Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммуно-цитохимические исследования лейкоцитов периферической крови при ревакцинации БЦЖ и туберкулезе у детей и подростков

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КЫРГЫЗСКОЙ РЕСПУБЛИКИ КЫРГЫЗСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

1 ' О ОД На правах рукописи

АКОПОВА ВАЛЕРИЯ АШОТОВН^

УДК 616.24-002.5'614.47-612.014.1:612.112-612.017.1

ИММУНО-ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ РЕВАКЦИНАЦИИ БЦЖ И ТУБЕРКУЛЕЗЕ У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ

(14.00.36 - аллергология и иммунология)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Бишкек - 1996

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте туберкулеза Министерства здравоохранения Кыргызской Республики (директор -кандидат медицинских наук А.Ш.Алишеров)

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

доктор медицинских наук И.А.Комиссарова доктор медицинских наук,профессор Д.А.Адамбеков

кандидат медицинских наук|Б.Л.Кибрик

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор В.Г. Евдошенко доктор медицинских наук, профессор Т.Ч.Чубаков

Ведущая организация:Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза МЗ РФ.

Защита диссертации состоится "_"_1996г.

в_часов на заседании Специализированного Совета

К-14.94.03. при Кыргызском Медицинском институте.

Адрес:720020,г.Бишкек,ул.Исы Ахунбаева,92. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан "_"_1996г.

Ученый секретарь Специализированного Совета,

кандидат медицинских наук М.А.Сабодаха

о

'J

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.Проблема туберкулеза у детей и подростков остается в центре внимания фтизиатров.Особенно остро стоит она в республиках Средней Азии.где характерен полный набор факторов, способствующих высокой заболеваемости туберкуле-зом:экологическое неблагополучие,возрастание стрессорных воздействий,повышенный радиационный фон,неполноценное питание,а также экономические трудности,что не дает возможности снизить инфициро-ванность и заболеваемость туберкулезом.

Активная вакцинопрофилактика позволила на определенном этапе значительно снизить заболеваемость туберкулезом (Л.А.Митинская и соавторы, 1979; 1980; Sutherland J.,Springett V., 1987. и др.)

Однако, в последнее время ,все большее внимание стали привлекать особенности организма на введение вакцины БЦЖ:повышенная неспецифическая заболеваемость в этот период,усиление аллергических реакций и др.(И.А.Комиссарова,1983;0.Д.Николаева, 1990,и др.).Все это позволяет предполагать,что специфическая иммунологическая перестройка может сочетаться с нежелательными изменениями в миелоидной и лимфоидной системах и других тканях организма, что в свою очередь, способно нарушить нормальное течение иммуногенеза и формирование полноценного иммунитета.

В связи с патоморфозом туберкулеза усложняется своевременная диагностика заболевания и определение активности процесса.Не менее важна оценка состояния реактивности организма,характера тканевых метаболических сдвигов,установление причин хронизации и рецидивирующего течения патологического процесса(И.А.Струков,И.П.Соловьева, 1986;И.Е.Кочнова и соавт.,1986;Н.М.Рудой и соавт.,1987;А.Г.Чучалин, 1989,и др.).Поэтому, выяснение причин повышенной заболеваемости туберкулезом детей и подростков на фоне интенсивной, активной иммунопрофилактики, осложненного течения иммуногенеза и хронизации туберкулезного процесса является актуальной проблемой, требующей специальных исследований.

Особая роль,как в повышенной заболеваемости туберкулезом,так и в хрони?[ии процесса,принадлежит реактивности организма,а устойчивость или восприимчивость к инфекции,в значительной мере,зависит от функ-" ционального состояния иммунокомпетентных клеток,угнетение которых в местных тканевых реакциях при туберкулезе несомненно(В.В.Ерохин, 1989; В.И.Покровский и соавт., 1994,и др.).

Характер метаболизма лейкоцитов определяет иммунологическую реактивность организма и обеспечивает основу иммунных реакций (М.В.Робинсон и соавт.,1986),поведение клеток крови в процессах воспаления, аллергических реакциях,также,в наибольшей степени, определяется особенностями метаболизма лейкоцитов.Поэтому,сведения о характере обменных процессов в нейтрофилах и лимфоцитах крови при иммунодиагностике,ревакцинации БЦЖ и различных фазах туберкулеза у детей приобретают особое значение.

