Иммуномодулирующая активность препарата Вермин на основе природных полипептидов

Перевозчикова, Елена Николаевна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммуномодулирующая активность препарата Вермин на основе природных полипептидов

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Перевозчикова, Елена Николаевна Пермь 2007 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Иммуномодулирующая активность препарата Вермин на основе природных полипептидов

□ ОЗОбО 14В

На правах рукописи

СГгс^^-

ПЕРЕВОЗЧИКОВА Елена Николаевна

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ ПРЕПАРАТА ВЕРМИН НА ОСНОВЕ ПРИРОДНЫХ ПОЛИПЕПТИДОВ

14 00 36 Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 4 МАЙ 2007

Пермь - 2007

003060146

Работа выполнена в лаборатории биологически активных препаратов филиала ФГУП «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед», Пермь

Научный руководитель:

кандидат биологических наук,

старший научный сотрудник Сафонова Галина Михайловна Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Шмагель Константин Владимирович доктор медицинских наук, профессор Четвертных Виктор Алексеевич

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита состоится «$/3 » U14X&-_2007 г, в_ _часов на заседании

диссертационного совета Д 004 019 01 в Институте экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу 614081, г Пермь, ул Голева, д 13 Факс(342)2446711

Автореферат диссертации размещен на сайте Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН (http //www legm ru)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН

Автореферат разослан » ouu-frtiU^ 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук,

профессор, член-корреспондент РАН/ / Ившнна Ирина Борисовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Создание препаратов, обладающих иммунокорригирую-шей активностью, является важной задачей в практической иммунологии Из отечественных иммуномовулягоров, уже внедренных в лечебную практику, заслуженное признание получили миелопид, палиоксидоний, имунофан, ликопвд, рибомунил, лейкинферон и др (Кузнецов и др, 19%, Борисова и др, 1998, Лебедев, 1999, Михайлова, 2001,2003, Хаитов и др, 2003) Однако все еще существует необходимость дальнейшего поиска и испытания новых пммуномодуляторов, действующих избирательно на отдельные звенья иммунной системы и являющихся безопасными лекарственными средствами Это вызвано ростом частоты вторичных иммунодефицитных состояний, аллергических и аутоиммунных заболеваний Практически важен поиск новых сырьевых источников для производства препаратов, регулирующих функции иммунной системы (Запорожец, 2004) В настоящее время возрос интерес к биологически акшвным препаратам пептидной структур!,! и их влиянию на иммунную систему (Черешнева и др, 2004, Гаврилова, 2006, Гумен и др, 2006, Милешина и др, 2006, Розенберг и др, 2006) Работы по изучению иммунобиологических свойств пептидных препаратов при пероральном, локальном, гаружном применении немногочисленны, не содержат достаточных сведений и в большей мерс относятся к применению пептидных препаратов в виде интра! шальных растворов (Снимшикова и др, 2006) Это положение, а также анализ сырьевой базы и технологических аспектов получения иммуномодулягоров пептидной природы - Ганптиина (Петров и др, 1991, 1993), Молокина (Казьянин, 1998), Вермина (Кашина, 1998, 1999), Микросшма (Чистохина, 2004, Сафонова, 2006), разработанных в Пермском НПО «Биомед», выявили целесообразность дальнейших исследований в направлении создания новых лекарственных форм препаратов згой группы для перекального и местного применения

Цель настоящего исследования - изучение иммуномодулируюшей активности препарата Вермин, содержащего палипегтгид ы из биомассы гибрида красного калифорнийского дождевого червя, при пероральном его введении в ферме таблеток и наружном применении в виде мази

Основные задачи исследования

1 Исследовать иммуномодулирующую активность, аллергенность, острую и хроническую токсичность таблеток, созданных на основе препарата Вермин

2 Исследовать иммуногропное действие разработанной мази Вермин при ишраваги-нальном применении

3 Оценить иммуномодулирующую активность мази Вермин на модели гнойной раневой инфекции

4 Оценить иммуномодулирующие эффекты таблеток и мази на пралиферативный ответ лимфошпов и фагоцитарную активность лейкоцитов периферической крови в системе иг

УИГО

Основные положения, выносимые на защиту

1 Разработанные на остове препарата Вермнн таблетки не обладают обшетоксически-ми и аллергенными свойствами, проявляют выраженную иммуномодулируюшую активность, восстанавливают нарушенные показатели иммунитета при экспериментальном иммунодефиците и стрессе

2 Разработанная га основе препарата Вермин мазь с дифилыю-абсорбшюнными свойствами стимулирует анпггелообразование и фагоцитоз при локальном иммунном ответе в условиях ишравагинального введения.

3 Разработанная на основе препарата Вермин мазь с гидрофильными свойствами при нанесении на гнойную рану оказывает ранозаживляющее действие, активирует поглотительную способность фагоцитов.

4 Таблетки и мазь Вермин проявляют иммуномодулируюшую активность в экспериментах т \tttx)

Научная новизна. Исследованы механизмы иммуномодулирующего действия таблеток и мази, разработанных на основе палипегпидного препарата Вермин Установлено стимулирующее влияние таблеток Вермин на системный иммунный ответ, активность фагоцитирующих клеток у животных с ненарушенными функциями иммунной системы, их способность корригировать степень выраженности экспериментального иммунодефицита при цигостатическом воздействии и иммобилшационном стрессе Оптимизирован состав мази Вермин на дифилы ю-абсорбщюнной основе для ишравагинального применения Выявлено иммуностимулирующее действие мази на ангигалоофазование и фагоцитарную активность в подвздошных и паховых лимфатических узлах и фагоцитарную активность нейтрофилда периферической крови на модели локального иммунного ответа у крыс популяции Разработан оригинальный способ получения мази Вермин на гидрофильной основе Установлено, что применение д анной мази приводит к сокращению сроков лечения раневой гнойной инфекции, повышению активности фагоцишруюших клеток.

Теоретическое и практическое значаще работы. Полученные данные расширяют представление о принципиальной возможности использования природных полипегтщдов для создания новых препаратов, обладающих иммуномодулирующей активностью Показана эффективность разработанных лекарственных форм препарата Вермин (таблетки, мазь) при коррекции вторичных иммунодефицигных состояний и гнойной инфекции. Мазь Вермин для ишравагинального применения рекомендуется для дальнейших клинических испытаний при гинекологических заболеваниях. На исследуемые таблетки и мазь разработаны проекты нормативной документации

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на II Международной конференции, посвященной 100-летию Пермского НПО «Биомед», Пермь, 1998, II Международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природ! юга происхождения», Санкт-Петербург - Валаам,

1998, Международной конференции «Фармация в XXI веке инновации и традиции», Санкт-Петербург, 1999,14-ой Коми республиканской молодежной научной конференции, Сыктывкар, 2000, Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы разработки, прогазод-ства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов», посвященной 95-легию Уфимского НИИВС им. ИИ Мечникова ГУЛ «Иммуш препарат», Уфа, 2000; Научной конференции «Актуальные вопросы разработай, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов», Томск, 2001, X Всероссийском научном форуме «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2006», Санкт-Петербург, 2006, Всероссийской конференции молодых ученых, посвященной памяти профессора Н Н Кеворкова «Иммунитет и аллергия от экспфимента к клинике», Пермь, 2006, Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2006 Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней», Москва, 2006

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ Получен Патент на изобретение Российской Федерации №2180574

Диссертация доложена и обсуждена на Научно - техническом совете филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед», совместном заседании проблемной комиссии Инс-ппута экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН и Пермского отделения Российского научного общества иммунологов

Шьем и структура диссертации Работа изложена на 187 страницах машинописного текста, содержит 7 рисунков и 47 таблиц. Диссертация состоит из введения, обзора данных литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 439 литературных источников, го них 291 - отечественных и 148 - зарубежных авторов, 9 приложений.

Связь работы с научными программами Диссертационная работа выполнена на базе лаборатории биологически активных препаратов в соответствии с планом НИР НИИ вакцин и сывороток филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед» (номер государственной регистрации 019 90 002648)

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Биологическую и иммуномодулируюшую активность таблеток и мази Вермин т то изучали на 38 самцах линейных мышей гибридов (СВА*С57В1У6)Р| массой 18-20 г, 190 самцах белых беспородных мышей массой 18-22 г, 73 самцах и 46 самках крыс популяции \Vistar массой 200-250 г, полученных го питомника РАН «Столбовая», 100 пестрых беспородных морских свинках самцах массой 180-250 г, 24 кроликах породы шиншилла, полученных го отделения подопытных животных НПО «Биомед» г Перми. Все животные находились в питомнике НПО «Биомед» на стандартном рационе питания Исследования проводили в соответствии с международным соглашением об экспериментах на животных

В экспериментах т \ntro использованы лейкоциты венозной крови, полученной от 18

фактически здоровых людей добровольцев в возрасте от 25 до 60 лет (средний возраст-34 года, из них-5 женщин на 6-10 сутки менструального цикла, 13 мужчин)

В качестве субстанции для производства таблеток и мази использовали полипегттдный препарат Вермин, который получали го биомассы гибрида красного калифорнийского дождевого червя (ГККДЧ) по технологии, разработанной ранее в лаборатории биологически активных препаратов НПО «Биомед»

На основе данной субстанции получены таблетки Вермин для перорального применения и мазь Вермин для наружного и ишравагинального применения Разработка технологии таблеток проведена совместно с технологии цеха таблешрованных препаратов НПО «Биомед» канд. фарм наук М.Р Закировым Мазь на дифильно-абсорбционной и гидрофильной основе создана совместно со старшим преподавателем кафедры технологии лекарственных средств ПГФА канд. фарм. наук Л.К. Коростелевой Анализ физико-химических свойств (средняя масса таблетки, прочность на истирание, распадаемость, содержание белка, рН водного извлечения) и оценку микробиологической чистоты таблеток и мази проводили с использованием методов, изложенных в XI Государственной Фармакопее Для определения аминокислотного состава субстанцию Вермин гидролшовали в 6М НО в течение 24 ч при 105°С Состав гнпролгоата определяли на аминокислотном аналгаатореТ 339 в г ГТушино Специфическую (биологическую) активность устанавливали по степени восстановления рецепторов тимощпов морской свинки к эритроцитам кролика

Используемые дозы таблеток и мази ю всех исследованиях приведены в пересчете на субстанцию Вермин Таблетки Вермин во всех экспериментах вводили в виде водной взвеси внуфижелудочно с помощыо зонда. Острую и хроническую токсичность таблеток исследовали в соответствии с «Правилами доклинической оценки безопасности форшкологических средств» (Москва, 1992) Опыты по изучению острой токсичности выполняли на 40 белых беспородных мышах массой 18-20 г Таблетки вводили однократно в дозах 10,20,30 мг/кг массы тела животного Контрольные животные в этом и последующих экспериментах получали воду очищенную или водную взвесь наполнителя таблеток. Наблюдение за животными осуществляли в течение 14 дней Хроническую токсичность препарата изучали в эксперименте на 24 кроликах породы шиншилла (13 - в опытной группе, 11 - в контрольной) в течение месящ. Кроликам опытной группы таблетки Вермин вводили ежедневно однократно в дсое 5,0 мг/кг До начала эксперимента и через месяц у животных опытной и кошрольной трупп забирали кровь го краевой вены уха для оценки показателей гемограммы и определения концентрации общего белка, активности аспартатаминотрансферазы, аланинами-нотрансферазы, альфа-амилазы в сыворотке крови По окончании эксперимента кроликов забивали путем декапитации, проводили вскрытие, осмотр внутренних органов, определение их массового коэффициента и олбор проб для гистологического анализа. Биохимические исследования осуществляли на полуавтоматическом анализаторе фирмы "ЬаЬзуЯеггБ", Финляндия, в КМСЧ № 1, г Пермь, совместно с доктором А Н Шварц. Аллергенные свойства таблеток Вермин изучали в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке ал-

лергенных свойств фармакологических средств» (Москва, 1999) в тесте конъюнктивалы юй пробы, реакции гиперчувствигельносш замедленного типа (ГЗТ), непрямой реакции дегра-нуляции тучных клеток. Коньюнкшвальную пробу выполняли на морских свинках. Сенсибилизацию животных осуществляли пероральным введением таблеток в виде взвеси в дозе 0,25 и 2,5 мг/кг в течение 7 дней Для постановки пробы одну каплю водного раствора препарата (0,5 мг/мл) вводили под верхнее веко правого глаза, а в левый глаз - каплю растворителя (воды очищенной) в качестве котроля Для изучения способности препарата вызывать реакцию гиперчувстигельносги замедленного типа использовали белых беспородных мышей, сенсибилизированных препаратом в дозах 0,25 и 2,5 мт/кг путем однокряшого внутрикожно-го введения в основание хвоста экстракта таблеток в полном адмовшггс Фрейнда. Для изучения способности препарата вызывать дегрануляцию тучных клеток крысам самцам вводили per 01 взвесь таблеток Вермин в дозе 0,5 мг/кг На 10-й день ог начала введения препарата осуществляли тестирование сенсибилизирующих свойств

Исследование иммуномодулирующего действия таблеток Вермин прозодили в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке иммунотоксических свойств фармакологических средств» (Москва, 1992) и методическими указаниями Фармакологического комитета МЗ РФ «Экспериментальное изучение иммунелропной активности фармакологических препаратов» (Москва, 1999) на модели системного иммунного ответа (внутр[прошитая иммунизация оптимальной дозой эритроцитов барана - 108) с использованием белых беспородных мышей, в реакции гиперчувствигельносш замедленного типа (подкожная иммунизация той же дозой аншгена в стопу с повторным введением разрешающей дозы антигена на 4-е сутки) на линейных мышах гибридах (CBA><C57BI76)F|, на модели системного иммунного ответа на фоне иммуносупрессии циклофосфамидом и модели ! 0 - часового иммобилизационного стресса с использованием белых беспородных мышей Экспериментальный иммунодефицит индуцировали однокраггной внугрибрюшинной инъекцией циклофосфамида (ЦФ) мышам в дозе 100 мг/кг Таблетки Вермин начинали вводить через сутки после введения ЦФ Иммунизацию осуществляли внутрибрюшинно огтшмальгой дозой эритроцитов барана через 1 ч после последнего применения препарата. Перед иммоби-лизационным стрессом животные получали таблеточную взвесь в течение 21 дня Через 12 ч после последнего введения таблеток осуществляли иммобилизацию в специальных пластиковых фиксаторах в положении на спине в течение 10 ч

Мазь Вермин на дифильно - абсорбционной основе вводили интравагинально в дозах 0,08 - 8,0 мг/кг и исследовали ее иммуномоделирукхцее действие на модели локального иммунного ответа на крысах самках популяции Wistar Локальный иммунный ответ моделировали иммунизацией эритроцитами барана под слизистую оболочку передней стенки влагалища Иммунстгропное и ранозаживляюшее действие мази на гидрофильной основе исследовано на крысах самиах популяции Wistar в соответствии с «Методическими рекомендациями по экспериментальному (доклиническому) изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран» (издание официальное) (Москва, 1989) Гнойную рану модели-

ровали с использованием суточных агаровых культур Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa Мазь на гидрофильной основе наносили наружно вдозе2,5мг/кг Скорость заживления раны оценивали по индексу Л Н Поповой Для определения минимальной подавляющей и минимальной бактерицидной концентраций (МПК и МБК) антибиотика гентами-цина сульфата применяли бульон на переваре Хопингера Конечная концентрация антибиотика в первой пробирке составляла0,625 мг/мл Микробную взвесь вносили в пробирки в виде суточной монокультуры S aureus (штамм 25923), Ps aeruginosa (штамм 27853), Escherichia coli (штамм 25922) ти в виде микробной смеси S aureus 80%, Ps aeruginosa 15%, Е coli 5% в концентрации Ю7 микробных клеток на 1 мл среды В качестве препарата сравнения в модели экспериментальной гнойной раны применяли мазь Ируксол Определение апиальфастафилолизинау интакгных крыс, до нанесения мази, на 7-е и 12-е сутки нанесения мази проводили в соответствии с «Методическими указаниями МЗ СССР по определению аншальфастафилсшгаити в сывороточных препаратах крови человека и животных» (Москва, 1984) О ранехзаживляющем действии судили по изменению прочности рубиа на разрыв (Горбунов и др, 1979, Перцев, 1986) Патоморфологический и гистологический анализ тканей и органов экспериментальных животных выполнен совместно с главным патологоанатомом г Перми кл1 н ЮА Горбуновым

Для определения числа анпттелообразуюших клеток (АОК) в селезенке и лимфатических узлах использовали метод локального гемолиза в геле агаразы (Jeme, Nordm, 1963) Титр антител против эритроцитов барана определяли в стандартном варианте реакции активной гемашпотинации (Silbennan et al, 2004) Выраженность иммунного воспаления при постановке реакции гиперчувствигельности замедленного типа оценивали через 24 ч после разрешающей иньекиии антигена путем регистрации толщины опытной и котпрольной стопы Оценку количества лейкоцитов, эритроцитов, ядросодержащих клеток (ЯСК) в суспензиях, показателей лейгафсрмулы проводили стандартными методами Концентрацию гемоглобина определяли гемиглобинцианидным методом Влияние таблеток и мази на фагоцитарную активность нейгрофилов периферической крови оценивали по модифицированному методу В Н Калл иг ia (Каштин, 1996, Шилов и др, 1998,2001,2002) Оценку показателей фагоцитоза в клеточных суспензиях костного мозга, лимфатических узлов (ЛУ) проводили по методу ЮЛ Шилова и С В Гейна (1998) Оценку кислородозависимых механизмов микробицид-носш проводили в модифицированном варианте (Шилов и др, 2001) спеетрофотометриче-ского теста (Гордиенко, 1983) с шпросиним тегразсшием (HCT - тест) Специфическую активность таблеток и мази Вермин определяли методе»! восстановления мембранных рецепторов тнмоцитов морской свинки, обработанных трипсином, к эритроцитам кролика

Влияние Вермина напролиферативный ответ лимфоцитов оценивали m vitro в культуре клеток крови с фитогемагглктгинином-П (ФГА, Sigma, США) Использовали лейкошпы периферической крови практически здоровых мужчин добровольцев в возрасте от 25 до 60 лет (средний возраст - 36,5 лег) Культивирование проводили в пластиковых круглодонных 96-луночных планшетах Каждая культура содержала 2 х 105 клеток в 0,2 мл полной пита-

тельной среды на основе среда 199, включающей 10% аутогшавмы, 2мМ Ь-птюгамина, 10 мМ НЕРЕБ и 100 мкг/мл генгамицина Интенсивность пролиферации оценивали по включению 3Н-метштгимццина Величину включения последнего определяли на жидкостном сцин-талпяционном счетчике «Бета-2» в радиоизотоп! юм подразделении ашлишческой лаборатории ИЭГМ УрО РАН

Статистический анализ экспериментальных данных проводили методами вариационной статистики Д остоверность различий между группами оценивали с помощью непарною и парного ¿-критерия Сгьюденга и критерия Дункана Различия считали значимыми три /х0,05 Все результаты в таблицах и на рисунках представлены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (М ± га)

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Иммуномодулирующая активность, аллергенность разработанных

таблеток Вермин

Таблетки Вермин получены на основе природных полипеттщдов, вьщеленных га биомассы гибрида красного калифорнийского дождевого червя Ранее выявлено, что в субстанции Вермин содержится около 40% полипеттгидов с молекулярной массой ниже 6500 О (Сафонова и др., 1998) Изучение состава полипептидною комплекса показывает наличие в нем практически всех незаменимых аминокислот (рис 1)

Рис 1 Аминокислотный состав препарата Вермин

Технология таблеток включает 2 основных этапа, получение субстанции Вермин и изготовление таблеток на основе данной субстанции (рис 2) Таблетки массой ОД г содержат 2,5 мг субстанции Вермиа Наполнителем служит микрокристаллическая целлюлоза Имму-номодулируюиве действие наполнителя таблеток не выявлено (рХ),05, данные в таблицах не приводятся)

