Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Иммунологическая микрогетерогенность рака молочной железы

и л

г. '> ^ 7

российская академия мвдищнсних наук

онкологический научный центр

На правах рукописи Артамонова Елена Владимировна

Ш'Шологичезш микрогегерогшность рака молочной

ЕЕЯЕЗЫ ( 14.00.14 - онкология )

Автореферат

Диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Москва - 1992

Работа выполнена в диагностическом - отделении (рук.Л~. доктс медицинских наук Д.В.Комов), лаборатории клинической радиоиммун логии (рук. - доктор медицинских наук, профессор З.Г.Кадагидзе) Всесоюзного Онкологического Научного Центра АМН СССР (Директор академик АМН СССР Н.Н.Трапезников).

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Н.Г.Блохина, доктор медицинских наук, профессор З.Г.Кадагидзе.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор И^В.Поддубная, доктор медицинских наук К.Л.Чимишкян.

Ведущее учреждение - Научно-исследовательский институт иммунологии МЗ СССР.

Защита диссертации состоится " 3. « Ut&JLA 1992 г. на заседании специализированного учёного совета (К.001.17.01) при ВОНЦ АМН СССР (Москва, II5478, Каширское шоссе, 24).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВОНЦ АШ СССР. Автореферат разослан ¡ЛА^ССлЛ 1992 г.

Учёный секретарь специализированного совета, доктор медицинских наук,

профессор /B.C.Турусов/

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОТА сс..V - . Актуальность темя исследования: недостаточное развитие ран-""""ней диагностики злокачественных новообразований, многочисленные

трудности в оценке прогноза и выбора адекватной тактики лечения, необходимость улучшения дифференциально"! диагностики а на пластических и первичногонерализованных §орм, взаимосвязь фенотипа опухоли и иммунного ответа организма', а таюха потенциальное воэмошюс-ти использования коньюгатов ионоклональных антител в терапии рака - всё это делает поиск и изучение опухолеассоциированных антигенов одной из актуальнейших проблем современной онкологии.

Хотя многочисленные исследования в этой области лишь подтвердили отсутствие истинных опухолеспецифичньк антигенов, позволяющее однозначно отличать опухолевую ткань от соответствующей нормальной ткани (Chartei and BaLch, 1985), за последние годы достигнут определённых прогресс в клиническом использовании различных биологических маркёров (BeeLet et aL, 1939, Kosh etat., 1957, Kagan, 1987, Humphrey, 1989). С появлением гибридо;^но1 технологии сделаны многочисленные попытки получить моноклоаальныэ антитела СЖАТ) к антигенам клеточных мембран на различных типах эпителиальных клеток и опухолей из них (SchmiegeL et aL., 1985, Torjashi et al., 1384, CoLctier eiaL. , 1981, Slacker etaL., 1985, Steele ei aL., 1985), причём важнейшую роль в изучении их распределения играет иъ-муногястохишя (V(LLLgham el aL, 1989). Важными в плане дифференциальной диагностики могут оказаться, кроме поверхностных глико-протеидов, онкофетальнне и дифференцировочные антигены, особу.о роль играет оценка маркерной гетерогенности, заключающейся в том, что опухолеассоциированные антигены экспрессирозаны не на всех оцу-холях данного гистологического типа и не на всех опухолевых клетках в каждом конкретном случае. Наконец, большой интерес визчвает проблема обнаружения на клетках солидных опухолей человека лейкоцитарных и родственных ш* антигенов, так как она непосредственно влияют

- 2 -

на иммунную реакцию организма.

Изучение иммунофенотипа злокачественной опухоли в клинике и, особенно, исследования его связи со стадие*?. заболевания, гистологической структурой опухоли, дальнейшим клиническим течением, а также с изменениями местного иммунологического статуса даёт противоречивые результаты. Одни авторы подтверждают эту взаимосвязь, другие её не находят (Mansour et aL;, 1933, Ca-toreitL et aL., I9S3 Большим недостатком опубликованных работ является кх ограниченное! одним-двумя маркёрами. Исследования же, посвященные оценке экспрессии большого количества маркеров из разных групп и выяснению их взаимосвязи, в доступной нам литературе не найдены.

Результаты исследований взаимодействия опухоли и организма показывают, что росту опухоли правде всего противопоставляется иммунная защита (Трапезников Н.Н., 1979, Thaler et at., 1977, Terry ei aL.,-1979). Состояние иммунной системы является одним из основных факторов, определяющих динамику развития злокачественных новообразований,—

Большинство исследователей, изучая иммунный статус больных, останавливается лишь на клетках периферической крови, тогда как в первую очередь нарушения и изменения в их составе будут происходить непосредственно в области патологического очага (Batch ei aL, 1990). Наличие на сегодняшний день 78 кластеров лейкоцитарных диф-ференцировочнкх антигенов делает неэффективным и работы по оценке общего пула Т- и Б-лим|оцитов без учёта их субпопуляций.

Рак молочной железы является одной из самых распространённых форм злокачественных новообразований у женщин, причём во всех экономически развитых странах отмечается неуклонный рост заболеваемо сти и увеличение смертности от рака этой локализации. От 25* до 35Х больных без поражения регионарных лимфатических узлов уке имеют отдалённые гематогенные микроиетастаэы к началу лечения (Fergus on si aL., 1982). Коноклональные антитела, спеч/фмннз для

рака молочной лсвдозы, не получена СРапЫпо е( а1., 19о9, Ш^исЫ е{. а1., 1980). Отсутствуют работы по комплексной оценке маркерной гетерогенности ори раке молочной железы, её роли в генерала иммунного ответа, а также по ыногофакторному изучению нару.цени? местного иммунологи1"некого статуса, '.{лшшческие и кланико-эксперимента-льные иссладования в этой области могут предоставить зодиожности для улучоения диагностики и дифференциальной диагностики рака молочной железы, для более точного прогнозирования его течения и для разработки методов иммунотерапии, что, несомненно, является актуальной задачей современной клинической онкологии и важно как с теоретической, так и с практической точек зрения.

Целью настоящей работы явилось комплексное изучение ишунофе- ■ нотипа опухоли и местного иммунологического статуса у больных раком молочной железы.

Для достижения этой дели поставлены следуасцие..задачи:

1. Исследовать с помощью моноклональннх антител экспрессии ряда эпителиальных и "лейкоцитарных" маркёров на клетках рака, молочной железу.

2. ¡Ьучить состав иммунокомпетентных клеток в срезах рака молочной железы на основе идентификации обцелейкоцитарннх, Т-клеточнчх, В-клэточнчх, Ш1еломоноци7®рних, актквационньк и нелинейнчх антигенов.

3. Оценить роло ¡иалунофенотапа рака молочной же левы в генерации местного иммунного ответа организма.

4. Сопоставить полученные дез^гьтаты с клиническими данными исследуемой категории пациенток. \ '

Научная новизна работы: впервые в СССР проведена комплексная оценка иммунофенотипа рака молочной железы по экспрессии злокачественным клетками ряда эпителиальных маркёров (ибщеэпителиального' : антигена Едр 34 - ЖАТ К2А-125; антигена мембран жировых глобул ко- ; лэка НШП - ¡ДАТ ЖО-25; РЭА, детерминанта, отсутствующая яа лзЕко-' ! гитах - ¡.ЖГ НЕА-19; молекул главного комплекса гястоствместимости

I и II класса (HIA-I - ЖАТ Wb/32, ÍIIA-D?,i? - &ÍAT 2.03, ilIA-K -

Í¿RAT ítíO-I) и антигенов сублопуляци?. лейкоцитов (адгеаипнь'х молеку.

