Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммуномодулирующее действие магнито-лазерного облучения в норме и при некоторых видах экспериментальной патологии

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ КУРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

на правах рукописи

ГОРЯИНОВ ИГОРЬ ИВАНОВИЧ

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ МАГНИТ0ЛАЗЕРН0Г0 ОБЛУЧЕНИЯ В НОРМЕ И ПРИ НЕКОТОРЫХ ВИДАХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ

14.00.36. Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск — 1994

Работа выполнена в Курском государственном медицинском институте

Научный руководитель:

— доктор медицинских наук, профессор А. И. Конопля

Официальные оппоненты:

— доктор биологических наук, профессор Л. Е. Сипливая

— кандидат медицинских наук А. М. Чухраев

Ведущее учреждение:

Российский Государственный медицинский университет им. Н. И. Пирогова, г. Москва

Защита состоится « июня 1994 г. в 15 час. на засе-

дании специализированного совета К 084.57.01 при Курском государственном медицинском институте (305033, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан » мая 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доцент

Г

4107000000—03 42В (03)—94

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время трудно найти область экспериментальных и клинических исследований, где бы не использовали луч лазера. Особенно широкое распространение получили методы лазерной терапии на основе применения ниакоинтенсивного лазерного излучения (Илларионов В. Е., 1990). Не вызывает сомнений клиническая эффективность лазерной и сочетанной ыагннто-лазерной терапии, при атом чаде всего лазер испольауется в тех случаях, где заболевание носит затяжной характер и стандартные лекарственные средства оказываются малоэффективными. При этом, однако, многие накопленные данные, посвященные изучению лазерной и магнито-лазерной терапии неоднородны, а порой и противоречивы (Гамалея Н.Ф. и др. ,1988; Куртенок Л. Р. ,1990). Это во многом объясняется опередзниеы практического использования лазерной терапии над ее экспериментальным обоснованием (Крюк А. С. и др. ,1986).

При многих формах патологии возникает нарушения тауноло-гической реактивности, характеризующиеся развитием гшмуиодефи-цитных состояний (¡Дуйкина Э. Е. ,1978; Быадэк У. Н. ,1982; Алексеева IIНи др. ,1991;Рагопеио Я ,1986). В связи с этил, одной из актуальных проблем медицины является коррекция данных нарушений иммунного ответа (Петров Р. Р ,1987; И&финский ЕС. и др. ,1987; Чучалин А. Ф. ,1989,- Земсков А. М. и др. ,1993). Многие применяемые в эксперименте и клинической практике нммуностиму.лят(}ры при одинаковых дозах и схемах лечения иогут оказывать у больных с одной и той же патологией совершенно различные не только по силе, но и по направленности эффекты ( ПокровскиЯ а И., и др. ,1989; Оролов ЕМ. и др. ,1990; Оцук Н. Д. и др. 1993). Это, соответственно, вызывает значительные сложности в вопросах их применения и диктует необходимость поиска и изучения новых аффеот вных и безопасных средств и способов иммунокоррекции.

- г -

с .«ним иа таких лерспективных методов является лазерное и еочетанное магнито-лазерное облучение (МЛО) (Борисова А. i£ , 1992; Илларионов В. Е. ,1992). Однако, при этом многие стороны механизмов, посредством которых реализуется иммунокорригирупций аффект лазерного излучения еще мало изучены. Практически отсутствует адекватное экспериментальное обоснование применяемых в атом отношении доз лазерного излучения (Крюк А. С. и др. ,1986). Остаются практически невыяснеными вопросы эффективности соче-танного воздействия лазерного излучения и постоянного магнитного поля на иммунологическую реактивность в норме и патологии. Такое положение затрудняет развитие указанного ,направления икмунокоррекции и делает актуальной проблему исследования влияния ИГО на иммунную систему.

Целью работы бьио изучение формирования иммунного ответа, индуцированного Т-зависимыми и Т-независииыми антигенами, при воздействии ШЮ в условиях нормы и патологии, характеризующихся развитием вторичного иммунодефицита.

Освовньеэ задачи работы: 1) изучение закономерностей влиянии ШЮ на развитие гуморального иммунного ответа (ГИО) и роакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), индуци-роааячшс Т-вавнсшями антигенами - эритроцитами барана (ЭБ) и бггсьим сывороточнш альбумином (БОА) и Т-независимым - бакте-лкпсподис8харидом (ЛИС); 2) установление роли селе-зе^о; в реализацией иммуномодулирупцего действия ШЮ; 3) вьив-iajc:¿ ролл гумздаядоык факторов сыворотки крови и эритроцитов перлфещч,^; 5 кровь'в реализации иммуномодулируицэго действия ЫЛО; 4) из;"" :a«r> a?. ШЮ на иммунологическую реактивность на ЗБ в yc.tíUHX ;.-;.?сдогии (острый панкреатит, интенсивная физическая ньгр^

Новые научные 'ЖЫ-.-к*выносимые ьа защиту. Сочетанное воздействие на орг,"и®'.'К . WO. стимулирует развитие иммунного

- 3 -

ответа на Т-зависимые антигена

Спленоциты или эритроциты интактных крыс после воздействия in vitro ШЮ, приобретает способность повышать иммунологическую реактивность на ЭБ у здоровых аллогенных реципиентов при пассивной переносе.

