Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Целенаправленное фитохимическое изучение плодов софоры японской

АВТОРЕФЕРАТ
Целенаправленное фитохимическое изучение плодов софоры японской - тема автореферата по фармакологии
Горбачева, Людмила Александровна Курск 1998 г.
Ученая степень
кандидата фармацевтических наук
ВАК РФ
15.00.02
 
 

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Целенаправленное фитохимическое изучение плодов софоры японской

На правах рукописи

ГОРБАЧЕВА Людмила Александровна

ЦЕЛЕНАПРАВЛЕННОЕ ФОТОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПЛОДОВ СОФОРЫ ЯПОНСКОЙ

15.00.02. - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Курск -1998

Работа выполнена в Курском государственном медицинско университете, Симферопольском государственном университет /Украина/

Научные руководители: кандидат фармацевтических нау:

доцент Дрозд Г.А.

кандидат химических наук, доцеь

Гришковец В.И.

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, пр<

Ведущая организация - Московская медицинская академия и? И.М.Сеченова

Защита состоится " 25" ноября 1998 г. в 15°° часов на засед, нии диссертационного совета К.084.57.02 при Курском государс-венном медицинском университете /305033, г.Курск, ул. К. Маркс

3/-

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Курског государственного медицинского университета

Автореферат разослан "Ж " 1998 г.

фессор Бубенчиков А.А.

доктор фармацевтических наук, пр<

фессор Куркин В.А.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук

Е.Н. Паши

Актуальность темы

Современная научная медицина широко использует расти-ельное сырье в лечебных целях. В то же время биологически ак-ивные вещества (БАВ), ответственные за весь спектр фармаколо-ического действия, для многих из них остаются недостаточно вы-сненными, а оценка качества сырья проводится по товароведче-ким показателям: содержание золы, влаги, экстрактивных веществ. [ числу таких объектов относятся плоды софоры японской.

Софора японская (Sophora japónica L., сем. Fabaceae) многие отни лет применяется в научной и народной медицине при различ-ых заболеваниях. Бутоны служат источником промышленного поучения рутина и кверцетина. Из плодов готовят настойку, которую спользуют в виде орошений, промываний или тампонов для лече-ия экзем, острых и хронических гнойных воспалительных процес-ов. Перечисленный диапазон фармакологической активности мож-о обосновать за счет активизации процессов регенерации, что редполагает положительное влияние на иммунный статус. С этой озиции легко объяснимы и другие аспекты их применения в на-одной медицине. В то же время для этого сырья достаточно изу-енным является только один класс БАВ - флавоноиды, но сущест-ующая нормативно-техническая документация на плоды софоры понской предусматривает их стандартизацию по товароведческим оказателям. В этой связи имеется настоятельная необходимость азработки более совершенных методик определения качества сы-ья с применением традиционных и новейших физико-химических :етодов исследования, установление взаимосвязи фармакологиче-кой активности с химической структурой каждой группы выделен-ых веществ.

Цель и задачи исследования

Цель работы заключалась в целенаправленном фитохимиче-ком исследовании плодов софоры японской с выделением классов иологически активных веществ для определения их иммунологи-еской активности и разработки методов объективной стандартиза-ии сырья.

Для достижения цели решались следующие задачи:

- провести общее химическое исследование плодов софоры понской по основным группам биологически активных веществ;

- изучить иммунотропную активность водных извлечений : плодов, как основного вида фармакологической активности сырья;

- выделить основные классы биологически активных вещее плодов софоры японской и изучить их вклад в иммунотропную а тивность;

- выделить в индивидуальном состоянии и изучить структу] фармакологически активных соединений;

- разработать методики количественного определения осно ных групп фармакологически активных веществ;

- пересмотреть и уточнить товароведческие показатели к чества сырья;

- разработать проект фармакопейной статьи на плоды соф ры японской.

Научная новизна

Проведено химическое изучение плодов софоры японско Определено наличие флавоноидов, полисахаридов, дубильных в ществ, тритерпеновых соединений, азотистых оснований.

Разработаны методические приемы анализа качественного со тава, выделения тритерпеновых соединений и водорастворимых п< лисахаридов.