VIA-> - СД29 - ¿áKAT К 20, Х-гаптена - СД15 - млАТ Лл0-Г2, CAIIA -СДЮ - ЖАТ К 503 и антигена :1гЮ-84). Выполнено многск£акторное ис следование местного иммунологического статуса у больичх раком молочной жолеэы на основе идентификации на инфильтрирующих опухоль иммунокоыпетентннх клетках общелойкоцитарных (СД45, СД53), Т-кле-точных (СДи, 0Д7, ОД4 и ОДВ), 3-клеточных (СД19, ОД22, СДОЗ, СД37 и СД76)» миеломоноцитарннх (СДИв, СД15, антигенов ИИО-бЗ и ИгЮ-З активационных (HIA-II, СД38) и нелинейных (HIA-I, Л-IFA-I, EFB-I) антигенов. Продемонстрирована чёткая взаимосвязь ыеаду иыыунофоно типом оцухоли.по РЭА, HIA-I и II класса, V1A-J,, антигену HIÍ0-64 и степенью выраженности и структурой местного иммунного ответа по больаншетву обгцелейкоцитарных, Т- и В-клеточных, астивационнкх и нелинейных маркёров. Выявлено*важное клиническое значение оценки экспрессии ыолекул HIA-I и II класса, антигена ЛК0-У4 и РЭА как имеющих статистически значимую связь с такими клиническими параметрами, как величина первичной опухоли, регионарное метастазиро-вание и стадия заболевания. Отмечены существенные корреляция между интенсивностью лимфоэднзк инфильтрации опухоли и степенью распространённости процесса. Показано, что максимальная выраженность [шмунного ответа по подавляюще^ больошнетву маркёров имкукоком-петентнкх клеток отмечается во II (На) стадии рака молочной железы. Получены данные, свидетельствующце о том, что -сохранность на злокачественных клетках молекул HIA-II класса, а также выраженную инфильтрацию опухоли (ЭД5+. Т-лимфоцитами,- СД4Г Т-хелперами/ индукторами и JL-Z.RA-I+ лимфоцитами ыоанс рассматривать как фактор более благоприятного прогноза заболевания.

Научно-практическая значимость: I. Выявлен Hrf маркёров опухолевых CHIA-I и II класса, ,ЕЮ-84,

Н:-!ГС1, РЭД) и (шмунокомлетентньк клеток (СД5, СД7, СД4, СДБ, СД22, ОЦ37, Сй7о, ОДИв, СД15, СД38, .¿-1УА--1),"" информативных с точки зрения их связи с клиническим течением рака моло^но? железы.

2. Показана возможность изучения некоторых из этих антигенов (Н1А-П класса, 'лКО-64, ¡Ж1, С,ЦПв, СД15, СД22, СД38, Л-1РА-1) с помощью отечественных моноклональнюс е.нтител ЛКО-1, ЖО-84, ЛКС-25, ЛКО-ГШ,. /К0-Г2, ;К0-12, /ГХ-20, ЖО-П.

3. Комплекс этих антител (см. пункт 2) апробирован и внедрен в практику исследований у Сольных раком колочно?: .железы в клинико-радко-иммунологической лаборатория ЮЩ АМН СССР.

4. Вдавленная чёткая связь противоопухолевого иммунитета с экспрессией на опухолевых клетках КХА-1 и II молекул позволяет рекомевдо-' вать изучить возможности включения индукторов зтих молекул, например, у-иктзр.£ерояа, интерле£кини-2 з комплекс иммунотерапии боль-нж раком колочяо?. аелеьы. -----

о. Отмечони хоррздя'чконная 'вгаиыесьяиь меоду ькепресеией'опухолевыми клетками Н1А-П класса, повышенными уровнями. инфильтрации опухоли СД5Т, СД4"1" Т-клетками и «б-Ш-П ли&фоцкташ и клиническим течением заболевания, что позве ".чет ввделить группы больных с благоприятным и неблагоприятным прогнозом.

Объём и структура диссертации:

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 5 глав собственных данные, обсуждения и списка литературы. ^териалы диссертации кзлокены на 172 страницах машинописного текста. Работа содержит- 23 таблицы, 9 рисунков. Библиография включает 215 названий, из них отечественных авторов -18 , зарубежных -¡97.

Апробация работы:

Апробация диссертации состоялась на совместной научной конференции отделений диагностического, опухолей молочной жьлегн, лаборатории клинической радиоимкунологиа, отдела патологической анахсмик

- о -

опухолей челсззка ЗЭК; -Ж!.ССЗ?,..«¡«федза онкологии йоскоеско;. ¿¡е-дицияскэП Академии й.1а.Сечэяоза 14 .июня-1591 года.

Осяоаяые положения диссертации были доложены на Обц&союзяой конференции "Актуальнне вопросы а биохнмилзскэ,". и имизунологмческой олокачеста*ан*к аоэообраэозааий", 12-14 декабря 1383 г. Публакаидк: по материалам даасдртации опубдикоьано 3 научных работы. • .

Материалы и методы: ...

I. Характеристика обследованных больных:

Исследование на краостагнкх срезах■опухолей проведено у 55 больные раком молочной железа. -

Распределение больных по гистологической классификации ЬОЗ

Гистологический тип опухоли Число больных -

Ин^ильтратиьпъг. прэтэкэвн*; рак 41

^фильтративнай долькоз-Д рак ■8 .....

мздулляраый рак 4

Слизистый рак 2

Всего ¿5

Клиническая сга-и... I - 15 — • - -

— тт - 30, из них На -.20 •

116 - 10

III - ¿3, И 5 них Ша - 2

Шб - 5

Шв - I

1У - I.

Размерь! первичной опухоли: Т1 21

•Т2 30

то 4 .

Наличие кетайгазов в регионарные-

лиьфатичесхие узлы: Но 38

К+ 17

II. Среды, реактивы, сыворотки, антитела.

Для отмывания гистологичоетахсрезов от антител использовали синтетическуя среда 199 на растаоре Хенкса для культур ткано», приготовленную H;ti полиоудалита к вирусных зн-деф&литоз АшН СССР, r.'ioc-ква и Hl't-i вирусных инфекций Ю PC3GP, г.Свердловск.

Азид натрия. Готовили 2,5)о раствор а?яда натрия до конечной концентрации 0,25/5.

Диаминобензвдин. Для проявления кммуноперокседазиой реакции использовали диаммнобзвгидин производства "Fluka", раствор диами-нобензидина готовили "ex temporae" (0,£:г/мл с добавлением 2 мкл % Н,0Ч).

д.

Специфичность использованных моноклональннх антител представлена s таблице I.III. Реакция определения ахтивност-и. Ш.Т и - имлунореактивноети антител с опухолевыми клетками.