ТП 1 Получение субстанции Вермин из биомассы ГККДЧ

ТО 1-1 Отбраковка, очистка биомассы (19±1)СС, 48 ч (8±2)°С, 48 ч

ВР Подготовка помещений, оборудования, персонала

ТО 1-2 Крнодеструкция очищенной биомассы—(10+1)°С, 72 часа

ТО 1-3 Гомогенизация замороженной биомассы

ТО 1-4 Экстрагирование о,9% ЫаС1 рН Б,8±0,2, (20±1)°С, 10 мнн рН 10,5¿0,2, (8±21°С, 48 ч

ТО 1-5 Центрифугирование экстракта 1500 об/мин, 30 пин

ТО 1-6 Фильтрация мембраны 0,8,0,65,0,45,0,22 ни

ТО 1-7 Лиофилыюе высушивание субстанции Вермин

ТП 2 Получение таблеток Вермин

ВР

ТО 1-1

Подготовка производственных помещений, оборудования, персонала

Получение массы для таблетирования

ТО 2-2

ТО 2-3

Таблетирование методом прямого прессования масса пблетки 0,2 г диаметр 8-9 мм_

Отбраковка таблеток и внутрицеховой контроль

"5"

Фасовка

Маркировка

Упаковка

Контроль

Рис 2 Технологическая схема получения таблеток Вермин

Максимально переносимую дозу таблеток вьившь не удалось из-за отсутствия реальной возможности ввести мышам пероралыю доау более 30 мг/кг При внутрижелудочном введении использованных доз препарата отклонений в поведенческих реакциях и других патологических изменений не наблюдается

Ежедневное пероральное введение таблеток кроликам в течение одного месяца в дозе 5,0 мг/кг не приводит к изменению поведенческих реакций и общего состояния животных. Изменения внутренних органов при патоморфологическом и гистологическом исследованиях не выявлены Через месяц ежедневного приема таблеток у животных отмечается достоверное увеличение количества эритроцитов и повышение концентрации гемоглобина то

сравнению с исходным уровнем (р<0,05, данные не приводятся) Изучение аллергенной активности таблеток Вермин показывает, что введение препарата не приводит к развитию ГЗТ у мышей ни в одной го использованных доз Препарат не вызывает реакции в коньюнкш-вальной пробе у морских свинок, не обнаруживает активности в тесте дегрануляции тучных клеток у 1фыс популяции \yistar Препарат Вермин в исследованных дозах существенно не влияет на показатели клеточности, массы тимуса и селезенки ингакгных мышей (р>0,05, данные не приводятся)

Стимуляция гуморального системного иммунного ответа проявляется при введении таблеток в дозе 0,25 мг/кг увеличением количества АОК в селезенке и нарастанием титра ге-магглютинирующих антител (табл. 1) Препарат статистически значимо не влияет на развитие реакции ГЗТ(р>0,05, данные не приводятся)

При системном иммунном ответе на фоне перорального введения таблеток Вермин на 5-е сутки отмечается повышение абсолютного количества палочкоядерных нейтрофилов во всех апробируемых дозах, а в дозах 0,025 и 2,5 мп'кг - количества моноцитов в периферической крови

Таблица 1

Влияние таблеток Вермин на количество АОК в селезенке и уровень антител при первичном иммунном ответе

Экспериментальное воздействие Доза препарата, мг/кг Число АОК в селезенке Тифгемагг-лютининов, обратного титра)

на 106 ЯСК селезенки, к^ю на селезенку, 1с®ю

Контроль - 1,83303 ±0,07305 4,4617±0,Ю53 8,6 ±0,33

(68,08) (28954)

0,025 1,8926 ±0,0747 4,5991 ±0,0751 8,9 ±0,56

Таблетки (78,09) (39732)

Вермин 0Д5 2,0319±0,0916 4,7597 ± 0,0930Г 9,55 ±0,29*

(107,6) (57516)

2,5 1,9658 ±0,1116 4,5697 ± 0,0854 83 ±0,68

(92,43) (37133)

Примечание Здесь и в табл 3 и 7 в скобках указана средняя геометрическая числа АОК (антилогарифм из средней арифметической 1с®ю числа АОК) Здесь и в табл 2 *- /т<0,05, **- р<0,01, *"*- /><0,001 в сравнении с кошролем по непарному /-критерию Сгаоденга, во всех группах п= 10

У тех же животных на высоте системного иммунного ответа обнаруживается достоверный стимулирующий эффект препарата на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови (табл. 2)

Таблица2

Влияние таблеток Вермин на интегральные показатели фагоцитарной активности нейгтрофилов периферической крови мышей на высоте системного иммунного опгвета

Экспериментальное воздействие Доза препарата, мтУкг Процент фагоцитоза Фагоцитарное число Абсолютное число фагоцитирующих нетрофилов, х109/л Абсолютное число фагоцитированных объектов, хЮ7л

Контроль - 423 + 3,1 0,75 ±0,06 0^)3 ±0,18 1,66 ±0,35

Таблетки 0,025 76,1 ±2,1" 1,98 ±0,08" 2,03 ±0,29** 5,18 ±0,62***

Вермин 0,25 62,8 ±4,Г 1,54±0,17** 1,77 ±0,43 4Д9± 1,06*

2,5 73,1 ±3,5** 1,88±0,15** 1,70 ±0,20* 4,46 ±0,67"

В модели иммунодефицита, индуцированного однократным введением ЦФ, у животных наблюдается достоверное снижение абсолютного и относительного числа АОК в селезенке, титра антител, относительной массы и клешчности тимуса, общего количества лейкоцитов периферической крови (за счет снижения лимфоцитов) в сравнении с аналогичными показателями у животных, не получавших иммунодепрессанг (контроль 1) Таблетки Вермин отменяют депрессию гуморального иммунного ответа, индуцированную ЦФ, нивелируют снижение массы тимуса Помимо этого введение таблеток Вермин в дозе 0,25 мг/кг на фоне воздействия ЦФ приводит к увеличению клеточности селезенки (табл 3), что может быть связано с активацией «тутового» гемогкоза, гри котором происходит возрастание числа селезеночных колониеобразующих единиц (полипогентных клеток - предшественников гранулоци-тов) (Богдашин и др, 1992) Таблетки Вермин восстанавливают абсолютное количество лимфоцитов и предотвращают вызываемый циклофосфамидом моноцигоз(табл 4)

Патологическое снижение активности фагоците® в организме может являться одним из ведущих звеньев в патогенезе вторичных иммунодефиците» Поэтому представлялось целесообразным изучение влияния таблеток Вермин на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови в модели ЦФ - индуцированной иммуносупрессии. Однократное введение ЦФ животным уменьшает процент фагоцитоза, фагоцитарное число и процент активных фагоците» более, чем на 50%. Применение таблеток Вермин оказывает стимулирующее действие на фагоцитарную активность нетрофилов на фоне иммуносупрессии Пероральное введение препарата в дозах 0,025 и 0Д5 мг/кг приводит к повышению относителыых и абсолютных показателей участвующих в фагоцитозе нетрофилов, в том числе активных фагоцитов и общего числа фагоцитированных объектов (тайл 5)

Влияние таблеток Вермин на показатели гуморального иммунного ответа, клеточности тимуса и селезенки мышей на фоне индуцированного иммунодефицита

Эксперименталь- Число ЯСК Число ЯСК Число АОК Титр гемагптюти-

ное воздействие, тимуса, селезенки, в селезенке, нинов, (1оё2 обрат-

доза х106/орган х106/орган ного титра)

Кошроль 1 69,13 ± 299,5 ± 4,6042 ±0,0538* 9,40 ±034*

935* 39,11 (40199,98)

Контроль 2 (ЦФ) 22,84 ± 242,44 ± 43020 ± 0,0890 7,22 ±0,40

5,28 27,23 (20045,72)

ЦФ+таблетки Вер- 52,26 ± 314,72 ± 4,4475 ±0,1136 9,80 ±035*"

мин, 0,025мг/кг 6,97" 44,40 (28019,8)

ЦФ+таблетки Вер- 44,86 ± 413,28 ± 4,6438 ± 0,0683** 830 ±0,45*

мин, 0Д5мг/кг 5,52** 41,46" (44037,1)

Примечание Здесь и втабл 4-6 *-р<0,05, *-р<0,0], *"-р<0,001 в сравнении с контролем 2 (ЦФ или стресс) по/-критерию Сгьюденга. Здесь и в табл 4, 5 в кошроле 1 п = 10, в контрале2 (ЦФ) л = 9, в опытных группах во всех вариантах п= 10

Таблица4

Влияние таблеток Вермин на количественный состав лейкоцитов периферической крови мышей на фоне индуцированного иммунодефицита

Экспериментальное воздействие, доза Количество лейкоцитов, хЮ9/л Количество форменных элементов крови, х109/л

нейтрофилы эозино-филы монотипы лимфоциты

палочко-яцерные сегменто-ядерные

Контроль 1 8,42 ± 037 ± 1,16± 0,10± 032 ± 6,47 ±

0,70* 0,08 0,15* 0,02 0,04" 039***

Кошроль 2 (ЦФ) 633 ± 037 ± 1,96± 0,13 ± 0,63 ± 2,90 ±

0,46 0,10 033 0,03 0,07 033

ЦФ+таблетки Вер- 8,09 ± 1,08 ± 238 ± 0,10± 031 ± 3,83 ±

мин, 0,025мг/кг 032* 0,23 0,40 0,01 0,08 038*

ЦФ+таблетки Вер- 8,93 ± 1,01 ± 3,22 ± 0,11 ± 0,42 ± 4,16±

мин, 0,25мг/кг 0,56" 0,13* 0,43* 0,02 0,05* 0,49*

Влияние таблеток Вермин на относительные и абсолютные показатели фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови мышей на фоне индуцированного иммунодефицита

Эксперименталь- Процент Фагоци- Процент Абсолют- Абсолют- Абсолют-

ное воздействие, фагоци- тарное активных ное число ное число ное число

доза тоза число фагоцитов фагоцити- фагоцити- активных

рующих рованных фагоци-

нейгрофи- объектов, тов, х10''/л

лов, хЮ9/л хЮ9/л

Контроль 1 35,4 ± 0,62 ± 15,7 ± 0,57 ± 0,98 ± 0,26 +

4,55" 0,09" 2,84* 0,13 0,24 0,07

Контроль 2 (ЦФ) 17,67± 0,29 ± 733 + 0,47 ± 0,78 ± 0,20 ±

3,70 0,06 1,77 0,14 0,25 0,07

ЦФ+таблетки Вер- 34,5 ± 0,63 ± 11,0± 1,17± 230 ± 0,61 ±

мин, 0,025мг/кг 1,8*** 0,03"* 3,47*" 0,22* 035** 0,10"

ЦФ+таблетки Вер- 33,6 ± 0,66 ± 11,4± 1,43 ± 2,82 ± 0,83 ±

мин, 0Д5мг/кг 1,6 Г 0,05*** 1,12"* 0,20*** 0,42*** 0,13*"

Помимо иммуносупрессии, индуцированной химическим агентом, для оценки имму-номодулирующих свойств таблеток Вермин использована модель иммобилизационного стресса Иммобюттацня животных вызывает существенное изменение клеточности органов иммунной системы У мышей, подвергнутых стрессу, происходит уменьшение массы и кле-точности селезенки, клегочности тимуса, массы лимфатических узлов В костном мозге наблюдается характерное повышение числа кариоштгов с 10,6 ± 0,83 до 16,1 ± 1,70 При применении таблеток Вермин в дозах 0,25 и 2,5 мтУкг достоверно восстанавливается клегочность тимуса соответственно до 76,4 ±10,4 и 82,1 ±10,7 ЯСКхЮ6/орган по сравнению с группой контроль 2 (стресс), где клегочность тимуса равна 45,4 ±8,6 ЯСКх1 (/'/орган

Иммобилизационный стресс приводит к снижению показателей фагоцитарной активности нейфофилов периферической крови в отношении формалинизированных эршроци-тов барана, что проявляется уменьшением процента фагоцитоза и фагоцитарного числа в 2 раза (табл 6) Таблетки Вермин в дозе 0,25 мтУкг способствуют повышению как абсолютных, так и относительных показателей нейтрофюты юга фагоцитоза Введение препарата в дозе 2,5 мг/кг приводит к нормализации показателей фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови и клеток костного мозга

Изменение показателей киелородозависимой бактерицидной активности фагоцитирующих клеток крови и клеточных суспензий селезенки и костного мозга в НСТ - тесте у животных, подвергнутых иммобилизационному стрессу, в контрольной и опытной группах отсутствует

Влияние таблеток Вершин на фагоцитарную активность клеток костного мозга и нейтрофнлов периферической крови мышей на фоне иммобилиза-цнонного стресса

Экспериментальное воздействие, доза, число наблюдений Клетки костного мозга Нейтрофилы периферической крови

абсолютное число фаго-щпирущих клеток на бедренную кость, хЮ6 абсолютное число захваченных объектов на бедренную кость, хЮ6 абсолютное число фагоииш-рующих клеток, xlÖ% абсолютное число захваченных объектов, х 10?/л процент фагоцитоза фагоцитарное число

Контроль 1 и = 8 2,6 ± 032' 3,4 ± 0,42 035 ± 0,12 0,85 ± 034 14Д5 ± 235* 031 ± 0,04*

Конгрсшь2 (стресс) и=9 4,1 ± 039 4,8 ± 0,69 039 ± 036 0,40 ± 0,06 735 ± 1ДЗ 0,Ю± 0,01

Стресс+таблетки Вермин, 0,025 мг/кг п = 8 4,9 ± 031 5,9 ± 0,71 036 ± 0,12 0,66 ± 0,16 1535 ± 2,56* 0,18± 0,03

Стресс+таблетки Вермин, 025 мг/кг п = 8 432 ± 0,68 53 ± 0,88 039 ± 0,11* 1,0 ± 035' 183 + 2,51** 032 ± 0,07*

Стресс+таблетки Вермин, 25 мг/кг л = 8 236 ± озо* 2,8 ± 0,61* 0,64 ± 0,13* 132± 031* 17,12± 4,73 035 ± 0,14

При хранении в сухом защищенном от света прохладном месте в течение 2 лет и 3 месяцев таблетки Вермин обнаруживают стабильность всех контролируемых показателей Основные нормируемые показатели на таблетки Вермин представлены в разработанном проекте Технических условий

Иммунотропное действие разработанной мази Вермин для интравагинального применения

Мази представляют собой сложные композиции, состоящие из лекарственных веществ, равномерно распределенных в основе, являющейся их носителем В связи с тем, что субстанция Вермин стимулирует анпггелообразование и фагоцитоз, представлялось важным исследование ее иммуномодулирующего действия в составе мази для интравагинального введения, что перспективно для лечения гинекологических заболеваний, которые сопровождаются ослаблением иммунных реакций на территории пенишльного тракта. Наблюдаются erat-

жение числа жизнеспособных фагоцитирующих клеток, их функционального резерва, фагоцитарной активности (Долгушин, Бухарин, 2001, Телешева и др, 2001), в связи с чем возникает необходимость проведения иммуномодулируюшей терапии В мази для ишравагиналь-ного введения целесообразно использовать основы, обладающие сла&лм осмотическим действием, те не оказывающие иссушающее влияние на слизистые оболочки и кожные покровы В соответствии с этим, в качестве од ного из компонентов мазевой основы нами рассмотрен ланолин, принятый Фармакопеей всех стран

В наших исследованиях было создано 27 мазевых композиций, в которых в качестве главных компонентов используются субстанция Вермин и ланолин. Выбор оптимальной га созданных композиций произведен с применением матрицы математического планирования эксперимента Основным параметром огпимизации является показатель восстановления экспрессии мембранных рецепторов тимоцитов морской свинки, с использованием которого из 27 мазевых композиций выбрано 5 составов. Совместно с кафедрой технологии лекарственных средств ПГФА проведена оценка их структурно-механических свойств (тикссгсропность, вязкость, механическая стабильность, касательное напряжение сдвига) Выявлено, что оптимальным по комплексу изученных показателей является состав, в котором мазевая основа содержит 67% ланолина безводного, 30% масла подсолнечного и 3% твина-80 Данная композиция характеризуется какдифильно-абсорбционная С использованием выбранной основы изготовлены 3 опытные серии мази, в которые субстанция Вермин введена в концентрации 0,01%, 0,1% или 1,0% Все варианты мази и мазевую основу использовали в иммунобиологических исследованиях на животных Установлено, что изготовленные мази Вермин не оказывают местно-раздражающего действия В тесте «Прочность рубца на разрыв» они проявляют выраженные регенераторные свойства (рО,05-0,001, данные не приводятся)

При ингравагинальном применении 0,01% 0,1% и 1,0% мазей Вермин и мазевой основы у животных статистически значимых изменений клеточности ЛУ и общего количества лейкоцитов периферической крови не выявлено Применение 1,0% мази Вермин приводит к статистически значимому (р <0,05) увеличению количества клеток в костном мозге, а использование 0,01% мази вызывает увеличение клеточности тимуса и относительной массы селезенки (р <0,05, д анные не приводятся)

На фоне иммунного ответа, развивающегося преимущественно в регионарных лимфатических узлах, интравагит ильное применение мази приводит к стимуляции ашшелообраэо-вания(табл 7) При всех используемых конце!прациях повышается число АОК в подвздошных ЛУ, при использовании 0,01% и 0,1% мази - в паховых ЛУ, при использовании 0,1% мази - в селезенке Титр гемагглюгинирующих антител достоверно увеличивается у животных, получавших 0,1% мазь Вермин Количество АОК в подмышечных лимфатических узлах находится на уровне контрольных животных

Влияние мази Вермин на количество АОК селезенки и ЛУ и уровень шгпггел у крыс\Ув4аг при шправаптальном введении

Эксперимен- Селезенка Подвздошные ЛУ Паховые ЛУ Подмышечные ЛУ Титргемаг-

талыюе воздействие, число наблюдений число АОК на 106ЯСК, Ь&о число АОК на орган, Ь&0 число АОК на 10бЯСК, Ь&о число АОК на орган, Ь&о число АОК на 106ЯСК, Ь&о число АОК на орган, Ь&о число АОК на 106ЯСК, Ь&о число АОК на орган, Ь&о таогининов, (Ь& обратного ттпра)

Контроль л=10 0,6245 ± 0,1467 (4,20 Зг5619± 0,1682 (3687) 2^440+ 0,0703 (350) 4,6031± 0,1052 (40100) 1,67641 0,1274 (47,47) 3,25611 0,1361 (1804) 032071 0,1177 (2,09) 2,04031 0,1298 (109,7) 6,1 ±0,24

Мазевая основа л =10 0Д365 ± 0,1712 (3,44) 3,7442 ± 0,1497 (5550) 2,6687 ± 0,0833 (466,4) 4,86201 0,1066 (72780) 1,69521 0,1879 (49,58) 3,17371 0,2158 (1492) 0,17481 0,0978 (1,49) 1,9433 ± 0,0932 (88,78) 6,410,24

Мазь 1% 77=10 0,6866 ± 0,0805 (4,86) 3,6978 ± 0,0932 (4987) 2,70971 0,1248 (512,6) 5,08931 0,1560* (122835) 1,2908 + 0Д754 (19,54) 2^3861 03109 (8683) 0,5331 + 0,2606 (3,41) 23856+ 0,2813 (243) 6,21035

Мазь 0,1% и=8 1,1061 ± 0,2161 (12,77) 4,1923 ± ОД 132* (15571) 2,90571 0,0877** (804^) 5,26591 0,1558**" (184487) 2,15171 0,0706*** (141,8) 3,78421 0,0464**" (6085) 033031 0,1377 (2,14) 2,1065+ 0,1355 (127,8) 7,010,26*

Мазь 0,01% л=8 1,0349 ± 0,2442 (10,84) 4,1089+ 0,3231 (12853) 3,0393 ± 0,0994*** (1095) 4,99681 0,1397* (99286) 2,12021 0,0607*** 031« 3,68821 0,0742** (4878) 03415+ 0,1310 (2,19) 2,1380+ 0,1431 (137,4) 6,71036

Примечание Здесь и в табл. 8 *- рФ,05," - р<0,01, ***- р<0,001 в сравнении с контролем, * - р<0,05, т • р0,0\, т - рОЩ по сравнению с мазевой основой по ¿-критерию Оьюдета.

