферона (зав.проф.фзнецов Б.и.) ШИГЭМ им.Гамалеи H.i. Ai,И СССР, (директор акад.ААК СССР Прозоровский C.B.).

Положения, выносимые на залягу. На защиту выносятся следующие положения:

1. ЭИ0? дауцифаном является методом ургенткой иммукокоррекции при недостаточности клеточного иммунитета при условии индивидуальной чувствительности лимфоцитов больного к препарату, определяемой в тесте ауторозетяообразования ин вигро. Стагфляция иеелеци&геес-ких факторов защиты я повышение сывороточных иммуноглобулинов b

и M при ЭИ2Гдц наблюдаются независимо от реакции клеточного звена иммунитета на процедуру.

2. При активации клеточного иммунитета ЭИдТдц на L-e сутки оказывает выраженное ингибируюцее действие со снижением иммунорегуля-торного индекса ниже 1,0 за счет снижения количества Т-хеллеров и

.повышения относительного числа Т-суярессоров. Супрессивный аффект не носит устойчивого харак-ера и имеет тенденцию к обратному развитию к 7-м суткам после процедуры.

3. ЭЯТ лейкинфероном является методом ургеитной кммунокоррек-ции широкого спектра действия. ЭИГлф - метод выбора при недостаточности клеточного звена иммунитете и обеспечивает наиболее быструю

и физиологи-шую его коррекцию. Лри повышенных и нормальных показателях иммунного статуса действие ЭйТлф яь-.датся имкунокоррнгирушим с. те,-аенцией. к кыцугостицулдаии.

4, АУШ1' является методом ургентной имцунокоррекции при недостаточности клеточного ш.эд'нитета и неспецифических факторов защиты. У больных с активацией клеточного к^нитета АУШТ оказывает избирательное ингкбируюцее действие на количество "активных" Т-лимфоцитов и Т-хелпеоов, а такие повышает число Т-супрессоров.

5. АЛНТ моссет быть использована с целью ургентной имцунокоррек-Цак при низких уровню: сывороточных иммуноглобулинов и недостаточное те неспецифкческих факторов защиты. При повышенных и нормальных показателях иммунного статуса МИГ оказывает наиболее выряженное инги-бируюцее действие на количество В-лиыфоцитов и уровень сывороточного fy % .

шдамы К шот ИССЛЕДОВАНИЯ

Клинической моделью для изучения иш.уномодолируюдего действия вышеназванных экстракорпоральных методов послужили 85 больных раком Л0?-оргаиов. Больные ЛОР-онкологического профиля - тяжелый кок-тинг'йнт хирургических больных с высокой частотой послеоперационных гнойно-воспалительных осло..з»ений. Проведение Ямцуйокорригирующих мероприятий, особенно в сжатые сроки, является у них актуальным при .-эдготоаке к операции и восстановлении нарувенных звеньев иммунной заикты после химиотерапии. Выбор контингента больных был так:»е обусловлен возможностью изучения имнунокорригирувдего действия экстракорпоральных методов в условиях постоянного наличия патологического очага (опухоли), обеспечииетаего постоянный характер имеющегося широкого спектра имцунных нарушений ( Sbavit G,, I9S5; Stein ¡985; Ефимова Н.В., Сорокина М.И., 1987 г. и др.) и в ряде случаев оценить действие исследуемых методов после имму-носуцрессивной терапии, что актуально для тренсплантологической клиники. Основное число пациентов было 1цуаского пола в возраста *х0-59 лет. У 70 (81,455) пациентов был рак гортани, длительность клинкчеезд канифестирозанного заболевания составила от 0,5 до 7 лет. У основного числа больных действие экстракорпоральных методов имод-нокоррекцип изучено в период, предшествующий радикальной операции, у 5-ти пациентов - на фоне послеоперационных раневых осложнений, у 4-х. - на фоне воспалительных процессов в легких. Параллельно обследовано 25 здоровых донороь.

В процессе экстракорпоральной иммунотерапии лейковзвесь, полу-

чанная с помощью клеточного фракционатора с непрерывным токаи крови " Aminoo " (США) обрабатывалась препаратами диуццфоноа ала лзй-кинфароном; облучение лейковзвеси проводили с по:юцьа гелий-неонового лазера ЛГН-Ш или аппарата "ИЗСЛЬДА ¡.Щ-73М". Посла обработки лэйковзвесь реинфузировалась больному в/в капелъво.

Иммунологическое обследование больньпс проводили и помощью общепринятых гестов, имеющих первостепзяноз значониз для оценки пи» иунного статуса (Петрова И.В. л др., 1980, Петров ?.В. и др. ,1384, Лебедев К.Д., 1920). С целью определения быстроты ;; устойчивости иммуноиодулирующего действия исследуемых катодов иммунологический мониторинг осуществляли до цитоферезз, на 1-8 и 7-э сутки поело наго; при ЗИТлф - кроне асого - на 14-е сутки. Клеточный иммунитет оценивали в реакции розеткообразованш и с помогав мс-ноклональных антител (IMT). Суспензии лейкоцитов получали из гепаринизкровакно!! крови, взятой из локтевой венн, ыетодзм спонтанной седиментация. Лимфоциты выделяли посредством центрифугирования в градиенте плотности фкколл-верографина ( Воуии А., 1968). Определяли количество Т-лимфоцитов (Е-РОЛ, Jondai .',!. it ai., 1972), лолиафинных -лимфоцитов ( Е-РОЛ II, West vi. ct al., 1975), активных Т-лиыфоци-юв (Еа-Р0Л, Wybraa J. et al,, 1973), теофидлш-рззистантных и теофилин-чувствительных Т-лимфоцитов в нагрузочном тесте с теофпл-линои (ТФР-РОЛ'И ТФЧ-РОЛ, Shore A. et al., 1978). ТеоуиллкновыЗ тест считали инверсный при относительно!! количестве ТФЧ-РОЛ, меньшим в% (Непрнна Е.С.,Ярилия А.А. и др., 1987). В качестве дополнительного теста для. оценки реакций Г-звена иммунитета использовали определенна числа ауторозеткообразующих лимфоцитов (ауто-РОЛ, Лесков В.П1986). С помощью ufii производства Института Имиунолог;ш 153 СССР методом непрямой ишунофлаоресценции определяли количество СД5+-лимфоцитов ( общиз Т-клвтки), -лимфоцитов (Т-халпары/иа-дукторы), СД8+ - лимфоцитов ( Т-супрэссоры/циготокскчеокко клагки), а таказ иммунорагуляторный индекс ( ЕРИ, СД^/СДа'1* ). Гуморальный иммунитет оценивали с помощи определения числа З-лимфоцигов ( ЕМ-РОЛ, Gupta s. et al,, 1975) и концентрации.шыуаоглобулинов A, l\,lJ-з сыворотке крови (M&nchini G. et al, J965). Кеспецифические факторы задан оценивали по функциональной активности найгрофилов я системы комплемента. Определяли количество розеисообраауэди* яейгрощи-лов и полиаффинных розеткообразуадих нейтрофилоз ( К-¿'ОН и Б-1'OKII, Оагрова И.В., I960). Поглотительную способность полвауклеароз оценивали в реакции фагоцитоза о использованием убитой шкребкой взвз-