I. Непрямая реакция цоьсрхкосткой икмуно$люоресценции (PU27" на криостатных срезах.

Заморокеннке срезы толщиной 4-ü мкк помещали по три ср«за на поверхность обезжиренное предметных стёкол. Срезы фиксировали при комнаткой температуре в течение 4 сек. Перед окраской антителами срезы фиксировали в течение 10 мкн г ацетоне при 4°С. Последуюцие этапы реакции проводили при комнатной температура, во влажной в«мь-ре. Инкубировали срезу 10 мин в среде 199 pH 7,2-7,4. ДМТ наносили на 30 мин. Отлизали в среде 199 10 мин.. Наносили 5ЛГД-меченые ?(ав^-фрагменты антисьгеорогки против глобулинов белой мнхи на 30 мин. Отмывали в среде 199 10 мин. Клетки консервировали 50i глицерином на физиологическом растворе. Срезы покрывали покровадки стьк-л&ки и характеризовали актигенполокительные клег :и и структуры. Специфические реакиии учитывали на микроскопе Leita Oi-fcopLan, -1РГ.-

-Fr

СПЕЩШЧВОСТЬ ИСЮЛЬЗОВАНШХ ЙОЮКЮНАЛЬНЫХ АШ'ИТЕЛ

NN

п/п

КЛАСТЕР ДИ-ХФЕРШИРОЕКЙ

НАЗВАНИЕ МОВО КЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

ДИФЖРЕНЦИРОВЗЧНЫЕ АНТИГЕНЫ Т-КЛЕТОК

CD5 CD7 CD4 CD8 CDIa

А 50х

i jao*HM9** нр z/e3"

L533* L161x

6. 7.

а

9.

10. 11.

ДИМЕРЕНЦИРОЮЧЕЫЕ АНТИГЕНЫ В-клеток

la-подобный антиген

CD19

CD22

CD23

CD37

CD76

ИНО-1. 2. 06хх HD 37Хх

НО 6ХХ HD 39^ ЙНО-12 HD 5Сгх HD 28хх HD 66хх

12. CD11B la CD15

14. антиген ИК084

МИЕЛОМОНОЦИГАРШЕ АНТИГЕНЫ

ИНО-ГШ

ИК0-Г2

ИКО-84

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ МАРКЕРЫ

15. CD10 (CALLA) К 503

16. CD38 ИКО-20

17. CD45 Вга55_

18. CD53 HD 7719. RFB-1 антиген ИК0-40

20. JL-LFA-1 антиген ИКО-11

21. Дифференцировочньй антиген геьюпоэтических клеток ИКСК63

22. # - цепь YLA- 4 антигена (CD29) К 20е vv

23. Антигены HLA-1 класса V 6/32?;

24. Раково-змбриональный антиген НЕА 19"L

25. Общеэпителиальный антиген НЕА 12Stx

26. НШ31 антиген ИКО 25

ЭРИТКЩНЬЕ АНТИГЕНЫ

27. Гликофорин А НАЕ 3

28. Антиген ядерных эритроидньк клеток НАЕ 9

Примечание: все ¿-aí серии /ф, получены д.к.н. А.С.Еаоианиковш, í.uAi с от:.«:асу' * пь-дэстаальнч Л.БоумселЗ: (фракция) s ходе сотвулчи^еС?Еа мкдт с отметкой :о: по-щсстав-лднь* i .MoAss-ixayapoK CwPD з ходе сотрудничать-!, í^uí.4. сери:! 5 з предоставлены В.лаг.ват (Бсатислаеа) б ходе сотрудн/.ч зства.

2. Прямая .р.еаяция имкуно-|люоре«денции на криостатннх срезах.

Срегч опухоли фиксировали с асетоне'как описано вше. Отзыва-* ля з среде 199 10 мину?. Зател наносив ЭДГЦ-г.еченые антксыьорст-ки или моноклональные антитела и инкубировали 30 минут. Отмывали в среде 199 10 цлнут. Илегки конеерьирорали 50,*> глицерином на физрастворе и учитывали специфическое свечение на люминесцентном микроскопе.

3,. АадуноферментныЛ метод (.-ЗУ).

¿¡¡¿муноферментный метод на криоетатиых срезах проводили следующим образом. Срезы опухоли фиксировали в ацетоне как описано вы-г:е. лцгибпровали активность эндогенной перонсидазы клеток с помощью ЗД раствора перекиси водорода 20 .жнут при комнатной -температуре. ;-1нкубц рокада срезы в среде 199 10 минут. Наносили пераые антитела на 30 кину?. Отбывали от-'.антител в среде 199 10 минут. 11а— косым антисугорстку, •меченую яероксидаяой против-иммуноглобули-нов .аъп'л Сг>роиэ20де?ве «ЭМ им. НЛ.'Гамалеи АЙН СССР). Шкубировалм 30 минут. Стаивали 8 среде 199 10 ¡ладут. Проявляли реакцию с помощь» раствора доамияебензедина.'Ддра клеток докрашивали гематоксилином &гЗер%. Затем срекы .ккочьли в 107° раствор келги-ина» закрывали покроЕНьс.:и стёбами и оценивали результаты реакции с помощь» светового микроскопа.

При жмунофенотипировании опухолевих клеток '"результаты реакции оценивали полуколичественнш методом. Наделяли 3 типа реак- < цки: I) .Отсутствие реакции;'2) .Мозаичная реакция; 3) , ¡'ономорфная экспрессия антигена на опухолевых клетках. При дальнейшем анализе в качестве положительной считали реакцию 2 и 3 типа.

При юмунофенотишровании и1.мунокоыпетентных клеток в опухоли ввделяли 4 типа икмунной реакций: I) Отсутствие антигенлоложи-тельных клеток в срезе; 2) С гжникальной инфхльтраошй (единичные -анткгенположтельнке клетки в сре~е, расположенные- раьрогне-н-но или мелкими группами); 3) С умеренной инфильтрацией (умеренное количество антигепполагйте.'.ьк"^ клеток, р&саолокенных рас-рогнснно .'.

Л,* Ю - • - ■ ' •■•'. -или небольшими группами; - немвдг-зчислешка .пбкетрируюод$,..5..парен.-хику опухоли клзтки); 4) С выраженной инфильтрацкзЯ (крупные ан-чтигенположигольаш игфдатр&ты; иаокеств-знаыз группа антигзнпо-лояятельньк клеток; «ножесхва пгнетрируацях б пареж»ыу опухоли клеток). При дальнзЯ'зак ¿наядое реакции I и 2 типа оцзнкзались как отрицательные, а 3 к 4 типа - как пслоглгельныа.

Статистическая обработка результатов проводилась с исаользо вашем аппарата таблиц сопряжённости признаков и критерия-^С

Результата исследования и обсуждения. !

Йлркёзы клеток рака молочной железы.

Исследование опухолевых клеток проведено на криосгахних сра-аах рака молочной железы у 55 больных с использованием набора мо-( нэхлональних антител к эпителиальным и лзйкоцитарнда антигенам. Выделяли 3 типа реакции: отрицательный, мозаичнкй и ыонокорфньй. | Частота встречаэглости-каждого типа представлена в "таблице 21' » .

