Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Хронобиологическое обоснование эффективности применения антиоксидантов при повреждении паренхимы печени

РГБ

V) А

I ' '

АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК РОССИИ ТОМСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР Научно-иселелопательскиП институт фармакологии

На правах рукописи

ГУРОВ Олег Вячеславович

ХРОНОБИОЛОГИИ ЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ

ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ АНТИОКСИДАНТОВ ПРИ ПОВРЕЖДЕНИИ ПАРЕНХИМЫ ПЕЧЕНИ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соисканиг ученой степени кандидата медицинских наук

•О* V

у

Томск 1994

| ,)

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии Тюменского медицинского института

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

доктор медицинских наук, профессор ЭЛ. БАРКОВА

члсн-корресп. РАМН профессор A.M. ДЫГАЙ

кандидат медицинских наук ЕЛ. ЧЕРНОВА

Омский медицинский университет

Зашита диссертации состоится "cfv" JA, 1994 г. л ч. на заседании специализированного совета К. 00).33.01 при НИИ фармакологии ТНЦ РАМН (634028, Томск, пр. Ленина 3)

С дисссртацисК можно ознакомиться а библиотеке научно-исслсдомтслиского института фармакологии Томского научного центра РАМН

с—

Автореферат разослан " / ^ " 1994 г.

Ученый секретарь спсциалтирошшного сонета

кандидат биологических паук II. К. ГОРШКОВА

Актуальность работы. Широкая распространенность хронических диффузных заболевания печени [Л.Ф.Блю-гер,1991; Э.Н. Баркова,1992]. в значительной степени обусловленная ухудшением экологической обстановки, гепатотоксич-ностьи многих Фармакологических препаратов, широко используемых в медицине [ А.И. Венгеровский. 19f.ö: Л.Ф.Виноградова, 1989), а также недостаточной эффективностою способов медикаментозного воздействия на патологические процесс», инициирующие ц потенцирующие гиперлипопероксидацив (J. Björne-boe. 1989]. определяют как одну из актуальнейших проблем современной экспериментальной к клинической гепатологии - разработку новых и усовершенствование существующих способов лечения повреждений печени [ Л.Ф. Виноградова, 1989; A.c. Логинов, 1989; А. С.Саратиков. 1989; А. 4>. Блюгер, 1991; Л. И. Венгеровский.1992].

Доказательства функционального взаимодппсгвия про- и антноксидантных систем печени, данные о цпркадиашюй организации обмена железа, ПОЛ в печени у интактных крыс, а также обнаружение инверсии их временной организации при токсическом повреждении паренхимы печени определяют актуальность изучения роли печени в регуляции ритмической организации ан-тиоксидантноЯ защиты при экспериментальном гепатозе IE.В. Чесноков, 1992; Э.Н. Баркова. 19941.

Необходимость хронобиологического подхода к разработке данной проблемы мотивирована не только отсутствием данных о временной организации функционального взаимоотношения ПОЛ и АОС. а также роли печени в их регуляции, но и возможностью выяснения молекулярных механизмов синдрома цитолиза, основанных на изучении пространственно-временной организации ПОЛ и антиоксидантной защиты в печени.

Актуальность выяснения роли процессов, дестабилизирующих структурно-функциональную организацию клеточных мембран при повреждении паренхимы печени, обусловлена необходимое п-ю разработки методов коррекции этих состояний. Купирование фармакологическими препаратами избыточной активности переокисления липидов. а также возможность потенцировать фармако-шнетику эндогенных антиоксидантов с учетом фазы ритма, во время которого он был введен, а также хронэстезии - измене-шя р'-аепторных функций клеток-мишеней - является весьма

перспективным направлением б дальнейшей разработке патогенетических основ терапии повреждений паренхимы печени [Б.М.Гехг. 1987; Р.М.Заславская. 1989; Ф!И.Комаров. 1989].

Цель настоящей работы - изучить роль печени в регуляции пространственно-временной организации обмена железа, перекидного окисления шшдов и уровнясх-токоферола л экспериментально обоснопать принципы хронофармако-коррекшм переписного окисления лтшдов при токсическом повреждении печени.

Основные задачи исследования: - изучить суточную динамику концентрации общего и свободного железа, продуктов переписного окисления липидов /ДК. МДЛ /. концентрациисх-токоферола в плазме крови н мембранах эритроцитов из печеночной и воротной . н у шггактных крыс;

- исследовать особенности пространственно-временной организации уровня пидеремии. продуктов перекисного окисления липглои и антиоксрдантноП защиты и временные Фактора, влшш-1!!Не на суточную ритмичность антитоксической функции печени у нптактинх крыс;

- изучить биоритмологические особенности уровня сидере-м(ш. продуктов перекисного окисления липидов. антипксндзнт-нс») системы н антитоксической Функции печени у крыс при пито к011 каими тетрах л орме -1 аном;

- экспериментально обосновать пришит хрош'.Фаргакокср-рек.шп процессов пшорлипопсргксидашш клеточных мембран при токсическом повреждении печени.

1! а у ч н а я п о о из п а. Впервые на основе коми-лок'.чюго исследования суточной динамики атаремш. активности ПОЛ и уровнясх-токоферола е плазме крови и мембранах эритроцитов п крови лз сосудов П" и П'. оле прохождения печени определена роль печени в регуляции суточной ритмичности уровня сидеремии. продуктов ПОЛ исх-токсферола. а также их влияние на продолжительность наркотического эффекта гексена-ла - ка!: интеграл' ного показатели антитоксической Функции

ЛР )СНИ.

Показано, что цнркидианнля организации иролуктои ИОЛ в плазме л меморанах эритроцитов крови, оттекающей ну печени у ш.такпш крыс. не зависит от ритмичности оСщий сидврсмии.

- а -

но синхронизирована с уровнен свободного железа и находится в реципрокннх взаимоотношениях с концентрацией сх-токоферола плазмы крови и эритроцитов, что, в конечном итоге, определяет суточную ритмичность антитоксической функции печени.

Впервые установлено, что рассогласование циркадианного ритма процессов ПОЛ в плазме кроен и мембранах эритроцитов, индуцированное тетрахлорметаном, сопровождается внутрисистемным десинхронозом печеночной регуляции метаболизма сх-токоферола в плазме кропи и мембранах эритроцитов, обмена железа, значительно снижая антитоксическую функцию печени.

На основе этого разработаны патогенетические принципы ангиоксидантной хронофармакокоррекции дисбаланса ПОЛ и ДОС у крыс с экспериментальным гепатозом.

Показано, что парентеральное введение сх-токоферола в ночные часы подопытным животным в дозировке 0,15 мг/100 г массы тела является наиболее эффективным способом коррекции процессов гиперлипоперокеидации, нарушений обмена железа н антитоксической Функции цитохром Р-450 моноксигеназнои системы в .печени, вызванных интоксикацией тетрахлорметаном.

Научно-практическая значимость.

Впервые представлена и обоснована пространственно-временная организация функциональной взаимосвязи ПОЛ и АОС у интактных крыс и закономерность ее изменений у животных с токсическим повреждением печени.

Впервые разработаны принципы антиоксидантиой хронофармакокоррекции процессов гиперлипоперокеидации клеточных мембран у крыс с экспериментальным токсическим гепатозом.

Доказано, что парентеральное введение масляного раствора сх-токоферола ацетата в дозировке, адекватно:! лечебной (0,15 мг / 100 г массы), в активную фазу суток является наиболее эффективным спос.- • коррекции нарушений пространственно-временной организации перекиеного окисления липидов и аи-тиоксидантной защити при интоксикации тетрахлорметаном.

Результаты экспериментальных исследований являются фундаментальной основой для клинической разработки хронобноло-гических принципов антиоксидантноп коррекции гиперлипопероксидации при гепатоцеллшярной недостаточности.

