Иммунологическая реактивность, плоидность и кинетика клеточного цикла клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей

Хисамова, Назиля Фагильевна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммунологическая реактивность, плоидность и кинетика клеточного цикла клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей

ДИССЕРТАЦИЯ

Иммунологическая реактивность, плоидность и кинетика клеточного цикла клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Хисамова, Назиля Фагильевна Уфа 2009 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Иммунологическая реактивность, плоидность и кинетика клеточного цикла клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей

0034Б40В5

На правах рукописи

ХИСАМОВА НАЗИЛЯ ФАГИЛЬЕВНА

ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ РЕАКТИВНОСТЬ, ПЛОИДНОСТЬ И КИНЕТИКА КЛЕТОЧНОГО ЦИКЛА КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ У ДЕТЕЙ

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

, м-.'.Р ^

\ 7.1."- л

УФА-2009

003464065

Работа выполнена в Государственном учреждении здравоохранения «Республиканская детская клиническая больница»

Научный руководитель- доктор медицинских наук, профессор

Хайруллина Раиса Масгутовна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика ИЛЪПавлова» Росздрава

Защита диссертации состоится « » марта 2009 года в . :ов на заседании Объединенного совета по защите докторских и кандидатских диссертаций ДМ 208.006.05 при ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава, по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.

Автореферат разослан «^¿Г» февраля 2009г.

Теплова Светлана Николаевна

доктор медицинских наук, Азнабаева Лиля Фаритовна

Учёный секретарь диссертационного совета

К. А. Лукманова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Аюуальность проблемы

Перспективным направлением клинической иммунологии, является комплексный подход к изучению процессов, протекающих в иммунокомпе-тентных клетках и характеристика взаимосвязей между различными звеньями системы иммунитета. Физиологическое состояние клеток и способность к осуществлению присущих им функций характеризуется, в частности, уровнем ДНК (плоидностью) и показателями кинетики клеточного цикла. Для объективной оценки этих параметров широкое распространение получает проточная цитофлуориметрия, разделом которой является ДНК-цитометрия [Saha I. et al., 2000]. По прогнозам специалистов [Шмаров Д.А., Козинец Г.И., 2004], в самом ближайшем будущем можно ожидать внедрения проточной ДНК-цитометрии в практику работы клинико-диагностических лабораторий.

Согласно консенсусу по стандартизации методов проточной цито-метрии, созданному по инициативе Совета Европейского Общества Целлю-лярной Аналитической Патологии, материалом для определения плоидности клеток и кинетики клеточного цикла могут быть клетки крови, костный мозг, хирургические биоптаты, жидкости тела [Ormerod M.G., Tribukait В., 2001].

К настоящему времени большое количество научных работ посвящено изучению плоидности и кинетики клеточного цикла в биоптатах органов и тканей [Rytwiriski К. et al., 1999, 2000; Tsuji Y. et al., 2000; García-Escudero A. et al., 2001; Both C.T. et al., 2001; Wnuk A. et al., 2001; Takes R.P. et al., 2002; Driemel O. et al., 2005].

Наряду с ДНК-цитометрией биоптатов, развивается направление, включающее оценку функционального состояния иммунной системы с использованием качественных параметров клеток, участвующих в иммунном ответе. Так, методом проточной ДНК-цитометрии исследовали функциональное состояние иммунокомпетентных клеток и пролиферативную активность лимфоцитов цельной крови при сочетанной травме. В условиях инкубации с митогенами и специфическими антигенами, было установлено угнетение функции лимфоцитов в первые дни и восстановление пролифератив-ной активности к четвёртой неделе после травмы [Бычкова Н.В. и др., 2004].

В методическом плане наименьшие сложности возникают при работе с периферической кровью, но исследования в этой области носят фрагментарный характер и в литературе отражены результаты ДНК-цитометрии клеток периферической крови лишь в условиях профессионального длительного радиационного воздействия [Ястребов А.П., Сазонов С.В., 1995].

В отделении клинической иммунологии Республиканской детской клинической больницы с 2002 года внедрено в практику изучение иммунно-

го статуса и функционального состояния клеток на проточном цитофлуори-метре, включающее ДНК-цитометрию клеток периферической крови. Комплексные исследования проводятся при хронических инфекционно-воспалительных процессах, новообразованиях, хронических гломерулонеф-ритах на фоне иммуносупрессии, врождённых пороках развития - состояниях, оказывающих влияние на уровень ДНК и клеточный цикл.

Несмотря на преимущества проточной цитометрии (высокая точность, быстрота анализа), множество вопросов возникает при изучении функциональной активности клеток периферической крови и особенно процессов пролиферации. В связи с этим, актуальным является определение роли и места проточной ДНК-цитометрии в диагностике и прогнозе различных патологических состояний в педиатрической практике.

Цель исследования

Определить диагностическое и прогностическое значение ДНК-цитометрии периферической крови в комплексной оценке иммунного статуса и функционального состояния клеток при различных патологических состояниях у детей.

Задачи исследования

1 Провести клинико-иммунологическое обследование, ДНК-цитометрию клеток периферической крови у здоровых детей, определить корреляционные взаимосвязи между изучаемыми параметрами.

2 Оценить иммунологическую реактивность у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы, хроническими гломерулонефри-тами, опухолями головного мозга и острыми лейкозами.

3 Методом ДНК-цитометрии охарактеризовать плоидность и кинетику клеточного цикла клеток периферической крови у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы, хроническими гломерулонеф-ритами, опухолями головного мозга и острыми лейкозами.

4 Оценить корреляционные взаимосвязи между параметрами, характеризующими иммунный статус и показателями ДНК-цитометрии клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей.

Научная новизна

Впервые дана характеристика плоидности и кинетики клеточного цикла клеток периферической крови методом проточной ДНК-цитометрии и установлена взаимозависимость между иммунологическими параметрами, показателями ДНК-гистограмм у практически здоровых детей, при хронических инфекционно-воспалительных процессах на фоне врожденных пороков развития мочеполовой системы и хронических гломерулонефритов, имму-носупрессивной терапии, при опухолевой трансформации.

Научно-практическая значимость работы

Определены области применения ДНК - цитометрии клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей в качестве показателей:

1) выраженности деструктивно-дистрофических изменений в почках при хронической почечной недостаточности на фоне врождённых пороков развития мочеполовой системы;

2) степени активности процесса и эффективности иммуносу-прессии при хроническом гломерулонефрите;

3) агрессивности течения заболевания при острых лейкозах.

Установлены особенности иммунологической реактивности, проявляющиеся у здоровых детей активацией, а при хронических инфекционно-воспалительных процессах супрессией клеточных эффекторных механизмов иммунной защиты, которые необходимо учитывать при разработке адаптационных норм и назначении иммунокоррекции.

Внедрение результатов исследования в практику

Материалы комплексных исследований, включающих показатели ДНК-цитометрии клеток периферической крови и иммунного статуса, используются в работе отделений клинической иммунологии, нефрологии, урологии, онкогематологии, нейрохирургии, отделении гемодиализа и трансплантации почки Республиканской детской клинической больницы, на циклах повышения квалификации врачей клинической лабораторной диагностики Института последипломного образования Башкирского государственного медицинского университета.

Основные положения, выносимые на защиту

1 ДНК-гистограммы клеток периферической крови практически здоровых детей соответствуют диплоидному содержанию ДНК. Основная масса клеток находится в 01 фазе клеточного цикла. Иммунный статус характеризуется высоким уровнем цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток.

2 При врождённых пороках развития мочеполовой системы у детей развивается комплекс иммунопатологических реакций в виде депрессии показателей противовирусной защиты (СБ8+; С016+56+), высокого содержания циркулирующих иммунных комплексов. Компенсированная стадия хронической почечной недостаточности характеризуется диплоидным типом гистограмм, в терминальной стадии выявляется анеуплоидия.

3 Иммунологическая реактивность у больных хроническим гломе-рулонефритом характеризуется снижением уровня естественных киллерных клеток, высоким содержанием клеток, несущих маркёры активации (С025+) и циркулирующих иммунных комплексов. При хроническом гломерулонефрите на фоне базисной терапии отмечаются достоверные различия с кон-

трольной группой по показателям кинетики клеточного цикла (фазы пролиферации).

4 К особенностям иммунологической реактивности при опухолях головного мозга относится высокое содержание в крови В-лимфоцитов и клеток, несущих маркеры ранней активации (С025+), при остром В-лимфобластном лейкозе - В-лимфоцитоз. Доброкачественные и злокачественные новообразования головного мозга характеризуются диплоидным типом гистограмм, анеуплоидия выявляется при остром В-лимфобластном лейкозе.

5 Корреляционным анализом взаимосвязей между параметрами иммунного статуса и показателями ДНК-цитометрии установлены различные типы межклеточной кооперации.

Апробация работы

Основные положения диссертации обсуждены на научно-практической конференции «Педиатрия в Приволжском Федеральном Округе» (Казань, 2004); научно-практической конференции «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», (СПб., 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты оказания стационарной медицинской помощи детям, новые технологии специализированной медицинской помощи. Роль стационарных детских учреждений в выполнении федеральных программ» (Уфа, 2007).

Апробация диссертации проведена на расширенном межкафедральном заседании кафедр лабораторной диагностики ИПО, педиатрии и детской хирургии ИПО, госпитальной педиатрии с курсом поликлинической педиатрии, детской хирургии, ортопедии и анестезиологии ГОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Росздрава (протокол № 1 от 11.12.2008), на заседании Объединенного совета ДМ 208.006.05 (протокол №3 от 29.01.2009).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 3 в изданиях журналов, рекомендованных ВАК.

Объём и структура диссертации

Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного текста и состоит из обзора литературы, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа содержит 28 таблиц, 25 рисунков. Список литературы включает 204 источников (106 отечественных и 98 иностранных авторов).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Работа выполнена на базе отделения клинической иммунологии Республиканской детской клинической больницы (г. Уфа).

В соответствии с поставленной целью и задачами исследования проводили в несколько этапов. На первом этапе осуществляли клинико-лабораторное обследование практически здоровых детей (контрольная группа, п=30), отвечавших следующим требованиям [Хайруллина P.M., 1999]:

- отсутствие жалоб на нарушения состояния здоровья в момент осмотра;

- эпизоды вирусных заболеваний не более 4 раз в течение года;

- отсутствие признаков аллергии и другой хронической патологии.

Следующим этапом работы было комплексное клинико-

лабораторное обследование 84 детей с различными нозологическими формами заболеваний:

- врожденные пороки развития мочеполовой системы (ВПРМПС), осложненные пиелонефритом и хронической почечной недостаточностью различной степени тяжести: двухсторонний мегауретер (п=10), гипоплазия (п=5), поликистоз (п=4) или удвоение почек (п=4);

- хронический гломерулонефрит (ХГН) (нефротический, гематури-ческий, нефритический синдромы) с начальными признаками нарушений детоксицирующей и выделительной функции почек. Обследование пациентов (п=20) проводили на фоне базисной терапии ХГН, включающей прием гормонов (преднизолон) и цитостатиков (хлорбутин, азатиаприн), механизм иммуносупрессивного действия которых связан с влиянием на пролифера-тивную фазу иммунного ответа [Цыган А.Н., Сергеева Т.В., 1998];

- опухоли головного мозга: 10 больных с доброкачественными (кра-ниофарингеома, зрелая тератома), 12 - со злокачественными новообразованиями головного мозга (опухоль лобной доли, III желудочка, медуллобла-стома, саркома, астроцитома, диффузная глиома ствола мозга). Клинико-иммунологическое обследование проводили до удаления массива опухоли. Злокачественный характер опухоли подтверждался результатами гистологических исследований;

- острые лейкозы: 16 больных с острым В-лимфобластным лейкозом (В-ОЛЛ), 3-е острым миелобластным лейкозом (ОМЛ); обследование проводили в день постановки диагноза до назначения соответствующей терапии.