ек staph, aureus (Петров Р.Б. и др., 1984). Определяли процент аароцитируюцкх ¡авто? ( фагоцитарный индекс, ФЕ), Коли veers о микробных тал, поглощенных одним неитрофилоа ( фагоцитарное число, 44), и количество ¿шкроорганизмоз, йоглощашшх кейгрсфилаш одного шл крови { atícoaasuuid фагоцитарный показатель, АШ). Активность кошлоианта сьторохки крови (С) к его С3-коааонэнга (С3) оценивали штодом кинетического титрования (Петрова Й.В., Шкурко В.И. и др., IS50). 3 процесса ЗКМТдц и ВЙТлф нссладовади экспрессию лоьархаосс-кых клеточнах рецепторов иа вктро л методиках, описанных выше, па следующих этапах: после выхода клеше из ротора аппарата, посла инкубации контрольной фракции лайковзввеи без препарата и после инкубации с препаратами. Для определения индивидуальной чувствительности больных к ЗьФТдц проводили прздвармтелькуа пробу ин вивро с использованием реакции аутороззткообрззования. При увеличении числа ауто-РОЛ под действа диуцифона ин вивро не иенза, чем б 2,5 раза «о сравнении с контролем, ЗИФТдц счизгали показанной с целью стимуляции клеточного иммунитета. В зависимости от времени макеймально-го прирос ta ауто-FOit в опыта (1-3 часа) определяли необходимое вреда инкубации лейкоаззеси с препаратом so время процедуры.

РЕЗУЛЬТАТА ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Кяотконсдулируюд'иэ аффекты 8ЙФУ диуцифоиом

Иаыувшодуларзютеб дайстзие ЗЙФТдц изучено у 2S больных ракой ЛОР-оргаыов. В процессе исследований выявлена неоднозначная реакция клеточного шиуаиита больных с исходно низкими показателями Т-звана на ША'Гдц, что дозволило выделить 2 группы пациентов в за-виспыости от чувегвитйльности к процедуре. В группу диуцифон--чувствитезшшх ( 1-я группа, п=8) воили больные, не получавшие каких-либо имвуносупргссивных воздействий до Э155Т. В группе диуци-фон-разистенгных ( 2-я группа, п=П ) - 7 пациентов имела хшиолу-чевуэ терапию в анашезе. Сроки после химиотерапии у 4-х больных составили 1-25 дней, сроки после лучевой терапии у 3-х больных -4-10 месяцев. В группе диуцифон-чувствителышх больных наблюдался достоверная симулирующий э$6акт БЙФХ в отношении практически всех, как количественных, так и функциональных показателей клеточного звена кмыу иигеis yse на 1-е сутки после процедуры. При этом Функциональные показатели - пелкевдлшкые и активные Т-лик$оциты - на 1-е сутки нормализовались. На 1-е сутки посла процедуры у больных

с инверсиями гаоЬиллинсвого тести в 2 раза снижалось число инверсий, что свидетельствует о тенденции к нормализации функционального состояния Т-клеток после &К5Т ( Пантелеева S.C. и др., ISS5, Брагусь Г.Г.,Ларчуя Г.Ф., 1991). Относительные количества "-клеточных субпопуляций таккз во зсэ>: случаях иормализозывалнсъ уже на J-з сутки после 5КФГ. Нормализующее дейсввиз в огновеики абсолютных значений количественных показателей ( лкмуоцигы, обцие> 7-клез-¡си ) запаздывало, выраженный их прирост наблюдался к 7-и суткам после процедуры.'В рэзулм&гв ЭЙЗТ увеличивалось число как хелпо-ров, так и супрессоров при их исходном дефиците (табл. I). Исходно поЕншенноэ число Т-супрэссоров н орыа лиз ов ыва л о с ь на 7-е сугки после ЗИМ.

Таблица I.

Динамика субпопуляций ?-лиа^оцигов у яиуцЕфон-чувсюнтзльных больных при ЗИ5Тдц .

А + 1Г1

Показатель

Сроки исследования

1-е сукш 7-и сутки

Здоровые 'доноры л =25

э шел

53±2,7 778+6?

70+3,1" 989Ш

71±г

шн+гог*

70,9+1,2 Ы'|6 +135

51+2,9 1129+192

"ххх

4'f, 8+2,4850+91

" 3 279f'ts 502+81"-

сда^.лфц 7c 48+3,6 .35+3t5xx 3E+2,8X(37,5) 29,5+2,6

в шел 623+58 - 59'i+47(37,5)

327+25

365+31(62.5)

41+2,2(62,5) 507+46 (37.5) 4s0+73

IÖöO£lI2W,5}

СД4-'/СД8'

0,63+0,1

1,26+0,18ÄX 1,4+0

16

1,63+0,09

Примечание: Здесь к далее: числитель и зианенагзль - показатели

различно реагирующих больных. В скобках - процент боль-■ . ных, х - р < 0,05, хх - р < 0,01, ххх - р < С,001 по сравнению с исходный»; данными.

К 1-й сутлии после ЭКТ омачоио дальнзйааа нарасганиа функциональных по;с£:за;ьлзи Г-звзка яящилгсти. Одноврэиенно вновь возрастало члсло кнворсиа тео^ллакновои ровкцаи лкздоциюв, соиавляя, как и до иродедурыДСО^, что когло бичъ связано с выходом в циркуляцию ¿юкодде яредшесгаеввиков ?-ялехок £Liraatitul s., 1978 и др.)' Тек, посла '¿l'.-vT наряду с активацией Т-лиигоцкюв на 7-е сутки отмэчен значительный прарост "нуловых" лвдоцитов. В результате ЭИ«Г наблюдалось вылаканное увеличение ауго-РОЛ, которые, как из se amo ¡ являются поогтлцлческими предиеагвеааакамя зрелых имаунорэгуляторных клеток ( Blue M.L. et al., IS87, Mac Donald H.К. et al., 1988). Количество ауто-РСЛ возрастало яа 1-е сутки после ЭИФГ в 4 раза, а к 7-Ü - з 10 раз.

