Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммуномодулирующая активность соединений ромашки аптечной и софоры японской в покое и при физических нагрузках

/\ п

\! г".

На правах рукописи

ЕРМАКОВА Алла Евгеньевна

ИММУНОМОДУЛИРУМЩАЯ АКТИВНОСТЬ СОЕДИНЕНИЙ РОМАШКИ АПТЕЧНОЙ И МОРЫ ЯПОНСКОЙ В ПОКОЕ И ПРИ ФИЗИЧЕСКИХ НАГРУЗКАХ

14.00.36 - Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск - 1995

Работа выполнена в Курском государственном медицинском университете.

Научный руководитель:

— доктор медицинских наук И. Л. Ласкова

Официальные оппоненты:

— доктор медицинских наук, профессор А. И. Конопля

— кандидат медицинских наук А. Н. Манжосов

Ведущее учреждение:

Российский государственный медицинский университет им. Н. И. Пирогова (г. Москва).

Защита состоится « » 1996 г. в 'час,

на заседании диссертационного совета К 084. 57. 01. при Курском государственном медицинском университете (305033, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета.

Автореферат разослан « ^^ » _ 1995 года.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доцент V В. В. Новиков

Е ТрТлГ без объявл. 42 В 03) - 95

СО Ермакова А. Е.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Необходимость эффективной коррекции нарушенных функций иммунной системы связана с широким распространением иммунодефицитных состояний, возникающих в результате постоянного действия стрессовых ситуаций, неблагоприятных экологических, производственных факторов и хронических патологических процессов (К. А. Лебедев и др., 1988; Т. В. Алехина и др., 1992; Д. К. Новиков, 1991; В. И. Пыцкий и др., 1991; Е. К. Алехин, 1994; С. М. Белоцкий, 1994; И. Л. Ласкова, 1995). Во многих случаях развитие патологического процесса и иммунодефицита взаимосвязаны, поскольку возникающие нарушения функций различных звеньев иммунной системы, выражающиеся в извращении реакции на различные антигены и выработке цитокинов, дезорганизуют тканевые структуры (В. И. Пыцкий и др., 1992; А. Г. Чучалин, 1989; В. И. Покровский и др., 1993; 1994). В связи с этим возникает необходимость применения нетоксичных иммуномодуляторов в комплексной терапии большинства заболеваний.

Многие из применяемых иммуномодуляторов обладают побочным действием различной степени выраженности, что затрудняет их использование в течение длительного времени (Д. Н. Лазарева и др., 1985; А. В. Сергеев и др., 1995; Б. С. Утешев и др., 1995). Учитывая это, поиск препаратов, обладающих «мягким», иммуномодули-рующим действием, безвредных для организма, эффективных при длительном пероральном применении в условиях дезадаптации и вторичных иммунодефицитов является актуальным и перспективным. Подобным требованиям соответствуют биологически активные соединения, выделенные из растительных объектов (Н. М. Беседнова, 1990; А. В. Симонов и др., 1990; С. А. Москаленко, 1990; Б. А. Баку-ридзе и др., 1993; Т. Р. Ремова, 1994; В. В. Давыдов, 1995). Они вы-

годно отличаются от своих синтетических аналогов малой токсичностью и биологическим сродством к тканям организма.

Имеющиеся в литературе сведения о влиянии препаратов растительного происхождения на функции иммунной системы носят, как правило, скрининговый характер или являются фрагментарными. Мало изучено иммунопротекгорное действие иммуномодуляторов растительного происхождения при длительном применении, а также в условиях иммуносупрессии, возникающей при различных формах стресса и патологии, не разработаны эффективные схемы их применения; неясными остаются многие аспекты механизма иммуномоду-лирующего действия большинства растительных препаратов.

Цель работы — изучение иммуностимулирующей активности соединений ромашки аптечной и софоры японской, обоснование целесообразности их применения для коррекции иммунного ответа в покое и при физических нагрузках различной интенсивности.

Задачи:

1) изучение влияния настоя соцветий ромашки аптечной и отвара плодов софоры японской на развитие иммунологической реактивности в состоянии покоя и при физических нагрузках;

2) изучение иммуномодулирующего действия гетерополисахарвда ромашки аптечной при внутрижелудочном введении в покое и при физических нагрузках;

3) изучение иммуномодулирующей активности гетерополисахарвда ромашки аптечной при парентеральном введении в покое и в условиях физических нагрузок;

4) выяснение некоторых сторон механизма действия гетерополисахарвда ромашки аптечной;

5) изучение влияния полисахаридов, сапонинов и флавоновдов, выделенных из плодов софоры японской, на развитие им-

мунного ответа в покое и при физических нагрузках.