Комплексное обследование больных включало сбор анамнеза, анализ клинических данных, проведение лабораторных исследований. Иммунологическое обследование проводилось с использованием комплекса стандартизированных тестов, включающих оценку:

- клеточного звена иммунитета на проточном цитофлуориметре FACSCalibur с программным обеспечением SimulSet с использованием мо-ноклональных антител фирмы Becton Dickinson и определением относительного содержания основных популяций и субпопуляций иммунокомпе-

тентных клеток (CD3\ CD4+, CD8+, CDI6+56+, CDI9+, CD25+, CD95+, HLA-DR+);

- плоидности и кинетики клеточного цикла клеток периферической крови методом проточной ДНК - цитометрии, основанным на связывании ДНК с флуоресцентным зондом - пропидиума йодидом, который позволяет определить долю клеток в различных фазах митотического цикла (G0/G1, S и G2+M). Образцы (не менее 20 ООО клеток) анализировали на проточном цитофлуориметре, оборудованном модулем дискриминации дуплетов в программе ModFit. При этом учитывалось значение коэффициента вариации (CV%) пика G1/0, отражающего точность измерения;

- концентрации сывороточных иммуноглобулинов классов А, М, G (Ig A, Ig М, Ig G) определяемых методом радиальной иммунодиффузии в геле [Manchini G. et al.,1965];

- уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) осаждением полиэтиленгликолем (мол. масса -6000) [Имельбаева Э.А. и др., 2006].

Статистическую обработку результатов исследования проводили в операционной среде «Windows-ХР» с использованием современных пакетов прикладных программ «STATISTICA 6.0». Для показателей, имеющих нормальное распределение признака, вычислялись среднее арифметическое значение (М) и стандартная ошибка среднего значения (ш). Для показателей, не имеющих нормального распределения, вычислялись медиана и интеркар-тильный размах (25 - 75 перцентили). Достоверность различий оценивалась по критерию Манна-Уитни. Корреляционный анализ выполнялся по методу Спирмена с определением коэффициента ранговой корреляции (rs). Значения р <0,05 приняты статистически значимыми [Ганц С., 1999].

Результаты исследования и обсуждение

Показатели иммунологической реактивности и ДНК-цитометрии клеток периферической крови у здоровых детей и при различных патологических состояниях

Изучение особенностей иммунологической реактивности при различных патологических состояниях не возможно без чёткого представления о норме. Нормативные показатели для каждого региона формируются при воздействии на организм человека различных внешних факторов. Изучение особенностей иммунологической реактивности практически здоровых детей проводилось в сравнении с нормативными показателями по РФ [Луговская С.А., Морозова В.Т., 2006].

Клеточное звено иммунитета у детей контрольной группы характеризовалось высоким уровнем содержания зффекторных клеток: цитотокси-ческих Т-лимфоцитов (CD8+), естественных киллерных клеток (CD16+56+), а также повышенным количеством клеток, несущих маркёры ранней активации (СБ25+)(табл. 1).

Таблица 1 - Иммунологические показатели практически здоровых детей

Показатели Контрольная группа, М±ш(п=30) Средние показатели по РФ, М±ш

Ы А, (г/л) 1,01 ±0,12 1,46 ± 0,38

1ё М, (г/л) 1,26 ±0,21 1,04 +0,46

С, (г/л) 10,68 ± 0,57* 12,20 ± 0,27

ЦИК, у.е. 29,24 ±2,50 До 50 у.е.

СБЗ+, (%) 62,10+ 1,31 64,00 ± 1,20

СЮ4+, (%) 37,43 ± 1,26 38,50 + 0,75

С08\ (%) 37,05+ 1,53* 31,50+ 0,85

С019+,(%) 14,76 ±0,90* 12,00 ±0,60

СО 16*56", (%) 22,10+ 1,73* 14,00 + 0,50

НЬА-ОЛ+, (%) 9,90 ±0,87* 14,00 ± 0,80

С025+, (%) 16,84 ±0,90* 9,00 ± 0,90

СР95+, (%) 28,50 ±3,67 Нет данных

С04+/СБ8+ 1,06 ±0,07* 1,35 ± 0,04

*- различие статистически значимо (р<0,05)

При сравнительной оценке состояния гуморального звена иммунитета в сыворотке крови у здоровых детей было выявлено снижение уровня 1ц в. Перечисленные различия, очевидно, являются отражением адаптационных особенностей иммунологической реактивности.

Наряду с клинико-иммунологическими исследованиями, у детей контрольной группы была проведена ДНК - цитометрия клеток периферической крови. Как следует из таблицы 2, в 100% случаев выявлялся диплоидный тип гистограмм, причём основная масса клеток (99,86 ± 0,02%) находилась в в 1-фазе клеточного цикла, т.е. на стадии реализации присущих клетке функций в интересах ткани и организма в целом [Мазурик В.К., 2001].

Таблица 2 - Распределение клеток периферической крови по плоидности и фазам клеточного цикла у здоровых детей (п=30)

Фазы клет. Плоид- в 1-фаза С2-фаза Б-фаза СУ

цикла ность кле- клеточ. клеточ. клеточ.

Группа ток цикла цикла цикла

Контр.фуппа 100 99,86 ± 0,04 ± 0,1 ± 2,48 ±

М ± ш, (%) 0,02 0,01 0,01 0,09

Доля клеток в стадии синтеза ДНК (S-фаза) составляла 0,1 ± 0,01%, в фазе G2-M - 0,04±0,01%. Коэффициент вариации пика G1/0 составил 2,48 + 0,09%, что отражает высокую точность измерений. На рисунке 1 представлена типичная гистограмма распределения популяции клеток (46XY) по содержанию ДНК, позволяющая идентифицировать клетки в фазах G0/1 (диплоидные), S (в стадии синтеза ДНК) и G2+M (тетраплоидные и в стадии митоза).

Diploid: 100.00 % Dtp Gt: 99.87 К. а! 48.74 Dip G2: 0.10 % at 97.47 Dip S:0.04 % ОЖ> 1:2.00 %CV: 2.63

Total S-Phase: 0.04 % Total BAD.: 0.00%

Debris: 0.04 % Aggregates: 0.00 % Modeled events: 19453 All cycle events: 19444 Cycle events per channel: 391 RCS: 6.987

Рисунок I - Гистограмма распределения клеток по фазам клеточного цикла в контрольной группе.

Одним из основных направлений работы было изучение взаимного влияния иммунных механизмов и функционального состояния клеток периферической крови на клинической модели инфекционно-воспалительного процесса при врождённых пороках развития, хронических гломерулонефри-тах на фоне иммуносупрессии и опухолевой трансформации.

В последние годы в Республике Башкортостан отмечается тенденция к увеличению числа детей, родившихся с пороками развития МПС [Мурзабаева С.Ш., Марданова А.К., и др., 2005]. Учитывая актуальность проблемы, проведено комплексное клинико-иммунологическое обследование больных с различными пороками развития почек и мочевых путей, осложненных пиелонефритом и хронической почечной недостаточностью (ХПН) различной степени тяжести. Согласно классификации Н.А Лопаткина и И.Н. Кучинского (2007) и на основании клинического течения заболевания было выделено две подгруппы детей: у пациентов первой подгруппы была установлена интермитирующая и терминальная стадии ХПН, во 2-ой - латентная и компенсированная.

По данным ДНК-цитометрии, в первой подгруппе была выявлена анеугогоидия клеток периферической крови: 40,96% клеток были анеупло-идными, 52,64%- диплоидными. Во второй подгруппе гистограммы характеризовались диплоидным типом (таблица 3).

■ Dvtfi«

Таблица 3 - Распределение клеток периферической крови у детей с врождёнными пороками развития МПС по плоидности и фазам клеточного цикла

Плоидность и фазы клеточного цикла Контрольная группа (п= 30), Ме 1-ая подгруппа (п= 12), Ме 2-ая подгруппа (п= 11), Ме

Диплоидные, (%) 100 52,64 (2,70-65,97) 100

01,(%) 99,89 (99,83-99,90) 94,31** (74,26-99,97) 99,02** (97,74-99,70)

02, (%) 0,02 (0,00-0,04) 0,02 (0,00-8,00) 0,00 (0,00-0,05)

5, (%) 0,10 (0,09-0,11) 5,70*« (0,22-10,94) 0,76** (0,25-2,26)

СУ 2,57 (2,29-2,83) 4,38* (3,03-6.71) 5,67* (7,59-7,11)

Анеуплоидные, (%) 0 40,96 (24,16-95,30) 0

С1,(%) 0 99,67 (97,86-99,87) 0

вг, (%> 0 0,00 (0,00-0,04) 0

0 0,29 (0,00-2,10) 0

СУ 0 4,29 (3,78-5,52) 0

* - различие с контролем статистически значимо (р<0,05),

** - различие с контролем статистически значимо (р<0,01) При изучении кинетики клеточного цикла было установлено, что основная масса клеток у детей с врождёнными пороками развития МПС находилась в 01 -фазе клеточного цикла. Пролиферативная активность клеток периферической крови превышала показатели контрольной группы. Так, при диплоидном типе гистограмм доля клеток в Б-фазе составила 0,76%, при гиперп-лоидии - 5,70%. Дети обеих подгрупп на момент обследования не принимали химиопрепараты, способные повлиять на клеточный цикл. Можно предположить, что митогенами для клеток являлись инфекционные агенты. В таблице 4 приведены данные иммунологических показателей у детей обеих подгрупп.

В результате сравнительного анализа выявлены однотипные иммунопатологические реакции, а именно: увеличение содержания ЦИК, повышение значений иммунорегуляторного индекса (СБ4+/С08+), низкий уро-

вень цитотоксических Т-лимфоцитов (С08+), естественных киллерных клеток (СБ 16+56+).

Таблица 4 - Сравнительная характеристика иммунологических показателей у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы

Показатели Контрольная группа, Ме 1-ая подгруппа (п=12), Ме 2-ая подгруппа (п=11), Ме

1£А,(г/л) 0,86 (0,75-1,09) 0,90 (0,68-1,98) 1,52(0,93-2,3)

1ёМ,(г/л) 0,91 (0,70-1,44) 1,00(0,88-1,03) 1,46 (0,78-2,08)

1& О, (г/л) 10,00 (9,00-12,50) 10,00 (8,50-11,00) 16,00 (11,50-20,90)

ЦИК, у. е. 31,00 (25,00-35,00) 38,00 (34,00-96,00) 41,00* (37,00-46,00)

СЭЗ\ (%) 62,00 (58,00-67,00) 68,00 (65,00-71,00) 77,00* (66,00-80,00)

С04+, (%) 38,00 (33,00-39,00) 38,00 (37,00-40,00) 48,00 (44,00-53,00)

С08+, (%) 37,00 (31,00-41,00) 28,50** (25,00-32,00) 26,00** (25,00-28,00)

С019+, (%) 15,00 (12,00-17,00) 12,00 (11,00-15,00) 12,00 (10,00-13,00)

СБ16+56+, (%) 22,00 (18,00-28,00) 9,50** (6,00-13,00) 12,00* (10,00-12,00)

(%) 9,00 (7,00-12,00) 9,00 (7,00-11,00) 9,00 (8,00-10,00)

С025+, (%) 17,00 (15,00-20,00) 13,50 (8,00-18,00) 11,00 (9,00-14,00)

С095+, (%) 1,00 (0,85-1,20) 1,38 (1,20-1,58) 2,00 (1,71-2,04)

СБ4+/СБ8+ 1,00 (0,85-1,20) 1,38* (1,20-1,58) 2,00** (1,71-2,04)

* - различие с контролем статистически значимо (р<0,05), ** - различие с контролем статистически значимо (р<0,01)

На рисунке 2 представлена гистограмма больного Л. с диагнозом: Нейромышечная дисплазия мочевой системы. Двухсторонний нерефлекси-рующий мегауретер. Хронический пиелонефрит. Ренальная гипертензия. ХПН, терминальная стадия.

■ ораг

N 0*9

| | *Л1 СИ

-О-

48. '' 1 '.Г

Сплпг«!» (Р1_2-А-Р«_2-Аг«в)

0*>кмЯ: в».4< Ч

СЬр О) : 91.»5 Чь Ов.4Э

о«р аг- о оо % м 1зг.вв СНр 3: вез Ог/О •: 2(Ю 4.23

Ал*ир>ок1 1: »0.5Э %

Ап 1 СИ: >00 00 % »( 116.42 Ал * О?: % «I Ап I 3: О ОО % 02/01: 3.91 О!; 1.75

Тот мчиркка о.оо *ч

Гсм«| в-рмм: Т.01 % Т«ММ В.А.О.: 2.44 «Ч»

ОвЬг»в: в 85 Аоог^ач««: О.ОО *<• МоО»1«<( «удш»: 13282 АН сус1* «у«л<»'. (210в Сус>* *у»г<1а ртг 1 во

НС5: 2 в82

Рисунок 2 - ДНК- гистограмма клеток периферической крови больного Л.