Обогащэнная макрофагами фракция спленоцитов животных, подвергнутых воздействию ЫЛО, выделяет в надосадочную жидкость иммуностимулирующий фактор(ы).

Развитие вторичного иммунодефицита в условиях экспериментального острого панкреатита (ОП) или однократной интенсивной физической нагрузки корригируется применением ЫЛО.

фактическая значимость. Расширены существующие представления о закономерностях формирования различных форм иммунного ответа при воздействии магнито-лазерного облучения.

Показана целесообразность использования а эксперименте магнито-лазерного облучения в качестве аффективного метода иммуностимуляции.

Экспериментально обоснована перспективность испытаний эффективности .ШЮ в качестве способа иммуностимулягди в условиях патологии, характеризующейся возникновением вторичного иммуно-дефицитного состояния.

Предложены и внэдрены "Способ стимуляции иммунного ответа" (N 1052-93,КГЫИ), "Способ иымунокоррекции при остром панкреатите" (N 1084-93,КГЫИ).

Апробация работа Основные положения диссертации были збсулдены на конференции молодьк ученых Курского государствен-юго медицинского (Курск,1992), на итоговой научной конференции Суре кого государственого медицине; jro института, посвященной ютуальным вопросам экспериментальной и клинической медицины и армации (Курск,1993), на научной конференции молодых ученых 'оссии "Здоровье и болезни человека на рубеже XXI . века"

■■ -. 47-

(Шсква, 1994), на соаыэйтиой. заседшти кафедр биологической химии и внутренних- -болезней N1 Курского государственного медицинского института.'(1994)..

Пу5дикации. Ib материалаы• ди'с с ё р тации опубликовано 4 работа

Объем и структура работы.-'- ДйСбёИация состоит иэ введения, обзора литературы (главы 1 и 2) ', ; материалов и методов (глава 3), результатов собственных исследований (главы 4-7), заключения, выводов и списка ли&ерэдуца.

Работа изложена на 138 страйицаз£ машинописи. Текст вкдхг:а-ет ?.£ таблицы, 1п рисунков, указатель использованной литературы, содержаний 188 источников отечественной и 41 источник зарубежной литературы.

С О ДЕР К А Н К Е ' Р А БОТЫ

штешды' й 'моды.'исследования

Исследования проведены на 1870 крысах Вистар массой 100 -200 г. Обьектаьа; исследования. слугаиш сыворотка и эритроциты крови, ткань селезенки.

• ШО проводил)! с использованием лазерного аппарата "Узор" Калужского радиолаыпового завода, инфракрасного диапазона с длиной волны 0,59 мкм, с импульсным режимом излучения с частотой 150 Гц. Средняя выходная ыощьность излучения не более 2 Вг. Время облучения на один сеанс задавалось с помощью реле времени и составляло 30, 60 или 120 сек. Постоянное магнитное поле использовали одновременно с лазерным излучением, магнитная насади? кретш;-; к излучателю и имела' напряженность магнитного поля порядка ЮЮ животным проводили на область

селезенки, печени ил;-; с^ег бедра 1, 2 или 3 раза с интервалом кюжду воздействиями .' . v. , пр-х-тавляя излучатель с магнитной

насадкой вплотную к облучаемой поверхности, доза облучения при атом на одно воздействие составляла 2*10^дж/см . Данные режимы чаще всего используются в экспериментальной и клинической практике при облучении паренхиматозных органов (Байбеков И. Ы. ,1991; Илларионов В Е. ,1992). В контрольной группе крыс только фиксировали за лапки для обездвиживания, в тех же временных параметрах, как и во время облучения.

В части опытов ^т 5-6 трехкратно облученных в течение 30,

60 или 120 сек крыс, получали спленоциты или эритроциты,

которые использовали для внутривенного введения в краевую вену

хвоста интшстным реципиентам. 1 мл взвеси спленоцитов в среде

193, содерхзярЯ 2»107 клеток/мл, вводили однократно, а 1 мл 6%

г

взвеси эритроцитов в среде 199, содержащей 8*10 клеток/мл, вводили 2 иди б раз с прамеаутком 21 ч.

ОП у крыс вызывали под гексеналовым наркозом, комбинируя перевязку протока поджелудочной галеаы, ветвей селезеночной артерии с »¡•эхяжггеской тразыой селезеночного сегызнта органа (Шалимов С. А. и др. , 1989).

Интенсивную физическую нагрузку создавали путем однократного 4-х часового плавания тоис с 4X от массы тела грузом в воде с температурой 29-31УС (Панин Л. Е. ,1983).