Наиболее информативными являются цитохимические исследования лейкоцитов периферической крови,позволяющие получить всестороннюю информацию о характере метаболических изменений,происходящих на клеточном и субклеточном уровнях. Такие исследования успешно применяют в гематологии (НауЬоеР.С.и.,ОиадПпо 0.,1980),педиатрии(Н.С.Кис-ляк, Р.В.Ленская,1978; И.А.Комиссарова,1983,и др.) и других областях медицины и экспериментальной патологии (Р.П.Нарциссов,1984; М.В.Робинсон и соавт., 1986,и др.). При туберкулезе у детей отдельные ферменты лейкоцитов исследовали Ю.С.Ивановский, 1975;Е.В.Дергач, 1982. Исследований по комплексному иммуно-цитохимическому изучению лейкоцитов крови при ревакцинации БЦЖ и туберкулезе у детей и подростков нам не встретилось, что и побудило нас к проведению данного исследования.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: изучение закономерностей формирования иммунного ответа на ревакцинацию БЦЖ и развитие первичного туберкулеза с помощью иммуно-цитохимической оценки метаболизма лейкоцитов крови.

ЗАДАЧИ: 1. Выяснить особенности изменений активности гидролитических и окислительно-восстановительных ферментов лейкоцитов у школьников 12 и 16 лет под влиянием пробы Манту и ревакцинации БЦЖ.

2. Изучить взаимосвязь изменений ферментного профиля лейкоцитов с рядом анамнестических, клинико-лабораторных параметров и определить иммуно-цитохимические критерии оптимального отбора декретированных лиц для ревакцинации БЦЖ и оценки-состояния здоровья в период иммуногенеза.

3. Установить характер и степень изменений ферментного профиля лейкоцитов при локальных формах первичного туберкулеза у детей в динамике и взаимосвязь этих изменений с анамнестическими данными и клиническими проявлениями заболевания.

4. Выяснить информативность иммуно-цитохимических и клинико -анамнестических показателей в оценке активности и прогнозе течения туберкулезного процесса.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА:

1. Впервые при ревакцинации БЦЖ всесторонне освещены: динамика иммунокомпетентных клеток крови и иммуно-цитохимичсских показателей; количественно оценены взаимоотношения между анамнестическим фоном и течением иммуногенеза;выявлены особенности реакции организма на туберкулин и вакцину БЦЖ на уровне миелоидной и лим-фоидной систем и в связи с возрастом обследованных; установлена зависимость характера течения иммуногенеза от исходного"%таболического фона.

2. Показано, что характер изменений ферментного профиля лейкоцитов при первичном туберкулезе является интегрирующей величиной, которая формируется под влиянием анамнестического фона, особенностей клинических проявлений и иммунологических сдвигов.

3. Впервые при первичном туберкулезе на основании цитохимических, гематологических, анамнестических,клинических параметров показана принципиальная возможность разработки алгоритма верификации активности патологического процесса.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ работы заключается в том, что изучение иммуно-цитохимических показателей периферической крови при иммунопрофилактике БЦЖ и первичном туберкулезе позволило разработать комплекс показателей для отбора декретированных контингентов на ре-

вакцинацию БЦЖ и таблицы диагностических коэффициентов для индивидуализированной оценки активности специфического процесса.

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ ПОЛОЖЕНИЯ об информативной значимости изменений метаболического статуса иммунокомпетентных клеток в оценке:

1. Характера реакций лимфоидной и миелоидной ткани у детей и подростков на введение туберкулина и вакцины БЦЖ;

2. Исходного состояния школьников в плане отбора декретированных контингентов для ревакцинации БЦЖ;

3. Прогноза течения периода иммуногенеза после ревакцинации

БЦЖ;

4. Активности туберкулезного процесса и прогноза его течения у детей и подростков.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ. Основные положения диссертации внедрены в практику детского отделения Кырг.НИИ туберкулеза, детского отделения Сокулукской ЦРБ.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы исследования доложены на заседаниях Республиканского Научного Общества Фтизиатров (1983-1989), Республиканской научно-практической конференции "Здоровая мать -здоровый ребенок"(Фрунзе,1989), Республиканского Научного Общества патологоанатомов (1989,1990), на совместном заседании Кафедры фтизиатрии КГМИ и отдела фтизиатрии Кырг.НИИ экологии и профилактики инфекционных болезней (1990). По теме диссертации опубликовано 7 научных работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 160 страницах машинописного текста и состоит из введения,обзора литературы, общей характеристики обследованных групп и методов исследования, собственных исследований, заключения,выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 26 рисунками. Библиографический указатель включает 213 источников литературы, в том числе 141 отечественных и 72 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Обследованы:61 школьник

12 и 16 лет при очередной ревакцинации БЦЖ и 41 больной первичным . туберкулезом в возрасте 5-15 лет. 48 туберкулиноотрицательных школьников были ревакцинированы БЦЖ. Всего выполнено и оценено 4340 цитохимических мазков крови и 720 традиционных гемограмм. Клиническое обследование проводили по общей схемеТуберкулинодиагностику и ревакцинацию БЦЖ осуществляли в соответствии с приказом 527 МЗ СССР от 05.07.88г.

ЦИТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ. В лейкоцитах периферической крови исследовали следующие ферменты: сукцинатдегидрогеназу(СДГ- сук-цинат: акцептор - оксидоредуктаза - 1.3.99.1); @-глицеро-фосфатдегид-рогеназу (@-ГФДГ - 1.1,99.5);миелопероксидазу (МП- 1.11.1.7.); кислую фосфатазу (КФ - 3.1.3.2.); щелочную фосфатазу (ЩФ-3.1.3.1.). В лимфоцитах определяли активность СДГ,@-ГФДГ,КФл, в нейтрофильных лейкоцитах - МП,ЩФ.КФн.Активность дегидрогеназ определяли по методу Р.П.Нарциссова(1969), МП - по Graham-Knjll (Р.Лилли, 1969), гидролаз (КФ.ЩФ)- методом азосочетания (Goldberg A.,Barka Т.,1962).Активность дегидрогеназ выражали суммарным количеством гранул формазана в 50 клетках. Активность МП,КФ,ЩФ выражали индексом Кеплоу(Кар1оу/,1955) с подсчетом 100 клеток, разделенных на 4 класса по интенсивности реакции.Полученные результаты обрабатывали методом вариационной статистики и корреляционного анализа (В.Ю.Урбах,1975), с^йределением достоверности по критерию Стьюдента(1). При составлении диагностических таблиц, для определения активности туберкулезного процесса, был применен метод последовательной процедуры Вальда (Е.В.Гублер, 1978).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. В период очередной ревакцинации БЦЖ у практически здоровых школьников 12 и 16 лет,после углубленного клинического осмотра исследовали ферментативную активность лейкоцитов и морфологический анализ крови в динамике:до постановки реакции Манту (1),через 72 часа после этого (II),на 7,14,30день после ревакцинации БЦЖ - III,IV,V этапы соответственно. В группе 12-летних школьников ревакцинация была отсрочена на 10 дней(после учета реакции Манату),с целью разделения влияния туберкулина и вакцины БЦЖ на метабо-

лические процессы. После постановки реакции Манту все обследуемые разделились на две группы: туберкулиноположительных и туберкулино-отрицательных.в таком аспекте в дальнейшем и будут рассматриваться результаты исследований.

Туберкулиноположительные школьники были обследованы в те же сроки, что и привитые и служили контролем для ревакцинированных. Исходные показатели морфологического анализа крови были без отклонений от общепринятой нормы. При учете реакции Манту было обнаружено статистически достоверное(р<0,05) увеличение числа нейтрофилов и уменьшение лимфоцитов.Корреляционный анализ выявил достоверную (р<0,05) взаимосвязь гематологических показателей с анамнестическими, эпидемиологическими данными во всех группах обследованных.

Цитохимические исследования показали, что через 72 часа после реакции Манту, у всех школьников,как туберкулиноположительных,так и ту-беркулиноотрицательных наблюдаются изменения метаболизма лейкоцитов в виде увеличения активности щелочной и кислой фосфатаз (р<0,01) и снижения активности миелопероксидазы (р<0,01),наиболее выраженные в 12-летнем возрасте. Существенные сдвиги обнаружены и в ферментном профиле лимфоцитов, выражавшиеся в снижении активности энергетических ферментов (СДГ,@-ГФДГ,р<0,001) и увеличении активности кислой фосфатазы лимфоцитов (р<0,001) у 12-летних детей. Аналогичные, но менее выраженные изменения отмечались и у 16-летних школьников,(таб. 1 -6).

• У туберкулиноположительных подростков изменения ферментного профиля лейкоцитов под влиянием 2 ТЕ туберкулина продолжают сохраняться на 7,14,30 день наблюдения(таб.1-2). Причем,характер и степень метаболических сдвигов через 72 часа и на III этапе обследования, в значительной мере, зависят от степени выраженности кожной реакции на туберкулин. Очевидно,что особенности метаболических изменений в ней-трофилах и лимфоцитах крови, под влияниемТуберкулинодиагностики, существенно изменяют ферментный профиль лейкоцитов крови и степень этих изменений зависит от возраста и выраженности местных проявлений.