Таким образом, у детей с врожденными пороками развития в терминальной стадии хронической почечной недостаточности, выявлялась ане-уплоидия клеток периферической крови. После билатеральной нефрэкто-мии, в отдельных случаях, отмечалась трансформация анеуплоидного типа гистограмм в диплоидный. Возможно, одной из причин выявленного тран-зиторного изменения плоидности клеток, являлась деструкция почечной ткани, так как проведенными ранее морфологическими исследованиями было установлено наличие деструктивно- дистрофических нарушений в интер-стиции почек в терминальной стадии ХПН при врождённых пороках мочеполовой системы [Казанская И.В., 1987].

Важную роль в патогенезе хронических гломерулонефритов играют аутоиммунные и иммунокомплексные процессы. В связи с этим, одной из актуальных проблем детской нефрологии является оценка эффективности иммуносупрессии как необходимого элемента базисной терапии.

ДНК- гистограммы периферической крови у детей с хроническим гломерулонефритом в 100% случаях характеризовались диплоидным набором хромосом (таблица 5).

Таблица 5 - Распределение клеток периферической крови по плоидности и фазам клеточного цикла у детей с хроническим гломерулонефритом___

Плоидность и фазы клеточного цикла Контрольная группа (п= 30), Ме Дети с ХГН (п~ 20), Ме

Диплоидные, (%) 100 100

01, (%) 99,89 (99,83-99,90) 99,77 (99,32-99,83) **

С2, (%) 0,02 (0,00-0,04) 0,09 (0,04-0,16) **

8, (%) 0,10(0,09-0,11) 0,15 (0,09-0,37) *

СУ 2,57 (2,29-2,83) 3,06 (2,38-3,84) **

* - различие с контролем статистически значимо (р<0,05), ** - различие с контролем статистически значимо (р<0,01)

Различия отмечались во всех фазах клеточного цикла, но наиболее значимыми они были в фазах пролиферации (Б+С2/М), несмотря на то, что дети получали базисную иммуносупрессивную терапию. Коэффициент вариации пика 01/0 не превышал 3,5%.

Показатели иммунного статуса характеризовались увеличением количества общих Т-лимфоцитов (СОЗ+ клеток), высоким уровнем маркёра ранней астивации (СБ25+), низким содержанием иммуноглобулинов класса в, ускорением СОЭ (таблица 6).

Таблица 6 - Характеристика иммунологических показателей у детей с хроническими гломерулонефритами

Показатели Контрольная группа , (п=30), Ме Дети с ХГН (п=20), Ме

1а А, (г/л) 0,86 (0,75-1,09) 1,13(0,86-1,55)

^ М, (г/л) 0,91 (0,70-1,44) 1,34 (0,72-3,26)

^ С, (г/л) 10,00 (9,00-12,50) 7,00* (4,00-9,60)

ЦИК, у. е. 31,00(25,00-35,00) 37,50(26,00-41,00)

СВЗ\ (%) 62,00 (58,00-67,00) 70,00* (63,00-78,00)

С04+, (%) 38,00(33,00-39,00) 36,00 (31,00-41,00)

С08+, (%) 37,00(31,00-41,00) 40,00 (35,00-46,00)

СБ 19+, (%) 15,00 (12,00-17,00) 18,00 (7,00-22,00)

С016+56+, (%) 22,00 (18,00-28,00) 16,00** (7,00-18,00)

НЬА-БЯ+, (%) 9,00 (7,00-12,00) 8,00(6,00-19,00)

СБ25\ (%) 17,00(15,00-20,00) 25,00* (18,00-36,00)

СБ95+, (%) 32,50 (13,00-38,00) 27,00 (17,50-41,50)

С04+/СБ8+ 1,00(0,85-1,20) 0,87(0,77-1,08)

* - различие с контролем статистически значимо (р<0,01),

** - различие с контролем статистически значимо (р<0,001)

Перечисленные особенности иммунологической реактивности и ДНК-цитометрии клеток периферической крови отражают реакцию организма на базисную терапию. Комплексный подход, объединяющий клиническую картину заболевания, иммунологические показатели, кинетику клеточного цикла, позволяет всесторонне оценить активность процесса и эффективность иммуносупрессивной терапии.

В структуре летальности от новообразований у детей одно из ведущих мест занимают лейкемии и опухоли головного мозга. Для характеристики иммунологической реактивности и функционального состояния кле-

ток периферической крови в условиях опухолевой трансформации нами проведено комплексное клинико-иммунологическое обследование детей с острыми лейкозами, доброкачественными и злокачественными новообразованиями головного мозга. Группы были подобраны с учётом прямого и опосредованного воздействия опухолевого процесса на клетки периферической крови.

По данным ДНК-цитометрии у детей со злокачественными и доброкачественными опухолями головного мозга клетки периферической крови имели диплоидный набор хромосом. Во всех группах наблюдений количество клеток в фазе клеточного цикла было достоверно ниже, чем в контроле. Доля клеток в фазе синтеза ДНК, характеризующей пролиферативную активность, превышала данные контрольной группы, и составило 0,16% и 0,20% (таблица 7). Коэффициент вариации пика О/О был таким же, как в контрольной группе, и не превышал 2,6%.

Таблица 7 - Распределение клеток периферической крови у детей с опухолями головного мозга и контрольной группы

Плоидность и Контрольная Группа со злока- Группа с добро-

фазы клеточ- группа, чественными качественными

ного цикла (п= 30) Ме опухолями, (п=12) Ме опухолями, (п=10) Ме

Диплоид., (%) 100 100 100

01,(%) 99,89 99,51* 99,75*

(99,83-99,90) (99,38-99,85) (99,50-99,87)

02, (%) 0,02 0,05 0,05

(0,00-0,04) (0,00-0,43) (0,03-0,10)

8, (%) 0,10 0,16* 0,20*

(0,09-0,11) (0,13-0,20) (0,12-0,39)

СУ 2,57 2,65 2,63

(2,29-2,83) (2,44-2,67) (2,11-2,73)

* - различие с контролем статистически значимо (р<0,05)

Иммунофенотипирование лимфоцитов методом проточной цито-метрии выявило достоверное повышение содержания В-лимфоцитов (СБ19+) и высокий уровень клеток с маркёром ранней активации (СБ25+) у детей обеих групп. Показатели гуморального звена иммунитета в группе детей с доброкачественными опухолями головного мозга не имели достоверных различий с контролем. У детей со злокачественными новообразованиями отмечалось достоверное, в сравнении с контрольной группой, снижение уровня в (таблица 8).

Таблица 8 - Характеристика иммунологических показателей детей с опухолями головного мозга

Показатели Контрольная группа,(п=30) Группа со злокачественными Группа с доброкачественными

Ме опухолями (п=12), Ме опухолями (п=10), Ме

А, (г/л) 0,86 (0,75-1,09) 0,83 (0,57-0,97) 1,02 (0,94-1,04)

1§М,(г/л) 0,91 (0,70-1,44) 1,45 (0,96-1,63) 0,97 (0,85-1,35)

18 С, (г/л) -10,00 (9,00-12,50) 8,30* (5,90-8,60) 11,40 (10,60-13,00)

ЦИК, у. е. 31,00 (25,00-35,00) 26,50 (21,50-37,00) 21,00 (20,00-49,00)

СБЗ+, (%) 62,00 62,00 65,00

(58,00-67,00) (53,00-67,00) (51,00-74,00)

СБ4+, (%) 38,00 33,00 38,00

(33,00-39,00) (30,00-40,00) (33,00-41,00)

СБ8+, (%) 37,00 35,00 37,00

(31,00-41,00) (31,00-43,00) (32,00-46,00)

СБ19+, (%) 15,00 26,00** 21,00*

(12,00-17,00) (24,00-30,00) (19,00-24,00)

СЭ16+56+, (%) 22,00 12,00 16,00

(18,00-28,00) (7,00-30,00) (12,00-17,00)

НЬА-ВЯ+,(%) 9,00 7,00 5,00

(7,00-12.00) (6,00-9,00) (5,00-11,00)

СЭ25+, (%) 17,00 28,00* 27,00*

(15,00-20,00) (22,00-36,00) (21,50-29,00)

СБ95+, (%) 32,50 21,00 13,00

(13,00-38,00) (19,00-36,00) (11,00-21,50)

СБ47С08+ 1,00 1,03 0,85

(0,85-1,20) (0,85-1,17) (0,81-1,24)

* - различие с контролем статистически значимо (р<0,05),

** - различие с контролем статистически значимо (р<0,005)

Диагноз острого лейкоза устанавливался на основании клинической картины заболевания, цитоморфологических исследований и иммунофено-типирования бластных клеток костного мозга.

У детей с ОМЛ выявлялся диплоидный тип гистограмм. В зависимости от плоидности клеток периферической крови больные с В-ОЛЛ были разделены на две группы: с диплоидным и анеуплоидным типом гистограмм.

Результаты ДНК-цитометрии у детей с В-ОЛЛ отражены в таблице 9. При диплоидном типе гистограмм были выявлены достоверные различия по количеству клеток в 01 и Б-фазах клеточного цикла. Так, в фазе 01 находилось 99,00% клеток (в контрольной группе - 99,89%). Доля клеток в Б-фазе составила 0,90%, в контроле- 0,10%. При анеуплоидии различия касались лишь количества диплоидных клеток, что составило 80,0%.

Таблица 9 - Распределение клеток периферической крови по плоидно-сти и фазам клеточного цикла у детей с острым В-лимфобластным лейкозом

Плоид- Контрольная Группа с В-ОЛЛ Группа с В-ОЛЛ

ность и фазы группа Диплоидный, анеуплоидный

клеточного (п= 30), Ме (п=10),Ме (п=6), Ме

цикла

Диплоидные, % 100 100 80,00**

(63,60-93,00)

01,(%) 99,89 99,00** 99,90

(99,83-99,90) (95,6 -99,40) (99,80-100,0)

02, (%) 0,02 0,10 0,10

(0,00-0,04) (0,00-0,20) (0,01-0,02)

5, (%) 0,10 0,90** 0,00

(0,09-0,11) (0,50-4,50) (0,00-0,00)

СУ 2,57 3,70* 2,80

(2,29-2,83) (2,60-4,40) (2,70-3,5)

Анеуплоидные, 0 0 20,00

% (7,00-36,40)

01,(%) 0 0 96,75

(95,80-98,50)

02,(%) 0 0 0,00

(0,00-0,00)

8, (%) 0 0 3,80

(0,00-4,90)

СУ 0 0 3,30

(2,60-3,80)

* - различие с контролем статистически значимо (р<0,05),

** - различие с контролем статистически значимо (р<0,001)

В группе с диплоидным типом гистограмм отмечалось снижение уровня во 2-ой группе достоверных различий с контролем по показателям гуморального звена не выявлено (таблица 10).

Показатели клеточного иммунитета в I-группе характеризовались низким уровнем содержания общих Т-лимфоцитов (СБЗ+), цитотоксических Т-лимфоцитов(СОБ ), ЕКК (С016+56+) и В-лимфоцитозом (С019+). При анеуплоидии (2-ая группа), наряду с высоким уровнем В-лимфоцитов, отмечался дефицит естественных киллерных клеток.

Таблица 10 - Характеристика иммунологических показателей детей с острым В-лимфобластным лейкозом

Показатели Контрольная группа, Ме (п=30) Группа с B-OJ1JI Диплоидный, Ме (п=10) Группа с B-OJIJI Анеуплоидный, Ме (п=6)

1ЕА,(г/л) 0,86 (0,75-1,09) 0,70 (0,60-0,70) 0,80 (0,70-0,80)

1ёМ,(г/л) 0,91 (0,70-1,44) 0,60 (0,50-0,60) 0,60 (0,60-1,10)

1§С,(г/л) 10,00 (9,00-12,50) 7,80* (6,00-8,40) 8,80 (7,40-9,20)

ЦИК, у. е. 31,00 (25,00-35,00) 34,00 (28,00-37,00) 35,00 (21,00-38,00)

СОЗ+ (%) 62,00** (58,00-67,00) 25,50** (9,00-54,00) 51,50 (37,00+73,00)

СШ+(%) 38,00 (33,00-39,00) 25,50 (10,00-40,00) 41,00 (27,00-41,00)

СЭ8+ (%) 37,00* (31,00-41,00) 14,00** (10,00-27,00) 22,00 (18,00-35,00)

СБ19+ (%) 15,00 (12,00-17,00) 61,00** (45,00-75,00) 63,00** (26,00-67,00)

<Л)16+56+ (%) 22,00* (18,00-28,00) 6,00* (3,00-7,50) 14,00** (8,00-15,00)

НЬА-Б^ (%) 9,00 (7,00-12,00) 7,00 (3,00-65,00) 7,00 (6,00-10,00)

СБ25+ (%) 17,00 (15,00-20,00) 22,00* (20,00-50,00) 15,50 (12,00-19,50)

СБ95+ (%) 32,50 (13,00-38,00) 16,50 (9,00-25,50) 15,00 (14,00-20,00)

* - различие с контролем статистически значимо (р<0,05), ** - различие с контролем статистически значимо (р<0,001)

Корреляционные взаимосвязи между показателями иммунного статуса и ДНК-цитометрии клеток периферической крови

Для изучения взаимосвязей между различными звеньями системы иммунитета и данными ДНК-цитометрии проведён корреляционный анализ (рисунок 3).