Впервые из плодов софоры получен полисахаридный ко? плекс, углеводный состав которого представлен арабинозой, гала] тозой, рамнозой, ксилозой и галактуроновой кислотой. Раствор] мый полисахарид охарактеризован по молекулярной массе, соде] жанию свободных и метоксилированных карбоксильных груп: степени этерификации.

Впервые проведено сравнительное определение количестве! ного содержания флавоноидов в зрелых и недозрелых плодах е взаимосвязи с иммунотропной активностью.

Исследование иммунологической активности плодов софор японской проведено впервые. Определен диапазон активной доз сырья и выделенных из него полисахаридов, флавоноидов, сапош нов, вызывающей стимуляцию иммунного ответа, установлена д] намика формирования иммунитета при длительном применении о-вара из плодов.

Впервые представлены экспериментальные данные по выд< лению и изучению химического состава сапонинов, а также их ил муностимулирующей активности. Выделены и охарактеризованы

ритерпеновых гликозидов, содержащихся в преобладающих коли-ествах, из которых 4 - впервые выделены из плодов софоры японкой, а сапонин со структурой З-О-Р-О-глюкуронопиранозид сояса-югенола В - впервые описан в литературе.

Экспериментально обоснована целесообразность заготовки лодов софоры японской в фазу неполной зрелости.

Впервые разработаны полные критерии определения качества ырья и обоснованы сроки его хранения.

Показана перспективность направленного фитохимического сследования растительного сырья во взаимосвязи с определенным идом фармакологической активности.

Практическая значимость и внедрение результатов исследования

Разработан и подготовлен к рассмотрению проект дополнения фармакопейной статье "Плоды софоры японской".

Результаты исследований плодов софоры японской используйся в научных исследованиях и учебном процессе кафедр фарма-огнозии Курского государственного медицинского университета и [рославской государственной медицинской академии, научной ра-оте кафедры органической химии Симферопольского государст-енного университета.

В практику пульмонологического отделения городской клини-еской больницы № 6 г. Курска внедрено применение отвара пло-ов софоры японской в течение 10 дней с целью повышения имму-ологической резистентности организма при хроническом бронхи-

а

На защиту выносятся:

- результаты исследования химического состава плодов софо-ы японской;

- доказательство строения ранее не описанных в литературе ля плодов софоры японской тритерпеновых соединений, полиса-аридов;

- результаты исследований иммунологической активности лодов софоры японской;

- экспериментальные данные по стандартизации плодов софо-ы японской.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук

. .. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планол научно-исследовательских работ Курского государственног медицинского университета (номер государственной регистраци 01.9.80000183).

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены: на научнс практической конференции, посвященной 25-летию фармацевтиче ского факультета Курского государственного медицинского инсти тута (Курск, 1991); 1 съезде иммунологов России (Новосибирс! 1992); Третьей украинской конференция по медицинской ботаник (Киев, 1992); Международном конгрессе "Народная медицина Рос сии - прошлое, настоящее, будущее" (Москва, 1993); I Междуна родном конгрессе по иммунореабилитации (Дагомыс, 1994); II Рос сийском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москвг 1995); Международном экологическом форуме «Современные экс логические проблемы провинции» (Курск, 1995); на 210 националь ном конгрессе Американского химического общества (Чикагс 1995).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 16 работ, из них 2 на английском языке.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 171 странице машине писного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава экспериментальной части (7 глав), общих выводов, списка литера туры и приложения. В тексте содержится 20 таблиц, 23 рисункг Список цитируемой литературы содержит 218 . источника, из них 73 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Во введении обоснована актуальность избранной темы, опре делены цели и задачи исследования, показана научная и практиче екая значимость работы.

Обзор литературы, представленный в первой главе, состоит из вух частей. В первой части представлена краткая ботаническая ха-актеристика софоры японской, сведения о химическом составе, армакологических свойствах, применении и препаратах. Во вто-ой части описаны иммуномодулирующие свойства основных клас-эв БАВ природного происхождения, растений и препаратов.

Объектом исследования служили плоды софоры японской, за-этовленные согласно требованиям ВФС 42-452-72 в Краснодар-ком крае и в окрестностях г. Симферополя (Крым) в 1993 - 1996 эдах. Фазу зрелости определяли визуально, сопоставляя окраску лодов и степень потемнения семян с фармакопейным описанием.