Таблица, 2. Частота выявления антигенов на клетках - ■ оака-ыолочнэ?! железу

Антитела Тип реакцки/количзстзо наблюдений %

Отрицательно Мозаичный Ыснэмор^.ны/:

НБА-125 0% (0/55) 41 (2/55) 9д% (53/55)

;ш-25 03 (0/55) 445 (24/55) 552 (31/55)

1ЕЛ-1Э 4$г (27/5о) Зо.'о (21/55) 131 (7/55)

и'о/32 47,* (26/55) гэг (к/55) 242 (13/55)

2.05 75^ (41/55) 15/с (9/55) 9л (5/55)

ЖО-1 75« (41/55) 1Ус (9/55) Н (5/55)

К 20 (31/55) 24л (13/55) 20/ь (11/55)

ИКО-34 405 (22/55) 31/о (17/55) 291 (16/55)

■жо-гг 85% (47/55) 11% (6/55) 4* (2/55)

К 503 852 (47/55) 151 (В/55) (0/55)

Как видно из таблицы 2,.общеэпителиальный антиген £^р 34 (.ЫКАТ НЕА-125) характеризуется мсноморфностыэ экспрессии не только б группе "рак молочной железы", но и в пределах каждого случая (то есть выявляется з 100,5 наших наблодений, причём в 90& - на всех опухолезах клетках в срезе). НЖ31 (ЖАТ Ж0-25>-"-яакяе выяв-

лен нами в 100% наблюдений, однако в ЪЪ'о отмечена гетерогенность его экспрессии в пределах одного случая. Раково-экбрнональньй антиген (51£ положительных реакций) характеризуется двумя типами гетерогенности.

При субклассификации рака молочной железы на основе обнаружения эпителиальных антигенов СЕдр 34, KMFGI и РЭА) отмечена закономерность .взаимоисключающей экспрессии HMFSI и РЭА. Так, если HL5FGI выявлялся на всех опухолевых клетках данного случая, то РЭА чаще полностью отсутствовал (6IX РЭА"), реже - частично отсутствовал (25%, F9A+/~) и ещё реже полностью присутствовал С13/3 РЭА+). Напротив, если.все опухолевые клетки данного случая были отрицательными по РЭА, то чаще все они экспресеировали HiiFGI (.70% HMFGI") и реже наблюдалось частичное отсутствие этого антигена С 30£ HMFGI+/~)р=Ю, 05. "

• Мономорфные детерминанты HIA-I класса (¡йСАТ V5/32) обнаружены в 53$ случаев, НИ-П-класса - в 25/t случаев. Сравнение 2 типов моноклональных антител к Н1А-11_показало_аналогячное распределение . мономорфных детерминант молекул HLA-IBt-SP (МКАТ 2.05) и HLA-БЕ (ЫКАТ Ш)-1).

С различной частотой на клетках рака молочной железы вшз-. -лялись антигены кластеров лейкоцитарной ди^ференцировки: ji-цепь Ш-i (443»),. молекулы ЖО-84 (60$, Х-гаптен (.15$) и САШ СЩ) . Все они отличат: ся двумя-. типами-гетерогенности.

Нами проведена оценка взаимосвязи экспрессии различиях, антигенов на клетках опухоли. К аотигеншлсжителымм относили все случаи с меноыорфной и мозаичной реакцией (то есть независимо от количества собственно антигенпозитивнчх клеток). При этом обнаружено, что презентация РЭА сопровождалась более онсоким выявлением антигена ИКО-84 по сравнения с РЭА" группой (82Д и 37/0, и наоборот, в /HD-84 - положительных случаях по сравнен:« 'с <K0-3-l~ значительно чаще обнаруживался PSA (б1% и 23%), р=С,0045.

Экспрессия адгезивных молекул VLA-js наблюдалась преимущественно.в группе с сохранными детерминантыми HIA-I класса (52.-4 и 34/ь), и наоборот, HIA-I - положительные .случаи достоверно чаще выявлялись при фенотипе V-LA^a* по сравнению с VIA(75% и 35,5/j), р-0,0224.

Отмечена такка существенная положительная корреляционная взаимосвязь экспргссии антигенов И1А-1 и II класса (р-0,002), причём молекулы HIA.-II обнаруживались только при сохранности HIA-I. Кроме этого, продемонстрирована определённая последовательность утраты опухолью антигенов главного комплекса гистосовместимости.. При этом на первом этапе каблвдается делеция молекул HIA.-IR, параллельно идёт исчезновение и HIA-I класса, причём коррелируют не только факты, но и степень - полная или частичная - утраты этих детерминант. Наиболее характерным для злокачественного фенотипа является полное отсутствие HIA-I и HIA-II (47/*).

Субпопуляпии иммунокомпетентнчх клеток в срезах рака молочно" железы.

Всю совокупность лейкоцитов в опухолевых срезах наиболее точно позволяет оценить МКАТ к общелейкопитарным антигенам СД45 (МКАТ •Зга~5о) и СД53 (МКАТ НД 77), которые окрашивают все типч кмкуноко-мпетентнчх клеток, инфильтрирующих опухоль:.лимфоциты, моноциты/ макрофаги, сегментоядердае и плазматические клетки как в строме, так к е паренхиме опухоли. При этой СД45 'выявляется несколько чаще и отличается более ярким свечением .в РИ$. Менее удобными в этом плане являэтед ЗДА-Х класса (МКАТ V6/32) , которые выявляются не" только на всех лейкоцитах, но и, в ряде случаев, на опухолевых клетках, что значительно затрудняет оценку пенетрируюцих в паренхиму опухоли лимфоцитов..

Комплекс анти -кдеточннх ЬЕСАТ позволил провести оценку как общего пула Т-лшлфоцвдов по антигенам СД5 (iiKAT Л 50) к СД7 (¡ГгАТ I 210, 1Щ 43), так и, отдельно, субпопуляцп^ Т-хелпоров/ин-дуктороз (СД4, МКАТ Н? 2/5) и Т-супрессоров/цктотоксикоз (СДо,

л ■

МКАТ 1 533). Наиболее стабильные образцы окраски и максимальная частота выявления Т-лимфоцитов получена при применении ЖАТ I 210 к СД7 (602 положительных раакций). фильтрация СД5Г Т-клетками отмечалась реке (35$), однако коррелировала с гистологической формой опухоли и выявлялась преимущественно при медуллярном и прото-новом раке. Частота выявления маркёров субпопуляций была сравнима с обще-Т-клеточнт антигеном СД7 и составила для Т-хелперов/индук-торов Ъо% и для Т-супрессоров/цитотокеиков 525?.

Достаточно часто мы обнаруживали инфильтрация опухоли 3-лимфоцитами. Так, обще-3-клеточный маркёр СД22 выявлялся в 42/£, а маркёры СД37 и СД76 - в 44$ наблюдений. При этом В-лдмфоциты преимущественно располагались.в воде групп и крупных инфильтратов, в ряде случаев формировали.в строме больше фолликулоподобные скопления и, в отличие от Т-лимфоцитов, редко пенетрировали в паренхиму опухоли. У большинства больных (60Я) встречались клетки терминального этапа дифференцировки В-ряда - плазмоциты, способные к продукции иммуноглобулинов. . . ------------

Макрофаги, идентифицированные по молекуле С2-ЗЗЛ-рецептора, участвовали в противоопухолевой реакции у ЪЪ% больных раком молочной железы. Они располагались преимущественно по-одиночке и небольшими группами и достаточно часто пенетрировали в паренхиму опухоли. Интересно отметить, что большая часть етромальных и практически все интрапаренхимальные иммунокомпетентные клэтки окспресси-ровали 1а - подобный антиген, у половины больных в реакции участвовали - положительные лимфоциты.

Суммарно частота выявления"различных типов реакции ЖАТ к антигенам иммунокемпетентных клеток представлена в таблице 3.