Научная новизна.

1) Гетерополисахарид ромашки аптечной вызывает выраженный иммуностимулирующий эффект при внутрижелудочном и парентеральном введении.

2) В реализации иммуномодулирующего действия гетерополи-сахарида ромашки аптечной решающую роль играют цитоки-ны, выделяемые неприлипающими к стеклу спленоцитами.

3) Отвар плодов софоры японской и выделенные из нее полисахариды и сапонины стимулируют развитие иммунного ответа в состоянии покоя и при интенсивных физических нагрузках.

Практическая значимость. Экспериментально отработаны схемы введения нативных препаратов и выделенных из них соединений ромашки аптечной и софоры японской, приводящие к устойчивым иммуностимулирующим эффектам в покое и при физических нагрузках. Обоснована целесообразность клинических испытаний данных препаратов при различных формах стресса и патологии. Расшифрованы некоторые механизмы иммуномодулирующего действия гетерополисахарида ромашки аптечной.

Материалы диссертации вошли в учебные программы и используются в лекционных курсах и на практических занятиях кафедр спортивной медицины и реабилитологии, фармакологии, фармакогнозии, биологической химии, внутренних болезней.

Апробация работы. Основные положения диссертации были обсуждены на I съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992); Международном симпозиуме по проблемам иммунологической реабилитации (Дагомыс, 1994); II Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1995); Всероссийской научной конференции «Современные вопросы дерматовенерологии» (Курск, 1995); Международном Экологическом Форуме «Современные экологичс-

скис проблемы провинции» (Курск, 1995); совместном заседании кафедр спортивной медицины и реабилитологии, фармакологии, биологической химии, фармакогнозии, внутренних болезней (1995).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (главы 1 и 2), описания материалов и методов исследований (глава 3), изложения собственных исследований (главы 4—6), заключения и выводов. Работа изложена на страницах машинописи и включает 28 таблиц, 5 рисунков, указатель литературы содержит W источника отечественной и зарубежной литературы.

Содержание работы

Материалы и методы исследования.

Исследования проведены на крысах линии Вистар массой 120— 180 г и мышах гибридах Fj (СВА х С 57BL/6) массой 16—18 г.

Физическая нагрузка создавалась плаванием крыс с грузом, составляющим 3—4 % массы тела 5-кратно по 4 ч с интервалом 20 ч (интенсивная нагрузка) и без груза 30-кратно по 2 ч с интервалом 22 ч (умеренная физическая нагрузка) в резервуаре большого объема при температуре воды 30±2°С (В. Г. Бобков и др., 1984; И. JI. Ласкова, 1989).

Развитие иммунного ответа индуцировали однократным внут-рибрюшинным введением эритроцитов барана (ЭБ) в дозе 108 клеток на 1 кг массы тела или липополисахаридом (ЛПС) S. typhi 0—90 в дозе 0,5 мг/кг массы тела. Интенсивность развития иммунного ответа на ЭБ оценивали на 5 сутки после иммунизации путем определения в селезенке числа клеток, образующих антитела (АОК) к ЭБ методом прямого локального гемолиза и к ЛПС — методом непрямого локального гемолиза (К. Мальберг, Э. Зигль, 1987), а также числа клеток, формирующих розетки (РОК) к ЭБ (X. Зауэр, 1987).

Сыворотку крови животных, получавших препараты, отделяли от

сгустка центрифугированием при 400 g и вводили аллогенным живот-4

ным внутрибрюшинно, 3-кратно с интервалом 12 ч по 0,5 мл на крысу. Эритроциты получали из гепаринизированной крови. Присутствие лейкоцитов в суспензии эритроцитов контролировали при микроскопиро-вании. Эритроциты вводили аллогенным реципиентам внутрибрюшинно 3-кратно с интервалом 12 ч по 108 клеток на 1 кг массы тела.

Лейкоциты выделяли из гепаринизированной крови в градиенте плотности фиколл/верографина (1,077 г/см3). В осадке подсчитывали число жизнеспособных клеток (проба с трипановым синим). Лейкоциты вводили сингенным реципиентам внутривенно однократно в дозе 107 клеток на 1 кг массы тела животного.

