Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммуноглобулиновые профили биологических жидкостей организма в норме и при патологии

На правах рукописи

РГБ ОД

ГАЛКИНА '/ 3

ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА

ИММУНОГЛОБУЛИНОВЫЕ ПРОФИЛИ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ ОРГАНИЗМА В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 2002

Работа выполнена в Санкт-Петербургском Государственном Медицинском Университете имени академика И.П. Павлова.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Тотоляп АЛ

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Сесь Т.П.

доктор биологических наук, профессор Самойлова КЛ.

Ведущая организация:

Центральный Научно - Исследовательский Рентгено-Радиологи-ческнй Институт МЗ РФ

Защита диссертации состоится ¿-¿■/ОАС^!— 2002 г.

в час. на заседании Диссертационного Совета (Д.001.022.01) при ГУ НИИЭМ РАМН (197376, Санкт-Петербург, ул. акад. Павлова, 12).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИЭМ РАМН.

Автореферат разослан "

У % " _2002 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета

доктор медицинских наук Бурова Л.А.

РОУ-Уе-/ 0 .

<СО <г .С П

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Исследование уровня иммуноглобулинов в различных биологических жидкостях проводится многими исследователями в течение ряда лет. Однако до настоящего времени существует расхождение в полученных данных в различных лабораториях. Эти различия могут быть обусловлены отсутствием стандартных методов получения биологических жидкостей (БЖ) для исследования и тем, что для иммунологического анализа биологических жидкостей в различных лабораториях используют различные по чувствительности и специфичности методы исследования. В отечественных и зарубежных работах приводятся данные, полученные методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, турбидиметрическим или иммуноферментным методом [ВоЫег К. й а!., 1994]. При ряде местных воспалительных процессов, на начальных этапах, не оказывающих выраженного действия на весь организм, динамика уровней сывороточных иммуноглобулинов не имеет диагностической и прогностической ценности. Согласно современным литературным данным, наибольшие изменения патологический очаг вызывает именно в месте своей локализации [Brandtzaeg Р. 1997]. Следовательно, биологические жидкости, участвующие в жизнедеятельности соответствующих органов, тканей и систем органов, в наибольшей степени будут отражать активность местного патологического процесса, а иммунологический анализ соответствующей биологической жидкости позволит оценить состояние местного иммунитета [Тоголян А.А.,1999]. Хотя в последние годы появляется все больше работ, посвященных данной теме, периферическая кровь до настоящего времени остается основной биологической жидкостью для иммунологического исследования, иммуногло-булиновый состав ряда экстраваскулярных секретов остается мало изученным, нет единого мнения о месте синтеза иммуноглобулинов, выявляемых в различных биологических жидкостях.

В последние годы во всем мире в терапии различных заболеваний широко применяются препараты, обладающие иммуностимулирующим действием [Ершов Ф.И., 1998]. Вместе с тем, в современной литературе практически отсутствуют данные о лабораторных иммунологических показаниях для решения вопроса о выборе конкретного иммунокорригирующего препарата и для контроля эффективности проводимой терапии.

Таким образом, поиск новых подходов к терапии острых и хронических воспалительных заболеваний различной локализации, на основании изучения иммуноглобулиновых профилей биологических жидкостей, является актуальной проблемой.

Цепь исследования состояла в изучении иммуноглобулинового профиля различных биологических жидкостей человека в норме и при патологии с целью оценки информативности показателей местного синтеза иммуноглобули-

нов для диагностики, назначения иммунокорригирующей терапии и контроля ее эффективности.

Задачи исследования:

1. Определить границы нормальных значений иммуноглобулинов, показателей местного синтеза и проницаемости соответствующих гистогематических барьеров для таких биологических жидкостей, как цереброспинальная жидкость (ЦСЖ), назальный смыв, назофарингеальный секрет, бронхоальвеоляр-ная жидкость (БАЖ), эякулят, вагинальный секрет;

2. Изучить влияние характера и типа воспаления на состояние гистогематических барьеров (ГГБ) и на местный синтез иммуноглобулинов различных классов и подклассов на примере острых и хронических заболеваний инфекционной и аллергической природы;

3. Изучить возможность использования интегральных показателей местного синтеза иммуноглобулинов (относительный коэффициент секреции -ОКС) и проницаемости ГГБ (О) для назначения местной иммунокорригирующей терапии;

4. Определить динамику иммуноглобулинового профиля различных биологических жидкостей при проведении местной и системной иммунокорригирующей терапии.

Научная новизна и теоретическое значение исследования

Проведен полный анализ иммуноглобулинового состава назальных смывов, смывов из гайморовых пазух, назофарингеального секрета, ЦСЖ, бронхо-альвеолярной жидкости, вагинального секрета, эякулята практически здоровых людей.

Определены границы нормальных значений иммуноглобулинов классов [цА, 1§М, ^О, ^Е, подклассов и б^А с использованием адекватного современного лабораторного метода исследования - иммуноферментного твердофазного анализа.

Определен характер происхождения иммуноглобулинов в назальных смывах, назофарингеальных смывах, БАЖ, вагинальном секрете, эякуляте на основании анализа интегральных показателей (ОКС,<2).

Определена зависимость иммуноглобулинового состава вагинального секрета, степени и характера местного синтеза иммуноглобулинов, а также функционального состояния вагинального ГГБ от циклических гормональных изменений в процессе физиологического менструального цикла.

Впервые выявлен местный синтез в нижних отделах женского репродуктивного тракта при кандидозном вагините и микоуреаплазмозе.

Впервые изучено влияние местной терапии линиментом циклоферона на показатели местного иммунитета нижних отделов женского репродуктивного тракта пациентов с инфекционно-воспалительными заболеваниями и дисбио-зами женской половой сферы. Определены показания для назначения терапии

циклофероном. Выявлены критерии эффективности иммунокорригирующей терапии линиментом циклоферона.

Впервые извело влияние местной терапии рекомбинантным 1Ь-2 на показатели местного иммунитета носа и околоносовых пазух пациентов с гнойными синуситами.

Впервые изучено влияние системной терапии рекомбинантным 1Ь-2 на показатели местного иммушггета бронхов и легких пациентов с атопической БА.

Практическое значение исследования

Показана высокая информативность и целесообразность использования иммуноглобулиновбго анализа биологической жидкости из патологического очага с применением интегральных показателей для оценки состояния местного иммунитета, выявления характера и механизма нарушений защитно-регуляторных функций соответствующего ГГБ.

Определены границы нормальных значений иммуноглобулинов в ЦСЖ, назальных смывах, назофарингеальных смывах, БАЖ, вагинальном секрете, эякуляте с помощью иммуноферментного метода.

Показана диагностическая значимость изучения иммуноглобулинового состава биологических жидкостей, определения степени нарушения проницаемости соответствующих ГГБ для оценки состояния и степени нарушения функционирования местного иммунитета при гнойных синуситах, атопиче-ском дерматите, атопической БА, фиброзно-кавернозном туберкулезе легких, простатите, вагинальных инфекциях.

Показана большая диагностическая значимость изучения иммуноглобулинового состава смывов из гайморовых пазух по сравнению с назальными смывами при гнойных синуситах.

Определены иммунологические показатели вагинального секрета, являющиеся показаниями для назначения местной терапии линиментом циклоферона при гинекологической патологии.

Изучен характер изменения иммуноглобулинового состава вагинального секрета при различных репродуктивно значимых вагинальных инфекциях и дисбиозах.

Показана диагностическая значимость использования анализа иммуноглобулинового состава вагинального секрета и функционального состояния вагинального ГГБ для оценки характера и степени нарушений местного иммунитета при инфекционной патологии нижнего отдела женской репродуктивной сферы.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Определение иммуноглобулинового состава различных БЖ, функционального состояния соответствующих ГГБ с использованием анализа интегральных показателей (ОКС, С№), <2(А1Ь)) является информативным методом оценки состояния местного иммунитета, позволяющим дифференцировать ха-

рактер и механизм иммунопатогенетическнх нарушений защитно-регулятор-ной функции гчсто-гсматчческих барьеров.