Типы реакций МКА к антигенам иммунойомпетентньк клеток таблица 3

МКА | Тип реакции I. Отсутствие клеток 2. минимальная | инфильтрация 3. умеренная инфильтрация 4. выраженная .инфильтрация

I. МКА. к обц^алейкоцитарнда антигенам:

ВД 77 0/36 (0%) 10/36 (28%) 13/36 (36%) '-13/36 (36%)

Вга 55 0/19 (0,%) 3/19 (16%) . 7/19 (37%) - 9/19 (47%)

W6/32 0/55 (0$) 12/55 (22%) 14/55 (2536) 29/55 ' (53%)

2. МКА. к Т-клеточним антигенам:

А 50 25/55. (45%) • 11/55 (2С$) 18/55 (33%) .. 1/55 "(236)

I 210 II/55 (20$) 11/55 (го%) 17/55 (31%) 16/55 (29%)

ВД 49 19/46 (42%) 20/46 (43%) 7/46 (15%) 0/46 (0%)

HP 2/6 10/55 (18%) 14/55 (25%) . 15/55 (27%) : 16/55 (29%)

1,533 13/55 ( 24$) 10/55 (18%) 18/55 (33%) 14/55 (25%)

3. МКА к В-клеточным антигенам:

ЦЦ 37 22/55 (4ö/o) 20/55 (36%) 12/55 (22%) 1/55 ' ( 2%)

ВД 39 24/55 (43,5%) . 8/55 (14,5%) - . 18/55 (33%) 5/55 (9%).

Щ6 27/55 (49%) 12/55 {22%) 12/55 .(22%) 4/55 Ш

ЙК0-12 13/30 (43,4%) 7/30 (23,3%) 6/30 (20%) .4/30 (13,3%)

ВД 50 21/55 (3 %) 20/55 (36,ЭД 8/55 (14,5%) 6/55 (11%)

ВД 28 .18/55 (33%) 13/55 (2*6) 14/55 '(25%) 10/55 (18%) :

ВД 66 16/55 (29%) 15/55 (27%) 11/55 (20%) 13/55 (24%)

Типы реакций МКА. к антигенам иммунокомпетентных клеток Продолжение таблицы 3

ММ I. отсутствие клеток Тип реакции 2. минимальная инфильтрация 3. умеренная инфильтрация 4. выраженная инфильтрация

4. МВД к миеломакрофагальным антигенам:

Ж0-ГМ1 16%.- (9/55) ■2936 (16/55) 44% (24/55) 11% (6/55)

ИК0-Г2 27% (15/55) 3136 (17/55) . 3 8% (19/55) 7% (4/55)

ИК0-84 73% (40/55) - 13% (7/55) 5% (3/55) 9% (5/55)

ИКО-63 74% (34/46) 20% (9/46) ,6% (3/46) 0% (0/46)

Ъ 161 65% (36/55) 24% (13/55) % (4/55) 4%'. (2/55)

5. МКА. к активационным и линией неограниченные антигенам:

2.06 0% (0/55) 23,5% (13/55) 34, £ }% (19/55) 42% (23/55)

ЖО-1 0% (о/55) ; 23,5% (13/55) 34,5% (19/55) 42% (23/55)

ИКО-20 9% (5/55) г 29% (16/55); 35% (20/55) 25% (14/55)

" ико-и 15% (6/40)■ 32,5% (13/40)' 32,5% (13/40) 2<$ ' (8/40);

ИК0-40 0% (0/50) Ж (13/50) 28% (14/50) 46% - (23/50)

К-20 о% (0/55) 8С$ (44/55) 20% (И/55) 0% (0/55)

- 16 -

Характер проявлений цветного-иммунитета --------i

и особенности клинического течения опухолей с различном и.умуна1епо-

- " ТИПОМ. - .

При оценке взаимосвязи между икмунофенотипом и гистологической формой опухоли статистически значимых закономерностей нами нэ вдавлено. Антигены Едр 34 и НМ1Ш обнаруживались во всех случаях прото-кового (41), долькового (8).медуллярного (4) и слизистого (2) рака. Несколько чащэ при протоковом раке по сравнению с дольковым на опухолевых клетках выявлялись РЭА (ЧЬ% л 46$, р>0,05) и HIA-II класса (24$ и 12,5%, р>0,05), несколько реже - молекулы ЖО-34 (59,2. и 75%, р>0,05) и VIA-j, .{39% и. 50$, р>0,05). HIA-I класса и Х-гаптен обнаруживались примерно с одинаковой частотой. Необходимо также отметать, что все 8 C4I1A-- положительных случаев имели строение ин-фильтративного протокового рака, а при других гистологических формах этот антиген на опухолевых клетках не обнаруживался. 1 »кмунофенотип клеток рака молочной яелез'н по лейкоцитарным и родственным ш антигенам в значительной мере определял интенсивность и структуру иммунного ответа м situ и был связал с клиническими проявлениями злокачественного процесса.

Так, при сохранности на.раковых клетках HIA-I класса общий ■ уровень лейкоцитарной инфильтрации опухоли по антигенам СД45 и СД53 был достоверно вше, чеи при утрате HIA-I (таблица 4). В HIA-I - положительных случаях значительно чаче выявлялись поваленные уровни инфильтрации.опухоли СД5Т и СД7+ Т-лимфоцитами, субпопуляциями СД4"*" Т-хелперов/индукторов и СДЭ+ Т-супрессоров/цитото-ксиков, ВАлимфоцитаыи (СД22+) и субпопуляциями 3-клеток СДЗ?+ и СД?6+, шлгукокошетеытными клетками, экспрессируэщими активацион-нче антигены HIA-D3. и СД38 и нелинейные антигены J-IFA-I и EF3-I.

Отличием HIA-33R. - положительных опухолей (таблица о) явилось обнаружение во всех случаях повьюенного общего уровня лейкоцитарной инфильтрации, а также Т-хелаеров/индукторэв к «¿-IFA-I"1" лимфо-

цитов при отсутствии В-клеточной инфильтрации. Доминирующей субпопуляцией при НЬА-1Т и HIA-II+ фенотипе были Т-хелперм/¿дцукгэрч.

йлмунофенотип опухоли по. антигенам главного комплекса гисто-совместимости находился в определенной взаимосвязи с клиническими проявлениями злокачественного процесса. В HIA-I и ÜIA-II - положительных случаях.достоверно, реже выявлялись метастазы в регионарные лимфатические узлы (таблица 9). В целом при сохранности этих детерминант значительно выпе была доля IIa клинической стадии рака молочной железы (таблица 10). Напротив, III стадия существенно преобладала при HIA-отрицательных фенотипах. Интересно, что все случаи прогрессировать заболевания после проведённого лечения исходно характеризовались,полним отсутствием молекул HIA-II. Напротив, все-больные, опухоли.которых экспрессировали H1A-II, живут без признаков рецидива и метастазов.

При экспрессии на клетках рака молочно"; яелез«--антигена «К0-34 достоверно чаще наблюдалась выраяенная лейкоцитарная инфильтрация опухоли лейкоцитами с. мембранными антигенами СД53_(90;2 и. 50,'í, pO,OI), НЬА-1 (90^ и 59%, р<0,01), ОД38 С76% и 41Й, р<0,01) и RFB-I (87^ и 58/о, р<0,01).. Обмечена интенсивная пенетрация опухоли СД4 и СД5 субпопуляцияш Т-клеток с наличием групп перитумора-льньк активированных В-лимфоцитов ССД23+)» В этой группе (.-^0-54^) достоверно реже обнаруяивались опухоли более 5 см в диаметре (0% и 16%, р<0,05), а такте метастазы в.регионарные лимфатические уз- -лы (88% и 50%, .р<0,01>,1 что соответствовало1 IIa клинической стадии (таблица 8). Отсутствие молекул ЖО-84 сопровождалось более частил выявлением III стадии рака молочной железы.