Изучение качественного состава, установление иммунологической активности плодов и выделение основных групп БАВ

Предварительными фитохимическими исследованиями плодов эфоры японской было установлено присутствие в сырье полисаха-идов, свободных Сахаров, азотсодержащих веществ, флавоноидов, ритерпеновых соединений и дубильных веществ.

Качественными реакциями, основанными на осаждении низ-омолекулярными спиртами и хроматографией в тонком слое сор-ента продуктов кислотного гидролиза, обнаружены кислые поли-ахариды. В сырье содержатся незначительные количества азоти-гых оснований, способных давать положительные реакции на ал-алоиды. Качественными реакциями и хроматографией в тонком пое сорбента обнаружено большое количество флавоноидов, кото-ые в виду своей изученности нами не выделялись. Хроматографи-й в тонком слое сорбента и качественными реакциями были обна-ужены тритерпеновые гликозиды, присутствующие в других видах гого рода.

Исследованиями иммунологической активности отвара плодов эфоры японской установлено развитие стимуляции иммунного от-ета на введение эритроцитов барана при 5-10-кратном внутриже-удочном введении, 15-кратное введение практически не влияет, а 0-кратное введение супрессирует развитие этого процесса у жи-отных.

Последующим изучением выявили различие иммунологиче-кой активности сырья в зависимости от фазы зрелости плодов, ровень активности плодов, собранных в недозрелом состоянии, в

среднем, в 1,4 раза выше, чем у вполне зрелых. В данных видах сь рья было проведено количественное определение флавоноидов.

Проведенными исследованиями установили, что зрелые плод содержат флавоноидов, в пересчете на кемпферол-3,7-диглюкози, 5,0%, недозрелые - 3,32%, Так как выделение и изучение индивид} альных веществ флавоноидной природы не представляло для ш научного интереса, в качестве объекта для изучения иммунотро1 ной активности флавоноидов был выбран рутин-стандарт, соде] жащийся в данном виде сырья. Образец ГСО предоставлен доктс ром фармацевтических наук Н.Ф. Комиссаренко (ГНЦЛС, г. Хар] ков). Анализ экспериментальных данных показал, что рутин обл. дает супрессирующей активностью, увеличивающейся с количес вом приемов.

Выделение и химическое изучение полисахаридного комплекса

Выделение полисахаридного комплекса из плодов софор японской проводилось путем трехкратной экстракции сырья горз чей водой очищенной.

Очистку концентрированного водного извлечения от фенол] ных соединений и тритерпеноидов осуществляли последующей эк< тракцией н-бутиловым спиртом. Полисахариды высаждали тре? кратным объемом 96%-ного этилового спирта. В целях дальнейше очистки был проведен диализ через полупроницаемую мембран против воды очищенной и обработка катионитом, что позволил освободиться от катионов металлов.

Выделенный полисахаридный комплекс дает положительны качественные реакции с меди сульфатом, цинка сульфатом, свини ацетатом основным. По результатам хроматографического исследс вания продуктов полного кислотного гидролиза установлено, что состав полисахарида входят Э-арабиноза, Б-галактоза, Ь-рамноза Б-галактуроновая кислота. Преобладающий сахар, Б-галактурс новая кислота, составляет 85% массы. Нейтральная фракция пред ставлена арабан-галактановым комплексом. На основании исследс ваний сделали заключение, что выделенный полисахаридный ко\ плекс представляет собой пектин с содержанием нейтральных сах< ров.

Определение молекулярной массы полисахаридного компла са проводилось вискозиметрическим методом. Молекулярная масс

1ектина, полученного из плодов софоры японской варьирует в пределах 13000 у.е., что, с учетом молекулярной массы галактуронпи-занозильного фрагмента, равной 177 у.е., соответствует ориентиро-зочно 70 звеньям в полимерной цепи.

Более глубокое исследование качественного состава пектина 5ыло проведено методом ИК-спектроскопии. Характеристические шстоты полос валентных колебаний (у) при 1740 и 1630 см"1 (у 3=0), подтвердили кислый характер исследуемого вещества.