2. Вычисление интегральных показателей - коэффициентов проницаемости и секреции ((QAlb), Q(Ig), ОКС) и их графическая интерпретация являются высоко информативным методом оценки состояния местного иммунитета, позволяющим производить анализ функционального состояния различных ГТБ, выявлять характер происхождения иммуноглобулинов в БЖ.

3. Иммуноглобулиновые профили БЖ при воспалении зависят от характера течения воспаления (острое и хроническое), от природы воспаления (инфекционное или аллергическое), вида патогена.

4. Динамика иммуноглобулинов в БЖ отражает состояние местного иммунитета и функциональное состояние соответствующего ГТБ, а мониторинг иммунологических показателей БЖ является необходимым условием назначения и контроля эффективности местной иммунокорригирующей терапии.

Апробация исследования и внедрение результатов в практику

Результаты исследований доложены на следующих научно-практических конференциях и симпозиумах: II -V международных научных конференциях "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, май, 1998, 1999, 2000, 2001 г.); Fourth John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology (Пущино, сентябрь 1998); 4th World Congress on Trauma, Shock, Inflammation and Sepsis, Munich (Germany), (март 1998 г.); заседание Санкт-Петербургского научного общества иммунологов, (Санкт-Петербург, апрель 1999г); VII Конгресс акушеров и гинекологов стран Балтийского моря (Санкт-Петербург, май, 1999 год), 5th World Congress on Trauma, Shock, Inflammation and Sepsis, (Munich (Germany), февраль-март 2000 г.); II Российский форум "Мать и Дитя" (Москва, сентябрь, 2000 год), World Congress of Lung Health and 10th ERS Annual Congress (Florence, Italy. August 30-September 3, 2000); Научно-практическая конференция «Инфекционно-воспалительные заболевания мочеполовой системы», (Новосибирск, 1-3 марта 2000г.); 14-th European Immunology Meeting EFIS 2000, (23-27 September, Poznan, Poland); European Congress of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (Euromedlab) (Prague, 2001).

Результаты исследований внедрены в практическую работу лаборатории клинической иммунологии, отделений гинекологии, дерматовенерологии, ЛОР-болезней и госпитальной терапии клиник СПбГМУ им. акад. И..П. Павлова.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 29 печатных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 170 страницах, содержит 25 рисунков, 18 таблиц. Библиография содержит 183 источника, в том числе 50 отечественных и 133 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для определения границ нормального уровня иммуноглобулинов различных классов и подклассов, а также для выявления показателей их местного синтеза в различных биологических жидкостях было обследовано 78 образцов биологических жидкостей практически здоровых лиц, проживающих в Северо-Западном регионе, а именно: цереброспинальная жидкость (17 чел), брон-хоальвеолярная жидкость (8чел), назальные смывы (12чел.), назофарингеаль-ные смывы (Ючел.), вагинальный секрет (24чел), эякулят (Ючел), секрет предстательной железы (7чел), сыворотка крови (78чел).

Всего обследовано 334 больных, находящихся на стационарном и амбулаторном лечении в клиниках СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова, в Институте мозга РАН, в районных КВД г.С.-Петербурга. В соответствии с клиническими диагнозами, верифицированными согласно общепринятым клиническим, инструментальным, функциональным критериям, все больные были разделены на следующие группы, представленные в таблице 1.

Таблица 1

Группы обследованных больных по патологиям

Локализация патологии Количество больных Нозологические формы Исследуемые биологические жидкости

Патология ЛОР-органов 70 1 .Гнойные синуситы (п=70) Назальные смьгеы Смьшы из гайморовых пазух

Патология дыхательной системы 50 1.Атопическая бронхиальная астма (БА) (п=10) 2.Фибрознокавернозный туберкулез легких (ФКТЛ) (п=40) Бронхо-альвеолярная жидкость (БАЖ)

Патология нервной системы 53 1.Глиомы головного мозга (п=16) 2.Рассеянный склероз (РС)(п=20) 3.Васкулиты (п=17) Цереброспинальная жидкость (ЦСЖ)

Патология мочеполовой системы 111 (38 м) (73 ж) 1.хронический простатит (п=38) Эякулят, Секрет предстательной железы (СПЖ)

1.Бактериальный ваганит (п=53) 2.Кандидозный вагинит (п=20) Вагинальный секрет

Кожные заболевания 50 1 .Атопический дерматит (АД) (п=50) Назофарингеальный секрет

Исследование вышеперечисленных биологических жидкостей проводилось одномоментно с анализом периферической крови пациента.

Концентрацию иммуноглобулинов классов А, М, G, Е и подклассов IgG (IgGl-4), slgA во всех биологических жидкостях определяли иммунофермент-ным методом с помощью наборов с моноклональными антителами («Поли-гност», Санкт-Петербург, Россия).

Концентрацию IL-8 в биологических жидкостях определяли иммунофер-ментным методом с помощью диагностических тест-систем для определения человеческого IL-8 («Цитокин», С.-Петербург, Россия).

Регистрацию результатов проводили на иммуноферментном анализаторе планшетного типа EJx808 (Biolec, USA).

Содержание альбумина в биологических жидкостях определяли колориметрическим методом с бромкрезоловым зеленым («Bio Test», Germany).

Определение функционального состояния (степени проницаемости) ГТБ проводилось по сравнительной оценке уровней концентрации альбумина в БЖ и в сыворотке крови (Q (Alb) - коэффициент проницаемости):

Q (Alb) = (Alb бж./А1Ь ск.) xlO3'

Определение характера происхождения иммуноглобулинов в БЖ (местный синтез/диффузия), степень местного синтеза иммуноглобулинов проводились на основании анализа следующих интегральных показателей [Mathews K.P., 1981; Blennow К. et al, 1994]:

1) коэффициент для иммуноглобулинов". Q (lg) = (Ig бж./Ig ск.)х103*

2) относительный коэффициент секреции иммуноглобулинов:

ОКС = (Ig бж. х Alb ск.) / (Ig ск.х Alb бж.)*1 или ОКС = Q (Ig) / Q (Alb)*

Илшунокорригирующая терапия. Было изучено влияние иммунокорри-гирующей терапии ронколейкином (г11-2, «Биотех», С-Петербург, Россия) при местном (гнойные синуситы), системном (атопическая БА) введении и цикло-фероном (индуктор интерферонов, «Полисан», С-петербург, Рорссия) при местном (вагинальные инфекции и дисбиозы), системном (атопический дерматит) введении на иммуноглобулиовые профили БЖ.

Статистическая обработка полученных результатов исследований проводилась с использованием стандартного пакета программ прикладного статистического анализа Microsoft Excel 97 для Windows. Помимо этого использовали параметрический метод корреляционного анализа и непараметри-

1 Примечание: * - условные обозначения в расчетных формулах: lg бж. -

концентрация иммуноглобулина в биологической жидкости; Ig ск. - концентрация иммуноглобулина в сыворотке крови; Alb бж. - концентрация альбу-

мина в биологической жидкости; Alb ск. - концентрация альбумина в сыворотке крови.

ческий метод ранговых корреляций Спирмена. Различие двух сравниваемых показателей считалось достоверным при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

В результате анализа полученных данных было показано, что в норме иммунокомпетентные клетки, расположенные в ассоциированной со слизистыми лимфоидной ткани синтезируют различные иммуноглобулины, в зависимости от типа биологической жидкости. Так, синтезированные местно slgA и IgA выявлены в назофарингеальном секрете, в смывах из полости носа, в БАЖ, в вагинальном секрете. Кроме того, в БАЖ выявлен местносинтезиро-ванный IgE, а в вагинальном секрете - IgG (в основном IgGl). В эякуляте здоровых мужчин определен синтезированный местно секреторный IgA. В ЦСЖ, которая является жидкостью замкнутого пространства, выявлен местный синтез IgG.

Таким образом, в норме для каждой исследованной БЖ существует свой спектр иммуноглобулинов, синтезируемых иммунокомпетентными клетками подслизистого слоя (для внешних секретов) или синтезируемых плазматическими клетками, расположенными в паренхиме (для БЖ замкнутых пространств). Полученные концентрации иммуноглобулинов в БЖ практически здоровых людей приведены в таблице 2 и 3.