Обнаружено выраженное стимулирующее влияние всех концентраций мази при ишра-вагинальном введении и на показатели фагощтгарной активности клеток подвздошных ЛУ, селезенки, а также нейгрофилов периферической крови (табл. 8)

Таблица 8

Влияние мази Вермин на фагоцитарную активность клеток подвздошных лимфатических узлов, селезенки, нейгрофилов периферической крови крыс \Vistar при ш права гиналыюм введении

Эксперимен- Подвздошные ЛУ Селезенка Нейтрофилы крови

тальное воздействие, число наблюдений фагоцитарное число количество захваченных объектов, хЮ6 фагоцитарное число количество захваченных объектов, хЮ6 фагоцитарное число количество захваченных объектов, х 109/л

Контроль и=10 033 ± 0,04 39,1 ± 9,13 0,19± 0,02 230,4 ± 3032 0,57 ± 0,05 1570,1 ± 222,1

Мазевая основа и=10 0,25 ± 0,03 633 ± 16,78 0,19+ 0,01 250,1 ± 42,09 0,66 ± 0,05 2014,0± 514,8

Мазь 1% «=10 0,42 ± 0,04**"" 110,0± 19,84** 039 ± 0,04***™' 378,6 ± 62,1* 0,80 ± 0,01*** 23823 ± 531,1

Мазь 0,1% п=8 0,41 ± 0,05* 117,9± 36,46* 037 ± 0,05**"" 395,0 ± 70,67* 0,97 ± 0,07**** 1935,6+ 3793

Мазь 0,01% и=8 0,40 ± 0,10 83,7 ± 22Д9 0,41± 0,05*""" 370,4 ± 52,81* 1,07 ± 0,17* 3275,6± 5913"

Поглотительная способность клеток паховых ЛУ увеличивается под влиянием 0,1 % мази (показатель фагоцитарного числа в опытной группе составил 039 ± 0,07, в контроле - 0,22 ±0,01, р<0,05) Мазевая основа при ингравагинальном введении не оказывает влияние на гуморальный иммунный ответ и функцию фагоцишрующих клеток (р>0,05, данные не приводятся)

Таким образом, мазь Вермин при ингравагинальном введении проявляет активность во всех концентрациях, но наиболее выраженными иммуномодулирующими свойствами обладает 0,1% мазь. В производственных условиях югогоалено и проконтролировано 3 серии 0,1% мази Вермин При хранении в течение 2 лег и 3 месяцев в сухом защищенном от света прохладном месте выявлена стабильность мази На мазь разработаны проекты ВФС и ЭПР

Иммуномодулирующая активность мази Вермин на модели гнойной раневой инфекции

Проявление максимального терапевтического эффекта мази во многом определяется характером ее основы Для мазей, щэедназначенных для лечения гнойных ран, чрезвычайно важно, чтобы они обладали выраженным дегидратирующим действием Нами были созданы композиции мазевых основ, характеризующиеся как дифильно-абсорбционные, дифильно-эмульсионные и гидрофильные Исследования показали, что гидрофильные основы, содержащие палютиленгликоли (ПЭГ), проявляют наиболее высокую осмотическую активность. Мазь Вермин на основе ПЭГ, предназначенная для лечения инфицированных ран, обладающая высоким дегидратирующим д ействием, запатентована. С целью исследования условий введения в данную мазь гентамицина сульфата проведена оценка влияния субстанции Вермин на его минимальную подавляющую и минимальную бактерицидную концентрацию Субстанция Вермин значимо снижает МПК и МБК антибиотика в отношении S aureus, Ps aeruginosa и смеси S aureus, Ps aeruginosa, E coli (табл9), что позволяет в мази Вермин, предназначенной для лечения гнойных ран, использовал, гентамицина сульфат в минимальной концентрации В гроизводелвенных условиях были изготовлены 3 опьпные серии оригинального состава 0,1% мази Вермин на гидрофильной основе без антибиотика и 3 опытные серии с добавлением 0,05% гентамицина.

Таблица 9

Влияние субстанции Вермин на МПК и МБК гентамицина сульфата

Состав смесей МПК, мг/мл МБК, мг/мл

Гентамицин, S aureus 0,02 0,039

Гентамицин, Е coli 0,01 0,02

Гентамицин, Ps aeruginosa 0,01 0,078

Гентамицин, S aureus 80%, 0,039 0,078

Ps aeruginosa 15%, E colt 5%

Гентамицин, S aureus, Вермин 1 мг/мл 0,0025 0,02

Гентамицин, Е coli, Вермин 1 мг/мл 0,01 0,02

Гентамицин, Ps aeruginosa, Вермин 1 мг/мл 0,005 0,039

Гентамицин, S aureus 80%, Ps aeruginosa 15%, 0,01 0,039

Е coli 5%, Вермин 1 мг/мл

В модели гнойных ран на крысах Wistar исследовано ранозажиаляющее и иммуномоду-лирующее действие мази обоих составов В экспериментах mvtíro и rnvtvo иммунотропная активность мазевой основы не выявлена (р>0,05, данные не приводятся) Количественное определение микробов в ране показывает, что исходный уровень (до нанесения мази) как S

аигеич, так и А' от/^шамг превышает 109 на 1 г ткани. На 4-е сутки в группе животных, которым проводили лечение мазью Вермин с антибиотиком и мазыо Ируксол, содержание микроорганизмов в ране снижается до 10'/г, в контрольной группе этот показатель не изменяется. На 7-е суши в группе животных, которым проводили лечение мазью Вермин с антибиотиком количество микробов уменьшается до Ю'/г, при лечении мазью Ируксол - до 104/г, в контрольной группе этот показатель не изменяется В группе животных, которым наносили мазь Вермин без антибиотика, количество микроорганизмов снижается по сравнению с контрольным вариантом в 10 - 20 раз. Обе мази Вермин (с антибиотиком и без него) снижают перифо-кальный отек, гиперемию и инфильтрацию тканей вокруг раны Индекс Л Н Поповой (процент заживления ран/супси) в период с 7 по 12 сутки в обеих опытных группах выше, чем в контрольной. Эггителизашя ран в группе животных, которым наносили мазь Вермин с антибиотиком, заканчивается на 11,0 ± 0,44 супси, в группе животных, которым наносили мазь Ируксол - на 12,6 ± 0,5 сутки лечения Эпигелизация ран с мазью Вермин без антибиотика длится дальше, но достоверно отлтриется от контрольной группы (табл 10)

Таблица 10

Влияние мази Вермин на заживление ран при экспериментальной хирургической инфекции у крыс \Vistar

Экспериментальное воздействие Показатели заживления раны, сутки Индекс Л Н Поповой Сроки зажив-

грануляции краевая эпигелизация очищение раны 1-3-е сутки 3-7-е сутки 7-12-е супси ления, супси

Контроль 5,2 ± 0,58 6,2 ± 037 20,6 ± 0,51 4,01 ± 1,19 8,83 ± 2,44 2,98 ± 0,48 28,0 ± 1,09

Мазь Ируксол 2,6 ± 0,4" 4,4 ± 0,51* 5,8 ± 0,66*" 12,11± 3,03* 15,1 ± 4,62 19,1 ± 0,48"* 12,6 ± оз

Мазь с антибиотиком 2,2 ± 0,48"* 3,6± о,бГ 4,6 ± 0,51"* 9,59 ± 1,66 17,64± 1,76 19,78± 0,13*" 11,0± 0,44"*"

Мазь без антибиотика 3,6 ± 0,51* 5,6 ± 0,51 14,2 ± 2,13 *~ш 7,04 ± из 11,75± 1,17 12,01 ± 1,24*"" 18,8 ± 0,66*"**'

Примечание Здесь и втабл. 11,12 '- /КО,05, **- /т<0,01,"*- /т<0,001 по сравнению с контрольной группой, " - р<0,05, т- рФЩ, ш- ¿<0,001 по сравнению с группой сравнения по критерию Дункана (и=5 в каждой группе)

При микроскопической оценке выявлено, что во всех вариантах в день иссечения раны нейтрофилы проявляют высокую функциональную активность. Характер фагоцитоза различный завершенный, незавершенный, извращенный На 4-е супси после иссечения раны у

животных контрольной группы выявлено значительное снижение процента фагоцитоза и фагоцитарной активности нешрофилов, отмечен высокий уровень дегенеративно-измененных форм и обильная микрофлора Такое соотношение в контрольной группе сохраняется и на 7-е сутки (табл 11)

Таблица И

Цитологическая характеристика ран при применении мази Вермин в модели местной гнойной инфекции у крыс \Vistar

Эксперименталь- Процент Фагоцитар- Неизмененные Дегенеративно изме-

ное воздействие фагоцитоза ное число нейтрофилы, % ненные нейтрофилы, %

Исходные данные (сразу после иссечения раны, до нанесения мази)

Контроль

Мазь Ируксол

Мазь с антибиотиком

Мазь без антибиотика

Кошроль

Мазь Ируксол

Мазь санптбио-тиком

Мазь без антибиотика

79,2 ±4,25 79,8+4,81 80,4 ±1,56

84,2 ±2,92

2,22 ±0,27 2,1410,19 2,1510,09

2,0810,17

1,4 ±0,74 0,810,48 2,4 ±0,81

Четвертые сутки нанесения мази

45,8 ±2,05 45,6 ±4,46 68,6 12,52"

82,6 ±3,77"

1,1 ±0,07 1,19±0,14 1,79 1 0,25'*

1,9±0,16**

8,6 ±3,65 9,2 ±1,95 13,212,28

2,010,83*

15Д ±4,61 9Д11,46 13,812,70

11,8 ±2Д2

30,61231 32,811,82 11,012,79"

13,812,95'

Седьмые сутки нанесения мази

Кошроль 41,215,15 0,9610,21 10,6133 41,017,89

Мазь Ируксол 47,611,88 1,0110,08 8,613,55 37,21231

Мазь с антибио- 73,411,20*"*** 1,6910,12"** 10,011,48 12,0+1,04*"*

тиком

Мазь без анти- 79,015,63"***" 1,8710,17*"*** 2,011,22* 12,414,01*"*

биотика

Применение мази Вермин обоих составов способствует статистически значимому повышению фагошпарной активности нейгрофилов в ране на 4-е и 7-е сутки По нашим дан-

ным препарат сравнения Ируксал фагоцитарную активность нейтрофилов в ране не стимулирует.

Изучение активности фагоцитов периферической крови показывает, что к моменту формирования гнойной раны, в день ее иссечения (перед началом нанесения мази), наблюдается снижение функциональной активности нейтрофилов по отношению к S aureus по сравнению с исход ными данными, полученными у интактных животных. Сходные результаты получены и при анализе фагоцитоза формалинизированных эритроцитов барана При применении мази Вермин на 4 - е сутки наблюдается повышение относительных показателей фагоцитарной активности нейтрофилов, а на 12- е сутки - как относительных, так и абсолютных показателей. В группе животных, которым наносили мазь Ируксал, только на 12- е сутки выявлено повышение относительных показателей фагоцитарной активности клеток периферической крови, абсолютные показатели и на 12- е сутки достоверных отличий не имеют (табл 12)

Таблица 12

Влияние мази Вермин на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови у крыс Wistar по отношению к S. aureus в модели местной гнойной инфекции

Экспери- 4-есутки нанесения мази 12- е (утки нанесения мази

ментальное

воздействие процент фаго- фаго- процент фаго- фаго- абсолют- абсолют-

фаго- цитар- цитар- фаго- цитар- цитар- ное коли- ное коли-

цитоза ное ный цитоза ное ный чество чество

число индекс число индекс фагоцити- захвачен-

рующих ных объ-

клеток, ектов,

х1(?/л х10?/л

Контроль 28,8 + 0,44 ± 1,48± 22,4 + 031 ± 139± 187,4± 2,68 ±

4,1 0,09 0,13 13 0,02 0,05 343 036

Ируксал 31,8 + 0,55 ± 1,65+ 33,6 ± 0,64 ± 1,92 ± 135,1 + 2,42 +

5,6 0,12 0,11 2,8* 0,06* 0,19* 33,5 0,49

Мазь с ан- 43,0± 0,84 ± 1,94± 443 ± 0,88 ± 1,99± 237,0 ± 4,76 ±

тибиотиком 3,8* 0,09"* 0,06* 3,1*** 0,06*"* 0,03" 22,6 0,49

Мазь без 433 ± 0,79 ± 1,83 ± 473 ± 1,14 ± 2,42 + 278,4 + 6,74 ±

антибиотика 2^* 0,06* 0,16 5,05"** 0,11*"" 0,06*** 38,6** 0,91***

В модели местной гнойной инфекции мазь Вермин с антибиотиком достоверно повышает уровень титра антиальфастафилолизина на 7-е сутки (титр в опьпной группе равен 7,5 ± 3,09 МЕ/мл, в контрольной - 236 ± 0,39 МЕУмл, /т<0,05), мазь Вермин без ангибиопь

ка- на 12- е сутки (пир в опытной группе равен 12,0 ± 4,0 МЕ/мл, в контрольной - 2,13 ± 0,53 МЕ/мл, р<0,05) В проводимых исследованиях мазь Ируксол влияния на уровень анш-альфасгафилализина не оказала

Иммуномодулирующие эффекты Вермина в системе in vitro

В связи с тем, что иммуномодулирующее действие препарата т \гю мажет опосредоваться через целый ряд непрямых механизмов (в частности, через повышение уровня коло-ниестимулирующих факторов, провоспалигельных цигокинов, регуляцию процессов созревания и миграции клеток и др), представляет интерес изучение эффектов таблеток и мази Вермин в системе ш vitro

Результаты оценки влияния препарата т vitro на пролифершивный ответ лимфоцитов пфиффической крови пршаически здоровых людей (п = 8) представлены на рис 3 Изучено совместное действие профильтрованного экстракта таблеток Вермин и ФГА в дозах от 1,25 до 40 мкг/мл При анализе эффекта препарата в культурах без ФГА установлено, что таблетки Вермин достоверных изменений не вызывают При анализе эмпирический зависимости доза - эффект мигогена обращает на себя внимание, что добавление фильтрата таблеток Вермин в концентрации 10"5 г/л к ФГА в дозе 5 мкг/мл приводит к достоверному увеличению пролиферации по сравнению с культурой клеток с мигогеном без исследуемого препарата по logm имп/мин, те препарат Вермин не обладает Mino генной активностью, но проявляет ее при стимуляции ФГА Это свидетельствует в палкзу костимулирующего действия таблеток Вермин

Рис 3 Влияние таблеток Вермин на индекс стимуляции при пролиферативном ответе лимфоцитов в культуре in vitro

По оси абсцисс - концентрация ФГА, мкг/мл, по оси ординат - индекс стимуляции по абсолютным значениям Цифрами рядом с кривыми указана концентрация препарата Вермин, г/мл * - р<0,05 к соответствующим культурам без препарата по f-кригерию Слюди па

Исследование влияния субстанции Вермин и экстрактов 0,1 % мази Вермин с дифиль-но - абсорбционной и 0,1% мази Вермин с гидрофильной остовой на фагоцитарную активность нешрофитов периферической крови практически здоровых людей добровольцев т vitro показало, что субстанция Вермин проявляет стимулирующее влияние в широком диа-

1,25 2,5 5 10 20 40

газоне концентраций от 300 мкг/мл до 3><Ю'ю мкг/мл.

Экстракт го мази Вермин на гидрофильной основе достоверно увеличивает фагоцитарную активность нейгрофилов по одному или нескольким показателям в дозах 300,30,3х 103, 3 * 10"5,3 * 106 мкг/мл. Наиболее выраженный эффект экстракта из мази Вермин на дифильно-абсорбционной основе выявлен в дозах 300, 03, 0,03, 3 * 107,3 * 10~9 мкг/мл Д анные материалы указывают на возможность непосредственного действия таблеток и мази Вермин, содержащих природные полипегтгиды, на клетки иммунной системы и, прежде всего, на неспецифическое звено

Таким образом, выявлено иммунотропное действие полипегтщдного препарата Вермин в широком диапазоне доз, независимо от пути поступления его в организм Это подтверждает значимость работы по созданию таблеток и мазей. Предположительно таблетки и мази Вермин осуществляют тканенеспецифическое действие, направленное на нормальное функционирование иммунных клеток, восстанавливают их реактивность, регулируют процессы метаболизма

ВЫВОДЫ

1 Установлена высокая иммуномодулирующая активность содержащего природные полипептиды препарата Вермин, используемого в виде таблеток и мази у животных с ненарушенными функциями иммунной системы, при лекарственной и стресс-индунированной иммуносупрессии, экспериментальной раневой инфекции

2 Обосновано, что таблетки Вермин при пероральном применении не проявляют общетоксические и аллергенные свойства и оказывают иммуномодулируюшее действие стимулируют накопление атителообразующих клеток в селезенке, повышение клегочно-сги тимуса и костного мозга, тигра антител к эригроцигам барана, увеличение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови.

3 Выявлено, что в экспериментальной модели циклофосфамидиндуиированного иммунодефицита таблетки способствуют восстановлению количества лимфоцитов в периферической крови, антигелообразующнх клеток в селезенке, клеточностн тимуса и фагоцитарной активности нейгрофилов периферической крови, повышают титр антител В экспериментальной модели иммобилизационного стресса таблетки предупреждают изменения клеточностн тимуса, показателей фагоцитарной активности клеток костного мозга, нейгрофилов периферической крови.

4 Показано, что в экспериментальной модели локального иммунного ответа мазь Вермин на дифильно - абсорбционной основе при интравагинальном введении способствует увеличению количества АОК в селезенке, подвздошных и паховых лимфатических узлах, относительной клеточностн тимуса и костного мозга, повышению титра антител к эригроцигам барана, фагоцитарной активности нейгрофилов периферической крови, макрофагов селезенки, регионарных лимфатических узлов

5 Обосновано, что в экспериментальной модели гнойной раневой инфекции мазь Вермин на гидрофильной основе способствует повышению активности фагоцитирующих

клеток в ране и периферической крови, обладает дегидратирующим действием, привод ит к сокращению сроков лечения.