Для определения анионных свойств пектина, характеризую-цих его иммунологическую активность, производили расчет коэффициентов свободных (Кс), этерифицированных (Кэ) карбоксиль-1ых групп. Полученные данные титрометрического анализа корре-шруют с результатами ИК-спектроскопии исследуемого образца по юотношению площадей под полосами колебаний в сложноэфирной 1704 см ) и свободной (1630 см ) карбоксильных группах. Выде-генный кислый полисахарид софоры японской характеризуется вы-:оким содержанием свободных карбоксильных групп и низкой сте-1енью этерификации.

Результаты иммунологических исследований полисахаридного сомплекса свидетельствуют о том, что он стимулирует процесс формирования иммунного ответа у животных в 2,2 раза, в сравне-ши с контролем при однократном введении. Данное действие уси-швается при увеличении кратности приема, достигая максимума в \,5 раза, в сравнении с контролем при 20-ти кратном введении.

Выделение и химическое изучение тритерпеновых гликозидов

Выделение сапонинов осуществляли экстракцией н-¡утиловым спиртом, насыщенным водой, позволившей избавиться >т части сопутствующих веществ. Экстракт концентрировали упа-)иванием и методом препаративной колоночной хроматографии на ;иликагеле в системе растворителей хлороформ - 96%-ный этило-(ый спирт (10:1 -» 1:1), насыщенный водой, и разделили на четыре рракции близких по хроматографической подвижности гликозидов.

Предварительная очистка гликозидов проведена адсорбцион-гой хроматографией на силикагеле при элюировании системой рас-ворителей (1) хлороформ - 96%-ный этиловый спирт (10:1 -> 1:1), [асыщенный 25%-ным водным аммиаком. ТСХ-анализ выделен-[ых фракций в системе хлороформ - метиловый спирт - 25%-ный

водный аммиак (15:5:1) показал, что одна фракция содержит оди! гликозид (8-1), в каждой из оставшихся - по два близких по хро матографической подвижности гликозида. Разделение на индиви дуальные гликозиды 8-2 - Б-5 проводили рехроматографированиен на микросферическом силикагеле 8Преаг1 в системе растворителе] (1), что позволило достигнуть необходимой эффективности разде пения.

Предварительную структуру гликозидов устанавливали мето дом хроматографического анализа продуктов полного кислотноп гидролиза путем сравнения с достоверными образцами тритерпено вых агликонов и Сахаров в различных системах растворителей. В< всех выделенных соединениях установлено наличие одного аглико на. На основании изучения физических свойств и данных 13С-ЯМР спектра (табл.1) его идентифицировали как пентациклический три терпеноид соясапогенол В или ЗР,22р,24-тригидроксиолеан-12-ен ТС-хроматографией в качестве углеводных компонентов для веще ства 8-1 идентифицировали Б-глюкуроновую кислоту, 8-2 - Б глюкозу и Б-глюкуроновую кислоту, 8-3 - Б-галактозу и Б- глюку роновую кислоту, 8-4 - Ь-рамнозу, Б-глюкозу и Б-глюкуроновук кислоту, Б-5 - Ь-рамнозу, Б-галактозу и Б-глюкуроновую кислоту.

Для выяснения последовательности соединения моносахарид ных остатков в углеводородных цепях применили частичный ки слотный гидролиз 1 н трифторуксусной кислотой в смеси диоксан вода (1:1). У всех гликозидов первым углеводным компонентом присоединенным непосредственно к агликону, является Б глюкуроновая кислота. Концевым сахаром гликозидов 8-4 и 8-5 яв ляется Ь-рамноза.

Доказательство размера окисного цикла моносахаридных ос татков проводилось путем обработки гликозидов 0.01 н растворо? трифторуксусной кислоты в смеси вода - диоксан 1:1 в течение дву: часов. В данных условиях легко гидролизуются фуранозидные свя зи, но совершенно не затрагиваются пиранозидные гликозидны связи. В 13С-ЯМР-спектрах отсутствовали сигналы углеродных ато мов в области 79-84 м.д., характерные для фуранозидов.

