Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Иммунологические показатели больных единичным и множественным базально-клеточным раком кожи, ассоциированным с вирусом папилломы человека

005008878

и ^

Русских Ольга Олеговна

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ БОЛЬНЫХ ЕДИНИЧНЫМ И МНОЖЕСТВЕННЫМ БАЗАЛЬНО-КЛЕТОЧНЫМ РАКОМ КОЖИ, АССОЦИИРОВАННЫМ С ВИРУСОМ ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА

14.03.09 - клиническая иммунология, аллергология

14.01.10 - кожные и венерические болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2012

005008878

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте иммунологии и на кафедре дерматовенерологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Телешева Лариса Федоровна

доктор медицинских наук, профессор Писклакова Татьяна Павловна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Аклеев АлександрВасильевич доктор медицинских наук, профессор Малишевская Нина Петровна

Ведущая организация: Учреждение РАН Институт иммунологии и

физиологии УрО РАН, г. Екатеринбург

Защита состоится 28 февраля 2012 г. в ................часов на заседании

Диссертационного совета Д 208.117.03 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации. по

адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Автореферат разослан "_____"____________________2012г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Латюшина Л.С.

з

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Эпителиальные опухоли кожи (ЭОК) — одна из самых многочисленных групп опухолей человека, отличающаяся значительным разнообразием. Этиология и патогенез ЭОК изучены недостаточно [Малишевская Н.П., 2002; Молочков В.А., 2005]. В последние годы благодаря достижениям в области молекулярной биологии предпринимаются попытки определить роль вируса папилломы человека (ВПЧ) в возникновении и развитии отдельных вариантов ЭОК [Кладова А. Ю., 2007; Shamanin V.et al., 1996; Berkhout R. et al., 2000; Hanvood A. et al., 2000; Weissenbom S. et al., 2005; de Villiers E., 2004]. В настоящее время известно около 200 генотипов вирусов папилломы, инфицирующих эпителий слизистых оболочек (род alpha) и кожи (род beta, gamma, mu и nu). Частота выявления ВПЧ рода beta в различных ЭОК существенно варьирует [Shamanin V. et al., 1996; Hanvood С. et al., 2000; Forslund O. et al., 2003; Ift-ner A. et al., 2003]. Это обусловлено разнообразием используемых лабораторных методов: менее чувствительные методы способны обнаруживать вирус при его высокой концентрации, более чувствительные - единичные копии вируса в пробе [Meyer Т. et al., 2000]. Предполагается, что ассоциация ВПЧ-инфекции с ЭОК может иметь региональные особенности, различаясь у жителей Восточной Европы, Центральной Европы и Америки [zur Hausen P. et al., 2005]. Эпидемиологические и молекулярнобиологические данные позволяют считать, что формирование кератоакантомы, себорейного кератоза, актинического кератоза, болезни Боуэна, базально-клеточного и плоскоклеточного рака кожи обусловлено кожными типами ВПЧ рода beta [Клю-чаеваС. В., 2003].

Базально-клеточный рак кожи (синонимы: базалиома, базалыюклеточная эпите-лиома, карциноид кожи, опухоль из базального слоя эпителия кожи) — опухоль, которая согласно МКБ-10, относится к злокачественным новообразованиям кожи и шифруется С44. Базально-клеточный рак кожи (БКРК) — наиболее часто встречающаяся злокачественная опухоль кожи. Она обладает медленным деструирующим ростом, может рецидивировать и, как правило, не метастазирует. Встречается с одинаковой частотой у лиц обоего пола, преимущественно в пожилом возрасте. Локализуется на открытых участках кожи, чаще на лице, бывает множественной [Журавель В.Г., 1996; Курдина М.И., 1999; Дубенский В.В., Гармонов А.А., 2004; Молочков В.А. и соавт., 2004; Greinert R. et al., 2003; Zeitouni N.C. et al., 2003]. Несмотря на то, что базально-клеточный рак кожи в структуре онкологической смертности составляет менее процента, опухоль привлекает внимание медицинской общественности как высокой заболеваемостью, так и высокими темпами роста во всем мире, превышающими темпы роста других злокачественных новообразований [Кулагин В.И. и соавт., 2001; Сангинов Д.Р., 2002; Конопацкова

О.М., Гречишникова Т.В., 2004; Писклакова Т.П., 2004]. По статистическим данным на 2010 год рак кожи занимает II место в структуре онкологической заболеваемости населения России и на его долю приходится 9,3% у мужчин и 13,3% у женщин [Васильев Ю.С., Ахметов И.Р., 2010]. В Челябинской области заболеваемость раком кожи превышает общероссийские показатели: в 2000 году она составляла 49,1 на 100000 населения; в 2010 году достигла 56,5 на 100000 населения (мужчин 42,9 %; женщин — 68,12 %). Смертность от рака кожи составляет в России 0,7 на 100000 населения, в Челябинской области-0,36 на 100000 населения.

Число работ, характеризующих иммунологический статус больных с базалио-мой, ограничено. Результаты исследований противоречивы, так как получены в разных

странах и этнических группах [Горячкина JI. А., Кашкин К. П., 2009]. Вместе с тем, исследования в данном направлении представляют значительный интерес с точки зрения оптимизации профилактики, диспансеризации и лечения БКРК [Сергеев Ю.В. и соавт., 1999; Снарская Е.С., 2004; Галил-Оглы Г.А. и соавт., 2005; Молочков В.А. и соавт., 2006; Kaplan В. et al., 2000; Arlette J. et al., 2004].

Цель работы

Изучение иммунного статуса больных с единичным и множественным базальноклеточным раком кожи, ассоциированным с папилломавирусной инфекцией.

Задачи исследования

1. Выявить частоту встречаемости, спектр генотипов и вирусную нагрузку вируса папилломы человека рода beta у больных с единичным и множественным базально-клеточным раком кожи в очагах новообразований и в непораженной коже.

2. Изучить иммунологические показатели периферической крови у больных с единичным и множественным базально-клеточным раком кожи.

3. Сравнить иммунологические показатели периферической крови у больных базально-клеточным раком кожи, инфицированных и неинфицированных вирусом папилломы человека.

4. Оценить взаимосвязи между иммунологическими показателями периферической крови у больных базально-клеточным раком кожи в зависимости от характера течения заболевания и инфицированное™ вирусом папилломы человека.

Научная новизна

Впервые методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (Real-Time) установлена высокая частота встречаемости вируса папилломы человека рода beta у больных с единичным базально-клеточным раком кожи (71,4% случаев) и больных с множественным базально-клеточным раком кожи (83,3% случаев).

Проведено сравнение частоты встречаемости вируса папилломы человека у больных базально-клеточным раком кожи как в очаге пролиферативного роста, так и в здоровой коже. С целью забора материала для выявления вируса с участков неизмененной кожи впервые использовался метод бритвенного соскоба со сгибательной поверхности правого плеча.

Установлены изменения в иммунологических показателях больных с единичным базально-клеточным раком кожи: снижение относительного количества лимфоцитов в периферической крови при повышении относительного количества клеток, несущих рецепторы CD3-CD16+CD56+(%), увеличение в сыворотке содержания Ig А, ИФН-у и снижение уровня ИФН-а по сравнению с условно-здоровыми лицами.

При множественном базально-клеточном раке кожи зарегистрировано увеличение процентного содержания эозинофилов в периферической крови, увеличение CD3-CD16+CD56+(%), снижение уровня CD3-CD19+(%); увеличение в сыворотке содержания ИФН-у и снижение ИФН-а по сравнению с условно-здоровыми лицами.