Материалы диссертации использованы для оформления 5 ра-

- А -

иноиализаторских предложений:

1. Способ определения двухвалентного железа в плазме кропи ЭЛГ Баркова. 0. В, Гуров, В. В. Варницына, О.П. Гурова, А.Л. Коркии - Ирикято 30.04.1992, Твм'-нский мединститут, Н J75. - 5 С.

2. способ повышения точности оценки антиоксидантноП слотом»: Э, II. Баркова. о. в. Гуров, 0.11. ГуроваПринято Й3.12,1993, Тюменскш» мединститут, N 218.- Р с.

3. Способ оценю! гепатотокснчностн ксенобиотиков при зкспгрнментьальных исследованиях: Э.Н. Баркова, О,В. Гурон. Н. А. Курллшп. - Принято 23,12.1993, Т&меисккп мединститут, К 219. - 4 г..

-). Модификация способа диагностики нарушений детокси-кациоиной Функции печени у экспериментальных животных: Э.И. Баркова. O.L. Гуров, И. А. Курлович - Принято 15.0.1.1994, Тюменский мединститут, Н "22. - 5 с.

li>. Способ стабилизации продуктов перекксного окисления лшшдоп в моче яри биоритмологических исследованиях: о. И. г-яркога, о.В. Гурон, О.П. Гурова - Принято 15.01.1934. Тюменский мединститут, Н 223, - б с.

А и р о 0 а ц и я р а 0 о г и. Основные положения работы доложены и обсуждены на Всероссийской конференции мололих у win IX "Профилактика н терапия зкетреиальннх 'состоянии" (гм?к, 1990, областной конференции. гюсгшщеиноГ. ЗО-ле-тик. Тюменского государственного медицинского института Пю-К"иь. 15Ш). II Международно/! конференции "Циклические «рс»-ipcuj ч природе и обществе" (Стагрогюль, 1994!. Можчународ-н 'й научной конференции "Актуальны? проблему экологической хронобиологии и ярономедпщпш" (Екатеринбург. 1094)

II у <"> л и к а ц и н. По теме диссертации опубликовано 8 работ, разработано 5 рационализаторски:-: предложений.

С т р у к т ура и о б ь е м д и с с е р т а ц и и. Диссертация состоит из сведений, обзора литературы (1 глапа, состоящая из 4 разделов), описания материалов и методов Ci I'.muaj. изложения результат (3.4.5 глава). обсуядо-ння полученных результатов. выводов и. списка литературы.

Диссертация изложена на 19г> листах машинописного текста, рключля я_' 1 рисунка it 's:> таолш».

Б указателе литературы представлены наименования 166 работ отечественных и 146 иностранных авторов.

Во введении обоснована актуальность хронобиологнческого изучения одного из наименее изученных уровней Функциональной взаимосвязи ЛОЛ и АОС, обмена общего и свободного железа, а .также антитоксической Функции печени - ритмичосиоП организации продуктов липопероксидации клеточных мембран, неферментативного компонента антиоксидантной защити -<х-токоферола, уровня общего и свободного железа, а также продолжительности наркотического эффекта гексеняла - как интегрального показателя антитоксической функции печени у животных с токсическим повреждением печени, необходимость хронобиологнческого подхода к разработке патогенетических принципов применения ан-тиоксидантов при повреждении паренхима печени, цель, основные задачи исследования, Показана научная' новизна и иауч-но-практпческая значимость.

В первой части первой главы представлены современные литературные данные об особенностях пространственно-временной организации перекисного окисления лнппдон при повреждении паренхимы печени. Показано, что активность ПОЛ влияет на функциональную активность гепатоцитов. клеток РЭС. процессы депонирования и редеионирования железа. Представлены данные о связи процессов свободнорадикального окисления липидов и обмена железа.

Во второй части первой главы даны современные аспекты применения энтиошшантов при повреждениях паренхимы печени.

Отмечено, что активация ПОЛ приводит к значительному угнетению антиоксидантной защиты, а применение антиоксидантов способствует коррекции гиперлипоперокси'дации.

В третьей части первой главы освещено современное представление о метаболизме ос-токоферола: его всасывании, транспорте, утилизации и экскреции, а также механизмах действия -как в корме, так и при различной степени тяжести повреждений паренхимы печени. Представлены данные о значительном снижении уровня эндогенного а-токоферола при гепатоиеллюлярных повреждениях, приводящих к дестабилизации функциональной активности гепатоцитов.

В четвертой части ччриол главы рассмотрены актуальные

проблемы хронофармакокоррекции и хронотерапии. Обоснована необходимость хронооиологического подхода к разработке Патогенетических принципов применения антиоксидантсв при повреждении паренхимы печгни.

М а т е р и. а л ы и н е г о д ы исследования.

Экспериментальные исследования прозелени на 1240 беспородных половозрелых крыоах- самцах массой 180-200 г, полученных из питомника "Рапполово"ЛМИ РФ в апреле-мае 1993 года. Животных содержали при полноценном пищевом рационе и естественном световом режиме: соотношение светового И темного периодов составляло соответственно 16.03*00.15 И 07. 57Ю0.15 часов.

ТоксичаскиЯ гепатоз воспроизводили посредством внутриже-лудочногп введения 10% масляного раствора тетрахлорметана из расчета з мл на 100 г массы животного в течение 7 днеЯ.

Интенсивность токсического воздействия тетрахлорметана на печень оцешюалц по содержанию продуктов иерекненого икислоиия липидои / ПОЛ / - диенорых коньыгатон / ДК / и иа-лоиового дияпьдегида / МДА / - к меморанах эритроцитов и плазме крови (И. Д.Стальная, Т.Г, Гаряшвилп ,1077), взятых из сосудов до и поело прохождения печен» - воротной и печеночной вей. Концентрацию общего и двухвалентного железа оценивали дифенилфенантролииорым методой с помощью стандартных ролктишв Чехословацкий фирмы "Лахема". Функциональную актив-чисть мшюксигеназиой системы гепатоцитов оценивали по про-.»»сяхительности наркотического эффекта гексепала (Ф.С. Геван-;мн •. 197.1). Активность антиэксилантной системы оценивали по концентрации «-токоферола п плазме кроьи из в^ротноП и Нече-и су и? с(1 13Г-И (МагИпес 1..Ю64).

С'.-токоФерол в дозе 0, 15 мг/кг массы животного вводили крысам контрольной и подопытной групп в течение 14 дней стодневно один Г'аз в сутки.

Одиси группа животных антиоксидант вводили в период максимальной концентрации продуктов ПОЛ в крови из печеночной репы - только в ночное время. дгуюП - в период минимальной концентрации продуктов ПС1 - только г» дневные чаг.н. Принимая во внимание, что после парентерального введения антиоксидант достигает своей максимальной концентрации в печени через 120

минут (.Т.ВЗогьеЬое.1986). препарат вводили внутрнбрщинно за 2 часа до батифазы и акрофазы циркадиаииого ритма продуктов ПОЛ в крови из печеночной пени - а дневное время - в 10 часов н в ночные часи - в 22 часа.

После проведения курса антиоксиг.антной хронофармакокор-рекции исследовали роль печени в регуляции уровня сидеремии. активности процессов ¡ЮЛ и состояния АОС, оценивая разницу концентраций соответствующих показателей в крови из печеночной и воротной вен. Замеры изучаемых показателей проводили 4 раза в сутки через 6-часовые интервалы параллельно в конт- ( рольной и подопытной группах крыс. На каждую временную точку использовано по 20 контрольных и подопытных крыс.

Результаты исследований были обработаны по ритмометри-ческой программе " Косинор " для оценки следующих показателей: период - продолжительность одного полного цикла ритмического колебания, мезор - среднесуточное значение, амплитуда - разница между наибольшими и' наименьшими значениями ап-роксимирующей функции, акрофаэа - время максимума функции по отношению к началу суток ( выражали в часах и минутах и определяли при уровне значимости 95 процентов), внутренняя ак~ рофаза - разность между акрофазами двух показателей с одинаковым периодом, внешняя акрофаза - положение функции по отношению к какому-либо биологически выраженному моменту измерений внешней среды для организма.