Суцестзенных. сдвигов в клеточном звене иммунитета диуцифон-рв-зисгеягкых больных в делом нэ происходило ( табл.2 ).

Таблица 2

Диаалика оубпопуляций Т-лиыфоциюв у диуцифон-резЕСтентных больных при ЭЙФТдц

M + /5?

Сроки исследования ■_Здоровые

ÜOKÜJor-ЗЛЬ до ЗИМ 1-е сутки 7-е сутки донора л=2э

СД51 лфц 3 iiïOI 5G+2,8 648+70 48+3,1 531+45 47+3,2 513+42 70,9+1,2 1346+185

Сд4~к я$ц % в »¡¡а 25 ,3+3,5 356+57 35+3,8ХХ(3£;4) 317+66 24,3+2,3 292+68 44,8+2,4 850+91

СД8- лфц % 51,3+3,1 39,3+2,4х 42+3,7 29,5+2,6

в мкл 14+1,2 754+71 11+1,3 542+55* 12+1,1 718+62 490+78

310+45 231+45 241+38

СД4+/СДЗ+ 0,4+0,05 0,7+0,04 0,8+0,03 (63,6) - 0,6+0,04 0,6+0,07(36,4) 1,63+0,09

Примечанием.таблицу I.

Следует, одаако, отметить наличие стицулкружщего эф&еэта в отношении процентного с о дер Дания розеткообразуетих сублоцуляцнй Т--клеток, особенно Еа-РОЛ к ТФР-.Р0Л, а также в ряде случаев - СД4+~ -лимфоцитов (в меньшей степени выраженного, чем в 1-ой группа). Б большинстве случаев возрастало количество оуго-РОЯ. Б 81, случаев прирост относительного числа ауто-РОЛ не уступал таковому в группе диуцифончувствительных больных, а абсолютное их число в 63,65» случаев приближалось к контрольным значения«!. Ршее было показано, что одной из возможных шпеней действия диуцифона яьля-л'-ся ауто-РОЛ (Лесков В.П., 1986). Поэтов с целью ответа на во.^ос, почецу у больных о одинаковой реакцией на ЭйЗГ субяопуляции ауто--РОЛ наблюдались различные эффекты со стороны других показателей клеточного иммунитета, а так.™е с целью возотхного отыскания способов прогнозирования действия процедуры иила проаналисирэиана динамика экспрессии маркеров таа'нокомпетеьткых ¡слеток ОПШ) в процессе цитафереза кн витро. Выявлено, что п обемх группах больно; прирост субпопуляций активных и теофиллинрезистеитных Т-лимфоцк-тов, а такие.исчезновение Т5Ч~клеток происходило в процессе выделения и инкубации лейкоЕзвеси. У диуцифон - резистентных больных имела место тенденция к увеличению обоих и полиаффинних лимфоцитов под действием диуцифона по сравнении с контролем, и в 26,4Й ' случаев достоверно увеличивалось число СД4+_лккфоц:1гов в процессе инкубации. Возможно, эти эффекты т:н витро обусловили возрастание экспрессии рецепторов на соответствующих субпопулнциях ИКК диуцифон-резистентных больных ин еизо. Однако, они не сопровождались приростом фактического содержания ИКК з крови, а в ряде случаев наблядг- . его сникение. У доуцифон-чузствительнш: больных под дейстмем диуцифона ин витро достоверно возрастало число общих и пол'гаффяншх Т-лямфоцятов, с также Т-хелперов по сравнению с исходными показателям! ин виво. У большгх с инверсиями нормалиг-овквалась реакция Т-клеток на тзофиллин. Использование указанных различий для прсчозирования действия ЭК?Г не представлялось целесообразным, так как в ряде случаев у больных с лимфе-пенией относительное число Т-клегочных субпопулятдаХ исходно высокое. Так ,;се не у всех больных имеет ьесто инверсия тео&иликово-го теста. Наиболее четкие различия п группах были заявлены с динамике ин витро субпоцуляции ау'.'0_РОЛ. У диуцифон-чувстлительных

больных наблюдался выраженный прирост ауто-РОЛ под действием диу-цифона - в 2.5-6 раз по сравнении с контролем (ауто-РОЛда}. У да.. уцифон-резистентши пациентов имело место 2 типа реакции: I. Выраженное увеличение ауто-РОЛ в контроле (субпопуляция ауго~РОЛ£°); 2. Отсутствие сдвигов ауто- РОЛ ин витро. Таким образом, наблюдаемый прирост ауто-РОЛ у диуцифои-реэистентных больных ин виво был обусловлен субпопуляцией ауто-РОЛ t° . Тест ауторозеткообразованйя был использован нами для прогнозирования реакции клеточного звена имьунитета больного на процедуру (табл.3). Оказалось, что субпопуляция ауто-РОЛ£Ьбладает некоторыми супрессорнши свойствами. При индукции суто-РШин вптро на 1-е сутки после ЗЖГ наблюдали суп-.

р Таблица 3.

Зависимость о^ьчста ЭКЗГдц от результатов предварительной пробы с диуци^оном ин питро (% ауз?о-Д)Л)

а/а ■ Варианты опыта _, Реакция Т-эвэ-

ДО лндубации инкубация t =370 1-3«. 9 диуцифон 50 мкг/мл ¿=370,I_3V. на на 1-е сутки после ЭИЭР

I. 7 42 22 'супрессия ,

2. 8 28 35 и

го. 8 II 8 без изменений

4. II 28 5

5. ? 5 6 «

6. о 7 20 стивдляция

7. 2 ... а 18 11

прессию Т-звена ин визо. Возшгшо, ато-.сдоено,, с что среди эу-то-Н)Л находятся предаествеяшки Т-суцрессортк клеток (Palacios Е., 1981, Heijntn c.i., 1982). Показано тащо, что деля супрессоркнх клеток среди ауто-РОЛ возрастает при их культивировании ( Kumacai Sh., 19-31). Однако, следует отметить, что супрессорно© действие ауто-РОЛ!" кратковременно, так как к 7-м суткам у диуцийон-резистентных больных." наблюдалась тенденция к стимуляции ряда показателей клеточного им-ííj-нитета. Возможно, последнее является следствием самой процедуры цптофереза.

Такп« образок, в каких наблюдениях индивидуальная чувствительность больных к 2И2?дн имела место у Q из IS пациентов с недостаток-

ностьы клеточного иммунитета случаев). ЭИШЕ была неэффектив-

на у больньк после химиотерапии (максимальный срок после курса -26 дней).