Спленоциты фракционировали по их способности прилипать к стеклу (Э. Ф. Полушкина и др., 1983). Соотношение прилипающих и неприлипающих к стеклу клеток равнялось 1:4 — 1:5. Исходная суспензия клеток селезенки содержала около 85% лимфоцитов, остальные клетки были представлены полиморфноядерными лейкоцитами и макрофагами. Для выявления иммунорегуляторных свойств клеток селезенки, их вводили внутривенно в дозе 108 кариоцитов интактным животным одновременно с иммунизацией их ЭБ.

Супернатанты прилипающих и неприлипающих к стеклу клеток селезенки (СПКС и СНКС) инкубировали в среде 199 с добавлением 5% телячьей эмбриональной сыворотки (Б. С. Уте-шев, И. Л. Ласкова, 1992). Пул супернатантов клеток селезенки готовили путем смешивания разных объемов супернатантов 5—6 крыс. Жизнеспособность клеток после фракционирования определяли по поглощению трипанового синего. Концентрацию белка в супернатанте клеток селезенки определяли по Лоури. Супернатанты спленоцитов вводили интактным крысам однократно внутрибрюшинно по 5 мг белка на 1 кг массы тела, одновременно с ЭБ.

Изучаемые препараты: водное извлечение из соцветий ромашки аптечной и плодов софоры японской в дозе 5 г/кг массы тела

5

животного внутрижелудочно. Разовую дозу расчитывали исходя из суточной дозы для человека (М. Д. Машковский, 1993) с учетом коэффициента пересчета на массу тела крысы (В. В. Новицкий и др., 1987). Гетерополисахарид, выделенный из соцветий ромашки аптечной (А. И. Яковлев, А. И. Конопля, И. Л. Ласкова, Курский медицинский университет) в дозе 2 и 10 мг/кг внутрибрюшинно; 10 и 50 мг/кг внутрижелудочно. Выбор разовых доз гетерополиса-харида основывался на экспериментальных данных о его влиянии на иммуногенез (И. Л. Ласкова, Б. С. Утешев, 1992). Биологически активные соединения, выделенные из плодов софоры японской (В. И. Гришковец, Л. А. Горбачева, Симферопольский госуниверситет): полисахарид в дозе 5 мг/кг, очищенная сумма сапонинов 1 мг/кг, флавоноид рутин — 8 мг/кг, которые вводились через зонд внутрижелудочно. Расчет биологически активных соединений плодов софоры японской проводили с учетом их процентного содержания в отваре.

Статистическую обработку цифрового материала проводили путем вычисления средних арифметических величин и их стандартных ошибок. Существенность различий средних величин оценивали по критерию Стьюдента (Г. Ф. Лакин, 1980) и критерию Вил-коксона-Манна-Уитни (Е. В. Гублер, 1978).

Результаты исследований

Иммуномодулирующее действие настоя соцветий ромашки аптечной и выделенного из них гетерополисахарида при внутрижелудочном введении. Настой соцветий ромашки аптечной в дозе 5 г/кг массы тела крысы при внутрижелудочном 5- и 10-кратном введении вызывает стимуляцию иммунного ответа, индуцированного ЭБ у не-плававших животных и нормализацию иммунного ответа у 5-кратно плававших крыс.

Однократное внутрижелудочное введение 10 и 50 мг/кг гете-роиолиеахарида одновременно с иммунизацией не оказывало влияния на развитие иммунного ответа, индуцированного ЭБ или ЛПС у находящихся в покое и 5-кратно плававших крыс. Пятикратное введение гетерополисахарида неплававшим крысам вызывало стимуляцию иммунного ответа на ЭБ. У крыс, получавших 10 и 50 мг/кг гетерополисахарид 5-кратно, количество АОК в селезенке было соответственно в 3,3 и 5,4 раза выше, а у крыс, получавших 10 мг/кг препарата 30-кратно — в 2,3 раза выше, чем у животных, которым гетерополисахарид не вводили. На развитие иммунного ответа, индуцированного ЛПС, внутрижелудочное введение гетерополисахарида влияния не оказывало.

Выявлена значительная эффективность длительного (30-кратного) введения небольших доз (10 мг/кг) гетерополисахарида по сравнению с кратковременным (5-кратным) введением больших (50 мг/кг) доз препарата для коррекции иммунного ответа при многократных физических нагрузках умеренной интенсивности.