В контрольной ipynne прямые взаимосвязи высокой степени интенсивности установлены между количеством диплоидных клеток, находящихся в Gl-фазе и количеством CD4+, СБ25+-клеток, что, очевидно, отражает нормальное содержание ДНК в клетках-индукторах.

При врождённых пороках развития МПС была выявлена прямая корреляционная зависимость между количеством анеуплоидных клеток и ЕКК (CD16+56+) клетками (rs = 0,94), что мы расценили как высокую степень сопряженности естественных киллерных клеток с феноменом анеуплоидии. Анализ корреляционных связей в популяции Т-лимфоцитов с хелперной активностью (CD4*) позволил сделать вывод о том, что наиболее типичным вариантом для CD4+ клеток является диплоидный набор хромосом, причём большая часть Т-хелперов - индукторов находилась в фазе синтеза ДНК.

Особенности кинетики клеточного цикла в группе детей с хроническим гломерулонефритом отражены в корреляционных взаимосвязях между числом диплоидных клеток в Gl-фазе и количеством сегментоядерных ней-трофилов (rs =0,71), а также числом диплоидных клеток в S-фазе и содержанием лимфоцитов (rs = 0,79).

Исследованиями в области онкологии доказано, что цитотоксиче-ские Т-лимфоциты (CD8+), проникая через гематоэнцефалический барьер, вступают в непосредственный контакт с опухолевыми клетками и течение злокачественного процесса зависит, наряду с прочими факторами, от уровня цитотоксической активности иммунокомпетентных клеток [Perrini G., et al. 1999]. Корреляционная матрица в группе больных с опухолями головного мозга, отражающая обратную связь между цитотоксическими Т-лимфоцитами и способностью клеток к пролиферации, по нашему мнению, характеризует клеточные механизмы, обеспечивающие противоопухолевую защиту.

Анализ корреляционных взаимосвязей у больных с острыми лейкозами выявил различные типы межклеточной кооперации в зависимости от плоидности клеток. При диплоидном типе гистограмм наиболее выраженной (rs = 0,70) была взаимосвязь между количеством клеток в Gl-фазе и цитотоксическими Т-лимфоцитами (CD8+). Высокий уровень сопряжённости между В-лимфоцитами и количеством клеток с анеуплоидией (rs = 0,81), установлен во второй группе, что вполне логично, так как именно эта популяция подвержена неконтролируемой пролиферации при B-OJ1JI.

Таким образом, прикладное значение проведенных комплексных исследований заключается в определении диагностических и прогностических возможностей ДНК - цитометрии клеток периферической крови и установлении взаимосвязей между иммунологическими показателями и функциональными характеристиками клеток у здоровых детей и при различных патологических состояниях.

Изучение процессов, протекающих в иммунокомпетентных клетках, включающих определение плоидности и кинетики клеточного цикла, способствует оптимизации диагностики и лечения детей с различными заболеваниями. Результаты проведённых исследований, особенности ДНК-цитометрии периферической крови, внесут свой вклад в формирование лабораторного перечня для характеристики функционального состояния клеток.

Выводы

1 ДНК-цитометрия клеток периферической крови у практически здоровых детей характеризуется диплоидным типом гистограмм: (99,86 ± 0,02)% клеток находится в 01- фазе, (0,1 ± 0,01)% в стадии синтеза ДНК (8-фазе), в 02/М - фазе - (0,04 ± 0,01)%. К особенностям иммунологической реактивности у здоровых детей относится высокий уровень цитоток-сических Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток (СБ16+56+).

2 Иммунопатологические реакции при врождённых пороках развития мочеполовой системы у детей характеризуются снижением цитотокси-ческих Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток, высоким уровнем циркулирующих иммунных комплексов. При хронических гломерулонефри-тах отмечается снижение количества естественных киллерных клеток, высокое содержание клеток с маркёрами активации (СБ25+) и циркулирующих иммунных комплексов. При доброкачественных и злокачественных опухолях головного мозга выявляется высокое содержание В-лимфоцитов и клеток с маркёрами активации (СБ25+), при остром В-лимфобластном лейкозе -В-лимфоцитоз (СО 19+).

3 ДНК-гистограммы во всех группах наблюдения характеризуются диплоидным типом. Анеуплоидия выявляется у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы в терминальной стадии хронической почечной недостаточности и остром В - лимфобластном лейкозе. При хроническом гломерулонефрите на фоне базисной терапии отмечаются достоверные различия с контрольной группой по показателям кинетики клеточного цикла (фазы пролиферации).

4 При врождённых пороках развития мочеполовой системы в терминальной стадии хронической почечной недостаточности анеуплоидия со-

пряжена с естественными киллерными клетками, а при остром В-лимфобластном лейкозе - с В-лимфоцитами.

Практические рекомендации

1 Результаты иммунофенотипирования и ДНК-цитометрии клеток периферической крови в группе здоровых детей рекомендуются в качестве ориентировочных нормативных показателей при сравнительной оценке иммунного статуса и функционального состояния клеток.

2 Рекомендовано включение ДНК-цитометрии клеток периферической крови в иммунологический мониторинг перед трансплантацией почки для исключения анеуплоидии.

3 Мониторинг показателей пролиферативной активности клеток по данным ДНК-цитометрии периферической крови рекомендован в качестве маркера активности процесса и эффективности иммуносупрессивной терапии при хронических гломерулонефритах.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 ДНК-цитометрия в диагностике лейкозов / З.Р. Хаматдинова, P.M. Хай-руллина, Т.Н. Красавцева, Е.В. Чувилина // Нижегородский медицинский журнал «Здравоохранение Приволжского Федерального Округа». Материалы научно-практической конференции «Педиатрия в Приволжском Федеральном Округе». - 2004. - С. 53.

2 Проточная цитометрия в диагностике острых лейкозов у детей / P.M. Хай-руллина, З.Р. Хаматдинова, А.Ж. Гильманов, Е.В. Чувилина, Н.Ф. Хисамова // Медицинская иммунология. - 2005. - Т. 7, № 2-3. - С. 212.

3 ДНК - цитометрия клеток периферической крови у детей с патологией мочеполовой системы / Н.Ф. Хисамова, З.Р. Хаматдинова, P.M. Хайруллина, Р.З. Ахметшин // Медицинская иммунология. - 2007. - Т. 9, № 2-3. - С. 343.

4 Иммунофенотипическая характеристика бластных клеток при верификации острых лейкозов / З.Р. Хаматдинова, P.M. Хайруллина, Н.Ф. Хисамова, Т.Н. Красавцева // Современные аспекты оказания стационарной медицинской помощи детям: материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Уфа, 2007. - С. 213.

5 ДНК-цитометрия периферической крови в педиатрической практике / Н.Ф. Хисамова, P.M. Хайруллина, З.Р. Хаматдинова, А.Ж. Гильманов // Клиническая лабораторная диагностика. - 2007. - № 9 - С. 57.

6 DNA CONTENT IN PERIFERAL WHITE BLOOD CELL AT CONGENITAL URINARY TRACT MALFORMATIONS IN CHILDREN / N. Khisamova, R. Khairullina, Z. Khamatdinova, A. Gilmanov // Laboratorine MEDICINA. - 2008.

- Vol. 10: Program and Abstracts 9th Baltic Congress of Laboratory Medicine. - P. 27.

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

РФ - Российская Федерация ХГН - хронический гломерулонефрит ХПН - хроническая почечная недостаточность ВПРМПС - врождённые пороки развития мочеполовой системы МПС - мочеполовая система СЙ - кластеры дифференцировки А - иммуноглобулины класса А М - иммуноглобулины класса М в - иммуноглобулины класса в ЦИК - циркулирующие иммунные комплексы ЕКК - естественные киллерные клетки ИКК - иммунокомпетентные клетки СОЭ - скорость оседания эритроцитов В-ОЛЛ - острый В-лимфобластный лейкоз

Хисамова Назиля Фагильевна

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Лицензия на издательскую деятельность ЛРМ 021319 от 05.01.99 г.

Подписано в печать 25.02.2009 г. Формат 60x84/16. Усл. печ. л. 1,04. Уч.-изд. л. 1,08. Тираж 100 экз. Заказ 104.

Редакционно-издательский центр Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. 3. Валиди, 32.

Отпечатано на множительном участке Башкирского государственного университета 450074, РБ, г. Уфа, ул. 3. Валиди, 32.

Оглавление диссертации Хисамова, Назиля Фагильевна :: 2009 :: Уфа

Список сокращений.

Введение.

Глава 1 Обзор литературы.

1.1. ДНК - цитометрия как один из методов изучения клеточного цикла.

1.2. Жизненный цикл клетки.

1.3. Факторы, влияющие на клеточный цикл.

Собственные исследования

Глава 2 Материалы и методы исследований.

2.1 Обследованный контингент.

2.2 Методы исследований.

Глава 3 Результаты комплексного обследования детей контрольной группы.

Глава 4 Результаты комплексного обследования детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы.

Глава 5 Результаты комплексного обследования детей с хроническими гломерулонефритами.

Глава 6 Результаты комплексного обследования детей с доброкачественными и злокачественными опухолями головного мозга и острыми лейкозами.

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Хисамова, Назиля Фагильевна, автореферат

Актуальность проблемы

Комплексный подход к изучению процессов протекающих в иммуноком-петентных клетках и характеристика взаимосвязей между различными звеньями системы иммунитета определяют перспективные направления клинической иммунологии. Физиологическое состояние клеток, способность к осуществлению присущих им функций характеризуется, в частности, уровнем ДНК (пло-идностью) и показателями кинетики клеточного цикла. Для объективной оценки этих параметров широкое распространение получает проточная цитофлуо-риметрия, разделом которой является ДНК-цитометрия [Saha I. et al., 2000]. По прогнозам специалистов [Шмаров Д.А., Козинец Г.И., 2004], в самом ближайшем будущем можно ожидать внедрения проточной ДНК-цитометрии в практику работы клинико-диагностических лабораторий.

Согласно консенсусу по стандартизации методов проточной цитометрии, созданному по инициативе Совета Европейского Общества Целлюлярной Аналитической Патологии, материалом для определения плоидности клеток и кинетики клеточного цикла могут быть клетки крови, костный мозг, хирургические биоптаты, жидкости тела [Ormerod M.G., Tribukait В., 2001]. К настоящему времени большое количество научных работ посвящено изучению особенностей плоидности и клеточного цикла в биоптатах органов и тканей [Rytwinski К., Wnuk A. et al., 1999; 2000; Tsuji Y. et al., 2000; Garcia-Escudero A. et al., 2001; Both C.T. et al., 2001; Wnuk A. et al., 2001; Takes R.P. et al., 2002; Driemel O. et al., 2005].

Наряду с ДНК-цитометрией биоптатов развивается направление, включающее оценку функционального состояния иммунной системы с использованием качественных параметров клеток, участвующих в иммунном ответе. Так, методом проточной ДНК-цитометрии исследовалось функциональное состояние иммунокомпетентных клеток и пролиферативная активность лимфоцитов цельной крови при сочетанной травме. В условиях инкубации с митогенами и специфическими антигенами было установлено угнетение функции лимфоцитов в первые дни и восстановление пролиферативной активности к четвёртой неделе после травмы [Бычкова Н.В. и др., 2004].