Таблица 2

Концентрация иммуноглобулинов (мг/л) в цереброспинальной жидкости и секретов дыхательных путей практически здоровых людей (М±т)

Класс иммуноглобулина ЦСЖ Назальные смывы Назофарингеаль-ный секрет БАЖ

IgA 1,48±0,3 34,6±5,6 161,8±69,7 7,39+3,03

IgM 0,6±0,2 1,1+0,5 6,2±2,3 0,17±0,09

IgG 25,1±1,9 12,1+3,3 57,9±2б,2 3,21±1,60

slgA 0,004±0,0005 5,3±1,5 30,2±10,0 0,035±0,02

IgGl 18,9±4,5 9,3±1,6 34,2±10,8 3,7+1,42

IgG2 5,Iii,2 2,0±0,7 6,5+2,4 0,9110,39

IgG3 1,0±0,2 1,1+0,3 4,0±1,5 0,27+0,14

IgG4 0,49±0,08 ' 0,5+0,1 2,2±0,7 0,30+0,16

IgE 0,0075±0,003 0,07±0,07 0,14+0,14 0,23±0,14

Таблица 3

Концентрация иммуноглобулинов (мг/л) в секретах мочеполовой системы практически здоровых людей (М±т)

Класс иммуноглобулина Вагинальный секрет Эякулят

1 фаза цикла 2 фаза цикла

IgA 216,6±19,9- 142,5±21,2 ' 17,3114,2

IgM 17,2±3,8 13,3±4,9 0,53±0,38

ige 308,8±27,4" 197,6±27,6 40,39±5,61

slgA 51,2±4.0- 80,1±13,1 5,23±1,62

IgGl 208,8±31,0* 132,6±24,5 35,14±5,42

IgG2 4б,2±8,7 34,4±7,3 15,6±3,6

IgG3 12,8±3,6 15,1 ±3,6 1,91±0,69

IgG4 10,0±2,8 9,4±2,4 2,31±1,02

IgE* 0,41±0,10 0,65±0,14 0,23+0,14

Примечания: *- концентрация IgE приведена в кЕ/л, достоверность отличий между группами (•р<0,05;"р<0,01).

Концетрация иммуноглобулинов в биологических жидкостях при патологии может меняться как за счет изменения местного синтеза, так и за счет изменения концентрации иммуноглобулинов, поступающих сыворотки крови в связи с изменением проницаемости соответствующего ГГБ. Выраженность этих изменений зависит и от места выработки биологической жидкости, и от характера патологического процесса. Местные воспалительные реакции приводят к изменению сосудистой проницаемости, притоку клеток, участвующих в воспалении, накоплению токсических продуктов, изменению тканевых функций. Инфекционные процессы, протекающие на слизистых, вызывают широкий хемокиновый ответ. Примером такого ответа может служить стимуляция эпителия к синтезу 1Ь-8, экспрессии рецепторов к 1Ь-8 и положительный хемотаксис нейтрофилов в очаг воспаления под действием этого хемоки-на. Известно, что нейтрофилы играют важную роль в формировании местного ответа на бактериальную инфекцию, поражающую слизистые организма [БуапЬо^ С. й а!., 1999]. Определение концентрации 1Ь-8 находит все более широкое применение в клинической практике. Повышение концентрации 1Ь-8 в периферической крови расценивается как показатель наличия воспалительного процесса в организме. Результаты проведенной работы свидетельствуют о том, что повышенная концентрация 1Ь-8 в различных БЖ является информативным показателем наличия местного воспаления на любой стадии заболевания, в том числе и хронического. Уровень этого цитокина в БЖ коррелирует с характером течения локального патологического процесса. При всех исследованных патологиях, при отсутствии острых воспалительных процессов, уровень 1Ь-8 в периферической крови оставался в пределах физиологической

нормы, в то время как в БЖ, полученной из очага воспаления, его концентрация достоверно превышала нормальный уровень.

При изучении ЦСЖ было показано, что сдвига, выявляемые в составе ЦСЖ при PC, глиальных опухолях и нейроваскулитах отличаются как по степени выраженности, так и по механизмам, лежащим в их основе. Например, при глиальных опухолях головного мозга увеличение концентрации иммуноглобулинов в ЦСЖ (р<0,05) в основном вызвано нарушением целостности ГЭБ и резким повышением его проницаемости для макромолекул. При демиелини-зирующих заболеваниях, в частности при PC повышенная концентрация иммуноглобулинов в ЦСЖ обусловлена как увеличенным интратекальным синтезом, так и усиленным поступлением сывороточных иммуноглобулинов через ГЭБ. Эти данные соответствуют результатам, полученным другими авторами [Claudio L. et al, 1994]. Среди подклассов IgG наиболее высокий интрате-кальный синтез был показан для IgGl и IgG2. При системных заболеваниях (нейроваскулитах) повышенная концентрация иммуноглобулинов в ЦСЖ, в частности IgE, обусловлена только повышением проницаемости ГЭБ. Степень повышения проницаемости ГЭБ и концентрации иммуноглобулинов при нейроваскулитах значительно ниже, чем при PC (р<0,05). Следовательно, выявление механизмов иммуноглобулиновых сдвигов в составе ЦСЖ может служить дополнительным диагностическим критерием для дифференциальной диагностики некоторых неврологических заболеваний.

В результате проведенного исследования было показано, что иммуногло-булиновые профили экстраваскулярных секретов зависят от целого ряда патологических факторов. При инфекционных заболеваниях придаточных пазух носа выявлены значительные изменения иммуноглобулинового состава смывов из полости носа и пазух. Иммунологические изменения, выявляемые в периферической крови пациентов, не зависели от типа течения синусита. При остром течении заболевания концентрация иммуноглобулинов, поступающих из сыворотки крови в назальные смывы (IgM, IgG) и Q(IgM), Q(IgG) более чем в два раза превышали их концентрацию при подостром течении синуситов (р<0,05). Это обусловлено более выраженным повышением проницаемости ГГБ носа при остром характере течения синуситов (при остром течении концентрация альбумина в смывах из пазух и носа и Q(Alb) в 2 раза выше, чем при подостром течении). В данной работе местный синтез IgE иммунокомпе-тентными клетками субмукозного слоя носа выявлен при подостром течении заболевания инфекционной природы. Повышенный уровень IgE в смывах из пазух при подостром течешга синусита (р<0,05), скорее всего, обусловлен развитием сенсибилизации в результате длительного контакта с патогеном. Кроме того, при остром течении выявлена достоверно сниженная концентрация slgA (р<0,05), а при подостром концентрация этого иммуноглобулина выше нормы(р<0,05). Местный синтез IgA выявлен при обоих типах течения синусита. Следует отметить, что все выявленные изменения наиболее выражены в смывах из пазух. При подостром течении отек слизистой пазух менее выра-

жен, воспалительные процессы протекают менее интенсивно. Вероятно, это обуславливает меньшую степень увеличения концентрации иммуноглобулинов в смывах из пазух пациентов данной группы (по сравнению с острым течением). Концентрация 1Ь-8 в назальных смывах и смывах из пазух пациентов с гнойными синуситами достоверно превышала нормальный уровень(р<0,01). При остром течении синусита это повышение более выражено, чем при подо-стром. В смывах из пазух при острых гнойных синуситах уровень 1Ь-8 оставался достоверно выше нормы и после исчезновения клинических признаков воспаления. Это свидетельствует о несовпадении по времени клинического и иммунологического выздоровления при данной патологии. Следовательно, выявленные иммунологические изменения в составе смывов из носа и гайморовых пазух при острых гнойных синуснтах отражают стадию локального патологического процесса и могут помочь клиницисту в определении характера течения синусита. Местное введение РЛ при гнойных синуситах приводило к достоверным изменениям концентрации показателей гуморального иммунитета в смывах из пазух и назальных смывах. Эти изменения выявлялись уже через 24 часа после начала терапии. При остром течении синусита выявлялось постепенное снижение исходно повышенных концентраций иммуноглобулинов, альбумина и 1Е-8 в назальных смывах и смывах из пазух пациентов. При подостром течении РЛ вызывал повышение проницаемости 11Ь носа и пазух, что приводило к усилению притока иммуноглобулинов из сыворотки крови в пораженную область (рис 1. а,б). Такие изменения способствовали усилению местных иммунологических реакций и как следствие клиническое выздоровление у пациентов, получавших иммунотерапию, происходило на 2-3 дня раньше, чем у пациентов, находившихся на традиционной терапии. Следовательно, местная иммунотерапия при острых гнойных синуситах приводит к усилению локальных иммунных реакций, в результате чего наблюдается более быстрое клиническое выздоровление.