Однотипными изменениями показателей иммунитета у больных базалиомой являются снижение относительного количества лимфоцитов при повышении числа клеток, несущих рецепторы CD3-CD16+CD56+; увеличение уровня ИФН-у; снижение концентрации ИФН-а и отсутствие изменений показателей функциональной активности нейтрофилов.

При корреляционном анализе показателей иммунитета в группе больных мно-

жественным базально-клеточным раком кожи установлены взаимосвязи: прямые -между ИФН-а и Ig А, ИФН-а и Ig G, ИФН-у и Т-лимфоцитами, ИФН-у и субпопуляцией Т-лимфоцитов с киллерной активностью, ИФН-у и Ig G; обратные - между ИФН-у и спонтанным НСТ-тестом, ИФН-у и натуральными киллерами.

При опухолевом процессе, ассоциированном с ВПЧ-инфекцией, определены изменения в показателях иммунитета, связанные с повышением количества эозино-филов, уровней ИФН-а и ИФН-у и числа нейтрофилов с одновременным нарушением их функции, а так же со снижением количества лимфоцитов, без изменения субпопу-ляционного состава этих клеток, уменьшением уровня Ig G.

При корреляционном анализе показателей иммунитета в группе больных БКРК, инфицированных вирусом папилломы человека, установлены положительные взаимосвязи между ИФН-а и CD3+CD19-(%), CD3+CD 19-(х 109/л), активностью фагоцитоза нейтрофилов (%) и отрицательная взаимосвязь с CD3+CD4+(*10Vn). Установлены взаимосвязи между ИФН-у и CD3+CD19-(%), CD3+CD19-(xl09An),

CD3+CD16+CD56+(%), и CD3+CD 16+CD56+(x 109/л), имеющие положительную направленность, с СН50, имеющую обратную направленность.

Установлена прямая взаимосвязь между вирусной нагрузкой ВПЧ-инфекции и количеством Т-лимфоцитов. Обратные взаимосвязи определены между вирусной нагрузкой ВПЧ-инфекции и числом В-лимфоцитов и нейтрофилов.

Теоретическое н практическое и значение

Теоретическая значимость работы заключается в расширении представлений о роли вируса папилломы человека рода beta и факторов иммунной системы в развитии и течении базально-клеточного рака кожи.

В практическом плане значимость работы состоит в оптимизации диспансерного наблюдения больных базально-клеточным раком кожи. Полученные данные позволяют на основании иммунологических показателей, при выявлении ВПЧ рода beta 3 у пациентов с единичным БКРК перевести их в группу больных множественным БКРК с пожизненными регулярными осмотрами с целью выявления очагов пролиферативного роста на ранних стадиях.

Реализация результатов исследования

Результаты работы используются в учебном процессе на кафедрах дерматовенерологии, онкологии, микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации, а также в практической деятельности Государственного бюджетного учреждения здравоохранения Областного кожно-венерологического диспанцера №3 г. Челябинска и Государственного бюджетного учреждения здравоохранения Челябинского Областного клинического терапевтического госпиталя для ветеранов войн.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены: на I Международном форуме медицины и красоты (Москва, 2008г.); на научно-практической конференции «Национальный альянс дерматологов и косметологов» (Уфа, 2009г.); на заседаниях областного научного общества дерматовенерологов (Челябинск, 2010г., 2011г.); на IX Российской конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2011г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 4 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 140 страницах компьютерного текста и включает 28 таблиц, 2 рисунка. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 3-х глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего работы 75 отечественных и 85 иностранных авторов. Диссертация изложена на 140 страницах компьютерного текста и включает 28 таблиц, 2 рисунка.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для осуществления поставленной цели в НИИ иммунологии и на кафедре дерматовенерологии Челябинской государственной медицинской академии за период 2008-2010 гг. проведено клинико-иммунологическое одномоментное продольное исследование больных с различными клиническими проявлениями базально-клеточного рака кожи, ассоциированного с папилломовирусной инфекцией. Обследовано 50 пациентов с базально-клеточным раком кожи в возрасте от 52 до 80 лет и 30 условноздоровых лиц в возрасте от 58 до 70 лет. Диагноз БКРК был подтвержден в Государственном лечебно-профилактическом учреждении Челябинского окружного клинического онкологического диспансера на основании клинических и цитологических методов исследования, а также врачами-патологоанатомами в Государственном бюджетном учреждении здравоохранения Челябинской областной клинической больницы на основании гистологических методов исследования.

Критерии включения в исследование: проживание на территории Челябинской области; подтверждение диагноза базально-клеточного рака кожи цитологическим и/или гистологическим методом; возраст больных старше 50 лет (для исключения синдрома Горлина-Гольтца); согласие больного на участие в исследовании.

Критерии исключения: наличие других онкологических заболеваний; наличие тяжелых соматических болезней: ишемическая болезнь сердца, гипертоническая болезнь, бронхиальная астма, хронический обструктивный бронхит в фазе декомпенсации, перенесенный инфаркт миокард, инсульт, сахарный диабет; перенесенные острые инфекционные и вирусные заболевания в течение последних шести недель до проведения исследования; острые и обострение неинфекционных хронических заболеваний в течение последних четырех недель.

Анализ распределения больных базалыю-клеточным раком кожи по характеру течения заболевания, возраста появления опухоли кожи, распределения по системе "ШМ, характеристики типов кожи по Т. И^райтк, гистологическое строение опухолей показал следующее:

1. Необходимость формирования двух групп больных: I группа - 30 человек с единичным БКРК; II группа - 20 человек с множественным БКРК. У больных с единичным БКРК были обнаружены следующие клинические разновидности базалиом: язвенная форма - 13 больных; нодулярная форма - 9 больных; саморубцующаяся - 4 больных; пигментная форма - 4 больных. У 20 больных с множественным БКРК были обнаружены 54 базалиомы: язвенная форма-27 БКРК; нодулярная форма - 18 БКРК;

пигментная форма - 9 БКРК;

2. Возраст появления базалиом - от 29 до 79 лет. После 50 лет базалиомы возникли у 72,3 % больных;

3. При сравнении распределения базалиом по системе TNM наиболее часто встречались базалиомы размером до 2 см (T1N0M0) - 76,2 % случаев. В стадии T2N0M0 зарегистрировано 23,8 % случаев. Причем в стадиях T3N0M0 и T4N0M0 не зарегистрировано ни одного больного;

4. Среди обследованных больных базально-клеточным раком кожи встречались только пациенты, у которых выявлены I, II, III типы кожи по Т. Fitzpatrik (тип кожи I

- у 2,5 %; тип кожи II - у 74 %: тип кожи III - у 23,5 %). Лица, обладающие IV, V и VI типом кожи, в группе обследованных больных не зарегистрированы;

5. При гистологическом исследовании базалиом в 90,3 % определялись опухоли солидного типа, а в 9,7% - опухоли солидно-аденоидного типа.

Определение ДНК ВПЧ молекулярно-биологическим методом (ПЦР).