В качестве антигенов использовали Т-зависимые антигены -ЭБ в дозе 2*10 клеток на 1 кг массы тела животного и БСА в дозе 0,1 г на 1 кг и Т-независимый антиген - ЛПС 5. ^урГи 0-901 в дозе 0,5 мг на 1 кг массы тела. Интенсивность развития ГИО на ЭБ оценивали на 5-й день после иммунизации по количеству клеток в селезенке, образующих антитела (АОК) (Мальберг К., ' Зигль Э. ,1987), числу клеток, образу«лщ«х иммунные розетки с ЭБ (РОК) (Зауэр Х.,1987) и уровню антизритроцитарных антител сыворотки крови реакцией прямой гемагглютипации (Шльберг К. ,1987). Интенсивность развития ГИО на БСА и ЛПС оценивали на

- 6 - 'V : '-У

ö-fi и 8-й дни после иммунизации iio yffciái». .;ámkrea сывортки крови, определяемых реакцией неПрйыоА .гешргдзагяйаШи (Иебот Е. , Мийер U. ,1968; ЫальберГ К. ,1987)!: Реш*цию ГЗТ у крыс индуцировали введением кЬеногенных клеток (ЭБ) (Черноусов А. Д. и др. ,1979).

Донорамй сыворотки служили Ййтактйыб- или опытные крысы. Собирали пул сывордткя-от 6-6 однородных по опыту л(ивотных и' использовали для фракционирования или для определения иммуномо-дулируюцэй активности, для чего ее вводил^ внутрибрюшинно однократно одновременно -с анти^ейом интактньгм аггогендаым реципиентам из расче.а Б мл на 1 кг массы тела. Е&ЛКИ сыворотки крови разделяли солевым- методом, для чего исподозовахи 502 масшрние сернокислым аммонием (Кульберг А. Я! ,1968). Еипавшие в осадок бедки (ОБ) и оставшиеся в надосадке (нб) диализнровали в течзние 12-15 ч против 50-кратного объема 0,05 U фосфатного буфера (рН=7,2), приготовленного на 0,15 Ы Хлористом натрии и фракционировали на колонке, заполненной сефадексом G-150 или Q-100. Оракции белка собирали на коллекторе Диафрак Д-0,02 и. контролировали самопишущим регистратором ПУи-2. или на спектра-фотоыетре СФ-2G при длине волны 280 нм. Иммуномодулирующуа активность фршщий белков сыворотки определяли путем однократного, одновременно с ЗБ, внутрибрпцинного введения их в объеме, содеркаяем 200 мг белка на 1 кг шссы тела.

Надосадочную жидкость клеток селезенки (ШКО) получали по w-гюду, разработанному Прокопенко Л Г. и Конопля А. И. (1982). Цдя поддер:гакия стерильных условий использовался ламинарбокс ЛЕВ. Сплэнощхы 1шта:ггных и опытных животных фракционировали по способ1 стк и,;*<Ги:аа"?ь к стеклу (Подушкина Э. Ф. и др. ,1983). Спленоцигарл:-э белка цельной НККО, так и полученных фракций HXKCII (npujjtn'ií '-.^x) и ШГ'СН (неприлипающих), фракционировали на сефадедзе G-100. Пр^два^ихсльно НККС, НЖКСП или НККСН концент-

рировали в 10-12 раз с помощью полиэтиленгликоля R U. 40 кД.

Дяя оценки Ы. iL хроматографических фракций белков НЖКС или сыворотки крови, выделенных на сефадексах, определяли обьем выхода белков с известной k. И. (Детерман Г. ,1970; Остермзн Я А. ,1985). Концентрацию белка в сыворотке крови определяли биуретовым методом, в НЖКС и их хроматографических фракциях по Бредфорд, используя краситель Кушей (3-250 (Шишкин С. С. ,1982).

Иммуномодулирующую активность НЖКС, НЖКСП, НХКСН или их хроматографических фракций определяли путем их однократного внутрибркпинного введения интактным аллогенным реципиентам соответственно в дозе 5 или 2 мг белка на 1 кг массы тела, с одновременной иммунизацией ЭЕ

В части опытов от 5-6 однородных по опыту- животных получали эритроциты в культуральиую среду 199 и хранили при +4° С. Перед употреблением эритроциты центрифугировали при 400g, удаляли надосадочную жадность и верхнш лейкоцитарную" пленку. Полученный осадок эритроцитов ресуспензировали в среде 199 и центрифугировал". при 400g (описанную операцию повторяли не менее 3 раз). Присутствие лейкоцитов в суспе-гаии эритроцитов контролировали при микроскслирот.анни. • Полученные эритроциты подвергал: действию УЛО и течение 30, 60 или 120 сек. С этой цолыз 15 мл 51 ззгэси эритроцитов по1'.ашэди з кварцевые кюаеты, а сЕеху посоидли излучатель с магнитной насацкой, максимально приближая с-го к поверхности взвеси. СОлучешше эритроциты в виде 57. взвеси в среде 199 в дозе 1 ;лл, содер.таидЯ З^Ю* клеток/мл, вводили внутривенно в ¡сраеву» вену хвоста ¡штатным реципиентам дву-, или пятикратно с интервалом 24 ч, с иммунизацией ЗБ в последний день введения облученных яритроцлтов.

3 части опытов спеноцкты издактных крыс также, ¡сак и эритроциты, подвергали асэдейсткию ШЮ в течение 30, 60 или 120 сек. 1 мл взвеси з среде 199, содержащей 2*107 облученных

спленоцитов, вводили однократно внутривенно в краевую вену хвоста с одновременной иммунизацией ЭБ.