У больных с "активированным" именным статусом ЭЩГдц оказывала выраженное ингибирукзщее действие на Т-звено иммунитета. СупрессиЕ ный эффект з большей степени был выражен в отношении активных, полиаффинных Т-лимфоцитов, а также Т-делперов. Относительное число Т-супрессоров при этом достоверно возрастало, а ИРИ снижался ниже 1,0. Однако,- устойчивого супрессивного действия процедуры не наблюдалось, и к 7-м суткам большинство показателей имело тенденцию возврата к исходным значениям. . 4

Реакция-гуморального звена ищуютета, а также неспецифических факторов защиты наЭМГдц не зависела от индивидуальной ^вствитель-ности больного к диуцифону, выявляемой в тесте ауго-РОЛ. Исходно низкое число В-лимфоцитов достоверно увеличивалось в результате ЭШГдц, но их нормализации не происходило. При повышенном количестве В-лимфоцитов на 1-е cyTioi наблюдалось ,их снижение в 1,4 раза от средненормативного уровня..К 7-м суткам число В-клеток восстанавливалось. Исследования в процессе цитафереза ин витро показали, что к&к стимуляция, так и ингибиция экспрессии ЕМ-рецепторов происходит уже при выделении, клеток,в.аппарате. Обработка диуцифоном вносит малозначимые дополнительные изменения в этот процесс, т.е. возможно, количественные изменения В~лимфоцитов в результате ЭЩТдц обусловлены самой процедурой цитафереза. Исходно сниженные уровни и -З^М-нормалмзошвались к 7-м суткам после Зй$Г в 77,8 и 80% случаев соответственно. В ряде случаев стимулирующий эффект наблюдался при исходно повышенных концентрациях иммуноглобулинов. Проведенные исследования показали, что ЭИШТда оказывает быстрый и выраженный стимулирующий эффект яри недостаточности розеткообразующей и фагоцитарной функции нейтрофилов. При этом сниженное общее число нейтрофилов крови так зке достоверно увеличивалось в 75^ случаев, что обусловливало нормализацию интегрального показателя фагоцитарной активности нейтрофилов - лШП. Стимулирующий эффект имел место у всех больных, в том числе, после химиотерапии и продолжался не менее 7-ми суток. Стимулирующее действие ЭЩГ распространялось так- . же на умеренно повышенную розетКообразующую способность поликуклеаров. а при значительно повышенных показателях (й Е-РОН II увеличен более, чем в 1,5 раза от средней нормы) ЭЩГ оказывала имцунокорригирукхцее действие со снижением их до уровня контроля. В меньшей степени вы-

ралено имадномодулирующее действие ЭШЕ на сиетеод комплемента. Из. менения касались только Cg-кошонента комплемента, на 7-е сутки на( людалась как стимуляция сниженной его активности (75% случаев), та] и ингибицин высокой (в 42,8,% случаев).

Ишдуномо'улирующие; эффекты ЭИТ лейкинйероном

Иммуномодудирующее действие ЭЙТлф изучено у 19 больных раком ДОР-органов. l^ypc химиотерапии до процедуры получили 14 больных. Сроки после ;орса составили от 4-х до 41 дня. Независимо от наличи в анамнэзб химиотерапии ЭИТлф у всех больных с недостаточностью кл точного шлвднитета оказывала быстрый стимулирующий эффект с нормализацией большинства показателей уже на 1-е сутки после процедуры. Несколько слабее в эти сроки реакция Т-супрессоров. Максимальное снижение исходно высокого их числе, наблюдалось на 7_е сутки после ЭКТлф, что сопровождалось нормализацией Й?И (табл.4). На 1-е су но после ЭИТлф з 2 раза снижалась частота инверсий у больных с инверс

Таблица 4.

Дшамика низких показателей субпопуляций Т-лимфоцитов при ЭИГлф u + m

Показатель Сроки исследования Здоровые . доноры

до ЭИТ 1-е сутки 7-е сутки

СД5+. лфц % в ыкл 57+1,2 584+78 64+1,2х* I24I+39BXX 80+4,0ХХ 70+3, Z™ 1254+43™ I38I+84XX 70,9+1,2 ' 1346+85

СДСлфц % Б МКЛ 29,3+3,2 443+60 40,5+2,7™ 43,3+3,iXX49±3,Ixxx зго+Тгз* езэ+гсг** ioi2+2i4xxs 44,8+2,^ : 850+91

сде^лфц % в МКЛ 42,7+2,9 906+156 34+2,Iх 73Í+I08 29+3,2х 38,5+2,8 493+86х(50) 778+87 721+91(50) 29,5+2, ( '490+76

сд4+/сда+ 0,68+0,11 1,3+0,IT** 1,7+0,13™ 1,3+0,15й : 1,63+0,'

примечание: для СДЗ+-лфц - высокие показатели. См. табл.1.

ней реакцией Т-лякфоцитов на теофиллин, а на 7_е сутки ока не отличалась от таковой в группе доноров, составляя 25%. Тагам образом, июцуностщ^лирующее действие ЭИТлф, кроме быстроты и выраженности, обладало-максимальной физиологичностью. Длительность стимулирующего эффекта - не менее 14-сугок после процедуры. К 14-м суткам наблюдалась тенденция к снижению некоторых показателей функциональной актив. ности Т-клеток (E-РОЛ II, Sa-P0JI) и реактивация супресеоршх клеток, что свидетельствует об обратном развитии наступивших изменений иммунного статуса. Т.е. реакция таднной системы на стимулирующее действие ЭИТлф имеет свое начало и завершение. В отличие от ЭИЩГдд, ЭИТлф практически не оказывала ингибируюшего действия на "активированный" иммунный статус-, за исключением повышения уровней Т-супрес-соров, сниженных более, чем на 257а от средненориативного уровня. В 1-е сутки действие ЭИГлф кошо было oxapáKTepnaoBaTb, как имцуно-корригирую;цее, с .нормализацией повышенных выше определенного уроЕ-ня показателей. На 7-е сутр проявлялась тенденция к стиедлирующа-щ действию процедуры. На 1-е сутки после ЭИТлф нормализовнвалось исходно повышенное количество ауто-РОЛ и сохранялось в пределах нормальных значений до 7-х суток. Так как высокое число ауто-РОЛ в крови больных может бить следствием нарушения продукции сывороточного тимичееггого' фактора или ИЛ-2 ( Su£avara I., Palacios В., IS82, SaEdilaads G.Í., 1975 и до.) ик^унокорригирующее действие ЭИТлф здесь, вероятна, свидетельствует о благоприятных сдвигах в этих системах^ что подтверждает физиологичность метода. Наиболее информативные тесты для прогноза быстрого действия ЭИТлф представлены таблице 5. Снижение прогностической ценности определения экспрессии СД4 и в соответствии с этим ИРИ обусловлено ситуациями с нормальный или повышеннш процентным содержанием СД4+-клеток у больных с лимфопенией. При этом прироста их относительного числа ' ин витро не происходят. У одного больного с недостаточностью клеточного иммунитета, которому ЭИТлф проводилась во время курса химиотерапии, не наблюдалось имщнологических сдвигов ин витро и на 1-е сутки ин виво. Стицулирующий эффект наступил на 7-е сутки после ЭИТ. Б 44,4/5 случаев при Э1!Глф не наблюдалось прироста исходно низкого числа ауто-РОЛ под делстшэм лейкинферона ин витро и на 1-е сутки ин виво. Стивдлкруюдий эффект здесь наступал к 7_м или 14-м суткам после Э1ГГ. Тем не менее, стимуляция остальных показе-телей Т-звена имела место уже з 1-е сутки. Такни образа/., о преде-