С целью выявления ВПЧ рода beta в группе обследуемых больных были проведены молекулярно-биологические исследования (ПЦР) у 39 пациентов БКРК. В первой подгруппе больных единичным БКРК обследован 21 больной, во второй подгруппе пациентов с множественным БКРК— 18. При проведении данной методики и статистической обработке полученных результатов группу контроля условноздоровых лиц составили 10 человек. Материалом для молекулярно-биологического исследования послужили биоптаты кожи размером 0,2x0,2см, полученные с помощью малоинвазивной модификации взятия биопсии бритвенным способом, или суспензия клеток, полученная методом соскоба. Соскоб использовался для взятия материала из зон новообразований, где имелись нарушения сцепления между клетками, и скарификация обеспечивала получение достаточного количества клеточной массы, а так же с участков здоровой кожи (правое плечо), как у больных с базалиомой, так и у лиц, контрольной группы.

Определение ВПЧ в соскобах проводилось методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени (Real-Time). Метод ПЦР в «режиме реального времени», позволил определить абсолютное количество геномов ВПЧ рода beta и ДНК человека в пробе. Амплификация и детекция проводилась на приборе «Rotor-Gene» 3000 («Corbett Research», Австралия). Для выявления ДНК ВПЧ рода beta (3 вида) были использованы три системы олигонуклеотидов (группоспецифических праймеров и зондов), предоставленные Федеральным государственным учреждением науки "Центральный научноисследовательский институт эпидемиологии” Роспотребнадзора (г. Москва):

1-ая-для выявления вида beta 1 (5,8,12,14,19,21,25,47,36 типы);

2-ая-для выявления вида beta2 (9,15,17,22,23,38,37,80тип);

3-ая - для выявления вида beta 3 (49,75,76 тип);

Во все три системы введены олигонуклеотиды для выявления и количественного определения ДНК человека (по В-глобиновому гену человека), что позволяло проводить оценку адекватности забора, хранения и обработки образцов (принцип внутреннего контроля).

С учетом того, что при взятии клинического материала из пораженных раком очагов и нормальной кожи количество эпителиальных клеток (а соответственно и копий вируса), попадающих в образец, существенно варьировало, мы использовали методику нормирования количества вируса на количество клеток человека, предложенную Кладовой А.Ю. (2007г.), что позволило получить надежные и достоверные дан-

ные о вирусной нагрузке ВПЧ в клетках кожи.

Расчет нормализованной вирусной нагрузки (ВН) производился по формуле:

ВН = lg ((кол-во ДНК ВПЧ / кол-во ДНК чел.) х Ю5).

Иммунологические методы исследования. Для оценки иммунологических показателей у больных базально-клеточным раком кожи и у лиц условно-здоровой группы исследовалась периферическая кровь. В периферической крови было определено: абсолютное число лейкоцитов; абсолютное и относительное число нейтрофи-лов, моноцитов, лимфоцитов и их субпопуляций; оценена функциональная активность нейтрофилов и концентрация иммуноглобулинов. Также определялись концентрация интерферонов: ИФН-а, ИФН-у.

Было проведено:

- определение популяционного состава лимфоцитов крови методом проточной цитометрии, уникальность которого заключается в возможности исследовать целевую клеточную популяцию в среде гетерогенного образца (Луговская С.А. и др. 2005; Зу-рочка А.В., 2007; Luider J. et al., 2005). Непосредственно для окрашивания нами были использованы двухпараметрические реагенты линии IOTest: CD3-FITC/CD19-PE, CD3-F1TC/CD4-PE, CD3-FITC/CD8-PE, CD3-FITC/CD (16+56)-РЕ, CD3-FITC/CD25-РЕ, CD3-FITC/HLA-DR-PE фирмы Beckman Coulter, США. Наличие пан-Т-лимфоцитарного маркера CD3+ при отсутствии CD 19+ характерно для Т-лимфоцитов; коэкспрессия CD3+ и CD4+ - для Т-хелперно/индукторных лимфоцитов; коэкспрессия CD3+ и CD8 + - для Т-цитоксических лимфоцитов; коэкспрессия CD3+ и CD 16+56 - для TNK лимфоцитов; экспрессия CD19+ при отсутствии CD3+ -для В-лимфоцитов; CD 16+56 при отсутствии CD3+для NK лимфоцитов; коэкспрессия CD3+ и CD25+ - маркер ранней активации Т-клеток; CD3+HLA DR+ - маркер поздней активации Т-лимфоцитов;

- для изучения функциональной активности нейтрофилов периферической крови определяли: лизосомальную акивность [Фрейдлин И.С., 1984], фагоцитарную активность на модели поглощения частиц полистерольного латекса [Фрейдлин И.С., 1976], кислородзависимый метаболизм с помощью спонтанного и индуцированного НСТ-теста [Маянский А.Н., Виксман М.Е., 1979]. Определение ЦИК было проведено по методу Гашковой В. (1978г.). Концентрации иммуноглобулинов класса А, М, G в сыворотке крови методом ИФА, с использованием иммуноферментных тест-систем ООО «Хема» (г. Москва);

- определение общей активности комплемента по 50% гемолизу (Резникова Л.С., 1967);

- для определения уровня интерферонов были использованы соответствующие тест-системы ООО «Цитокин» (г. Санкт-Петербург).

Полученные результаты исследований были подвергнуты статистической обработке с использованием пакета прикладных программ “Statistica for Windows 6.0” с вычислением средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±т). Различия между сравниваемыми группами считали достоверными при р <0,05, по непараметрическим критериям Mann-Whitney, Wald-Wolfowitz (Гублер Е.В., 1973; Гланц С., 1999; Боровиков В.И., 2001). Представленные цифровые данные были округлены до 2-го десятичного знака. Для оценки достоверности частоты встречаемости признака использовалось значения хи-кватрат (%2) по методу Пирсона. Определение взаимосвязей между показателями иммунитета проводили с помощью корреляционного анализа по Spearman.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Первой задачей нашего исследования стало выявление частоты встречаемости, спектра генотипов и вирусной нагрузки вируса папилломы человека рода beta у больных с единичным и множественным базально-клеточным раком кожи в очагах новообразований и в непораженной коже.

Вирус папилломы человека рода beta среди больных с единичным БКРК обнаруживался у 15 человек (71,4%). Тогда как среди больных с множественным БКРК вирус папилломы человека рода beta определялся у 15 человек (83,3%). У условноздоровых лиц вирус папилломы человека рода beta выявлен у 2 человек (20%) (табл.

О-

Таблица 1

Частота инфицирования вирусом папилломы человека рода beta у больных базально-клеточным раком кожи

Инфициро- ванность ВПЧ Больные единичным БКРК (п = 21) Больные множественным БКРК (п= 18) Условно- здоровые (п=10)

пораженная кожа здоровая кожа пораженная кожа здоровая кожа здоровая кожа

ВПЧ+ 15(71,4 %) 3 (14,3 %) р* < 0,005 15 (83,3 %) 7 (38,9 %) р" < 0,01 2 (20 %)

ВПЧ- 6 (28,6 %) 18(85,7%) 3(16,7%) 11 (61,1 %) 8 (80 %)

Примечание: р - при сравнении в группе с единичным БКРК между пораженной и здоровой кожей; р** - при сравнении в группе с множественным БКРК между пораженной и здоровой кожей.

Изучение частоты инфицирования вирусом папилломы человека рода beta у больных базально-клеточным раком кожи показало, что значительно чаще вирус папилломы человека обнаруживается в группе с единичным БКРК в очагах, пораженной опухолью кожей, чем у этих же лиц в участке правого плеча здоровой кожи, непораженном опухолью. Так же надо отметить, что чаще вирус папилломы человека обнаруживается в группе с множественным БКРК в очагах, пораженных опухолью, чем у этих же лиц в участке здоровой кожи. В группе условно-здоровых лиц вирус папилломы человека рода beta был зарегистрирован у 2 человек.