Статистическую обработку цифрового материала проводили путем йичислеЧпш средних арифметических значений и их стандартных оиибок. Достоверность различий средних величин оценивали с помоц&ю критериев Стьюдента и Внлкоксона-1!анна-Уитни.

результаты исслздований

ВЛИЯНИЕ ШО НА РАЗБИТИЕ ¡ШНУШОГО ОТВЕТА, ИНДУЦИРОВАННОГО Т ЗАВИСИЫЬШИ И Т-НЕЗАКЕИШМ АШИГЕНЛ}^!

Первоначально изучено влияние различных эгапозшшл 2оа-действия ШО при однократном, дву- и трехкратном облучении на форииргыапиз ГКО па ЭЕ. Установлено, что однократное воздействие НЛО в течение 120 сек сткыуллрует развитие ГШ на 33. С6 это:»' свидетельствузг увеличен:::; галнчества и^аунных AOIï и РОК селегенке :;рис, подвергнуты:: 1 раз воздействии ШЮ в течение 120 сег., сответстветю в 1,6 и 2,9 раза по сравнена с контролый-к^ jsiLOTHbMii (таблица 1). Однократное облучение: з "r:43¡,i'e 20 шш 60 сег. не оказывает ш.шуноыодул11пувцего эффекта! в .ovjnmc с. одяо1фаТ|гаго воздействия 1Ш0 s течение 120 сск, хде nrw~aji:ssciî нерз«;- чЕы;а.-юы1ый цас-изст1шуА:;рущ;п. a'44^*ST. ÀbV" i"*-'- '¿рсякратнсе ассдоистиио е течение 60 плк 120 пен с кнтарса-.й»: ¡.;е;'ду coshcoí:.-: '34 ч обладает сущэствсшаг:: кму < .яруя^гл дзйзтвлеы, ¡¡рп этой аффект более вцрагзн «pr. otiw'iw::-!:'. >.'¿отннх в течзннз 120 се;» Так, при т рефератном л е ••¡учоина 120 сек в их селеьекке оОиарузгзно

„-au.__лукки.. ¿Cit и РОК соответственно в 3,7 и 3,3 раз г,

Tjrrpsr • i,:;?антител в 1,8 раза по оравизюар с twbTpc^iCoti хр.чШсц zIílüirííx, • била • проведена только щ-f-H)'üi-..íi)_v-X , " oto» '.' kbsSfcjiee .чувствительной к

1золкцз 1. влияние МЯО на развитие Г И 0, индуцированного 35 г М £ а )

■ Условия спита Кратность воздействия НЛО Рении воздействия ЙЛ0(сек) Сэлезенка Кровь

Групп А0К РОК Титра Ат

1. Иммунизация 30 — — 25,2 * 3,4 39,0 £ 5.6 2,8 ± 0,2

2. Трехкратная фиксация — — 27,5 ± 3.9 48.3 г 5,9 2.9 £ 0,1

• 3. Воздействие НЛО 1 30 29,3 £ 4.9 45.3 1 4,2 3,1 £ 0,2

4. Воздействие МЛО ! 60 31,9 £ 5.6 30,1 £ 4,7 3,2 £ 0.3

5. , 6. Воздействие МЛО Воздействие МЛО 1 2 120 30 40.5 ± 4.3 Р!, 2<0,¿5 32.6 ± 4,7 111.7 £ 18,3 р!.2<о.оё 57,5 4 5,1 3,4 £ 8,2 3,3 £ 0,2

7. Воздействие МЛО 2 60 42.7 ± 5.1 Р{,3<0,05 126,8 ± 7,1 Р1,3<0.65 3,5 ± 0,3

8. .оздействне МЛО 2 120 40,8 ; Р.! 131.3 £ 6.8 Р1,3< 0.0ё 4,8 £ 0.3 Р1,3<0,й5

9. Воздействие МЛО ■ 3 30 43,6 г 8,5 р{,4<0.¿5 57,8 £ 4,2 3,3 £ 0,2

10. Воздействие МЛО 3 ВО 62,2 £ 7.1 Р1,4<0,05 141.9 1 12,3 Р1,4<0,05 4,5 £ 0.3-

11. Воздействие НЛО 3 120 92,2 ± 9,2 150,5 ± 13,1 Pi.4c0.oS 4,9 £ 0.3 Р1.4< 0,05

Примечание: в этой и последующих таблицах: 1.кавдаа средняя получена в опытах на 8-10 крысах; ¡¡.ЙЗЖ-тыс/оргэн: 3.)'0К-млн/орган; 4.Ат-1ов2; 5.Р-существеннэсть различий средних, цифра рядом с Р показывает по отношении к какой группе различия достоверны.

.....

воздействию ШЮ оказалась, йятителогенеза.