Динамика активности ферментов лейкоцитов у туберкулнпоположительпих юношей 16 лет ( п 10)

Фор мои 1 и Сроки обследования

до приои Манту через 72 часа 7 дет, после БЦЖ 1 1 день после Е>ЦЖ 30 день после ЬЦЖ

М + <г М -к ст- М + <г М + <г м ± а-',

N111 224,2 10,3 224,9 7,3 209,2 1 1,7 218,1 16,3 227,9 0,9 •

ЩФ 42,4 16,9 -19,8 18,6 48,0 7,7 61,9 13,7 55,7 17,6

КФп 59,5 ¡4,5 16,0 65,3 15,9 5 1,4 10,2 51,8 10,3 63,4 10,8

СДГ 1,2 14,4 1,8 11,9 2,1 16,8— 2,2 18,8— 1,2

с*ГФДГ 9,9 0,4 9,9 0,5 10,0 0,4 10,6 0,7 11,5— 0,8

КФл 36,-1 9,3 14,3 9,5 36,9 7,0 39,9 8,5 46.1" 5,4

Достоверносп. в сравнении с исходными показателями: Р>0,05"; Р>0,01"; Р>0,00Г"

Таблица 2 13

Динамика активности ферментов лейкоцитов у туберкулппоположительпих девушек 10 лет ( п В)

Фср МС'11 ■14.1 Сроки обследования

ДО 1ЦК101.1 Мипту через 72 часа 7 дсчп. после ПЦЖ 1 1 л<чп. после БЦЖ 30 день поело СЦЖ

м ± 0~ М + о- М ± <г М ± о- М ± <Г

МП 220,7 16,0 229,5 8,6 220,1 15,5 217,1 17,5 225,6' 10,9

ЩФ 60,5 30,5 54,5 21,2 56,5 13,3 58,8 14,0 67,1 19,7

КФн 63,2 18,0 63,2 13,8 62,0 1-1,9 51,9 10,0 71,1 11,5

едг 14,9 1,8 13,2 1,1 1 1,8 1.5 15,7 1,2 17,8— 0,8

сГФДГ 10,1 0,5 9,9 0,4 9,9 0,5 10,0 0,3 11,8 0,8

КФл 37,5 6,2 45,6 12,1 40,0 7,5 51,9" 10.0 47,0 10,6

Достоверность в сравнении с исходными показателями: Р>0,05"; Р>0,01"; Р>0,00Г"

Динамика активности ферментов лейкоцитов у туберкулипоотрицательпих.репакцшшровашшх БЦЖ юношей 16 лет ( п 13)

фер мен ты Сроки обследовании

до проии М.ппу через 72 часа 7 день после 13ЦЖ 1-1 деш. после БЦЖ 30 день после ЬЦЖ

м + <Х~ М ± а- М + о- м + <г м ± <г

МП 217,4 16,6 220,9 12,8 211,9 11,4 198,5" 10,0 196,9"' 13,2

ЩФ 41,2 4,7 45,1 16,3 49,2 14,9 57,5- 13,8 65,4" 17,8

КФн 60,2 18,1 68,8 13,5 86,7"" 10,4 77,8::- 8,8 92,3:.-' 11,6

СДГ 14,2 1,3 14,3 0,9 14,8 1,6 14,9' 1,1 18,8"" 2,2

*ГФДГ 9,9 0,5 10,1 0,6 10,0 0,4 10,4 0,7 11,9— 0,7

КФл, 33,8 10,4 49,5" 12,8 56,9» 17,9 68,8::: 6,5 7 1,3«: 10,9

Достоверность в сравнении с туберкулиноположнтельнымн юношами 10 лег: Р>0,05"; Р>0,01"; Р>0,001'" Достоверность н сравнении с исходными показателями: Р>0,05'; Р>0,01"; Р>0,00Г"

Таблица 4

Динамика активности ферментов лейкоцитов у туберкулнпоотрицательпых , рсвакцшшропанпих БЦЖ девушек 16 лет ( п 17 )

Фер МСЧ1 ты Сроки обследования

до пробы Манту через 72 часа 7 день после БЦЖ 14 день после БЦЖ 30 до!п. после СЦЖ

М ± <г М ± <г- М ± о- М ± М ± сг~

МП 225,4 19,2 219,2" 13,0 217,9 9,6 208,1" 14,4 203,0— 15,1

ЩФ 53,7 13,8 43,6- 13,9 49,5 13,1 66,6' 17,8 71,3* 24,9

КФн 59,8 19,4 75,8: 12,7 81,5». 11,4 76,6»" 10,4 87,1«. 9,9

СДГ 14,6 1,7 13,9 1,6 14,5 1,5 14,6 1,9 18,9:.. 1,5

«¿ГФДГ 10,3 0,4 10,1 0,6 10,0 0,3 10,2 1,0 12,1 — 0,8

КФл 33,6 8,4 45,9" 13,6 61, Г.« 12,2 66,9«. 9.3 74,3::: 9,6 .