Таблица №1

Химические сдвиги углеродных атомов агликона тритерпе-швых сапонинов плодов софоры японской в 13С ЯМР-спектре 5 м.д., О - ТМС, С5В5>0

№ Вещество

атома агликон 8-1 8-2 8-3 8-4 8-5

1. 39,0 38,6 38,6 38,5 38,6 38,5

2. 28,4 26,7 26,5 26,7 26,6 26,7

3. 80,2 90,9 90,9 90,8 90,9 91,0

4. 43,2 43,8 43,7 43,8 43,8 43,9

5. 56,4 56,2 56,3 56,4 56,2 56,2

6. 19,2 18,6 18,7 18,7 19,0 19,0

7. 33,6 33,3 33,3 33,2 33,3 33,4

8. 40,1 40,0 40,0 40,0 40,1 40,0

9. 48,1 47,8 47,7 47,8 47,8 47,9

10. 37,3 36,5 36,5 36,6 36,7 36,8

11. 24,1 24,1 24,1 24,0 24,1 24,0

12. 122,5 122,4 122,5 122,5 122,5 122,6

13. 144,9 144,9 144,9 145,0 144,9 144,8

14. 42,4 42,4 42,4 42,5 42,6 42,5

15. 26,5 26,5 26,5 26,6 26,5 26,7

16. 28,7 28,7 28,7 28,8 28,7 28,9

17. 38,0 38,0 38,0 38,1 38,0 38,1

18. 45,4 45,3 45,4 45,5 45,4 45,4

19. 46,8 46,8 46,9 46,9 46,9 46,8

20. 30,9 30,9 30,9 31,0 30,9 зм

21. 42,3 42,4 42,4 42,5 42,6 42,5

22. 75,5 75,6 75,6 75,6 75,7 75,5

23. 23,6 22,6 22,8 22,7 23,0 23,4

24. 64,7 63,4 63,4 63,5 63,4 64,0

25. 16,3 15,7 15,8 15,7 15,9 16,0

26. 17,2 17,0 17,1 17,0 17,2 17,1

27. 25,7 25,8 25,8 25,7 25,9 25,7

28. 28,7 28,7 28,6 28,7 28,8 28,7

29. 33,3 33,3 33,4 33,3 33,4 -33,3

30. 21,1 21,2 21,2 21,1 22,0 21,2

Окончательное установление структуры тритерпеновых глико зидов проводили на основании данных спектроскопии ЯМР. Отне сение сигналов для агликоновой части выполняли путем сопостав ления с литературными данными по химическим сдвигам для со ясапогенола В. Отнесение сигналов моносахаридных остатков про водили на основе литературных данных для незамещенных сахароь с учетом эффектов гликозилирования.

Установление типов гликозидных связей между моносахарид ными остатками и между сахарной частью и агликоном осуществ ляли путем анализа эффектов гликозилирования для сигналов С атомов в 13С ЯМР-спектре. При этом наблюдали положительны эффекты на а-атомах, составляющие +4-11 м.д. и обычно неболь шие отрицательные эффекты на р-атомах, равных 0-2 м.д., что оп ределяет (В-конфигурацию гликозидных связей. Установление кон фигурации гликозидных связей также подтверждалось путем анали за величин констант спин-спинового взаимодействия (КССВ) 1-го ] 2-го протонов сахарного остатка в ПМР-спектрах. При этом значи тельные величины КССВ характерны для диаксиального располо жения скелетных протонов Н-1 и Н-2, что соответствует Р-конфи гурации остатков Б-глюкопиранозы, Ъ-галактопиранозы и Б-глю копиранозы.

Для остатка Ь-рамнозы в любом случае (как для а-, так и дл (3-конфигурации) наблюдается малое значение КССВ равное 1-1 Гц, поскольку экваториален протон Н-2. В этом случае доказатель ство а-конфигурации гликозидной связи проводилось путем на блюдения и анализа величин ядерных эффектов Оверхаузера (ЯЭО при предоблучении протонов Н-1. В случае а-конфигурации пре доблучение Н-1 остатка рамнозы вызывает появление ЯЭО (2-4% только на пространственно сближенном протоне Н-2. В случае (3 конфигурации гликозидной связи (аксиальный протон Н-1) ЯЭС наблюдается на аксиальных протонах Н-3 и Н-5 вследствие 1,3 диаксиальных взаимодействий (пространственной сближенности) Определение величин ЯЭО проводилось путем съемки ПМР спектров в разностном варианте. Для гликозидов Б-4 и Б-5 ЯЭО на блюдался только на протонах Н-2, что подтверждает а-конфигура цию гликозидных связей остатков Ь-рамнозы в этих соединениях.