нежели продуктивная. , :

Развитие ГЗТ отличаетеиот ГШ йо свойствам Основных видов клеток и выделявши ими фшсгорав/. (иедуницин, Н. В., 1983.). Шэтому представляло интерес выяснить, как влияет воздействие ШЮ на развитие реакции ГЗТ, индуцированной ЭБ. Выявлено, что МЛО не только стимулирует формирование ГИО, но и ГЗТ, причем и в данном случае отмечен дозозависимый эффект.

Важно было установить; как влияет на иммунологическую реактивность раздельное применение лазерного излучения и постоянного магнитного поля малой индуктивности. Выявлено, что стимулирует развитие ГИО только лазерное излучение, предшествующе иммунизации, но гораздо менее эффективно, чем ШЮ. Постоянное магнитное поле, примененное как до, так и после иммунизации, не оказывает существенного влияния на формирование ПЮ, индуцированного ЭБ.

В последующих опытах установлено, что иммуностимулирующее действие МЛО сохраняется в течение 7 дней, а спустя 14 - 28 дней после облучения иммунологическая реактивность животных- на ЭВ не отличается ог интактякх крыс. Воздействие ШЮ на область селезенки оказывает с умственное влияние на иммунологическую реагсгпвность на Т-зависимае антигены (ЭБ или БОА), но не влилет на иммунный отб&'г, индуцированный Т-независимым антигеном - £ПС. V.

РОЛЬ СЕЛЕЗЕНКИ В СТИМУЛЯЦИИ ИММУННОГО ОТВЕТА В УСДОЙЛХ В'/ЗДЕЯСТЕИЯ ШЮ Сте -скь и х£ра:-гг*>р изменений иммунного ответа как в норме, так и в условиях патоло:ии определяется присутствием и активностью иммуномодулирухш:-: С ^сгоров, выделяющихся клетками селезенки (Прокопенко Л. Г. и ,1982; Конопля А. И. и др. ,1985).

- и -

Установлено, 4то введение в КрайеуЯГвеНу .¡¿вейга интактным рысам спленоцитов ашгогь.чных доноров, подвергнутых трехкратно-у воздействию ШЮ с проме*уткбм24 ч 6.течение 30, 60 или 120 ек стимулзфует развитие ГИО из ЭК Такими же свойствами бладают спленоциты крыс, подвергнутые воздействию ШЮ в тех же араметрах in vitro (таблица 2). ,

Таким образом, воздействие' ЦЙСУ.Ва клетки селезенки как in ivo, так и in vitro индуцирует появление у них иммуностимули-пащих свойств, проявляющихся при, пассивном, переносе интакткым шогенным реципиентам, причем выраженность-этих .эффетов ока-шась достаточно пропорциональна времени воздействия, которое ¡ределяет суммарную дозу облучения.

Так как, иммуностимулирующее действие сленоцитов опосреду-ся гуморальными факторами, ввделявдймися этими клетками, то ла изучена роль спленоцитарных субстанций в реализации им-ностимулирующвго действия ЫЛ0.

Установлено, что НЖКС интактных крыс иммуномодулирунцэй гивностыс ie обладает. Введение же НйКС крыс, подвергнутых эдействию ШЮ 30, 60 или 120 сек, интактным животным в ачительной мере стимулирует ГИО, индуцированный ЭБ, причем )аявнность этого эффекта на введение НЖКС крыс, подвергнутых действию .ШЮ 120 сек, оказалась сущэственно выше, чем при ¡дении НЖКС от животных, облученных 30 и^и 60 сек. Аналогичен свойствами обладала НЖКС, полученная после инкубации в :ение 4 ч при 37еС спленоцитов, подвергнутых ШЮ in vitro.

Результаты этих опытов позволяют предположить, что воа-ствие ШЮ приводит к развитию метаболических сдвигов в еноцитах, следствием которых является выделение ими иммунос-улируюцих соединений, концентрация (или активность) которых «сит от дозы облучения.

Так как, нами была изучена суммарная иымуномс ^улирушдя

Таблица Влияние спленоцитов крыс после воздействия МЛО на развитие ГКО на ЗБ ( Н ± ж )

¡Групп ! Условия: опыта Режим воздействия МЛО Ссек) на сплено-циты или их доноров Й0К РОК

1. Иммунизация 3F — 12.0 ± 2.8 32,1 ± 6.1

2. Введение спленоцитов интактнкх крыс — 14.Й + 2.S 38,3 ± 6,7

3. Введение спленоцитов крыс, подвергнутых воздействию МЛО 30 26,2 i 3.7 Р1,2<0,05 47,8 ± 5,2 Р1,2<0,05

4. Введение спленоцитов крыс, .подвергнутых ВОЗДЕЙСТВИЕ НЛО 00 81,3 1 11,8 Р1,2<0,05 03,2 ± 3.3 Р1,2<0,05

5. Вв-дение спленоцитов крнс, подвергнутых воздействии МЛО 120 103,3 ± 21,5 Р1.2< 0,05 93,1 ± 10,2 Р1,2<0,05

5. Введение спленоцитов, подвергнутых in vitro воздействии МЛО 30 27,4 í 4.S Р1,2<0,05 58,3 ± 5,9 Р1,2<0,05

7. Введение спленоцитов, подвергнутых in vitro воздействию МЛО 60 3\3 ± 7.6 Pi.2<0,05 72,4 ± 17,2 Р1,2<0,05

8. Введение сппэнош'тор, подввргнуткх in itro воздействия НЛО 120 94,2 ± 13,8 Р1,2.6,7<0.05 112,7 ± 14,7 Р1,2,6.7<0,05

- 13 - ■

активность 1ПКС, возник вопрос о гомогенности или гетерогенное ти в функциональном и фиги-ко-хкуическом отношении белков НЖКС. Рэсзнию этих аадач посвящены последующие серии исследований.