В отделении клинической иммунологии РДКБ с 2002 года внедряется в практику изучение иммунного статуса и функционального состояния клеток на проточном цитофлуориметре, включающее ДНК-цитометрию клеток периферической крови. Комплексные исследования проводятся при хронических ин-фекционно-воспалительных процессах, новообразованиях, хронических гломе-рулонефритах на фоне иммуносупрессии, врождённых пороках развития, то есть состояниях, так или иначе оказывающих влияние на уровень ДНК и клеточный цикл. Несмотря на возможности проточной цитометрии (высокую точность, быстроту анализа), множество вопросов возникает при разработке подходов к изучению функциональной активности клеток периферической крови и особенно процессов пролиферации. В связи с этим, весьма актуальным является определение роли и места проточной ДНК-цитометрии в диагностике и прогнозе различных патологических состояний в педиатрической практике.

Цель исследования

Задачи исследования

2 Оценить иммунологическую реактивность у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы, хроническими гломерулонефритами, опухолями головного мозга и острыми лейкозами.

3 Методом ДНК-цитометрии охарактеризовать плоидность и кинетику клеточного цикла клеток периферической крови у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы, хроническими гломерулонефритами, опухолями головного мозга и острыми лейкозами.

Научная новизна

Впервые дана характеристика плоидности и кинетики клеточного цикла клеток периферической крови методом проточной ДНК-цитометрии и установлена взаимозависимость между иммунологическими параметрами, показателями ДНК-гистограмм у практически здоровых детей, при хронических инфекци-онно-воспалительных процессах на фоне врожденных пороков развития мочеполовой системы и хронических гломерулонефритов, иммуносупрессивной терапии, при опухолевой трансформации.

Научно-практическая значимость работы

2) степени активности процесса и эффективности иммуносупрессии при хроническом гломерулонефрите;

3) агрессивности течения заболевания при острых лейкозах.

Установлены особенности иммунологической реактивности, проявляющиеся у здоровых детей активацией, а при хронических инфекционновоспалительных процессах супрессией клеточных эффекторных механизмов иммунной защиты, которые необходимо учитывать при разработке адаптационных норм и назначении иммунокоррекции.

Внедрение результатов исследования в практику

Материалы комплексных исследований, включающих показатели ДНК-цитометрии клеток периферической крови и иммунного статуса, используются в работе отделений клинической иммунологии, нефрологии, урологии, онкоге-матологии, нейрохирургии, отделении гемодиализа и трансплантации почки Республиканской детской клинической больницы, на циклах повышения квалификации врачей клинической лабораторной диагностики Института последипломного образования Башкирского государственного медицинского университета.

Основные положения, выносимые на защиту

1 ДНК-гистограммы клеток периферической крови практически здоровых детей соответствуют диплоидному содержанию ДНК. Основная масса клеток находится в G0/1 фазе клеточного цикла. Иммунный статус характеризуется высоким уровнем цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток.

2 При врождённых пороках развития мочеполовой системы у детей развивается комплекс иммунопатологических реакций в виде депрессии показателей противовирусной защиты (CD8+; CD16+56+), высокого содержания циркулирующих иммунных комплексов. Компенсированная стадия хронической почечной недостаточности характеризуется диплоидным типом гистограмм, в терминальной стадии выявляется анеуплоидия.

3 Иммунологическая реактивность у больных хроническим гломеруло-нефритом характеризуется снижением уровня естественных киллерных клеток, высоким содержанием клеток, несущих маркёры активации (CD25+) и циркулирующих иммунных комплексов. При хроническом гломерулонефрите на фоне базисной терапии отмечаются достоверные различия с контрольной группой по показателям кинетики клеточного цикла (фазы пролиферации).

4 К особенностями иммунологической реактивности при опухолях головного мозга относится высокое содержание в крови В-лимфоцитов и клеток, несущих маркеры ранней активации (CD25+), при остром В-лимфобластном лейкозе - В-лимфоцитоз. Доброкачественные и злокачественные новообразования головного мозга характеризуются диплоидным типом гистограмм, анеуплоидия выявляется при остром В-лимфобластном лейкозе.

Апробация работы

Публикации

Объём и структура диссертации

Диссертация изложена на 123 страницах компьютерного текста и состоит из обзора литературы, пяти глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций. Работа содержит 28 таблиц, 25 рисунков. Список литературы включает 204 источника (106 отечественных и 98 иностранных авторов).

Заключение диссертационного исследования на тему "Иммунологическая реактивность, плоидность и кинетика клеточного цикла клеток периферической крови при различных патологических состояниях у детей"

выводы

1 ДНК-цитометрия клеток периферической крови у практически здоровых детей характеризуется диплоидным типом гистограмм: (99,86 ±0,02)% клеток находится в G0/1- фазе, (0,1 ± 0,01)% в стадии синтеза ДНК (S-фазе), в G2/M - фазе — (0,04 ±0,01)%. К особенностям иммунологической реактивности у здоровых детей относится высокий уровень цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток (CD16+56+).

2 Иммунопатологические реакции при врождённых пороках развития мочеполовой системы у детей характеризуются снижением цитотоксических Т-лимфоцитов и естественных киллерных клеток, высоким уровнем циркулирующих иммунных комплексов. При хронических гломерулонефритах отмечается снижение количества естественных киллерных клеток, высокое содержание клеток с маркёрами активации (CD25+) и циркулирующих иммунных комплексов. При доброкачественных и злокачественных опухолях головного мозга выявляется высокое содержание В-лимфоцитов и клеток с маркёрами активации (CD25+), при остром В-лимфобластном лейкозе - В-лимфоцитоз (CD19+).

3 ДНК-гистограммы во всех группах наблюдения характеризуются диплоидным типом. Анеуплоидия выявлялась у детей с врождёнными пороками развития мочеполовой системы в терминальной стадии хронической почечной недостаточности и остром В - лимфобластном лейкозе. При хроническом гло-мерулонефрите на фоне базисной терапии отмечаются достоверные различия с контрольной группой по показателям кинетики клеточного цикла (фазы пролиферации).

4 При врождённых пороках развития мочеполовой системы в терминальной стадии хронической почечной недостаточности анеуплоидия сопряжена с естественными киллерными клетками, а при остром В-лимфобластном лейкозе - с В-лимфоцитами.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Хисамова, Назиля Фагильевна

1. Алов, И.А. Препрофаза / И.А. Алов // Цитология. Митотическое деление клетки / под ред. И.А. Алова. М., 1975. - Т. 2. - С. 67 -89.

2. Афанасьев, Ю.И. Гистология / Ю.И. Афанасьев, Н.А. Юрина. М.: Медицина, 1999.-80 с.

3. Бродский, В.Я. Клеточная полиплоидия, пролиферация и диффе-ренцировка / В.Я. Бродский, И.В. Урываева. М.: Наука, 1981. - 260 с.

4. Бычков, М.Б. Химиотерапия злокачественных опухолей / М.Б. Бычков // Архив патологии. 1996. - № 4. - С. 15-17.

5. Бычкова, Н.В. Анеуплоидия и пролиферативная активность рака молочной железы (проточно-цитометрическое исследование) / Н.В. Бычкова, К.М. Пожарский // Вопросы онкологии. 1997. - Т. 43, № 2. - С. 171-175.

6. Бычкова, Н.В. Проточно-цитометрическое исследование анеуплои-дии и пролиферативной активности клеток рака эндометрия как показатель агрессивности опухоли / Н.В. Бычкова, И.Е. Мешкова // Вопросы онкологии. -1996. Т. 42, № 2. - С. 57-62.

7. Винделов, Л. Проточно цитометрический анализ ДИК и его применение в клинической и экспериментальной онкологии / Л. Винделов, И. Хри-стенсен // Гематология и трансфузиология. - 1994. - Т. 39, № 6. - С. 8-12.

8. Возможности использования лазерной ДНК цитометрии у больных с эпителиальными опухолями яичников / И.В. Паниченко и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. - № 4. - С. 48-51.

9. Генетический мониторинг врожденных пороков развития в Республике Башкортостан / С.Ш. Мурзабаева, А.К. Марданова, Р.В. Магжанов и др. // Медицинская генетика. 2005. - Т. 4, № 9. - С. 425-431.

10. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц. М., 1999. - 495 с.

11. Гунин, А.Г. Клеточный цикл, апоптоз / А.Г. Гунин // Электронные учебные пособия. 2000-2001. - http: // www.histol.Chuvashia.com

12. Державин, В.М. Клинико-биохимические признаки системного и локального мембранопатологического процесса при различных формах мочекаменной болезни у детей / В.М. Державин // Полиорганная мембранная патология у детей. М., 1991.-С. 169-176.

13. Диагностика и лечение хронического гепатита С у детей больных злокачественными новообразованиями / А.Ф. Бухны, О.Г. Желудкова, Н.А. Фи-ногенова и др. // Педиатрия. 1996. - № 4. - С. 42-45.

14. Дудко, Е.Т. Проточная цитометрия ДНК лимфоцитов при хроническом лимфолейкозе / Е.Т. Дудко // Врачебное дело. 1993. — № 1. — С. 41-44.

15. Егоров, A.M. Молекулярная организация клетки и некоторые особенности патогенеза инфекций / A.M. Егоров, Ю.О. Сазыкин // Антибиотики и химиотерапия. 2000. - № 4. - С. 3-5.

16. Епифанова, О.И. Изучение регуляторных механизмов митотическо-го цикла с помощью ингибиторов транскрипции и трансляции / О.И. Епифанова // Клеточный цикл / под ред. О. И. Епифановой. М., 1973. - С. 72-103.

17. Значимость показателя ДНК- плоидности опухолевых клеток в прогнозировании течения рака лёгкого / Т.Г. Николаева, Б.Е. Полоцкий, Б.Н. Басов и др. // Вестник ОНЦ РАМН. 1995. - № 3. - С. 40-45.

18. Игнатова, М.С. Детская нефрология: рук-во для врачей / М.С. Игнатова, Ю.Е. Вельтищев. Д., 1989.-455 с.

19. Игнатова, М.С. Проблемы нефрологии детского возраста на рубеже столетий / М.С. Игнатова // Российский вестник перинатологии и педиатрии. — 1998.-№3.-С. 37-43.

20. Ильинских, Н.Н. Инфекционный мутагенез / Н.Н. Ильинских, Е.Ф. Бочаров, И.Н. Ильинских. — Новосибирск, 1984. — 168 с.

21. Ильинских, Н.Н. Цитогенетический гомеостаз и иммунитет / Н.Н. Ильинских, И.Н. Ильинских, Е.Ф. Бочаров. Новосибирск, 1986. - 256 с.

22. Иммунодефицитные состояния / Под ред. B.C. Смирнова и И.С. Фрейдлин. СПб.: Фолиант, 2000. - 368 с.

23. Ингибиторные факторы в сыворотке больных со СПИД-ассоциированным комплексом / A.M. Борисова, P.M. Хаитов, О.Ф. Еремина и др. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1991. - № 2. - С. 26-27.

24. Исаков, B.JI. Современные методы автоматизации цитологических исследований / B.JI. Исаков, В.Г. Пинчук, JI.M. Исакова. Киев: Наукова Думка, 1988.-345 с.

25. Казанская, И.В. Патогенетические механизмы пиелонефрита при пороках развития почек и мочевыводящих путей у детей и принципы его дифференцированного консервативного и хирургического лечения: автореф. дис. .д-ра мед.наук. М., 1987. - 44с.

26. Кальметьева, JI.P. Иммунофенотипические особенности новорождённых с пороками развития органов брюшной полости: автореф. дис . канд. мед. наук. Уфа, 2003. - 25с.

27. Картамышева, Н.Н. Тубулоинтерстициальные изменения при хронических заболеваниях почек у детей / Н.Н. Картамышева, О.В. Чумакова, А.Г. Кучеренко. М.: Медицина, 2005. - 93 с.

28. Кинетические аспекты гемопоэза / под ред. Г.И. Козинца, Е.Д. Гольдберг. Томск, 1982. - 312 с.

29. Клиническая иммунология: руководство для врачей / под ред. Е.И. Соколова. М.: Медицина, 1998. - 272 с.

30. Клиническая лабораторная аналитика: в 4 т. / под ред. В.В. Меньшикова. М., 2000. - Т. 2. - 195 с.

31. Коровина, Н.А. Гломерулонефрит у детей: монография. / Н.А. Коровина, Л.П. Гаврюшова, М. Шашинка. М.: Медицина, 1990. - 255 с.