Экспрессия злокачественными клетками адгезивных молекул VJA-ß сопровождалось выраженной В-клеточной реакцией (58* и 29Х, р<0,025) с инфильтрацией опухоли 0ЦЗЗ+ плазматическими клетками (75/t и 52/i, р<0,05). В этой группе по сравнению с Vl\-j>~ достоверно чаще отмечалась II и несколько реке - III стадия рака моло-í-

тс _

- xw

таблица 4

Частота обнаружения юлмунокомпётентньк клеток '.....

в опухолях с ю.аг/нофенотклом НМ-Г' и HIA-I".

Антиген ШкТ частота положительных реакции

при ш.кунооенотипе Р

HIA-I ÜIA-I

СД53 Ж 77 т (16/16) 55£ (10/18) х)

СД45 Вга 55 100% (II/II) 62% (5/8) х)

СДэ А 50 Э5'¡а (16/29) Ii/o (3/25) х)

ОД? I 210 83,5 (24/29) 25% (9/25) х)

СД4 HP 2/6 . В6% (25/29) 23% (6/26) х)

еда X 533 76% (22/29) 38/0 (10/25) X) .

0Д19 ЗД 37 2В% (8/29) 19% (5/23)

СД22 ВД 39 62% (18/29) 19% (5/25) х)

ад б Л1% (12/29) т (4/26)

ИКО-12 ..,■ -56% (9/16) 7% (I/I3)

СД23 ад 50 ' ,Ж (10/29) 15% (4/25)

СД37 ад 23 62%, (18/29) 23 % (6/26) х)

СД76 ВД-66 ' 65% (19/29) 19% (5/26) х)

Ш1в ■ ИК0-ГМ1 65%: (19/29) - 42% (11/26) • .....- 1

HXÄ-II 2.05 . 93% (27/29) 53% (15/26) х)

жо-1 ; 93% (27/29) 56% (15/26)

Щ38 ИК0-20 83% (24/29) 38% (10/26) х)

Л-Ш-1 : ИКО-П ,, 75% (15/20) ■ 30% (5/20) х)

СД29 К 20 21% (6/29) 15% (4/26)

Примечание: знаком х) отмечены статистически достовернее различил, р0,05..

таблица 5

Частота обнаружения иымунокомпетентних клеток

в опухолях с иммунофенотипогл HIA-II"r и HH-II".

Антиген ЖАТ частота полоз оеак^й при юлу ительных унофеноткпе HU-II" Р

HIA-I сдоз Ш5 V 6/32 ВД 77 Вга 55 100% (14/14) 100% (14/14) 100% (14/14) 71% (29/41) 65% (19/29) 75% (9/12) х) х)

ОД5 СД7 СД4 еда А 50 I 210 HP 2/6 Ъ 533 71% (10/14) 93% (13/14) 100% (14/14) 86% (12/14) 22% С 9/41) 49% (20/41) 41% (17/41) 49% (20/41) х) х) к) <L

0Д1Э СД22 СД23 ЗД37 0Д75 ВД 37 ВД 39 : вд 6 Ж0-12 ВД 50 ВД 28 НД 66 21% (3/14) 51% (8/14) 36% (5/14) 60% (3/5) 21% (3/14) • 71% (10/14) 64% (9/14) 24% (10/41) 37% Ш/41) 27% (11/41) 28% (7/25) 27% (И/41) 31% (14/41) 37% (15/41) х) х)

СЯНв жо-гмг 57% (8/14) 54% (22/41)

сдза /-IFA-I £FB-Î да Ж0-20 " ffîD-II Ж0-40 . К 20 93% " (13/14) 100% (9/9) . 93% (13/14) 14% (2/14) 51% (21/41) 35% (11/31) 65% (24/37) 19% (3/4Г) х) х) х)

Примечание: знакоы х) отмечен» статистически достоверные различия, р<0,05.

., - .20 - . -

■ таблица б Частота .обнарУ/Ю^' им^окомпетентшж клеток......

в опухолях с иммунофенотипом РЭА1- к РЭА".

Антиген ШАТ • частота'положительных .реакиий

* РЗА+ при ищу носенотипе * . РЭА" Р

Н1А-1 \*/о/32 89% (25/28) и/>г (18/27) х)

СД53 НД 77 . ■ж. (18/20) . 50% (8/Х6) х)

СД45 Вга 55 87% (7/6) 82% (9/11)

. СД5 А 50 .43% (12/28) 26% (7/27) '

СД7 I 2Ю :. 75% (21/28) .44% (12/27) ■ х)

СД4 НР 2/6 04% (18/28) 48%: (13/27)

И8 Ь 533 ' 75% (21/23) 41% (11/27) х)

ОД» ВД.37 25,» (7/23) 22% (6/27)

СД22 ВД 39 57% (16/28) ¿О/а (7/27) х)

ВДб ' 39% (11/28) 18% (5/27) ... х)

ИКО-12 50| (9/16) 8% (1/12) х)

СД23 НД 50 . 3256'- (9/28) Ш% (5/27)

0Д37 ВД 28 . 50/о (14/28) 37% (Ю/27)

' СД76 НЛ66 - -ш (К/28) 30% "(3/27) Х-) ' 1

СДПв - Ж0-Ш1 64% (18/28) 44%. (12/27) .

СЩ5 -Ж0-Г2 ■• 45% (13/23) 37% (10/27)

ЩА-И 2.05 ш (25/23) 63% (17/27) - х)

¿2(0-1 т (25/28) 53% (17/27)

да Ж0-20 - 75% (21/28) 48% (13/27). х)

¿-Ш-1 дао-и . 62%: (13/28) 37% (7/19)

ИВ-1. . Ж0-40 61% (21/26) 64% (16/25)

СД29 К 20 29/Г (8/28) 7% (2/27)

Примечание: знаком х) откечены статистически достоверные различия, Р<0,05.

■ ^в-á; ' . ti • • ûtf {o ■ дно <в © »5 bjgß. ■ «-vu • as СОЕ et CDÏÏ »3 X3 • a-x is> Л Ь» № О ata н . ta Я . • ОС u . и t s S Х> О • Ä H сь: к *а a

. м *£ > M \ »-< N ■■•■S" 42 to CD A3 'к s? • I ^ ц i

: £ ^ &Э H-Í . -Ç. S1 к • ^ en -J го а ^ . 8 0> ы м о> Р] «ч 0» ч » £ i нч • 1

t-4 ГО ■i?* ^ S4 H T) it* л о to í-4 0 -J их ■ 01 \ ■fc да м с); л> •о t-> £, . СП Л» О СО Ol СП 'ЙЧ ^ Ь-1 ас 1 д; Но ' . X о

Лз Vï «о ^ ... ÍS4. . го it* СО M ..МО ** со (—i HI -J чз M . \ го .N • S <1 VA. СО " 1 is + <оа • S

»м О- M -V >4. СО •er -'со -, ê. • a н s .g n • ; g 3 '"•О H' CO S со о 1-4 О СЛ 1-1 1-1 О § jg . + i. 1 • $5 i

vP^biA M' . СО СО н Л> СЛ ** > .-S ' -Л OI' ел X • ъч œ • to CP to со \ ■о + о >• t-i SÍ 1

■ им M \ СО s CO M & ^ оз -о V ^ à . & со "О + "l p CJ 1 >i a-

тз

<t>

s

0

i§ •о

1

p>

n

' [»

Ы

S

-в..