6 Показано, что в экспериметггах т \\tro препарат Вермин проявляет стимулирующее действие на пролиферативный ответ лимфоцитов и фагоцитарную актизность нетро филов пф»(|)фической крови у практически здоровых людей добровольцев.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Петров В Ф, Сафонова Г.М, Кашина С В, Перевозчикова ЕН, Плюснина ЛИ. Изучение обшегоксического действия и аллергенное™ препарата ВерминШ кн. Современная вакциналогия Тез. дотсл П Междунар конф, посвященной 100-летию Пермского НПО «Биомед» -Пермь, 1998 -С 182-182

2 Сафонова Г М, Плюснина ЛИ, Кашит С В, Перевозчикова ЕН Опыт выращивания красного калифорнийского червя на отходах производства НПО «Биомед»//В кн Современная вакциналогия Тез докл. П Междунар. конф, посвященной 100-лешю Пермского НПО «Биомед» - Пермь, 1998 -С 183-183

3 Петров В Ф., Сафонова ГМ, Кашина С В, Перевовчикова ЕН Экстракт из биомассы гибрида красного калифорнийского червя - средство для лечения длительно незаживающих гнойных ран//В кн Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения Матер II Междунар съезда-Санкт-Петербург, 1998-С 144144

4 Сафонова Г.М, Коростелева /ПС, Перевозчикова ЕН Исследования в области технологии и специфической активности мази ВсрминУВ ют Фармация в XXI веке инновации и традиции Тез докл межд. конф -Санкт-Петербург, 1999 -С 57-57

5 Сафонова Г М., Шилов Ю И, Перевозчикова Е Н Изучение влияния препарата Вер-мин на фагоцитоз т и/йо/УВ кн. Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов Матер Всерос конф 42 -Уфа. РИОГУП «Иммунопрепарат», 2000 -С 87-89

6 Сафонова ГМ, Перевозчикова ЕН, Хилько МГ, Клейн С В, Бизяева НЮ Об адагтгогенном и иммуномодулирующем действии биологически активной добавки к пище ВерминУВ кн. Актуальные вопросы разработки, гроизводства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов Матер Всерос конф 42 - Уфа РИО ГУП «Иммунопрепарат», 2000 -С 89-91

7 Сафонова Г М, Коростелева Л .К., Перевозчикова ЕН, Красик ДД, Бизяева Н Ю К вопросу об оптимизации состава мази Вермин//Х1У Респуб молод. науч конф Тез. докл -Сыктывкар,2000 -Т 1 -С 109-110

8 Волкова ЛВ, Сафонова ГМ, Пестерева СА, Перевозчикова ЕН, Бизяева НЮ Влияние мази с интерфероном на модель раневой инфекции у животных//В кн. Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов Матер конф -Томск, 2001 -С 4042

9 Сафонова ГМ, Перевозчикова ЕН, Перевозчиков АБ, Дуняшева ЕА Иммуно-

тропное действие мази Вермин при вагинальном введении крысам на модели локального иммунного ответа//Весгник Уральской медицинской академической науки - 2006 -№3-1(14) -С 218-220

10 Сафонова Г М, Перевозчикова Е Н, Перевозчиков А Б Иммунстгропиая активность препарата Вермин при различных путях введения//В кн. Вакцинология 2006 Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней Матер Всерос иауч.-практ конф -Москва, 2006-С 86-86

11 ПеревозчиковаЕН, Сафонова ГМ. Влияние мази Вфмин на фагоцитарную акп®-ность нейфофилов при экспериментальной раневой инфекиии'/Медицинская иммунология -2006 -Т 8,№2-3 -С 166-166

12 Петров В Ф, Сафонова Г М, Перевозчикова ЕН, Коростелева Л.К. Мазь для лечения инфицированных ран//Паггенг на изобретение РФ №2180574 Приоритет изобретения 30 03 1999 Зарегистрирован в Госуд арственна« реестре изобретений Российской Федерации 20 032002

ПЕРЕВОЗЧИКОВА Елена Николаевна

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ ПРЕПАРАТА ВЕРМИН НА ОСНОВЕ ПРИРОДНЫХ ПОЛИПЕПТИДОВ

Автореферат

_Лицензия ПД-11-0002 от 15 12 99_

Подписано в печать 27 04 2007 Формат 60><90/16 Набор компьютерный Уел печ л 1,5 Тираж 100 экз Заказ № 260-к/2007

ИД «Пресстайм» Адрес 614025, г Пермь, ул Героев Хасана, 105

Оглавление диссертации Перевозчикова, Елена Николаевна :: 2007 :: Пермь

Список основных сокращений

Введшие

Глава 1 Иммунобиологические свойства природных полипептидов (Обзор литературы)

1.1. Природные полипептиды и их синтетические производные как потенциальные иммуномодуляторы

12. Характеристика основных возбудителей гнойных ран и роль пептидов в 24 воспалительном процессе

13. Вермикультура - как источник природных полипептидов

Глава 2. Материалы и методы

Глава 3. Иммуномодулируюк \ая активность, аллергенность разработанных таблеток Вермин

3.1. Получение таблеток

32. Оценка иммунобиологической активности таблеток Вермин

32.1. Оценка острой и хронической токсичности

322. Изучение аллергенной активности

323. Характеристика иммуномодулирующей активности таблеток Вермин да 75 модели системного иммунного ответа

32.4. Влияние на реакцию гиперчувсшигельности замедленного типа

32.5. Хфактфисшкаиммунотрош1ойакшвностит^епж Вермин в 79 условиях индуцированной циклофосфамидом иммуносупрессии

32.6. Характеристика иммунотропной активности таблеток Вермин - в 85 условиях иммобилизационнош стресса

Глава 4 Иммунотропное действие разработанной мази Вермин для ингравагинального применения

4.1. Разработка мази Вермин для интравашналшого применения

42. Оценка иммунотропной активности мази Вермин на модели локального 95 иммунного ответа при ишравапшалшом применении

42 \ Изучение влияния мази Вермин на массу и клеточность центральных и периферических органов иммунной системы крыс

422. Оценка влияния мази Вермин на показатели гуморального иммунного 95 ответа

423. Характеристика влияния мази Вермин на форменные элементы 98 периферической крови и фагоцитарную активность нейтрофилов

42.4. Изучение влияния мази Вермин на фагоцитарную активность клеток 100 селезенки и регионарных лимфатических узлов

Глава 5. Иммуномодулирующая активность мази Вермин на модели гнойной раневой инфекции 5.1. Создание мази Вермин для лечения гнойных ран

52. Оценка иммунобиологической активности мази Вермин в 108 экспериментальной модели гнойных ран 52.1. Патофизиологические показатели течения раневой инфекции

522. Характеристика клеточных элементов и фагоцитоза в ране

523. Идентификация и количественное определение микробов в ране

52.4. Гистологическая xapai терисгикараневых биоптатов

52.5. Фагоцитарная активность нешрофшюв периферической крови 118 ~52.6. Влияние мази на гуморальный иммунный ответ

Глава 6. Иммуномодулирующие эффекты Вермина в системе in vitro

6.1. Оценка влияния таблеток Вермин на пролиферацию Т - лимфоцитов in vitro

62. Изучение влияния субстанции и мазей Вермин на фагоцитарную ^ активность нейтрофилов периферической крови практически здоровых людей добровольцев в эксперименте in vitro

Обсуждение

Выводы

Список лигерапуры

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Перевозчикова, Елена Николаевна, автореферат

Актуальность проблемы. Создание препаратов, обладающих иммунокорригирую-щей активностью, является важной задачей в практической иммунологии. Из отечественных иммуномодулягоров, уже внедренных в лечебную практику, заслуженное признание получили миелопид, полиоксидоний, р^лунофан, ликопид, рибомунил, лейкинферон и др. [26,112, 122,153,154,238]. Однако все еще существует необходимость дальнейшего поиска и испытания новых иммуномодулягоров, действующих избирательно на отдельные звенья иммунной системы и являющихся безопасными лекарственными средствами. Это вызвано ростом частоты вторичных иммунодефицитных состояний, аллергических и аутоиммунных заболеваний. Практически важен поиск новых сырьевых источников дня производства препаратов, регулирующих функции иммунной системы [75]. В настоящее время возрос интерес к биологически активным препаратам пептидной структуры и их влиянию на иммунную систему [42,57,152,186,256]. Работы по изучению иммунобиологических свойств пептидных препаратов при пероральном, наружном применении немногочисленны, не содержат достаточных сведений и в большей мере относятся к применению пептидных препаратов в виде инграна-зальных растворов [202]. Это положение, а также анализ сырьевой базы и технологических аспектов получения иммуномодулягоров пептидной природы - Ганглиина [167,168], Моло-кина [83 ], Вермина [90,91], Микросгама [191,261], разработанных в Пермском НПО «Био-мед», выявили целесообразность дальнейших исследований в направлении создания новых лекарственных форм препаратов этой группы для пероральнош и местного применения.

Цель настоящего исследования - изучение иммуномодулирующей активности препарата Вермин, содержащего полипегггиды из биомассы гибрида красного калифорнийского дождевого червя, при пероральном его введении в форме таблеток и наружном применении в виде мази.

Основные задачи исследования

1. Исследовать иммуномодулируюшую активность, аллергенносгь, острую и хроническую токсичность таблеток, созданных на основе препарата Вермин.

2. Исследовать иммунотропное дейсшие разработанной мази Вермин при ишраваш-нальном применении.

3. Оценил» иммуномодулирующую активность мази Вермин на модели гнойной ранен вой инфекции.

4. Оценил» иммуномодулирующие эффекты таблеток и мази на прсшиферативный ответ лимфоцитов и фагоцитарную акшвносп» лейкоцитов периферической крови в системе in vitro.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Разработанные на основе препарата Вермин таблетки не обладают общетоксическими и аллергенными свойствами, проявляют выраженную иммуномодулирующую активность, восстанавливают нарушенные показатели иммунитета при экспериментальном иммунодефиците и стрессе.

2. Разработанная на основе препарата Вермин мазь с дифильно-абсорбционными свойствами стимулирует антигелообразование и фагоцитоз при локальном иммунном ответе в условиях интравашнального введения.

3. Разработанная на основе препарата Вермин мазь с гидрофильными свойствами при нанесении на гнойную рану оказывает ранозаживляющее действие, активирует поглотительную способность фагоцитов.

4. Таблепси и мазь Вермин проявляют иммуномодулирующую активность в экспериментах in vitro.

Научная новизна. Исследованы механизмы иммуномодулирующего действия таблеток и мази, разработанных на ослове полипептидного препарата Вермин. Установлено стимулирующее влияние таблеток Вермин на системный иммунный ответ, активность фагоцитирующих клеток у животных с ненарушенными функциями иммунной системы, их способность корригировать степень выраженности экспериментального иммунодефицита при цитосгагическом воздействии и иммобилизационном стрессе. Оптимизирован состав мази Вермин на дифильно-абсорбционной основе для интравашнального применения. Выявлено иммуностимулирующее действие мази на антигелообразование и фагоцитарную активность в подвздошных и паховых лимфатических узлах и фагоцитарную активность нейгрофилов периферической крови на модели локального иммунного ответа у крыс популяции \Vistar. Разработан оригинальный способ получения мази Вермин на щцрофильной основе. Установлено, что применение данной мази приводит к сокращению сроков лечения раневой гнойной инфекции, повышению активности фагоцитирующих клеток.

Теоретическое и практическое значение работы. Подученные материалы расширяют представление о принципиальной возможности использования природных полипегпи-дов для создания новых препаратов, обладающих иммуномодулирующей активностью. Показана эффективность разработанных лекарственных форм препарата Вермин (таблетки, мазь) при коррекции вторичных иммунодефищпных состояний и гнойной инфекции. Мазь Вермин для интравагинального применения рекомендуется для дальнейших клинических испытаний при гинекологических заболеваниях. На исследуемые таблетки и мазь разработаны проекты нормативной документации.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на П Международной конференции, посвященной 100-летию Пермского НПО «Биомед», Пермь, 1998; П Международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения», Санкт - Петербург -Валаам, 1998; Международной конференции «Фармация в XXI веке: инновации и традиции», Санкт-Петербург, 1999; 14-ой Коми республиканской молодежной научной конференции, Сыктывкар, 2000; Всероссийской научной конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов», посвященной 95-летию Уфимского НИИВС им. И.И. Мечникова ГУП «Иммунопрепарат», Уфа, 2000; Научной конференции «Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов», Томск, 2001; X Всероссийском научном форуме «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2006», Санкт-Петербург, 2006; Всероссийской конференции молодых ученых, посвященной памяти профессора Н.Н Кеворкова «Иммунитет и аллергия: от эксперимент к клинике», Пермь, 2006; Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней», Москва, 2006.

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ. Получен Патент на изобретение Российской Федерации №2180574.

Диссертация доложена и обсуждена на научно-техническом совете филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ «Пермское НПО «Биомед», совместном заседании научной проблемной комиссии по аллергологии и иммунологии Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН и Пермского отделения Российского научного общества иммунологов (Пермь, 2007) и рекомендована к защите.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 187 страницах машинописного текста, содержит 7 рисунков и 46 таблиц. Диссертация состоит из введения, обзора данных литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 439 литературных источников, из них 291 отечественных и 148 зарубежных авторов, 9 приложений.

Заключение диссертационного исследования на тему "Иммуномодулирующая активность препарата Вермин на основе природных полипептидов"

вывода

1. Установлена высокая иммуномодулирующая активность содержащего природные полипешиды препарата Вермин, используемого в виде таблеток и мази у животных с ненарушенными функциями иммунной системы, при лекарственной и стрессиндуцированной иммуносупрессии, экспериментальной ранеюй инфекции.

2. Обосновано, что таблетки Вермин при пероральном применении не проявляют общегоксических и аллергенных свойств и оказывают иммуномодулирующее действие: стимулируют накопление ашителообразующих клеток в селезенке, повышают клешчносгь тимуса и костного мозга, тигр антител к эритроцитам барана, увеличивают фагоцитарную активность нейгрофилов периферической крови.

3. Выявлено, что в экспериментальной модели циклофосфамидиндуццрованного иммунодефицита таблетки способствуют восстановлению клегочности тимуса, чиста ашителообразующих клеток в селезенке, количества лимфоцитов и фагоцитарной активности нейгрофилов периферической крови, повышают титр антител. В экспериментальной модели иммобилизационного стресса таблетки предупреждают изменения клеточносга тимуса, показателей фагоцитарной активности клеток костного мозга и нейгрофилов периферической крови.

4. Показано, что в экспериментальной модели локального иммунного ответа мазь Вермин на дифильно - абсорбционной основе при интравашнальном введении способствует накоплению ашителообразующих клеток в селезенке, подвздошных и паховых лимфатических узлах, нарастанию титра антител к эритроцитам барана, увеличению клегочности тимуса и костного мозга, повышению фагоцитарной активности нейгрофилов периферической крови, макрофагов селезенки, регионарных лимфатических узлов.

5. Обосновано, что в экспериментальной модели гнойной раневой инфекции мазь Вермин на гидрофильной основе способствует повышению активности фагоцитирующих клеток в ране и периферической крови, проявляет дегидратирующее действие, приводит к сокращению сроков лечения.

6. Показано, что в экспериментах т уНю препарат Вермин оказывает стимулирующее влияние на пралиферашвный ответ лимфоцитов и фагоцитарную активность нейтрофилов пфиферической крови практически здоровых людей.

144

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2007 года, Перевозчикова, Елена Николаевна

1. Алексеев К.В. Перспективные противовоспалительные препараты для заживления ран / КВ. Алексеев, В Л. Коновалов, О Л Слюсар // Военно-медицинский жури. -2000.-Nl.-C. 85-86.

2. Алексеев КВ. Новые препараты для местного применения / К.В. Алексеев, О .И. Слюсар, О.И. Филетов //Военно-медицинский журн. 2001. - N1. - С. 73-73.

3. Алексеева И.В. Разработка и апробация мази для лечения гнойных ран / КВ. Алексеева, Л.Н. Олешко, ТЛ Малкова и др. // Рациональное использование лекарственных средств. 4.2.: Тез. докл. Пермь, 2000. - С. 3-4.

4. Андреева И.Э. Рациональная фармакотерапия бактериального вагиноза у гинекологических больных / Н.Э. Андреева, Л.Н. Олешко, Т.В. Петухова, О.А. Блинова // Рациональное использование лекарственных средств: 4.2. Тез. докл. -Пермь, 2000.-С. 4-5.

5. Артюшин А.М. Природа помогает земледельцу / А.М. Арпошин // Биоконверсия органических отходов: Тез. докл. Ш конгресса. Москва, 1994. - С. 1-4.

6. Бабенко ГА О протекторных и лечебных свойствах препаратов, полученных из биомассы красного калифорнийского дождевого червя (ккдч) / ГА Бабенко, ИА

7. Мельник, ИЛ Погрибный, В Л. Фундитус // Биоконверсия органических отходов: Тез. докл. Ш Междунар. конгресса. Москва, 1994. - С.12-13.

8. Багирова В.Л. Современные аспекты использования вспомогательных веществ в технологии лекарственных препаратов / ВЛ. Багирова, Н.Б. Демина, И.А. Девяткина и др. // Фарматека. 1998. - N6. - С. 34-36.

9. Багирова В .Л. Мази. Современный взгляд на лекарственную форму / В Л Багирова, КБ. Демина, НА Кулинченко // Фармация. 2002. - N2. - С. 24-26.

10. Бахметьев Б А Влияние тироксина на отдельные этапы иммуногенеза: Автореф. дис. канд. мед. наук / Б А Бахметьев. Новосибирск., 1986. - 20 с.

11. Безуглая Е.П Теория и практика местного лечения гнойных ран / Е.П. Безуглая, СР. Белов, ВГ Гунько. Киев: Здоровье, 1995. - 383 с.

12. Беседнова Н.Н. Иммуноактивные пептиды из морских организмов / Н.Н. Беседнова, Л.М. Эпштейн, В.Ф. Петров и до. // П Междупар. конф., посвященная 100-летию Пермского НПО «Биомед»: Тез. докл. Пермь, 1998. - С. 187-188.

13. Беседнова Н.Н. Регуляция иммунных процессов пептидами природного происхождения / ЬШ. Беседнова //Антибиотики и химиотерапия. 1999. - N1. -С.31-35.

14. Благитко Е.М. Микробиологическая характеристика раневого инфекционного процесса при использовании ионообменных сорбентов / Е.М. Благитко, Н.В. Бугайченко, В Л Ильина, Г.И. Шорина // Хирургия. 2003. - N11.-0.33-36.

15. Блатун Л А. Опыт применения мазей на гидрофильной основе для местного лечения гнойных ран в первой фазе раневого процесса / Л.А. Блатун, С.Н. Игнатенко, А.О. Жуков // Современные вопросы частной хирургии. М., 1986. - С. 151-154.

16. Блатун Л.А. Клинико-лабораторная эффективность современных мазей на полиэтиленгликолевой основе при лечении гнойных ран / ЛА Блатун, А.М. Светухин, АА Пальцын и др. // Антибиотики и химиотерапия. 1993. - N7. - С. 2531.

17. Богдашин ИВ. Роль кроветворных клеток-предшественников в восстановлении гемопоэза после цитостатическош воздействия / КВ. Богдашин, Д.В. Бузник, А.М. Дьггай, Е.Д. Годьдберг // Бкшл. эксперим. биол. и мед. -1992. -N.1.-0.50-51

18. Борисов АА Иммуносупрессивное действие патогенных грамотрицательных бактерий / АА Борисов, ЕВ. Борисова, О.С. Моложавая, В А Борисов // Вестн. РАМН.-2001.- N2.-С.21-25.

19. Борисова А.М. Иммунотерапия при вторичных НДС при хронических легочных заболеваниях / АМ. Борисова, АВ. Глазко // Иммуномодуляторы: Сб науч. тр. М., 1987.-С. 35-47.

20. Борисова АМ Опыт клинического применения полиоксидония при вторичных иммунодефицитах взрослых / АМ. Борисова, Л.В. Лактионова, Н.Х. Сетдикова // Ьйет. I. ЬптипогеЬаЬ. -1998. N10. - С. 100-109.

21. Боритко А.В. Бактробан в профилактике местных гнойных осложнений / А.В. Боритко, А.А. Кукушкин // В мире лекарств. -1999. N 2. - С. 26-27.

22. Бородкин Ю.С. Эгимизол — оригинальное средство повышения адаптационных возможностей организма / Ю.С. Бородкин, Ю.В. Зайцев, В.В. Лосев, С .И. Богословская // Фармакологическая регуляция состояний дезадаптации: Сб. науч. тр.-М, 1986.-С. 7-17.