При разделении на сефадексе G-100 белков Н8КС icpuc, подвергнутых воадей"ркю l-.'O, подучено три фракции: 1-я выходила в свободном сбзьецэ -Í5-V5 ил (около 60Z бедка) и содержала белки сЕИ бохзе 100 ¡<Л, Н-я выходила в объеме 110-130 мл (окол 10% бел!«а) ц содержала белки с ЕМ. 60-80 иД и III-я фракция выходит з обье>;э 166-205 мл (огало 302 бежа) и солергала беге« Ч14 J0-S0 кД. Установлено, что кммуносткмули-pj'rz&ii акуивностьэ облздг.ет П-я фракция, содергаязя в основном еол« с а и. 60-80 «д.

На основании этих даякых tsazno сделать вывод о том, что воздействие 1'ЛО кндущфус? способность сплекоцитов к гаделенно гуморального $з$ясра (^шггороз) о 1L'% 60-80 кД, стгофлируктдрго развитие ГКО у ютагств пллогетгех рчцкпиэнтоа при пасспч'оч переносе.

Взгзю счю выяснить - кэкпе клетки се.гезешга звделяот иыиупост:с4ул:грук^59 субетсзцки. Установлено, что сяособкостьп ускорять (1ср^:рогс:гпэ ГГЮ аа С3 обладает щ^зж крив now-! Еоздейстзкл lira гз сглзгс-.ге с? 1ГЯСЕ При хро>зтсгрг,/п!. ЯЗ!СП ма сефздггае 3-1С0 увтггоахэво, что гааунсстга«улирун^й фшстср(н) гадает !LÜ 60-CQ т.н. кделяотся со II фракцией, содерлг.-нгЧ сспозиюн баг2! с II li 60-80 ¡сД.

Tascai сбргзсм, Еоздейстапэ 1'ЛО на область иукунокомпчтент-5CÍO сргс:га •• coz-згенку, приводит г: изнзнеиию и.\я.!унолсгической :еалт.чт;кост:! организма, в целом характеризующейся ускорением ¡армирования ГКО -на Т-аависгвдо антигены. По-видимому, не гррлэдзпея роль в этом играет иммуностимулирующий фактор (факто->ji) 11Н 60-80 кД, выделяемый клетками селезенки, обогащенными !.^рофагаыи.

НШШЬ РОЛИ ГУМОРАЛЬНЫХ ФАКТОРОВ СЫВОРОТКИ и ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ В РЕАЛИЗАЦИИ ИШУНОМОДУЛИРУЮ-ЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ШЮ

Известно, что изменения иммунологической реактивности на '.кэо- и эндогенные антигены как норме, так и в условиях патологии в значительной степени зависят от наличия и активности гуморальных иммуномодулируидо сывороточных субстанций (Прокопенко Л. Г. и др. ,1983; Самойлова К. А. и др. ,1086; Конопля А. И. и др. ,1988; Levitt D. и др. ,1984.)

В наших опытах установлено, что введение сыворотки крыс, подвергнутых 3-х кратному с интервалом 24 ч воздействию ШЮ в течение 30, 60 или 120 сек на область селезенки, аллогенным интакгным реципиентам стимулирует у них формирование ГИО на ЭБ. Об этом свидетельствует повышение иммунных АОК в опытных группах по сравнению с контролем (введение сыворотки интакгных крыс) в 4,3; 5,2; 5,4 рай, а РОК - в 2,6; 2,9; 2,9 раза соответственно.

Учитывая, что конечное тшуиомодулирующэе действие сыворотки определяется соотношением и активностью содержащихся в ней стимулирующих и супрессируюзди субстанций, была предпринята попытка фракционирования белков сыворотки itpoBH крыа, подвергнутых воздействию ШЮ.

Первоначально белки сыворотки кроьн экспериментальны"}: крыс фракционировали солевые методом, ticr.cutaya 50% насыщение сернокислым аммонием. Установлено, что белки сыворотки крови крыс, подвергнутых воздействию ШЮ, выпадающие в осадок при 602 насыщении сернокислым айканием (ОБ), об адаюг юаауносупрессор-ными свойствами, в отличие oí ОБ интактных животных. Введение, оставшихся после насыщения сыворотки сернокислым аммонием в надосадочной .жидкости, НБ илтэктныы аллогенным реципиентам,

наоборот, стимулирует у передних формирование ГИО, индуцированного ЭБ.