Иммуносупрессия, наблюдаемая после физических нагрузок разно]"! интенсивности, обусловлена накоплением иммуносупрессирую-щих субстанций в сыворотке крови, индуцирующих появление у эритроцитов свойства активировать выделение супрессирующих цитокинов спленоцитами. Принимая во внимание такой механизм действия иммуносупрессии, было изучено влияние гетерополисахарида на иммуномодулирующие свойства сыворотки крови, эритроциты и супернатанты спленоцитов животных, находящихся в покое и выполнявших физические нагрузки различной интенсивности. Установлено, что сыворотка крови и эритроциты неплававших крыс, получавших гетерополисахарид, не влияли на развитие иммунного ответа, индуцированного ЭБ и ЛПС у неплававших аллогенных животных. Введение гетерополисахарида 5- и 30-кратно плававшим

7

крысам не оказывало влияния на иммуносупрессирующие свойства сыворотки крови и эритроцитов плававших крыс.

После 5-кратного плавания СП КС содержит фактор, супресси-рующий при аллогенном переносе развитие иммунного ответа, индуцированного Т-зависимым и Т-независимым антигенами. При пятикратном введении препарата плававшим крысам в СНКС этих животных обнаружен фактор, стимулирующий реакцию неплававших крыс на ЭБ, но не на ЛПС. На основании этих данных можно заключить, что иммуностимулирующий и иммуносупрессирующий факторы клеток селезенки крыс, выполнявших физическую нагрузку и получавших гетерополисахарид, выделяются независимо. Не исключено, что эти факторы являются функциональными антагонистами.

Изучено влияние гетерополисахарида на функции иммунорегу-ляторных клеток селезенки. Установлено, что большие дозы гетерополисахарида индуцируют выделение хелперных факторов неприли-пающими к стеклу клетками селезенки. Малые дозы при длительном введении снижают чувствительность клеток иммунной системы к действию иммуносупрессирующего фактора, выделяемого прилипающими к стеклу спленоцитами после физической нагрузки.

Исследовано иммунопротекторное действие гетерополисахарида ромашки аптечной при длительном внутрижелудочном введении до проведения интенсивной физической нагрузки. Профилактическое введение гетерополисахарида предотвращало развитие им-муносупрессии в отношении ЭБ и ЛПС после интенсивной физической нагрузки. СПКС животных, получавших гетерополисахарид перед плаванием, при аллогенном переносе интактным животным, супрессировал развитие иммунного ответа на ЭБ и ЛПС. СНКС, при аллогенном переносе интактным животным, повышал выраженность иммунного ответа на ЭБ, но не влиял на реакцию,

индуцированную ЛПС. Результаты проведенных экспериментов

8

свидетельствуют об иммунопротекгорном действии гетерополиса-харида ромашки аптечной. При реализации этого действия определенную роль играют факторы, выделяющиеся под влиянием ге-терополисахарида неприлипающими к стеклу клетками селезенки.

Практически важным является изучение иммунореабилитирую-щей эффективности гетерополисахарида ромашки аптечной после интенсивной физической нагрузки. Пятикратное введение гетерополисахарида после интенсивной физической нагрузки вызывало слабо выраженное усиление развития иммунного ответа на ЭБ и не влияло на реакцию, индуцированную ЛПС.

Таким образом, гетерополисахарид ромашки аптечной мало эффективен при введении его после выполнения интенсивной физической нагрузки. Вероятно, препарат и выделяющиеся под его влиянием цитокины, не оказывают существенного действия на иммуно-циты, предварительно подвергшиеся влиянию иммуносупрессирую-щих факторов прилипающих спленоцитов плававших крыс.

Иммуномодулирующая активность гетерополисахарида ромашки аптечной при парентеральном введении. Детальное изучение механизма действия гетерополисахарида проводили на животных, получавших препарат парентерально.

Однократное внутрибрюшинное введение 10 мг/кг гетерополисахарида стимулировало развитие иммунного ответа на ЭБ и ЛПС у неплававших мышей и нормализовало эти процессы у плававших животных. Инъекции препарата в указанной дозе не вызывали появления иммуномодулирующих свойств у эритроцитов крыс, находящихся в покое и плававших животных. Гетерополисахарид не индуцировал выделения иммуномодулирующих факторов прилипающими к стеклу клетками селезенки, но активировал выделение иммуностимулирующих факторов неприлипающими спленоцитами неплававших крыс. Препарат не влиял на супрессирующую актив-

9

ность СПКС, но индуцировал выделение иммуностимулирующих факторов неприлипающими спленоцитами плававших крыс.

Таким образом, в условиях проведенных экспериментов, гете-рополисахарид ромашки аптечной при однократном парентеральном введении не влиял на иммуномодулирующие свойства эритроцитов и вместе с тем активировал выделение иммуностимулирующих факторов неприлипающими спленоцитами плававших и не-плававших животных.