На основании спектральных изучений гликозиды идентифи цированы как З-О-р-Б-глюкуронопиранозид соясапогенола В (Б-!)

3-0-Р-0-глюкопиранозил-(1 ->2)-0-р-В-глюкуронопиранозид сояса-погенола В (8-2), 3-0-Р-В-галактопиранозил-(1-»2)-0-Р-0-глюку-ронопиранозид соясапогенола В (8-3), З-О-а-Ь-рамнопиранозил-(1->2) -О-Р-В-глюкопиранозил - (1-»2)-0-Р-Б-глюкуронопиранозид соясапогенола В (8-4), 3-0-а-Ь-рамнопиранозил-(1—>2)-0-(3-0-га-лактопиранозил-( 1 ->2)-0-Р-Б-глюкуронопиранозид соясапогенола В (8-5). Вещество 8-1 является новым тритерпеновым глнкозидом. Гликозид 8-2 известен под названием азукисапонин II, 8-3 - сояса-понин III, 8-4 - азукисапонин V и Б-5 - соясапонин I. Соединения 82 - 8-5 были выделены ранее из бутонов софоры японской, но из плодов - впервые. Химические превращения веществ представлены на рис 1 и 2.

Исследования иммунологической активности сапонинов показали, что препараты в дозах 0,01 г/кг веса обладают выраженным иммуносупрессирующим действием, которое ослабевает с уменьшением количества вводимого вещества. Однако, в дозах, близких к 0,0005 г/кг, стимуляция иммунного ответа составляет 803%, в сравнении с контролем.

Исследование многократного применения препаратов сапонинов выявило выраженную иммуностимулирующую активность, постепенно уменьшающуюся с длительностью приема. Сопоставление результатов исследования иммунологической активности отвара плодов с активностью сапонинов установило совпадение динамики формирования процесса иммунной стимуляции животных, вызванной введением эритроцитов барана.

Схема химических превращений тритерпеновых гликозидов £>-4,8-2,8-1, выделенных из плодов софоры японской.

Схема химических превращений тритерпеновых гликозидов 8-5, 8-3, 8-1, выделенных из плодов софоры японской.

Исследования по стандартизации плодов софоры японской

В ходе иммунологических исследований было установлено, что все выделенные классы природных соединений, обуславливают активность плодов софоры. Для объективной оценки качества сырья в проект ВФС введены показатели количественного содержания полисахаридов, флавоноидов, тритерпеновых сапонинов.

Количественное определение содержания флавоноидов в плодах софоры японской проведено спектрофотометрически по методике анализа настойки.

Количественное содержание полисахаридов в плодах софоры проведено гравитометрически по методике, изложенной в ГФ-Х1 для листа подорожника.

Определение количественного содержания тритерпеновых гликозидов проведено методом гравитометрии и основано на экстракции н-бутиловым спиртом, насыщенным водой, с последующей очисткой экстракта и получением сухого остатка.

Проведенные исследования позволили установить следующие критерии доброкачественности сырья: содержание суммы флавоноидов в пересчете на кемпферол-3,7-диглюкозид - не менее 3,0%; суммы полисахаридов - не менее 8,0%; суммы тритерпеновых сапонинов - не менее 1,5%; влажность - не более 14%; общей золы - не более 3%; золы, не растворимой в 10%-ной соляной кислоте - не более 1,0%; содержание пожелтевших, побуревших и почерневших частей растения - не более 8,0%; примеси стеблей и листьев - не более 6,0%; органической примеси - не более 0.5%; минеральной - не более 1,0%.

ВЫВОДЫ

1. Изучен качественный химический состав плодов софоры японской. Установлено наличие свободных и связанных Сахаров, аминокислот и азотсодержащих соединений, дубильных веществ, флавоноидов и сапонинов.

2. Изучено влияние отвара из недозрелого и вполне зрелого сырья на гуморальный иммунный ответ (ГИО) у животных, позволивший устранить имеющиеся в литературе противоречия по поводу времени сбора плодов софоры японской в пользу фазы неполной зрелости.