32. Кост, Е.А. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования / Е.А. Кост. М.: Медицина, 1975. - 135 с.

33. Костинов, М.П. Иммунокоррекция в педиатрии / М.П. Костинов. -М., 1997. 108 с.

34. Котельников, В.М. Параметры пролиферации гемопоэтических клеток в клинике гемобластозов: автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1991. -44 с.

35. Кравцова, Г.И. Врожденные дисплазии почек / Г.И. Кравцова, Н.Е. Савченко, С.О. Плисан. Минск: Беларусь, 1982. - 223 с.

36. Крокер, Д.Ж. Показатели клеточной пролиферации при злокачественных лимфомах с особым рассмотрением ядрышкообразующих районов / Д.Ж. Крокер // Гематология и трансфузиология. 1994. - Т. 39, № 6. - С. 12-19.

37. Кучма, Ю.М. Проточная цитометрия клеток костного мозга при острых лейкозах: автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 2002. - 20 с.

38. Лабораторная гематология / С.А. Луговская, В.Т. Морозова, М.Е. Почтарь, В .В. Долгов.- М.; Тверь, 2006. 224 с.

39. Лабораторные показатели у детей с клиническими признаками иммунологической недостаточности / А.Ю. Пищальников, В.А. Гашек, Е.Р. Зве-няцковская, И.А. Амышева // Актуальные вопросы теоретической и актуальной медицины. Челябинск, 1993. - С. 111-112.

40. Лебедев, К.А. Иммунная недостаточность (выявление и лечение) / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина. М.: Медицинская книга, 2003. - 287 с.

41. Лебедев, К.А. Иммунограмма в клинической практике / К.А. Лебедев, И.Л. Понякина. М., 1990. - 223 с.

42. Лебедев, К.А. Понятие нормы в оценке иммунного статуса человека / К.А. Лебедев, Н.В. Козаченко, И.Д. Понякина // Физиология человека. 1989. -Т. 15,№6. -С. 34-45.

43. Метод проточной ДНК-цитометрии в оценке функциональной активности иммунокомпетентных клеток / Н.В. Бычкова, И.Д. Дмитриева, Н.И.

44. Давыдова, Н.М. Калинина // Медицинская иммунология. 2004. - Т. 6, № 3-5. -С. 397.

45. Методические указания к занятиям по иммунологии и серологии: учебно-методическое пособие для специалистов по клинической лабораторной диагностике / сост. Э.А. Имельбаева, P.M. Хайруллина, Ю.А. Медведев и др.. -Уфа, 2004.-87 с

46. Методы компьютерной цитологии в гематологических исследованиях / В.М. Погорелов, B.C. Медовый, В.А. Балабуткин и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 1997. - № 11. - С. 40-44.

47. Мешкова, Р.Я. Скрининг больных с нарушениями иммунной системы и оказание специализированной лечебно-диагностической помощи: авто-реф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1996. - 37 с.

48. Мониторинг врождённых пороков развития / Н.П. Бочков, Н.А. Жу-ченко, Е.А. Кириллова и др. // Росссийский вестник перинатологии и педиатрии. 1996. - Т. 41, № 2. - С. 20-25.

49. Наумов, Ю.Н. Регуляция экспрессии генов гистосовместимости II класса / Ю.Н. Наумов, В.И. Коненков, Л.П. Алексеев // Иммунология. 1993. -№2.-С. 6-11.

50. Наумова, В.И. Почечная недостаточность у детей / В.И. Наумова, А.В. Папаян. Л., 1991. - 286 с.

51. Наумова, В.И. Разработка проблем нефрологии в институте педиатрии РАМН / В.И. Наумова // Педиатрия. 1997. - № 2. - С. 43-45.

52. Николаева, Т.Г. Проточная ДНК- цитометрия в прогнозировании течения некоторых злокачественных новообразований / Т.Г. Николаева, Я.В. Добрынин // Вопросы онкологии. 2001. - Т. 47, № 6. - С. 684-689.

53. Николаева, Т.Г. Цитометрическое определение содержания ДНК в клетках опухолей головы и шеи и его роль в прогнозе заболевания / Т.Г. Николаева, С.А. Худират, А.А. Ахундов // Вестник ОНЦ им. Н.Н. Блохина. 2000. -№ 1.-С. 11-20.

54. Новик, А.А. Принципы проточной цитометрии в иммунологии и онкогематологии / А.А. Новик, В.Ю. Никитин, В.Н. Цыган // Вестник Российской Военно-медицинской Академии. 2001. - Т. 2, № 6. — С. 34-39.

55. Новиков, Д.К. Оценка иммунного статуса / Д.К. Новиков, В.И. Новикова. М.: Витебск: Витязь, 1996. - 282 с.

56. Новикова, В.М. Координация систем регуляции в антигенстимули-рованных Т-клетках / В.М. Новикова // Иммунология. 1995. - № 1. - С. 7-10.

57. Об этиологии и патогенезе инфекционно-воспалительного процесса в бронхах при хроническом бронхите / Н.В. Путов, JT.A. Вишнякова, Н.В. Яковлева, Н.И. Александрова // Терапевтический архив. 1991. - Т. 63, № 3. - С. 4448.

58. Опухоли головного мозга у детей / В.Е. Поляков, Т.Н. Смирнова, М.В. Цвылёва и др. // Российский медицинский журнал. 2001. - № 2. - С. 4849.

59. Основы строения, деятельности иммунной системы и оценка её состояния / Ю.А. Медведев, Х.Х. Ганцева, Д.В. Пахомов, В.В. Сперанский. Уфа: БГМУ, 1998.-39 с.

60. Основы цитогенетики человека / А.А. Прокофьева-Бельговская и др.. М.: Медицина, 1969. - 544 с.

61. Папаян, А.В. Клиническая нефрология детского возраста / А.В. Папаян, Н.Д. Савенкова. СПб., 1996. - 718 с.

62. Пинегин, Б.В. Современные проблемы иммунодиагностики и иммунотерапии / Б.В. Пинегин // Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии: материалы 1-ой Национальной конференции РААКИ. М., 1997. - С. 145-151.

63. Плоидность ДНК опухолевых клеток и прогноз при раке гортани / Т.Г. Николаева, Я.В. Добрынин, B.C. Алфёров и др. // Вестник ОНЦ РАМН. -1995. -№1.- С. 17-22.

64. Полетаев, А.И. Проточная цитометрия и сортировка в цитологии, молекулярной биологии, биотехнологии и медицине / А.И. Полетаев // ИНТ. Сер. Общие проблемы физико-химической биологии. — М., 1989. Т. 12. - С. 8890.

65. Пономаренко, В.М. Нарушения межклеточной регуляции при апла-стической анемии / В.М. Пономаренко, В.И. Ругаль // Гематология и трансфу-зиология. 1994. - № 1. - С. 26-29.

66. Потапнев, М.П. Методы проточной цитометрии в медицинских и биологических исследованиях / М.П. Потапнев // Сборник научных трудов. -Минск: ГУ РНМБ, 2003. С. 1-10.

67. Применение проточной цитометрии для оценки функциональной активности иммунной системы человека: пособие для врачей-лаборантов / Б.В. Пинегин, А.А. Ярилин, А.В. Симонова и др.. М., 2001. - 53 с.

68. Проточная ДНК цитометрия в прогнозировании течения рака молочной железы / Т.Г. Николаева, Я.В. Добрынин, Б.Н. Басов и др. // Вестник ОНЦ РАМН. - 1994. - № 1. - С. 30-37.

69. Проточная цитометрия в гематологии. Методы и техника проточно-цитометрического анализа / Д.А. Шмаров, С.А. Луговская, Е.С. Князева, Г.И. Козинец // Клиническая лабораторная диагностика. 1997. - № 8. - С. 3-10.

70. Проточно-цитофлуоримертический анализ пролиферативной активности лимфоцитов в культуре с фитогемагглютинином / Б.А. Никулин, Д.А. Шмаров, В.Н. Першин, Б.В. Крехнов // Лабораторное дело. 1989. - № 4. - С. 34-38.

71. Ройт, А. Иммунология: пер. с англ. / А. Ройт, Дж.Бростофф, Д. Мейл. М.: Мир, 2000. - 592 с.

72. Роль проточных счётчиков в лабораторных исследованиях / Г.И. Козинец, Т.Г. Сарычева, Т.Н. Левина и др. // Новое в трансфузиологии: инф. бюллетень. М., 1996. - Вып. 15. - С. 43-46.

73. Руснак, Ф.И. Влияние кальцитриола на иммунокомпетентные клетки у детей с хроническим гломерулонефритом в функционально-компенсированной стадии / Ф.И. Руснак // Педиатрия. 1997. - № 3. - С. 37-39.

74. Сергеева, К.М. Взаимосвязи и коррекция реакций вегетативной нервной системы с показателями иммунитета и свертывающей системы крови при гломерулонефрите у детей. Сообщение 2 / К.М. Сергеева, Н.Ф. Шапошникова // Нефрология. 1998. - Т. 2, № 4. - С. 55-67.

75. Сергеева, К.М. Клинико-лабораторные критерии оценки характера течения гломерулонефрита у детей / К.М. Сергеева // Нефрология. 1999. - Т. 3, № 4. - С. 66-76.

76. Сергеева, Т.В. Факторы прогрессирования гломерулонефрита у детей / Т.В. Сергеева, А.Н. Цыгин, О.В. Чумакова // Российский педиатрический журнал. 2000. - № 5. - С. 20-22.

77. Симонова, А.В. Фенотип лимфоцитов крови при воспалительных заболеваниях человека / А.В. Симонова. М.: ИНТО, 2001. - 228 с.

78. Случай диффузного нефробластематоза в клинической практике / С.О. Фалалееваи др. // Педиатрия. 2006. - № 1. - С. 106-107.

79. Стефании, Д.В. Клиническая иммунология и иммунопатология детского возраста: рук-во для врачей / Д.В. Стефании, Ю.В. Вельтищев. М.: Медицина, 1996. - 239 с.

80. Сынзыныс, Б.И. Репликация ДНК в облучённых клетках / Б.И. Сын-зыныс, А.С. Саенко, И.И. Пелевина // ИНТ. Сер. Радиационная биология. М., 1990.-Т. 9.-С. 114-213.

81. Титов, В.Н. Автоматизированный счёт форменных элементов крови: методич. рук-во / В.Н. Титов, И.Н. Наумова. М., 1995. - 61 с.

82. Трухина, О.Н. Характеристика нефропатий у детей в экологически неблагоприятном регионе по тяжелым металлам и обоснование использования мембранотропных препаратов для лечения этих больных: автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1994. - 23 с.

83. Урология / Н.А. Лопаткин и др.; под ред. Н. А. Лопаткина. М.: ГЭОТАР-МЕДИА, 2007. - 519 с.

84. Фёдоров, Н.А. Структура ДНК и трансформация клеток / Н.А. Фёдоров. М.: Медицина, 1983. - 195 с.

85. Федосеева, В.Н. Руководство по иммунологическим и аллергологи-ческим методам в гигиенических исследованиях / В.Н. Федосеева, Г.В. Поря-дин, Л.В. Ковальчук. М.: Промедек, 1993. - 317 с.

86. Фонталин, Л.Н. Иммунологическая толерантность и неспецифическая иммунодепрессия при инфекционных процессах / Л.Н. Фонталин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1989. - № 2. - С. 108114.

87. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Си-дорович. М.: Медицина, 2000. - 432 с.

88. Хаитов, P.M. Оценка иммунного статуса человека в норме и при патологии / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2001. - № 4. - С. 4-6.

89. Хайруллина, P.M. Эколого-гигиенические основы иммунореабили-тации в регионе с развитой нефтехимической промышленностью: автореф. дис. д-ра мед. наук. СПб., 1999. -47с.

90. Хаматдинова, З.Р. Иммунофенотипические варианты острых лейкозов в Республике Башкортостан: автореф. дис. . канд. биол. наук. Уфа, 2005.- 21с.

91. Характеристика и механизмы иммунных нарушений у больных со злокачественными опухолями головного мозга / Н.А. Хонина, М.И. Центнер, О.Ю. Леплина и др. // Вопросы онкологии. 2002. - Т. 48, № 2. - С. 196-201.

92. Харисова, И.М. Статистические методы в медицине и здравоохранении / И.М. Харисова, Н.Х. Шарафутдинова. Уфа: БГМУ, 1999. - 145 с.