23. Бочкарев ЕР. Влияние на иммунную систему препаратов, обладающих антиоксидантными и антигипоксантными свойствами / Е.Г. Бочкарев, Ю.В. Сергеев IIИммунопатол.,аллерлж,инфектол.-2000.- N4.-С.8-14.

24. Валевко С А. Современные аспекты создания стабильных лекарственных форм / СА Валевко//Фармация.-1993. -N6.-C. 51-54.

25. Васина Т.А Эгиотропная антибиотико и иммунотерапия больных с гнойно-воспалительными процессами / ТА. Васина, Г.В. Булава, Д.Д. Меньшиков, В.Б. Хватов // Антибиотики и химиотерапия. -1998. N11. - С. 28-33.

26. Виноградов В.М Фармакологическая стратегия адаптации / В.М. Виноградов, Ю.Г. Бобков //Фармакологическая регуляция состояний дезадаптации: Сб. науч. тр. -М., 1986.-С. 7-17.

27. Возианов А.Ф. Цитокины. Биологические и противоопухолевые свойства / А.Ф. Возианов, А.К. Бутенко, K.IL Зак. Киев: Наук, думка, 1998. - 320 с.

28. Вожова Л.В. Поиск оптимального состава мази с интерфероном / ЛВ. Волкова, В.Ф. Петров, Е.В. Шарыгина и др. //Фармация в XXI веке: инновации и традиции: Тез. Докл. Междунар. конф. 7-8 апреля 1999 г. С-Петербург, 1999. - С. 51-52.

29. Волкова Л.В. Антибактериальные свойства катионных пептидов / Л.В. Волкова, ГШ. Косарева, Н.И. Аверьянова // Перм. мед. журн.- 2004. Т. 21, N 2. - С 139-142.

30. Волчегорский ИА Роль иммунной системы в выборе адаптационной стратегии организма / НА. Волчегорский, И.И. Долгушин, О.О. Колесников, В.Э. Цейликман. Челябинск, 1998 - 68 с.

31. Гаврилин МВ. Изучение возможности использования геля полиэтиленоксида в фармации / МВ. Гаврилин, ЕВ. Компанцева, Л.С. Ушакова // Фармация. -1998. N 2.-С. 20-20.

32. Гаврилова ТВ. Иммуномодулирующие эффекты миелопептидов при экспериментальном проникающем ранении глаза / ТВ. Гаврилова, С.В Гейн-Екатеринбург, 2004. 102 с.

33. Гаврилова ТВ. Иммунокоррекция нарушений функций иммунной системы при проникающем ранении глаза: Дис. д-ра мед. наук в виде научного доклада / ТВ. Гаврилова. Екатеринбург, 2006. - 67 с.

34. Гейн СВ. Роль Р эндорфина и опиатных пептидов в регуляции пролиферации лимфоцитов и изменении ТН1/ТН2 цитокиновош профиля / СВ. Гейн, Т.А. Симоненко // Мед. иммунол. -2004. - N3/5. - С. 226-227.

35. Герасимова НМ. Изучение влияния иммунотерапии на резистентность организма женщин при хроническом трихомониазе и бактериальном вагинозе / Н.М. Герасимова О А Воронова // Иммунология Урала. 2001.- N1(1). - С. 109-109.

36. Глянцев С. Хроническая рана: от Мечникова до наших дней / С. Глянцев // Врач. -1997.-N8.-С. 34-36.

37. Гольдберг Е.Д. Механизмы цитостатическош повреждения и регенерации кроветворной системы / ЕД Гольдберг, А.М. Дыгай, В.В. Жданов // Веста. РАМН. -1998.-N8.-С. 6-10.

38. Гордиенко С.М. Оценка клеточного иммунитета в клинической практике. Методические рекомендации / С.М. Гордиенко. Барнаул, 1983. -19 с.

39. Гордиенко С.М. Сравнительная оценка результатов теста восстановления нитросинего тетразолия при микроскопическом и спекгрофотометрическом вариантах метода с различными солями тетразолия / СМ. Гордиенко // Лаб. дело. -1983. N 2. - С. 21-24.

40. Горецкая М.В. Влияние препарата «Деглутам» на иммунокомпетентные клетки крови, селезенки и костного мозга крыс / МБ. Горецкая // Иммунопатол., аллергол., инфекгол. 2002. - N1. - С. 40-46.

41. Горышина ЕЛ Сравнительная гистология тканей внутренней среды с основами иммунологии: Учебное пособие / Е.Н. Горышина, О.Ю. Чага / Под ред. докт. биол. наук А.А. Заварзина. Л: Изд-во Ленингр. ун-та, 1990. - 320 с.

42. Государственная Фармакопея СССР. Вып. 1.- 11-е изд., доп. М.: Медицина, 1987.336 с.

43. Государственная Фармакопея СССР. Вып. 2 -11-е изд., доп. М.: Медицина, 1989400 с.

44. Государственный реестр лекарственных средств. М, 1998. -1007 с.

45. Государственный реестр лекарственных средств. М., 2001. - Т. I. -1277 с.

46. Грецкий В.М. Носители лекарственных веществ в мазях / В.М. Грецкий, Г.В. Цагарейшвили. Тбилиси, 1979. - 230 с.

47. Гречко О.А. Терапевтическая эффективность пептидного препарата вермилат в клинике эпителиальных эктопий слизистой оболочки шейки матки: Автореф. дис. канд. мед. наук / ОА. Гречко. Льв1в. держ. мед. ун-т 1м. Д.1 алицького МОЗ Украши. - Л., 2002. - 20 с.

48. Гумен А.В. Продукция лимфоцит-акгивирующих факторов макрофагами мышей при стрессе и старении: модулирующее действие синтетических пептидных биорегуляторов/ А.В. Гумен, ЕТ. Рыбакина, НА. Козинец и др Л Мед. иммунол. -2006. Т. 8, N 2-3. - С. 133-134.

49. Гунько BP. Изучение осмотической активности различных мазевых основ / BP. Гунько, АА. Гунько, Н.М. Мусиенко // Химико-фармацевтический журн. 1982 N3.-С. 89-91.

50. Гусев Е.Ю. Влияние глюкашна на иммунный ответ: Автореф. дис. канд. мед. наук / Е JO. Гусев. М, 1989. - 20 с.

51. Гусев Е.Ю. Взаимоотношения клеточноопосредованного и гуморального иммунного ответа на уровне целостного организма: Дис. . д-ра мед. наук / Е.Ю. Гусев. Пермь, 1996. - 200 с.

52. Давтян Т.К. О взаимоотношении иммунного и адаптивного ответов/ Т.К. Давтян, JLA. Аванесян // Усп. современ. биол. 2001. - Т. 121,N3.- С.275-286.

53. Дамбаева СВ. Влияние тимических пептидов на функциональную активность фагоцитарных клеток периферической крови доноров / C.B. Дамбаева, К.Ф. Ким, Д.В. Мазуров, В .И. Дейгин // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. 2002. - N 6.-С. 55-59.

54. Даценко Б.М Гнойная рана / БМ. Даценко, СГ. Белов, Г.Г. Гамм. Киев, 1985. — 223 с.

55. Даценко Б.М. Многокомпонентные мази на гидрофильной основе для профилактики и лечения местной гнойной инфекции. Мазь «Левомеколь» / Б.М. Даценко, И.М. Перцев, BP. Гунько и др. // Новые лекарственные препараты. М., 1989. - Вып. 10. - С. 15-20.

56. Даценко Б.М Мазь «Диоксиколь» / БМ. Даценко, И.М. Перцев, Т.И. Тамм // Новые лекарственные препараты. М., 1989. - Вып. 12. - С. 16-20.

57. Девятое В. А Применение в хирургии электрохимических активированных водных растворов и лекарственных средств на их основе / В А Девятов // Врач. 2000. - N 5. -С. 30-31.

58. Девятов В А. Лечение длительно незаживающих ран, трофических язв и пролежней мазью Девятова В.А. / В.А. Девятов, Г.А. Белобородое, C.B. Петров // Terra Medica Nova -2002. -N2. -С. 25 -26.

59. Догель В.Н. Зоология беспозвоночных / В.Н. Догель; Под ред. Полянского Ю.И. -М.: Высшая школа, 1981. 606 с.

60. Долгов В.В. Лабораторная диагностика нарушений обмена белков / В.В. Долгов, О.П. Шевченко. М.: Российская академия последипломного образования. - 1997. -68 с.

61. Долгушин ИЛ Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. -Екатеринбург: УрО РАН, 2001. 283 с.

62. Долгушин ИИ. Роль нейтрофилов в регуляции антимикробной резистентности / ИЛ Долгушин // Вест. РАМН 2002. -N3. - С. 16-20.

63. Дубинская АЛ, Сбитнева Н.Д Получение кормовых экологически чистых продуктов на основе вермикультивирования / А. II Дубинская, Н.Д. Сбитнева // Биоконверсия органических отходов: Тез. докл. Ш конгресса. Москва, 1994. - С. 98-101.

64. Дьячков И.С. Изучение механизмов межклеточной кооперации в реакциях врожденного иммунитета иглокожих / И.С. Дьячков, И.В. Кудрявцев, А.Н. Сухачев // Вестн. уральской мед. академической науки. 2006. - N3(1). - С. 57-60.

65. Единая система конструкторской документации. Технические условия. -Международный стандарт. ГОСТ 2.114-95.

66. Запорожец Т.С. Цитокининдуцирующая активность биополимеров морских щдробионтов/ Т.С. Запорожец, Л.А. Иванушко, ТЛ Звягинцева и дрУ/ Мед. иммунол. 2004. - Т. 6, N1-2. - С. 89-96.

67. Захаров Ю.М Молекулярные и клеточно-клеточные механизмы регуляции эритропоэза / Ю.М. Захаров // Веста. РАМН 2000. - N. 2. - С. 4-9.

68. Зеликсон ЮЛ Развитие отечественной технологии мазей в третьей четверти XX века / ЮЛ Зеликсон // Фармация. 2001N1.- С. 45-47.

69. Земсков В.М. Зависимость иммунологической реактивности от групп крови / В.М. Земсков, А.М. Земсков, В Л Золоедов и др. // Усп. соврем, биол.-1996. -Т. 116, N 1 .С. 69-77.

70. Злакоманова ОЛ Влияние антибиотиков на хемогаксическую функцию нейтрофилов / О.Н. Злакоманова, А.В. Чукичев, А.В. Зурочка, Е.А. Елизарьева // Мед. иммунол. -2004. N3-5. - С. 230-230.

71. Зурочка В.А. Оценка влияния бестима на активность фагоцитарных клеток мышей линии СВА с гнойной стафилококковой инфекцией / ВА. Зурочка, П.П. Городечный, Е.Ю. Вяткин // Мед. иммунол. 2005. - Т. 7, N 2-3. - С.113-113.

72. Казьянин АБ. Технологические подходы к получению полипептидов из гидробионтов и их биологическая активность / А.В. Казьянин, В.Ф. Петров // Актуальные проблемы теоретической и прикладной иммунологии: Матер, науч.-практ. конф. Пермь, 1994. - С. 20-21.

73. Казьянин АБ. Об иммунобиологических свойствах молокина: Дис. . канд. мед. наук / А.В. Казьянин. Пермь, 1998. -129 с.

74. Каламова Н.К Определение эффективности антимикробных консервантов лекарственных средств / Н.И Каламова, К.А. Каграманова, C.B. Денисова // Фарматека. -1999. -N 2. С. 51-53.

75. Каплин В.Н. Нетрадиционная иммунология инфекций / В.Н. Каплин. Пермь, 1996.-163 с.

76. Капуцкий Ф.И. Лекарственные препараты на основе производных целлюлозы / Ф.И Капуцкий, Т. Л. Юркштович. Минск: Университетское, 1989. -110с.

77. Караулов АБ. Иммунитет и инфекционные заболевания: от вакцинации к иммунореабилитации / АБ. Караулов // Практикующий врач. -1996. N. 3. - С. 4-7.

78. Карсонова МИ Некоторые общие вопросы иммунитета, иммунодиагностики и иммунотерапии на модели хирургических инфекций / М.И Карсонова, Т.И. Юдина, Б Б. Пинегин//Мед. иммунол. -1999. .N1-2. - С.119-132.

79. Касьяненко ИБ. Химиотерапевтический метод лечения онкологических больных: Справочник по онкологии / ИВ. Касьяненко. Киев: Здоровье, 2000. - С. 66-76.

80. Кашина C.B. Влияние вермина на иммунитет / C.B. Кашина, Г.М. Сафонова, В.Ф. Петров // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. -1998. N 2. - С. 99-100.

81. Кашина С.В. Характеристика иммунобиологических свойств препарата вермин: Дис. канд. мед. наук / CJB. Кашина. Пермь, 1999. - 200 с.

82. Кашнин АЛ Новый синтетический иммуномодулятор «Нуклеостим» / А.П. Кашнин, TJL Богданова, ОБ. Аак и дрУ/Акгуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов: Матер, конф. Уфа, 2000. - С. 267-270.

83. Кеворков НЛ Гормоны репродукции в регуляции процессов иммунитета / Л Л Кеворков, ЮЛ Шилов, СВ. Ширшев, В.А. Черешнев. Екатеринбург: Наука, 1993.-172 с.

84. Кетлинский СА Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета / С А Кетлинский, Н.М. Калинина // Иммунология. — 1995. N 3. - С. 30-44.

85. Ким К.Ф. Влияние тимических пептидов на синтез и внутриклеточное содержание некоторых цитокинов / К.Ф. Ким, С.В. Климова, В.А. Дьяконова и др. // Иммунология 2002. - N5. - С. 274 - 279.

86. Клебанов ГЛ Клеточные механизмы прайминга и активации фагоцитов / ГЛ Клебанов, ЮЛ. Владимиров // Усп. соврем, биол. -1999. Т. 119, N 5. - С. 462^75.

87. Клюшкин ИВ. Оценка иммунологического статуса у больных хирургического стационара / ЛВ. Клюшкин, Е.Е. Краснощекова, К.Т. Валеева, МЛ Насруллаев // Казанский мед. журн. -1993. Т. 74, N 3. - С. 218-219.

88. Коваленко ГА Иммобилизированные протеолитические ферменты для наружного применения / ГА Коваленко // Химико-фармацевтический журн. 1998. - N 4. - С. 41-41.

89. Ковальчук ЛВ. Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция / JI.B. Ковальчук, JIB. Ганковская // Иммунология. -1995. N1. - С. 4 - 7.

90. Ковальчук JLB. Новые возможности лечения цитокинами: иммуноцитокины в локальной иммунокоррекции / Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская //Междунар. журн. иммунореабилитации. -1997. N 6. - С. 57 - 60.

91. Козлов В.А. Клиническая иммунология в клинике внутренних болезней / В А. Козлов. Новосибирск, 1997. - 20 с.

92. Кокряков В Л Антимикробные пептиды как молекулярные факторы иммунитета / В.Н. Кокряков, Г.М. Алешина, ОБ. Шамова // Мед. акад. журн. -2002.-T.2,N4.-C. 29-38.

93. Кокряков В.Н. Достижения и проблемы в изучении антибиотических пептидов животного происхождения / В.Н. Кокряков, Г.М. Алешина, О.В. Шамова и др. //Веста. РАМН. 2002.- N12.- С. 15-20.

94. Колесников О Л. Комплексная оценка влияния препарата бестим на иммунную и нервную системы/ ОJI Колесников, С.А. Артамонов, А.С. Симбирцев // Веста. Уральской мед. академической науки. 2006. - N 3-1С.95-97.

95. Колпакова ЕР. Получение очищенной коллагеназы Clostridium histoliticum и разработка мазей на ее основе. Автореф. дис. .канд. мед. наукУЕР-Колпакова.-Пермь, 2001.- 17 с.

96. Коробов ВЛ Пептидные факторы микробного антагонизма природные антибиотики широкого спектра действия / В.П. Коробов, Т.В. Полюдова, Л.М. Лемкина // Перм. мед. журн.- 2005.- Т.21, N1. - С. 134-144.

97. Крамаренко ОД Изучение влияния фармацевтических факторов на высвобождение диазолина из мазей / ОД Крамаренко, ЛЛ Ерофеева, Т.А. Артамонова, НА Артамонова// РЖХ. -1997. N23. - С. 41-41.

98. Кудрявцев И.В. Исследование функциональной активности различных фракций циркулирующих клеток иглокожих / ИВ. Кудрявцев, И.С. Дьячков, ДА., АЛ Сухачев // Веста, уральской мед. академической науки. 2006. - N3(1). - С. 117-120.

99. Кузин МЛ Раны и раневая инфекция. Руководство для врачей. / М.И. Кузин, Б.М Коспоченок. 2-ое изд. пер. и доп.- М: Медицина, 1990. - 592 с.

100. Кузнецов В Л. Концепция иммунокоррекции при многофакторных иммунодефицитных состояниях, инфекционных и онкологических заболеваниях / В Л. Кузнецов, ДЛ Беляев, A.A. Бабаянц // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. -1996.-N 5.-С. 104-110.

101. Кузнецова В.М Фармакологическое изучение новой комбинированной мази с гепарином и метилурацилом / BJVL Кузнецова, В.И. Чуешов, ВА Рыбак, В.И. Гриценко // Человек и лекарство: Тез. докл. IX Российского национального конгресса. -М, 2002 С. 241-242.

102. Кузнецова Э.Э. Биологически активные соед инения фетальных тканей человека и ювенильных тканей кролика / Э.Э. Кузнецова, В.Г. Горохова, А.Г. Горохов, В Л Марченко // Здоровье и образование: Матер, междунар. науч.-практ. конф. Пермь, 2003.-С. 158-158.

103. Кулинский В Л Две адаптационные стратегии в неблагоприятных условиях -резистентная и толерантная. Роль гормонов и рецепторов / В Л Кулинский, ИА. Ольховский // Усп. современ. биол. -1992.- Т. 112, N. 5-6. С. 697-714.

104. Курбангалеев СМ. Гнойная инфекция в хирургии (принципы и методы лечения) / С.М Курбангалеев. М.: Медицина, 1985.- 272 с.

105. Кутузова ИВ. Создание многокомпонентной мази полиненасыщенных жирных кислот, обладающих антимикробной активностью. / ИВ. Кутузова, A.C. Селезнев, ПК. Бабанова и др. // Фармация. -1990. N 3. - С.24-27.

106. Кутузова ИВ. Сравнительное изучение антиоксидантной активности витаминов А, Е и ß-карогина / ИВ. Кутузова, Н.М. Сторожок, ИП. Рудакова, АЛ Тенцова // Фармация. -1997. N 4. - С. 15-15.

107. Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред. В.В. Меньшикова. -М: Медицина, 1987. 368 с.

108. Лазарева ДЛ Стимуляторы иммунитета / Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин. -М.:Медицина.-1985.-145 с.

109. Лебедев ВБ. Имунофан регуляторный пептид в терапии инфекционных и неинфекционных болезней / ВБ. Лебедев, Т.М. Шелепова, О.Г. Степанов и др.; Под ред. акад. РАМН В Л Покровского. - М.: Ргатшко, 1998. -120 с.

110. Лебедев ВБ. Имунофан синтетический пептидный препарат нового поколения: иммунологические и патогенетические аспекты клинического применения / ВБ. Лебедев // Иммунология. - 1999. - N 1. - С.25-30.

111. Лекарственные препараты в России: Справочник. М.:Астра Фарм Сервис, 2004.- 1488 с.

112. Литовская А.В. Иммунологическая эффективность ликопида у длительно работающих в условиях воздействия метакрилатов // АБ. Литовская, Е.Е. Шилова, ТБ. Шмакова,К.Л Букина//Мед. иммунол. 2005. - Т. 7, N2-3. - С. 309-309.

113. Лобаева ТА Изучение влияния фитопрепарата «Томатное масло» на скорость заживления экспериментальных псшнослойных ран / ТА. Лобаева, Н.Н. Глущенко, О А Богословская, ИЛ Ольховская // Фармация. 2002. - N 5. - С. 26-28.