В пораженной коже у больных с единичной базалиомой статистически значимо чаще встречаются вирус папилломы человека рода beta 1 и 2. А в пораженной коже у больных множественной базалиомой разница в частоте встречаемости вируса папилломы человека рода beta 1, 2 и 3 не обнаружилась. При сравнении частоты встречаемости различных генотипов вируса папилломы человека рода beta в пораженной коже больных базалиомой было установлено: с единичной базалиомой чаще встречаются вирус папилломы человека рода beta 1 (р < 0,05), при множественной - чаще вирус папилломы человека рода beta 3 (р < 0,05). Данные приведены в таблице 2.

При обследовании биоптатов здоровой кожи было установлено, что у больных множественной базалиомой вирус папилломы человека рода beta 1 и 2 встречается достоверно чаще, чем вирус папилломы человека рода beta 3. Из-за малого числа наблюдений мы не смогли обнаружить разницу в распределении вируса папилломы че-

ловека рода beta у больных с единичной базалиомой и контрольной группы. Данные приведены в таблице 3.

Таблица 2

Распределение генотипов вируса папилломы человека рода beta в пораженной коже у больных базально-клеточным раком кожи

ВПЧ Единичный БКРК (n=I5) Множественный БКРК (n=15) P 4

Beta 1 80,0 % (12 ) 53,3 % ( 8 ) p 4 < 0,05

Beta 2 60,0 %(9) 60,0 % ( 9 ) p 4 > 0,05

pl-2 > 0,05 pl-2 > 0,05

Beta3 40,0 % (6 ) 60,0 % ( 9 ) p 4 < 0,05

pl-3 < 0,05 pl-3 >0,05

p2-3 = 0,05 p2-3 > 0,05

Примечания для таблицы 2: pl-2 статистическая значимость различия средних исследуемых показателей группы с ВПЧ beta I - по сравнению с группой ВПЧ beta 2; pi-3 статистическая значимость различия средних исследуемых показателей группы с ВПЧ beta 1 - по сравнению с группой ВПЧ beta 3; р2-3 статистическая значимость различия средних исследуемых показателей группы с ВПЧ beta 2 -по сравнению с группой ВПЧ beta 3. р 4- статистическая значимость различия средних исследуемых показателей группы с единичным БКРК - по сравнению с группой с множественным БКРК.

Таблица 3

Распределение генотипов вируса папилломы человека рода beta в здоровой коже у больных базально-клеточным раком кожи

Род ВПЧ Больные единичным БКРК (n = 3) Больные множественным БКРК (п = 7) Контрольная группа (п = 2)

Beta 1 3 (100 %) 6 (85,7 %) р 1-3 < 0,05 50,0 % (1)

Beta 2 3(100%) 5 (71,4 %) р 2-3 < 0,05 100% (2)

Beta3 1 (33,3 %) 1 (14,29 %) 0

Примечания для таблицы 3: pl-2 статистическая значимость различия средних исследуемых показателей группы с ВПЧ beta 1 - по сравнению с группой ВПЧ beta 2; pl-З статистическая значимость различия средних исследуемых показателей группы с ВПЧ beta 1 — по сравнению с группой ВПЧ beta 3; р2-3 статистическая значимость различия средних исследуемых показателей группы с ВПЧ beta 2-по сравнению с группой ВПЧ beta 3.

Анализ частоты встречаемости моно- и микст-ВПЧ-инфекции у исследуемых групп показал, что на долю моноинфекции (инфицирование одним видом ВПЧ) у больных БКРК в пораженной коже приходилось от 40 % до 46,67 %, в здоровой коже

- от 0% до 42,9 %, а на долю микст-ВПЧ-инфекции (инфицирование двумя и более видами ВПЧ) у больных БКРК в пораженной коже приходилось от 53,3 % до 60 %, в здоровой коже от 57,14 % до 100 %. В группе условно-здоровых лиц на долю моноинфекции и микстинфекции приходилось по 50 % случаев.

Присутствие ВПЧ в патологически измененном эпителии может быть следст-

вием как активной вирусной инфекции, так и бессимптомной персистенции, характерной для условно-патогенных инфекционных агентов. В связи с этим, помимо выявления ВПЧ, необходимо проводить измерение вирусной нагрузки - количество геномов ВПЧ в эпителиальных клетках [Snijders Р., 2003; Stoler М., 2006]. В настоящее время не вызывает сомнений необходимость проведения количественного анализа вирусных геномов в коже. Это позволит более объективно судить о ВПЧ-инфекции в опухолях кожи, а, следовательно, глубже понимать механизмы, связывающие ЭОК и ВПЧ [Snijders Р., 2003; Harwood С. Et а!., 2004; zur Hausen P. et al., 2005; Weissenborn

S. et al., 2005].

Нам известно, что инфицирование ВПЧ кожных покровов происходит при наличии микротравм (повышенная солнечная инсоляция, повышенная фоточувствительность, рентгеновское и другие виды ионизирующего облучения, воздействие на кожу минеральных масел, смол, мышьяка, инсектицидов, нефтепродуктов и других химических веществ, механические и термические травмы кожи, приводящие к образованию рубцов и т.д.), когда глубина их достигает базального слоя эпидермиса. Достаточно единичных вирусных частиц, чтобы вызвать инфекционный процесс. Показано, что определенные характерные фрагменты ВПЧ, связываясь с геном р53 кера-тиноцитов и воздействуя на его опухольсупрессирующую функцию, приводят к неконтролируемой пролиферации кератиноцитов [Прилепская В.Н. и др., 2000; Коломи-ец Л.А., Уразова JI.H., 2002; Молочков А. В. и др., 2004]. У лиц, инфицированных ВПЧ, по мере размножения трансформированных клеток и прогрессирования неопла-зии возрастает интеграция ДНК ВПЧ в клеточный геном, снижается экспрессия протеинов репликации (Е1-Е5). Далее ген Е2 становится функционально неактивным, и экспрессия Е6 и Е7 возрастает, пролиферация клонов трансформированных клеток усиливается, и процесс вступает на этапы канцерогенеза с максимальной экспрессией протеина Е7 [Мынбаев О.А, и др., 2009; Климов Е.А., 2010].

Таблица 4

Средняя вирусная нагрузка вируса папилломы человека рода beta у больных базально-клеточным раком кожи, М±ш

Вирусная нагрузка, lg ВПЧ на 105 клеток человека БКРК единичный БКРК множественный

пораженная кожа (п = 15) здоровая кожа (п = 3) пораженная кожа(п= 15) здоровая кожа (п = 7)

Beta 1 3,84 ±0,13 2,53 ± 0,86 3,9 ± 0,4 3,22 ±0,44

Beta 2 3,95 ±0,39 2,79 ±0,39 4,04 ± 0,54 3,76 ±0,69

Beta 3 4,28 ±0,61 2.4 4,61 ±0,4 4,40

Примечания для таблицы 4 - статистически значимых различий нет.

Результаты полученных концентраций ДНК ВПЧ выражались в ^ (ВПЧ на 105 клеток человека), данные приведены в таблице 4, и трактовались по аналогии с результатами инфицирования ВПЧ клеток базального слоя эпителия шейки матки (наиболее уязвимым участком считается зона перехода многослойного плоского эпителия в цилиндрический эпителий), следующим образом: менее 3 ^ — малозначимая, от 3 до

5 ^ - значимая и более 5 ^ - повышенная вирусная нагрузка [Прилепская В.Н. и др., 2002; Киселев В.И., Киселев О.И., 2003; Рудакова Е.Б. и др., 2004; Русакевич П.С., Фокина Н.П., 2006; Климов Е.А.. 2010; Зотова М.А., 2011].