Иммуноглобулиновый состав ларингеального секрета исследован у пациентов с атопическим поражением респираторных органов, сочетающимся с атопическим дерматитом. У большинства пациентов обследованной группы отмечалась гиперемия слизистой глотки, гипертрофия небных миндалин. Концентрация альбумина в назофарингеальных секретах пациентов с атопическим дерматитом достоверно превышала норму (р<0,05), что может свидетельствовать о повышенной проницаемости ГТБ носоглотки при АД. В назофарингеальных секретах большинства обследованных пациентов (70%) концентрация превышала нормальные показатели в 100 раз (р<0,01), причем у 40% уровень ^Е в крови соответствовал физиологической норме. Зависимость между концентрацией ^Е в назофарингеальном секрете и сыворотке крови пациентов не выявлена, а значения ОКС для ^Е были >1. Очевидно, что у этой группы пациентов существует местный синтез 1£Е клетками слизистого и подслизистого слоя носоглотки.

О 1ЦА)

после

О'ЛЫ

ч ь е

Число пррцедур

цез

через («д.

—Сп-триг т»«<м /'•еех-'ржт*«**

— и»}* 4 "41*?

0(1803)

го

л (. а числе процедур

Рис.1. Динамика некоторых иммунологических показателей в ходе местной имму-нокорригиругощей терапии: динамика (Х1&А) -а) (назальные смывы/сыворотка крови) и ^03 - б) в смьшах из гайморовых пазух пациентов с различным течением гнойных синуситов при терапии ронколейкином; динамика (20^А) -в), и СК1£03) -г) (вагинальный секрет/сыворотка крови) при терапии линиментом циклоферона пациентов с вагинальными инфекциями и днсбиозами. Примеча1ше: *- достоверность отличий от нормы (р<0,05).

б

в

В назофарингеальных секретах у 30% обследованных пациентов выявлено значительное увеличение концентрации (р<0,05), что может косвенно указывать на активность местных иммунологических реакций у данных пациентов. Несмотря на увеличение проницаемости ГГБ носоглотки при АД концентрация 1&А, б^А, ^М, ^О в назофарингеальных секретах статистически не отличалась от нормальных значений, а весь IgA, определяемый в секрете, синтезируется месгно. Полученные данные могут свидетельствовать о том, что, не смотря на повышенную проницаемость ГГБ, у данной группы пациен-

тов сохранилось нормальное функционирование местной иммунной системы носоглотки. Обследованной группе пациентов проводили системную терапию циклофероном. У пациентов с положительным клиническим эффектом терапии отмечалось повышение местного синтеза slgA (р<0,05). Выявленное снижение концентрации IgE в назофарингеальном секрете при положительном эффекте проводимой терапии (р<0,05), скорее всего, обусловлено снижением местных воспалительных реакций и постепенным восстановлением нормальной проницаемости l i b барьера глотки. Скорее всего, при данном способе введения циклоферон не оказывает непосредственного влияния на состояние слизистой носоглотки, и выявляемые изменения в составе назофарингеального секрета, являются вторичными по отношению к иммунологическим сдвигам, определяемым на системном уровне.

Иммуноглобулиновые профили БЖ могут принципиально различаться в зависимости от типа и характера воспаления. Это хорошо видно на примере изменений иммуноглобулинового состава БАЖ при атопической БА и ФКТЛ. При фиброзно-кавернозном туберкулезе легких основным этиологическим фактором является Mycobacterium tuberculosis - внутриклеточный паразит, который при данном типе туберкулеза в первую очередь поражает альвеолярные макрофаги. БА - хроническое воспалительное заболевание дыхательных путей, которое характеризуется выраженной гиперреактивностью дыхательных путей на специфические и неспецифические стимулы. При сравнении иммунологического состава БАЖ больных с ФКТЛ и атопической БА были показаны достоверные отличия, обусловленные различной природой изменений в состоянии местного иммунитета бронхов. Степень повреждения ГГБ легких при ФКТЛ достоверно выше, чем при атопической БА (р<0,05): проницаемость ГГБ легких при атопической БА соответствует норме или превышает ее в среднем в 2 раза, а при ФКТЛ проницаемость ГГБ в 7-8 раз выше, чем у здоровых людей. В отличие от БА при ФКТЛ в БАЖ выявляются достоверно повышенные концентрации slgA, IgA, IgG2, IgG3, IgG4 (p<0,05). Достоверно повышенный уровень IL-8 в БАЖ был выявлен как при ФКТЛ (р<0,01), так и при атопической БА (р<0,05). Однако концентрация данного цитокнна при ФКТЛ в несколько раз превышала его концентрацию при БА (р<0,05), что, вероятно, вызвано тем, что пациенты с ФКТЛ были обследованы в фазу обострения заболевания, а пациенты с БА - в стадию затихающего обострения. Достоверные различия в проницаемости ГГБ легких при ФКТЛ и БА могут служить новым диагностическим критерием в дифференциальной диагностике туберкулеза и атопической БА. Очевидно, что столь значимые различия в нарушении проницаемости ГГБ легких и концентрации иммунологических показателей в БАЖ при данных заболеваниях могут помочь клиницисту в постановке диагноза, особенно при расположении патологического очага в нижних отделах легких. Системное введение РЛ пациентам с атопической БА приводило к снижению местных воспалительных реакций, повышению концентрации IgA и slgA в БАЖ. Вероятнее всего при системном введении противовос-

палительный эффект РЛ достигается путем активации клеточно-опосредован-ных реакций, как на системном, так и на местном уровне, на что косвенно указывает выявленное ранее повышение концентрации TNF-a в периферической крови аналогичной группы пациентов. [Перадзе А.Т. и соавт., 1998].

На примере изменений, выявляемых в иммуноглобулиновом составе вагинального секрета обследованных групп пациентов видно, что на показатели местного иммунитета значительное влияние оказывает вид возбудителя, вызывающего данную патологию. По изменениям проницаемости lib влагалища и характера иммуноглобулиновых сдвигов исследованные заболевания нижних отделов женского репродуктивного тракта могут быть разделены на три группы:

1. острая форма неспецифического бактериального вагинита: заболевание, при котором повышение проницаемости ГТБ влагалища обуславливает повышение концентрации иммуноглобулинов сывороточного происхождения в вагинальном секрете. Кроме того, при данной патологии выявлен повышенный уровень slgA в вагинальном секрете, что может свидетельствовать об усилении синтеза этого класса иммуноглобулинов при исследованной патологии;

2. .хронический неспецифический бактериальный вагинит: заболевания, при которых снижение проницаемости ГТБ влагалища (р<0,001) приводит к снижению концентрации иммуноглобулинов сывороточного происхождения в вагинальном секрете. Эти изменения сочетаются со снижением местного синтеза IgGl и slgA (р<0,01), что может быть связано с альтерацией эпителия.

3. бактериальный вагиноз, кандидозный вагинит, урогенитальный мико-уреаплазмоз: заболевания, при которых выявляется повышение проницаемости ГТБ влагалища (р<0,001) и снижение концентрации иммуноглобулинов в вагинальном секрете (р<0,001). Вероятно, это вызвано тем, что при данной патологии местный синтез иммуноглобулинов снижен (IgA, slgA, IgG), а сывороточные иммуноглобулины не восполняют возникший дефицит. Важно отметить, что при кандидозном вагините и микоуреаплазмозе выявлен местный синтез IgE, что может указывать на существование местных IgE - опосредованных аллергических реакций при этой инфекционной патологии.