Пятикратное внутрибрюшинное введение гетерополисахарида в дозе 2 мг/кг существенно стимулировало развитие иммунного ответа, индуцированного Т-зависимым и Т-независимым антигенами у животных, находящихся в покое и плававших крыс. Инъекции 10 мг/кг гетерополисахарида лишь слабо усиливали выраженность этих процессов у плававших крыс.

Пятикратные инъекции препарата в дозе 10 мг/кг индуцировали появление у эритроцитов неплававших животных иммуносупресси-рующих свойств и не влияли на свойства эритроцитов плававших крыс. Введение гетерополисахарида в дозе 10 мг/кг индуцировало выделение супрессирующих факторов прилипающими к стеклу клетками селезенки и стимулирующих факторов неприлипающими к стеклу спленоцитами. У плававших крыс гетерополисахарид не влиял на иммуносупрессирующие свойства СПКС, но индуцировал выделение иммуностимулирующих факторов неприлипающими к стеклу клетками селезенки (табл. 1).

Результаты проведенных экспериментов показали, что пятикратное парентеральное введение гетерополисахарида индуцирует появление иммуносупрессирующих свойств у эритроцитов, но активирует выделение иммуностимулирующих факторов неприлипающими спленоцитами.

Таблица 1

Иммуномодулирующая активность супернатантов спленоцитов неплававших и плававших крыс, 5-кратно получавших инъекции гетерополисахарида (ГПС) ромашки 10 мг/кг

N2 п/п Условия опыта Количество АОК к ЭБ

СПКС СНКС

1. Контроль (без плавания и введения ГПС) 28,4±3,3 28,4±3,3

2. Введение супернатанта спленоцитов крыс 26,3±3,0 29,2±3,б

3. Введение супернатанта спленоцитов крыс, получивших ГПС 12,5±1,8* 63,6±7,0*

4. Введение супернатанта спленоцитов плававших крыс 9,3±1,4* 27,б±3,5

5. Введение супернатанта спленоцитов плававших крыс, получавших ГПС 8,8±1,5 59,б±б,9*

Примечание: * - достоверность различий Р<0,05.

Количество АОК дано в тыс./орган.

Характерным свойством гетерополисахаридов различного происхождения является связывание с гликолипидными или гликопро-теидными структурами цитоплазматических мембран различных клеток, что приводит к изменению некоторых физиологически важных функций клеток. Учитывая это, изучены иммуномодулирую-щне свойства мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК), полученные через различные промежутки времени после введения животным гетерополисахарида ромашки (10 мг/кг).

Трансплантация мышам МКПК животных, не получавших гете-рополисахарид, не оказывала существенного влияния на развитие у них Т-зависимого и Т-независимого иммунного ответа.

Введение животным сингенных МКПК, выделенных через 0,5, 1 и 2 ч после инъекции гетерополисахарида, стимулировало развитие у них иммунного ответа на ЭБ, но не влияло на выраженность реакции, индуцированной ЛПС. Наиболее выраженная стимуляция наблюдалась при трансплантации МКПК, выделенных через 1 час

И

после введения'донорам гетерополисахарида (табл. 2). Исследование влияния МКПК, выделенных через час после введения гетерополисахарида, на иммуномодулирующую активность СПКС и СНКС неиммунизированных сингенных реципиентов показало, что СПКС при сингенном переносе не вызывал иммуномодулирующего эффекта. В отличие от этого СНКС стимулировал у сингенных реципиентов развитие иммунного ответа на ЭБ.

Проведенные эксперименты не позволяют однозначно решить вопрос — чьи клетки, донора или реципиента, являются источником иммуностимулирующего фактора, выделяемого неприлипающими к стеклу клетками селезенки мышей после введения им МКПК сингенных животных, получавших однократные инъекции гетерополисахарида. Для решения этого вопроса прилипающие и неприлипающие спленоциты реципиентов кариощггов мышей, получавших гетерополисахарид (ПСКМГ и НСКМГ) внутривенно, транспортировали животным-реципиентам.