Значения вирусной нагрузки составляло от 3,84 lg/Ю5 до 4,61 Ig/Ю5 в пораженной коже больных, и от 2,4 lg/Ю5 до 4,4 lg/Ю5 в здоровой коже больных. Мы сравнили наши данные с данными Кладовой А. Ю. (2007). Автором было установлено, что из 82 больных БКРК обнаружение ВПЧ рода beta составило 81,7 % случаев, а вирусная нагрузка составила 2,08 ± 1,4 lg/Ю5 в пораженной коже, биоптаты здоровой кожи этих же больных не исследовались.

При сравнении между показателями средней вирусной нагрузки вируса папилломы человека рода beta у больных базально-клеточным раком кожи с единичной и множественной базалиомой, а так же при оценке пораженной и здоровой кожи мы не нашли статистически значимых отличий.

Анализ полученных данных показал, что, во-первых, вирус папилломы человека рода beta чаще встречается в биоптатах, пораженных базально-клеточным раком кожи, чем в здоровых тканях; во-вторых, у больных с единичным базальноклеточным раком кожи чаще встречается вирус папилломы человека рода beta 1, у больных с множественным базально-клеточным раком кожи — чаще вирус папилломы человека рода beta 3; в-третьих, моно- и микст-ВПЧ-инфекция одинаково часто встречается как в здоровой, так и в пораженной коже; в-четвертых, показатели вирусной нагрузки вируса папилломы человека рода beta здоровой и пораженной кожи как при единичном БКРК, так и при множественном БКРК не имели достоверных различий, при этом вирусная нагрузка оценивалась как значимая.

Таблица 5

Содержание лейкоцитов в периферической крови у больных базально-клеточным раком кожи, М±ш

Показатели Базально-клеточный рак кожи (п = 50) Практически здоровые лица (п = 30) Р

единичный (п = 30) множественный (п = 20)

1 2 3 4 5

Лейкоциты, х109/л 7,35 ± 0,4 7,57 ± 0,6 6,72 ± 0,3 pi—3 >0,05 р2-3 >0,05 pi—2 > 0,05

Эозинофилы, % 2,80 ±0,4 4,15 ±0,9 2,80 ± 0,4 pl-3 >0,05 р2—3 <0,05 pl-2 <0,05

Палочкоядерные ней-трофилы, % 3,27 ±0,6 3,45 ±0,5 2,60 ±0,4 pi—3 >0,05 р2-3 >0,05 pl-2 > 0,05

Сегментоядерные ней-трофилы, % 62,07 ± 1,5 62,15 ±2,4 60,07 ± 1,3 pl-3 >0,05 р2—3 >0,05 pl-2 > 0,05

Моноциты, % 8,70 ± 0,5 7,60 ±0,6 8,20 ± 0,5 pi—3 >0,05 р2-3 >0,05 pl-2 > 0,05

Моноциты, *109/л 0,63 ± 0,04 0,69 ±0,2 0,58 ±0,05 pi—3 >0,05 р2—3 >0,05 pi—2 > 0,05

Продолжение 6

1 2 3 4 5

Лимфоциты, % 21,17 ± 1,7 22,35 ± 2,5 26,37 ± 1,2 р 1-3 <0,05 р2-3 <0,05 р 1—2 > 0,05

Лимфоциты, *109/л 1,53 ±0,1 1,69 ±0,3 1,74 ±0,1 р 1-3 >0,05 р2-3 >0,05 р1-2 > 0,05

Нейтрофилы, % 64,53 ± 1,7 65,35 ±2,6 62,43 ± 1,1 р1—3 >0,05 р2-3 >0,05 р1—2 > 0,05

Нейтрофилы, х 109/л 4,84 ± 0,3 4,83 ± 0,5 4,12 ±0,2 р 1—3 >0,05 р2—3 >0,05 р1—2 > 0,05

Примечания для таблиц 5—6: р!—3 - статистическая значимость различия средних исследуемых показателей группы с единичным базально-клеточным раком кожи — по сравнению с группой практически здоровых лиц: р2-3 — статистическая значимость различия средних исследуемых показателей группы с множественным базально-клеточным раком кожи —по сравнению с группой практически здоровых лиц; р!-2 - статистическая значимость различия средних исследуемых показателей между группами с единичным и множественным базально-клеточным раком кожи.

Следующим этапом нашего исследования стало изучение иммунологических показателей периферической крови у больных с единичным и множественным базально-клеточным раком кожи. В таблице 5 представлены данные о содержании лейкоцитов, нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов в периферической крови у обследованных.

Клеточный состав периферической крови у больных с множественным базально-клеточным раком кожи характеризовался увеличением числа эозинофилов - по сравнению с группой больных с единичным базально-клеточным раком кожи и группой условно-здоровых лиц. При анализе данных, приведенных в таблице 5, можно отметить, что у группы с единичным базально-клеточным раком кожи наблюдается достоверное снижение относительного количества лимфоцитов по отношению к группе условно-здоровых лиц, так же наблюдается достоверное снижение относительного количества лимфоцитов больных с множественным базально-клеточным раком кожи по сравнению с группой условно-здоровых лиц. Других достоверных отличий между показателями в группах больных не выявлено.

Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у больных с базально-клеточным раком кожи представлен в таблице 6.

При анализе показателей лимфоцитарного звена у пациентов с единичным и множественным БКРК нами установлено, что у больных при сравнении с группой контроля наблюдается достоверное повышение относительного количества СОЗ-С016+С056+. При этом у больных с множественным БКРК показатель СБЗ-С016+С056+ достоверно выше, чем у больных с единичным БКРК. У больных с единичным БКРК отмечается достоверное повышение относительного количества СБЗ-С019+ при сравнении с группой больных множественным БКРК. У больных с множественным БКРК достоверно снижено относительное количество СОЗ-СГ)19+, чем у группы условно-здоровых лиц.

Таблица 6

Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови у больных базально-клеточным раком кожи, М ± ш

Показатели Базально-клеточный рак кожи (п = 50) Практически здоровые лица (п = 30) Р

единичный (п = 30) множественный (п = 20)

1 2 3 4 5

С03+С019-, % 70,89 ± 1,7 72,18 ±2,6 74,6 ± 1,4 р1-3 > 0,05 р2-3 > 0,05 р1-2 > 0,05

С03+С019-, х 109/л 1369,8 ±116,9 1590,79 ±242,8 1537,1 ± 103,6 р1-3 > 0,05 р2—3 > 0,05 р1-2 > 0,05

СШ+СЭ4+, % 41,87 ± 1,8 45,4 ± 2,7 45,3 ± 1,7 р1-3 > 0,05 р2-3 > 0,05 р1-2 > 0,05

С03+С04+, х 109/л 831,2 ±81,5 1009,63 ± 174,5 924,2 ±63,9 р1—3 > 0,05 р2-3 > 0,05 р1-2 > 0,05

С03+С08+, % 24,14 ± 1,9 23,88 ±1,9 25,7 ± 1,6 р1-3 > 0,05 р2-3 > 0,05 р1—2 > 0,05

С03+С08+, х 109/л 459,13 ±49,02 523,42 ±78,1 542,5 ± 63,6 р1—3 > 0,05 р2—3 > 0,05 р1-2 > 0,05