114. Лозовой В.П. О зонах распределения иммунологических показателей / В.П. Лозовой, ВБ. Губарев, Е.Н. Наумова, ТБ. Елисеева / /Иммунология. 1989. - N. 2. -С. 50-53.

115. Лопухин Ю.М. Коррекция нарушений иммунитета в клинике и эксперименте / ЮМ. Лопухин, РБ. Петров, Л.В. Ковальчук. М., 1985. - С. 6-12.

116. Ляпунов КА- Создание препаратов для местного лечения ран в разных фазах раневого процесса / НА. Ляпунов, Л.А. Благун, Б.М. Даценко // РЖХ. 1997. - N19. -С. 51-51.

117. Мазь для лечения инфицированных ран. А.с. N2180574 (Россия) / В.Ф. Петров, Г.М. Сафонова, ЕЛ Перевозчикова, Л.К. Коростелева.

118. Майер НА Использование питательных веществ в процессе заживления ран / НА. Майер, М.Д. Моллер, ДН Херндон // Анестезиология и реанимация. 1996. -N 5. - С. 29-37.

119. Маринина Т.Ф. Использование многокомпонентной мази в лечении гнойно-воспалительных заболеваний / Т.Ф. Маринина, Л.Н. Савченко, КГ. Агеева и дрУ/ Человек и лекарство. Тез. докл. IX Российского национального конгресса М., 2002. -С. 283-283.

120. Мартыненко ЯД Влияние модуляторов свободно радикального окисления на активность фагоцитов / Л.Д Мартыненко, АЛ Шепелев, Л.В. Алемукина // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1990. N10. - С.113-117.

121. Мастернак ТБ. Протективное действие ряда иммуномодуляторов и их влияние на активность макрофагов/ Т.Б. Мастернак, Е.Ю. Малкина, А.С. Ларин и др. // Иммунология. -1998. -Ы1. С.33-36.

122. Машковский М. Д Лекарственные средства / М. Д. Машковский. В 2 т.-13-е изд. - Харьков: Торсинг, 1997. -Т. 2. - 13 изд., новое. - Харьков: Торсинг, 1997. -592 с.

123. Маянский ДЛ Хроническое воспаление / ДК Маянский.- М., 1991. -271 с.

124. Маянский АЛ Проблемы управления фагоцитарными механизмами иммунитета / АЛ Маянский, АЛ. Невмятуллин, НА. Маянский // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. -1995. N 3. - С. 21 - 26.

125. Медведко А.Ф. Применение лазерного излучения в лечении гнойных ран / А.Ф. Медведко, М.А. Фриденталь, А.Л. Вороной // Клиническая хирургия. -1990. N 1. -С. 32-33.

126. Медуницын Н.В. Проблемы этики и безопасности применения средств иммунореабилитации / Н.В. Медуницьш // Междунар. журн. иммунореабилитш щи. -1997.-N6.-С. 85-87.

127. Мельник И А. Использование вермикулыуры в медицине, животноводстве и других отраслях народного хозяйства / И.А. Мельник // Биотех -- 95: Тез. докл. Междунар. науч.-техн. конф. Днепропетровск, 1995. - С. 49-50.

128. Мельникова Т.И. Современные представления об иммунокоррекции / Т.Н. Мельникова // Четвертая междунар. конф. по медицинской ботанике: Тез. докл. -Киев, 1997.- С.36-38.

129. Методические рекомендации по оценке аллергенных свойств фармакологических средств. МЗ СССР. Фармаколог, комитет. - М., 1988. -18 с.

130. Методические рекомендации по оценке иммунотоксических свойств фармакологических средств (издание официальное). МЗ РФ. Фармаколог, комитет. -М., 1992,-39 с.

131. Методические рекомендации по доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ (издание официальное). МЗ СССР. Фармаколог, комитет. -М.,1985. -19 с.

132. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран (издание официальное). МЗ СССР. Фармаколог, комитет. - М., 1989. - 48 с.

133. Методические указания по определению безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище. Мл Федеральный центр Госсанэпиднад зора Минздрава России, 1999. - 87 с.

134. Методы бакгериолгического исследования в клинической микробиологии: Методические рекомендации.-М. : МЗ РСФСР, 1983.- 37 с.

135. Мефодьев В .В. Этиология гнойно-септических заболеваний и ашибиотикорезисгентность выделяемых возбудителей / В.В. Мефодьев, P.M. Хохлявина, Л.Б. Козлов // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. 2002. - N 2. -С. 119-120.

136. Милешина С.Е. Модулирующее влияние коллагеновых пептидов на пролиферацию лимфоцитов человека / С.Е. Милешина, КБ. Дмитриева, КВ. Давыдова, КГ. Козлов // Веста. Уральской мед. академической науки. 2006.- N 3-1. -С. 152-155.

137. Михайлова АА Миелопептиды и их роль в функционировании иммунной системы/A.A. Михайлова//Иммунология. 2001. -N 5.- С. 16-18.

138. Михайлова А А Миелопептиды эндогенные иммунорегуляторы/ А А Михайлова // Клинич. геронтология. -2003. - N 3. - С.41-44.

139. Михеева КГ. Опиоидные пептиды экзогенного происхождения ß-казоморфины и питание детей грудного возраста / КГ. Михеева, О.Б. Курасова, Т.Г. Верещагина и др. // Педиатрия. - 2003. - N 5.- С. 96-99.

140. Могиленко ДА Клонирование и анализ экспрессии гена морской звезды Asterias Rubens, аналогично СЗ компонента комплемента / Д.А. Могиленко, КВ. Кудрявцев // Веста, уральской мед. академической науки. 2006. - N3(1). - С. 160162.

141. Морозов BJT. Пептидные биорегуляторы (25-летний опыт экспериментального и клинического изучения) / BP. Морозов, В.Х. Хавинсон. СПб., 1996. - 74 с.

142. Новиков Д.К. Характеристика иммунофармакотерапевтических препаратов / ДК. Новиков, Ю.В. Сергеев, В .И. Новикова// Иммунопатол., аллергол., инфекгол. -2002.-N4.-С. 7-27.

143. Нузов Б.Р. Воздействие милиацинового масла на заживление гнойных ран у больных сахарным диабетом и экспериментальных животных / Б.Р. Нузов // Клиническая хирургия. 1991. -N1. - С. 8-10.

144. Оковитый СБ. Клиническая фармакология препаратов пептидных и синтетических иммуностимуляторов / СБ. Оковитый // ФАРМшздекс-Практик. -2005.-N8.-С. 13-29.

145. Перевозчиков А.Б. Иммунобиологическая характеристика препарата олексин: Авгореф. дне. канд. мед. наук/ А.Б. Перевозчиков-Пермь, 1999. -20 с.

146. Пернак Б.С. Переработка городских отходов в органическое удобрение — биогумус / Б.С. Пернак // Биотех 95: Тез. докл. Междунар. науч.-техн. конф. -Днепропетровск, 1995. - С. 18-19.

147. Перцев ИМ. Многокомпонентные мази на гидрофильной основе / ИМ. Перцев, БМ Даценко, В Г. Гунько // Фармация. -1990. N 5. - С. 73-77.

148. Петров АБ. Биологические свойства нового иммуномодулятора бесгим / АБ. Петров, НБ. Пигарева, А.Ю. Котов и др. // Мед. иммунол,- 2006. Т. 8, N 2-3. - С. 455-455.

149. Петров АБ. Влияние иммуномодулятора Бесгим на лимфопоэз и поляризацию иммунного ответа/ АБ. Петров, Н.В. Пигарева, АЛО. Котов и др. // Вестн. Уральской мед. академической науки. 2006. - N 3-1. - С. 189-191.

150. Петров В.Ф. / В.Ф. Петров, ГМ. Сафонова, Е.Ф. Крылова // Биологически активные вещества гидробионтов новые лекарственные, лечебно-профилактические и технические препараты: Тез. Докл. Всесоюз. совещ.-Владивосгок, 1991. - С. 71-72.

151. Петров В.Ф. Получение природных биологически активных препаратов — новое направление исследований в НПО «Биомед» / В.Ф. Петров, Г. М. Сафонова // Журн. мед. иммунол. -1998. N2. - С. 95-97.

152. Пинегин ББ. Некоторые теоретические и практические вопросы клинического применения иммутюмодулятора ликопида / Б.В. Пинегин, Т.М. Андронова // Иммунология. -1998. N 4. - С. 60-63.

153. Пинегин Б.В. Современные представления о физиологии фагоцитарного процесса / БВ. Пинегин // Аллергия, астма и клиническая иммунология (Новости науки и техники ВИНИТИ РАН, серия Медицина). 2000. - N 8. - С.57-65.

154. Пинчук Л.М. Молекулярная мимикрия как фактор патогенности микроорганизмов / Л.М Пинчук // Усп. современ. биол. 1992.-Т. 112, N2.-0. 225237.

155. Пирожников О.Ю. Применение анастафина для лечения гнойной инфекции мягких тканей / О.Ю. Пирожников //Современная вакцинология. Пермь, 1998. - С. 97-98.

156. Повхан МФ. Вермикультура: производство и использование / МФ. Повхан, И.А. Мельник, В.А. Андриенко и др.; Под ред. И.А. Мельник. Киев: УкрИНТЭИ, 1994.-128 с.

157. Правила доклинической оценки безопасности фармакологических средств (GLP): Руководящий нормативный документ. М, 1992. - 73 с.

158. Протасова С.Ф. Прогресс в области лечения рака: цитокиновые мази / С.Ф. Протасова, ИВ. Киселева, С.М. Щеканова и др. // Фармация в XXI веке: инновации и традиции: Тез. докл. междунар. конф. С-Петербург, 1999. - С. 193-194.

159. Рассохин АР. Состояние эритропоэза и функциональные характеристики эритробластических островков костного мозга при стимуляции и ингибиции эритропоэза / AT. Рассохин, ДГ. Круглов, Ю.М. Захаров // Вести. РАМН. 2000. -N2.-С. 9-14.

160. Рахманов Р.К. Местное лечение гнойных ран кукумазимом / Р.К. Рахманов, Ж.А. Наргаев, Х.К. Абдурахманов // Вестн. хирургии им. Грекова. 2002 - N 4.-С. 74-75.

161. Регистр лекарственных средств России (PJIC) 5-е издание / Под ред. Ю.Ф. Крылова М: Ремарко.-1997/1998.- 880 с.

162. Регудин Л.И. ПЭГ и их использование в медицине и биологии / Л.И. Регудин, ГА Маркман, АС. Лобань // Журн. микробиол. -1984. N 4. - С. 17-21.

163. Римарчук Г.В. Оздоровление детей в районах экологического неблагополучия / ГБ. Римарчук // РМЖ. -1999. -Т. 7, N11. -С. 977-981.

164. Родионов С.Ю. Альфа-фетопротеин: выделение, влияние в условиях физиологической нормы и патологии, перспективы использования в клинической практике: Автореф. дис. д-ра мед. наук / С.Ю. Родионов. Пермь, 2003. - 48 с.

165. Розенберг BJL Влияние вилона и эпиталона на экспрессию некоторых СД-маркеров лимфоцитов при ВИЧ-инфекции / В.Я. Розенберг, А.Н. Бутырский, Б.И. Кузник // Мед. иммунол. 2006. - Т.8, N 2-3. - С. 460-460.

166. Романова Е.Н. Влияние эпиталона на состояние иммунитета у больных после термического повреждение/ E.IL Романова, Л.П. Малежик, В .А. Сизоненко, К.Г. Шаповалов // Мед. иммунол. 2006. - Т. 8, N 2-3. - С.461-461.

167. Сандлер КБ. Гормоны тимуса серых китов и перспективы их использования в медицине: Дис. канд. мед. наук / Н.Б. Сандлер. Владивосток, 1987.- 350 с.

168. Сани'1-арно-эпидемиологичсские правила и нормативы «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» СанПиН 2.32.1078-01 // Бюлл. нормативных и методических документов Госсанэпиднадзора. -2002.-Вып. 4(10).

169. Сафонова Г.М Сравнительная иммунобиологическая характеристика препаратов, полученных из природного сырья / Г.М. Сафонова // Proceedings International conference «Chemistry, Chemical and Biotechnology», Tomsk, Russia, 2006.-Vol.2.-P. 429-430.

170. Свидетельство на стандартный образец мутности ОСО 42-28-85-03 (86). Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. ЛА Тарасовича. 2003.

171. Селье Г. Концепция стресса как мы ее представляем в 1976 году // Новое о гормонах и механизмах их действия / Г. Селье. Киев: Наук, думка, 1977. - С. 27-51.

172. Скворцов АА Система натрийуретических пептидов. Патофизиологическое и клиническое значение при хронической сердечной недостаточности / АА

173. Скворцов, В.Ю. Мареев, ЮЛ Беленков // Кардиология. 2003. - Т. 43, N 8. - С. 8393.

174. Слепых Н.И. Оценка эффективности использования споробактеина в профилактике и лечении / Н.И. Слепых, А.А. Третьяков, А.А. Стадаилов, C.B. Петров // Веста, хирургии им. Грекова. 2003. - N 1. - С. 65-69.

175. Слободан В А Использование вермикулыуры в медицине и ветеринарии / В А. Слободан, Н.С. Слободан // Биоконверсия органических отходов: Тез. докл. Ш Междунар. конгресса- Москва, 1994. С. 47-48.

176. Слободан В А Перспективы использования дождевых червей в медицине / В. А Слободан // Биоконверсия органических отходов и охрана окружающей среды: Тез. докл. IV Междунар. кошресса Киев, 1996. - С. 90-90.

177. Смахтин М.Ю. Иммунорегуляторное и гепатотропное действие пептидов GLY-HIS-LYS, DSLET и АКТГ 4-10 / М.Ю. Смахтин, А.А. Курцева, В.Ю. Чердаков // Вестн. Уральской мед. академической науки. 2006. - N 3-1. - С. 223-225.

178. Смирнов СВ. Биологически активные гелевые повязки «Апполопак» / C.B. Смирнов, А Б. Воленко, О.И. Нуждин, СБ. Горюнов // РМЖ. 2001. - N5. - С. 21-22.

179. Смольникова JI.A. Особенности местной иммунной защиты репродуктивного тракта у беременных с рецидивирующим течением бактериального вагиноза / J1.A. Смольникова // Иммунология Урала. 2001. - N 1(1). — С. 90-91.

180. Снимщикова ИА Новые подходы к локальному применению препаратов иммунорегуляторных пептидов в педиатрической практике / И.А. Снимщикова, MA Хал илов, Е.И. Лялюхина и др. // Мед. иммунол. 2006. - Т. 8, N 2-3. - С. 464464.

181. Созинова Г.М Влияние инсулина на антителогенез и отдельные этапы иммуногенеза: Автореф. дис. канд. мед. наук / Г.М. Созинова. М., 1993. - 22 с.

182. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера. Москва: Медицина, 1982. - 464 с.

183. Средство для лечения длительно незаживающих ран «Вермин». Ас. N2119340 (Россия) / В.Ф. Петров, АС. Кирьянов, Г.М Сафонова, АБ. Благиных, П.В. Попов, C.B. Кашина

184. СТАНДАРТ ОТРАСЛИ: Построение, содержание и изложение Фармакопейных статей на медицинские иммунобиологические препараты ОСТ 42 -502 99- Москва, 1999. - 24 с.

185. Старцева КВ. Иммунобиологическая характеристика препарата «Биосгим-Т» на основе природных нуклеиновых кислот. Дис. . канд. мед. наук / Н.В. Старцева. - Пермь, 2004. -176 с.

186. Стручков ВЛ Клиническая иммунология в хирургии / ВЛ Стручков, Л.М. Недвецкая, КЛ Прозоровская и др. Ташкент, 1987. - 270 с.

187. Сухачев А.Н. Особенности реакций врожденного иммунитета мидий Mytilus edulis / АЛ Сухачев, ИЗ- Кудрявцев И.С. Дьячков, К.Е. Николаев // Вестн. уральской мед. академической науки. 2006. - N3(1). - С.

188. Суховая ДА. Технологические аспекты выделения и очистки альфа-фетопротеина для производства лекарственной формы препарата «Профеталь» / ДА Суховая, ЛР. Хорошева, Т.В. Гаврилова и др. // Мед. иммунол. 2006. - Т. 8, N 2-3. - С. 466466.

189. Тараканова МЛ Структура ДНК лейкоцитов больных лейкозом в процессе химиотерапии / МЛ Тараканова, Е.Ю. Москалева, Л.В. Безобразова и др. // Вестн. РАМН -1993. N 4. - С. 17-19.

190. Телешева Л.Ф. Иммунологическая характеристика больных с псевдоэрозией шейки матки, осложненной и неосложненной генитальной инфекцией / Л.Ф. Телешева, В.Ф. Долгушина, В.В. Сахарова и др. // Иммунология Урала. 2001.- N 1(1).-С. 89-90.

191. Тенцова АЛ Современные аспекты исследования и производства мазей / АЛ Тенцова, В.М. Грецкий. -М.: Медицина, 1980. 192с.

192. Тереньтъев В .А. Структурные предпосылки участия в регуляции клеточного цикла а-фетопротеина (AFP) и трансформирующего фактора роста (TGFß 1) / В.А. Тереньтъев // Мед. иммунол. 2004. - Т. 6, N 3-5. - С. 256-256.

193. Тереньтъев ВА Альфа-фетопротеин человека: новые подходы к изучению / В А Тереньтъев, Н.Т. Молдогазиева, Ю.С. Татаринов // Мед. иммунол. 2006 - Т. 8, N2-3.-С. 466-467.

194. Технология лекарственных форм / Под ред. Кондратьевой Т.С. М.: Медицина, 1991.-Т. 1.-469 с.

195. Титов HR Новые фармацевтические препараты из дождевых червей / И.Н. Титов, С.С. Конин // Дождевые черви и плодородие почв: Материалы П науч.-практ. конф. Владимир, 2004. - С. 50-51.

196. Тотолян АА Иммунологические аспекты хирургической инфекции / АА. Тотолян. С-Петербург, 1995. - 36 с.

197. Тотолян АА Современные подходы к диагностике иммунопатологических сосгояний/АА Тотолян //Мед. иммунол.- 1999.-Т. l.,N 1-2.-С. 75-108.

198. Третьякова И.Е. Влияние супернатантов активированных нейтрофилов на функциональную активность фагоцитов на различных этапах воспалительного процесса / И.Е. Третьякова, ИИ Долгушин, ЕА Мезенцева // Мед. иммунол. -2004.-N3-5.-С. 256-257.

199. Трусов ВВ. Солкосерил в лечении язвенной болезни / В.В. Трусов, МА Филимонов //Клиническая медицина. 1989. - Т. 67, N1. - С. 103-105.

200. Тутельян ВА Биологически активные добавки к пище в современной медицине / В А Тутельян // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Тез. докл. П Международного съезда. — СПб., 1998.-С. 38-47.

201. Тутельян ВА Биологически активные добавки в питании человека / В.А. Тутельян, Б.П Суханов, АЛ Австриевских, В.М. Позняковский. Томск: HTJ1, 1999.-2% с.

202. Тутельян AB. Прайминг фагоцитов и его применение в системе оценки специфической активности иммунорегуляторных соединений / A.B. Тутельян, ГЛ Клебанов//Иммунология.-2004.-Т. 25,N1. С. 14-16.

203. У гай И.Ю. Влияние бестима на иммунологические показатели периферической крови и цервикальной слизи женщин с хроническими цервицитами / И.Ю. У гай // Мед. иммунол. 2006. - Т. 8, N 2-3. - С. 468-469.