Таблица 2

Иммуномодулирующая активность МКПК мышей, получавших гетерополисахарид (М±т)

№ п/п Число крыс Количество Количество

Условия опыта АО К к ЭБ АО К к ЛПС

тыс/орган тыс/орган

1. Контроль (без введения МКПК) 8 15,6+1,9 10,1+1,4

2. Введение МКПК интактных мышей Инъекции МКПК, выделенных после введения гетерополисахарида, через: 8 16,8+2,0 р>0,05 9,5+1,2 р>0,05

3. 0,5 ч 8 32,6+3,7* 11,8+1,7

р<0,05 р>0,05

4. 1 ч 8 57,4+6,2* 12,1+1,6

р<0,05 р>0,05

5. 2 ч 8 44,0+5,1* 9,7±1,8

р<0,05 р>0,05

Результаты проведенных экспериментов позволяют считать, что МКПК мышей, получавших инъекции гетерополисахарида, индуцируют образование иммуностимулирующих цитокинов неприли-пающими к стеклу клетками селезенки. Источником этих цитокинов являются спленоциты реципиентов, а не трансплантированные и фиксировавшиеся в селезенке реципиента МКПК донора. Прилипающие к стеклу клетки селезенки реципиентов не выделяют иммуностимулирующего фактора, но участвуют в передаче сигнала от трансплантированных МКПК к неприлипающим спленоцитам. Эта функция прилипающих клеток не опосредуется гуморальными факторами или опосредуется цитокинами, короткий период полураспада которых затрудняет выявление ее при сингенном переносе.

Иммуномодулирующее действие плодов софоры японской и выделенных из нее соединений в покое и при физических нагрузках. Отвар плодов софоры японской стимулирует развитие иммунного ответа, индуцированного ЭБ при 5- и 10-кратном внутрижелудочном введении у животных, находящихся в покое. При 15- и 20-кратном введении препарат не оказывал иммуномодулирующего действия.

Фармакологическая активность плодов софоры японской обусловлена содержанием в них биологически активных веществ: полисахаридов, сапонинов, флавоноидов. В связи с этим было изучено влияние указанных соединений на иммунологическую реактивность в покое и при физической нагрузке.

Установлено, что полисахарццный комплекс оказывал постепенно нарастающее стимулирующее действие на развитие иммунного ответа, достигая максимума к 20 дню введения. Количество иммунных АОК в этот период было в 3,9 раза, а РОК — в 2,5 раза выше, чем у животных, не получавших исследуемого препарата.

При 5- и 10-кратном внутрижелудочном введении сапонины вызывают выраженный иммуностимулирующий эффект. Количество иммунных АОК в селезенке крыс увеличивалось в 5 раз, РОК —

Рис. 1. Влияние внутрижелудочного введения отвара плодов со-

форы японской и выделенных из нее полисахаридов, сапонинов и

флавоноидов на развитие иммунного ответа, индуцированного ЭБ,

в покое (М±1п). 600

500

400

300"-

200

100 "

/

\

/

/ * /

\

\

*

• 4 / / Ч ^

// ч

V ^ * ^ - -

¡¿1

•5Д

Д - Д15- Д 10

-1-1-ь-

V

—-

о

По оси ординат — количество АОК (%); по оси абсцисс — дни.

- контроль; ---отвар плодов;

* полисахариды; * сапонины;

^ флавоноид рутин.

в 2,5 раза по сравнению с контролем при 5-кратном введении и в 3 и 2 раза соответственно при 10-кратном введении. После 15- и 20-кратного введения стимулирующее влияние на иммунный ответ сохранялось, но имело тенденцию к ослаблению. В отличие от полисахаридов и сапонинов, флавоноид рутин супрессирует развитие иммунного ответа при 5—20-дневном введении (рис. 1).

Изучено иммуномодулирующее действие отвара и биологически активных соединений, выделенных из софоры японской в условиях интенсивной физической нагрузки. Препараты вводили внутриже-лудочно 5-кратно перед каждым сеансом плавания. Установлено, что отвар плодов софоры японской усиливает, а полисахариды и сапонины стимулируют развитие иммунного ответа, индуцированного ЭБ. Флавоноид рутин в условиях физической нагрузки не оказывает иммуномодулирующего действия.

При исследовании протекторного действия препараты вводили перорально 25-кратно, с 21 дня проводили 4-часовые сеансы плавания в течение 5 дней. Иммунопротекторное действие было максимальным у полисахаридов, несколько менее выражено оно было у сапонинов и отвара плодов софоры японской. Флавоноид рутин оказался иммунологически не активным (рис. 2).

Результаты проведенных нами исследований показали, что полисахариды ромашки аптечной и софоры японской, а также сапонины последней, являются эффективными корректорами иммуно-супрессии, возникающей при длительных умеренных и кратковременных интенсивных физических нагрузках.