3. Проведено определение количественного содержания фла-воноидов, составляющее для недозрелых плодов 3,32% и для собранных в фазу полной зрелости - 5,0%, что не коррелирует с влиянием водных извлечений из сырья на ГИО у животных.

4. Иммуностимулирующее действие сырья мало зависит от содержания в них флавоноидов, т.к. рутин, содержащийся в плодах софоры японской, стимулирует ГИО при однократном введении всего в 1,4 раза и вызывает нарастающую супрессию с увеличением кратности приемов.

5. Впервые выделен и охарактеризован суммарный полисахарид, в состав которого входят галактуроновая кислота (85%), ара-биноза, галактоза, рамноза и ксилоза. Доказана его гомогенность и определены вязкость, количество свободных (22%) и этерифициро-ванных (21%) карбоксильных групп. Молекулярная масса полисахарида (13 ООО у.е.) в сопоставлении с аналогичной величиной га-лактуронового фрагмента свидетельствует о содержании ориентировочно 70 галактуронопиранозидных звеньев в молекуле пектина.

6. Полисахаридный комплекс при 1-кратном внутрижелу-дочном введении стимулирует ГИО в 2,2 раза, и активность возрастает с увеличением кратности приема до 354%, однако не достигает уровня влияния отвара из плодов, т.е. не является доминирующем в этом виде фармакологического действия.

7. Из плодов софоры японской впервые выделены 5 индивидуальных тритерпеновых сапонинов (гликозиды 1 - 5), строение которых доказано физико-химическими методами, анализом С- и Н+-ЯМР-спектров и сравнением с достоверными образцами хроматографией на пластинках "БПиГоГ, агликон которых идентифицирован как Зр,22(3,24-тригидроксиолеан-12-ен или соясапогенол В. Суммарный выход сапонинов из воздушно-сухого сырья составляет 1,7%.

8. Строение выделенных сапонинов установлено как 3-0-0-О-глюкуронопиранозид соясапогенола В (8-1), 3-0-(3-0-глюко-пиранозил-(1-»2)-0-Р-0-глюкуронопиранозид соясапогенола В (Б-2), 3-0-3-0-галактопиранозил-(1-»2)-0-Р-В- глюкуронопиранозид соясапогенола В (8-3), 3-0-а-Ь-рамнопиранозил-(1-»2)-0-Р-0-глю-копиранозил-(1-»2)-0-р-0-глюкуронопиранозид соясапогенола В (8-4), 3-0-а-Ь-рамнопиранозил-(1-»2)-0-Р-В-галактопиранозил-(1->2)-0-Р-0-глюкуронопиранозид соясапогенола В (8-5). Строение

веществ S-2 - S-5 для плодов софоры японской описаны впервые, а гликозид S-1 является новым тритерпеновым гликозидом.

9. Уровень активности сапонинов плодов софоры японской при 1-кратном введении превышает 800%, при многократном - несколько ослабевает. По влиянию на иммунную систему это коррелирует с активностью отвара из плодов. Это свидетельствует о том, что именно тритерпеновые сапонины обеспечивают основной вклад в стимуляцию ГИО.

10. На основании исследований разработан проект временной фармакопейной статьи "Плоды софоры японской" с введением в качестве количественных показателей определение содержания фла-воноидов, полисахаридов и сапонинов.

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах:

1. Горбачева Л.А. и др. Химическое и биологическое обоснование необходимости совершенствования стандартизации действующих веществ плодов софоры японской. /Горбачева Л.А., Дрозд Г.А., Писарев В.М., Гапонов A.M., Локтионов A.B., Ермакова А.Е. // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств. Т.2. Физико-химические методы стандартизации и контроля качества лекарственных средств и средств медицинского микроанализа. - М. -1991. - С. 26-27.

2. Горбачева Л.А. и др. Экспериментальное обоснование анализа взаимосвязи химического состава софоры японской с фармакологической активностью. /Горбачева Л.А., Дрозд Г.А., Писарев В.М., Гапонов A.M., Ермакова А.Е., Локтионов A.B. //Актуальные вопросы фармацевтической науки и практики: Тезисы докладов научно-практической конференции, посвященной 25-летию фармацевтического факультета Курского государственного медицинского института. - Курск. -1991. - Ч. 2. - С. 190-191.