Временная организация перекисного окисления липи-дов. антиоксмдантной защиты и антитоксической функции печени у штактных крыс

Изучив суточную динамику концентрации ДК и МДА, ос-токо-ферола'уровня общего и свободного железа, в плазме крови из печеночной и воротной вен, а также продолжительности гексе-налового наркоза, как интегрального показателя антитоксической функции печени, ми получили возможность охарактеризовать циркадианную организацию ЛОЛ и АОС у интактных крыс, а также роль печени в ее регуляции.

Обнаружено, что суточная динамика концентрации начальных /ДК/ и промежуточных /ИДА/ продуктов ПОЛ в плазме не .

совпадают по времени о ритмами этих продуктов в мембранах орчтроцитов /табл.1,рис.1/, что может Сыть обусловлено особенностями антираднкалыюй защиты эритроцитов, -в том числе и нефернентативного ее компонента -ос-токоферола.

. лкрофазь! концентрации ДК в мембранах эритроцитов опережает аналогичный показатель е плазме крови из печеночной вены на 2_ч 10 мин, а из воротной вены - на 5 ч 39 мин /табл.!, рис.I/. При этом уровень начальных продуктов липопе-роксндацин в плазме крови синхронизирован о ритмом концентрации, промежуточных продуктов ПОЛ /ИДА/ в мембранах эритроцитов /г» +0,73; Р< 0,05/ / рио,1 /,

Весьма существенно, что уровень продуктов ПОЛ в плазме кропи и мембранах эритроцитов из печеночной вены возрастает в фазу их максимальных аначения и падает до уровня ниже, чем в воротной пене, в фазу минимальных значений концентрации.

Несомненно, что эт» закономерность свидетельствует о ритмическом характере колебаний активности процессов ПОЛ и АОи ц печени. ' .

Обнаружено, что• концентрация свободного железа синхронизирована с ритмом концентрации ДК плазмы / г= +0,78; 140, ОЬ / И МДА эритроцитов / Г» +0.72; Р<0.05 / в крови из печеночной вены /рис, 1/, Превышение уроьня продуктов ЛОЛ и крова, оттекающей из печени в фазу максимума сидеремии. аргументирует справедливость' заключения о прямой зависимости между параметрами активности ПОЛ и содержанием несвязанного ¿слеза в органе. Такал же характер корреляции мы обнаружили ¡шюе у кроликов с алкогольной интоксикацией. /Э.Н.Баркова. I.. В. Гуров, 1991/.

Очевидно, что 'печень в разное время суток функционирует как " поставщик", так и "гаситель" первичных продуктов ПОЛ. В атом убездает закономерность порто-кавальных различия показателя : при активации липопероксидации в световую Фазу суток "выходв ДК из печени достоверно преобладает над их "поступлением" через оретнуо вену. В темповую Фазу суток наименьшая активность ПОЛ сопровождается достоверным палением концентрации ДК в плазме крови после^ ее прохождения через печень. Несомненно, что в исследовании этого феномена ключе-вуп роль играет, анализ циркадианноП организации антиради-

Таблшш 1

Ритмометрические параметры пространственно-временной организации показателей ПОЛ, АОС, уровня сидеремин и антитоксической функции печени у интактних крыс

Показатели

Период /М * ш/

Мезор /М * т/

Амплитуда /М * т/

АкроФаза /95Х ЛИ/

ДК плазмы о 24. КЬ0.81 10,641*0.83 5,67+0,41 печеночной вене

ДК плазмы В 24.0011.40 10,65*0,21 2.41-10.19 в воротной Еене

МДА нлазмы в 23, 90*0,61 20.62*0,97 8,28*0,62 печеночной вене

МДА плазмы в 23,80*1,21 21,17*1,78 5,61*0,46

воротной вене .

ДК эритроцитов 24,10*0,22 Л&, 03*0.62 3,12*0,35 в печеночной вене

ДК эритроцитов 23.89*0.29' 17,73*0,26 2.48*0.29 в воротной вене

МДА эритроцитов 23,90*0,41 52,42*2,18 14,48*1,24 печеночной вене

МДА эритроцитов 24.00*0,30 49,50*1,92 12,32*0,68 в воротной вене

Железо Общее 24,00*0,80 21,61*0,49 10,77*2,1 из печеночной вены

Железо общее 24,10*0,70 21,46*0,58 4,77*0,51 из вортной вены

Ге ++ 23,8*0,70 7,14*0,32 1,65*0,26 из печеночной вены

++ 23,8*2,10 7,26*0,36 1,65±0,21 из воротной вены

СХ-токоферол 24,20*0.40 5,39*0,63 1,78*0,14 плазмы в печеночной вене

сх-токоферол 23,80*0,45 6,07+0,25 1,46*0,24 плазмЫ| в воротной вене

сх-токоферол 23,80*1.20 6,3210.31 3,24*0,27 эритроцитов в печеночной Еене

сх-токоферол 24,10*0.40 6,46*0,24 4,15*0,36 эритроцитов в в воротной вене

Продолжитель- 23,70*0,51 15,15*1,06 5,86*0,07 ность гексена-лового сна

/7

9.

2'" 10.' /9,00:

15. /12. .18;

14. /12.34;

7.

/5.43; 5.

/2.33;

8.

/6.36;

ю.

/7.38; 18. /15.04;

17. /15.02; 12. /10.09;

16. /13.07;

22. /21.15;

10/ . 36/

46 12. ■18

26 18.06/ 18 16.02/ 36

9. 24/

09

7.45/ 48

10.52/ 22

13. ОС/ 31

21.59/ 42 20.22/ 19

14.30/

19

19.31/

20

23. 34/

22.59 /20.27:1.32/

19.46 /16. 10;23.22/

18.48 /17.46; 19.52/

11.31 /9.38; 13.23/

Примечание: М - среднее арифметическое; ш - средняя ошибка среднего арифметического; ди - доверительный интервал

Рис. i. Суточная динамика концентрации ДК и КДА. общего и двухвалентного железа .сх-токоферола в пласте косей н мембранах эритроцитов из печеночной (сплошная линия) и воротной (пунктирная линия) лен у интактиых крыс.

По оси абсцисс - время суток, часы; по оси ординат -показатели концентрации : ДК - нмоль/мл - плазмы (I) и эритроцитов (III): Ш - тюль/мл - плазмы (II) и эритроцитов ÜV); общего железа - мкмоль/л (V) и двухвалентного железа плазмы (VI): (х-токофеода -мкмоль/л - плазмы (VII) и ос-токо-Фграла эритроцитов (VIII!

кальной защиты.

Исследование биоритмов концентрации с<-токоферола в плазме крови и эритроцитах позволило обнаружить их синхронизацию в печеночной /г» +0.84; Р<0,05 / и воротной сенах / г» +0.74; Р< С;Э5 /.

Биоритмы концентрации а-токоферола в эритроцитах находятся в прямой зависимости от процессов депонирования анти-оксиданга в печени /табл.1, рис. 1/.

Так. в вечернее время, когда концентрация ос-токсФерола в эритроцитах максимальна, отсечено превышение его уровня в печеночной веке на 1,21*0.12 мкмоль/л над таковым в воротной вене /рис.1/. Примечательно, что в плазме крови в зто время суток концентрацияСХ-токоферола также максимальна .но прсле прохождения через микрососудистую систему печени она снижается. очевидно, в связи с его фиксацией на эритроцитах.

В утренние часы - на фоне минимальной концентрации (х-токоферола в эритроцитах - его уровень в печеночной вене снижен на 1,63*0,02 мкмоль/л . При этом в плазме крови концентрация антиоксиданта в зто время суток минимальна.

Если принять во внимание, что концентрация ос-токоферока плазмы и эритроцитов находятся в реципрокных взаимоотношениях с уровнем ЯК плазмы,. , МДА эритроцитов, а также уровнем свободного железа в крови из печеночной вены / рис.1/. то становится очевидным, что модулирующий эффект ПО/1 и антиок-сндантной защиты функционирует как осциллятор для протекающих в печени процессов депонирования железа и его освобождения, регулируя, циркадианньЯ ритм сидеремии.

Ритометрический анализ позволил обнаружить, что суточная динамика продолжительности наркотического сна у шггакт-ных животных синхронизирована с показателями концентрации свободного железа. ДК плазмы и МДА эритроцитов, но находится в прстивофазе с уровнем сх-токоферола плазмы и мембран эритроцитов из воротной и печеночной вен.

Если принять во внимание, что время наивысшего наркотического эффекта гексенала совпадает с минимальней концентрацией сх-токоферола, но максимальной концентрацией ДК плазмы и МДА эритроцитов в неченочнсГ! вене /табл. 1 , рис. ] /, то ста- г новится очевидной :мкономерность пространственно-временной

взаимосвязи процессов ПОЛ, лОС и уровня свободного железа, чт-1 в конечной итоге определяет циркалианную ритмичность функционирования моиокснгеназной системы'гепатоцитов.

' - i

Временная организация активности переписного окисления липидов и антиоксиданшой защиты у крыс при интоксикации тетрахлорметаном

Изучив суточную динамику продуктов перекнсного окисления линидов, антиокснданткой защити в плазме крови и мембранах эритроцитов из печеночной, н воротной вен, биоритмы сидеремии н продолжительности наркотического эффекта гекиенала, мы получили возможность охарактеризовать механизмы перестройки циркадирниой организации системы ИОЛ и антноксидантной защити у крыс с экспериментальным токсическим гепатозем.

Анализ р;ггмометричсских параметров показал, что у животных о'интокенкапиеч тотрахлорметаном циркаднанная организация сидеремии, продуктов ПОЛ в плазме и мембранах эритроци-■vn< g крови из печеночной и воротной вен импортированы по отнояи-шш к таковым у имтактных крыс.

Однако при этом сохранена высокая степень прямой корре-л.ч'\1!он!ЮЯ записиритмических колебаний свободного желе-( с. концентрацией ДК плазмы крови /г»0,+79; Р<0.05/ и ИДА :•; иг;'щитов /г--*0,92: Р<0.й5/'в крови, оттекающей из печени. При том мезоры концентрации продуктов ПОЛ и свободного жег крови из печеночной вони возрастают /табл. 2 /.

.Если учесть, что уровень свободного железа возрастает в период максимума концентрации продуктов ПОЛ в плазме и мембранах эритроцитов крони из, печеночной вены и падает ниже, чей г, поротной вене, з фазу минимальных значений, то можно предположить, что изменение ритмической организации уровня свободного железа может быть следствием активации процессов ошнюднсрадикального окисления липидов.

Гитиометричес.лй анализ суточной динамики концентрации сх-токоферола и плазме крови и эритроцитах азндетельстг.ует, что на фоне достоверного снижения их ..среднесуточных показателей из печеночной и поротной вен, сохраняется прямая кор-¡«.•ляпиенная зависимость меж;-.' показателями в плазме и зрит-

Ритмометрические параметры

Таблица 2 пространственно-временной

организации показателей ПОЛ, АОС. уровня сидеремии и антитоксической функции печени у крис с экспериментальным гепатозсм

Показатели

Период /М * го/

Мезор ■ /М 1 о\/

Амплитуда АкроФаза /И * !(1/ /Э5Й ДИ/

ДК плазмы в печеночной вене М плазмы й воротной вэне

МдА плазм« в печеночной вене

МДА плазмы а воротной вене

ДК эритроцитов в печеночной вене ДК эритоцитов в воротной вене

МДА эритроцитов в печеночной вене МДА эритроцитов в воротной вене

Железо общее из печеночной вены

Железо общее из воротной вены

Ге++ плазмы из печеночной вены Ре++ плазмы из воротной вены ос-токоферол плазмы в печеночной веке

а-токоферол плазмы в воротной вене

сх-токоферол эритроцитов в печеночной вене

«-токоферол эритроцитов в воротной вене

Продолжительность гексена-лового сна

24; 0041,20 23.9011,30 24,1010, 40 24, 00*1,20 24, 2040. ео 24,00*0,62 24,1040.60 23,80*0, ЭО 23,8041,20 23.91*0, 80 24. 1040.70 24,00*1,20 23.70* 1.10

24,00±0,80

23, 80*0, 70

24.00*0,30

23. 7010,50

14.1510.58 13. 72*0, 59 27,83*0.28 27,5510,46 21,7610,62 21,67*0,35 95, 49*5, 12 93. 48*3. 33 27,30*0,62 25,02*0.33 9,42*0.33 9, ЗОЮ. 24 3, 29*0.26

3,84*0,32

4.77*0,25

4.68*0,28

24 , 97+0. 97

5,06*0,28 22.01

/20. 19; 2л. 41/ 5,21*1,24 4.42

/3.06;6.18/ 8.57*2,54 4.05

/2. 25; 5. <15/ 7,39*1,8 2.40

/0.01:5.16/ 2,39*0,27 19.32

/16. 44; 22.20/ 6,45*0,24 20.13

/18.05:22.21/ 7,65*1,41 22.36

/20.36; 0.36/ 6.6212,3? 22.06

/20.38; 23.3-1/ 6,92*0.43 9.35

/6. 26; 12. 45/ 2,30*0,22 11.42

/8. 38; 14. 46/ 7,71*0,44 22.09

/19.27:23.49/ 2,-2610, 36 21.58

/18.06:01.50/ 1,06*0,23 10.00 .

/7.17; 12.44/

1,0810,15 8.31

/6.35:10.27/

2,66*0.31 8.00'

/о. 20; 9. 40/

3,11*0,91 6.26

/3.22; 9- 26/

9,64*0,23 22.42

/20.35:0.49/

Примечание: м - среднее арифметическое; п - средняя ошибка среднего арифметического; ЛИ - доверительный интервал

роиитах из печеночной /г-+0,84;Р<0,05/ и воротной вен /Г-+0.94;Р<0,05/. При этом значительное повышение уровня свободного железа, продуктов ПОЛ гз плазме и эритроцитах в ночные часы сопровождается минимальной концентрацией «-токоферола в плазме и значительным увеличением ее порто-каваль-ноп разницы в эритроцитах,

Напротив, окрофаза янтиоксиданта плазмы крови в дневное время и положительный прирост его уровня в эритроцитах соответствуют минимальной активлостл ПОЛ и уровня сидеремии в Печеночной вене.

Аналогично инверсии циркадианного ритма активности продуктов (ЮГ концентрации о;-токоферола плазмы и эритроцитов, а также уровня сидеремии перестраивается и ритм продолжительное.;! гс-исеналового наркоза. ГепатотоксическиП эффект тгграхлорметяна проявляется в закономерном увеличении среднесуточной продолжительности наркотического эффекта гекоена-ла -•21,9740,97 мин, которы* на 64.8 мин превышает аналогичный показатель у шпакпшх крыс.

Максимальная продолжнте.чы.ость наркоза - 33,35*0,63 мин обнаружена о ночное время, минимальная - 16,2Н1,-13 мил - в дневные часы, АироШа показателя - 2.-12 /0.35; <1.49/смещена г ,левнну часов ( в контроле - "1.31 /9.38; 13.23/) на почине .

Суточная динамика наркотического эффекта гексенала синх-рчииЕиропаиа с показателями концентрации свободного железа т*10, г>Э; Р<0, 05/, ли плазмы /г ^0.8<1: Р<0. 013/ и МЛЛ плазмы в ¡ ("•ГЦ из воротной иен /г-+0,84;Р. 0.05/, но находится в про-'пш-лфааа с уровнемос-токоферола в плазме, /г -0.71; КО. 05/ й М'.шоргитя эритроцитов /г~ -0.78; 140,05/ в крови из печеночной гекы.

Восьми существенно, что мезоры концентрация продуктов ПОЛ и уровня сидеремии в печеночной пене увеличены (Р< 0.05).

Наибольший наркотический э^ект гексенала, приходящийся на ночные часы, совпадает со значительным падением нерто-ка- . галыгоП разницы по концентрации ос-токоферола плазмы и эритроцитов. Снижение антитоксической функции печени синхрони-;шрг'р„ч!1о с максимальным подъемом продукте» ПСЛ в плазме кро-I II и мембранах эритроците*» и уреннем ер.- годного жел-.-з§

Таким образом, экспериментально обоснована закономерная последовательность перестройки временной организации активности системы перекисного окисления лшшдов и антиоксидант-ной защиты при экспериментальном токсическом гепатозе и их осциллируют,;! эффект на ритмичность процессов обмена железа и антитоксической функции печени.

Перестройка временной организации ПОЛ и ДОС на ранних стадилх токсического повреждения печени, а также их конкурентное взаимодействие в течение суток - на Фоне значительной активация ПОЛ и снижения резервов антиоксидантной гацти определяют возможность проведения антиоксидантной хронофар-макокоррекции процессов пшерлшшероксидации, индуцированных введением тетрахлорметана.

Доказательства циркадианной ритмичности метаболизма а-токофорола в печени и нарушений ого циркадианной организации при экспериментальном гепатозе на фоне активации процессов ПОЛ и значительного истощения резервов антнокекданта -определяют актуальность в разработка экспериментальной модели коррекции процессов липопероксилации при токсическом повреждении печени.

Таким образом, перестройка цнркадианной ритмичности пш-, ногенного »фонта гексонала при экспериментальном токсическом гепатозе у крыс является следствием нарушения антитоксической Функции печени и сопровождается внутрисистемным десинх; онозом печеночной.регуляции ПОЛ. ДОС и уровня ендере-мии на протяжении суток.

Влияние курсовых введений альфа-токоферола на рре-ме! луп организацию перекненого окислишь лигшдов и антиоксидантной защиты у интактных крыс

После введения сх-токсферола интактиым животным в дневное время па Фоне максимальной активности процессов ПОЛ, но му-нимального уровня аптиоксидянтов в крови, оттекающей из печени. обнаружено достоверное увеличение его уровня в эритроцитах криви поступающей и оттекавшей через микрососудисту» систему, при несущественных изменениях -указателей в плазм? крови.

Неизменность ритмометрических параметров концентрации данного антиоксиданта в плазме крови из печеночной вены, на Фойе внутреннего смещения акрофазы показателя из печеночной вены к аналогичному в контроле /внутренняя епрофаза составляет 6 ч 04 мин /, свидетельствует о сохранении процессов суточной ритмичности метаболизма данного ачтиоксиданта в печени. присущей животным контрольной группы /табл.3,/.

Наибольшие значения концентрацииа-токоферола в плазме крови из печеночной вены, приходящиеся на ночные часы, синхронизированы со значительно возросшими показателями в эритроцитах. !?; утренние часы минимум концентрации сх-токоферола в плазме коррелирует с наименьшим его содержанием в эритроцитах и падением порто-навальной разницы концентрации в эритроцитах.

Анализ ритмометрическнх параметров активности ПОЛ позволил обнаружить, чте иезоры концентрации начальных и промежуточных продуктов ПОД плазмы крови и мембран эритроцитов крови из печеночной и воротной вен сохраняют значения, • достоверно не отличаются от таковых у интактных животных /табл. 1.3/.

Конкурентное взаимодействие про- и антиоксидантных систем крови подтверждается противофазной динамикой уровня сх-токоферопа в плазме с концентрацией ДК плазмы крови из печеночной вены /г*-0,72:Р<0.05/ и в мембранах эритроцитов /г=-0,94;Р<0.05/. Аналогичен характер взаимосвязи МДА и витамина Е в мембранах эритроцитов /г=-0,85;Р<0.05/

Фаза максимума продуктов ПОЛ в плазме кройи и мембранах эритроцитов из крови печеночной вены синхронизирована с фазой минимума концентрациисх-токоферола в плазме и мембранах эритроцитов . Напротив, в вечернее время максимальные значения концентрации ос-токоферола в плазме и эритроцитах соответствуют минимальной активности свободнорадикального окисления липидов в печени, о чем свидетельствует снижение концентрации продуктов ПОЛ в крови из печеночной вены .

Участие ПОЛ и антиоксидантной защиты в регуляции суточного ритма сидеремии аргументировано синхронизацией ритмов концентрации свободного железа в плазме крови из печеночной вены с уровнем продуктов ПОЛ, а также их реципрокные ьзаимо-

Таблица О

Ритмометрические параметр« пространственно-временной организации показателей ПОЛ - АОС у интактинх ирис после

парентерального введения ос-токсферола в дневное время -}.

Показатели

Период /М ± т/

Иеэор /М 1 т/

Амплитуда /М * т/

Акрофаза /95% ДИ/

ДК плазмн а печеночной вене ДК плазмы и поротной вене

ИДА плазмн в печеночная вене

МДА плазмы в воротной вене

ДК эритроцитов в печаточной вене ДК эрнтецитов в воротной вене

МДД эритроцитов в печеночной вене МДА итрснштов н псротпой пене

¡К"лгзо ебдео на пе'ч'ночноп вены

железо оОщ^е из воротной еены

» плазмы из печеночной вены Ке*+ плазмы из воротной вены С'.-Токофорол плазмн з псче- . ночной оен.?

с<~токофг>рол плазмы в воротной вене

ос-токоФерол зритрош: :ов в печеночной пене

ос-токоферо-эритроцитом в поротной вено

Продолжительность гекеена-дового с!'а

2з.ес*о.31 24.2011.50 23.90*0,80 23. 80*1,21 23, 7010, 20 23,90*0.2.1 24,110,5 . 24.00*0,40 23,7010. ео 23, 9010. 70 23.910.30 24,110.46 24,0010,30

23, 90±0, 35

24.0010,6

23.79i0.30

23.7010, 21

10,9310,23 11.05Ю.41 22, 7210, 69 21,2810, 73 18.7810,65 17.В2Ю.29 58. 2210, 98 52, 27*1.37 21,5110,47 21.'1Ы0,?1 6,55 .0, 32 7,17*0. 27 5,45*0,26

6,39*0,28

7.84Ю. 19

8. 04*0, 10

15.9410,42

4,53*0, 17 2,30*0, 35 5,5310. 39

/

3,0910,26 2. 77Ю. 29

/7 /9 /13 /9.

1,40*0,17

15,7110.58

8,6210,30 8, бас. 54

/10. /9. /8.

2.5310,20

2. 12Ю, 13

3, 88*0.15 0,8110,22

/10. /14. /15. /12. /е. /18.

0,7110.69

/15.

3. 06*0,31

-'20.

1.37Ю,41

/21.

9.01

18; 10.43/ 11.45

13 Р.9/ 15.25 52: 1о. 5'3/

11.30

50; 13.06/ 11.05 ЯК 11.5Э/ 11.51

4а; 13.54/ 11,10 52: 13. 38/

11. иа

04: >;>. 12/ 19. 31 22; 0. 40/ 17, 24

44; 19.04/. 13. 59 09; 15. 48/

10.31

51; 12.11/

19.25

01:20.49/

16. 55 51: 17.59/

22. 13

37; 23. 49/

23. 17 51:0.45/

6,18+0,87 12.49

/10,

15^14.57/

Примечание; М - среднее арифметическое;

т - средняя сшибка греднего арифметического; ДИ - доверительный интервал

Таблица 4

ритмометрические параметры пространственно-временной организации показателей ПОЛ - АОС у интактных крыс после парентеральное введениясх-токоферола в ночные часы

Показатели

Период /М л т/

Мезор /М * п/

Амплитуда Акрофаза /М ± т/ /95» ДИ/

д;:. плазмы в печеночной вене Д!'. плазма в воротной вене

).!ДА плазмы в печеночной ьане КДА плазмы в воротной вене

Д.\ ЭОПТрОЦИТОБ б печеночной ьене ДК эритроцитов в вг.оатной вене

МДД '¿ритроцитов в печеночнсй вене КДА эритроцитов в воротной вене Мелег'о общее из пзчиночной вены

Железо общее из воротной вены

Ге++ плазмы из печеночной вены

Ре+т плазмы из воротной вены

СХ-токоферсл плазмы в печеночной вене

ос-токоферол плазмы в воротной вене

сх-токоферол эритроцитов в печеночной вене

а-токоферол эритроцитов в воротной вене

Продолжителъ -ность гексена-лсього сна

24. 00±0. 41 24. 20*2. 50 23. 8*0. 30 24. 00*0, 42 24,20*0.42 23.90*0,42 23. 90±0, 40 23, 90*0. 42 23. 6040, 20 24,00*0,50 23,80*.0,11

23, 80*0, 11

24. 00*0, 50

23,90*0.55 24.00*0.55 24.1*0, 50 23, 90*0, 45

12,52*0,28 11.97*0.34 22,5210,42 22.60*0,91 17,87*0, 62 46,36*1,92 52.421-2, 18 46.36*1,92 25,38*0,32 22, 64*0, 39 6. 16*0, 42 6. 92*0, 33 6,45*0,21

6,37*0,21

6. 27*0, 14

6,97*0,14

14,36*0,98

2,2840, 3,64*0, 6, 62*0, 5, 65*1, 4.28*0, 3,24*0,

14,48*1.

10,72*0, 3,74*1, 8,25*0, 3,31*0. 1,51*0, 1, 03*0.

31 12. /10.07; 22 13. /10.54: 31 16. /14.55; 91 18. /15.54; 31 10. /10.54; 82 9. /7.17; 24 8. /6.36; 49 10: /в. 05; 47 20. /18.19; 33 15. /12.45; 22 17. /14.46; 24. 18. /16.13; 24 4. /2.16;

.23/

15

14. 38

15. 22/ 35

18.15/ 52

21.48/ И

15.56/ 46

12.15/ 48

10. 52/

27

12.53/ 25

22.09/ 25

18.05/ 32

19.20/ 45

21.17/

28

6.40/

0,89*0,27 ' 3.18

. /1.50; 4.46/'

2,66^0.20 20.00

/17.28:22.32/

2.80*0,37 20.19

/18.31;22.07/

.11,28*0.33 13.03

/12.11:15.55/

Примечание; Ы - среднее арифметическое;

ге - средняя ошибка среднего арифметического; ДИ - доверительный интервал

отношения с концентрацией(х-токоферола в плазме и мембранах эритроцитов.

Следует отметить, что ритмоиетрнческие параметры наркотического эффекта гексенала достоверно не отличаются от контрольных значений, Акрофаза наркотического эффекта гексенала синхронизирована с активностью ПОЛ и находится п ироти-вофазе с параметрами аит'иоксидантной зашиты.

Поело курсов витаминотерапии, проведенных интактннм животным. ь период максимальной концентрации с<-токоферзлл плазмы и эритроцитов в крови, но минимальных значении показателей активности ПОЛ, оттекающей из печени - в ночные чаек.?, отпечено отсутствие достоверных изменений мезонов концентра -шш антиоксиданта в плазме и эритроцитах. При этом акр"Фа-н показателе!) в плазме крови и:ч печеночной и воротной ''ем смещаются с вечернего Бремени на ночные часы /таол. 4/.

Максимальные значения кпшдентршмисс-токоферола в плазме из печеночной вены сопровождаются значительным увеличением его уровня в эритроцитах по выходе из печени,' а шшимальши1 значения уровня янтиокеидаита в плазме крови соответствует падению порто-кзвалыюй разницы по его концентрации в эритроцитах

Ритчомстрические параметры активности ПОЛ п плазме кропи и мембранах эритроцитов свидетельствуют о том, что при неизменности срелнесуточинх значений в крепи из печеночной и воротной вен, сохраняются рециирокние взаимоотношения продуктов перекисного окисления липпдов с уровнем о;-токоферола в плазме крови и мембранах эритроцитов из крови после прохождения печени /табл.<1 /.

Закономерно, что повышение активности ПОЛ в дцешюе время. сопровождающееся увеличением уровня свободной фракции железа, на/одни л в противофазе с концентрациями сх-токоферола в плазме и мембранах эритроцитов из печеночной вены. Соответственно, снижение активности ПОЛ, солровоздзощееся падением уровня свободного железа, совпадает по времени с наивысшей концентрацией сх-токоферсл'э в плазме крови и мембранах эритроцитов в крови из печеночной вены.

Как правило, ритмометрические параметры продолжительности наркотического эффекта гексенала после витаминотерапии,

проведенной в дневные часы, сохраняют реципрокныв взаимоотношения с показателями резервной мощности антиоксидантной за,;;пти и имеют высокую степень прямой корреляции с активностью ПОЛ в печени.

Таким образом, введениесх-токоферола интактным животным не приводит к достоверным изменениям пространственно-временно)! организации системы ПОЛ и АОС, уровня сидеремии, а также антитоксической функции печени. Неизменность ритмометричес-;<'!!>: параметров из воротной и печеночной вен в контроле с аналогичными после введения антиоксидантов свидетельствуют о достаточной стабильности данной системы в условиях нормы.

■ Временная организация ПОЛ и и антиоксидантной защиты у крыс при интоксикации тетрахлорметаном после парентерального введения сх-токоферола

Обращает внимание наличие статистически значимых суточных ритмов для всех изученных показателей, а также выраженные .различия в изменениях пространственно-временной организации ПОЛ и антиоксидантной защиты в зависимости от времени парентерального введения препарата.

Так, носче введения препарата в период минимальной активности ПОЛ. но наивысшего уровня (Х-токоферола в плазме крови и мембранах эритроцитов, ритмы которых инвертированы после введения гепатотоксина. максимальные значения концентрации сх-токоферола в плазме крови из печеночной и воротной вен смещаются с ночных часов на утреннее время, а акрофаза концентрации сх-токоферола в эритроцитах из печеночной' и воротной вен смещается с вечернего на дневное время /табл.5/.

Уровеньсх-токоферола в плазме крови из печеночной вены сохраняет высокую степень обратной корреляционной зависимости с концентрацией ДК плазмы /г» -0,89; Р<0.05/, а концентрация СХ-токоферола в эритроцитах - с уровнем МДА эритроцитов из печеночной вены /г= -0,70; Р<0.05/.

Следует отметить, что уровень продуктов ПОЛ в плазме и мембранах эритроцитов в крови из печеночной вены возрастает в лочное время - в период максимальной их концентрации, но минимального уровня эндогенных антиоксидантов и закономерно

Таблица г>

ритмометрические параметры пространственно - временной организации ПОЛ - АОС у крыс с экспериментальным тепатозсм после парентерального введения ос-токоферола в дневное время

Показатели .

ПертЗд /М i ш/

Иезор /М * т/

Амплитуда /М а. ш/

Акрс-îenn

ли/

ЯК плазмы в 2.1, печеночной вене

ЛК плазмы в 23, воротной пене

ИЛА плазмы в 24, печеночной вене

МДА плазмы В .23, воротной вене ДК эритроцитов 24. печеночной вене ДК эритроцитов 23, воротной вено КЛА эритроцитов 24, печеночной вене МЛ А эритроцитов ¿3. члрптноП иене Железо общее 23, печеночной вены Железо общее 24, поротной вены Ре+< плазмы 24, печеночной вены

в

в

в

в

из

из

из

гЧм-» плазмы из воротной пены

<х-токоФорол плазмы с печеночной вене

ос-токофорол плазмы в воротной ceiu

а-токоферол эритроцитов а печеночной вене <х-токоферол. эритроцитов в воротной вене

Продолжительность гексена-лового сна

23. 23.

23.

OOiO.OO 90*0, 30 00*0, 30 80*1,20 00*0,40 80i0.39. OOtO, 20 90*0, 40 70*1. 30 00*0. 80 OOiO.SO 90*1,30 90*0.80

80*0,60

SOtO, 30

13, 07*0.57 12,89*0.85 26.37*0.28 25.86t0.49 21.25*0,02 20.30*0,42 88, 32*7, il 84; 79*6,23 24,36t 1,13 26.07 iQ, 55 9, 37±0, 27 9,09*0, 18 3,32*0,15

4.24 i 0.29

/

1,64*0,50

/

7,91*0,08 3,02*0,77

/20.

}

/20.

22.

48/

r;.'. r.1

V

3,85*0,13 i,esto,i7 15,09tl, 16

/

10,34. 1. 14

6, 73±0, 61

5, 9ß*0, 39' /

5,96*0,44

/

1.84*0,45

/

0.82*0. 22

'0. /15.

3

/17. /18. /22. /22.

/10. /10.

I

/19.

5

/18. /4.

-i.31±0 23 0, 91*0,32

/5,

24, lOiO.GO

23,90i0, 70

5.24i0 23 5.33*0, 16 20, 96*0, 45

1,28*0,33

/10.

1.37*0,28

/9.

•1, 20±0,12

/14.

22; 3. 4.3/ СИ. 55 yj .45/

V'-n Г'Л

iic: 1-4.44/ ¡У. Ü5 00, 20. 32/

0. Iii 34;.:, 02/ 23. 47 03; 1. 39/

22:22.10/

12.5!. 15; 15.35/ 21, S '5 ?3: 0. 23/ 20. 50 42; 22. W/ 7.55

4.3; 11. 0Й/

7 £1 25:09.33/

13.22 43; 15.58/

11.40 14; 14.13/

16Î08 12; 18.04/

Примечание: M - среднее арифметическое;

m - средняя ошибка среднего арифметического; Д11 - дорештельный интервал

снижается в период минимальной активности ПОЛ. но наивысшего урсзня ос-токоферола в крови из печеночной вены - в дневные часы /табл.5,/.

о закономерности временной зависимости обмена железа и активности ПСЛ в печени свидетельствует синхронизация ритмов концентрации свободного железа с уровнем ДК в плазме /г-+0,85; Р<0.05/ и мембранах эритроцитов в -крови из печеночной вены /г= +0,54; РС0.05/, а также превышение уровня сидеремии в период максимальной концентрации продуктов ПОЛ.

Достоверное снижение среднесуточной продолжительности гексеналового наркоза после проведенной витаминотерапии в дневные чаек сопровождается внутренним смещением акрофазы с ночного Бремени - на полуденное /табл.5 /. При этом время максимальной продолжительности гексеналового наркоза совпадает с наименьшим уровнем ос-токоферола плазмы и эритроцитов, ¡ю максимальными значениями ПОЛ и сидеремии из печеночной вены /табл.5/.

После введений антиоксиданта в период максимальной концентрации ПОЛ. но минимальных резервов антиоксидантной защиты обнаружено, что на фоне достоверного увеличения мезоров. акрофазы концентрации Ос-токоферола в плазме и мембранах эритроцитов в крови из печеночной и воротной вен смещаются с дневного времени на ночные часы.

Если учесть, что уровень ос-токоферола в печеночной вене значительно возрастает в вечерние и ночные часы - период максимальной концентрации антиоксиданта в плазме крови, а снижается, аналогично контрольным животным, в утреннее и дневное время, то становится очевидным факт1 нормализации временной организации процессов метаболизма Ос-токоферола в печеьи.

Сопоставление ритмометрических ' параметров активности процессов ПОЛ с уровнем эндогенных антиоксидантов плазмы и эритроцитов свидетельствует о сохранении между ними закономерной временной зависимости /рис.2,табл.6/.

Так, смещение акрофазы концентрации ос-токоферола в плазме крови и мембранах эритроцитов, сопровождается аналогичными изменениями суточной ритмичности продуктов ПОЛ, акрофаза которых смещается, в противоположность сх-токоферолу, с ночных

часов па дневное время /табл.б /,'

При этом время максимальной концентрации продуктов ИОЛ в плазме крови и мембранах эритроцитов соответствует мпнптль-ному уровнюсх-токоферола в плазме крови и палению его гюр-то-каеальноП"разницы по концентрации в эритроцитах, а минимальные значения концентрации продуктов ПОЛ - в ночное время, соответствуют максимуму концентрации сх-токоферола в Плазме крови ¡: положительному приросту его уровня в эритроцитах,

Важно отметить, что изменение ритмометрических параметров сидеремий в воротной вене после введения аитиокЬидэнтов р ночные часы проявляется лишь в смещении акрофазн с на 15 ч. Падение уровня общего железа в Плазме из печг.тчнеч") вены в утренние часы, а также его увеличение п вечернее время, при неизменном ритме поступления из поротной шш, может свидетельствовать о стабилизации процессов депонирования и редргюпнрования железа печень», марупение которых происходило после тетрахлориетановой интоксикации /таол. 2.6 /.

Следовательно, мемраностаОилизирурцему эффектуос-токоф')-ро-:а. вводившемуся в ночное гремя, а также изменению, в ответ на введение препарата, суточной ритмичности ПОЛ и антпокси-дантной зашиты принадлежит, по всей вероятности, основная роль в нормализации циркаднанной ритмичности сидеремин.

Аналогично изменению цнрк-адианпоП ритмичности активист! НОЛ, аптноксидантноп защиты и уровня сидеремии после антнок-сидантной терапии перестраивается ритмичность наркотического зффекта гексриала.

Максимальная продоля-ителымсть гегсенапового наркоза - в ночное '1рсмя, совпадает со значительным падением норто-ка-вальной разницы по концентрации с<--гоксФерола и ее макекмяль-ним подъемом по отношению к прочуктнм ПОЛ в плазме крови и мембранах эритроцитов, а также уровню ендеремни.

Таким со'раз ом. у крнс с экспериментальным гепатозо^, вызванным тетрахлорметзновоП интоксикацией, получавших анчи-окондантную терапию п период мак'-шалыой активности процессов ПОЛ и минимальной антноксядантноП защиты крова - о ночные часы, уже через 2'недели после введенияс<-токоферола в дозирогке. ялпсватноП лечебной I 0,15 мг/100 г массы живот-

- 2-1 -

Таблица 6

Ригмсмегрические параметры пространственно - временной организации ПОЛ - АОС у крыс с экспериментальным гепатозом после шрентер:льного введениясх-токоферола гночные часы

Показатели

Период /И I гл./

Мезор /М 1 щ/

Амплитуда /М *. ш/

Акрофаза /95% ЛИ/

ДК плазма в печеночной вене ДК плазмы ч воооткоЛ ьеье

л11к ГОШЗМЫ в печеночной вено ;>1,\А ;:л:1зкы в воротной ьене

эритроцитов е пс-чгпочной йене ДК оштроцигов в воротной вене

ЫДА эритроцитов в печеночной иене

ЫДА эритроцитов в Е''ротноП вене Железо оощез в печеночной Бене

Железо общее в воротной вене "е*^ плазмы в печеночной вене

£'е++ плазмы в воротной вене схг-токофзрол плазмы в печикочной вене сх-токоферол плазмы в воротной вене

сх-токоферол эритроцитов в печеночной вене «.-токоферол эритроцитов в воротной вене

продолжительность гексена-лового сна

23,70*0.10 23. 80x0. 80 24.0010, 30

2з.ео±1, ю

24.1010, 60 23.9010,38 24,0010, 40 23. 8010, 60 23,90Ю. 70 24.00*0, 30 23,8010,40 24.0010.50 23,9011,14

12.36*0.42. 13,74*0,27

25, 90*0, 62 23,51*0,62 19.33*0,49 20, 14*0, 23 67.73*4,93 64,41*4, 14

26, 56*0, 82 24, 40*0, 67

9, 33*0, 19 8. 13*0, 12 4, 56*0,18

4,79*0, 2. 05*0, 4,39*2. 7,72*0. 1,2310. 1.83*0, 12,46*2, 12.99*1, 8,14*0, 4,27*0, 2,54*0, 3,17*0. 0,78*0,

44 17.

/15.43; 21

49 /11 17 /20.21 73 17! /15.40; 49 В. /6.48; 59 10. /8.26; 00 12. /10.26;

41 14. /13.05; 40 13. /14.50; 12 15. /13.48; 27 19. /16.30;

42 11. /10.07; 29 7.

/5.30:

03

18.23/ 44

15.36/ 56

2.3. 28/ 01 18.20/

40

10.32/

ГО

13.14/

46

15.06/

41

16. 17/

26 22. 02/ 20

16.52/ 22

21.14/ Зг>

13.03/ 46 10.02/

24,20*0,60 5, 23±0, 17 23,80*0.70 6.12*0,19 2.4,10*0,40 6,1310,18 23, 90*0, 40 16, 44*0, 31

0.99*0,30 5.48

/5. 36; 8. 02/

1.37*0.41 23.17

/21.51;0.45/

1,24*0,36 1.32

/23. 52; 3. 12/

4,41*0,09 14.30

/13. 10:15.50/

Прчмечание:

М - среднее арифметическое: и - средняя ошибка среднего арифметического; Дй - доверительный интервал

Рис.. 2. Суточная динамика концентрации ЛК и МДА, двухвалентного жолим. сх-токок'рола в плазме крови и мембранах эритроцитов из печеночной (сплошная линия) и воротной (пунктирная линия) roh. продолжительности наркотического эффекта гекачплл У животных с экспорименталыш гс'.атозом после парентерального г?ведеинисх-токоферола в ночные часы.

йо оси абсцисс - время суток, чгсн; по осп ординат -показатели концентрации : ДК - нмоль/ил - плч&мы (I) и эритроцитов (III); НДД - имо..ь/мл - плазмы ¡11) и эритроцитов (IV); двухвалентного• железа - мкмоль/л- плазмы Ч'У); гексена-лопог" 11-1( коза- мин (VI); сх-токоферола -мкмоль/л - плазмы (VII! исх-токоферола эритроцитов (ViII)

hopo) отмечена нормализация пространственно-временной организации ПОЛ и АОС в печени, что может свидетельствовать об эффективности ночного введения препарата животным на ранних стадиях токсического повреждения печени.

ВЫВОДЫ

ь Концентрация ос-токоферола в плазме крови и мембранах эритроцитов у интактных белых крыс подвержена закономерным суточным колебаниям. Наибольшего уровня она достигает в тем-ноеую. наименьшего - в световую фазу суток.

2. Ииркадианная организация токоферолемии у интактных белых крыс находится в противофазе с ритмичностью ПОЛ и концентрацией свободного ;келеза в крови из печеночной вены.

3. Ритиичность гипногенного эффекта гексенала интегральна интенсивности ПОП и уровню токоферолемии в печеночной вене. Максимум продолжительности гексеналового сна синхронизирован с наибольшей порто-кавалыюй разницей по концентрации свободного железа. ДК, МДА и наименьшим содержанием антиоксиданта в плазме и мембранах эритроцитов крови из печеночной вены.

4. К проявлениям гепатотоксического действия тетрахлор-метана относится инверсия гипногенного эффекта гексенала, ПОЛ, АОС и обмена железа.

5. Резистентность пространственно-временной организации ПОЛ, АОС и антитоксической функции печени у интактных белых крыс к парентеральному введению альфа-токоферола в дозе, адекватной лечебной, не зависит от фазы суток, в которую вводили антиоксидант.

6. Курсы парентерального введения витамина Е в темновую фазу суток, когда концентрация эндогенного антиоксиданта в печеночной вене у жиеотных с токсическим гепатозом минимальна, обеспечивает наибольшую эффективность восстановления ритмической организации фармакокинетики токоферола.

7. Антиоксидантная хронофармакокоррекцин процессов ги-перлипопероксидации клеточных мембран при экспериментальном токсическом гепатозе, проведенная в период максимальной активности процессов ПОЛ. уровня свободного железа, но наи-

меньшей концентрациисх-токоферола в крови является наиболее эффективным способом коррекции внутрисистемного десинхроноза ПОЛ. ДОС, уровня свободного железа и антитоксической Функции печени.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. А.Л. Ксркин, Е. В. Чесноков, О.В. Гуров. Биоритмы экст креции железа при экспериментальном гепатозе //Механизмы патологических реакций, Иркутск, 1991.-С.49.

2. Э.Н. Баркова, Б. В. Жданова, Е.М. Нипшсюш, А. Л. Кор-кин. В. В. Варницшю, О.В. Гуров. 0. й. Черноглазова. 0.11. Гурова, Б.А. Тетерина. Фундаментальные й прикладные ьлпектм пространственно-временной организации эритролоэза г обмена железа // Комплексное изучение медико-биологических проблем здоровья населения Тюменской области: Сборник научных трудов, посвященный 30 летию •• 'Тюменского медицинского института. Тюмень, 1993. С. 19.

3. Л.Л. Коркин. О.В. Гуров. Суточная динамика экскреции же.-еза с мочой и мехзнизмы ее регуляции у (юльгих циррозом печени //. Профилактика и экспериментальная терапия экстремальных и терминальных состояний. Омск, 1992. с. МО-142.

4. О.В. Гуров, Л.Л. Коркин. Временная организация ПОЛ и ДОС при повреждении паренхимы печени: // Комплексное изучение ме^ико-биологичеоких проблем здоровья населения Тюменской оОл.'сти: Сборник научных трудов, посвященный СО летию -Тюменского медицинского института. Тюмень, 1993. С. 23.

5. Д.Л. Коркин, О.В. Гуров. Особенности суточной динамики экскреции железа с мочой при повреждении паренхимы печени: // Комплексное изучение медико-биологических проблем здоровья н?селем"я Тюменской области: Сборник научных тру дов, посвященный 30 летию - Тюменского медицинского института. Тюмень, 1993. С. 23. ,

6. Баркова Э.И. Гуров о.в.,Гурова О.П. Роль печени в регуляции биоритмов сидеремии у кроликов при острой алкогольной интоксикации/УБюл. эксперим. биологии» и медицины. - 1993. - !1 7.-С. 147-149.

7. Гуров О.В. Хронобиологическое обоснование эффектов-

ности применения антиоксидантов при паренхиматозном повреждении печени // Актуальные проблемы экологической хронобиологии и хрономедицины : Тез. докл. международной научной конференции. - Екатеринбург, 1994.- С.

8. Е. Barcova. A.Korcin, 0. Gurov. Dlurlnal variation of iron metabolism in petlents with haewochromatosis // Gastro-enterology-1993: Abstracts International conference.- London. 29 June - 1 July 1993.- P.286. \

\