Выраженный иммуномодулирующий эффект в состоянии покоя и при физических нагрузках различной интенсивности наблюдается при введении препарата полиненасыщенных фосфолипидов растительного происхождения эссенциале (И. Л. Ласкова, 1995). Сопоставление этого эффекта с действием, вызываемым гетерополи-сахаридом ромашки аптечной, показало, что фосфолипиды эссенциале и полисахариды ромашки вызывают примерно одинаковый иммуностимулирующий эффект при парентеральном введении до или в период индуктивной фазы иммунного ответа, осуществляющегося одновременно с физической нагрузкой или непосредственно после нее. Вместе с тем гетерополисахарид, в отличие от фосфолипидов, эффективен при внутрижелудочном применении в про-

200

А

150

100

50

200-

150"

100 -

50

В

123456 123456

Рис. 2. Влияние внутрижелудочного введения отвара плодов со-форы японской и выделенных из нее соединений на развитие иммунного ответа при физической нагрузке.

А — 5-кратное введение; Б — 25-кратное введение.

По оси ординат — количество АОК (%), по оси абсцисс: 1 — контроль (без плавания и введения препаратов); 2 — плавание, но без введения препаратов; 3 — плавание + отвар плодов софоры японской; 4 — плавание + полисахарид; 5 — плавание + сапонины; 6 — плавание + рутин.

дуктивную фазу иммунного ответа, а также при профилактическом применении (табл. 3).

Иммуностимулирующее действие эссенциале в значительной степени опосредуется тяжелой фракцией эритроцитов (Б. С. Уте-шев, И. Л. Ласкова, 1992). Эти клетки являются одной из первичных точек приложения действия полиненасыщенных фосфолипи-дов. В возникновении иммуномодулирующего эффекта гетеропо-

Таблица 3

Сравнительная характеристика иммуномодулирующих свойств гетерополисахарида ромашки и полиненасыщенных фосфолипи-

дов эссенциале

№ п/п Свойства Гетерополисахарид Полиненасыщенные фосфолипиды

1. Эффективность при парентеральном введении Высокая Высокая

2. Эффективность при внутрежелудочном введении Высокая Низкая

3. Эффективность при введении до физической нагрузки Высокая Низкая

4. Эффективность при введении одновременно с физической нагрузкой Высокая Высокая

5. Эффективность при введении после физической нагрузки Низкая Низкая

6. Влияние на свойства эритроцитов Индукция появления иммуно-супрессирующих свойств Индукция появления иммуностимулирующих свойств

7. Влияние на свойства мононуклеарных клеток крови Индукция появления иммуностимулирующих свойств Не выявлено

8. Влияние на выделение цитокинов прилипающими спленоцитами Активация выделения супрессирующих факторов Активация выделения стимулирующих факторов

9. Влияние на выделение цитокинов неприлипающими спленоцитами Активация выделения стимулирующих факторов Не выявлено

лисахарида эритроциты, по-видимому, не играют существенной роли. Гетерополисахарид, вероятно, первично взаимодействует с моно-нуклеарными клетками периферической крови или лимфоидной ткани слизистой кишечника, которые в свою очередь, индуцируют вы-

деление иммуностимулирующих цитокинов неприлипающими клетками селезенки. Цитокины обладают свойством подавлять выделение супрессирующих медиаторов иммунного ответа прилипающими клетками селезенки животных, выполнявших интенсивную физическую нагрузку. Не исключено, что цитокины неприлипающих спленоцитов повышают резистентность клеток-эффекторов к действию супрессирующих медиаторов иммунного ответа.

На основании изученных данных можно считать, что гетеро-полисахарид ромашки предпочтительнее использовать в случае необходимости длительного внутрижелудочного введения иммуно-модулятора, а также с целью стимуляции продуктивной фазы иммунного ответа. Что же касается полиненасыщенных фосфолипи-дов, то их применение оправдано при ситуациях, требующих наряду с коррекцией иммунологической реактивности усиления неиммунологических функций.

Выводы

1. Настой соцветий ромашки аптечной и отвар плодов софоры японской при внутрижелудочном введении стимулируют развитие иммунного ответа у животных, находящихся в покое и выполнявших физическую нагрузку.

2. Однократное внутрижелудочное введение гетерополисахари-да ромашки не влияет на иммунологическую реактивность непла-вавших и плававших животных. Пятикратное внутрижелудочное введение гетерополисахарида животным, находившимся в покое, индуцирует выделение иммуностимулирующего фактора неприлипающими к стеклу клетками селезенки. Введение гетерополисахарида повышает резистентность иммуноцитов к действию иммуно-супрессирующего фактора, выделяемого клетками селезенки животных, выполнявших интенсивную физическую нагрузку.