СБ4+/СП8+, у.е. 2,83 ± 0,7 2,19 ±0,2 1,97 ±0,2 р1-3 > 0,05 р2-3 > 0,05 р1-2 >0,05

С04+/С08+, х109/л 2,38 ± 0,3 2,17 ±0,3 1,8 ±0,2 р1-3 > 0.05 Р2-3 > 0,05 р 1-2 >0,05

С03+С016+С 056+, % 4,74 ± 0,9 4,42 ± 0,8 3,91 ±0,7 р1—3 > 0,05 р2-3 > 0,05 р1—2 > 0,05

СБЗ+С016+С 056+, хЮ9/л 100,9 ±22,8 109,53 ±36,7 78,17 ±16,2 р1-3 > 0,05 р2-3 > 0,05 р1—2 > 0,05

СЭЗ- С016+С056+, % 12,9 ±0,93 16,03 ± 2,6 10,1 ±0,9 р1—3 < 0,05 р2-3 < 0,05 р1—2 < 0,05

СБЗ- СШ6+С056+, X 109/л 258,9 ± 27,8 338,6 ±65,2 242,03 ±35,01 р1—3 > 0,05 р2-3 > 0,05 р1—2 > 0,05

Продолжение таблицы 6

1 2 3 4 5

СЭЗ-СВ19+. % 9,2 ± 0,8 7,4 ± 0,7 9,7 ± 0,7 р1-3 > 0,05 р2-3 < 0,05 р1—2 < 0,05

СОЗ-СШ9+, X 109/л 184,03 ±26,5 145,3 ± 10,7 195.4 ± 18,1 р 1—3 > 0,05 р2-3 > 0,05 р 1—2 > 0,05

Для изучения функциональной активности нейтрофилов были проанализированы следующие показатели: лизосомальная активность, спонтанный и индуцированный НСТ-тест, активность и интенсивность фагоцитоза нейтрофилов. При проведении сравнительного анализа функциональной активности нейтрофилов периферической крови отличий от показателей контроля и между показателями в группах больных выявлено не было.

С целью изучения гуморального звена нами были определены следующие показатели в сыворотке крови: уровень иммуноглобулинов А, М, в, ЦИК, СН50 и показатели интерферонов а и у. Изучение показателей гуморального иммунитета характеризовалось достоверным увеличением ^ А у больных с единичным базальноклеточным раком кожи - по сравнению с группой практически здоровых лиц (рис. 1). Изучение показателей интерферонов а и у выявило достоверное увеличение ИФН-у и снижение уровня содержания ИФН-а у больных с базалиомой по сравнению с группой практически здоровых лиц.

100

90

80

70

60

50

40

30

20

10

0

В-л

12

Г

ЩІК. у .е. СН50. у.е

«едБКРК г мнЕКРК здоровые

ІІФН-0

ИФН-у

Рисунок 1. Показатели гуморального иммунитета в крови у больных базальноклеточным раком кожи и показатели интерферонов а и у.

Таким образом, сравнительный анализ показателей иммунитета больных базалиомой, как единичной, так и множественной, по сравнению с показателями группы контроля позволил установить, что однотипными изменениями у больных базалио-

мой являются: снижение относительного количества лимфоцитов, что характерно для данного заболевания; увеличение показателя СПЗ-С01б+СП56+ (%), который отвечает за функцию врожденного иммунитета; отсутствие изменений показателей функциональной активности нейтрофилов, что свидетельствует о недостаточном участии этих клеток в противоопухолевой защите при базалиоме; увеличение показателя ин-терферона-у, что характеризует эффективную противоопухолевую защиту и, возможно, определяет медленный рост новообразований и отсутствие метастазирования; снижение показателя интерферона-а, что, вероятно, свидетельствует о снижении противовирусной защиты.

Сравнительный анализ показателей иммунитета больных множественной база-лиомой показал, увеличение процентного содержания эозинофилов в периферической крови, что подтверждает данные других исследований при онкологических заболеваниях, и снижение уровня С03-С019+%, что свидетельствует о некотором подавлении гуморального иммунитета.

Сравнение иммунологических показателей периферической крови у больных базально-клеточным раком кожи, инфицированных и неинфицированных вирусом папилломы человека показало, что клеточный состав периферической крови у больных базально-клеточным раком кожи, инфицированных ВПЧ, характеризовался увеличением числа нейтрофилов, за счет сегментоядерных форм, увеличением числа эозинофилов и снижением уровня лимфоцитов по сравнению с группой больных базально-клеточным раком кожи, неинфицированных ВПЧ (табл. 7). При анализе показателей лимфоцитарного звена у пациентов БКРК, инфицированных и неинициированных вирусом папилломы человека, различий установлено не было.

Таблица 7

Содержание лейкоцитов в периферической крови у больных базально-клеточным раком кожи, инфицированных ВПЧ и неинфицированных ВПЧ, М±т

Показатели Базально-клеточный рак кожи, п=39 Р

ВПЧ+(п = 30) ВПЧ- (п = 9)

Лейкоциты, х109/л 7,27 ± 0,40 6,31 ±0,74 >0,05

Эозинофилы, % 3,63 ±0,70 2,78 ± 0,40 = 0,05

Палочкоядерные нейтрофилы, % 3,07 ± 0,42 2,56 ± 0,82 >0,05

Сегментоядерные нейтрофилы, % 63,7 ± 1,45 55,89 ±3,15 <0,05

Моноциты, % 8,60 ± 0,52 9,33 ± 0,50 >0,05

МОНОЦИТЫ, х109/л 0,68 ±0,11 0,64 ± 0,08 >0,05

Лимфоциты, % 20,63 ± 1,26 28,33 ±3,24 <0,05

лимфоциты, х109/л 1,38 ±0,10 1,85 ±0,27 >0,05

Нейтрофилы, % 66,60 ± 1,56 56,89 ±3,19 <0.05

Нейтрофилы, х ю9/ л 4,83 ±0,37 3,64 ±0,43 <0,05

Примечания для таблиц 7-8: статистическая значимость различия средних исследуемых показателей группы с ВПЧ+ базально-клеточным раком кожи по сравнению с группой с ВПЧ- базально-клеточным раком кожи.

При изучении функциональной активности нейтрофилов периферической крови было выявлено, что у больных БКРК, инфицированных ВПЧ, снижены: интенсивность фагоцитоза нейтрофилов, фагоцитарное число и активность индуцированного НСТ-теста полиморфно-ядерных нейтрофилов (табл. 8).

Функциональная активность нейтрофилов периферической крови у больных базально-клеточным раком кожи, инфицированных ВПЧ и неинфицированных ВПЧ, М±ш

Показатели Базально-клеточный рак кожи (п = 39) Р

ВПЧ+(п = 30) ВПЧ-(п = 9)

Фагоцитоз нейтрофилов активность, % 46,83 ±2,1 46,67 ± 2,7 >0,05

Интенсивность, уел.ед 1,23 ±0,1 1,56 ±0,2 <0,05

Фагоцитарное число, уел. ед 2,61 ±0,16 3,36 ±0,52 <0.05

НСТ-тест нейтрофилов спонтанный активность. % 17,6 ± 1,35 18.89 ±2.22 >0.05

Индекс, уел. ед 0,27 ± 0.02 0,3 ± 0,04 >0.05

НСТ-тест нейтрофилов индуциро- ванный активность. % 29,43 ± 1.8 33,44 ±2,1 = 0.05

Индекс, уел. ед 0.43 ± 0,03 0,52 ± 0,07 >0,05

Лизосомальная активность нейтрофилов, усл.ед 276,6 ± 7,7 294,63 ± 15,6 >0,05

І ВПЧ+

впч-

14

12

10

І

ИФН-у

I ВПЧ+

впч-

ЦИК.у.е СН50,у.е

Рисунок 2. Показатели гуморального иммунитета и интерферонов а и у у больных базально-клеточным раком кожи, инфицированных ВПЧ и неинфицированных ВПЧ

Изучение уровней интерферонов показало достоверное увеличение содержания ИФН-а и ИФН-у у больных БКРК, инфицированных ВПЧ, по сравнению с группой неинфицированных ВПЧ. Изучение показателей гуморального звена иммунитета характеризовалось снижением 1% в у больных базально-клеточным раком кожи, инфицированных ВПЧ. по сравнению с группой неинфицированных ВПЧ (рис. 2).