204. Ухов А .Я. Показатели иммунитета при лечении инфицированных ран низкочастотным ультразвуком / АЛ. Ухов, И.М. Федечко, О.М Нарепеха // Клиническая хирургия. 1990. -N1. - С. 10-12.

205. Федоров ДЛ Морфологическая и иммуногистохимическая характеристика репаративных процессов в длительно незаживающих ранах / Д.Н. Федоров, АЛ Ивашкин, В.В. Шинин и др. // Арх. патол. 2002. - N 1. - С. 8-11.

206. Фомина ЕБ. Коллоидная устойчивость и структурно-механические свойства эмульсионных мазей / ЕБ. Фомина, Т.Х. Чибиляев, В.А. Вайнштейн, С.М. Сопожкова // Фармация. -1998. N 2. - С. 22-22.

207. Фрейдлин КС. Авторитетное мнение / И.С. Фрейдлин // Мед. иммунол. 2005. -Т. 7, N1.-С. 11-14.

208. Хавинсон ВХ Пептидная регуляция старения / В.Х. Хавинсон // Вести. РАМН. -2001.-N12.-C. 16-20.

209. Хаитов P.M. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса / Р.М Хаитов, ББ. Пинегин // Иммунология. -1995. N 4. - С. 3-8.

210. Хаитов P.M. Экологическая иммунология / P.M. Хаитов, ББ. Пинегин, Х.И. Истамов. М.: Изд-во ВНИРО, 1995. - 219 с.

211. Хаитов P.M. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах / P.M. Хаитов, ББ. Пинегин // Иммунология. -1996. N 6. - С. 4-9.

212. Хаитов PJM Экспериментальное изучение иммунотропной активности фармакологических препаратов / Р.М Хаитов, И.С. Гущин, Б.В. Пинепш, А.И. Зебрев // Ведомости Фармаколог, комитета. -1999. N1. - С. 31-36.

213. Хаитов P.M Оценка иммунного статуса человека в норме и патологаи / Р.М Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2001. - N 4. - С.4-6.

214. Хаитов PJM Иммуномодуляторы: механизм действия и клиническое применение / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. -2003. N. 4. - С. 196-203.

215. Холодова Ю.Д. Эйзения навозная как объект для биоконверсии отходов и ценная кормовая добавка / Ю.Д. Холодова, В.Н. Миронова, Н.М. Городиий и др. // Докл. АН УССР. 1991. -N 2. - С. 139-143.

216. Хоробрых В.В. Методы постановки реакции бластгрансформации в микромодификации / В.В. Хоробрых, АВ. Пронин, АФ. Киркин, А.В. Санин // Иммунология. -1983. -N 3. С. 76-79.

217. Цагарейшивили ГЛ. Ланолин и его производные в фармацевтической и косметической практике / Г.В. Цагарейшивили, Г.С. Башура, Н.А Ляпунов. — Тбилиси: Мецниереба, 1976.-14 с.

218. Чадаев АЛ Местное медикаментозное лечение инфицированных ран / АЛ Чадаев, АД Климиашвили, В.Ф. Козлов и др. // РМЖ. 2001. - N 4. - С. 12-15.

219. Чадаев А.П Современные методики местного медикаментозного лечения инфицированных ран / АЛ Чадаев, АД. Климиашвили // Хирургия. 2003- N 1. -С. 54-56.

220. Чекмарева ИА Электронно-радиоавтографическое исследование дифференцированного влияния биологически активных раневых покрьггий на процессы регенерации / ИА Чекмарева, Б.В. Втюрин, АА Адамян и др. // Арх. пагол. 2004. - N 3. - С. 19-23.

221. Чередеев АЛ Мембранные белки мононуклеарных фагоцитов в межклеточных взаимодействиях / АЛ Чередеев, JIB. Ковальчук // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. -1995. N 3. - С. 12-20.

222. Черешнев В А Иммунные молекулярно-клеточные механизмы воспаления / В А Черешнев. Пермь, 2004. - 51 с.

223. Черешнева MJB. Иммунотерапия в комплексном лечении больных с воспалительными заболеваниями роговой и сосудистой оболочек глаз (клиникоэкспериментальное исследование): Дис. . д-ра мед. наук. / М.В. Черешнева. -Пермь, 2000.-372 с.

224. Черешнева МВ. Иммунокоррекция при ранении глаза / М.В. Черешнева, ЮЛ Шилов, ОЛ Баданина и др. Екатеринбург, 2001. -148 с.

225. Черешнева МВ. Иммунокоррекция в комплексном лечении больных с воспалительными заболеваниями роговой и сосудистой оболочек глаз / М.В. Черешнева, ЮЛ Шилов, В А Черешнев и др. Екатеринбург: УрО РАН, 2004. -253 с.

226. Черкасов ВА Лимфотропная иммунокоррекция миелопидом в послеоперационном периоде у больных раком толстой и прямой кишки / ВА Черкасов, Н.Н. Кеворков, В.П. Катаев и др. // Веста, хирургии им. ИЛ Грекова. -2002. Т. 161, N6. - С. 39-42.

227. Четвертных ВА Экспериментальный хламидиоз и интегральная оценка морфофункциональных реакций органов иммунной системы: Дис. д-ра мед. наук / В А Четвертных. Пермь, 2001. - 278 с.

228. Чипенс ГЛ, Веретенникова НИ, Вегнер Р.Э. Структурные основы действия пептидных и белковых иммунорегуляторов / Г Л Чипенс, КМ. Веретенникова, Р.Э. Вегнер. Рига, 1990. - 322 с.

229. Чиркин В.В. Проблемы иммунореабилитации / В.В. Чиркин, В Л Карандашов // Медицинская помощь. 2003. - N 3. - С. 4-7.

230. Чисгохина ЛЛ Иммунобиологическая характеристика препарата «Микростим» на основе метаболитов лактобактерий: Дис. канд. мед. наук / Л.П. Чисгохина. -Пермь, 2004.-171 с.

231. Чумакова М.М Иммуномодулятор ликопид в хирургической практике / М.М. Чумакова // Тепа МесЦса Коуа. 2002. -N3.-0.28-30.

232. Шабашова Н.В. Влияние беетима и ликопида на клинико-иммунологические показатели иммунного старения / КВ. Шабашова, Е.В. Фролова, АС. Симбирцев и дрЛ Мед. иммунол. 2005. - Т. 7, N 2-3. - С. 331-331.

233. Шапошников ЮР. Заживление ран в зависимости от факторов конституционального иммунитета / Ю.Г. Шапошников, К.Г. Табатадзе, О.В. Жукова и др. // Хирургия. 1991.- N 7.- С. 23-27.

234. Шилов ЮЛ Адренергическая регуляция функций циркулирующего пула фагоцитирующих клеток при остром стрессе / ЮЛ Шилов, Е.Г. Орлова // Докл. Академии наук. 2000. - Т. 373, N 2. - С. 267-269.

235. Шилов ЮЛ Влияние гидрокортизона на функции фагоцитирующих клеток в условиях блокады (3-адренорецепторов / ЮЛ Шилов, ДВ. Ланин, C.B. Ширшев // Мед. иммунол. 2001. - Т. 3, N 2. - С. 136-137.

236. Шилов ЮЛ Адренергические механизмы регуляции функций фагоцитирующих клеток периферической крови крыс при остром стрессе / ЮЛ Шилов, Е.Г. Орлова // Медицинская иммунология. 2002. - Т. 4, N1. - С. 29-36.

237. Шилов ЮЛ Изменения числа лимфоцитов, массы и клеточности органов лимфомиелоидного комплекса при остром стрессе и блокаде ^-адренорецепторов / ЮЛ Шилов, ЕР. Орлова // Веста. Пермск. университета. 2004, Вып. 2. - С. 177 -181.

238. Ширшев СВ. Механизмы иммуномодулирующего действия гормонов репродукции: Автореф. дис. д-ра мед. наук / C.B. Ширшев. М., 19%. - 48 с.

239. Ширшев СВ. Механизмы иммунного контроля процессов репродукции / C.B. Ширшев, -Екатеринбург: УрО РАН, 1999. 381 с.

240. Ширшев СВ. Механизмы иммуноэндокринного контроля процессов репродукции. В 2 т. / СВ. Ширшев. Екатеринбург: УрО РАН, 2002. - Т. 1. - 430 с.

241. Ширшев C.B. Механизмы иммуноэндокринного контроля процессов репродукции. В 2 т. / C.B. Ширшев Екатеринбург: УрО РАН, 2002. - Т. 2. - 557 с.

242. Шмагель К.В. Иммунитет беременной женщины / К.В. Шмагель, В.А. Черешнев. М.: Медицинская книга, 2003. - 226 с.

243. Шмагель КВ. Альфа-фетопротеин: строение, функции, роль в эмбриогенезе / КВ. Шмагель, В А Черешнев // Акушерство и гинекология-2002.- № 5.-С. 6-8.

244. Шмагель КВ. Роль иммунной системы в адаптации женского организма к беременности / КВ. Шмагель, В. А Черешнев // Russian Journal of Immunology.- 2005.-Vol. 9, Suppl.2.- C. 136-148.

245. Штрубе Ю. В какой степени аминокислоты и пептиды определяют эффективность потенциирования лекарственных средств / Ю. Штрубе, П. Штольц, В. Майер // Биологическая медицина. -2002. N 2. - С. 9-14.

246. Юрченко ЛЛ Системное воспаление и система гемостаза в акушерской патологии / ЛЛ Юрченко, В.А. Черешнев, Е.Ю. Гусев и др. Екатеринбург: УрО РАН, 2004.-163 с.

247. Юшков Б .Г. Система крови и экстремальные воздействия на организм / Б.Г. Юшков, BP. Климин, М.В. Северин. Екатеринбург: УрО РАН, 1999. - 200 с.

248. Юшков В.В. О противовоспалительной и анальгетической активности органопрепаратов / ВВ. Юшков, C.B. Серый // Пептидные биорегуляторы -цитомедины. Спб., 1992.-С. 150-151.

249. Юшков ВВ. Выявление и анализ противовоспалительной активности иммуномодуляторов / ВВ. Юшков, В.Х. Хавинсон // Патол. физиол. 1993. - N 2. -С.11-13.

250. Юшков ВВ. Иммунокорректоры: руководство для врачей и провизоров / ВВ. Юшков, ТА Юшкова, АВ. Казьянин. Екатеринбург: ООО «ИРА УТК», 2002. -255 с.

251. Яковлев И.Б. Эпидемиологическое и экономическое обоснование приоритетных направлений в производстве иммунопрепаратов / КБ. Яковлев, Е.В. Сармометов, В А Черешнев // Современная вакцинология: Тез. докл. Пермь, 1998. -С. 20-21.

252. Ярилин АА Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и патологии / АА. Ярилин // Иммунология.-1997. N 5. - С.7-14.

253. Ярилин АА Симбиотические взаимоотношения клеток иммунной системы / АА Ярилин // Иммунология. 2001. - N 54. - С. 16-20.

254. Ясыеевич JIС. Применение пептидного биорегулятора в комплексном лечении онкологических больных пожилого возраста / Л.С. Ясысевич, ЛИ. Крутилина, Т.В. Костецкая и др. // Усп. геронтологии. 2005. - Вып. 16. - С. 88-92.

255. Abraham Е. Effects of endogenous and exogenous catecholamines on LPS-induced neutrophil trafficking and activation / E. Abraham, DJ. Kaneko, R. Shenkar // Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 1999. Vol. 276, N1. - P. L1-L8.

256. Akira S. Toll-like receptor signaling / S. Akira, Takeda K. // Nature Rev. Immunol. -2004. Vol. 4. - P. 499-511.

257. Aloisi F. Lymphoid neogenesis in chronic inflammatory diseases / F.Aloisi, R. Pujol-Borrell // Nature Rev. Immunol. 2006. - Vol. 6. - P. 205- 217.

258. Al-Yousef S. Neuropeptides in annelids // Progress in Comparative Endocrinology / S. Al-Yousef; Ed. by Epple A.etal.; Wiley-Liss. New York, 1990. P. 232-241.

259. Andrews EJ. Aberrent regeneration in carcinogen-treated earthworms {Eisenia foetida) / E J. Andrews // J. of Experim. Zool. 2005. - Vol. 189, N 3. - P. 333-338.

260. Arillo A. Nitrite biotransformation by mitochondria from the earthworm Eisenia foetida (Savigny) / A. Arillo, F. Melodia, B. Marsano // Сотр. Biochem. Physiol. 1992. -Vol. 102, N2.-P. 209-211.

261. Ashmarin IP. New role of a highly-stable oligopeptides, neurotrophins, and immunomodulators in the regulatory continuum. / I.P. Ashmarin, E.P. Karazeeva // Usp Fiziol Nauk. 2003, - Vol. 34, N1. - P. 14-19.

262. Beg A.A. Endogenous ligands of Toll-like receptors: implications for regulating inflammatory and immune responses / A.A. Beg // TRENDS in Immunology. 2002. -Vol. 23, N11.-P. 509-512.

263. Beutler B. Innate immunity / B. Beutler, J. Hoffmann // Current Opinion in Immunology.-2004.-Vol. 16.-P. 1-3.

264. Bhavsar A.P. The worm turns for antimicrobial discovery / A.P. Bhavsar, EX). Brown //Nature biotechnology.-2006.-Vol. 24, N9.-P. 1098-1100.

265. Bilej M. In vitro antigen-binding properties of coelomocytes of Eisenia foetida (Annelida) / M Bilej, L. Tuckova, J. Rejnek, V. Vetvicka // Immunology Letters. 1990. -Vol. 26, N 2. - P.183-187.

266. Bilej M. Phagocytosis of synthetic particles in earthworms. Effect of antigenic stimulation and opsonisation / M. Bilej, V. Vetvicka, L. Tuckova etal. II Folia Biol. -1990. -Vol. 36.-P. 273-280.

267. Bilej M. The flow cytometric analysis of in vivo phagocytic activity of earthworm coelomocytes (Eisenia foetida, Annelida) / M. Bilej, J.P. Scheerlinck, T. VandenDriessche et cd. II Cell Biology Intemation. Reports. -1990. Vol. 14. - P. 831-837.

268. Bilej M. Detection of antigen in the coelomocytes of the earthworm Eisenia foetida (Annelida) / M. Bilej, P. Rossmann, T. Vanden Driessche et al. II Immunology Letters. -1991. Vol. 29, N 3. -P. 241-245.

269. Bilej M. The interaction of Staphylococcal protein A with free coelomocytes of annelids / M. Bilej, J. Rejnek, L. Tuckova // Cell Biology Intemation. Reports. -1992. -Vol.16, N 5. P.481-485.

270. Bilej M. Identification of a cytolytic protein in the coelomic fluid of Eisenia foetida earthworms / M. Bilej, L. Biys, A. Beschin et al II Immunology Letters. -1995. Vol. 45, N1-2.-P.123-128.

271. Bilej M. Cellular expression of the cytolytic factor in earthworms Eisenia foetida / M. Bilej, P. Rossmann, M Sinkora et cd. II Immunol. Lett. -1998. Vol. 60, N1. - P. 23-29.

272. Brown G.D. Dectin-1: a signalling non-TLR pattern-recognition receptor / G.D. Brown //Nature Rev. Immunol. -2006. Vol. 6. -P. 33^3.

273. Bulet P. Anti-microbial peptides: from invertebrates to vertebrates / P. Bulet, R. Stocklin, L. Menin // Immunological Rev. 2004. - Vol. 198. - P. 169-184.

274. Cameron G.R. Inflammation in earthworms / G.R. Cameron // J. Path. Bad 1932. -Vol. 35. - P.933-972.

275. Cerenius L. The prophenoloxidase-activating system in invertebrates / L. Cerenius, K. Soderhall //Immunological Rev. 2004. - Vol. 198.-P. 116-126.

276. Chapron C. Etude histologique, infiastructurale et experimentale de la regeneration cephalique ches le lombricien, Eisenia foetida / C. Chapron // Ann. Embr. Morph. 1970. — N3.-P. 235-238.

277. Cheng N.N. The composition of phospholipid and biosyntesis of platelet activating factor in earthworm Eisenia foetida / N.N. Cheng, T. Sugiura, T. Fukuda, K. Waku // Yao Hsueh Pao -Acta Pharmaceutica Sinica. -1992. Vol. 27, N12. - P.886-890.

278. Chong W. A Review for antibacterial immunity of the earthworm / W. Chong, Z. Dong-Mei, S. Zhen-jun // Дождевые черви и плодородие почв: Материалы П науч.-практ. конф. Владимир, 2004. - С. 58-59.

279. Cooper E.L. Lack of a bactericidal response in the earthworm Lumbricus terrestris after immunisation with bacterial antigens / EL. Cooper, R.T. Acton, P.F. Weinheimer, E.E. Evans // J. Invert Path. -1969. Vol. 14. - P. 402-405.

280. Cooper EL. Comparative immunology, 2nd edition / EL. Cooper. Prentice Hall, NJ, 1976.-P. 88-103.

281. Cooper EL. Comparative immunology / E.L. Cooper // Current Pharmaceutical Design. 2003. - Vol. 8, N 2. P. 99-110.

282. Cooper EL. Earthworm immunity: a model of immune competence / E.L. Cooper, P. Roch // Pedobiologia. -2004. Vol. 47. - P. 676-688.

283. Cooper El. Role of Toll-like receptors in adjuvant-augmented immune therapies by T. Seya / E.L. Cooper // eCAM 2006. - Vol. 3, N1. - P. 133-137.

284. Danne L.L. Earthworm egg capsules as vectors for the environmental introduction of biodegradative bacteria / L.L. Danne, M.M. Haggblom // Applied and environmental microbiology. -1999. Vol. 65, N 6. -P.2376-2381.

285. De Eguileor M. Different types of response to foreign antigens by leech leukocytes / M. De Eguileor, A. Grimaldi, G. Tettamanti et al II Tissue Cell. 2000. - Vol. 32. - P. 4048.

286. De Eguileor M. Leeches: immune response, angiogenesis and biomedical applications / M De Eguileor, G. Tettamanti, A. Grimaldi et al. /Curr Pharm Des. 2003. - Vol. 2. - P. 133-147.

287. Delves P J. The immune system: part 1 / P.J. Delves, I.M. Roitt; Delves PJ.; Ed. by I. Mackay, F. Rosen // The New England Journal of Medicine. 2000. - Vol. 343, N 1. -P. 37-49.

288. Delves PJ. The immune system: part 2 / PJ. Delves, I.M Roitt;; Ed. by I. Mackay, F. Rosen // The New England Journal of Medicine. 2000. - Vol. 343, N 2. -P. 108-117.

289. Du Pasquier L. Immunoglobulin superfamily receptors in protochordates: before RAG time / L. Du Pasquier, I. Zucchetti, R De Santis // Immunological Rev. 2004. - Vol. 198. -P. 233-248.

290. Dutta RC. Peptide immunomodulators versus infection; an analysis / RC. Dutta // Immunol. Lett.-2002.-Vol. 83,N3.-P. 153-161.

291. Engelmann P. Monoclonal antibodies identify four distinct Annelid (invertebrate) leukocyte markers / P. Engelmann, L. Palinkas, E.L. Cooper, P. Nemeth // Developmental and Comparative Immunology. 2005. - Vol. 29, N 7. - P. 599-614.

292. Espinoza-Navarro 1 O. Effect of malathion on the male reproductive organs of earthworms, Eisenia foetida / O. Espinoza-Navarrol, E. Bustos-Obregon // Asian J. Androl. 2005. - Vol. 7, N l.-P. 97-101.

293. Ferencik M Handbook of immunochemistry / M. Ferencik. London: Chapman Hall, 1993.-519 p.

294. Figdor C.G. C-tupe lectin receptors on dendritic cells and langerhans cells / C.G. Figdor, Y. van Kooyk, G J. Adema // Nature rev. Immunol. 2002. - Vol.2. - P. 77-84.