3. Пятикратное внутрижелудочное введение больших доз гетерополисахарида стимулирует развитие иммунного ответа у непла-вавших животных и нормализует его у крыс, выполнявших интен-18

сивную физическую нагрузку. Малые, длительно вводимые дозы препарата, нормализуют развитие иммунного ответа при многократных физических нагрузках умеренной интенсивности.

4. Однократное внутрибрюшинное введение гетерополисахари-да стимулирует развитие иммунного ответа у неплававших и нормализует эти процессы у плававших животных. На иммуномодули-рующие свойства эритроцитов при таком способе введения данный препарат не влияет, но индуцирует выделение иммуностимулирующего фактора неприлипающими клетками селезенки находившихся в покое и выполнявших физическую нагрузку крыс.

5. Однократные внутрибрюшинные инъекции гетерополисаха-рида ромашки индуцируют появление у мононуклеарных клеток периферической крови свойства активировать выделение иммуностимулирующего фактора неприлипающими клетками селезенки.

6. Пятикратное внутрибрюшинное введение гетерополисахарида ромашки в малых дозах не влияет на свойства эритроцитов и индуцирует выделение иммуностимулирующих факторов неприлипающими клетками селезенки неплававших и плававших животных.

7. Пятикратные инъекции больших доз гетерополисахарида ромашки индуцируют появление иммуносупрессирующих свойств у эритроцитов неплававших крыс и не влияют на свойства эритроцитов плававших животных. Парентеральное введение таких же доз активирует выделение супрессирующего фактора прилипающими спле-ноцитами и стимулирующих факторов — неприлипающими клетками селезенки у животных, находящихся в покое. У плававших крыс большие дозы гетерополисахарида индуцируют выделение иммуностимулирующего фактора неприлипающими спленоцитами.

8. Полисахариды и сапонины плодов софоры японской при пе-роральном введении существенно стимулируют развитие иммунного ответа у животных, находящихся в состоянии покоя, а также нормализуют его при интенсивной физической нагрузке. Флавоноид рутин супрессирует развитие этого процесса.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Химическое и биологическое обоснование необходимости совершенствования стандартизации действующих веществ плодов со-форы японской//Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств. Т. 2. — Москва. — 1991. — С. 26—27 (соавт. Горбачева JI. А., Дрозд Г. А., Писарев В. М.).

2. Влияние различных факторов на иммунофармакологические свойства лекарственных растений//Тез. докл. I съезда иммунологов России. — Новосибирск. — 1992. — С. 145 (соавт. Дрозд Г. А., Горбачева JI. А., Писарев В. М. и др.).

3. Fruits of sófora japanese as means of immunorehabilitation// International Jornal of Immunorehabilitation. — 1994. — №1. — S — p. 127 (Gorbachova L. A., Drosd G. A.).

4. Изучение иммуномодулирующего действия полисахаридов и флавоноидов плодов софоры японской//! I Российский Национальный конгресс «Человек и лекарство». — Москва. — 1995. — С. 136 (соавт. Прокопенко J1. Г.).

5. Изучение иммуномодулирующего действия плодов софоры японской и настоя соцветий ромашки аптечной в эксперименте// Совр. пробл. дерматовенерологии. — Курск. — 1995. — С. 59-60 (соавт. Прокопенко JI. Г.).

6. Изучение иммунокорригирующей активности плодов софоры японской в норме и в условиях иммуносупрессии//Международ-ный Экологический Форум «Современные экологические проблемы провинции». — Курск. — 1995. — С. 94—95 (соавт. Прокопенко JI. Г., Горбачева JI. Г.).

7. Плоды софоры японской — экологически безопасный иммуно-стимулятор//Гам же. — С. 62—63 (соавт. Горбачева JI. А., Дрозд Г. А., Прокопенко JI. Г., Гришковец В. И.).

8. Поиск экологически безопасных иммуностимуляторов: сапонины плодов софоры японской//Там же. — С. 63—64 (соавт. Горбачева JI. А., Дрозд Г. А., Прокопенко JI. Г., Гришковец В. И.).

9. Иммуномодулирующее действие гетерополисахарида ромашки аптечной в покое и при интенсивных физических нагрузках// Тез. докл. юбил. конф. — Самара. — 1996 (соавт. Ласкова И. Л., Прокопенко Л. Г.). Принято к печати.

10. Изучение механизма иммуностимулирующего действия гетерополисахарида ромашки аптечной//Там же (соавт. Ласкова И. Л., Прокопенко Л. Г.). Принято к печати.