Таким образом, анализ показал, что у больных базально-клеточным раком кожи, инфицированных вирусом папилломы человека, был снижен уровень лимфоцитов, без изменения субпопуляционного состава; повышен уровень нейтрофилов, но функция этих клеток была нарушена, так как снижены интенсивность фагоцитоза нейтрофилов, фагоцитарное число и НСТ-тест индуцированный; увеличен уровень эозинофилов; имелось увеличение уровней ИФН-а и ИФН-у, при снижении Jg G, по сравнению с показателями больных, неинфицированных ВПЧ.

Для выявления структуры и характера взаимосвязей между иммунологическими показателями был применен метод корреляционного анализа. Взаимосвязи определялись между вирусной нагрузкой вируса папилломы человека, иммунологическими показателями и уровнями интерферонов, так как именно интерфероны осуществляют реализацию механизмов врожденного и регуляцию системы адаптивного иммунитета, составляющих основу контроля над процессами, вызванными ВПЧ [Stem P.L., Kitchener Н.С., 2009]. При анализе взаимосвязей в группе больных единичным БКРК выявлено 4 корреляционных связей, из них 3 положительных и 1 отрицательная. Между ИФН-а определялись положительные взаимосвязи с активностью спонтанного НСТ-теста и CD3+CD16+CD56+(%). Отрицательная взаимосвязь определилась между ИФН-а и СН 50. Между ИФН-у была установлена положительная взаимосвязь с активностью фагоцитоза нейтрофилов. Выявленные взаимосвязи свидетельствуют о том, что снижение ИФН-а, которое характерно для этих пациентов, может сопровождается снижением внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофилов и количеством субпопуляции Т-лимфоцитов с киллерной активностью, но повышением гемолитической активности комплемента. Увеличение ИФН-у сопровождается увеличением активности фагоцитоза нейтрофилов. Эти данные можно оценивать, как усиление роли врожденного иммунитета при единичном базально-клеточном раке кожи.

При анализе взаимосвязей в группе больных множественным БКРК выявлено 7 корреляционных связей, из них 5 положительных и 2 отрицательных. Между ИФН-а определялись положительные взаимосвязи с Ig А и Ig G. Между ИФН-у были установлены положительные взаимосвязи с CD3+CDI9-(%), CD3+CD16+CD56+(%), Ig G. Между ИФН-у были установлены отрицательные взаимосвязи с активностью спонтанного НСТ-теста и CD3-CD16+CD56+(%).

Выявленные взаимосвязи свидетельствуют о том, что снижение ИФН-а, характерное для этих пациентов, может сопровождаться уменьшением уровня коннцентра-ций Ig А и Ig G. Увеличение ИФН-у сопровождается увеличением Т-лимфоцитов, субпопуляции Т-лимфоцитов с киллерной активностью и Ig G, но уменьшением натуральных киллеров и активностью спонтанного НСТ-теста. Полученные данные могут оцениваться, как некоторое усиление адаптивного иммунитета при множественном базально-клеточном раке кожи.

Для установления возможного влияния инфицирования вирусом папилломы человека на иммунную систему больных базалиомой, нами был проведен корреляционный анализ показателей иммунитета инфицированных и неинфицированных ВПЧ.

При анализе взаимосвязей в группе больных БКРК, неинфицированных ВПЧ, вьивлено 7 корреляционных связей, из них 5 положительных и 2 отрицательные. Положительных взаимосвязей между ИФН-а и иммунологическими показателями периферической крови больных не было установлено. Между ИФН-а определялась отрицательная взаимосвязь с циркулирующими иммунными комплексами. Положительные взаимосвязи были выявлены между ИФН-у и CD3+CD19- (%), CD3+CDI9-

(хЮ9/л), активностью фагоцитоза нейтрофилов, эозинофилами (%) и нейтрофилами (%). Отрицательная корреляционная связь была установлена между ИФН-у и фагоцитарным числом нейтрофилов.

Выявленные взаимосвязи свидетельствуют о том, что увеличение ИФН-у, характерное для базально-клеточного рака кожи и единичного и множественного, сопровождается увеличением Т-лимфоцитов, эозинофилов, нейтрофилов, активности фагоцитоза нейтрофилов, но некоторым уменьшением способности фагоцитов к захвату частиц латекса. Эти данные можно оценивать как усиление роли иммунной системы в патогенезе опухолевого заболевания.

При анализе взаимосвязей в группе больных БКРК, инфицированных вирусом папилломы человека, выявлено 14 корреляционных связей, из них 8 положительных и

6 отрицательных. Положительные взаимосвязи определены между ИФН-а и CD3+CD19- (%), CD3+CD19- (*109), активностью фагоцитоза нейтрофилов (%); отрицательные взаимосвязи - между ИФН-а и CD3+CD4+ (х109). Положительные взаимосвязи установлены между ИФН-у и CD3+CD19-(%), CD3+CD19-(xl09),

CD3+CD16+CD56+(%), и CD3+CD16+CD56+(xl09). Обратная взаимосвязь установлена между ИФН-у и СН50.

При анализе взаимосвязей вирусной нагрузки вируса папилломы человека и показателей иммунитета были установлены: одна прямая связь между вирусной нагрузкой и CD3+CD19-(xl09) и обратные корреляционные связи между вирусной нагрузкой и палочкоядерными нейтрофилами, нейтрофилами (%), CD3-CD19+(%) и CD3-CD19+(*109).

Можно предположить, что при опухолевом процессе, ассоциированном с ВПЧ-инфекцией, увеличение ИФН-а способствует увеличению активности фагоцитоза нейтрофилов, Т-лимфоцитов, со снижением Т-хелперов, увеличение ИФН-у приводит к увеличению Т-лимфоцитов, TNK-клеток, со снижением активности комплемента. При возрастании вирусной нагрузки увеличивается количество Т-лимфоцитов, но падает число нейтрофилов и В-лимфоцитов.

Таким образом, корреляционный анализ показал, во-первых, взаимосвязь различных компонентов иммунной системы, во-вторых, при опухолевом процессе роль ИФН-у заключается в индукции увеличения количества Т-лимфоцитов, эозинофилов и нейтрофилов. На наш взгляд, так реализуется противоопухолевый иммунитет при данном заболевании, для которого характерно отсутствие метастазирования. В-третьих, при опухолевом процессе, ассоциированном с вирусом папилломы человека, одновременное увеличение ИФН-у и ИФН-а способствует повышению количества Т-лимфоцитов, TNK-клеток и фагоцитарной функции нейтрофилов, рост вирусной нагрузки приводит к увеличению Т-лимфоцитов. По нашему мнению, сочетанное действие этих факторов реализует одновременно и противоопухолевую и противовирусную защиту при изучаемом заболевании.