Местная терапия линиментом циклоферона у пациентов с положительным клиническим эффектом лечения вызывала повышение проницаемости ГТБ влагалища в начале курса проводимой терапии, это приводило к достоверному повышению концентрации сывороточных иммуноглобулинов в вагинальном секрете. Увеличение концентрации иммуноглобулинов непосредственно в воспалительном очаге вызывало повышение активности и эффективности местных гуморальных защитных реакций. Таким образом, иммунологическое исследование состава вагинального секрета может подтвердить наличие патологии нижних отделов женской половой сферы, отразить состояние местного иммунитета влагалища, служить дополнительным критерием существования определенного заболевания инфекционной природы.

При хронической патологии мужского урогенитального тракта (хронический простатит) выявлено повышение проницаемости 11 Ь простаты и увеличение как СК^), так и концентрации иммуноглобулинов в эякуляте. При данной патологии б^А играет важную роль в защите слизистой мужского мочеполового тракта, т.к. в эякуляте обследованных пациентов его концентрация достоверно превышала нормальный уровень (р<0,05). Повышение в эякуляте концентрации иммуноглобулинов, поступающих из периферической крови, при данной патологии описано в работах ряда авторов [К^ег Ь., 1996]. Кроме того, при простатите выявлен местный синтез 1{>А, в то время как в норме он отсутствует. Следовательно, повышение концентрации иммуноглобулинов при хроническом простатите обусловлено сочетанием двух причин: увеличенным притоком иммуноглобулинов из сыворотки крови в связи с повышенной проницаемостью ГТБ простаты и изменением местного синтеза иммуноглобулинов в результате местной воспалительной реакции. Уровень 1Ь-8 в эякуляте и СПЖ при простатите достоверно превышал норму (р<0,05), однако, не было выявлено корреляции между концентрацией этого цигокина в СПЖ и эякуляте, и его уровень в СПЖ не зависел от активности местных воспалительных реакций. Таким образом, выявление описанных изменений в составе эякулята может служить одним из критериев для диагностики патологии мужского урогенитального тракта.

В настоящее время в лечении различных заболеваний широко применяются местная терапия. В данной работе впервые было изучено влияние на показатели местного иммунитета локальной иммунокорригирующей монотерапии ронколешшном на течение гнойных синуситов и 5% линимента циклоферона на гинекологические инфекции. Проведенное исследование показало, что в результате местной иммунотерапии уменьшалась длительность заболевания, не требовалось проведение антибиотикотерапии. Эффективность терапии гнойных синуситов РЛ составила 95%, урогенитапьной инфекции линиментом циклоферона - 75%. Влияние проводимой терапии на показатели местного иммунитета пациентов выявлялось уже через сутки после начала терапии. В результате ретроспективного анализа полученных данных было показано, что для повышения эффективности проводимой иммунотерапии при генитальных инфекционных заболеваниях необходимо учитывать дополнительные лабораторные критерии. Такими критериями могут служить исходные показатели вагинального секрета: достоверно повышенная проницаемость ГТБ влагали-ща(рис 1.в), наличие местного синтеза ЩЕ, сниженные СК1{^\) и <3(1§01), вызванные нарушением их местного синтеза. Результаты, полученные при мониторинге иммунологических показателей вагинального секрета в ходе иммунотерапии линиментом циклоферона, позволили объективно прогнозировать степень эффективности данной терапии на начальных этапах лечения. Так, было показано, что достоверное повышение <3(1{£А), С}(51;»А.), СК^ОЗ) (рис.1 г) уже после двух первых процедур свидетельствует о положительном эффекте проводимой терапии.

Согласно полученным результатам изучение иммуноглобулиновых профилей БЖ организма имеет важную диагностическую значимость дня диагностики широкого ряда патологий, для назначения терапии и контроля ее эффективности. Показатели биологических жидкостей из инфекционного очага отражают выраженность местного воспаления и могут иметь диагностическое значение при локальных патологических процессах. Изменения иммуноглобу-линового состава секретов отражают изменения в функционировании местного иммунитета и зависят от патофизиологических механизмов, вызывающих эти изменения.

Таким образом, полученные результаты доказывают большую целесообразность использования местных показателей для определения показаний к местной иммунокорригирующей терапии и контроля ее эффективности. Согласно приведенным в данной работе и литературным данным, местная иммунотерапия является эффективным и перспективным способом лечения, и более подробное изучение возможностей применения данной терапии при более широком спектре патологий может внести заметный вклад в терапию многих заболеваний. При ряде заболеваний, протекающих на слизистых, на ранних этапах невозможно выявить изменения на системном уровне. Однако иммунологический анализ биологической жидкости непосредственно из очага поражения позволяет оценить состояние местного иммунитета на любых стадиях патологического процесса. Кроме того, ранняя диагностика заболевания способствует более быстрому выздоровлению, уменьшению патогенного влияния на организм в целом.

На современном уровне развития клинической иммунологии изучение им-муноглобулииового профиля БЖ организма в норме и при различных патоло-птческих процессах, проявляющихся в первую очередь на локальном уровне, представляется необходимой частью иммунологического обследования, позволяющей значительно помочь клиницисту в постановке диагноза.

ВЫВОДЫ

1. Определены границы нормальных значений уровня иммуноглобулинов, показателей их местного синтеза для различных биологических жидкостей (в назальных смывах, назофарингеалыюм секрете, ЦСЖ, БАЖ, вагинальном секрете, эякуляте) и проницаемости соответствующих гисто-гематических барьеров.

2. В биологических жидкостях здоровых людей выявляются различные классы местносинтезируемых иммуноглобулинов, а именно: б^А и IgA в назальных смывах, назофарингеалыюм секрете, БАЖ, вагинальном секрете. Кроме этого в БАЖ определяется местно синтезированный а в вагинальном секрете ^О (в основном ^01).

3. Для острого воспаления, затрагивающего слизистые ткани, характерно значительное повышение проницаемости соответствующего гистогематиче-ского барьера, увеличение концентрации сывороточных иммуноглобулинов в биологических жидкостях, снижение концентрации синтезируемых местно иммуноглобулинов, а для хронического воспаления - повышение местного синтеза иммуноглобулинов различных классов в сочетании с незначительно повышенной или неизмененной проницаемостью гистогематического барьера.

4. Хроническое воспаление аллергической природы (атопическая БА) практически не влияет на функциональное состояние гисто-гематического барьера, в то время как иммунологические сдвиги в составе биологических жидкостей при инфекционном хроническом воспалении зависят от природы патогена, а именно: при хронической форме неспецифического бактериального вагинита снижена проницаемость гистогематического барьера, повышен местный сшггез 1§С1; при кандидозном вагините, микоплазмозе - повышена проницаемость гистогематического барьера, выявлен местный синтез 1§Е, а местный синтез остальных классов иммуноглобулинов снижен.

5. Основными лабораторными показаниями для назначения терапии линиментом циклоферона при инфекционной патологии нижнего отдела женского репродуктивного тракта являются следующие показатели состояния местного иммунитета: наличие местного синтеза ^Е, увеличенная концентрация альбумина в вагинальном секрете (повышенные значения <3(А1Ь)).

6. Иммунокорригирующая терапия циклофероном и ронколейклном при остром воспалении приводит к восстановлению нормальной проницаемости гисто-гематических барьеров и повышению местного синтеза иммуноглобулинов, а при хроническом течении - к повышению проницаемости гисгогема-тических барьеров и вследствие этого к увеличению притока иммуноглобулинов из сыворотки крови, компенсирующих исходно сниженный их местный синтез.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ В ПРАКТИКУ

1. С целью определения характера и степени возможных нарушений местного иммунитета, а также функционального состояния ГГБ при инфекционно-воспалительных заболеваниях целесообразно проводить исследование имму-ноглобулиновош состава биологической жидкости, соответствующей локализации патологического очага, с определением уровней концентрации иммуноглобулинов (^А, б^А, 1{>М, подклассов ^в) и альбумина, и вычислять интегральные показатели для них ((3(1£), СКА1Ь), ОКС(^)).

2. Дополнительными лабораторными иммунологическими показаниями к назначению местной терапии 5% линимент циклоферона при инфекционно-воспалительных заболеваниях нижнего отдела женской половой сферы являются следующие показатели вагинального секрета: увеличение концентрации альбумина в вагинальном секрете- более 1,5 г/л; увеличение проницаемости вагинального ГТБ (С|(А1Ь) - более 38,0); наличие местного синтеза 1§Е.