О • g

s s to s

4

в ex

s

таблица д

Связь ^.г/нсх^еног/.т опухота со ■ стадией 'заболевания.

маскс-р ■|енотик ?ЭА -г — KXATI Т ~ -IIÄ-II; отип ¡¡посол;: VIA-ja :<ко-34 + - САШ ' Т" — X-ranifcH т —

Стадия I 13 б-х гп S/28 10/27 2 U Щ 5/29 11/26 17/« 42Й р4),05 3/14 13/41 21Д 32^ 3/24 11/31 ^сХ/0 35/с 11/33 5/22 Щ 23,* р<0,025 3/0 13/47 37,28% 3/6 13/47 37, ¿3/i? 2i3/ö

Стадия II 30 б-х 55;» 19/28 II/27 63$ 41>о р<0,01 23/29 7/26 8Q5& ; 27% . р<0,0005 . 10/14 20/41 Ш 4^5 i 17/24 13/31 7Ц 42,J .р<0,025 21/33 9/22 64;» ■ 4i/0; .. р=0,05 4/8 26/47 50Д .5558 5/8 25/47 62,53,i

Стадия На 20 б-х 35% 15/28 5/27 54£ 1% р<0,005 17/29 3/26 Ö92 .12,2 р*0,0005 8/14 12/41 57% '2ЗД р<0,05 11/24 9/31 4Sj£ 29/о 17/33 3/22 52/о ■ m р<0,0005 4/8 16/47 50,S 34& 4/8 16/47 50^ 54.t

Стадия Пб 10 б-х "ий- 4/2 6/27 HS 22Д 6/29 4/26 21£ 13* 2/14 8/41 Щ I9,5/t 6/24 4/31 25/iö 13.0 4/33 6/22 12% 21% 0/8 10/47 0* 21% I/o 9/47 12,5/C 19,i

Стадия III 8 б-х I4,5/t 2/28 6/37 ?/о 22/Ь 1/29 7/26 3/1 m р<0,025 1/14 7/41 7jS. 2/24 7/31 fe 20/о 1/33 8/22 O/'j 32/5 р<0,025 1/8 8/47 .12,9* O/o 9/47 fti I7X

.Стадия 1У I б-нэ" 1,5/5 1/28 0/27 0/29 1/26 0£ 0/14 I/4I Q£ 2,5* 0/24 I/3I 0,i 0/33 1/22 42 ; 0/8 1/47 Qfa S.% O/Ö 1/47 0/'o 2/o

ной железы.(таблица 8).

Для РЭА - положительных опухолей (таблица о) было характерно^** наличиз инфильтрации Т-супрессорно/цнтотоксичзсккш клетками (СДЬ Отмечалась перитумсральная В-клеточная реакция, различия по СД4+ Т-л1шфоцитам бт-ли несущественными. Экспрессия РЭА не имела чзткой связи с размерами первичной опухоли и регионарным метастазировани-ем, преобладала На стадия (таблица 8).

При оценке взаимосвязи иммунофенотила и рецепторного статуса " опухоли обнаружено, что большинство рецепторополоиитзльных по эстрогенам и прогестерону опухолей моноыорфно экспрессировадо антнге.1 мембран нировых глобул НМГС1 (таблица 9).

таблица 9

Взаимосвязь экспрессии НМР31 с рецепторным статусом

абсолютное число Реакция с МК А ЭДО-25 к Н!»Л51 Всего

% В раду мозаичная мономор^ная --

% в колонке 24 31 55.

Уровень рецепторов 'эстрогенов (р=Ю,С001)

отрицательны;? . 20 2 22

( <10 £чоль/мг) ■ 91;? % 40/

832 _____

полочштельнчй 4 , 2Э 33

( >10 фмоль/мг) 136 . ' "882

т 94л

Уровень рецепторов прогестерона (р=0,0142)

отрицательный' . 18 " 13 31

(< 10 фмоль/мг} Ш ■ 42/

75$ ' т

положительный о . 13 24

( >10 фмоль/мг) ' гь% 752 44£

. 25% - ■ 58*

- 24 -

Клинической значение местной иммунореактивности - при раке молочной железн. При оценке взаимосвязи.мастного иммунологического статуса - • и гистологической формы.опухоли обнаружено, что инфильтрация СД5+ Т-лимфоцктами выявлялась-преимущественно при медуллярном и прото-ковок раке и практически отсутствовала при дольковом и слизистом» Во всех четырёх случаяхыедуллярного рака отмечены повяленные уровни лейкоцитарной инфильтрации по антигенам 0Д45, СД53 и H3Ä-I,

умеренное-и выраженное-участие в реакции Т-лимфоцитов (СДЗ1", СД7Т)

> ч

и их субпопуляций (СД4+, СД8+}у моноцитов/макрофагов (СД11в"г, СД15 при отсутствии B-клеточной инфильтрации. Каких-либо особенностей „ местной иммунореактивности при протоковом и дольковом раке нами не выявлено. • . '•

Степень выраженности и структура лейкоцитарной инфильтрации опухоли определяется,. помимо отмеченных вше-антигенных особенно-1 стей злокачественных: клеток, и другими факторами и также в значительной мере-коррелирует с клиничеекиыи проявлениями рака молочной железы. Так, СДИв+ макрофаги и СД15+ макрофаги и сегментоядерные нейтрофилы достоверно чшце выявлялись у больных с ТZ (Ь0% и 57% соответственно) и ТЗ (75% и 100% соответственно) по сравнению с TI (14% и 9% соответственно), 005.

При отсутствии метастазов.в регионарные лимфатические узлы (таблица 10) существенно вьше был общий уровень лейкоцитарной инфильтрации (по маркёру ОД53), а также участие в реакции Т-лимфоци-тов (СД5 и ДО) и их субпопуляций (СД4 и СД8), 3-лимфоцитов (СД22) и их субпопуляций (0Д37 и СЩ76), а такие J-1SA.-V лимфоцитов.

В целом максимальная выраженность иммунных реакций in si-iu по подавлявщемй большинству маркёров икыунокомпетентных клеток отмечена во II (На) клинической стадии раха молочной железы с дальнейшим существенным снижением ко 116 - III стадиям. Вероятно, это

можно объяснить подавлением иммуннс.1 защиты "хозяина" в процессе опухолевой прогрессии. При распространении заболевания на регионарные лимфатические узлы роль иммунных: реашдий т «|1и теряет своё значение. Достоверные различия между На и Пб, II (На) и III стадиями кас лись Т-лимфоцитов.(СД5+ я СД7+) и их субпопуляции (СД4+ и 0Д8+), В-лимфоцитов (СД22+) и их субпопуляцмП (ЗД37 и СД76Т), СД38+ плазматических клеток и .¿-ЬРА-1лимфоцитов. Общий уровень инфильтрации, а также выявление других исследованных в работе маркёров ш.э.<унокомпетентных клеток не зависели от клинической стадии злокачественного процесса.

При оценке взаимосвязи прогрессировать с уровнем местных клеточных реакций можно отметить, что у больных раком молочной же- ■ лезы с выявленными в течение 1,5 лет наблюдения послс первичного лечения отдалёнными метастазами достоверно .реле отмечено участие з инфильтрации опухоли 0Д5+ Т-ляы$оци?ов, СД4Г Т-хсдлгров/иедук-торов иЛ-ЬРЛ-1"г иьмунокомпетентнкх клеток (таблица II).