При,. гель-хроматографии солевых фракций сыворотки на сефа-дексах G-150 и G-100 иммунос ул ре с с ирующий фактор выделяется с белками 11 фракции ОБ, имеющими М. М. 60-80 кД,, иммуностимулирующий выходит с белками 11 фракции НБ, имеющими М. М. 20-30 кД, причем последний превалирует в цельной сыворотке, либо количественно, либо за счет большей активности. Не исключена возможность наличия блокирующих агентов, не позволяющих проявлять активность иммуносупрессирующим соединениям в цельной сыворотке.

За последние годы появились работы, свидетелЬС?вукШе об активной роли эритроцитов в регуляции гуморального иммунного ответа (Козлов Е А. и др. ,1984; Прокопенко Л. Г. и др. ,1985; Сипливая Л. Е. 1992). Это послужило основанием для изучения иммуномодудирущих свойств эритроцитов экспериментальных животных после воздействия ШЮ.

Установлено, что дву- или пятикратное введение эритроцитов с интервалом 24 ч, полученных от доноров, подвергнутых трехкратному воздействию ШЮ в течение 120 сек, стимулирует формирование ГИО на ЭБ. Дву- или пятикратное введение эритроцитов от доноров, подвергнутых трехкратному воздействию ШЮ в течение 30 или 60 сек, не оказывает заметного влияния на развитие иммунного ответа на ЭБ у аллогенных реципиентов. Эритроциты крыс, подвергнутые in vitro облучению в течение 60 или 120 сек, приобретают свойство стимулировать формирование ГИО . при дву-или пятикратном их введении с интервалом 24 ч. Наиболее эффективным оказалось пятикратное введение эритроцитов, облученных in vitro в течение 120 сек. Об этом свидетельствует увеличение иммунных АОК и РОК в селезенке опытных животных соответственно в 3,4 и 2,8 раза по сравнению с контролем

- 16 -

(введение эритроцитов интактньос крыс).

Результаты проведенных экспериментов показали, что аритр циты животных, подвергнутых воздействии Ш10 in vivo или vitro, приобретают способность стимулировать ГИО на ЭБ при введении здоровым аллогенным реципиентам, причем эти свойст эритроцитов усиливаются пропорционально суммарной дозе облуч иия.

По-видимому, это связано с тем, что под вс.с^йствием Ü происходят изменения антигенной структуры мембраны эритроцито приводящие к появлению у них способности взаимодействовать иммунокомпетентными клетками, вызывая усиление последивши и мунологической реактивности на ЭБ, посредством выработки ант геннеснецифических ииыуностиыулируюгдих субстанций.

1ШМУН0К0ГО1ГИРУЙ1ЩЕ ВЛИЯНИЕ ШЮ В УСЛОВИЯХ ОСТРОГО ПАНКРЕАТИТА И ИНТЕНСИВНОЙ СИЗИЧЕСКТЛ НАГРУЗКИ.

Одним из важных свойств иммуностимуляторов является проя ление высокой активности в условиях патологии, характеризую^ ся развитием устойчивого вторичного иммунодефицита (Лазаре Д. Н. и др. 1985), поэтому в дальнейших опытах нами иэуче влияние Ш10 на развитие ГИО, индуцированного ЭЕ, в услови экспериментального 0Г1 и однократной интенсивной физической на рузки. В налюй лаборатории установлено, что эти еостоян характеризуются развитием вторичного иммунодефицита (Коноп А, Я , Омелюсик И. Л. ,1985; Киндрас а Н и др. ,1989; Быстро НА. ,1990).

Установлено, что ч^рсз 24 ч или 7 суток после перевяз протока, сосудов и механической травмы сэлеаеночного сегмен под»£лудочной келезы существенно снижается формировании ГИО ЗБ. Особенно резко выражена иммуносупрессия через 7 суто Однократное облучение в течение 120 сек через 24 ч по

■ •"- 17 -

геревязки протока; и. сосудов ;,Г'°Д«элуДОЧ#оЧ железы не вЛЙйт на >азвитие ГПО на ЭБ. Дву- «•'трехкратное воздействие ШЮ через 24 [ после операции, когда к.сауниэацшо проводили одновременно с ервым сеансом УЛЭ, корригирует нарушение ГИО, вызванного азвитием ОП, восстанавливал идеологическую реактивность fía Б до уровня контрольной-группы (введение антигена).

Наибольшей эффективностью Обладает ШО в отногсйнНй ишуно-ynpsccrai, вызываемой перевязкой протока, сосудов и механичес-эй травмой сел&зекочного' сегмента под.гэлудочной .железы, прове-гкное 2 или 3 раза по .120'сек на сеанс, начиная с 5-х суток зеле операции. Соответствующе показатели (ЛОК й РОК) у крыс с 1, подвергнутых двукратному воздействию ШЮ увеличивались в 7 и 2,2 раза, а у животных, которьгм ШЮ проводилось трехкрат-) - в 6,4 и 3,1 рааа по сравнению с контролем.

Тагеш образом, воздействие ШЮ в условиях ОП нэ только Фригирует, но и повышает показатели ГИО по сравнению со ;оровыми животными; Следует■отметить связь между кратностью г еменем начала воздействия МЛО и изменением имму?гологичес1«эй активности на ЭБ в условиях ОП.