ВЫВОДЫ

1. Методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцент-ной детекцией в режиме реального времени установлена высокая частота встречаемости вируса папилломы человека рода beta у больных единичным (71,4% случаев) и множественным (83,3% случаев) базально-клеточным раком кожи.

2. Частота обнаружения вируса папилломы человека рода beta у больных базально-клеточным раком кожи выше в пораженной коже (единичный - 71,4 %, множественный — 83,3 %), чем в здоровой коже (единичный - 14,3 %, множественный -

38,9 %). При этом у больных с единичным базально-клеточным раком кожи чаще встречается вирус папилломы человека рода beta 1 (80 %), у больных с множественным базально-клеточным раком кожи чаще - вирус папилломы человека рода beta 3 (60 %).

3. Инфицирование одним или несколькими типами ВПЧ и показатели вирусной нагрузки одинаково часто встречаются при единичном и множественном базальноклеточном раке кожи, как в пораженной, так и здоровой коже.

4. Иммунологические показатели больных базально-клеточным раком кожи характеризуются однотипными изменениями независимо от характера течения заболевания: снижением относительного количества лимфоцитов и уровня ИФН-а, увеличением CD3-CD16+CD56+ (%) и концентрации ИФН-у и отсутствием изменений функциональной активности нейтрофилов.

5. При множественном базально-клеточном раке кожи в отличии от единичного наблюдается увеличение относительного содержания эозинофилов и снижение количества CD3-CD19+ (%) в периферической крови больных.

6. При множественной базалиоме установлены взаимосвязи между иммунологическими показателями больных: прямые - между ИФН-а и Ig А, ИФН-а и Ig G, ИФН-у и Т-лимфоцитами, ИФН-у и субпопуляцией TNK-клеток, ИФН-у и Ig G; обратные — между ИФН-у и спонтанным НСТ-тестом, ИФН-у и натуральными киллерами.

7. У больных базально-клеточным раком кожи, инфицированных вирусом папилломы человека, были установлены изменения в показателях иммунитета, связанные с повышением количества эозинофилов и числа нейтрофилов с одновременным нарушением функции этих клеток, со снижением количества лимфоцитов, без изменения их субпопуляционного состава, с уменьшением уровня Ig G, с повышением концентрации ИФН-а и ИФН-у.

8. У больных базально-клеточным раком кожи, инфицированных вирусом папилломы человека, выявлены взаимосвязи между иммунологическими показателями: прямые - между ИФН-а и Т-лимфоцитами, активностью фагоцитоза нейтрофилов, между ИФН-у и Т-лимфоцитами, TNK-клетками, между вирусной нагрузкой вируса папилломы человека и Т-лимфоцитами; обратные - между ИФН-а и CD3+CD4+(xI09Ai), между ИФН-у и активностью комплемента, между вирусной нагрузкой вируса папилломы человека и количеством В-лимфоцитов и нейтрофилов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью оптимизации диспансерного наблюдения больных следует выделять единичный и множественный базально-клеточный рак кожи.

2. При обнаружении у больного с единичным базально-клеточным раком кожи вируса папилломы человека рода beta 3, увеличении процентного содержания эозинофилов и снижении уровня В-лимфоцитов в периферической крови рекомендуется включать пациента в группу диспансерного наблюдения больных множественным базально-клеточным раком кожи.

3. В группе больных множественным базально-клеточным раком кожи диспансеризация должна проводиться пожизненно с частотой осмотра один раз в 6 - 12 месяцев.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Русских, О.О. Эпидермальные новообразования кожи у больных базальноклеточным раком кожи / 0.0. Русских, Т.П. Писклакова, Е.И. Костенко // Национальный альянс дерматологов и косметологов: материалы науч. тр. I междунар. форума медицины и красоты. - М., 2008. - С.227-228.

2. Писклакова, Т.П. Базально-клеточный рак кожи и солнечный эластоз как грани единой проблемы старения кожи / Т.П. Писклакова, Е.И. Костенко, 0.0. Русских, О.И. Екимова 11 Научно-практическая конференция национального альянса дерматологов и косметологов «Инновации в дерматологии, косметологии и эстетической медицине». - Уфа, 2009 - С.62.

3. Русских, О.О. Показатели системного иммунитета у больных базальноклеточным раком кожи / О.О. Русских, Е.И. Костенко // Вест. Юж.-Урал. Гос. Ун-та. - 2010. -№37(213). - С. 89-94. - (Сер. «Образование, здравоохранение, физическая культура»; Вып. 25).

4. Русских, О.О. Сравнительная характеристика показателей системного иммунитета у больных с доброкачественными и злокачественными новообразованиями кожи / О.О. Русских, Е.И. Костенко, Л.Ф. Телешева II Вест. Урал. Мед. Академической Науки. Тематический вып. по аллергологии и иммунологии. -2011-Т. 2/1. (35) - С.197-198.

5. Русских, О.О. Показатели системного иммунитета и интерферонового статуса у больных базально-клеточным раком кожи / О.О. Русских, К.В. Никуш-кина II Вест. Урал. Мед. Академической Науки. Тематический вып. по аллергологии и иммунологии . - 2011.-Т. 2/1. (35)- С.198-199.

6. Русских, О. О. Показатели системного иммунитета у больных базальноклеточным раком кожи, инфицированных вирусом папилломы человека / О.О. Русских // Известия высших учебных заведений. Уральский регион. - 2011. - № 3. - С. 112 -117.

7. Костенко, Е.И. Изменения иммунологических показателей у больных себорейным кератозом / Е.И. Костенко, О.О. Русских // Вест. Юж.-Урал. Гос. Ун.

- 2011. - №39 - С. 89-94. ( Серия «Образование, здравоохранение, физическая культура»; Вып. 29).

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АПК - антиген представляющие клетки

БКРК - базально-клеточный рак кожи

ВН - вирусная нагрузка

ВПЧ - вирус папилломы человека

ГЭ - геномный эквивалент

ДК - дендритные клетки

ДНК -дезоксирибонуклеиновая кислота •

МКБ - международная классификация болезней

ИФН - интерферон

ИФА - иммуноферментный анализ

нет - нитросиний тетрозолий

ПВИ - папилломавирусная инфекция

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ФНО - фактор некроза опухоли

ЭОК - эпителиальные опухоли кожи

CD - clusters of differentiation (кластеры дифференцировки)

Ig - иммуноглобулин

lg - логарифм

МНС - главный комплекс гистосовместимости

NK - натуральные киллеры

Th - Т-хелперы

URR - регуляторная область

STAT - сигнальный трансдуктор и активатор транскрипции (Signal transducer and

activator of transcription)

Русских Ольга Олеговна

ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ БОЛЬНЫХ ЕДИНИЧНЫМ И МНОЖЕСТВЕННЫМ БАЗАЛЬНО-КЛЕТОЧНЫМ РАКОМ КОЖИ, АССОЦИИРОВАННЫМ С ВИРУСОМ ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА

14.03.09-клиническая иммунология, аллергология

14.01.10 - кожные и венерические болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск-2012

Подписано в печать 25.01.2012 г. Отпечатано в типографии ПРИНТМЕД 26.01.2012 г. Формат 60x84 ’/іб. Гарнитура Times New Roman Суг. Бумага офсетная. Печать на ризографе. Объем 1 уел. п.л. Тираж 100 экз.