Достоверность в сравнении с туберкулиноноложительпыми девушками 16 лет: Р>0,05"; Р>0,01"; Р>0,00Г" Достоверность в сравнении с исходными показателями: Р>0,05'; Р>0,01"; Р>0,00Г"

Табл.5

Динамика активности ферментов лейкоцитов у туберкулииоотрицагелвиих, ревакцшшрованпих БЦЖ мальчиков 12 лет (и 7)

фор мен ты сроки обследования

до пр Мшпу через 72 ч. через 10 д. 7 день 14 день 30 день

М ± сг М £ сг М — <г М 1 с~ М 1 0 М 1 сг-

МП 235,3 11,9 223,1 14,5 228,4 12,7 2113,0" 13,2 212,7 27,1 239,7 15,2

ЩФ 38,6 5,8 63,9" 12,0 60,6" 16,3 77,0" 11,2 61,9- 9,4 63,4" 14,1

КФп 32,7 ' 6,9 63,7- 9,9 98,4- 15,6 98,0- 12,1 88,0- 8,7 70,1- 9,0

СДГ 21,6 3,1 18,5" 0,4 16,9- 0,9 21,0" 1,6 18,4- 1,3 16,Г" 1,0

<*-ГФДГ 12,4 1,4 10,3" 0,8 10,?" 0,4 12,3 0,6 12,6 0,5 11,3 0,9

КФл 20,1 1,5 49,1- 10,9 60,3- ¡¡,8 71,9- 15,4» 52,0- 6,3 54,4- 12,3

Достоверность в сравнении с исходными показателями: Р<0,05";Р<0,01";Р<0,001""

Табл. 6

Динамика активности ферментов лейкоцитов у туберкулиноотрицательных, ревакцшшровапных БЦЖ девочек 12 лот (и 6)

фор мен ты сроки обследования

до пр М,1П1у через 72 ч. через 10 д. 7 день 14 день 30 день

М ± а- М ± <г- М + <г М 1 сг М ± сг М + О-'

МП 234,7 10,1 224,3 14,4 211,7 9,9 211,2 12,7 232,2 16,5 239,5 27,5

ЩФ 41,2 9,6 66,3' 14,1 62,2 12,5 81,5 17,7 62,3 10,4 63,2 9,9

КФн 31,7 3,1 53,5" 10,4 75,0" 20,0 93,;- 5,7 102,5— 15,5 85,0 9,8

СДГ 22,1 0,7 19,0- 1,0 15,4- 1,2 20,1" 0,7 18,7" 1,7 16,4'" 1,3

л- ГФДГ 11,9 0,5 10,0- 0,2 10,9- 0,5 12,2 0,9 12,7* 0,5 11,9 0,8

КФл 24,2 3,7 57,7- 8,1 43,0 16,3 61,3- 7,4 68,8- 10,4 61,0- 10,4

Достоверность в сравнении с исходными показателями: Р<0,05';Р<О,01";Р<0,00Г

Ревакцинация БЦЖ сопровождается дальнейшим резким снижением активности миелопероксидазы в нейтрофилах, это дифференциальный признак между туберкулиноположительными и туберкулиноотрицательны-ми(таб.З-4). При некоторых различиях в степени выраженности цитохимических сдвигов, общая тенденция динамики энзиматических показателей у 12 и 16-летних школьников совпадает. Однако,'в группе 12-летних, ревакцинированных БЦЖ отмечается больший объем метаболических изменений и иной характер динамики активности сукцинатдегидро-геназы (таб.3-6).У этих же школьников,введенный 10-дневный интервал' между туберкулинодиагностикой и прививкой БЦЖ, выявил тенденцию к нормализации активности гидролитических ферментов (МП,ЩФ,КФн) к 10 дню (таб.5-6).

Таким образом,ревакцинация БЦЖ,в сравнении с туберкулинодиагностикой, сопровождается более выраженным увеличением активности кислой фосфатазы нейтрофилов и лимфоцитов и снижением активности миелопероксидазы. Активность щелочной фосфатазы изменяется мало и ее динамика, также как @-глицерофосфатдегидрогеназы, в основном, определяется введением туберкулина.