93. Цыгин, А.Н. Лечение хронического гломерулонефрита у детей / А.Н. Цыгин, Т.В. Сергеева // Российский педиатрический журнал. 1998. - № 2. - С. 55-57.

94. Чернов, В.М. Острый лимфобластный лейкоз у детей: конспект врача. М., 2004. (Приложение к «Медицинской газете» от 08.09.04.) -www.kid.ru/pregnancy/index69.

95. Чиркин, В.В. Иммунореабилитация при хронических заболеваниях пищеварительной системы / В.В. Чиркин, С.Н. Кузьмин, Б.Б. Першин // Иммунология. 1996. - № 3. - С. 62-63.

96. Ширинский, B.C. Проблема вторичных иммунодефицитов у больных хроническим бронхитом / B.C. Ширинский, Ю.А. Сенникова // Иммунология.-1994.-№ 1.-С. 51-54.

97. Шмаров, Д. А. Лабораторно-клиническое значение проточно-цитометрического анализа крови / Д.А. Шмаров, Г.И. Козинец. М.: МИА, 2004.-128 с.

98. Шмаров, Д.А. Проточно-цитометрический анализ пролиферации гемопоэтических клеток. Методологические вопросы / Д.А. Шмаров, Д.И. Ко-зинец // Клиническая лабораторная диагностика. 1999. - № 8. — С. 16-18.

99. Шут, М.В. Исследование клеточного цикла методом проточной цитометрии / www.media./onkology/02 03/118.shtml::Wednesday,05-Feb-2003.

100. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин. М.: Медицина, 1999.-607 с.

101. Ястребов, А.П. ДНК-цитометрия крови людей, подвергавшихся воздействию малых доз радиации / А.П. Ястребов, С.В. Сазонов // Доктор Лэн-динг. 1995. - № 6 (9). - С. 20-23.

102. Analysis of DNA histograms and histopathologic assessment of necrosis after preoperative chemotherapy of osteosarcoma in children and youth / K. Rytwin-ski, A. Wnuk, T. Klepacka, K. Bilska // Med. Wieku Rozwoj. 2000. - Vol. 4, N 2. -P. 36-43.

103. Analysis of DNA ploidy using fresh frozen tissues of head and neck squamous cell carcinomas / Y. Arai, M. Tsukuda, K. Ito et al. // Auris Naus Larynx. 1997. - Vol. 24, N 2. - P. 193-198.

104. Andreeff, M. Flow Cytometry of Leukemia / M. Andreeff // Flow Cytometry and Sorting. Wiley-Liss, Inc., 1990. - P. 697-724.

105. Aneuploidy and histopathological classification, according to the Musculoskeletal Tumour Society and WHO, of osteosarcoma in children and adolescents / K. Rytwinski, T. Klepacka, A. Wnuk, E. Michalak // Med. Wieku Rozwoj. 2000. -Vol. 4, N4.-P. 373-82.

106. Astrocytoma infiltrating lymphocytes include maijor T cell clonal expansions confined to CD8 subset / G. Perrini, V. Schnuridger, A.-L. Quiguerel, P. Saas // Int. Immunol. 1999. - Vol. 7. - P. 13-50.

107. Baserga, R. Resting cell and the G0/1 phase of the cell cyclc / R. Baserga // J. Cell Physiol. 1978. - Vol. 95. -P. 377-386.

108. Bauer, K.D. Concensus review of the clinical utility of DNA cytometry in colorectal cancer / K.D. Bauer, С. B. Bagwell, W. Giaretti, M. Melamed, R.J. Zarbo, Т.Е. Witzig, P.S. Rabinovitch // Cytometry 14. 1993. - P. 486-491.

109. Brow, M. Flow cytometry: principles and clinical applications in hematology / M. Brow, C. Wittwer // Clin. Chem. 2000. - Vol. 46. - P. 1221-1229.

110. Cell microfluorometry: a method for radip fluorescence measurement / M.A. Van Dilla, T.T. Trujillo, P.F. Mullaney, J.R. Coulter // Science. 1969. - N 163.-P. 1213.

111. Cellular DNA Content and survival in advanced ovarian carcinoma / J. Pfisterer, F. Rjwjs, W. Sauerbrei et al. // Cancer (Philad.). 1994. - Vol. 74. - P. 2509-2515.

112. Chapman, M.K. Fiveyear prospective study of DNA tumor ploidy and colorectal cancer survival / M.K. Chapman, J.D. Hardcastle, N.C. Armitage // Cancer (Philand.). 1995. - Vol. 76. - P. 383-387.

113. Chen, W.J. Intratumoral regional differences of DNA ploidy of gastrointestinal stromal tumors: a flow cytometric study / W.J. Chen, H.L. Eng, F.M. Fang // Chang Gung Med. J. 2000. - Vol. 23, N 9. - P. 520- 528.

114. Chromosome aberrations in psoriatic patients treated with arsenic / I. Nordenson, S. Salmonsson, E. Brun et al. // Hum. Genet. — 1979. Vol. 48, N 1. — P. 1-6.

115. Clinical Flow Cytometry. Principles and Application / eds: K.D. Bauer, R.E. Dugue, T.V. Shankeu. Baltimor, 1993.-635 p.

116. Clinicopathologic study and DNA analysis of 37 cardiac myxomas: a 28-year experience / E. Acebo, J.F. Val-Bernal, J.J. Gomez-Roman, J.M. Revuelta // Chest. 2003. - Vol. 123, N 5. - P. 1379-1385.

117. Clinicopathologic variables, operative characteristics, and DNA ploidy in predicting outcome in ovarian epithelial carcinoma / L.W. Rice, S.D. Mark, R.S. Berkowitz et al. // Obstet. Gynecol. 1995. - Vol. 86. - P. 379- 385.

118. Convention on nomenclature for DNA cytometry / W. Hiddemann, J. Schumann, M. Andreef et.al. // Cytometry. 1984. -N 5. - P. 445-446.

119. Coovadia, H.M. Immunological events in acute measles influencing outcome / H.M. Coovadia, A. Wesley, P. Brain // Arch. Dis. Child. 1978. - Vol. 53, N 11.-P. 861-867.

120. DNA cytofluorometric analysis of benign and malignant nerve sheath tumors / Y. Tsuji, K. Kusuzaki, A. Kuzuhara et al. // Anticancer Res. 2000. - Vol. 20, N 6C. - P. 4691-4696.

121. DNA ploidy in papillary carcinoma of the thyroid gland in children and adolescents / Y. Stern, K. Segal, O. Medalia, R. Feinmesser // Int. J. Pediatr. Otorhi-nolaryngol. 1998. - Vol. 46, N 1-2. - P. 67-70.

122. DNA ploidy status as a prognostic marker and predictor of lymph node metastasis in laryngeal carcinoma / R.P. Takes, R.J. Baatenburg de Jong, R. van Blommestein et al. // Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. 2002. - Vol. Ill, N 11. - P. 1015-1020.

123. Dressier, L.G. DNA flow cytometry in solid tumors: practical aspects and clinical applications / L.G. Dressier, S.A. Bartow // Semin. Diag. Pathol. 1989. -Vol. 32.-P. 4-7.

124. Duque, R.E. Concensus review of the clinical utility of DNA cytometry in neoplastic hematopathology / R.E. Duque, M. Andreef, R.C. Braylan, L.W. Diamond, S.C. Peiper // Cytometry 14. 1993. - P. 492-496.

125. Dworzak, M.N. Flow cytometric detection of minimal residual disease in acute lymphoblastic leukemia / M.N. Dworzak, E.R. Panzer-Griimayer // Leuk. Lymphoma. 2003. - Vol. 44, N 9. - P. 1445-1455.

126. Effect of cellular DNA content on the prognosis of epithelial ovarian cancers / S. Ozalp, O.T. Yalcin, Z. Gulbas et al. // Gynecol. Obstet. Invest. 2001. -Vol. 52.-P. 93-97.

127. Ensley, J.F. The clinical application of DNA content and kinetic parameters in the treatment of patients with squamous cell carcinomas of the head and neck / J.F. Ensley //CancerMetastasis Rev. 1996. - Vol. 15, N 1. -P. 133-141.

128. Evaluation of early marrow response in childhood aneuploid acute lymphoblastic leukemia: flow cytometric DNA analysis versus standard morphology /

129. S. Finn, D.S. Hawkins, J.C. Rutledge, K. Patterson // Pediatr. Dev. Pathol. 2004. -Vol. 7, N1.-P. 39-47.

130. Fabry, Z. Nervous tissue as an immune compartment: the dialectic of the immune response in the CNS / Z. Fabry, C.S. Raine, M.N. Hart // Immunol. Today. -1994.-Vol. 15.-P. 218-224.

131. Flow cytometric analysis of DNA stemline heterogeneity in primary and metastatic breast cancer / H. Beerman, V.T. Smit, P.M. Kluin et al. // Cytometry. — 1991.-Vol. 12, N2.-P. 147-154.

132. Flow cytometric detection of minimal residual disease with atypical antigen combination in patients with de novo acute myeloid leukemia / E. Plata, H. Choremi-Papadopoulot, V. Viglis, X. Yataganas // Ann. Hematol. 2000. - Vol. 79. - P. 543-546.

133. Flow cytometric determination of atypical antigen expression in acute leukemia for the study of minimal residual disease / J. Drach, D. Drach, H. Glassl et al.//Cytometry.-1992.-Vol. 13.-P. 893-901.

134. Flow cytometric DNA hypertetraploidy is associated with unfavorable prognostic features in breast cancer / A.E. Pinto, S. Andre, M. Noguira et al. // J. Clin. Pathol. 1997. - Vol. 50. - P. 591-595.

135. Flow cytometric DNA index in the prognosis of colorectal cancer / W. Giaretti, M. Danova, E. Geido et al. // Cancer (Philand.). 1991. - Vol. 67. - P. 1921-1927.

136. Flow cytometric DNA ploidy in salivary gland tumours / O. Driemel, H. Maier, K. Kraft et al. // Oncol. Rep. 2005. - Vol. 13, N 1. - P. 161-165.

137. Flow cytometric S-phase fraction as a complementary biological parameter for the cytological grading of non-Hodgkin's lymphoma / A.E. Pinto, J. Ca-befadas, S.D. Nobrega, E. Mendonfa // Diagn. Cytopathol. 2003. - Vol. 29, N 4. -P. 194-199.

138. Flow cytometry estimate of s phase cell cycle and prognosis of osteosarcoma in children and adolescents / A. Wnuk, K. Rytwinski, M. Rychlowska et al. // Med. Wieku Rozwoj. 2001. - Vol. 5, N 3. - P. 283-290.

139. Flow Cytometry in clinical cancer research / B. Barlogie, M.N. Raber, J. Schumann et al. // Cancer Res. 1983. - Vol. 43. - P. 3982-3997.

140. Flow Cytometry in Hematology / eds: O.D. Laerum, R. Bjerknes. London: Academic Press, 1992. - 272 p.

141. Flow cytometry in the diagnosis of peritoneal carcinomatosis / C.T. Both, A.A. de Mattos, J. Neumann, M.D. Reis // Am. J. Gastroenterol. 2001. - Vol. 96, N5.-P. 1605-1609.

142. Flow cytometry: a practical approach / ed. by M.G. Ormerod. N.Y.: Oxford University Press, 1994. - 282 p.

143. Flow-cytometric DNA analysis of intracranial tumors in children / P. Habermehl, M. Knuf, M. Schwarz et al. // Pathol. Res. Pract. 2004. - Vol. 200, N 3.-P. 197-202.

144. Freguency and clinical significance of DNA aneuploidy in acute leukemia / W. Hiddeman, B. Woermann, J. Ritter et al. // Ann. NY Acad. Sci. 1986. -Vol. 486. - P. 227-240.

145. Fridman, W.H. Pathophysiology of cytokines / W.H. Fridman, J. Michon // Leuk. Res. 1990. - Vol. 14, N 8. - P. 675-677.

146. Givan, A.L. Flow Cytometry: first principles / A.L. Givan. N. Y., 1992. - 202 p.

147. Green, D.R. Mitochondria and Apoptosis / D.R. Green, J. Reed // Science. 1998. - Vol. 281. - P. 1309-1312.

148. Hammer, J. DNA aneuploidy by flow cytometry is an independent prognostic factor in sguamous cell carcinomas of the oral cavity / J. Hammer, E. Nagel, K. Kraft//Anticancer Res. 1999. - Vol. 19. - P. 1419-1422.