3. С целыо повышения эффективности проводимой местной иммунотерапии лечение целесообразно проводить под динамическим иммунологическим контролем показателей местного иммунитета с определением интегральных показателей (Q(Alb), Q(Ig)).

4. При дифференциальной диагностике атопической БА и фиброзно-кавернозного туберкулеза легких повышение проницаемости ГТБ бронхов (легких) в 7 и более раз может служить дополнительным лабораторно-диагностическим критерием развития фиброзно-кавернозного туберкулеза у данного пациента.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Galkina O.V., Petrov S.V, Smirnov M.N, Zueva E.E., Totolian A.A. Immunological effects following interleukin-2 therapy in patients with sepsis and peritonitis. // 4th International Congress on Trauma, Shock, Inflammation and Sepsis. Munich, (Germany), March 4-8,1997. Proceedings, Ed. Eugen Faist, 1997,879-883.

2. Тотолян A.A., Буравцова H.A., Молчанова И.В., Галкина О.В. Анализ секреторного иммуноглобулина А сыворотки крови // Сб.трудов 2-го Национального конгресса РААКИ "Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии", 1998, с.740

3. Galkina O.V., Zueva Е.Е., Nesterov I.M., Prokofeva M.V., Totolian A.A. Immunological effects of cytokine therapy in patients with inflammatoiy processes // Fourth John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology. Push-chino, Russia. Abstracts, 1998, p.23

4. Галкина O.B., Нестеров И.М., Молчанова И.В., Алешина Л.А., Буравцова Н.А., Коваленко А.Л., Тотолян А.А. Клинико-иммунологическая эффективность местного применения циклоферон-линимента в терапии вагинальных инфекций Н Иммунология, 1998, №6, с.37-38

5. Totolian N.A., Skoromets А.А., Barbas I.M., Griaseva I.V., Klimovich V.B., Galkina O.V. Intrathecal free light chains of immunoglobulins in early and advanced multiple sclerosis //Multiple sclerosis, 1998, v4, 4, 363.

6. Тотолян A.A., Нестеров И.М., Галкина O.B., Коваленко А.Л., Алексеева Е.Ф., Алешина Л.А., Буравцова Н.А., Зуева Е.Е., Марфичева Н.А., Молчанова И.В. Клинико-иммунологическая эффективность местной терапии цикло-фероном некоторых форм вагинальных инфекций // Russian Journal of Immunology, 1999, v.4, Suppl.l, p.251.

7. Галкина O.B., Алешина Л.А., Басек T.C., Буравцова Н.А., Елькин А.В., Каклюгин А.П., Маслянский AJI., Молчанова И.В., Тотолян А.А. Особенности иммуноглобулинового профиля бронхоальвеолярной жидкости при патологии дыхательного тракта // Медицинская Иммунология, 1999, т.1, Jfa 3-4, с. 34-35.

8. Галкина О.В., Нестеров И.М., Алешина Л.А., Буравцова Н.А., Марфичева Н.А., Молчанова И.В., Тотолян А.А. Иммуноглобулиновый профиль ва-

гинального секрета при инфекциях генитального тракта // Медицинская Иммунология, 1999, т.1, №3-4, с.35-36.

9. Плужников М.С., Лавренова Г.В., Галкина О.В., Катинас Е.Б., Шай-кин Д.И., Буравцова Н.А., Молчанова И.В., Тотолян А.А. Местное применение ронколейкина при острых гнойных синуситах // Медицинская Иммунология, 1999, т.1, №3-4, с.128.

10. Тотолян А.А., Нестеров И.М., Галкина О.В., Коваленко А.Л., Алексеева Е.Ф., Алешина Л.А., Буравцова Н.А., Зуева Е.Е., Марфичева Н.А., Молчанова И.В. Клинико-иммунологическая эффективность линимента циклоферо-на в лечении больных с некоторыми формами вагинальных инфекций (результаты плацебо-контролируемых исследований) // Медицинская Иммунология, 1999, т.1, №3-4, с.138.

11.Nesterov I.M., Ajlamazyan Е.К., Kovalenko A.L., Galkina O.V., Totolian А.А. Clinical and immunological effects of local therapy with cycloferon liniment in patients with vaginal infections // Журнал акушерства и женских болезней, 1999, специальный выпуск. Abstracts. The VII-th Baltic Sea Congress on Obstetrics and Gynecology, St.Petersburg, 12-15 May 1999

12. Totolian A., Bobkov Y.U., Galkina O., Aleshina L., Buravtsova N., Molchanova I. Inflammatory proteins of the seminal plasma // Clinical Chemistry and Laboratoiy Medicine, 1999, v.37, S.l. W167.

13. Плужников M.C, Лавренова Г.В, Тотолян А.А, Галкина О.В, Катинас Е.Б Местное применение интерлейкина-2 (ронколейкина) в терапии острых гнойных синуитов// Материалы конференции "Иммунологические аспекты ринологии", Самара, 1999, 134-138.

14. Galkina O.V., Zyeva Ye.Ye., Totolian A.A., Petrov S.V. The Immune Control of rIL-2 Therapy in Patients with Severe Peritonitis and Surgical Sepsis. Advances in Critical Care Testing, the 1999 IFCC-AVL Award, eds W.F. List, M.M.Muller, A.St.John, 82-83.

15. Galkina 0.,Lavrenova G., Catinas E., Buravtsova N., Aleshina L., Totolian A.; Local immunotherapy of purulent sinusitis by recombinant human inter-leukin-2/ Shock,v.13,2000,165.

16. Shaporova N.L.,Peradze A.T., Trofimov V.I., Malishkin K.A., Totolian A.A., Galkina O.V., Ivanova O.A., Caclugin A.P. Inflammation indexes and immune status dynamics during interleukin-2 treatment in the patients with bronchial asthma.//Eur. Resp. Journal, 2000,561.

17. Бобков Ю.А., Галкина O.B., Горбачев А.Г., Аль-Шукри С.Х., Козлов В.В., Тотолян А.А.; Маркеры воспаления в эякуляте и секрете предстательной железы у больных хроничечским простатитом// Медицинская Иммунология, 2000, т.2,2,151.

18. Галкина О.В., Грязева И.В., Климович В.Б., Самойлович М.П., Тотолян А.А. Количественное определение секреторного иммуноглобулина А в биологических жидкостях с помощью моноклональных антител// Медицинская иммунология, 2000, т.2,2,155.

19. Соколов Г.Н., Монахов К.Н., Алексеева Е.Ф., Галкина О.В., Атнаше-ва P.P., Глухова Е.Ю., Коваленко А.Л., Алешина JI.A., Буравцова H.A., Зуева Е.Е., Марфтева H.A., Молчанова И.В., Соколовский Е.В., Тотолян A.A.; Клинико-иммунологические критерии применения препарата «Циклоферон» при лечении больных атопическим дерматитом.// Медицинская Иммунология, 2000, т. 2,2, 234.

20. Totolian A., Lavrenova G.,.Galkina О, Katinas Е., Smimov М., Buravtsova N., Aleshina L.; Local Immunotherapy of Purulent Sinusitis by Recombinant Human Interleukin-2// 5th World Congress on Trauma, Shock, Inflammation and Sepsis. Munich, (Germany), Febr.29-March 4, 2000. Proceedings, Ed. Eugen Faist, 2000,307-311.

21.Перадзе A.T., Шапорова H.JI., Малышкин K.A., Трофимов В.И., Галкина О.В., Каюпогин А.П., Маслянский А.Л., Лебедев А.Э., Смирнов М.Н., Тотолян A.A. Иммунологическое обоснование клинического применения ронко-лейкина у больных с атопической бронхиальной астмой // Медицинская Иммунология, 2000, т. 2, 3,311-320.