Таблица 5

Пропностическая ценность изменений маркеров Т-хшеток при БИТлф ин вигро

Показатель .{£ совпадения ин витро-ин виво эффектов в 1-е сутки Степень измёнзния по-■ казателя ин-витро существенная для.прогноза

СД4+- лфД, % 69,2 ■ не менее 10$ по сравнению с исходным уровнен

СД8+-: лфц, % 100,0

СД4+/СД8+ 84,6 не менее, чем в 1,5 раза по сравнению с исходным уровнем

лание ин вигро прироста ayro-РОЛ .при БИТлф не.имело0 такой практической значимости, как при ЭИФТдц. Определенную ценность представляет оценка сублолуляции аую-РОЛ . При индукции эгих ¡наток № витро у 2-х больных вцраяенносгь и длительность орзвад на процедуру снижалась.

Исследования поведали,, что.'ЭДТлф может быть использована для аффективной коррекции количественного'-дефицита В-клеток. Их число достоверно возрастало на 1-е сутки и нормализовывалось на 7-е сутки после БИТ в 31,7% случаев. Прогностическая ценность определения цн витро экспрессии ЕМ-ыаркера В-лиифоцитов составила 91,6$. Исходно сниженный уровень приближался к уровню контроля в 80% случаев на 7-е сутки после ЭИТлф, уровень ЩА к 7-м суткам нормали-еовывался. При псвышенних и нормальных показателях гуморального им-{jyHHreia ЗИТ не вызывала существенных изменений.

При ЭИТлФ наблюдался быстрый и выраженный стимулирующий эффек1 с длительностью на менае 14 суток при,сниженной розеткообразующей в фагоцитарной активности полинуклеаров. При. этой, существенного увеличения исходно сниасонного' числа-нейтрофилов крови не наблюдалось, что обусловило меньший прирост АФП, чац при ЭИМдц, Возможно ею связано с миграцией нейтрофилов в ыикроциркуляторное русло, и í.jPOhtho, далее, в очаг поранения йод действием фактора угнетения миграции ней^роуилюв, содеркащьгося в препарате (Вахромеева Н.С. и др., 19Б6).. Ка;: было показано в наших исследованиях, снижение числа полинуклеаров ясслз ШТлФ в венозной крови сопровождалось ас-BüflflHMSM его в капиллярной. В отличие от ШОТдц, при ЗИТлф наблюдался выраженный стимулирующий эффект'при сниженной активности

комплемента сыворотки крози и его Сд-компонента. Такии образом, проведенные исследования показали, что ЭИТвд является методом ур~ гзнтчой иммунокоррвкдии широкого спектра действия, в тон числа у болышх после. имуносупрессивной терапии.

Имыуноиодулирующиа эффекты адоптивной УФ-иимунотерапии

Имыуяомодулйрующае действие "АУФИТ изучено у 20 больных ракой ЛОР-органов. .Химиотерапия больным этой группы не проводилась, 4 больных.получали'лучевую тэрапив за 2-4. кесяца до ШИТ. При недостаточности клеточного ¡шмувитета на 1-е сутки поело АУФИТ наблюдался быстрый 'симулирующий зз^ект с достоверным увеличением и в ряде случаев - нормализацией практически всах исследованных показателей. Насколько медленнее была реакция активных Т-лимроцитов, нормализация которых отмечалась к 7-м суткам после процедуры. Количество Т-хелперов нормализошвалосъна 1-е сутки после АУФИТ ц не имело тенденции к сникенин до 7-х суток (табл.б). При анализе динамики

. - ... Таблица 6

Динамика низких показателей' субпопуляций Т-лимЬоцитов . при АУФИТ .

■ М. + m

Показателе.-' уроки доследования •до АУФИТ 1-9 сутки- 7-е сутки ¡Здоровые доноры

в ц'сл "55,5+4,1 . 720+50. 74,8+3,2xx(7i,2) 47,5+3,4 (22Д) '■1С0'7+Х53х(66,7) 6.91+20 (33.3) 55,5+30919+95 • 70,9+1,2 1346+85

СД4+-лфц,, % в мкл . 32,6+^5,' 472+48' • '43+8,3 х ' 738+77хх 47+2,бххх. 784+61хх 44,8+2,4 850+91

Сй8+-лфЦ., % .в мкл 43,6±1,8 ,674+48 Б5+3,зх(50) 51+3,8х(50) 660+50х 37,5+2,4Х(50) 29,5+2,6 45+2,4(50) 598+45(50) 490+78 631+23х(50)

0, Б8+0, I I,2S+C,I2X 1,2S¿0,15х 1,63+0,09

Примечание: для СДй+-л.;|Ц - высокие показам ли. Сц.такна табл.1.

исходно повышенного **исла Г-супрессоров оказалось, что достоверно снижалось в 50% случаев посла АУФИТ юлы:о относительное их количество, оставаясь при этом выше контрольного уровня. Абсолютное число СД8+ -клеток было достоверно увеличено на 1-8 сутки у всех больных, а на 7-е - в 50$ наблюдений. Возрастание числа как хелпер-ных, так и супрессорных Т-клеток приводило к тому, чю суммарное число иымунорзгуляторных с-убпоауляцим превышало число общих Т-кле-кок. Этот факт свидетельствует о наличии большого числа Т-лимфоци-- тов с фенотипом СД4+ОД8+, присущим тимоцивам, что подтверждалось выраиенным приростом как исходно низкого, так и умеренно повышенного числа ауто-РОЛ. В то не время достоверного устойчивого увеличения СД5+-лфц после АУФИТ на происходило. Известно, что СДЗ-ашиген появляется на мембране в процессе онтогенеза Т-клетоя позднее Е-ро-цептора. Возмокно, вследствие поступления в кровоток в основном незрелых Т-клеток! не наблюдалось существенного снижения числа инверсий теофиллинового теста посла АУФИТ. Таким образом, АУФИТ является менее физиологичным способом коррекции Т-звена,.чем ЭИФТдц и . особенно ЭИТпф, что, однако, не отменяет его достоинств, как метода ;ургентной стимуляции клеточного иммунитета. На 7-е сутки после АУФМ ряд показателей функциональной активности Т-клегск (экспрессия Е- в СД5- рецепторов, ТФР-РОЛ) возвращался'к первоначальному уровню или имел тенденции к снижению по сравнении с уровнем на 1-е сушки после процедуры, т.е. длительность стимулирующего эффекта АУФИТ в целом, короче, чем ЭИТлф и ЭИФТдц. При активации клеточного иммунитета АУМТ оказывала избирательное иншбирующее действие на количество активных Т-лимфоцнтов при определенной степени его повышения (относительное число - более W». абсолютное - 23% от средненорцативно го уровня), а такие на количество Т-хелперов. При этом достоверно увеличиваюсь сниженное число Т-супрессороа. Сутрессивный эффект АУФИТ наиболее полно проявлялся к 7-м Суткам после процедуры.