Таким образом, моано отметить, что опухоли, объединённые з группу рак молочной зелезы, обладают своего рода шкрогетероген-ностью на уровне антигенных структур плазматических мембран злокачественных клеток. Такая же гетерогенность характеризует и местную иммуннутз реакция» организма, так как при одинаково" обще;'-! интенсивности лейкоцитарной инфильтрации опухоли субпопуляпионннй состав участвующих в ней иммуноцитов может быть весьма разнообразным. Возможно, эта микрогетерогенность, проявляющаяся на уровне как опухолевых, так и иммунокомпетентных ¡слеток, отражает индивидуальные особенности злокачественной популяции и является одним из факторов, влшгощик на клиническое течение рака молочной железы.

таблица 10

Сопоставление степени выраженности ин*нльтра:;ни опухоли имцунокомпетенгными клетками с регионарным цотасгазирозанием.

1 Антиген МКАТ частота лояокигельных реакций

I 'V, л. ПЛ. V«* метастазы метастазы Р

* » отсутствуют выявлены

Н1А-1 \/6/32 84% (32/38) 65% (И/17)

ОД53 ВД 77 . 83% (20/24) 50% - (6/12) <0,05

СД45 Впа 55 ' 85% (12/14) 80% (4/5)

ОД5 А. 50 - 45%. (17/38) .12% (2/17) <0,005

ОД7 I 210 71% (27/38) 35% (6/17) <0,01

СЙ4 ИР 2/6 68% (25/38) 29% И/т <0,005

СД8 Ь 533 76% (29/33) 18% (3/17) <0,0005

СД19 ВД 37 . 29% (И/38) 12% (2/17)

СД22 ВД 39 50% (19/38) 24% (4/17) <0,05

ВД5 39% (15/38) г o^ (1/17) <0,005

ЯК0-12 42% (8/19) 18% (2/11)

СД23 ВД 50 34% (13/38) 5% (1/17) <0,005

СД37 ВД 28 55% (21/33) . .10% (3/17) <0,005

СД75 ВД 6-3 ел* .С 20/33) _ Ж (4/17) ✓г» л ос

СДПв шо-пл 53% (20/33) 59% (10/17)

СД15 .•К0-Г2 42% (16/38) 41% (7/17)

ш-и 2.03 84% (32/38) 59% (10/17) <0,05

— — - ИКО-1 84% (32/33) 59,® (10/17) <0,05

одзз Ж0-20 58% (26/38) 47% (8/17) •

¿-Ж-1 ЖО-П 70% (19/27) 8% (1/13) <0,0005

£5В-1 Ш0-40 74?. (25/35) 69% (11/16)

СЛ29 К 20 ■ 18% (7/38) 18% (3/1?)

таблица II

Сопоставление степени выраженности инфильтрации опухоли икмунокомпетентньми клетками с прогрессировавшем.

Антиген • шг • Прог не выявлено 'ресаирование выявлено Р

ОД5 • ОД4 /-1РА-Г А 50 НР 2/6 шо-и 40% (6/15) 53% (8/15) 60% (9/15) 0% (0/7) 0% (0/7) 0% (0/7) < 0,05 <0,01 <0,01

Примечание: в таблице II лривед&ая только

статистически достоверные рг>злимая.

ВЫВОДЫ.-..

1. На основе исследования 28 эпителиальных и лейкоцитарных антигенов ня опухолевых и иммунокомпетентных клетк«х в тк®ни рака, молочной железы у 55 больных с помощью 32 моноклональных антител осуществлен отбор информативных маркеров р»ковых клеток и субпопуляций инфильтрирующих опухоль лейкоцитов для клинического использования.

2. Во всех случаях рака молочной келезы н* злокачественных клетках выявляются общеэпителиальный «нтиген Egp34 (МК*Т HE4-I25) и антиген мембран жировых глобул hmfg-1 (ШАТ ИКО-25).

3. Иммунофенотип клеток рака молочной железы характеризуется гетерогенной экспрессией молекул hla-1 ,ньд-Ш .ji-цепи vla -4, Х-гаптена, РЭА, антигена ИКО-84.

4. Отмечена вз»имосвязь между мвркервми опухолевых клеток:

при экспрессии молекул hla-T достоверно чаще обнаруживаются hla-ii . и vla-j.I антигены hia-ii выявляются только при сохранности молекул hla-i , экспрессия антигенов РЭА и ИКО-84 имеет положительную, а. РЭА и hmfg-1 - отрицательную корреляцию.

5. Иммунокомпетентны5 клетки, инфильтрирующие.рак молочной железы, зкспрессирупт широкий набор Т-клеточных, В-клеточных, мке-ломоноцитарных, активационных и нелинейных антигенов. Общую степень выраженности инфильтрации монно оценить с помощью УКАТ к об-щелейкошторным маркерам CD 45 (МК«Т Зга55 > и CD53 (¡щт HD77).

6. Фенотип злокачественных клеток взаимосвязан с характером местного иммунного ответа, ьаиболызая интенсивность лиьйоидной инфильтрации отмечена в опухолях, экспрессирующих молекулы H1A-I , hla-ii , РЭА и антиген ИКО-84 в сравнении с опухолями, не имеющими этих маркеров на мембране.

7. Маркерный профиль клеток рака молочной келезы не различается при I; II, III клинической стадии злокачественного процесса. Па. стадия в сравнении с III, достоверно чаще встречалась при наличии на клетках антигенов hla-I,hla-IX , РЭА, ИКО-84.

8. Структура местного иммунного ответа также взаимосвязана, с клинической картиной заболевания: максимальный уровень инфильтрации опухоли иммунокомпетентными клетками отмечен при На стадии. При вовлечении в процесс регионарных лимфатических узлов достоверно снижались общий уровень лейкоцитарной инфильтрации и инфильтрация опухоли Т- и R-лимфоцитами и cd11а+клетк5ми.

-гв -

9. Сохранность не злокачественных клетках антигенов hla.-ii класса, а также повышенные уровни инфильтрации опухоли CD5+, CD4+ Т-лимфоцитаыи и CDHa+ иммунокомпетентными клетками можно рассматривать как Фактор, увеличйвавдий вероятность благоприятно] прогноза при раке молочной железы.

СПЖОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТ«ЦИИ.

1. Блохина. Н.Г. .Артамонова Е.В. Состав иммунохомпетентшх клетек в ткани молочной железы при доброкачественных и злокачест венных поражениях//Общее овэнля конференция "Актуальные вопросы в биохимической и иммунологической диагностике злокачественных новообразований", Москва, 1989, тезисы докл.,с.7-8.

2. Блохин« Н.Г., Барышников A.D..Ермилов* В.Д., Артамонова Е.В. Некоторые особенности фенотипа первичных злокачественных опухолей молочной железы// Общесоюзная конференция "Акутальные вопросы в биохимической и иммунологической диагностике злокачест венных новообразований", Москв», 1989, тезисы дол.,с.5-6.

3. Т^пицин H.H..Кадагидзе З.Г.,Блохиня Н.Г., Барышников АЛ Ермилова В.Д..Артамонова Е.В., Колденхауэр Г..Бернард А. Экспрес сия лейкоцитарных и родственных им антигенов на клетках рака молочной железы человека-'/ оксперим.онкология.- I990.-t.I2, № 2,-с.54-58.

УЧАСТОК ииоюгтелъной техники вонц atsh ссср

пода,К печати *

гмил^Л тирай^^ so.