22. Нестеров И.М., Айламазян Э.К., Тотолян A.A., Коваленко A.A., Галкина О.В. Вагинальный секрет при инфекционно-воспалительных заболеваниях нижнего отдела женской половой сферы // Мать и дитя: Материалы 2-го Рос. форума, Москва, 18-22 сент. 2000 г., М., 2000,181

23.Galkina О., Katinas Е., Buratsova N., Smirnov М., Lavrenova G., Totolian

A., Aleshina L. Recombinant human interleukin-2 in local treatment of purulent sinusitis.// Immunolog}' Letters, 2000, v. 73, 2-3,219.

24. Бобков Ю.А., Аль-Шукри С.Х., Горбачев А.Г., Галкина О.В., Козлов В.В., Тотолян A.A. Информативность показателей местного иммунитета при хроническом прстатите // Медицинская Иммунология, 2000, т.2, 4, 401408.

25. Нестеров И.М., Галкина О.В., Айламазян Э.К., Алексеева Е.Ф., Алешина Л.А., Буравцова H.A., Зуева Е.Е., Марфичева H.A., Тотолян A.A. Клинико-иммунологическая эффективность применения линимента циклофеорна в ходе местной терапии вагинальных инфекций (результата плацебо контролируемого исследования)//Медицинская Иммунология,2001,т. 3,1, 77-88.

26. Аль-Шукри С.Х., Бобков Ю.А., Галкина О.В., Горбачев А.Г, Козлов В.В., Тотолян A.A. Диагностическое значение маркеров воспаления в эякуляте и секрете предстательной железы у больных хроническим простатитом // Современные технологии// 2001, 1,38-39

27. Galkina О., Katinas Е., Lavrenova G., Simbirtsev A, Totolian A. Local concentranions of IL-8 and TNF-a in suppurative sinusitis.// 14 th European congress IFCC, Praha, may 2001.

28. Аль-Шукри X.K., Бобков Ю.А., Галкина O.B., Горбачев А.Г., Козлов

B.В., Тотолян А.А Диагностическая роль определения интерлейкина-8 при хроническом простатите.// Урология, 2001, б, 6-9.

29. Соколов Г.Н., Галкина О.В., Алексеева Е.Ф. Клинико-иммунологичес-кие критерии применения препарата циклоферон при лечении больных ато-пическим дерматитом.// Дерматовенерология и косметология, 2001,1, 16-21.

ЛР № 020496

Подписано в печать 14.05.02 г. Заказ №> 324 Формат бумаги 60 х 84/16. Тираж 100 экз. Усл.п.л. 1,0

Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова Типография ООО «ПЛАСТПОЛИМЕР»

Исследование уровня иммуноглобулинов в различных биологических жидкостях проводится многими исследователями в течение ряда лет. Однако до настоящего времени существует расхождение в полученных данных в различных лабораториях. Эти различия могут быть обусловлены несколькими факторами. Одним из таких факторов может быть отсутствие стандартных методов получения биологических жидкостей для исследования [133]. Другим фактором может быть то, что для иммунологического анализа биологических жидкостей в различных лабораториях используют различные по чувствительности и специфичности методы исследования. Так, например, во многих отечественных и некоторых зарубежных работах авторы приводят данные, полученные методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. В других работах описываются результаты, полученные турбидиметрическим или иммуноферментным методом [38, 72]. При ряде местных воспалительных процессов, на начальных этапах, не оказывающих выраженного действия на весь организм, динамика уровней сывороточных иммуноглобулинов не имеет диагностической и прогностической ценности. Это обусловлено тем, что изменения концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови отражают их изменения при любом воспалительном процессе, часто не выходят за пределы физиологической нормы и отстают по времени от периода заболевания. В настоящее время известно, что возбудители инфекционно-воспалительных заболеваний обладают способностью влиять на иммунологические защитные механизмы, направленные на уничтожение и элиминацию этиологического агента. Согласно современным литературным данным наибольшие изменения патологический очаг вызывает именно в месте своей локализации [40,54]. Следовательно, биологические жидкости, участвующие в жизнедеятельности соответствующих органов, тканей и систем органов, в наибольшей степени будут отражать активность местного патологического процесса, а иммунологический анализ соответствующей биологической жидкости позволит оценить состояние местного иммунитета. Несмотря на это периферическая кровь до настоящего времени остается основной биологической жидкостью для иммунологического исследования [40]. Хотя в последние годы появляется все больше работ, посвященных данной теме, иммуноглобулиновый состав ряда экстраваскулярных секретов остается мало изученным. Нет единого мнения о происхождении иммуноглобулинов в различных биологических жидкостях (о месте синтеза иммуноглобулинов, выявляемых в различных биологических жидкостях).

В последние годы во всем мире в терапии различных заболеваний широко применяются препараты, обладающие иммуностимулирующим действием [9, 35]. Вместе с тем, в современной литературе практически отсутствуют данные о лабораторных иммунологических показаниях для решения вопроса о выборе конкретного иммунокорригирующего препарата и для контроля эффективности проводимой терапии.

Цель настоящего исследования

Изучение иммуноглобулинового профиля различных биологических жидкостей человека в норме и при патологии с целью оценки информативности показателей местного синтеза иммуноглобулинов для диагностики, назначения иммунокорригирующей терапии и контроля ее эффективности. Задачи исследования:

1. Определить границы нормальных значений иммуноглобулинов, показателей местного синтеза и проницаемости соответствующих гистогематических барьеров для таких биологических жидкостей, как ЦСЖ, назальный смыв, смыв из гайморовых пазух, назофарингеальный секрет, БАЖ, эякулят, вагинальный секрет;

2. Изучить влияние характера и типа воспаления на состояние гистогематических барьеров и на местный синтез иммуноглобулинов различных классов и подклассов на примере острых и хронических заболеваний инфекционной и аллергической природы;

3. Изучить возможность использования интегральных показателей местного синтеза иммуноглобулинов и проницаемости ГГБ для назначения местной иммунокорригирующей терапии; Определить динамику иммуноглобулинового профиля различных биологических жидкостей при проведении местной и системной иммунокорригирующей терапии.

Научная новизна исследования

Проведен полный анализ иммуноглобулинового состава назальных смывов, смывов из гайморовых пазух, назофарингеального секрета, ЦСЖ, бронхоальвеолярной жидкости, вагинального секрета, эякулята практически здоровых людей. Определены границы нормальных значений иммуноглобулинов классов IgA, IgM, IgG, slgA, IgE, и подклассов IgG с использованием адекватного современного лабораторного метода исследования - иммуноферментного твердофазного анализа. Определен характер происхождения иммуноглобулинов в назальных смывах, назофарингеальных смывах, БАЖ, вагинальном секрете, эякуляте на основании анализа интегральных показателей (OKC,Q).

Определена зависимость иммуноглобулинового состава вагинального секрета, степени и характера местного синтеза иммуноглобулинов, а также функционального состояния вагинального ГГБ от циклических гормональных изменений в процессе физиологического менструального цикла.

Впервые выявлен местный синтез IgE в нижних отделах женского репродуктивного тракта при кандидозном вагините и микоуреаплазмозе. Впервые изучено влияние местной терапии циклофероном-линиментом на показатели местного иммунитета нижних отделов женского репродуктивного тракта пациентов с инфекционно-воспалительными заболеваниями и дисбиозами женской половой сферы. Определены показания для назначения терапии циклофероном. Выявлены критерии эффективности иммунокорригирующей терапии линиментом циклоферона.

Впервые изучено влияние местной терапии рекомбинантным IL-2 на показатели местного иммунитета носа и околоносовых пазух пациентов с гнойными синуситами.

Впервые изучено влияние системной терапии рекомбинантным IL-2 на показатели местного иммунитета бронхов и легких пациентов с атопической БА.

Теоретическая значимость работы Показано, что на иммуноглобулиновые профили биологических жидкостей при воспалении оказывают влияние природа воспаления, характер течения воспаления, вид патогена.

Изучен характер и степень нарушения функционирования гуморального звена местного иммунитета в различных локальных представительствах иммунной системы. Проведена оценка функционального состояния (проницаемости) ГГБ влагалища и характера изменения содержания иммуноглобулинов в вагинальном секрете в зависимости от типа воспалительного процесса. Определена зависимость функционального состояния местного иммунитета нижнего отдела женского репродуктивного тракта от циклических гормональных изменений в процессе физиологического менструального цикла.