У части ревакцинированных школьников в процессе иммуногенеза (на 5-12 день) отмечалось присоединение катаральных явлений, которым предшествовали более высокие (на I и II этапах исследования) показатели активности кислой и щелочной фосфатаз нейтрофилов и низкие -миелопероксидазы. В дальнейшем у них формировался маленький кожный рубчик (1 -2 мм).

Корреляционный анализ показал, что на степень выраженности местных тканевых реакций и величину кожного рубчика оказывает влияние характер количественных и качественных изменений в лейкоцитах крови, а особенности перестройки ферментного профиля лейкоцитов являются определяющими в течении всего периода иммуногенеза.

В клинической группе обследованы в динамике 20 больных туберкулезом внутригрудных лимфоузлов (ТВ/1) и 21 - первичным туберкулезным комплексом (ПТК) с различной активностью процесса, в возрасте 5-15 лет. В анамнезе у всех обследованных - многократные простудные и ин-

Таблица 7

Динамика активности внутрилейкоцитарных ферментов у детей больных туберкулезом __._внутригрудных лимфатических узлов(п21)_

Фермент сроки обследования

I I! III IV V

м * <г М ь сг М ± <г М * сг М * <г

ЩФ 58.9 25.69 28.1 21.01 44.1 " 11.75 42.6 " 10.36 41.5 •" 4.95

МП 190.9 32.50 221.7'" 22.91 228.9" 10,29 221.6'" 11.12 239.7"" 2.76

КФН 59.7 17.85 60.2 12.99 64.1 13,29 54.6 12.31 54.2 5.8

сдг 591 131.89 566 43.39 747.9"* 74.65 688.9'" 40.63 693.5- 20.55

с- ГФДГ 554.5 28,72 518.5 23.75 583.5'" 35.43 609 32.28 592.9 14

КФЛ 40.9 10.05 40.5 9.79 34.5" 4.61 36 5.46 38 2.65

р<0.05 *; р<0.02 **; р<0.01 ***; р<0.001 ****

Таблица 8

Динамика активности ферментов лейкоцитов у детей с первичным туберкулезным комплексом (п=21)

Фермент Сроки обследстш'ия

I и ш IV

м ± (Г м ±- сг ' м ' ± а~ м £ а-

ЩФ 46.5 15.73 46.7 13.87 42.6 8.93 40.3 7.11

КФн 58.3 21.39 43.7 — 10.25 71.1 ' 15.15 53.9 6.79

МП 191.9 20.74 211.4 '" 16.53 224.5"" 13.7 214.4 "■• 6.61

СДГ 598.4 116.15 682.1 ' 107.18 695.6 '" 46.3 703.4 "• 52.22

„с-ГФДГ 595 14.81 513 "" 20.98 506 "" 18.82 - -

КФл 49.9 16.33 34.8 10.58 44.75 8.45 39.3 * 12.39

р<0.05 *; р<0.02 **; р<0.01 *"; р<0.001 ****

фекционные заболевания. Локальный процесс был выявлен у 17 детей (41,5%) в период виража туберкулиновых проб, у 12 (29%) - отсутствовал вакцинальный рубчик, у 11 (26,8%) он был свыше 5мм,контакт с бакте-риовыделителем установлен у 23 детей (56%),у этих детей преобладали выраженные и гиперергические реакции на туберкулин.На всех этапах исследования рутинные клинико-гематологические исследования не обнаружили значительных изменений в гемограмме, за исключением некоторого снижения содержания гемоглобина и процента моноцитов, наиболее выраженных в острую фазу процесса.

Цитохимические исследования показали, что при поступлении в стационар у детей с первичным туберкулезом отмечается снижение активности миелопероксидазы (124-153 ед.), невысокие значения активности щелочной (28-30 ед.) и кислой фосфатазы нейтрофилов (36 ед.), свидетельствующие об интоксикации и сниженной реактивности; угнетение активности сукцинатдегидрогеназы при низких значениях кислой фосфатазы лимфоцитов,особенно выраженные при осложненном течении процесса.(таб.7-8)Выявлена корреляционная зависимость между уровнем исходной активности ферментов и выраженностью и продолжительностью клинической симптоматики.Под влиянием терапии активность миелопероксидазы повышалась и достигала максимума к моменту выписки из стационара, к этому времени нормализовались и другие показатели. Однако,к 4-му месяцу лечения, практически у всех детей, активность кислой фосфатазы нейтрофилов наростала и ее значения превышали показатели активности щелочной фосфатазы,что свидетельствует о повышенной аллергической настроенности организма.