3. Горбачева Л.А. и др. Иммунофармакологическое изучение плодов софоры японской. /Горбачева Л.А., Дрозд Г.А., Писарев В.М., Гришковец В.И., Чирва В.Я. //Тезисы докладов 1 съезда иммунологов России. - Новосибирск. - 1992. - С. 115-116.

4. Дрозд Г.А. и др. Влияние различных факторов на иммуно-фармакологические свойства лекарственных растений. /Дрозд Г.А., Горбачева Л.А., Писарев В.М., Конопля А.И., Гапонов A.M., Ерма-

кова А.Е., Жуков И.М., Георгиев Б.П. // Тезисы докладов 1 съезда иммунологов России. - Новосибирск. - 1992. - С. 145.

5. Горбачева JI.A. и др. Иммунофармакогностическое исследование плодов софоры японской. / Горбачева JI.A., Дрозд Г.А., Писарев В.М., Гришковец В.И., Чирва В.Я. //Третья Украинская конференция по медицинской ботанике: Тезисы докладов. Часть - Киев. -1992. С. 40-41.

6. Дрозд Г.А., Горбачева JI.A., Дрозд Н.Г. Научное обоснование широкого использования плодов софоры японской в народной медицине. //Народная медицина России - прошлое, настоящее, будущее: Тезисы докладов Международного конгресса. - М. - 1993. -С. 193-194.

7. Дрозд Г. А., Горбачева Л. А. Фармакогностическо-иммунологическое изучение плодов софоры японской (Sophora japónica L.). //Фармация. - 1994. - XLIII, N1. - С. 34-37.

8. 8.Gorbachova L.A., Yermakova A.E., Drozd G.A. Fruits of sophora japanese as means of immunorehabilitation. //International journal of immunorehabilitation. Abstracts of the international congress on immunorehabilitation. - 1994. - №1. - Supplement. - P. 127.

9. Дрозд Г.А. и др. Лекарственные растения - основа создания препаратов для иммунореабилитации. /Дрозд Г.А., Горбачева Л.А., Жуков И.М., Дрозд Н.Г., Ермакова А.Е. // II Российский национальный конгресс "Человек и лекарство": Тезисы докладов. - М. - 1995.-С. 135-136.

10. Горбачева Л.А. и др. Плоды софоры японской - экологически безопасный иммуностимулятор. /Горбачева Л.А., Дрозд Г.А., Гришковец В.И., Ермакова А.Е., Прокопенко Л.Г. //Современные экологические проблемы провинции: Международный экологический форум. - Курск. - 1995. - С. 62-63.

11. Горбачева Л.А. и др. Поиск экологически безопасных иммуностимуляторов: сапонины плодов софоры японской. /Горбачева Л.А., Дрозд Г.А., Гришковец В.И., Ермакова А.Е., Прокопенко Л.Г. //Современные экологические проблемы провинции: Международный экологический форум. - Курск. - 1995. - С. 63-64.

12. Gorbacheva L.A. et all. The study of triterpene glycosides of Sophora japónica Seeds. //Gorbacheva L.A., Grichkovets V.l., Drozd G.A., Chirva V.Ya. //Symposium on Saponins: Chemistry and Biological

Activity. 210 th ACS National Meetind. Abstr. - Chicago. - 1995. -AGFD-156.

13. Горбачева Л.А.и др. Выделение и характеристика полисахарида плодов софоры японской./ Горбачева Л.А.; Гришковец В.А., Дрозд Г.Г., Чирва В .Я.// Химия природных соединёний.-1995.-№5. -С. 748-749. ' ''"'

14. Гришковец В.А., Горбачева JI.A. ТритерпенЬвые гликози-ды семян Sophora japónica II Химия природных соединений.-1995,-№5.-С. 709 -713.

15. Гришковец В.А., Горбачева Л.А. Количественное определение содржания тритерпеновых гликозидов в плодах Sophora japónica // Химия природных соединений.-1996.-№1. - С. 104 -106.

16. Гришковец В.А., Горбачева Л.А.Весовой и спектрофото-метрический методы количественного определения тритерпеновых сапонинов в плодах Sophora japónica // Химия природных соеди-нений.-1997.-№1. - С. 69 -70.