Доказана высокая информативная значимость интегральных показателей (Q(Ig), С)(Альб), ОКС), их графической интерпретации для оценки состояния местного иммунитета, анализа функционального состояния соответствующих ГГБ, выявления характера происхождения иммуноглобулинов, определяемых в биологических жидкостях.

Проведение мониторинга иммунологических показателей биологических жидкостей является необходимым условием для оценки эффективности местной иммунокорригирующей терапии.

Практическая значимость Показана высокая информативность и целесообразность использования иммуноглобулинового анализа биологической жидкости из патологического очага с применением интегральных показателей для оценки состояния местного иммунитета, выявления характера и механизма нарушений защитно-регуляторных функций соответствующего ГГБ.

Определены границы нормальных значений иммуноглобулинов в ЦСЖ, назальных смывах, назофарингеальных смывах, БАЖ, вагинальном секрете, эякуляте с помощью иммуноферментного метода.

Показана диагностическая значимость изучения иммуноглобулинового состава биологических жидкостей, определения степени нарушения проницаемости соответствующих ГГБ для оценки состояния и степени нарушения функционирования местного иммунитета при гнойных синуситах, атопическом дерматите, атопической БА, фиброзно-кавернозном туберкулезе легких, простатите, вагинальных инфекциях.

Показана большая диагностическая значимость изучения иммуноглобулинового состава смывов из гайморовых пазух по сравнению с назальными смывами при гнойных синуситах.

Определены иммунологические показатели вагинального секрета, являющиеся показаниями для назначения местной терапии линиментом циклоферона при гинекологической патологии.

Изучен характер изменения иммуноглобулинового состава вагинального секрета при различных репродуктивно значимых вагинальных инфекциях и дисбиозах.

Показана диагностическая значимость использования анализа иммуноглобулинового состава вагинального секрета и функционального состояния вагинального ГГБ для оценки характера и степени нарушений местного иммунитета при инфекционной патологии нижнего отдела женской репродуктивной сферы.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Определение иммуноглобулинового состава различных БЖ, функционального состояния соответствующих ГГБ с использованием анализа интегральных показателей (ОКС, Q(Ig), Q(Alb)) является информативным методом оценки состояния местного иммунитета, позволяющим дифференцировать характер и механизм иммунопатогенетических нарушений защитно-регуляторной функции ГГБ.

2. Вычисление интегральных показателей - коэффициентов проницаемости и секреции ((QAlb), Q(Ig), ОКС) и их графическая интерпретация являются высоко информативным методом оценки состояния местного иммунитета, позволяющим производить анализ функционального состояния различных ГГБ, выявлять характер происхождения иммуноглобулинов в БЖ.

3. Иммуноглобулиновые профили БЖ при воспалении зависят от характера течения воспаления (острое и хроническое), от природы воспаления (инфекционное или аллергическое), вида патогена.

4. Динамика иммуноглобулинов в БЖ отражает состояние местного иммунитета и функциональное состояние соответствующего ГГБ, а мониторинг иммунологических показателей БЖ является необходимым условием назначения и контроля эффективности местной иммунокорригирующей терапии.

Апробация исследования и внедрение результатов в практику Результаты исследований доложены на следующих научно-практических конференциях и симпозиумах:

II международная научная конференция "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге " - Санкт-Петербург, май, 1998 год.

IV международная школа по иммунологии фонда Джона Хамфри (Fourth John Humphrey Advanced Summer Programme in Immunology) Пущино, сентябрь 1998

4th World Congress on Trauma, Shock, Inflammation and Sepsis, Munich (Germany), март 1998 г.

Санкт-Петербургское общество иммунологов, С-Пб, апрель 1999г,

III международная научная конференция "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге " - Санкт-Петербург, май, 1999 г.

VII Конгресс акушеров и гинекологов стран Балтийского моря - Санкт-Петербург, май, 1999 год.

5th World Congress on Trauma, Shock, Inflammation and Sepsis, Munich (Germany), февраль-март 2000 г.

IV международная научная конференция "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, май, 2000 г.).

II Российский форум "Мать и Дитя" - Москва, сентябрь, 2000 год.

World Congress of Lung Health and 10th ERS Annual Congress. Florence. Italy. August 30-September 3, 2000.

Научно-практическая конференция «Инфекционно-воспалительные заболевания мочеполовой системы», Новосибирск, 1-3 марта 2000г.

14-th European Immunology Meeting EFIS 2000, 23-27 September, Poznan, Poland

European Congress of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (Euromedlab) Prague 2001

V международная научная конференция "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург, май, 2001 г.).

По теме диссертации опубликовано 29 печатных работ.

Результаты исследований внедрены в практическую работу лаборатории клинической иммунологии, отделений гинекологии, дерматовенерологии, JIOPболезней и госпитальной терапии клиник СПбГМУ им. акад. И.П.Павлова.

16

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 170 страницах, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, пяти глав результатов собственных исследований, заключения и выводов, практических рекомендаций . Работа содержит 25 рисунков, 18 таблиц. Библиография содержит 183 источника, в том числе 50 отечественных и 133 зарубежных.

ВЫВОДЫ

1. Определены границы нормальных значений уровня иммуноглобулинов, показателей их местного синтеза для различных биологических жидкостей (в назальных смывах, назофарингеальном секрете, ЦСЖ, БАЖ, вагинальном секрете, эякуляте) и проницаемости соответствующих гисто-гематических барьеров.

2. В биологических жидкостях здоровых людей выявляются различные классы синтезируемых местно иммуноглобулинов, а именно: slgA и IgA в назальных смывах, назофарингеальном секрете, бронхоальвеолярной жидкости, вагинальном секрете. Кроме этого в бронхоальвеолярной жидкости определяется синтезированный местно IgE, а в вагинальном секрете IgG (в основном IgGl).

3. Для острого воспаления, затрагивающего слизистые ткани, характерно значительное повышение проницаемости соответствующего ГГБ, увеличение концентрации сывороточных иммуноглобулинов в БЖ, снижение концентрации синтезируемых местно иммуноглобулинов, а для хронического воспаления - повышение местного синтеза иммуноглобулинов различных классов в сочетании с незначительно повышенной или неизмененной проницаемостью ГГБ.

4. Хроническое воспаление аллергической природы (атопическая БА) практически не влияет на функциональное состояние гисто-гематического барьера, в то время как иммунологические сдвиги в составе БЖ при инфекционном хроническом воспалении зависят от природы патогена, а именно: при хронической форме неспецифического бактериального вагинита снижена проницаемость ГГБ, повышен местный синтез IgGl; при кандидозном вагините, микоплазмозе - повышена проницаемость гисто-гематического барьера, выявлен местный синтез IgE, местный синтез остальных классов иммуноглобулинов снижен.

150

Практические рекомендации

1. С целью определения характера и степени возможных нарушений местного иммунитета, а также функционального состояния ГГБ при инфекционно-воспалительных заболеваниях целесообразно проводить исследование иммуноглобулинового состава БЖ, соответствующей локализации патологического очага, с определением уровней концентрации иммуноглобулинов (IgA, slgA, IgG, IgM, IgE, подклассов IgG) и альбумина, и вычислять интегральные показатели для них (Q(Ig), Q(Alb), OKC(Ig)).

2. Дополнительными лабораторными иммунологическими показаниями к назначению местной терапии 5% линимент циклоферона при инфекционно-воспалительных заболеваниях нижнего отдела женской половой сферы являются следующие показатели вагинального секрета: увеличение концентрации альбумина в вагинальном секрете- более 1,5(г/л); увеличение проницаемости вагинального ГГБ (Q(Alb) - более 38,0); наличие местного синтеза IgE.

3. С целью повышения эффективности проводимой местной иммунотерапии лечение целесообразно проводить под динамическим иммунологическим контролем показателей местного иммунитета с определением интегральных показателей (Q(Alb), Q(Ig)).

4. При дифференциальной диагностике атопической БА и фиброзно-кавернозного туберкулеза легких повышение проницаемости ГГБ бронхов (легких) в 7 и более раз может служить дополнительным лабораторно-диагностическим критерием развития фиброзно-кавернозного туберкулеза у данного пациента.