При ПТК наиболее низкие значения активности щелочной фосфатазы отмечались у детей с осложненным течением. Исходный уровень активности энергетических ферментов (СДГ,@-ГФДГ) и кислой фосфатазы лимфоцитов был более высоким, чем при ТВЛ. Корреляционный анализ выявил статистически достоверную связь между уровнем активности ферментов при поступлении в стационар и выраженностью и продолжительностью клинических проявлений заболевания. При этом оказалось, что активность дегидрогеназ определяет легочный синдром, активность

кислых гидролаз - интоксикационный, щелочной фосфатазы - антропометрические показатели, миелопероксидазы - анамнез.

На основании всей имеющейся информации при поступлении больного в стационар (анамнез,гематологические,цитохимические, клинические данные) с помощью последовательного анализа Вальда разработаны диагностические таблицы для определения активности и прогноза течения первичного туберкулеза(ПТК и ТВ/1).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Таким образом, проведенные исследования позволили установить, что при введении туберкулина и вакцины БЦЖ, и при различных формах первичного туберкулеза в лейкоцитах крови происходят существенные изменения ферментного профиля, которые отражают не только особенности реаг^оования миелоидной и лимфоидной систем, но и характер нарушений,возникающих в других тканях в период иммуногенеза и специфического патологического процесса. Тесная взаимосвязь цитохимических сдвигов, выявляемых в нейтрофилах и лимфоцитах крови при ревакцинации и туберкулезе с анамнестическими, клиническими и гематологическими признаками, прогностическая значимость метаболических изменений указывают на перспективность использования цитохимических методов исследования лейкоцитов при указанных состояниях для оценки характера течения иммуногенеза, патологического процесса и эффективности проводимой терапии.

ВЫВОДЫ. 1. После ревакцинации БЦЖ и при локальных формах первичного туберкулеза в лейкоцитах крови выявлены существенные изменения ферментного профиля, характер которых зависит: при ревакцинации

- от анамнестического фона, возраста,состояния организма, степени выраженности кожной туберкулиновой чувствительности, а при туберкулезе

- от активности и характера течения патологического процесса.

2. У туберкулиноположительных школьников проба Манту вызывает в миелоидной и лимфоидной ткани такие же изменения,как при ревакцинации БЦЖ, но менее выраженные по объему и сохраняющиеся в течении месяца.

3. Ферментный статус лейкоцитов крови у туберкулиноотрица-тельных школьников после пробы Манту изменяется также,как у тубер-кулиноположительных, но метаболические сдвиги у них усиливаются под влиянием ревакцинации БЦЖ.

4. При отсроченной на 10 дней ревакцинации БЦЖ отмечается тенденция к нормализации ферментного профиля, измененного под влиянием пробы Манту.

5. У школьников 12 лет, ревакцинированных БЦЖ отмечается больший объем метаболических изменений и большая подверженность их катаральным явлениям в течении периода иммуногенеза.

6. При высоких исходных показателях активности гидролитических ферментов, или сниженных энергетических, как правило, у школьников обнаруживаются осложнения в периоде иммуногенеза в виде катаральных явлений, и они наиболее вероятны на 7 - 12 день после ревакцинации БЦЖ.

7. При локальных формах первичного туберкулеза у детей с высокой активностью специфического процесса, наблюдается угнетение активности гидролитических и окислительно-восстановительных ферментов лейкоцитов, что свидетельствует о выраженной интоксикации и ареак-тивности организма.

8. У детей, страдающих туберкулезом, выявлена тесная взаимосвязь изменений клеточного метаболизма с анамнестическими данными,клиническими проявлениями, объемом поражения и продолжительностью симптоматики, что позволяет использовать иммуноцитохимичес-кие признаки в качестве критериев оценки фазы заболевания и прогноза его течения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Предлагаются иммуно-цитохимические методы определения активности гидролитических ферментов (КФ.ЩФ) и миелопероксидазы для оптимального отбора декретированных лиц на ревакцинацию БЦЖ с целью получения наиболее эффективной иммунопрофилактики.

2. По совокупности выявленных изменений в ферментном профиле лейкоцитов при введении туберкулина и вакцины БЦЖ рекомендуется

сократить ревакцинацию в 12-летнем возрасте, с учетом эпидемиологической ситуации.

3. Предлагается использовать разработанные таблицы диагностических коэффициентов для строго количественной, индивидуализированной оценки активности патологического процесса при первичном туберкулезе у детей.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Клинико-цитохимические параллели при туберкулезе у детей //Актуальные проблемы туберкулеза и смежной патологии в Киргизской ССР.-Фрунзе.-1984. С.100-105.(соавт.:Сидорова Е.А.,Кибрик Б.Л.)