При анализа действия АУФИТ на гуморальный иммунитет выявлено иымунокорригирущвв действие процедуры на уровни Щ .

АУЭКТ не увеличивала число нейтрофилов крови при исходно низко1 их количестве, но при этом оказывала быстрый и выраженный стиыу-лнрузщил эффект при нодостаточности.розеткообразующал и фагоцитарной активности нойгро^илов. Здесь так из на 7-е сутки в 66,7j6 случаев «осолатное число полиаафицных нейтроушлов возвращалось к исходным значениям, т.е. стимулируюдве действие АУФИТ на нейтрофилькое звено бы^о в ряде случаев короче, чаи при ЭИФТдц и ЭИТлч. Нь 1-е сутки

после АУФИГ нормализовывалесь исходно сниженная активность комплемента и его Cg-компонента, удерживаясь на достигнутом уровне в течении срок? наблюдения. Таким образом, АУФШ может быть рекомендована в качестве метода ургентной иммунокоррекции при недостаточности клеточного звена иммунитета и неспецифических факторов защиты, однако,он является менее физиологичным и уступает по длительности действия ЭИ^Гдц и ЭИТлф.

Иодуномодулицующие эффекты адоптивной лазерной иммунотерапии

Им1фгномодулирующее действие МИТ изучено у 18 больных раком . ЛОР-органов. Химиотерапию больные этой группы не получали. 5-ти пациентам проведен i¡ypo лучевой терапии за 4. месяца до МИГ. При анализе действия МИТ на клеточный юда^нитет -было показано, что при этом методе воздействия происходит в основном коррекция функциональной активности ИКК (экспрессия рецепторов, реакция в нагрузочных тестах), как при исходном снижении, так и повышении ее. При недостаточности клеточного иммунитета существенного увеличения фактического содержания еубпоцуляций Т-лимфоцитов (абсолютных значений показателей) в 1фови не происходит; Более того, на 1-е сутки после МИТ в ряде сдучаев наблюдалось достоверное снткение показателей клеточного иммунитета. Основные изменения в Т-звене наблюдались на 7-е сутки после, МИТ. В эти сроки отмечено максимальное увеличение полиаффинных Т-лимфоцитов, происходят однонаправленные сдвиги большинства других показателей, имеет тенденцп к снижении частота инверсий теофеллинового теста у больных с инверсной реакцией Т-лимфо-цитов на теофиллин. К 7-м суткам также нормализуется исходно повышенное число ауто-РОЛ. На 1-е сутки после МИТ у всех больных достоверно снижалось исходно высокое число Т-супрессоров, однако, до 7-х суток этот эффект сохранялся только в 50% случаев. При активации клеточного иммунитета МИГ оказывала преимущественное ингиби-рующее действие на уровни общих.Т-клеток и "нулевых" лимфоцитов, в 43,9$ случаев ингибирувдее действие процедуры распространялось и на исходно низкое количество Т-супрессоров. Следует отметить так же вариабельность действия АНИТ как на низкие, так и на высокие показатели клеточного иммунитета. Таким образом, проведенные исследования показали, что МИГ, в отличие от вышеописанных экстракорпоральных методов имцунокоррекции, не ыо;кет быть использована для ургентной коррекции клеточного звена имьщ'ннтета.

Действие МКТ на 3~.п;тЪоцти также ня!более полно проявлялось на 7-е сутки после процедура (табл.7). В..раг.(?кность стимулпру.о-дего

Таблица 7.

Динамика низких показателей гуморального иммунитета при. АНИТ

М i»)

Показатель

ЕМ-РОЛ

в мкл

Сроки исследования до" МИТ:

1-е сутки

Здоровые У-é "сутки" доноры h= 25

8+1,2 16,8+2,9**166,7) 13,2+2,8х 14+0,3

325+31

' 8 + 2,5 (33,3) 140+22 287+41ххС63,б) 233+50х

85+20х (36,4>

Щ ь .8,5+0,9 II,6+1,2** 14,3+1,3х* .. 12,8+2,2

^•М, г/л 0,5+0,09 0,84+0, Iх ■ 1,1+0,Iх 1,3+0,12

. Уу, А, г/л 1,2+0,1 2,2+0,3х

2,38+0,13х 2,2+0,07

Примечание: см. табл. I. •

эффекта АЛИТ в отношении В-лимфоцитов уступало таковоцу при ЭИТлф, но, по выраженности действия на уровни иммуноглобулинов МИГ превосходила остальные изученше методы экстракорпоральной коррекции им« цунитета. Сниженные уровни всех трех иммуноглобулинов достоверно увеличивались уже на 1-е сутки после АЛИТ, к 7-м суткам стимулирующий эффект нарастал. На 7-е сутки наблюдалось ингибирующее действие процедуры при повышенном уровне В-клеток иЩ ^ .

IÚ1ИТ оказывала быстрое и выраженное стищ'лирующее действие при сниженной розеткообразующей и фагоцитарной способности 'полицук-леаров, не вызывая достоверного прироста их количества в крови, а также сталировала сниженную активность комплемента и .его С3«.компонента. Стицулирующий эффект сохранялся до 7-гс суток после процедуры. К 7-м суткам у всех больных с повышенной активностью комплемента проявлялось ша.унокорригирующее действий МИГ. При повышенной активности С3-компонента оно имело место в 58,3$ случаев. Таким образом, проведенные исследования показали, что МИТ является .методом ургентной иицунокоррекции при низких уровнях сывороточных иммуноглобулинов и недостаточности неспеци^ичеоких факторов защиты.

Исходя из принципа системного подхода (Лозовой В.П., 1988), а также концепции "мобилей" (Петров Р.В., IS87), следует отметить, что иммунная система на любое воздействие реагирует как единое целое. Изменения одного звена неизбе;кно влекут за собой сдвиги и перестройки структурно-функционального состояния других звеньев. Практическая медицина до настоящего времени не располагает средствами избирательной коррекции иммунитета. Однако, существует так называемая относительнал избирательность действия иыцуномодуляторов, т.е. они различаются по силе воздействия на различные клеточные субпопуляции (Арийский B.C., Е.А., 1991). Все изученные метода оказывали Еыражешое стимулирующее действие при сниженной функциональной активности ЙКК (степень экспрессии мембранных рецепторов, реакция в нагрузочных тестах). Различия касаются главным образом количественных показателе? клеточного иммунитета (содэрзкания лимфоцитов, общих Т-клеток) и А5П, который, являясь интегральным показателем фагоцитарной фушщяи нейтрофшов, зависит также от фактического содержания в крови- последних-. Преигудестводя в первом и во втором случае обладает ЭИэлГдц, что вероятно связано со свойством диуцифо-на усиливать процессы пролиферации лимфоцитов и грацулоцнтолоэза (Запускалова О.Б. и др., 1990). Зто обстоятельство делает ЭИФГдц при условии -индивидуальной ^вствительяосги к ддуцяфону методом выбора при нарушениях именного статуса, обусловленных лимфо- и нейтропенией. Однако, следует' иметь з пину, что выраженный •it-рост количественных показателей цри Э1ЙТдц имеет место только к 7-м суткам после процедуры. ПрегафщестЕО имеет ЭЩТдн и при сниженном количестве Т-суярессоров. Выраженный стимулирующий эффект при низких уровнях Т-супрессоров оказывает такие АУФЙХ. В то же время, №ИГ повышает и исходао высокие уровни Г-супрессоров, что очевидно, делает более целесообразным при исходно высоком количество sti:x клеток применение других способов коррекции иммунитета. По сумме сти-г/гулирувдих эффектов на клеточный иммунитет преимущество имеет 3!ГГлф, являясь также наиболее физиологичним способом коррекции Т-звенп.01ГГлф не вызывает такого выраженного количественного прироста клеточных субпоцуляций, как ЭИ5Т;д, но ее эффект в отношении количественных показателей наступает быстрее. Таким образом, как наиболее онагры!1 и физиологичный метод им-фтокоррекцяи слезет ть методом

выбора при недостаточности клеточного тадштета. ЭИГлф - метод вы- • бора так же при дефиците В-лимфоцитов. Учитывая, что по вцратеннос-ти стимулирующего э^феета цри низких уровнях Уд- А ЭИГлф почти не уступает ДЛИТ, а таюке вызывает повышение уровней и М и стимулирует неспецифические'факторы защиты, ЭИГлф следует признать оптимальным методом ию^унокоррекции при комплексной недостаточности всех трех основных звеньев иыоднктета. При низких уровнях сывороточных иммуноглобулинов методом выбора является МИГ. Все изученные методы экстракорпоральной иммунокоррекции, за исключением ЭИЯСдд, оказывают выраженное иммуномодулирующее действие на систему комплемента. Ингибирующее действие на активированное клеточное звено иммунной системы наиболее выражено цри ЭЩГдц и АУЗЙГ, на гуморальное - МИ'Т. Указанные эффекты следует иметь в виду при установлении показаний к экстракорпоральной иммунокоррекции с учетом'конкретных нарушений именного статуса. В перспективе они могут быть -использованы в клинике для экстракорпоральной имьщшосупрессии при аутоимцуншх заболеваниях и трансплантации органов.

ВЫВОДЫ

1. Исследованные методы цитафереза с экстракорпоральной обработ. кой лейкоцитов диуцифоном (ЭШГдд), лёйкинфероном (ЭИГлф), лазерным (АЛИТ) и ультрафиолетовым (АУШТ) излучением после однократной процедуры оказывают быстрое (за I сутки) и устойчивое Хот 7 до 14 суток) стицулирующее действие при вторичной иммунологической недостаточности, которое проявляется в различной степени выраженной активацией клеточного и гуморального иммунитета, а также неспецифических факторов защиты.

2. Им:лу н о с ? к му лиру вке е действие изученных методов адоптивной иммунотерапии отличается рядом особенностей:

а) ЭИЗТдц оказыьает наиболее выраженное стицулирующее действие на количественные показатели иммунокомпетентных клеток при условии индивидуальной чувствительности к препарату и независимо от нее повышает функциональную активность нейтрофилов и уровни сывороточных им-уноглобулинов ^ и. М;

б) ЭИГлф обладает наиболее широким спектром иммуностицулирующд-го действия, максимально выраженной способностью корригировать соотношение субпоцуляций иммунорегуляторных 1-клеток и является методок выбора при недостаточности клеточного иммунитета и количественном дефиците 3-лимфоцитов.

в) АУШГ вызывает сталирующий эффект при недостаточности клеточного иммунитета, иеспецкфических факторов защиты и низких уровнях сывороточныхи "J<f М. К 7-м суткам после процедуры функциональная активность иммунокомдетентных клеток имеет тенденцию к снижению;

г) спекулирующее действие АЛИГ при недостаточности клеточного иммунитета касается в основном функциональных и в меньшей степени количественных показателей. АПИТ - оптимальный метод иммунокоррекции при низких уровнях сывороточных иммуноглобулинов А, М, .

3. При повышенных к нормальных показателях иммунного статуса ЭИШГдц оказывает наиболее выраженное ингибирующее действие на 1-е сутки, АЛИТ и АУфИТ> к 7-м суткам посла процедуры. ¿эЯствиэ ЭИТлф при повышенных иммунологических показателях является икмунокорриги-рующим с тенденцией к их стимуляции на ?-е сутки- после процедуры.

4. Показано, что действие ЭШГдд на клеточный иммунитет ин виво прогнозируется по изменению субпопуляции ауто-РОЛ при обработке лей-кавзвеси диуцифоном ин витро. йэйствие ЭИТлф на Т- и В-звенья иммунитета прогнозируется по изменениям экспрессии СД4, СдЗ и Ш маркеров лимфоцитов и имцунорегуляторного индекса при обработке лейко-звеси лейкинфероном,

5. Изученные экстракорпоральные методы оказывают разнонаправленное действие на иммунную систему в зависимости от ее-угнетения или активации и являются методами ургентной иммунокоррекции при вторичной иммунологической недостаточности Они обладают относительной избирательностью действия на различные звенья иммунитета, в связи

с чем-могут быть использованы для целенаправленной коррекции иммунных нарушений.

ПРАКТИЧЕСКИЙ РЕКОМЕНДАЦИЙ -

1. Для определения иммунологических показаний к применению изученных методов экстракорпоральной имьунокоррекции (ЭИЗТдц, ЭИТлф, АЛИГ и АУЗЙГ) следует осуществлять комплексную оценку имцунного статуса пациента в единстве клеточного, гуморального иммунитета и не-слецифичесдах факторов защиты.

2. ЭИЗГдц показана: -

- при недостаточности клеточного звена иммунитета при условии индивидуальной чувствительности лимфоцитов больного к диуциф^лу в тзсте ауторозеткообразования. При проведении плановой гмцунокор-рекции ЭЛЗГдц - метод выбора у больных с недостаточностью Т-лзени, преимущественно обусловленной лимфопенией.

- при недостаточности нейтрофильного звена систеыы неспецифических факторов защиты, в том числе, после имцуносуцрессивной терапии. ЭИФГдц „ метод выбора при низком АФП.

3. Определение ин витро индивидуальной чувствительности больтй к диуццфону целесообразно проводить не ранее 27-го дня после окончания имцуносупрессивной терапии. ЭИШТ,вд следует считать показанной для коррекции Т-авена иммунитета при увеличении субпопуляции ауто-РОЛдц в 2,5 и более раз по сравнению с контролем. Время инкубации лейковзвеси во время процедуры соответствует времени максимального прироста ауто-РОЛдд в предварительной пробе ин витро.

4. ЭЖлф показана: '

- при недостаточности меточного звена иммунитета, в том числе после и ыму н о су пр е с с и вно й терапии. ЭИГлф - метод выбора при необхода; мости быстрой имвднокоррекции;

- при недостаточности В-эвена иммунитета и низких уровнях ^ А!

- при недостаточности неспецифичесних факторов защиты (нейтро-филы, система комплемента); нарушение процессов миграции нейтрофи-лов в микроцирнуляторное русло;

- при комплексной недостаточности трех основы^ звеньев ш.щу-кологической защиты.

5. Учитывая, что быстрое действие ЭИГлф может не проявляться

у отдельных больнкх, следует проводить предварительную пробу с цре-парат'м ин витро с определением акспрессии СД4, СДЗ, ЕМ - рецепторов и со отношения СД4/СУЭ. ЭИГлф следует считать показанной для коррекции клеточного иьеднитата при изменениях числа СД4+ «. и СДВ+-клеток • на 10$ и увеличении СД4*/СДЗ+ в 1,5 раза и более по сравнению с исходными показателями. При увеличении Щ*Р0Д в 154 раза и более по сравнению с контролем ЭИГлф следует считать показанной для коррекции 3-звена.

6. В качестве дополнительного теста для прогнозирования иммунологической эффективности ЭИВГдц и ЭИТлф следует использовать определение прироста ин витро субпопуляции ауто.Р0Л£" . Индукция ин витро ауто-РОЛ^1 отменяет стимулирующее действие на клеточный им-вднитет и'/ДГдц и снижает выраженность и длительность эффекта ЭИГлф

7. АУйИГ показана:

- при недостаточности клеточного имвдкитета со снижением коли чества как хелперних, тик и супрессорных Т-клеток,

- низкие уровни $ ,

- недостаточность неспецнфлческих факторов задиты.

3. А,1!7Г показана:

- при низ.ж уровнях сиворогочньк нмодноглобулкнов А, ,

- при недостаточности неспецифических факторов защиты. 9. В процессе экстракорпоральной иммунотерапии необходимо контролировать наступающие сдвиги в иыьунном статусе посредством осуществления еженедельного мониторинга тех звеньев, на которые непосредственно оказывается или может быть попутно оказано воздействие. .

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ I» Опыт использования экстракорпоральной коррекции иммунной системы в лечении ЛОР-онкологаческих больных.// Бзстн.оторинолар. -1990. - JÍ 5. - С.8-12. ССсавт. Ольшанский В.О., Дмитриев A.A., Ако-лян Р.Г. и др.).

2. Адоптивная лазерная иммунотерапия-и фотодинамическая терапия в ЛОР-онкологии.// ВесТн.оторинолар.- 1990. - 1? 5. - С.3-8, (Соавт. Антонив В.Ф., Дмитриев A.A., Дайхес H.A. и др.). .

3. Клинино-имадунологачаская оценка экстракорпоральной обработки лейкоцитов в реабилитации иммунитета при злокачественных новообразованиях. // В сб.: Реабилитация иммунной системы. - Цхалтубо. -

1990. - С.85. (Соавт.Дмитриев A.A.,Дайхес H.A., Сускова B.C.).

4. Цитаферез, как метод иммунореабилитацки у ЛОР - онкологических больных. // В сб.: Реабилитация имцунной системы, Тез.II Me лсд. сит. -Цхалтубо. - 1990. - С.85-86 (Соавт.Дахес H.A., Валеева Н.З., Елец В;И.).

5. Опыт использования адоптивной лазерной иммунотерапии в ЛОР-онкологии. // В сб.: Новое в лазерной медицине и хирургии. Тез.докл. Йезд.кснф.-Лереяславль-Залесский. - 1990. - С.249-251. (Соавт. Дайхес H.A., Кэсарев A.B., Абдиев O.E., Давудов Х.Ш.).

6. Комплекс нал имьф'но коррекция препаратами лейкинферона в профилактике и лечении инфекционных осложнений у больных злокачествен-ньз.ет оцухоляда верхних дыхательных путей. // Тез. докл. IX Бсес. сиш. по целенаправленное изысканию лекарственных веществ. -Рига.

1991. - С.56. (Соавт. фзнецов В.П., Беляев ДД.„Дайхес H.A.).

7. Цитаферез, как метод коррекции вторичных имцунодефицнтных состояний. // В сб.: Новые медицинские и технические аспекты экстракорпоральных методов и перйтонеального диализа. - Москва. - 1991. -С. 106-107 (Соавт, Дмитриев-A.A., Дайхес H.A.)..

8. bow inteaoive laser stirauletion ia treating patients with the secondary iramuuodeficite of malignant systematic genesis.//Int. Conf. Proc. "Biomedical Optics'91".-Loa Anéeles, USA.-19S1.'-P.122.

( ItaitPiev A.A., Dajkhea Л.А., Uovclian S.L,, Tiracfeev A.3.)

9. Role of modulation of c-AMP levels in correction of henostn-sio disorders in patients with acquired byperlipidecaia and aeccnCnrj-

= 26 т

iasiu»oâtficiíscy.//GpgtT« ÏPfci ß0»» pftibophyeloloyf, Afcstr,-líoscou,-1991.-pp.123-124. Í Rtmoyltoh Ь.О., Gavrilov O.K., J?i»aech-koe V.J. et a}.)