В последующа исследованиях установлено, что интенсивная норазовая физическая нагрузка в виде 4-х часового плавания прессирует формирование ГИО на ЭБ у интактных животных, тократное'воздействие ШЮ в течение 120 сек перед плаванием влияет на иммунологическую реактивность на ЭБ. Двукратное действие ШЮ перед плаванием усиливает развитие иммунного 5ета на ЭБ, восстанавливая его интенсивность до уровня в гтрольной группе. Трехкратное воздействие до физической наг-1ки стимулирует развитие ГИО на ЭБ, о чем свидетельствует ответственное повышение АОК и РОК в 2,3 и 1,4 раза по знанию с контролем (ЭБ). Стимулирующий эффект ШЮ получен и лучае использования облучения после плавания, но при этом он

был менее выраженный. Полученные результаты подтверждают ранее приведенные данные о том, что ШЮ аффективнее влияет на индуктивную, чем продуктивную фазу иммуногенеза.

Проведенные нами опыты подтверждают высокую эффективность и'.О для коррекции вторичных иммунодефицитов при правильном подборе времени и дозы воздействия ШЮ. При этом, по-видимому, сывороточные и спленоцитарные гс«муностимулирущие соединения, появляющиеся при воздействии ШЮ, блокируют выделение (или активность) ингибируюцих субстанций, возникающих при развитии ОП или в "слбвиях стресса в виде интенсивной физической нагрузки.

Не вызывает сомнений, что применение ШЮ как иммуностимулятора в целях коррекции в условиях иммунодефицита, является перспективным и возможности его раскрыты далеко не полностью

ВЫВОДЫ

1. ЫЛО на область селезенки стимулирует формирование ГИО на Т-зависиыые антигены ЭБ и БСА и ГЗТ на ЭБ, не влияя на развитие ГИО на Т-неаависимый антиген - ЛПС. Лазерное облучение в меньшей степени оказывает аналогичное действие. Постоянное магнитное поле не влияет на иммунный ответ на ЭБ.

2. Эффективность ШЮ зависит от кратности и времени воа-действия. Более чувствительна к ШЮ индуктивная, нежели продуктивная фаза и;.:»^1уногенеза. Иммуностимулирующий эффект ШЮ сохраняется в течение 7 дней после последнего облучения.

3. ШЮ индуцирует появление в сыворотке крови иммуномодули-рутещих факторов; при гель- хроматографам солевых фракций сыворотки на сефадексах (3-150 и (3-100 иммуносупрессирупцие субстанции выделяются в составе фракций, в которых преобладают белки с М. 11 60-80 кД, иммуностимулирующие с белками Ы. 20-30 кД.

4. Введение спленоцитов крыс, подвергнутых воздействию ШЮ,

ктактным аллогенным реципиентам, повышает у них иммунологичес-ух реактивность на ЭЕ

5.Спленоциты или эритроциты интактных крыс, подвергнутые п vtt.ro воздействию ШЮ, стимулируют у аллогенных интактных зципиентов ГИО на ЭБ.

6. фракция клеток селезенки, обогащенная макрофагами, вы-эляет в надоеадочную жидкость иммуностимулирующие субстанции; ри гель-хроматографии на сефадексе (3-100 они выделяются в эставе фракций, в которых преобладают белки с НИ 60-80 кД.

7. ОП, вызванный сочетанной перевязкой сосудов и протока эджелудочной железы с травмой селезеночного сегмента органа ни 4-х часовое плавание в воде с температурой 29-31' С с 42 рузом от массы тела приводят к возникновению вторичного кмунодефицита. Воздействие МЛ0 в этих условиях корригирует арушение иммунного ответа.

8. Сыворотка и НИС крыс с ОП или подвергнутых однократной втенсивнок физической нагрузке обладают иммуносупрессорной сгивностыо. ШЮ таких животных отменяет иммуносуп рессорные зойства сыворотки и НХКС.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Изучение иммуномодулируицих эффектов магнито-лазерного 5лучения. Курск, гос. мед. ин-т. - Курск, 1993. - 10 с. Деп. в «НИТИ 27.04.93. N 1105-В 93 (соавт. Князева Л. И.).

2. Иммуномодулирующие факторы сыворотки и селезёнки животах, подвергнутых воздействию магнито-лазерного облучения. Куле гос. мед. ин-т. - Курск, 1994. - 17 с. Деп. в ВИНИТИ 4.02.94. 325-В 94 (соавт. Князева. Л. И., Конопля. Е А., Конопля. Е. Н.).

3. Коррекция магнито-лазерным облучением нарушений иммун-зго ответа при остром панкреатите. Курск, гос. мед. :н-т. Курск, 994. 12 С. Деп. В ВИНИТИ 4. 02. 94. N 326-В 94

- 20 -

4. Иммуномодулирупцве действие магнито-лазерного облу ния. // Tea. докл. научной конференции молодых ученых России "3, ровье и болезни человека на рубеже XXI века". - Москва, 199 с. 443-444 (соавт. Князева Л. И.).

Подписано в печатьЦ вл'М.у.п/л •/.£> з.2.1 № iSt-O Курская городская типография