2. Ферментный профиль лейкоцитов периферической крови у детей //Здоровая мать-здоровый ребенок:Мат.Респ.научно-практич.конфер.-Фрунзе.-1985.С.123-124. (соавт.: Кибрик А.Б.)

3. Некоторые показатели функциональной активности лейкоцитов у здоровых детей школьного возраста//Внелегочный туберкулез:Труды,-Фрунзе.-1987.С.66-74. (соавт.: Кибрик А.Б.)

4. Совершенствование иммунопрофилактики туберкулеза у под^\ростков в Республике Кыргызстан. Методические рекомендации.-Фрунзе.-1990.С.8-13. (соавт.:Галиева Р.Ш.,Бауэр В.Р. и др.)

5. Клинико-цитохимические параллели при некоторых формах тубер-кулеза//Вопросы акушерства и педиатрии:Труды.- Бишкек.-1993.С.91. (соавт.:Галиева Р.Ш.)

6. Цитохимическое изучение энзиматической активности нейтрофилов и лимфоцитов крови при экспериментальном туберкулезе //Туберкулез,бактериологическая диагностика,иммунология и экспериментальные исследования:Труды.-Бишкек.-1993.С.52-55. (соавт.:Ситковский Г.В.)

7. Ферментный профиль лейкоцитов крови при иммунодиагностике и ревакцинации БЦЖ у школьников//Туберкулез;Труды.- Бишкек.-1995,С.149-155.

SUMMARY

The dissertation is devoted to the study of the patterns of immunologic response to BCG revaccination and of the development of primary tuberculosis in children and adolescents using comprehensive immunocytochemical investigation of metabolic changes in peripheral blood leukocytes.For the first time in-depth studies in relation to BCG revaccination were done of the dynamical (time) changes of blood immunocompetent cells and immunocytochemical indicators, the quantitative relationships between the anamnestic background and the course of immunogenesis, responses to tuberculin and BCG vaccine at the level of the lymphoid and myeloid systems as well as in relation to the patient's age. The course of immunogenesis has been found to depend on the baseline metabolic background. It has been shown that the type of changes present in the enzyme profile of leukocytes in primary tuberculosis is an integrating characteristic influenced by the anamnestic background (factors),particular clinical features and immunological changes.

On the basis of the results of this study we have developed a

set of immunocytochemical indicators for the selection of

eligible populations for BCG revaccination and tables of

diagnostic coefficients of signs for the individualized

assessment of primary tuberculosis activity.

The results of the dissertation are published in 7 scientific

papers.

АННОТАЦИЯ

Диссертация,жал балдардын жана еопурумдврдун кургак учук оорусунун баяталчп учурунун онугуусуне чсана БЦЖлык ревакт'инацияга иммундук жооптордун калыптануусунун мы^зам-ченемдуулуктарун окуп уг-рекуу максатннда,периЗерикалых кандагы лейкошттердин метаболи-змдерине бирдиктуу иммуно-питохимикал^я изйлдев жургузууга арнал-ган.

БЦд ревакцинация учурунда биринчи болуп кандын иммуноком-петенттуу клеткаларынын динамикаоы -кана иммуноштохимикалнк керсо?-кучторду ар тарабы чагынан керсэтулгвн: анамнестикалчк *он менен иммуногенездик агнчдардчн вз ара байланыпггарч елчэмдуу бааландч, иэилдвегв алынган оорулардын жазтарына баЯланкстгуу миелоиддик жана дич^оиддик ^и^темадагч БЦЖ вак»*инасчна чана туберкулинге болгон организмдин реакгия^чнцн вчгвиелуктвру анчкталдч,иччуногенэздин агчичнчн чу на з у белтапкч четаболикал"к ^юндан кэз карандчлчгч дали л но или.

х'уб^ркулиндкн ба^тал^ч учурундаги лейкошттердин -Ьерменттик про^линин эзгеруу мунезу бачым чочо^гондугун билдирди. лл чокдук аначнест/калык ¿юндун чана ичмунологикалкк чмлыитар менен клиника-лчк кврунуптордун взгвчэлукторунун таа^ири аотында калкптанат.

лургузудген изилдевнун негизинде иччуно-хичикалкк керсеткуч-тердун комплекса иттелип чыктч. Бул комплекс Ьцд ревак-кна»-И5ск со-'суз --©сала т'/ргзн кентингенттерди тандоо '5ана кургак уч\"к оорусунун бааталчш учурундагы белгилердин ар бир адамга ар башка коэффициент чэнзн баалоо учун тузулген.

Диссертаг'иянчн натыРча^ы бапнл'чт чиккан 7 иатерде керсетул-

ген.