295. Fisher E. The myelo-etythroid nature of the chloragenous-like tissue of the annelids / E. Fisher// Comp. Biochem. Physiol. -1993. Vol. 106A - P. 1-8.

296. Fletcher MA Lymphocyte proliferation / M.A. Fletcher, N. Klimas, R. Morgan, G Gjerset // Manual of Clinical Laboratory Immunology. Forth Edition; Ed. by Noel R Rose eted. - Washington, 1992. - P. 213-220.

297. Ganz T. Antimicrobial polypeptides in host defense of the respiratory tract / T. Ganz // J. Clin. Invest 2002. - Vol. 109, N 6. - P. 693-697.

298. Ganz T. Defensins: Antimicrobial polypeptides of innate immunity / T. Ganz // Nature rev. Immunol. -2003. Vol. 3. -P. 710-720.

299. Gates G.E. Contribution to a revision on the earthworm family lumbricidal / G.E. Gates//Megedrilogica.-1975.-Vol.2,N l.-P. 1-8.

300. Girardin SJE. Intracellular vs extracellular recognition of pathogens common concepts in mammals and flies / S.E. Girardin, P J. Sansonetti, D.J. Philpott // TRENDS in Microbiology. -2002. - Vol. 10, N4.- P. 193-199.

301. Gonser S. Peptides and polypeptides as modulators of the immune response: thymopentin—an example with unknown mode of action / S. Gonser, E. Weber, G. Folkers //Phaim. Acta Helv. -1999. Vol. 73, N 6. -P. 265-273.

302. Giuliani C. Thymosin a-1 regulates MHC class 1 expresion in FRTL-5 cells at transcriptional level / C. Guiliani, G. Napolitano, A. Mastino et al. II Eur. J. Immunol. -2000,- Vol.30.-P.778-786.

303. Hamama K. Alterations in polyamine levels of nematode, earthworm, leech and planarian during regeneration temperature and osmotic stresses / K. Hamama, H. Hamama, T. Shinozawa // Comp.Biochem. Physiol. 1995. - Vol. 111, N1. - P. 91-97.

304. Hanusova R. Peptide fragments induce a more rapid immune response than intact proteins in earthworms / R. Hanusova, L. Tuckova, P. Haiada et al. II Dev. Comp. Immunol.-1999.-Vol. 23, N2.-P. 113-121.

305. Hanusova R. Identification of a coelomic mitogenic factor in Eisenia foetida earthworm / R. Hanusova, M. Bilej, L. Biys et al. II Immunol. Lett. -1999. Vol. 65, N 3. -P. 203-211

306. Hildeman W.H. Immunophylogeny: from sponges to hagfish to mice. Frontiers in immunogenetics / W.H. Hildeman. New York, Amsterdam, Oxford: Elsevier-North Holland, 1980.

307. Hoffmann JA Drosophila innate immunity: an evolutionaiy perspective / J.A. Hoflmann, J.-M Reichhart // Nature Immunol. 2002. - Vol. 3/2. - P. 121-126.

308. Imler J.-L. Toll signaling: the TIReless quest for specificity / J.-L. Imler, J.A Hoffinann//Nature Immunol. -2003. Vol. 4/2. -P. 105-106.

309. Inohara N. NODs: intracellular proteins involved in inflammation and apoptosis / N. Inohara, G. Nunez // Nature rev. Immunol. 2003. - Vol. 3. - P. 371-382.

310. Janeway ChA. Immunobiology. The immune system in health and disease / Ch.A Janeway, P. Travers. Second ed. - London, San Francisco, Philadelphia: Current Biology Ltd.; New York and London: Garland Publishing Inc., 1996. - 250 p.

311. Jeme NJC Plaque formation in agar by single antibody-producing cells / N.K. Jeme, AANordin // Science. -1963. Vol. 140, N 3365. - P.405-405.

312. Jones DA Plant innate immunity direct and indirect recognition of general and specific pathogen-associated molecules / DA Jones, D. Takemoto // Current Opinion in Immunology. - 2004. - Vol. 16. - P. 48-62.

313. Kanost MR. Innate immune responses of a lepidopteran insect, Manduca Sexta / M.R. Kanost, H. Jiang, X.-Q. Yu // Immunological Rev. 2004. - Vol. 198. - P. 97-105.

314. Kauschke E Evidence for perforin-like activity associated with earthworm leukocytes / E.Kauschke,K.Komiyama,I.Moroetal. //Zoology.-2001.-Vol. 32.-P. 13-24.

315. Kauschke E. Immune proteins in earthworms /E. Kauschke, I. Eue, S. Lange et alJf.Recent research developments in comparative biochemistry and physiology. 2000.-Vol. 1, part I.-P. 105-122.

316. Klinman D.M. Immunotherapeutic uses of CpG oligodeoxynucleotides / D.M. Klinman // Nature rev. Immunol. 2004. - Vol. 4.-P. 1-10.

317. Knutsen A.P. Thymosin-alphal stimulates maturation of CD34+ stem cells into CD3+4+ cells in an in vitro thymic epithelia organ coculture model / AP. Knutsen, JJ. Freeman, K.R. Mueller et al. //Lit J. Immunopharmacol. -1999. Vol. 21. - P. 15-26.

318. Komiyama K. Non-specific cellular function of Eisenia foetida regulated by polycyclic aromatic hydrocarbons / K. Komiyama, M. Okaue, Y. Miki et al. II Pedobiologia. 2004. -Vol. 47.-P. 717-723.

319. König S. Mass spectrometric analyses of CL39, CL41 and Hl ,H2, H3 confirm identity with fetidin and lysenin produced by earthworm leukocytes / S. König, F. Wagner, E. Kauschke et al. II Dev. Comp. Immunol. 2003. - Vol. 27. - P. 513-520.

320. König S. Sequence analysis of earthworm hemolysins / S. König, F. Wagner, E.Kauschke, I. Eue // Spectroscopy. 2004. - Vol. 18, N2. -P. 347-353.

321. Lange S. Interaction of earthworm hemolysin with lipid membranes requires sphingolipids/ S. Lange, F. Nüßler, E. Kauschke et al H JBS Online. -1997. Vol. 272, N 33.-P. 20884-20892.

322. Lange S. Biochemical characteristics of Eiseniapore, a pore-forming protein in the coelomic fluid of earthworms / S. Lange, E. Kauschke, W. Mohrig, EX Cooper // Eur. J. Biochem. -1999. Vol. 262. -P. 547-556.

323. Langenau DM The zebrafish: a neu model of T-cell and thymic development / D.M. Langenau, LJ. Zon//Nature rev. Immunol. -2005. Vol. 5. -P. 307-317. .

324. Lassegues M Antibacterial activity of Eisenia foetida andrei coelomic fluid: evidence, induction and animal protection / M. Lassegues, Ph. Roch, P. Valembois // J. Invert Path. -1989.-Vol. 53.-P. 1-6.

325. Lechenault H. Histochemical investigation of lipids during cephalic regeneration of the oligocheta Eisenia foetida Sav. / H. Lechenault // Annales d Histochimie. 1969. - Vol. 14, N2.-P. 189-198.

326. Lemaitre B. The road to Toll / B. Lemaitre // Nature rev. Immunol. 2004. - Vol. 4. -P. 521-527.

327. Liew F.Y. Negative regulation of Toll-like receptor-mediated immune responses / F.Y. Liew, D. Xi, E.K. Brint, LAJ. O'Neill // Nature rev. Immunol. 2005. - Vol. 5. - P. 446458.

328. Linthicum D.S. Graft rejection in earthworms; an electron microscopic study / D.S. Linthicum, D.H. Marks, E.A. Stein, E.L. Cooper // Eur. J. Immunol. 1977. - Vol. 7. - P. 871-871.

329. Liu Y.-Q. Purification of a novel antibacterial short peptide in earthworm Eisenia foetida II Y.-Q. Liu, Z.-J. Sun, C. Wang et al. // Acta Biochimica et Biophysica Sinica. -2004. Vol. 36, N4. -P. 297-302.

330. Loker E.S. Invertebrate immune systems not homogeneous, not simple, not well understood / E.S. Loker, C.M Adema, S.-M. Zhang, T.B. Kepler // Immunological Rev. -2004.-Vol. 198.-P. 10-24.

331. Luhm J. One way synergistic effect of low superantigen concentrations on lipopolysaccharide induced cytokine production / J. Luhm, H. Kirchner , L. Rink. // J. Interferon-Cytokine lies. 1997. - Vol. 17, N 4. - P. 229-238.

332. Marcel R Hie effect of inhibitory and trophic substances on the secretory cycle of the nervous chain neurons during regeneration in Eisenia foetida Sav. f. typica. [ French] / R. Marcel // Gen. Comp. Endocrinol. -1973. Vol. 21, N1. -P. 45-59.

333. Marcel R Are cephalic regeneration and clitellogenesis controlled by the same neurohormone in the lumbricid Eisenia foetida ? . [ French] / R Marcel, C. Cardon // J. de Physiol. -1982. Vol. 78, N 6. - P. 574-578.

334. Marchalonis J J. Natural recognition repertoire and the evolutionary emergence of the combinatorial immune system / JJ. Marchalonis, S. Kaveri, S. Lacroix-Desmazes, M. D. Kazatchkine //FASEB J. -2002. Vol. 16. -P. 842-848.

335. Medina AX. Immunological and chemical analysis of proteins from Eisenia foetida earthworm / A L. Medina, JA Cova, RA Vielma et cd. II Food and Agricultural Immunology. -2003. Vol. 15. -P. 255-263.

336. Medzhitov R Innate immunity / RMedzhitov, C. Janeway // The New England Journal of Medicine. 2000. - Vol. 343, N 5. - P. 338-344.

337. Medzhitov R Toll-like receptors and innate immunity / R Medzhitov // Nature rev. Immunol.-2001.-Vol. 1.-P.135-145.

338. Metchnikoff II. Researches on the intracellular digestion of invertebrates / I.I. Metchnikoff// Quart J. Mcroscop. Sei.- 1884. Vol. 24. - P. 89-89.

339. Metchnikoff I.I. Lectures on the comparative pathology of inflammation / I.I. Metchnikoff.- New York: Dover Press, 1893.

340. Millet A CM. Immunity in Caenorhabditis elegans / A CM Millet, JJ. Ewbank // Current Opinion in Immunology. 2004. - Vol. 16. - P. 4-9.

341. Nagler-Anderson C. Control freaks: immune regulatory cells / C. Nagler-Anderson, AX. Bhan, DX. Podolsky, C. Teihorst // Nature Immunol. 2004. - Vol. 5, N 2. - P. 119122.

342. Nürnberger T. Innate immunity in plants and animals: striking similarities and obvious differences / T. Nürnberger, F. Brunner, B. Kemmerling, L. Piater // Immunological Rev. -2004. Vol. 198. - P. 249-266.

343. O'Neill L AJ. Toll-like receptors in the spotlight / LA J. O'Neill, Z. Brown, S.G. Ward // Nature Immunol. 2003. - Vol. 4/4. - P. 299-299.

344. O'Neill LAJ. Immunity's Early Warning System / LAJ O'NeiMScientific American. 2005. - Vol. 292, N1. - P. 24-31.

345. Plotrowski MC. Pseudomonas aeruginosa strains posses specific adhesins for laminin /MC. Plotrowski, JH Toumier, E. Puchelle // Infect Immunity. 1996. - Vol. 64, N 2. - P. 600-605.

346. Polack B. Role of manganese superoide dismutase in a mucoid isolate of Pseudomonas aeruginosa adaption to oxidative stress / B. Polack, D. Dacheux, I. Delic-Attree etal. II Infect Immunity. 1996. - Vol. 64, N 6. - P. 2216-2219.

347. Popovic M Glycolipoprotein G-90 obtained from the earthworm Eisenia foetida exerts antibacterial activity / M Popovic, M. Grdiza, T.M Hrzenjak // Veterinarski aihiv.2005. Vol. 75, N 2. P. 119-128.

348. Pytycz B. Riboflavin content in autofluorescent earthworm coelomocytes is species-specific / B. Pytycz, J. Homa, B. Kozio, et al. II Folia Histochemica et Cytobiologica. -2006. Vol. 44, N 4. - P. 275-280.

349. Rejnek J. The interaction of a protein from the coelomic fluid of earthworms with staphylococcal protein A / J. Rejnek, L. Tuckova, J. Zikan, M Tomana // Dev. comp. Immunol.- 1991.-Vol.15, N 4. P. 269-277.

350. Rinkevich B. Primitive immune systems: Are your ways my ways? / B. Rinkevich // Immunological Rev. -2004. Vol. 198. - P. 25-35.

351. Roitt I. Immunology / I. Roitt, J. Brostoff, D. Male / Fourth Editioa London, Baltimore, Barcelone etc: Mosby, 1996. - 418 p.

352. Roots B.I. Isolation and characterisation of the myelin-like membranes ensheating giant axons in the earthworm nerve cord / B.I. Roots, B. Cardone, P. Pereyra // Ann. NY Acad. Sci. 1991. - Vol. 633. - P. 559-561.

353. Rosen H. Superantigens / HJ. Rosen // Dermatol. 1997. - Vol. 36, N1. - P. 14-16.

354. Rossmann P. Lesion of leukocytes, erythrocytes, and mesothelial cells by the coelomic fluid of Eisenia foetida earthworms / P. Rossmann, M. Bilej, L. Tuckova et al. // Folia Microbiol. (Praha). -1997. Vol. 42, N 4. -P. 409-416.

355. Satchell JE. Lumbricidae. In : Soil biology / J.E. Satchell. London, 1967. - P. 259322.

356. Schulenburg H. Evolution of the innate immune system: the worm perspective / H. Schulenburg, CI* Kur/, J J. Ewbank // Immunol. Rev. 2004. - Vol. 198. - P. 36-58.

357. Seong S.-Y. Hydrophobicity: an ancient damageassocialed molecular pattern that initiates innate immune responses / S.-Y. Seong, P. Matzinger // Nature rev. Immunol. -2004.-Vol. 4.-P. 469-478.

358. Shilov Jul. Role of adrenergic mechanisms in regulation of phagocytic cell functions in acute stress response / Jul. Shilov, E.G. Qrlova// Immunol. Lett. 2003. - Vol. 86, N 3. -P. 229-233.

359. Sinkora M Hemolytic function of opsonizing proteins of earthworm's coelomic fluid / M Sinkora, M Bilej, L. Tuckova, A. Romanovsky // Cell Biology International. 1993. -Vol. 17, N10.-P. 935-939.

360. Srivastava P. Roles of heat-shock proteins in innate and adaptive immunity / P. Srivastava//Nature rev. Immunol. -2002. Vol. 2. -P. 185-194.

361. Stein EA. The role of opsonins in phagocytosis by coelomocytes of the earthworm, Lumbricus terrestris / EA Stein, K.L. Cooper // Dev. Сотр. Immunol. 1981. — Vol. 5. -P. 415-415.

362. Steiner H. Peptidoglycan recognition proteins:on and off switches for innateimmunity / H. Steiner // Immunological Rev. 2004. - Vol. 198. - P. 83-96.

363. Strober W. Signalling paihways and molecular interaction of NODI and NOD2 / W. Strober, P J. Murray, A Kitani, T. Watanabe // Nature rev. Immunol. 2006. - Vol. 6. - P. 9-20.

364. Suckale J. Evolution of innate immune systems / J. Suckale, R.B. Sim, A.W. Dodds // Biochemistry and Molecular Biology Education. -2005. Vol. 33, N 3. -P. 177-183.

365. Sugiura T. Platelet-activating factor and its structural analogues in the earthworm Eisenia foetida / T. Sugiura, A Yamashita, N. Kudo et al. II Biochim. et Biophys. Acta. -1995.-Vol. 1258,N l.-P. 19-26.

366. Sun Z. Pharmaceutical Value and Use of earthworms in China / Z. Sun // Дождевые черви и плодородие почв: Материалы П науч-практ. конф. Владимир, 2004. - С. 53-54.

367. Suzuki М М. Polychlorinated biphenyls (PCBs) depress allogeneic natural cytotoxicity by earthworm coelomocytes/ M. M. Suzuki, E. L. Cooper, G. S Eyambe et а/У/Ehviron. toxicol. chem.-1995.- vol. 14, N 10.-P.1697-1700.

368. Suzuki MM Killing of intrafamilial leucocytes by earthworm effector cells / M.M. Suzuki, E.L. Cooper // Immunol. Lett -1995. Vol. 44. - P. 45-49.

369. Temegino CA Impaired neutrophils adherence as early marker of systemic inflammatory response syndrome and severe sepsis / С A Terregino, C.L. Lubkin , S.R. Thorn // Am. Emerg. Med. 1997. - Vol. 29, N 3. - P. 400-403.

370. Ting JP.-Y. Caterpillers, pyrin and hereditary immunological disorders / J.P.-Y. Ting, D.L. Kastner, KM. Hoffinan / Nature rev. Immunol. 2006. - Vol.6. - P. 183-195.

371. Triantafiloul K. A CD 14-independent LPS receptor cluster / KTriantafiloul, M. Triantafiloul, RX. Dedrick/Nature Immunol. -2001. Vol. 2, N 4. - 338-345.

372. Tuckova L. Lytic activities in the coelomic fluid of Eisenia foetida and Lumbricus terrestris / L. Tuckova, J. Rejnek, P. Sima, R Qndrejova // Dev. comp. Immunol. 1986. -Vol. 10,N2.-P. 181-189.

373. Tuckova L. Antigen processing in earthworms / L. Tuckova, M. Bilej // Immunology Letters. -1994. Vol. 41, N 2-3. - P. 273-277.

374. Ulevitch R Therapeutics Targeting the innate immune system / Nature rev. Immunol. -2004.-VoL4.-P. 512-520.

375. Van den Bergl T.K. On the origins of adaptive immunity: innate immune receptors join the tale / T.K. van den Bergl, J.A. Yoder, G.W. Litman // TRENDS in Immunology. -2004.-Vol. 25, N1.- P. 11-16.

376. Van Eden W. Heat-shock proteins induce T-cell regulation of chronic inflammation / W van Eden, R van der Zee, B. Prakken // Nature Rev. Immunol. 2005. - Vol. 5. - P. 318-330.

377. Vetvickal V. p-Glucan in invertebrates / V. Vetvickal, P. Sima // ISJ. 2004. - Vol. 1. -P. 60-65.

378. Vickery C. Inflammatory cytokines in human acute wound fluid / C J. Vickery, J. Ford , DJ. Leaper // 5 th European Conference on advances in wound management 21-24 November, 1995. Harrogate, UK, International Conference Centre. - P. 42-42.

379. Von Andrian UJi. T-cell function and migration. Two sides of the same coin / U.H. Von Andrian, CJL Mackay //New Engl. J. Med 2000. - Vol. 343, N 14. - P. 1020-1034.

380. Vorob'ev AA. Principles of classification and the strategy of immunomodulators used in medicine. / AA. Vorob'ev // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol. 2002. - Vol. 4. — P. 93-98.

381. Wakefield CJi. Surgery and release of a neutrophil Fc gamma receptor / C.H. Wakefield, P£>. Carey, S. Foulds etal. II Am. J. Surg. 1995. - Vol. 170, N 3. - P. 277-284.

382. Wiesner L. Does an aryl hydrocarbon receptor (AHR)-like molecule exist in earthworms? Some implications for immunity / L. Wiesner, M.E. Hahn, S.I. Karchner et al. II Pedobiologia. 2004. - Vol. 47.-P. 646-650.

383. Winoto A. Cutting into innate immunity / A. Winoto // Nature immunol. 2004. -Vol. 5, N6.-P. 563-564.

384. Xu Y. DNA damage: a trigger of innate immunity but a requirement for adaptive immune homeostasis / Y. Xu // Nature rev. Immunol. 2006. - Vol.6. - P. 261-270.