149. Hammer, J. Respiratorische Notfalle—Warum sind Sauglinge anfalliger? / J. Hammer // Schweiz. Rundsch. Med. Prax 1999. - Vol. 88, N 23. - P. 10351037.

150. Hedley, D.W. Concensus review of the clinical utility of DNA cytometry in carcinoma of the breast / D.W. Hedley, G.M. Clark, С.J.Cornelisse, D. Killander, T. Kute, D. Merkel // Cytometry 14. 1993. - P. 482-485.

151. Hughes, C.C.W. The endothelial cell as a regulator of T-cell function / C.C. Hughes, C.O. Savage, J.S. Pober // Immunol. Rev. 1990. - Vol. 117. - P. 85102.

152. Immune infiltrates and cytokines in gliomas / B. Giometto, F. Bozza, F. Faresin et al. // Acta Neurochir. (Wien). 1996. - Vol. 138. - P. 50-56.

153. Immunologic defects in patients with chronic recurrent sinusitis: diagnosis and management / D.S. Sethi, J.A. Winkelstein, H. Lederman, M.C. Louiy // Otolaryngol. Head Neck Surg. 1995. - Vol. 112, N 2. - P. 242-247

154. Improved sensitivity and resolution in the flow cytometric DNA analysis of human solid tumor specimens / B.A. Bach, W.A. Knape, M.G. Edinger, R.R. Tubbs // Am. J. Clin. Pathol. 1991. - Vol. 96. - P. 615-627.

155. Inhibition of endotoxin-induced activation of human monocytes by human lipoproteins / W.A. Flegel, A. Wolpl, D.N. Mannel, H. Northoff // Infect. Im-mun. 1989. - Vol. 57, N 7. - P. 2237-2245.

156. Interleukin 1 and ро1у(гГ).ро1у(гС) induce production of granulocyte CSF, macrophage CSF, and granulocyte-macrophage CSF by human endothelial cells / W.E. Fibbe, M.R. Daha, P.S. Hiemstra et al. // Exp. Hematol. 1989. - Vol. 17, N 3.-P. 229-234.

157. Iversen, O.-E. Prognostic value of the flow cytometric DNA index in human ovarian carcinoma / O.-E. Iversen // Cancer (Philad.). 1988. - Vol. 61. - P. 971-975.

158. Johnson, R. Cellular mediatrs of immune injury: Neutrophils / R. Johnson, S.J. Klebanoff, W.G. Couser // Immunologic Renal Diseases / E.G. Neilson, W.G. Couser. Philadelphia: Lippincott-Raven, 1997. - 560 p.

159. Kurland, J. Modulation of hemopoiesis by prostaglandins / J. Kurland, M.A. Moore // Exp. Hematol. 1977. - Vol. 5, N 5. - P. 357-73.

160. Lanza, G. Expression of protein p53 in the adenoma-colorectal carcinoma sequence / G. Lanza, R Gafa // Pathologica. 1998. - Vol. 90, N 4. - P. 351356.

161. Long- term survival and DNA ploidy in advanced epithelial ovarian cancer / E. Resnik, V.P. Trujillo, J.B. Taxy et al. // J. Surg. Oncol. 1997. - Vol. 64. -P. 299- 303.

162. Malignant melanoma in children and congenital melanocytic nevi: DNA content and cell cycle analysis by flow cytometry / A. Alvarez-Mendoza, J. Reyes-Esparza, R. Ruiz-Maldonado et al. // Pediatr. Dev. Pathol. 2001. - Vol. 4, N 1. -P. 73-81.

163. Manchini, G. Immunological guantitation of antigens by single radial immunodiffusion / G. Manchini, A. Garbanaza, G. Heremans // Immunochemistry. -1965. Vol.2, №3. - P. 235-254.

164. Memarzadeh, S. Advances in the management of epithelial ovarian cancer / S. Memarzadeh, J.S. Berek // J. Reprod. Med. 2001. - Vol. 46. - P. 621-630.

165. Mendelsohn, M.L. New approaches for biological monitoring of radiation workers / M.L. Mendelsohn // Health Phys. 1990. - Vol. 59, N 1. - P. 23-28.

166. Mitchison, J.M. The Biology of the cell cycle / J.M. Mitchison. Cambridge Univ. Press., 1971. - 313 p.

167. Muller, E. Impulscytophotometrische Untersuchungen zum DNS-Gehalt in Humanen Zellkernen / E. Muller, R. Weidhase // Wiss Beitr. M.-Luther-Univ. Halle-Wittenberg. 1983. - Vol. 32, N 2. - S. 3-8.

168. Mundy, G.R. Pathophysiology of cancer-associated hypercalcemia / G.R. Mundy // Semin. Oncol. 1990. - Vol. 17, N 2. - P. 10-15.

169. Native inhibitors (autoantibodies') of IL-1 alpha and TNF / K. Bendtzen, M. Svenson, A. Fomsgaard, L.K. Poulsen // Immunol. Today. 1989. - Vol. 10, N 7. - P. 222.

170. Ormerod M.G. Consensus report of the task force on standardization of DNA flow cytometry in clinical pathology / M.G. Ormerod, B.Tribukait, W.Giarretti. http://archive.uwcm.ac.uk/uwcm/hg/hoy/dna.html. 2001.

171. Prediction of long- term survival by flow cytometric analysis of cellular DNA content in patients with advanced ovarian cancer / M.L. Fridlander, D.W. Hed-ley, C. Swamson, P. Russel // J. Clin. Oncol. 1988. - Vol. 6. - P. 282-290.

172. Prognostic significance of DNA content and S- phase fraction in epithelial ovarian carcinomas analyzed by image cytometry / A.E. Reles, C. Gee, I. Schell-schmidt et al. // Gynecol. Oncol. 1998. - Vol. 71. - P. 3-13.

173. Prognostic significance of DNA content in epithelial ovarian cancer / W.H. Gaewski, A.F. Fuller, C. Pastel-Leu et al. // Gynecol. Oncol. 1994. - Vol. 53.-P. 5-12.

174. Prognostic significance of DNA index, multiploidy, and S- phase fraction in ovarian cancer / O.-P. Kalloniemi, R. Punnonen, J. Mattila et al. // Ibid. -1988.-Vol. 61.-P. 334-339.

175. Prognostic significance of DNA ploidy and S- phase fraction in malignant serous cystadenocarcinoma of the ovary / N. Bakshi, A. Rajwanshi, F. Patel, N.K. Ganguly // Analyt. Quant. Cytol. Histol. 1998. - Vol. 20. - P. 215-220.

176. Prognostic significance of DNA ploidy in childhood astrocytomas / M.W. Ben Arush, S. Linn, O. Ben-Izhak et al. // Pediatr. Hematol. Oncol. 1999. -Vol. 16, N5.-P. 387-396.

177. Prognostic significance of DNA ploidy in hatients with stage 11 and stage 111 colon carcinomas: a prospective flow cytometric study / G. Lanza, R. Gafa, A. Santini et al. // Cancer (Philand.). 1998. - Vol. 82. - P. 49-59.

178. Prognostic value of DNA flow cytometry in sympathoadrenal paragangliomas / A. Garcia-Escudero, M. de Miguel-Rodriguez, A. Moreno-Fernandez et al. // Anal. Quant. Cytol. Histol. 2001. - Vol. 23, N 3. - P. 238-244.

179. Proliferation and apoptosis in solid tumors. Analysis by laser scanning cytometry / I. Abdel-Moneim, M.R. Melamed, Z. Darzynkiewicz, W. Gorczyca // Anal. Quant. Cytol. Histol. 2000. - Vol. 22, N 5. - P. 393-397.

180. Quantitative cytology in leukemia research / B. Barlogie, A. Maddox, D. Johnston et al. // Blood Cell. 1983. - N 9. - P. 35-55.

181. Risk factor of local recurrence of colorectal cancer: a multivariate study / N. Pietra, L. Sarin, B. Themassen et al. // Hepatogastroenterology. 1998. - Vol. 45.-P. 1573-1578.

182. Role of DNA flow cytometry and image cytometry on effusion fluid / I. Saha, P. Dey, H. Vhora, R. Nijhawan // Diagn. Cytopathol. 2000. - Vol. 22, N 2. -P. 81-85.

183. Role of follow-up in management of local recurrences of colorectal cancer: a prospective, randomized study / N. Pietra, L. Sarli, R. Costi et al. // Dis. Colon Rectum. 1998. - Vol. 41, N 9. - P. 1127-1133.

184. Roots, R. Protection of DNA molecules of cultured mammalian cells from radiation-induced single- strand seissions by various alcohols and SH compounds / R. Roots, S. Okada // Int. J. Radiat. Biol. 1972. - Vol. 21. - P. 329-334.

185. Rytwinski, K. Flow cytometry, basic principles and applications—with special reference to pediatrics / K. Rytwinski, A. Wnuk // Med. Wieku Rozwoj. -1999. Vol. 3, N 2. - P. 281-291.

186. Sasaki, M.S. Free radical scavenging in protection of human lymphocytes against chromosome aberration formation by gamma-ray irradiation / M.S. Sasaki, S. Matsubara // Int. J. Radiat. Biol. 1977. - Vol. 32. - P. 439-445.

187. Segerer, S. Chemokines, chemokine receptors, and renal disease: From basic science to pathophysiologic and the therapeutic studies / S. Segerer, PJ. Nelson, D. Schlondorff // J. Am. Soc. Nephrology. 2003. - Vol. 14. - P. 338-351.

188. Shankey, T.V. Concensus review of the clinical utility of DNA cytometry in prostate cancer / T.V. Shankey, O.-P. Kallioniemi, J.M. Koslowski, M.L. Lie-ber, B.H. Mayall, G. Miller, GJ. Smith // Cytometry 14. 1993. - P. 497-500.

189. Shankey, T.V. Guidelines for implementation of clinical DNA cytometry / T.V. Shankey, P.S. Rabinovitch, B. Bagwell, K.D. Bauer, R.E. Duque, D.W. Hed-ley, B.H. Mayall and L.L. Wheeless // Cytometry 14. 1993. - P. 472-477.

190. Shapiro, H.M. Practical Flow Cytometry / H.M. Shapiro. N.Y., 1995.155 p.

191. The prognostic significance of nuclear DNA content in malignant epithelial tumors of the ovary / R.J. Brescia, R.A. Barakat, U. Beller et al. // Cancer (Philad.). 1990. - Vol. 65. - P. 141-147.

192. The role of multiploidy as unfavorable prognostic variable in colorectal cancer / M. Cosimelli, I. D'Agnano, M. Tedesco et al. // Anticancer Res. 1998. -Vol. 18, N3B. - P. 1957-1965.

193. TitlerDNA ploidy in soft tissue sarcoma: comparison of flow and image cytometry with clinical follow-up in 93 patients / K.E. Dreinhofer, B. Baldetorp, M. Akerman et al. // Cytometry. 2002. - Vol. 50, N 1. - P. 19-24.

194. Tumor ploidy as a mayor prognostic factor in advanced ovarian cancer / C.J. Rodenburg, C.J. Cornelisse, P.A.M. Heintz et al. // Cancer (Philad.). 1987. -Vol. 59.-P. 317-323.

195. Vindelov, L.L. A detergent-tiypsin method for the preparation of nuclei for flow cytometric DNA analysis / L.L. Vindelov, I.J.Chiristensen, N.I. Nissen // Cytometry. 1983. - № 3. - P. 323-327.

196. Vindelov, L.L. Same methods and applications of flow cytometric DNA analysis in clinical and experimental oncology / L.L. Vindelov, G.B. Cristensen // Curr. J. Haemotol., 1989. - Vol. 48, N 4. - P. 69-76.

197. Wang, D. Multivariate analysis of prognostic factors in non-small cell lung cancer / D. Wang, S. Liao, Z. Gao // Chung Hua J. Hsueh Tsa Clin. 1997. -Vol. 77.-P. 497-500.

198. Wheeless, L.L. Concensus review of the clinical utility of DNA cytometry in bladder cancer / L.L Wheeless, R.A. Badalament., R.W. de Vere White, Y. Fradet, B. Tribukait // Cytometry 14. 1993. - P. 478-481.

Оглавление диссертации Хисамова, Назиля Фагильевна :: 2009 :: Уфа

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Хисамова, Назиля Фагильевна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Хисамова, Назиля Фагильевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций