Хориоретинальная дистрофия: особенности развития у преждевременно стареющих крыс линии OXYS и коррекция митохондриальным антиоксидантом

Фурсова, Анжелла Жановна

Диссертации по медицине → Патологическая физиология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Хориоретинальная дистрофия: особенности развития у преждевременно стареющих крыс линии OXYS и коррекция митохондриальным антиоксидантом

ДИССЕРТАЦИЯ

Хориоретинальная дистрофия: особенности развития у преждевременно стареющих крыс линии OXYS и коррекция митохондриальным антиоксидантом - диссертация, тема по медицине

АВТОРЕФЕРАТ

Фурсова, Анжелла Жановна Новосибирск 2009 г.

Ученая степень: доктора медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.16

Автореферат диссертации по медицине на тему Хориоретинальная дистрофия: особенности развития у преждевременно стареющих крыс линии OXYS и коррекция митохондриальным антиоксидантом

09-5 3105

На правах рукописи

ФУРСОВА Аижелла Жановна

ХОРИОРЕТИНАЛЬНАЯ ДИСТРОФИЯ: , ОСОБЕННОСТИ РАЗВИТИЯ У ПРЕЖДЕВРЕМЕННО СТАРЕЮЩИХ КРЫС ЛИНИИ ОХУБ И КОРРЕКЦИЯ МИТОХОНДРИАЛЬНЫМ АНТИОКСИДАНТОМ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации иа соискание ученой степени доктора медицинских наук

Новосибирск, 2009

Работа выполнена в Институте цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук (Новосибирск)

Научный консультант: доктор биологических наук

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор

доктор медицинских наук

Колосова Наталия Гориславовна

Сафронов Игорь Дмитриевич Грек Олег Рувимович

Черных Валерий Вячеславович

Ведущая организация: Институт терапии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (Новосибирск)

Защита состоится «¿1 » 2009 года в 10.00 часов на заседании

диссертационного совета Д 001.048.01 в Научном центре клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук по адресу: ул. Академика Тимакова, 2, Новосибирск, 630117. Тел./факс: 8 (383) 333-64-56

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НЦКЭМ СО РАМН. Автореферат диссертации разослан с^т^- О 4 2009 г.

Учёный секретарь диссертационного совета доктор биологических наук H.A. Пальчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Возрастная макулярная дистрофия (ВМД) занимает лидирующее положение в мире среди заболеваний, ведущих к стойкому снижению зрения и слепоте (Егоров Е.А., 2006). Её выраженные проявления в разной степени присутствуют более чем у 50% европейцев старше 65 лет (Акопян B.C., 2004). Заболеваемость ВМД растет на фоне увеличения продолжительности жизни. В России, по разным данным, ВМД страдает от 14 до 46 % населения этой возрастной группы. Ситуация осложняется несвоевременной постановкой диагноза и тенденцией к омоложению заболевания, что ведет к инвалидизации трудоспособного населения. Патогенез ВМД до конца не ясен, эффективных способов лечения нет, что обусловлено неполнотой знаний механизмов развития заболевания - комплексного и многофакторного, как и сам процесс старения (Cook Н. et al., 2008).

Патогенез ВМД связан с гипоксией и воспалением. Их мишенью становятся пигментный эпителий сетчатки, мембрана Бруха и сосуды хориоидеи. В качестве основного повреждающего звена выступает окислительный стресс - нарушение баланса между генерацией и детоксикацией активных форм кислорода (АФК), его следствием - отек, отслойка пигментного и нейроэпителия, кровоизлияния, неоваскуляризация, потеря зрения. Неоваскуляризацию в условиях гипоксии в тканях внутренних оболочек глаза больных ВМД провоцирует фактор роста эндотелия сосудов (vascular endothelial grows factor - VEGF). Он экспрессируется в клетках пигментного эпителия и в физиологических условиях обеспечивает жизнеспособность и пролиферацию эндотелиальных клеток сосудов (Lau L., 2007, Ding X., 2008). Атрофия клеток пигментного эпителия и недостаточная экспрессия гена и синтеза белка VEGF ведут к атрофии хориокапилляров и развитию атрофической формы ВМД (Grisanti S., Tatar О., 2008). Ингибиторы VEGF снижают неоваскуляризацию, их всё шире используют в лечении ВМД, однако механизм участия этого фактора в патогенезе заболевания остаётся до конца не выясненным.

Впервые адресную доставку в митохондрии антиоксиданта mitoQ - комплекса убихинона (CoQ) и проникающего катиона трифосфония - осуществили М.Р. Murphy et al. (Murphy M.P., 2001; Kelso G.F., 2002). Ещё более эффективным соединением этого класса оказался созданный в России SkQl - кати-онный аналог хинона, составленный из пластохинона, проникающего катиона и деканового линкера (Скулачев В.П., 2007). Комплексные исследования показали, что SkQl является мощным антиоксидантом многократного действия, поскольку легко восстанавливается в дыхательной цепи митохондрий (Скулачев В.П. и др., 2008; Antonenko Y.N. et al, 2008). Обсуждаются большие потенциальные возможности применения митохондриально направленных антиок-сидантов в терапии заболеваний, патогенез которых связан с окислительным стрессом (Cochemé Н.М., 2007), однако их внедрение невозможно без проведения всесторонних фундаментальных исследований.

Один из подходов к выяснению этиологии и патогенеза, к разработке способов терапии - создание биологических моделей социально значимых заболеваний человека. Дистрофию сетчатки моделируют воздействием физических факторов либо используют генетические модели: животных трансгенных, с нокаутом генов или с определенными мутациями (Ding Н., 2008). По характеру изменений и механизму развития они не могут быть строго отнесены к моделям ВМД, т. к. воспроизводят, как правило, одну из стадий заболевания, но не дают комплексной картины его развития. У людей ВМД развивается на фоне множественных проявлений старения, возраст манифестации которых различается, затрудняя отделение причин от эффектов старения.

Существует три основных критерия соответствия модели тому или иному заболеванию: адекватность клинических проявлений, изменений на морфологическом уровне и реакция на стандартную терапию (Swanson K.S., 2004). По характеру морфологической и электронно-микроскопической картины близки развивающимся при ВМД у пожилых людей изменения глазного дна преждевременно стареющих мышей SAM (Р8), появляющиеся у них к возрасту 10-12 мес. (Maji A.B., 2000). Сегодня эта линия - единственная общепризнанная модель преждевременного старения, однако клиническая картина изменений тканей глазного дна у них не исследовалась.

Исследования последних лет показали, что комплексное проявление фе-нотипических признаков преждевременного старения характерно и для крыс линии OXYS, созданной в ИЦиГ СО РАН селекцией крыс Wistar по признаку ранней катаракты. В пяти первых поколениях её развитие провоцировали обогащенной галактозой диетой (Соловьева H.A., 1975). В дальнейшем отбор шёл по ранней спонтанной катаракте, сцеплено с которой животные унаследовали синдромом преждевременного старения. Его проявлениями становятся сниженная по сравнению с исходной линией крыс Wistar продолжительность жизни и раннее развитие возраст-зависимых заболеваний на фоне ранней ин-

волгоции тимуса и снижения активности Т-клеточного звена иммунной системы (Колосова Н.Г., 2001, 2003, 2008; Лоскутова Л.В, Колосова Н.Г., 2000; Маркова Е.В., 2003, ВоЬко А. е1 а1, 2005; Ко1овоуа N.0., 2006). Состояние линии по-прежнему контролируется по признаку ранней спонтанной катаракты, однако до настоящего времени анализ клинической картины возрастных изменений хрусталиков крыс линии ОХУБ не проводился. Наши предварительные исследования показали, что наряду с катарактой у крыс линии ОХУБ развиваются клинические проявления хориоретинальной дистрофии (ХРД), аналогичные наблюдаемым при ВМД у людей. Выяснение механизмов развития у крыс линии ОХУЭ патологических изменений сетчатки как одного из проявлений преждевременного старения, обоснование соответствия линии критериям модели ВМД, пригодной для изучения молекулярно-генетических основ формирования этого заболевания и оценки эффективности терапевтических воздействий, представляются актуальными как для фундаментальной медико-биологической науки, так и для практической медицины.

Цель исследования: изучить особенности развития ХРД у преждевременно стареющих крыс линии ОХУБ, оценить профилактический и терапевтический потенциал митохондриально направленного антиоксиданта БкС^.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать клинические особенности развития патологических изменений сетчатки и хрусталиков у крыс линии ОХУБ.

2. Провести морфологическое исследование особенностей развития ХРД у крыс линии ОХУБ.

3. Изучить уровень экспрессии гена фактора роста эндотелия сосудов УБОР' в тканях внутренней оболочки глаз крыс линии ОХУБ на разных стадиях развития ХРД.

4. Установить связь развития катаракты и ХРД у крыс линии ОХУБ с окислительным стрессом и оценить возможность воздействия на их течение препаратов со свойствами антиоксидантов.

5. Изучить влияние митохондриального антиоксиданта БкС)1 на развитие ХРД и катаракты у крыс линии ОХУБ и связь его эффектов с влиянием на экспрессию гена УЕОБ в хориоретинальном комплексе и альфа-кристалли-нов в хрусталиках.

Научная новизна исследования. Впервые показано, что у преждевременно стареющих крыс линии ОХУЭ параллельно с катарактой развивается ХРД, по клиническим и морфологическим проявлениям соответствующая ВМД у людей, что позволяет рассматривать эту линию как адекватную модель этого заболевания. Установлено, что в основе патогенеза ХРД у крыс линии ОХУБ лежат склеротические повреждения сосудов хориоидеи, нарушение кровотока в них и деструкция пигментного эпителия, которые приводят к ишемии и повреждению нейросенсорных клеток.

Показано, что развитие ХРД у крыс линии ОХУБ связано с изменениями уровня экспрессии гена УЕОБ в хориоретинальном комплексе крыс линии ОХУЭ: его снижением на ранних стадиях заболевания, влияющим на тяжесть поражения сетчатки, и ростом в период формирования выраженных патологических изменений, когда между экспрессией гена УЕОБ и тяжестью поражения сетчатки устанавливается положительная связь.

Установлено, что окислительный стресс, выступая в качестве патогенетического фактора развития ХРД и катаракты, не лежит в основе их этиологии у крыс линии ОХУЭ: он характерен для развитых стадий заболевания.

Впервые выявлен высокий терапевтический потенциал митохондри-ального антиоксиданта 8кС>1 - пластохинон-децил-трифосфония; его способность при профилактическом приеме с кормом или в виде капель полностью предупреждать развитие катаракты и ХРД у крыс линии ОХУБ и снижать выраженность патологических изменений хрусталиков и сетчатки. Отработаны способы введения и оптимальная эффективная доза БкСП для профилактики и лечения дистрофических изменений хрусталиков и сетчатки у крыс линии ОХУБ

Показано, что в основе эффектов лежит нормализация кровотока в сосудах хориоидеи, восстановление функций пигментного эпителия, которые на молекулярном уровне связаны с нормализацией уровня экспрессии гена фактора роста эндотелия сосудов УЕОБ в хориоретинальном комплексе. Антикатарактальный эффект 8кС>1 связан с его способностью повышать экспрессию основных белков хрусталиков а-кристаллинов.

Научно-практическая значимость работы. Научно-практическая ценность работы определяется доказательством соответствия линии преждевременно стареющих крыс ОХУБ критериям модели катаракты и ВМД. Это открывает уникальные возможности в использовании этих животных для исследования этиологии и патогенеза анализируемых заболеваний, в том числе на ранних доклинических стадиях развития, а также для корректной оценки эффективности терапевтических воздействий. Использование 1фыс линии ОХУБ позволило выявить новое свойство препарата офтан-катахром («Сантен», Финляндия) - его эффективность в профилактике ВМД, усовершенствовать рецептуру БАД «Окулист» (ОАО «Диод»). Высокая эффективность использования модели для оценки терапевтического потенциала новых препаратов продемонстрирована на примере митохондриального антиоксиданта БкСП («Центр митоинженерии МГУ»). Установлена перспективность создания лекарственных препаратов на основе БкСИ для профилактики и лечения катаракты и ВМД. Результаты исследования легли в основу создания ветеринарного препарата, эффективность которого подтверждена в испытаниях на домашних животных.

Положения, выносимые на защиту:

1. Развитие у крыс линии OXYS ХРД по клиническим и морфологическим проявлениям соответствует возрастной макулярной дистрофии у людей, развивается параллельно с формированием катаракты и является одним из проявлений преждевременного старения.

2. В основе патогенеза ХРД у крыс линии OXYS лежат склеротические повреждения сосудов хориоидеи, нарушение кровотока в них, деструкция пигментного эпителия, изменения уровня экспрессии гена фактора роста эндотелия сосудов VEGF в хориоретинальном комплексе: снижение экспрессии на ранних стадиях и повышение по мере прогрессирования заболевания.

3. Митохондриальный антиоксидант SkQl обладает высоким профилактическим и лечебным потенциалом в отношении катаракты и ВМД, его эффекты связаны с нормализацией кровотока, восстановлением пигментного эпителия и экспрессии генов: VEGF в хориоретинальном комплексе и а-крис-таллинов в хрусталиках.

4. Использование линии преждевременно стареющих крыс OXYS позволяет получать более объективную оценку эффективности новых способов лечения и профилактики катаракты и ХРД.

Апробация материалов диссертации. Результаты работы были доложены и обсуждены на следующих научных собраниях: Всероссийской научно-практической конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные и клинические аспекты» (Новосибирск, 2004); International conference «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health» (Смоленск, 2003); межрегиональной конференции офтальмологов (Красноярск, 2003), научно-практической конференции «Пептидные биорегуляторы в офтальмологии» (Москва, 2005); школе офтальмологов «Диагностика и современные методы лечения дистрофических заболеваний глазного дна» (Новосибирск, 2006); V Всероссийской школе офтальмологов (Москва, 2005); 3 International Conference «Basic science for medicine» (Новосибирск, 2007); XV международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Гурзуф, 2007); 5-й национальной конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2007); 3-й Всероссийской научно-практической конференции «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007); конгрессе «Человек и лекарство. Урал-2007» (Тюмень, 2007); 7th Joint Meeting of AFERP, ASP, GA, PSE & SIF Athenaeum Intercontinental (Greece, Athens,2008); I научно-практической конференции «Ионы Скулачева» (Москва, 2007); III Всероссийском семинаре научного общества офтальмологов России «Макула-2008» (Ростов-на-Дону, 2008); научио-практической конференции «Фундаментальные науки - медицине» (Новосибирск, 2008); IV съезде Российского общества биохимиков и молеку-

лярных биологов (Новосибирск, 2008); 6th European Congress of Biogerontology -Ageing and individual life history (Netherlands, Noordwijkerhout, 2008); II международной конференции «Ионы Скулачева» (Суздаль, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 30 печатных работ, из них 8 - в журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов диссертационных работ.

Объём и структура диссертации. Текст диссертации изложен на 230 страницах машинописного текста. Диссертация содержит введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, 3 главы, содержащие результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, список цитированной литературы. Работа иллюстрирована 54 рисунками, цифровой материал представлен в 10 таблицах, указатель литературы включает 82 отечественных и 229 иностранных научных источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Животные. Работа выполнена на 1710 крысах линий OXYS и Wistar на базе Центра коллективного пользования генофондов животных ИЦиГ СО РАН. Возрастные изменения органа зрения (состояние хрусталиков и глазного дна) исследованы на самцах и самках крыс в возрасте от 3 недель до 24 мес. Оценка эффективности препаратов проведена на 593 (1186 глаз) самцах крыс линии OXYS и 299 (588 глаз) самцах крыс линии Wistar. Возраст животных варьировал в зависимости от цели исследования. Препараты животные получали индивидуально с кормом (на сухариках, контрольные - только сухарики) или в виде инсталляций в конъюнктивальную полость.

Методы офтальмологического обследования животных. Биомикроскопию проводили после расширения зрачков 0,5 % тропикамидом на щелевой лампе «Shin №рроп»(Япония) и ручной щелевой лампе-насадке к электрическому офтальмоскопу «Betta 200» (Германия). Глазное дно исследовали с помощью ручного электрического офтальмоскопа «Betta-200». Выборочно проводили флюоресцентную ангиографию и фотографирование глазного дна животных на фундус-камере «Оптон» (Германия) под фторотановым наркозом (1-1,5 мин) через минуту после внутрибрюшинного введения 10% флюорес-цеина натрия. Электроретинографию проводили под масочным фторотановым наркозом с помощью ручной портативной электроретинографической системы «Ephious АВ» (Швеция).

Состояние хрусталиков оценивали в соответствии с принятой в клинической практике градацией степени помутнения хрусталика по системе AREDS в баллах, стадии дегенерации сетчатки у животных определялись по классификации Л.А. Кацнельсона с соавт. (1990) в баллах, соответственно степени тяжести процесса на основании данных офтальмоскопических и ангиографи-ческих исследований.

Биохимические методы. Определение уровня МДА в сыворотке крови по реакции с 2-тиобарбитуровой кислотой (Esterbauer, Cheeseman, 1990), содержание продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов и оснований Шиффа в хрусталиках и хориоретинальном комплексе определяли согласно методике Н.Г. Колосовой (2002). Липиды крови - с использованием стандартных наборов фирмы Biosib®. Суммарную клеточную РНК из хрусталиков и хориорети-нального комплекса выделяли фенол-хлороформным методом (Маниатис Т., 1982). Уровень экспрессии гена VEGF исследован в рамках совместной работы с А.М. Марковцом (ИЦиГ СО РАН), уровень экспрессии а-кристаллинов

- с Ю.В. Румянцевой методом ПЦР в реальном времени в присутствии красителя SYBR Green I («Molecular Probes», США) на амплификаторе iCycler iQ4 (Bio-Rad laboratories, США).

Морфологические методы исследования. Заднюю стенку глазного яблока фиксировали для получения полутонких срезов в растворе 2,5 % шюта-ральдегида, приготовленном на основе 0,2 M какодилатного буфера (pH 7,4). Материал постфиксировали в 2% растворе четырехокиси осмия на холоде в течение 3 ч, дегидратировали в спиртах восходящей концентрации, ацетоне, пропиленоксиде и заливали в эпон-812 (Боголепов H.H., 1976).

На ультратоме LKB-4 (Швеция) готовили полутонкие срезы, окрашивали 0,1 % раствором толуидинового синего. Просмотр и фотографирование полутонких срезов производили на световом микроскопе «Люмам И 1». Для световой микроскопии фиксацию проводили жидкостью Карнуа, готовили рутинные гистологические препараты, окрашивали гематоксилином-эозином. Препараты изучали и фотографировали на фотомикроскопе Mild-Leitz (Germany).

Характеристика препаратов, эффекты которых исследовали в работе. Офтан-катахром («Сантен», Финляндия), состав 1 мл: цитохром С 675 мкг, аденозин 2 мг, никотинамид 20 мг; Цитраль 0,01% водно-спиртовый раствор; «Окулист» («Диод», Москва) в 30мг антоцианы черники - 10мг, дигидро-кверцетин - 15 мг, бета-каротин - 0,5 мг, селен - 15 мкг, применяемая доза 91,5 мг/кг; «Лютеин-комплекс» («Экомир», Москва) в 500мг лютеина- 2мг; экстракта черники - 130 мг, витамина С - 100мг; витамина Е - 15 мг, витамина А - 1100 ME; бета-каротина - 1,3 мг; цинка - 5 мг; меди - 0,5 мг; селена

- 15 мкг; таурина - 50 мг), доза 25 мг/кг; «Миртасол» - водный, 25 % экстракт из плодов черники, содержащий антиоксиданты антоцианидины с добавлением микроэлемента селена (5 мкг натрия селината в мл). Активное вещество

- антоцианидины, в т. ч. гликозид миртилин, в незначительных количествах яблочная и лимонная кислота, пектиновые вещества; Витамин Е (а-токоферола ацетат, «Уралбиофарм»).

Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета программ Statistica-5. Использовали факторный дисперсионный АЪЮУАанализ с post hoc сравнением групповых средних (Newman-Keul test). Как независимые

факторы рассматривали генотип, препарат, возраст животных. При оценке эффективности терапии проводили зависимые парные сравнения (t-test dependent samples), сопоставляя состояние глаза до и после действия. Данные в таблицах и на рисунках представлены как М ± т, где М - среднее арифметическое значение, m - стандартная ошибка среднего. Достоверными считали различия прир < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Клинические особенности развития патологических изменений глазного дна и хрусталиков у крыс линии OXYS

На первом этапе работы была охарактеризована клиническая картина развивающихся у крыс линии OXYS патологических изменений глазного дна и хрусталика и проведен анализ зависимости заболеваемости животных от возраста. Стандартное офтальмологическое обследование показало, что катаракта и дистрофия сетчатки развиваются у крыс линии OXYS параллельно. Первые признаки катаракты в хрусталиках появляются в возрасте 5-6 недель у 20 % животных, к 3 мес. патологические изменения присутствуют уже в 90 % глаз крыс линии OXYS, но все они соответствуют ранним стадиям заболевания. Заболевание активно прогрессирует с возраста 12 мес. и достигает выраженных стадий, предполагающих потерю или существенное ухудшение остроты зрения, к 14-18 мес. (рис. 1).

По локализации в 45 % случаев катаракта развивается по типу субкап-сулярной в области заднего полюса хрусталика, у 30 % развивается ядерная

10080-

60-

40-

20-

JL_

0,7 ' 1,5 ' 3 ' б ' 9 '12 а Возраст животных, мес.

□ 0 □ 1 ■ 2 ■ 3

60-

40-

20-

0,7

ш!

6 9 12 24

1,5 3 6 9 12 Возраст животных, мес.

Рис. 1. Заболеваемость катарактой крыс линий (а) и ОХУБ (б) по стадиям в зависимости от возраста: 0 - хрусталик прозрачный; 1, 2, 3 - изменения соответствуют 1,2 и 3 баллам

катаракта, у 10-15% наблюдается клиновидное помутнение средних отделов коры хрусталика по его периферии, по мере прогрессирования процесса постепенно распространяющееся к оптической зоне. На рис. 2 приведены примеры биомикроскопической картины катаракты в зависимости от локализации помутнений хрусталика у крыс линии ОХУБ. У крыс линии \Vistar и в 24 мес. в 33 % глаз хрусталики остаются без изменений, а в остальных регистрируются изменения, подобные наблюдаемым у 3-месячных крыс линии ОХУБ.

Рис, 2. Виды катаракты в зависимости от локализации помутнений хрусталика: а - ядерная; б - передняя субкапсулярная; в - задняя субкапсулярная

Первые признаки ХРД у крыс линии ОХУБ также регистрируются в возрасте 5-6 недель и достигают выраженных стадий к 12-14 мес. (рис. 3). В 3 мес. 24 % крыс линии ОХУБ имеют признаки, характерные для 2-й стадии заболевания. К возрасту 6 мес. признаки поражения сетчатки регистрируются у 100% крыс линии ОХУ8, при этом у 75% выявляется предисциформная и у 25 % - дисциформная стадия ХРД (рис. 3). Тяжесть заболевания прогрес сирует, и к возрасту 9 мес. у 30,5 % животных диагностируется дисциформная, у 2,9% - рубцовая стадия развития ХРД. К возрасту 12 мес. уже 44% заболевших имеют грубые необратимые изменения сетчатки, а у 31 % выявляется дисциформная стадия с обширными кровоизлияниями и экссудативной отслойкой пигментного и нейроэпителия сетчатки. Изменений сетчатки у крыс линии

обнаружено не было.

Анализ результатов обследования позволяет нам выделить два критических периода для развития катаракты и ХРД у крыс линии ОХУБ: от 1,5 до 3 мес, - возраст манифестации первых признаков, 12-14 мес. - период формирования ярко выраженных патологических изменений. Первый период характеризуется на офтальмоскопическом уровне перераспределением пигмента, появлением мягких экссудативных (ишемических) очагов, единичных кровоизлияний, признаков атрофии хориокапиллярного слоя и пигментного эпителия. Такие изменения соответствуют 1-й предисциформной стадии развития ВМД у людей.

Н о □ 1 ■ 2 ■ 3

Рис. 3. Заболеваемость ХРД крыс линии ОХУБ по стадиям в зависимости от возраста: 0 - сетчатка без изменений; 1, 2, 3 - изменения соответствуют 1, 2 и 3 баллам

Второй период - соответствует 2-й (дисциформной) стадии с выраженными экссудативными изменениями, отёком центральной зоны, достигающей 2-3 диаметров диска зрительного нерва, в виде одной или нескольких полостей (кистозных образований) с экссудативной отслойкой ретииального пигментного эпителия, нейроэпителия. В 10% случаев диагностируется репаративная стадия, при которой регистрируются признаки неоваскуляризации с экссуда-тивно-геморрагической отслойкой пигментного и (или) нейроэпителия сетчатки и рубцеванием. Офтальмоскопически это проявляется субретинальным возвышением тёмного цвета, края менее чёткие, по ним могут быть единичные кровоизлияния различной степени зрелости.

Позже сетчатка уплощается, видны зоны рубцового перерождения. Просвет сосудов равномерно сужен по всей длине, световой рефлекс с сосудистых стенок вялый, тускнеет по мере уменьшения калибра сосуда. Выраженность патологических изменений глазного дна нарастает с возрастом животных на фоне развития артериосклероза - сужения калибра артерий, признаки которого клинически выявляются уже в возрасте 4-5 мес. у 100% крыс линии ОХУ8. На рис. 4 приведены примеры офтальмоскопической картины изменений глазного дна крыс линии ОХУ£1.

г у Т

к .А. А.

Рис. 4. Примеры патологических изменений картины шазного дна крыс линии ОХУБ: а - мягкие экссудативные ишемические очаги; б - выраженные экссуда-тивиые изменения в заднем полюсе с отслойкой пигментного эпителия; в - экс-судативная отслойка нейроэпителия; г-выраженный артеряолосклероз

Данные офтальмологических наблюдений подтверждены ангиогра-фическими исследованиями. Методом флюоресцентной ангиографии (ФАГ) у крыс линии ОХУБ выявлено замедление кровотока как в артериальной, так и венозной системах сетчатки, четко визуализируются зоны атрофии пигментного эпителия, участки сливающейся гипер флюоресценции, характерные для предисциформных изменений (рис. 5). При дисциформной стадии регистрируется неоваскуляризация, расположенная под сетчаткой и быстро заполняющаяся красителем. На поздних стадиях выявляются участки просачивания красителя из неполноценных новообразованных сосудов, неоднородная флюоресценция, нарастающая к поздней венозной фазе, и выход контраста в артери-овенозную фазу из хориоидеи с медленным прокрашиванием субретинального транссудата (рис, 5). Границы очага имели более чёткие контуры при экссу-дативной макулопатии, были размыты и изменялись за время исследования при экссудативной отслойке нейроэпителия. При далеко зашедших стадиях заболевания в области дисциформной отслойки нейроэпителия проявлялись

Рис. 5. Флюоресцентная ангиография глазного дна крыс линии ОХУБ: а-зоны атрофии пигментного эпителия; б - субретинальная транссудация, отслойка РПЕ; в - отслойка нейроэпителия с участками субретинальной новообразованной мембраны

новообразованные сосуды и участки плотного экссудата или кровоизлияний с участками субретиналыюй новообразованной мембраны (рис. 5).

Элегароретинография (ЭРГ) - метод количественной оценки функционального состояния нервных клеток сетчатки, основанный на регистрации биопотенциалов, возникающих в ней при световом раздражении. Его используют для диагностики, локализации, прогноза и контроля течения патологического процесса в сетчатке (Шамшинова А.М., 1999). ЭРГ показала, что фоторецепторы развиваются у крыс линии ОХУБ физиологично, к возрасту 3-4 недель регистрируется функционально зрелая элеюроретинограмма (рис. 6).

О Я 1М 110 200

Л 100 130 300

Я 100 1М 200

30 1» 1» 300

Я 100 Ш 300

Рис. 6. Примеры кривых ЭРГ крыс линии ОХУБ разного возраста, по оси ординат амплитуда (мВ), по оси абсцисс - время (мс): а - супернормальная ЭРГ, возраст 3 мес.; б - негативная ЭРГ, возраст б мес.; в - нормальная ЭРГ, возраст 3 недели; г - субнормальная ЭРГ, возраст 7 мес.; д - нерегистрируемая ЭРГ, возраст 12 мес.

Для крыс линии ОХУБ в возрасте 3 мес. характерна супернормальная ЭРГ, которая характеризуется увеличением амплитуды а- и Ь-волн вследствие раздражения фоторецепторов, вызванного, можно предполагать, развивающейся к этому возрасту гипоксией сетчатки (рис. ба). К б мес, чувствительность сетчатки к световому раздражителю снижается, изменяется величина отрицательных а- и Ь-волн, ЭРГ носиг субнормальный характер, что может быть следствием частичной атрофии внутренней части сегментов палочек и их ядер (рис. бг). По мере црогрессирования дистрофических изменений происходит снижете амплитуды Ъ-волны, что может отражать усиление ишемии сетчатки и служить прогнозом нарушений зрительных функций (Ма1зш У, 1994). При выраженных экссудативных изменениях сетчатки у крыс линии ОХУБ регистрируется негативная ЭРГ с небольшим снижением до изолинии амплитуды Ь-волны (рис. бб). 1С 12 мес. по мере прогрессировав дегенеративных процессов происходит угнетение ЭРГ, вплоть до её исчезновения (рис. 6д).

Таким образом, биомикроскопические, офтальмоскопические исследования, подтверждённые методами ФАГ и ЭРГ, показали, что у крыс линии ОХУБ развивается дистрофия сетчатки, которая протекает на фоне катаракты и по клиническим проявлениям соответствует ВМД у людей.

2. Морфологические особенности развития хориоретинальной дистрофии у крыс линии ОХУв

У людей развитие ВМД связано с атеросклеротическими изменениями сосудов хориоидеи, изменениями мембраны Бруха и пигментного эпителия, и, как следствие, гибелью фоторецепторов. Анализ их состояния у крыс линии ОХУБ разного возраста, выполненный нами совместно с проф. И.П. Хороши-ловой-Масловой (Московский институт глазных болезней им. Гельмгольца) методами световой микроскопии, выявил прогрессивное нарастание патологических изменений с возрастом (рис. 7). Уже в 3 мес. у крыс линии ОХУЭ регистрируются характерные для хронической ишемии изменения, связанные с расстройством кровообращения. Они развиваются на фоне сохранной структуры сосудистой оболочки глаза, но при этом наблюдаются полно!фовие сосудов, появление эритроцитов в околососудистых пространствах, сладж-синдром, набухание ядер клеток эндотелия сосудов и выраженный отек в слое гангли-озных клеток.

Рис. 7. Примеры изменений хориоретинального комплекса крыс линии ОХУБ (а-в) и его морфологическая картина у крыс динии (г), окраска гема-

токсилин-эозином, ув. 400: а - отек в слое ганглиозных клеток сетчатки, ядра отодвинуты от внутренней пограничной мембраны; б - сохраняется отек в слое ганглиозных клеток; в - тотальный фиброз хориоидеи, просветы сосудов не определяются

В возрасте 7 мес. у крыс линии ОХУБ выявляются склероз, уплотнение стенок сосудов во внутренних слоях сетчатки, фиброз стромы хориоидеи и редукция кровообращения в ней за счет облитерации просвета сосудов, преимущественно в зоне хориокапиляров. В возрасте 14,5 мес. на фоне прогрессирующей артериосклероза и фиброза хориоидеи, облитерации просвета ее сосудов наблюдается частичная гибель клеток фоторецепторного слоя, которую можно рассматривать как результат нарушения трофики наружных слоев сетчатки через систему хориокапилляров. Признаком развивающегося при этом окислительного стресса является накопление в апикальной части пигментного эпителия липофусциновых гранул, выявленное нами у годовалых крыс линии ОХУБ при электронно-микроскопическом исследовании (Нероев В.В. и др., 2008),

Нарастание артериосклеротических изменений, нарушение системы «пигментный эпителий - мембрана Бруха - слой палочек» приводит в возрасте

24 мес. к полной гибели фоторецепторного слоя у крыс линии ОХУБ: палочек, наружного ядерного и наружного плексиформного слоев. Их гибель связана с облитерацией сосудов, питающих эту зону сетчатки. В то же время внутренние слои, отличающиеся другим источником кровоснабжения, оставались относительно сохранными. В сетчатке некоторых двухлетних крыс линии \Vistar также отмечались атрофические изменения, но лишь на периферии, в то время как в центральной зоне структура сетчатки была сохранена.

Такая картина развития патологических изменений на морфологическом уровне полностью подтвердилась в независимом совместном исследовании с А.А. Жданкиной (СибГМУ), выполнившей количественный анализ полутонких срезов сетчаток крыс линии ОХУБ (Жданкина А.А., 2008). Уже в возрасте 5 мес. у крыс линии ОХУв наблюдали деструкцию сосудов хорио-идеи, истончение их стенок и сужение просвета, явления сладжа форменных элементов крови (рис. 8а) и тромбоза (рис. 86). Так, количество тромбирован-ных сосудов у крыс линии ОХУБ было в 19 раз больше, чем у контрольных крыс линии Wistar (р < 0,05), количество открытых сосудов снижено в 2,3 раза (р < 0,05; табл. 1).

— 'ЧНЛТЖ «¿г

I '

ИЙЯКу ^ .

Рис. 8. Стаз форменных элементов в сосудах хориоидеи сетчатки крыс линии ОХУБ (а), тромбоз хориоидальных сосудов крыс линии ОХУЙ (б): возраст животных 5 мес.; НЯС - наружный ядерный слой; ФС - фотосенсорный слой; ПЭ - пигментный эпителий; X -хориоидея; окраска толуидиновым синим; ув. 900

У пятимесячных крыс линии ОХУ8 выявлены деструктивные изменения пигментного эпителия: уменьшение размеров эпителиоцитов, их уплощение, вакуолизация цитоплазмы и деструкция микроворсинок, исчезновение базальной складчатости, снижение удельной площади пигментного эпителия в полтора раза (р < 0,05; табл. 1).

Таким образом, морфологический анализ показал, что, как и при ВМД у людей, при развитии дистрофии сетчатки у крыс линии ОХУБ в первую оче-

Таблица 1

Морфологические показатели состояния хориоретинального комплекса у крыс линий OXYS и Wistar в возрасте 5 мес. (М ± т)

Показатель Линия крыс

Wistar OXYS

Удельная площадь открытых сосудов хориоидеи, % 36,00 ± 0,70 15,37 ±1,14'

Удельная площадь сосудов хориоидеи со сладжем эритроцитов и тромбозом, % 1,52 ±0,09 28,78 ± 2,24*

Удельная площадь пигментного эпителия сетчатки, % 5,43 ±0,10 3,56 ±0,21

* достоверные различия между крысами линий Wistar и OXYS (р<0,05).

редь страдают сосуды хориоидеи, пигментный эпителий и радиальная глия. Относительная резистентность нейронов внутренних слоев, вероятно, может быть связана с компенсаторным открытием и расширением интраретинальных сосудов в наружном, внутреннем сетчатом и ганглионарном слоях.

Изменения хориоретинального комплекса у крыс линии OXYS - типичная реакция на хроническую гипоксию - один из ведущих факторов патогенеза ВМД. Нарушение кровообращения, транскапиллярного обмена способствует развитию трофической недостаточности и дистрофических изменений сетчатки, нарушению синтеза и метаболизма специфических белков в пигментном эпителии, рекрутированию в хориоретинальный комплекс из циркуляции лейкоцитов и активации каскада комплемента (Friedman D., 2004; Chen J. et al., 2007). Такие результаты согласуются с выявленными у крыс линии OXYS методом магнитно-резонансной томографии нарушениями мозгового кровотока и характерными для хронической ишемии склеротическими изменениями церебральных сосудов, в том числе и глазных (Агафонова И.Г. и др., 2007).

3. Окислительный стресс и развитие хориоретинальной дистрофии у крыс линии OXYS

Окислительный стресс вовлечен в патогенез катаракты и ВМД - заболеваний, которые нередко развиваются одновременно и у людей пожилого и старческого возраста. Задачей настоящего раздела работы явилась оценка возможной связи развития катаракты и ХРД у крыс линии OXYS с окислительным стрессом, в качестве маркера которого исследовали содержание продуктов ПОЛ в сыворотке крови крыс разного возраста, а также их концентрацию в сетчатке и хрусталиках животных с активно прогрессирующими патологическими изменениями органа зрения. Содержание продуктов ПОЛ в сыворотке крови используют в клинической практике и в эксперименте в качестве маркера окислительного стресса для диагностики системных изменений его параметров на уровне организма. С возрастом и при различных заболеваниях

этот показатель растет. Увеличено содержание продуктов ПОЛ и в крови людей с ВМД и со старческой катарактой (Ates М., 2004).

Работая с крысами линии OXYS 60-65 поколений, мы выявляли у них повышенный уровень продуктов ПОЛ в сыворотке крови (Колосова П.Г., Фурсова А.Ж. и др., 2004). Однако в рамках настоящего исследования мы установили, что содержание продуктов ПОЛ в сыворотке крови крыс линии OXYS 70-80 поколений не отличалось от такового у крыс линии Wistar как в период появления первых признаков катаракты и ХРД, так и при развитии выраженных патологических изменений (п = 52; возраст 2, 6, 13 и 24 мес.). С возрастом содержание продуктов ПОЛ в сыворотке крови крыс линий OXYS и Wistar росло и в 24 мес. было вдвое выше, чем у двухмесячных животных.

Примечательно, что первые признаки катаракты, по нашим данным, развиваются у крыс линии OXYS на фоне повышенного содержания в хрусталиках восстановленного глутатиона, которое становится существенно более низким, чем у крыс линии Wistar только при развитии выраженных патологических изменений в возрасте 13-24 мес. Проявлением окислительного стресса в этом возрасте становится снижение растворимости белков хрусталиков вследствие связанных с окислительным повреждением пострансляционных модификаций. В возрасте 3 мес., когда у крыс линии OXYS активно формируются патологические изменения, мы исследовали содержание продуктов ПОЛ (диеновых конъюгатов и оснований Шиффа) непосредственно в хрусталиках и не выявили отличий от крыс линии Wistar. В то же время наши исследования показали, что уже на начальных стадиях развития катаракты наблюдается значительное снижение экспрессии генов аА- и аВ-кристаллинов в хрусталиках крыс линии OXYS, которое с развитием заболевания ещё усиливается (Румянцева Ю.В. и др., 2008).

В хориоретинальном комплексе трёхмесячных крыс линии OXYS были обнаружены только тенденции к повышению содержания продуктов ПОЛ: несколько выше, чем у крыс линии Wistar было содержание конечных его продуктов - оснований Шиффа (на 25 %, р = 0,06). Окислительный стресс, таким образом, будучи патогенетическим фактором развития катаракты и ХРД, не лежит в основе их этиологии у крыс линии OXYS. Следует отметить, что и проявления преждевременного старения мозга развиваются у крыс линии OXYS раньше, чем повышается содержание окисленных белков и липидов в нём (Kolosova N.G., 2006). В то же время становление мозга крыс линии OXYS в ранний постнатальный период происходит на фоне гипоксии, обусловленной задержкой формирования микроциркуляторного русла: замедленной пролиферации эндотелия сосудов (Григорьева Т.А., 2005, Korbolina L.E., 2007). В возрасте 20-30 дней её проявлением становятся характерные для адаптации к тканевой гипоксии изменения энергетического метаболизма: накопление фосфокреатина и его повышенный расход на синтез АТФ (Sergeeva S., 2006).

Отставание выявлено в формировании как артериальных, так и венозных микрососудов пиальной оболочки мозга и брыжейки кишки, что указывает на системный характер изменений. Проявлением системных изменений сосудистого эндотелия может быть и снижение продукции оксида азота в организме крыс линии OXYS (Bobko А., 2005). Эти данные, а также результаты наших морфологических исследований свидетельствуют в пользу сосудистой этиологии ХРД у крыс линии OXYS.

4. Экспрессия гена VEGF в хориоретинальном комплексе крыс линии OXYS при развитии ВМД

Патогенез ВМД тесно связан с изменениями экспрессии гена VEGF, который синтезируется в клетках пигментного эпителия и, проникая через мембрану Бруха, в физиологических условиях обеспечивает жизнеспособность и пролиферацию эндотелиальных клеток сосудов (Lau L. et al., 2007; Ding H. et al., 2008). Экспрессия VEGF усиливается при гипоксии и запускает сигнальный каскад, который может приводить к неоваскуляризации при развитии влажной ВМД. В то же время атрофия клеток пигментного эпителия и недостаточные экспрессия гена и синтез белка VEGF ведут к атрофии хориокапилля-ров и развитию атрофической формы ВМД (Grisanti S., Tatar О., 2008). Задачей следующего этапа работы являлась оценка связи развития ХРД у крыс линии OXYS с возможными изменениями экспрессии гена VEGF в хориоретинальном комплексе. Для этого проведено сравнение его экспрессии у крыс линий OXYS (п = 37) и Wistar (п = 42) в возрасте 0,7, 3, 12,14 мес.

У крыс линии Wistar исследованных возрастных групп значимых различий в уровне экспрессии гена VEGF, которую оценивали по уровню мРНК, выявлено не было. У крыс линии OXYS в 3 мес. её уровень был в 2 раза ниже, чем в 20 дней (р < 0,0002), а также в 12 и 14 мес. (р < 0,001) (рис. 9). Только в возрасте 3 мес. выявлены межлинейные различия в уровне экспрессии гена VEGF: у крыс линии OXYS он был в 2 раза ниже, чем у крыс линии Wistar (р < 0,01). Как показано выше, к возрасту 3 мес. у большинства крыс линии OXYS присутствуют офтальмоскопически выявляемые признаки ХРД, прежде всего - проявления ишемии, а также морфологические признаки дистрофических изменений клеток пигментного эпителия. Возможно, сниженная экспрессия гена VEGF приводит к развитию сосудистой недостаточности, выявленной при морфологическом исследовании. Склероз сосудов сопровождается развитием ишемии и дальнейшим нарушением функций пигментного эпителия. По нашим данным, последнее проявляется на ультраструктурном уровне в накоплении в клетках пигментного эпителия липофусциновых гранул, а в межклеточном пространстве - продуктов неполного распада клеток палочек (Нероев В.В., 2008).

Поздние стадии ХРД протекают у крыс линии OXYS на фоне не отличающегося от выявленного у крыс линии Wistar уровня экспрессии гена VEGF.

—О—

—А— охге

Рис. 9. Экспрессия гена УБОР в хориоретинальном комплексе крыс линий \Vistar и ОХУЭ разного возраста; * достоверные межлинейные различия

Однако корреляционный анализ показал, что уровень экспрессии прямо зависит от выраженности патологических изменений (г = 0,69, р < 0,03). Он максимален у животных с признаками скрытой и классической хориоидальиой неоваскуляризации.

УЕОБ экспрессируется в основном в клетках пигментного эпителия, количество которых у крыс линии ОХУ8 уменьшается с возрастом и по мере прогрессирования ХРД. Как и у пациентов с ВМД, у крыс линии ОХУЭ уровень его экспрессии повышен при поздних стадиях заболевания.

5. Воздействие на развитие катаракты и хориорегинальной дистрофии у крыс линии ОХУв препаратами со свойствами антиоксидантов

Одним из инструментов выяснения механизмов развития заболевания и показателем адекватности модели может служить оценка возможности воздействия на его течение методами стандартной терапии. Мы исследовали влияние ряда применяемых в клинической практике лекарственных препаратов и содержащих антиоксиданты БАД на развитие ХРД и катаракты в период активной манифестации патологических изменений у крыс линии ОХУБ. Крысы линий ОХУЭ и ЭД^аг (контроль) после офтальмоскопического осмотра в возрасте 1,5-2 мес. в течение 45 дней получали препараты в виде капель (оф-тан-катахром и 0,01 % цитраль) или индивидуально с кормом. Контрольные

крысы получали физиологический раствор (0,9 % ИаС1) в каплях или обычное питание соответственно. Каждая группа включала 15 животных.

Офтан-катахром и цитраль в каплях. Oftan-Catachrom («Сантен», Финляндия) - комбинированный препарат из группы антигипоксантов, который широко используется для лечения катаракты. Входящие в его состав действующие вещества (в 1 мл его раствора содержится 0,675 мг цитохрома С, 1 мг натрия сукцината, 2 мг аденозина, 20 мг никотинамида) активизируют энергетические процессы в тканях при состояниях, сопровождающихся нарушением окислительных процессов в организме. 0,01 % раствор цитраля - традиционный кератопластический препарат использовался для сравнения. При предварительном осмотре животных в возрасте 2 мес. у 41 % крыс линии ОХУБ выявлены признаки начальной катаракты, у 31 % - дистрофические изменения, соответствующие 1-й стадии ХРД.

Через 45 дней (в возрасте 3,5 мес.) в контрольной группе заболеваемость катарактой и ХРД достигла 100 и 79%, соответственно. У 54% крыс линии ОХУБ изменения сетчатки соответствовали 1-2-й стадии заболевания (рис. 10). Цитраль не повлиял на состояние хрусталиков и сетчатки животных, выраженность патологических изменений согласно зависимым парным сравнениям возросла (соответственно р < 0,014 и р < 0,026). Катахром предупредил прогрессирование не только катаракты, но и ХРД. У крыс линии \Vistar пато-

Контроль Цитраль

Офтаи-катахром

3 90 :

1 80 :

1 70 :

1 60^

1 50"

я 40 -

о 30: 20 -

и ю:

ИЦ о:

В 2 мес,

В 3,5 мес.

Контроль Цитраль

Офтан-катахром

В 2 мес.

—V-

В 3,5 мес.

□ без изменений □ 1 балл ■ 2 балла

Рис. 10. Влияние инсталляций препаратов цитраль и офтан-катахром на заболеваемость катарактой и ХРД у крыс линии ОХУБ; по оси ординат - распределение глаз по выраженности патологических изменений хрусталиков и сетчатки

логических изменений хрусталиков и сетчатки выявлено не было, препараты на их состояние не повлияли.

Таким образом, показано, что офтан-катахром, терапевтический потенциал которого направлен на улучшение окислительных и энергетических процессов в тканях, не только препятствует прогрессированию катаракты, но и способен не менее эффективно задерживать развитие ХРД, что позволяет рекомендовать его в качестве средства для лечения и профилактики ВМД у людей.

Препараты с антиоксидантной активностью. Проведено сравнение эффективности профилактического приема с кормом животными биологически активных добавок «Окулист» (91,5мг/кг), «Селен-актив» (34,4 мг/кг), «Лю-теин-комплекс» (50 мг/кг), «Миртасол» (20 мг/кг сухого вещества) и витамина Е (20 мг/кг).

У крыс линии патологических изменений выявлено не было

ни при предварительном осмотре в возрасте 1,5 мес., ни после приёма препаратов. У крыс линии ОХУБ в 1,5 мес. заболеваемость катарактой и ХРД составила ~ 20% и достигла у контрольных животных к возрасту 3 мес. 100%. Парные зависимые сравнения показали, что все препараты повлияли на развитие патологических изменений хрусталиков (для всех р < 0,05), однако эффект их существенно различался. В профилактике катаракты наибольшую эффективность проявили «Миртасол» и «Окулист», полностью предотвратив развитие патологических изменений хрусталиков (рис. 11). Далее по эффективности препараты распределились следующим образом: «Лютеин-комплекс» > витамин Е > «Селен-актив». Несколько иначе повлияли препараты на развитие

1001 80"

& 60 §

" 404

I -(3 200

100-

80-

Я бо-

40-

20-

□ контроль Н Селен-актив □ витамин Е

■ Лютеин-комплекс Н окулист И Миртасол

Рис. 11. Влияние приёма препаратов с антиоксидантной активностью на заболеваемость крыс линии ОХУБ катарактой и ХРД

ХРД у крыс линии OXYS. Патологические изменения сетчатки не развивались на фоне приёма препаратов «Лютеин-комплекс», «Окулист», «Миртасол». Зависимые парные сравнения выявили значимый лечебный эффект «Лютеин-комплекса» - снижение заболеваемости ХРД. Такие результаты соответствуют известным данным клинических исследований, доказывающих патофизиологическую направленность действия этого препарата при ВМД. На фоне приема «Селен-актива» заболеваемость выросла до 80 %.

Таким образом, нами продемонстрирована возможность воздействовать на развитие катаракты и ХРД у крыс линии OXYS препаратами с антиоксидан-тной активностью. Это свидетельствует в пользу адекватности модели, а также о связи патогенеза катаракты и ХРД у крыс линии OXYS с окислительным стрессом и о перспективности использования линии для оценки новых способов лечения и профилактики этих возрастных заболеваний органа зрения.

б. Оценка профилактического и лечебного потенциала митохондриального антиоксиданта SkQl

Возможность предотвращать и задерживать развитие признаков преждевременного старения с помощью антиоксидантов свидетельствует в пользу связи его патогенеза у крыс линии OXYS с окислительным стрессом. Ранее показано, что эффективность антиоксидантов зависит от их способности предупреждать развитие дисфункций митохондрий, которые появляются уже у молодых крыс линии OXYS и с возрастом нарастают (Шабалина И.Г. и др., 1995; Колосова Н.Г. и др., 2001; Сапрунова В.Б., 2008).

Следующим этапом нашей работы явилось исследование влияния на развитие ХРД и катаракты у крыс линии OXYS митохондриального антиоксиданта SkQl, способного избирательно накапливаться в митохондриях, защищая их от окислительного стресса и вызванного им митоптоза и апоптоза (Скулачёв В.П., 2007; Сапрунова В.Б., 2008). Формула этого соединения приведена на рис, 12.

н3с

Рис. 12. Структурная формула молекулы SkQl

6.1. Оценка профилактического эффекта 8к<21 Приём 5к£>1 с кормом. На первом этапе у крыс линии ОХУБ в критический для формирования первичных признаков заболевания период была исследована способность БкСН влиять на развитие ВМД и катаракты. После предварительного осмотра с возраста 1,5 мес. и контрольные линии \Vistar в течение 45 дней получали 8кС>1 в дозе 50 нмоль на кг массы тела с кормом. Препаратом сравнения служил витамин Е (20 мг/кг). Количество животных в каждой группе 15 (30 глаз).

При первичном осмотре (рис. 13) в 20% глаз крыс линии ОХУБ выявлены начальные изменения хрусталиков и в 13% - признаки макулопатии. В возрасте 3 мес. заболеваемость катарактой составила 90%. В 35% глаз изменения соответствовали 2 баллам по шкале градации нарушений прозрачности хрусталика, преобладали передние и задние субкапсулярные помутнения. Изменения глазного дна были выявлены в 85 % глаз, в 16% из них - 2-й (дис-циформной) стадии. У крыс, принимавших витамин Е, катаракта развивалась в 58 % глаз, т. е. заболеваемость была в 1,8 раз меньше, чем в контроле, но при этом в 12% глаз изменения соответствовали 2 баллам. Признаки ХРД выявлены у 54% крыс линии ОХУБ этой группы (в 1,5 раза меньше, чем у контрольных), 2-й стадии ВМД соответствовали изменения в 8 % глаз.

Приём БкСН снизил заболеваемость крыс линии ОХУБ катарактой и ХРД и существенно повлиял на тяжесть их течения. Изменения хрусталиков были выявлены в 46% глаз, но все они соответствовали 1 баллу. Признаки

100 80 60 40 -| 20

В 1,5 мес. □ контроль

100-| I 80

| бон

ЕС

| 40 !

В 20 д

8к<}1

В 3 мес. В витамин Е

В 1.5 мес.

V-

В 3 мес,

Рис. 13. Влияние приёма 8к<31 и витамина Е (с кормом в течение 45 дней по 50 нмоль/кг и 20 мг/кг соответственно) на заболеваемость катарактой и ХРД крыс линии ОХУБ

ХРД зарегистрированы у 38% крыс линии ОХУ8 и клинически соответствовали предисциформной стадии ВМД. Сравнение с заболеваемостью до начала лечения показало, что заболеваемость катарактой на фоне приёма БкСН увеличилась на 26%, что на 64% ниже контрольных значений. Заболеваемость ХРД была на 44% ниже, чем в контрольной группе крыс линии ОХУБ. У крыс линии \Vistar изменений прозрачности хрусталиков и поражения сетчатки ни до, ни после приёма препарата выявлено не было.

Таким образом, установлено, что БкСЛ эффективней, чем витамин Е, предупреждает развитие катаракты и ХРД у крыс линии ОХУБ и (или) снижает выраженность патологических изменений. Проведенное исследование продемонстрировало перспективность использования 8кС?1 в профилактике возрастных заболеваний органа зрения. Следующий этап работы был посвящен изучению зависимости эффекта препарата от дозы.

Оптимальная профилактическая доза препарата определялась на крысах-самцах линий ОХУБ (п = 120) и \Vistar (п = 120), которые с возраста 1,5 мес. после первичного осмотра в течение 45 дней получали БкС>2 вдозах 10, 50 или 250 нмоль/кг. Количество животных в группе - 30. В возрасте 1,5 мес. (рис. 14) в 23 % глаз крыс линии ОХУБ были выявлены начальные признаки катаракты, в 20 % - дистрофии сетчатки. У крыс линии \Vistar патологических изменений хрусталика и сетчатки в возрасте 1,5 и 3 мес. выявлено не было.

У всех контрольных крыс линии ОХУБ были выявлены признаки ВМД и катаракты - они регистрировались в 97 и 100 % глаз животных соответствен-

§10<Н

80 60 40 Н 20 О

10 50 250

В 1,5 мес.

В 3 мес. Доза ЭкСМ, нмоль/кг

5юо-

3 80-

з 60

£ 40 а

20-

10 50 250

В 1,5 мес. в 3 мес.

Доза Бк(31, нмоль/кг

Рис. 14. Оценка эффекта профилактического приёма различных доз 8к<31 на развитие катаракты и ХРД у крыс линии ОХУ8; приём препарата с возраста 1,5 мес. в течение 45 дней: по оси ординат - глаза с патологическими изменениями (%)

но. Как показал дисперсионный анализ, 8кС>1 повлиял на развитие дистрофии сетчатки (РЗ, 102 = 9,3; р < 0,00002) и катаракты (РЗ, 102 = 17,2, р < 0,00002). Его эффект зависел от дозы и с её увеличением нарастал (рис. 14). Зависимые парные сравнения показали, что приём 8к(21 в дозах 10,50 и 250 нмоль/кг предупреждал развитие патологических изменений сетчатки у крыс линии ОХУБ, которая была ниже, чем в контрольной группе в 3; 4,5 и в 18 раз соответственно. Степень патологических изменений хрусталиков, выраженная в баллах, снизилась соответственно в 2, 3 и в 8,7 раза. Согласно парным зависимым сравнениям состояния хрусталиков до и после приёма препарата, у животных, получавших дозу 10 нмоль/кг крыс линии ОХУБ к возрасту 3 мес. катаракта всё-таки развивалась (р < 0,005). Па фоне приёма 50 и 250 нмоль/кг 8кС)1 прогрессирования заболевания не было (р = 0,135 и р = 0,62 соответственно). Более того, степень прозрачности хрусталиков в возрасте 3 мес. у них была достоверно ниже, чем в возрасте 5-6 недель (р < 0,05).

В следующем эксперименте мы показали эффективность длительного приема 8к<31. Животные получали его с возраста 1,5 до 24 мес. (до возраста 12 мес. п = 30; >12 мес. п = 10) и периодически осматривались (проведено 7 осмотров). Длительные наблюдения подтвердили, что ХРД и катаракта у крыс линии ОХУв с возрастом прогрессируют и развиваются параллельно, что затрудняет осмотры глазного дна у животных с развитой катарактой. Как видим на рис. 15, у крыс линии ОХУБ, получавших БкСНв дозе 250 нмоль/кг, и в 24

Рис. 15. Влияние длительного приёма 5кр1 (с возраста 1,5 мес.) на развитие катаракты и ХРД у крыс линии ОХУв: по оси ординат - выраженность патологических изменений; * достоверные отличия по сравнению с контрольными животными

О 1,5 3 7 12 17 20 24 Возраст, мес.

0 1,5 3 7 12 17 20 24 Возраст, мсс.

-•е- контроль —о— 50 нмоль/кг -Иг- 10 нмоль/кг — 250 нмоль/кг

мес. заболеваемость сохранилась на уровне полуторамесячных животных. Достоверным был и профилактический эффект ЗкС>1 в дозах 10 и 50 нмоль/кг: он существенно изменил характер течения заболевания - снизил процент глаз с выраженными стадиями заболевания, что повлияло и на среднестатистический показатель - выраженность изменений хрусталиков и сетчатки в баллах.

Результаты клинических наблюдений подтверждены данными ЭРГ (рис. 16). Показательным явилось трёхкратное снижение амплитуды Ь-волны ЭРГ (рис. 17), значительное снижение активности общей ЭРГ, вплоть до полного её угнетения, что свидетельствует о грубом поражении всех слоев сетчатки у 24-месячных крыс линии ОХУБ. На фоне приема 250 нмоль/кг 8к<31 амплитуда была такой же, как у 3-месячных крыс линии ОХУБ, что свидетельствует об адекватности биоэлектрического ответа сетчатки, сохранности её фоторецепторного аппарата.

Рис. 16. ЭРГ контрольных крыс линии ОХУБ в возрасте 3 и 24 мес. и 24-месячных крыс линии ОХУБ, получавших с возраста 1,5 мес. 250 нмоль/кг БкСП

Высокую эффективность длительного профилактического приёма 8кС>1 в дозе 250 нмоль/кг подтвердили и морфологические исследования сетчатки 24-месячных крыс линии ОХУБ. Отмечено уменьшение фиброзных изменений стромы сосудистой оболочки, сохранение просвета не только мелких, но и крупных хориоидальиых сосудов, что, возможно, обеспечивало полноценную трофику наружных слоев сетчатки, отсутствие отёка и сохранность нормального расположения её ганглиозных клеток. Отмечалось сохранение наружного ядерного

40 -

24 мес. без БкСЛ 24 мес. без БкС}!

3 мес. без 8к()1

80 4

60-

140-

20-

3 мес. 24 мес. 24 мес.

+ Бкр!

Рис.17. Амплитуда Ь-волны ЭРГ контрольных крыс линии ОХУв в возрасте 3 и 24 мес. и 24-месячных крыс, получавших с возраста 1,5 мес. 250 нмоль/кг 8к(21; * достоверные отличия от 3-месячных; # от контрольных 24-месячных крыс

слоя, толщина которого в заднем полюсе достигала 8-10 рядов, в то время как у контрольных крыс линии ОХУБ этот слой полностью отсутствовал.

В области, где визуализировались наружный и внутренний ядерные слои, у получавших 250 нмоль/кг БкС^! крыс линии ОХУБ были сохранены палочки, которые имели укороченный вид (рис. 18). Слой ретинального пиг-

Рис. 18. Хориоретинальный комплекс двухгодовалых крыс линий Wistar (а), ОХУБ (б) и ОХУБ (в), получавших Бкр1с возраста 1,5 мес. в дозе 250 нмоль/кг: а - нормальная сетчатка, слои: (1) палочки, (2) наружный ядерный слой, (3) наружный плексиформный, (4) внутренний ядерный слой, (5) внутренний плек-сиформный, (6) ганглионарные клетки; б - нет фоторецепторов (все слои отсутствуют); в - дифференциация слоев сохранена; окраска ГЭ; ув. 400.

ментного эпителия сохранялся в этих участках, и лишь местами выявлялась его отслойка.

Таким образом, продемонстрирована зависимость эффективности препарата от дозы, выявлена оптимальная доза (250 нмоль/кг), полностью предотвращающая развитие патологических изменений сетчатки и хрусталиков. Длительный приём препарата положительно повлиял и на общее состояние крыс линии ОХУБ, в том числе на одно из характерных проявлений старения - изменения качества шерстного покрова. Признаков негативного влияния на общее клиническое состояние и поведенческие реакции животных при длительном применении 8к<31 не обнаружено, что свидетельствует об отсутствии кумулятивной токсичности.

Поскольку оптимальная лечебная форма препаратов в клинической офтальмологической практике - капли, мы исследовали возможность применения ЭкС)1 в инсталляционной форме. После предварительного осмотра с возраста 1,5 мес. крысы линий \yistar и ОХУЭ были разделены на группы (п = 15), которые получали препарат в каплях с концентрацией 8кС>110,50 или 250 нМ (контрольные животные - раствор 0,9 % №0). На момент начала лечения изменения хрусталиков были диагностированы у 16% крыс линии ОХУ8, признаки начальной стадии ВМД - у 14% (рис. 19).

К возрасту 3 мес. у 85 % контрольных крыс линии ОХУБ развивалась ХРД, в 5 мес. изменения сетчатки и сосудистого русла регистрировались у 100 % животных. Изменения носили начальный характер и были представле-

баплы 1.00- „

0,75 ■

I 0,50-

0,25

ОХУБ #т

Й1

■ь * 1.1

баллы 1,00-

| 0,75 ! 0,50

К 0,25

5 недель 3 мес. 5 мес. Возраст животных

□ 0,9%НаС1 □ 10 им ■ 250 им

ОХУБ

[+1

¿1

5 недель 3 мес. 5 мес. Возраст животных

Рис. 19. Влияние капель на развитие ХРД и катаракты у крыс ОХУБ; * достоверные отличия от контрольных животных; # достоверные отличия по сравнению с предыдущим обследованием, зависимые парные сравнения: по оси ординат - выраженность патологических изменений

ны отёком центральной зоны глазного дна, точечными геморрагиями, атрофией хориокапилярного слоя и мягкими ишемическими очагами. Инсталляции 10 нМ 8к<31 затормозили, а в концентрации 250 нМ полностью предупредили развитие патологических изменений. В 3 мес. наблюдалась зависимость эффекта препарата от дозы (Р2,87 = 8,8; р < 0,0003), в 5 мес. выраженность изменений сетчатки у крыс, получавших различающуюся в 25 раз дозу препарата, была одинаковой (рис. 19). ХРД всё-таки развивалась, но имела менее выраженные стадии.

К возрасту 5 мес. заболеваемость крыс линии ОХУБ катарактой достигла 100%. Инсталляции 10 нМ 8кС21 существенно снизили выраженность изменений, а 250 нМ 8кС>1 полностью предупредили их развитие. В этом возрасте эффект не зависел от концентрации капель. Парные сравнения данных биомикроскопии показали, что состояние хрусталиков оставалось таким же, как и в 1,5 мес.

Таким образом, установлена способность 8кС>1 в каплях предупреждать развитие патологических изменений хрусталиков и сетчатки.

6.2. Оценка лечебного потенциала 8к(£1

Оценивая способность ЭкСН влиять на состояние сетчатки и хрусталиков животных с уже развитыми клиническими признаками катаракты и ХРД, проведено 5 экспериментов. Эффект препарата исследовался на крысах линии ОХУБ разного возраста (от 7 до 12 мес.), получавших после предварительного осмотра препарат с кормом или в виде капель. При оценке результатов лечения проводили зависимые парные сравнения - сопоставляли состояние конкретно каждого глаза до и после лечения.

6.2.1. Эффекты Як()1 при его приёме с кормом

Опыт 1 выполнен на 48 крысах линий ,\¥1з1аг и ОХУ8 в возрасте 10,5 мес. Половина животных в течение 1,5 мес. получала по 50 нмоль/кг БкС) на кг, остальные служили контролем. Зависимые парные сравнения показали, что у контрольных крыс линии ОХУЭ увеличилась интенсивность помутнений хрусталиков (р < 0,04) и прогрессировала стадия дистрофии сетчатки (р < 0,01), в то время как под влиянием 8кС>1 выраженность этих изменений значительно снизилась, В сетчатке животных этой группы наблюдалось уменьшение отёка, количества и площади ишемических очагов, рассасывание кровоизлияний. У крыс линии \\^аг препарат не влиял на состояние хрусталиков, изменений глазного дна не наблюдали (рис. 20).

Опыт 2 выполнен на 38 крысах-самцах линии ОХУБ (76 глаз) с выраженными патологическими изменениями глаз, С возраста 7,5 мес. после осмотра все животные в течение 3 мес. получали с кормом 8к(^1 по 250 нмоль/кг массы тела в сутки. При осмотрах в возрасте 9,5 мес. и 10,5 мес. парные зависимые сравнения выявили снижение выраженности изменений как хрусталиков, так и сетчатки (рис. 21).

баллы

До лечения Контроль 10,5 мес. 12 мес.

□ Wistar И OXYS

SkQl 12 мес.

До лечения Контроль 10,5 мес. 12 мес.

SkQl 12 мес.

Рис. 20. Влияние 45-дневного курса БкСН (50 нмоль на кг массы тела с кормом) на состояние хрусталиков и сетчатки крыс линий и ОХУЭ; # достоверные межлинейные различия; * достоверные отличия от контрольных животных

баллы

1,6 1,4

I 1,2 "

g 1,0-а

S 0,8 0,6 0,4-1

Начало приема препарата

7 8 9

Возраст животных, мес.

И хрусталики -О— сетчатка

Рис. 21. Влияние приема SkQ1 (250 нмоль на кг массы тела с кормом) на состояние хрусталиков и сетчатки крыс линии OXYS; # значимые изменения по сравнению с состоянием при предыдущем осмотре (зависимые парные сравнения)

На фоне лечения произошло уменьшение интенсивности заднекапсу-лярных помутнений, ограничение их локализации преимущественно в области капсулы и освобождение от помутнений области коры и глубжележащих отделов хрусталика. Аналогично развивалась ситуация и с изменениями сетчатки. В 38 глазах (50%) животных отмечено значительное снижение отёка макулярной области и резорбция ишемических очагов, в 18 (24 %) - полностью исчезли мелкие петехиальные кровоизлияния и в 3 (4 %) - имела место полная регрессия изменений сетчатки, офтальмоскопических изменений не было.

К концу 3-месячного курса лечения у всех крыс линии ОХУБ наблюдалась положительная динамика. Прозрачность хрусталиков увеличилась, обозначилась отчётливая биомикроскопическая картина: помутнение уменьшалось в размерах и визуализировалось в виде локальных изменений в задне-капсулярной области. При ядерной локализации интенсивность визуализации изменений настолько снизилась, что, видимая биомикроскопически, не поддавалась чёткой фоторегистрации доступными методами. На глазном дне в 22 глазах (28%) офтальмоскопически имела место полная регрессия изменений, а у 28 (73 %) животных отмечен переход из второй в первую стадию процесса. На рис. 22 представлены фотографии глазного дна крыс линии ОХУБ после курса лечения БкС)!.

Рис. 22. Глазное дно крыс линии ОХУБ после лечения БкСП (250 нмоль/кг в течение 3 мес. с кормом)

Опыт 3 выполнен на 60 крысах-самцах линий Wistar и ОХУБ, половина которых с возраста 8 мес. получала 8кС>1 по 250 нмоль/кг с кормом ежедневно. У контрольных животных патологические изменения хрусталиков и сетчатки прогрессировали, Бкр1 достоверно снизил выраженность патологических изменений и хрусталиков, и сетчатки (рис. 23).

Опыт 4 выполнен на 60 крысах-самцах линий ОХУБ и в возрасте 12 мес., половина которых получала по 250 нмоль на кг массы тела БкС?!

баллы

1,5 мес. 2,5 мес.

До лечения ■ контроль □

-"V-

Продолжительность лечения

До лечения

Ё.

1,5 мес. 2,5 мес.

Продолжительность лечения

Рис. 23. Влияние приёма с кормом 250 нмоль/кг БкС>1 на состояние хрусталиков и сетчатки крыс линии ОХУ8: по оси ординат - выраженность патологических изменений; * значимые отличия по сравнению с состоянием при предыдущем осмотре (зависимые парные сравнения)

с кормом в течение 45 дней. На момент начала лечения у 100% крыс линии ОХУБ присутствовали признаки помутнения хрусталиков (рис. 24). В 34% глаз изменения соответствовали двум баллам, в 66 % - одному баллу. После полутора месяцев приёма 8кр1 в 12,5 % глаз крыс линии ОХУБ хрусталики восстановили прозрачность, в 72 % помутнения соответствовали одному баллу и только в 15,5 % - двум баллам.

Через 3,5 мес. лечения уже в 59% хрусталиков глаз крыс линии ОХУБ не было выявлено патологических изменений, в 41 % глаз изменения хрусталиков соответствовали одному баллу и в 3 % (один глаз) - двум баллам (рис. 246). Таким образом, в результате лечения количество глаз с изменениями, соответствующими двум баллам, снизилось на порядок. В контрольной группе крыс линии ОХУБ количество животных со второй стадией достигло 60 %, а у 5 % крыс была диагностирована полная катаракта, соответствующая трем баллам (рис. 24а).

У крыс линии ^^аг изменений сетчатки не было выявлено ни при предварительном осмотре, ни после лечения. Катаракта на момент начала лечения у крыс линии 'УШаг присутствовала: в группу, по возможности, подбирались животные с изменениями хрусталиков для проверки независимости эффектов препарата от генотипа. В 50 % глаз крыс контрольной группы и в 54 % опытной группы при предварительном обследовании были выявлены признаки помутнения хрусталиков. Катаракта у крыс линии ^^аг проявлялась небольшими

О 1,5 3,5

Продолжительность наблюдений, мес.

О 1,5 3,5

Продолжительность лечения Бк(31, мес.

Ц без изменений И 1 балл ■ 2 балла ■ 3 балла

Рис. 24. Распределение контрольных (а) и опытных (б) крыс линии ОХУБ по стадиям развития катаракты

очаговыми стационарными помутнениями, которые не прогрессировали. Процент глаз с изменениями хрусталиков за период наблюдений вырос в контрольной группе до 83 %. После 1,5 мес. приёма 8кС>1 количество глаз с катарактой снизилось вдвое, но через 3,5 мес. лечения количество глаз с изменениями достигло 43 %. Тем не менее, если заболеваемость контрольных крыс линии

выросла в 1,7 раза, то на фоне приёма 8кС>1 она была ниже, чем до начала лечения.

У крыс линии ОХУЭ на момент начала эксперимента заболеваемость ХРД составила 100%, дистрофические изменения присутствовали в разной степени у всех животных. За период наблюдения в группе контрольных крыс линии ОХУЭ процент животных с изменениями глазного дна, соответствующими двум баллам, вырос с 18 до 43 % (рис. 25). На фоне приёма 8к<31 через 1,5 мес. патологические изменения сетчатки отсутствовали в 25% глаз, через 3,5 мес. - в 81 % глаз крыс линии ОХУЭ. При этом изменений, соответствующих второй стадии заболевания, выявлено не было. Таким образом, заболеваемость со 100% снизилась до 18% (рис. 25).

Таким образом, в четырех независимых экспериментах продемонстрирована способность 8к<31 при его приёме с кормом снижать выраженность уже развитых патологических изменений хрусталиков и сетчатки и/или нормализовать их состояние.

9080706050-

Контроль

90807060: 50-

Опыт

53 40-

20100:

а 40-

10 - | I

о-___11

О 1,5 3,5

Продолжительность наблюдений, мес.

0 1,5 3,5

Продолжительность лечения 31сС|1, мес.

□ без изменений Щ 1 балл ЦЦ 2 балла

Рис. 25. Распределение контрольных и опытных крыс линии ОХУБ по стадиям развития ХРД; приём 8кС)1 с кормом по 250 нмоль на кг массы тела

6.2.2. Лечебный эффект капель $к01

Исследование лечебного эффекта капель 8кС?1 проведено на четырех группах: три эксперимента на взрослых животных в возрасте 8-10 мес. и один на старых в возрасте 20-22 мес. с развитыми стадиями катаракты и ХРД. Опытные крысы получали 250 нМ раствор 8кС>1, контрольным закапывали физиологический раствор.

Опыт 1 выполнен на 18 крысах линии ОХУ8 в возрасте 8 мес. и 20 линии \yistar в возрасте 10 мес. Крыс линии А^аг отбирали по наличию патологических изменений хрусталиков. Эффект инсталляций 250 нМ БкСН оценивали через 21, 35 и 60 дней лечения. Препарат повлиял на выраженность патологических изменений хрусталиков крыс линии ОХУБ (БЗДМ = 37,9; р < 0,000), интенсивность которых уже через 21 день лечения 8кС>1 снизилась в 1,7 раза (р < 0,012), через 35 дней лечения была в 3,3 раза менее выраженной, чем у животных контрольной 1руппы и оставалась на том же уровне через 60 дней (рис. 26). У крыс линии Ч^аг значимых изменений состояния хрусталиков выявлено не было.

Выраженность патологических изменений сетчатки при осмотре через 21 день лечения БкС)1 у крыс линии ОХУБ снизилась вдвое, через 35 -в 5,2 раза, а через 60 - в 15 раз. Наблюдалось исчезновение или уменьшение отёка, клинически менее выраженными стали проявления отслойки нейроэпи-телия, рассосались петехиальные кровоизлияния, произошла резорбция ише-мических очагов, в 2-3 раза снизилось количество твёрдых экссудатов.

баллы

1,6" 8 1.4 :

1,21,0-

1,4 -

S 1,2" а 1,о-

« 0,8:

Wistar

OXYS

Wistar

OXYS

□ до лечения Щ лечение 21 день

□ лечение 30 дней Щ лечение 60 дней

Рис. 26, Влияние капель 8к0>1 (250 нМ) на состояние хрусталиков и сетчатки крыс линий ,\У1з1аг и ОХУБ (возраст \Vistar - 10 мес., ОХУБ - 8 мес.); * отличия достоверны при зависимых парных сравнениях состояния глаз до начала лечения; # по сравнению с предыдущим обследованием

Опыт 2 выполнен на 60 крысах линий Wistar и OXYS, половина которых в течение 3,5 мес. получала 250 нМ капли SkQl с возраста 9 мес. У контрольных крыс линии OXYS патологические изменения хрусталиков и сетчатки прогрессировали (рис. 27). Лечение каплями SkQl в течение 1,5 мес. снизило выраженность патологических изменений хрусталиков и сетчатки вдвое. Лечебный эффект сохранялся на фоне терапии в течение 3,5 мес. и проявился в уменьшении отёка, количества и площади ишемических очагов, рассасывании кровоизлияний: у 12 животных (23 глаза, 77 %) геморрагии рассосались полностью, а у 3 (4 глаза, 13 %) - частично.

Опыт 3 выполнен на крысах линии OXYS в возрасте 12 мес. (п = 50), половина которых в течение 2 мес. получала 250 нМ SkQl в каплях, вторая половина служила контролем. К возрасту 14 мес. у контрольных крыс линии OXYS количество глаз со 2-й стадией катаракты выросло в 1,5 раза. Зависимые парные сравнения показали, что у крыс линии OXYS, получавших SkQl в каплях, выраженность патологических изменений хрусталиков достоверно снизилась (р < 0,000). В 22% глаз признаков катаракты не обнаружено. Препарат позитивно повлиял и на состояние сетчатки (р < 0,0001): количество глаз без патологических изменений выросло втрое, не было зарегистрировано и дистрофических изменений, соответствующих 2-й стадии заболевания. У контрольных крыс линии OXYS признаки ХРД прогрессировали (рис. 28).

баллы

1 f i

1,5 мес. 2,5 мес. 3,5 мес.

1,5 мес. 2,5 мес. 3.5 мес.

До лечения

Продолжительность лечения

До лечения

Продолжительность лечения

0,9% NaCl □ капли SkQl, 250 нМ

Рис. 27. Влияние капель SkQl (250 нМ) на состояние хрусталиков и сетчатки крыс линии OXYS; начало приёма с возраста 9 мес.; * статистически значимые изменения по сравнению с состоянием на момент начала эксперимента (зависимые парные сравнения; р < 0,0005)

I 90' | 80-

|70-| 601 5°' ¡40

S 30

I10

(5 о

До После До После лечения лечения лечения лечения i._.._л___/

Контроль

-У-

SkQl

До После До После

лечения лечения лечения лечения

1_._Л_ _J

Контроль

SkQl

□ без изменений 0 1 балл ■ 2 балла ■ 3 балла

Рис. 28. Влияние капель SkQl (250 нМ) на распределение глаз крыс линии OXYS по выраженности патологических изменений хрусталиков и сетчатки: по оси ординат - процент глаз с изменениями разной степени выраженности; прием препарата с 12 мес., обследование в 14 мес.

В этом опыте было проведено ультраструктурное исследование хори-оретинального комплекса крыс линии OXYS, патологические изменения сетчатки которых оценивалась в два балла, а после лечения 250 нМ каплями SkQl не были выявлены (Нероев В.В., 2008). У контрольных крыс линии OXYS количество полноценных капилляров в хориоидее было в семь раз меньше, чем у крыс линии Wistar, и присутствовали сосуды с признаками полной деградации. Под влиянием капель SkQl количество полноценных хориокапилляров на единицу длины сетчатки глаза возросло с 2,33 до 9,00 (р < 0,001), а количество сосудов с признаками деградации снизилось с 6,67 до 2,33 (р < 0,01), произошло восстановление структуры мембраны Бруха. У крыс линии OXYS, получавших SkQl, увеличилось количество клеток пигментного эпителия и восстановилась их функциональная активность, о чем свидетельствовало появление большого числа фагосом, практически полностью отсутствующих в клетках пигментного эпителия контрольных крыс линии OXYS. Следствием этого явилась интенсификация удаления из клеток палочек отработанных наружных сегментов фоторецепторов и, следовательно, запуск обновления фото-рецепторного слоя.

Опыт 4 выполнен на крысах линий Wistar в возрасте 22 мес. (п = 12) и OXYS в возрасте 20 мес. (п = 10) с тяжелыми поражениями хрусталиков и сетчатки. В 8 % глаз крыс линии Wistar изменений хрусталиков не было, а в 25 % они были представлены нежными периферическими помутнениями в заднекапсулярной области и не могли быть строго отнесены к 1-й стадии катаракты. В связи с этим мы ввели промежуточную стадию - 0,5. 50% глаз соответствовали 1-й стадии катаракты, 17% - 2-й. Через месяц лечения SkQl мы уже не выявили глаз без изменений, стадии 0,5 соответствовало 25 % глаз, 1-й стадии - 62,5 %, 2-й - 12,5 %. У крыс линии OXYS до лечения в И % глаз катаракта соответствовала 1-й стадии, в 47% - 2-й, в 42% - 3-й с полной утратой прозрачности хрусталика. Через 1 мес. лечения выявлено прогрессиро-вание катаракты у крыс линии OXYS: уже в 63 % глаз изменения хрусталиков соответствовали 2-й, в 37% - 3-й стадии заболевания.

Выраженное помутнение хрусталиков у старых крыс линии OXYS не позволило дать объективную оценку состояния глазного дна и влияния на него препарата. Результаты ожидаемы - не приходилось надеяться на позитивные изменения в потерявших прозрачность хрусталиках с развитой ядерной катарактой и разрушенной сетчаткой. В целом же результаты настоящего раздела убеждают в том, что SkQl обладает терапевтическим потенциалом - способен нормализовать состояние хрусталиков и глазного дна животных и/или снижать выраженность патологических изменений. Эффект препарата зависит от возраста животных и выраженности патологических изменений. Восприимчивыми к лечению оказались животные с начальными стадиями заболевания: у них наблюдалось стойкое улучшение состояния хрусталиков

и сетчатки и/или его нормализация. У старых животных с более выраженными изменениями на глазном дне и развитой ядерной катарактой лечебный эффект практически отсутствовал.

6.3. Связь терапевтических эффектов SkQl с его влиянием на содержание в крови продуктов ПОЛ и экспрессию гена VEGF во внутренних оболочках глаз крыс линии OXYS

Известно, что антиоксиданты в высоких концентрациях могут выступать как прооксиданты. Показано (Antonenko Y.N. et al., 2008; Скулачев В.П., 2007), что SkQl отличает широкий «коридор» концентраций, в котором он проявляет свойства эффективного антиоксиданта и в водной, и в липидной фазах, причем в очень низких концентрациях. Во всех наших экспериментах мы использовали наномолярные концентрации и получили терапевтический эффект. При длительном приёме SkQl он был минимальным при дозе 10 нмоль/кг. Однако, если профилактический приём препарата в дозах 50 и 250 нмоль/кг в течение года не повлиял на содержание продуктов ПОЛ в сыворотке крови, то у животных, получавших SkQl в дозе 10 нмоль/кг, этот показатель оказался выше, чем в контроле: у крыс линии Wistar в 1,7, линии OXYS - в 1,6 раз (р < 0,003).

Напомним, что по содержанию продуктов ПОЛ в сыворотке крови крысы линий Wistar и OXYS разного возраста в настоящее время не различается. Такие результаты указывают на ограниченность прогностической ценности исследования содержания продуктов ПОЛ в крови в диагностических целях и для оценки терапевтических эффектов антиоксидантов. Эффекты SkQl, как и других антиоксидантов, не ограничиваются влиянием на уровень окислительных повреждений. Влияя на АФК-зависимые пути сигнальной трансдук-ции, они изменяют настройку редокс-зависимых генных сетей: воспалительного ответа, антиоксидантного ответа, теплового шока, апоптоза, метаболизма железа, остановки клеточного цикла (Dröge W., 2002). Изменения экспрессии ключевых для развития ВМД и катаракты генов под влиянием SkQl были выявлены в нашей работе.

Для оценки связи терапевтических эффектов SkQl с его влиянием на экспрессию гена VEGF у крыс линии OXYS проведено два эксперимента. В них оценивали: 1) эффект профилактического приёма SkQl в критический для развития дистрофии сетчатки период с 1,5 до 3 мес. в дозе 250 нмоль/кг с кормом; 2) лечебный эффект 3-месячного курса капель SkQl (250 нМ), приём с возраста 9 мес. Влияние препарата на экспрессию гена VEGF сопоставляли с клиническим эффектом препарата.

Профилактический приём SkQl полностью предупредил развитие катаракты и дистрофии у крыс линии OXYS. Он не повлиял на экспрессию гена VEGF у крыс линии Wistar, в то время как у 3-месячных крыс линии OXYS на фоне приёма антиоксиданта этот показатель был таким же, как у контрольных крыс линии Wistar (рис. 29). Можно полагать, такой эффект был связан

\Vistar ОХУБ

I I контроль | капли вк01

Рис. 29. Влияние профилактического приёма БкСН на уровень экспрессии гена УЕвР в тканях внутренних оболочек глаза крыс линий ОХУБ и А^аг; приём препарата с 1,5 мес. по 250 нмоль/кг в течение 45 дней с кормом; # достоверные отличия с \Vistar (р < 0,016); * достоверное отличие с контролем (р < 0,044)

со способностью препарата предупреждать развитие характерных для крыс линии ОХУв дистрофических изменений пигментного эпителия и склеротические изменения хориоидеи. Сопоставление уровня экспрессии гена УЕвР с выраженностью патологических изменений сетчатки выявило тесную отрицательную связь между этими параметрами: г = -0,61; р < 0,03. Таким образом, на ранних стадиях развития заболевания выраженность патологических изменений у крыс линии ОХУБ зависит от уровня экспрессии гена УЕвЕ

Экспрессию гена УЕОР при лечении каплями БкС^ (250 нМ) исследовали на крысах линий ОХУБ и \Vistar в возрасте 9 мес. Препарат оказывал лечебный эффект (рис. 27). У крыс линии Ч^аг под влиянием капель Эк^Н наблюдалась тенденция к повышению экспрессии гена УЕОБ (р < 0,075). У крыс линии ОХУБ она, напротив, достоверно снизилась (рис. 30). Принципиально важно, что уровень экспрессии гена УЕОР, как и при профилактическом приеме препарата 3-месячными крысами линии ОХУБ, зависел от выраженности патологических изменений, но связь оказалась положительной (г = 0,69; Р<0,03).

В этом же опыте мы оценили влияние БкСН на экспрессию а-кристал-линов - основных структурных белков хрусталика (более 90 % водорастворимых белков), а-кристаллины обеспечивают прозрачность хрусталиков как его структурные компоненты, выполняют роль шаперонов, предотвращают апоп-тоз. Снижение их экспрессии нарушает плотность и укладку волокон, свето-

ед. флюоресценции

ё м: т

* ШЛ Г^П

| : н-Ш ;

1 ч 1111

Wistar OXYS

I i контроль Ц капли SkQl

Рис. 30. Уровень экспрессии гена VEGF в тканях внутренних оболочек глаза крыс линий OXYS и Wistar контрольных и получавших в возрасте с 9 до 12 мес. 250 нМ капель SkQl; * отличие достоверно по сравнению с контролем (р < 0,019)

рассеивание хрусталика и приводит к агрегации кристаллинов других групп, неокисленное состояние которых обеспечивается шаперонной активностью а-кристаллинов. Снижение экспрессии генов типично для сенильной катаракты и связано с повреждениями эпителиального слоя хрусталика. Предполагается, что снижение у крыс линии OXYS экспрессии генов а-кристаллинов (Румянцева Ю.В., Фурсова А.Ж. и др., 2008) и развитие катаракты у крыс линии OXYS также сопряжено с дистрофическими изменениями эпителия хрусталика, несостоятельностью его дренажной и пластической функций, причины которой пока не известны (Колосова Н.Г. и др., 2003). В пользу связи патогенеза катаракты с окислительным стрессом свидетельствует то, что приём SkQl в каплях не только улучшил состояние хрусталиков крыс линии OXYS, но и повысил в них экспрессию генов а-кристаллинов. Экспрессия гена аА-кристаллина была в 2,7 раза выше, чем у контрольных крыс линии OXYS и достигла уровня крыс линии Wistar. Экспрессия аВ-кристаллина увеличилась в 3,4 раза по сравнению с контролем, но оставалась в 5 раз меньше, чем у крыс линии Wistar. При этом корреляционный анализ показал, что выраженность патологических изменений хрусталиков у крыс линии OXYS зависит от уровня экспрессии генов аА- (г = -0,53; р < 0,012) и аВ кристаллинов (г = -0,60; р < 0,003) (рис. 31).

Таким образом, установлено, что митохондриальный антиоксидант SkQl эффективен как в профилактике, так и в лечении ХРД и катаракты у крыс линии OXYS. При профилактическом приеме он предотвращает их развитие, а при лечении - снижает выраженность патологических изменений и/или при-

. флюоресценции

флюоресценции

OXYS

О контроль | капли SkQl

Рис. 31, Влияние инсталляций капель SkQl (250 нМ; приём с 9 мес. в течение 3,5 мес.) на экспрессию генов аА- (а) и аВ-кристаллинов (б) в хрусталиках крыс линий Wistar и OXYS; # статистически значимые межлинейные различия; * статистически значимый эффект препарата

водит к их полному исчезновению. Его лечебный эффект в отношении катаракты связан с повышением уровня экспрессии основных белков хрусталиков а-кристаллинов, в основе которого могут лежать восстановление эпителия хрусталиков и активизация энергетических процессов в нём. В отношении ХРД эффект SkQl связан с влиянием на уровень экспрессии гена УЕОР в хо-риоретинальном комплексе крыс линии ОХУЭ, который антиоксидант нормализовал. Важно, что препарат не влиял на этот показатель у крыс линии \Vistar. Направленность изменений (повышение или понижение экспрессии УЕОР) у крыс линии ОХУЗ зависела от возраста животных и стадии заболевания. Во всех случаях терапевтический эффект SkQl был связан с нормализацией состояния сосудов хориоидеи и сетчатки, с предупреждением дистрофических изменений пигментного эпителия и восстановлением его функций.

Таким образом, результаты наших исследований указывают на то, что ключевую роль в развитии дистрофии сетчатки у крыс линии ОХУ8 могут играть: а) нарушения структурно-функционального состояния мембраны Бруха и клеток пигментного эпителия, уменьшение количества полноценных митохондрий в них; б) инволюция эндотелия капилляров хориоидеи, их метаболическая несостоятельность на фоне снижения уровня экспрессии гена фактора роста сосудистого эндотелия УЕОБ в клетках пигментного эпителия в критический для развития ХРД период; в) развитие атрофических процессов в эндотелии хориокапилляров, облитерация их просвета со значительной регрессией хориоидального кровообращения, следствием которых становится дальнейшее

поражение клеток пигментного эпителия и поражение фоторецепторной системы с полной атрофией наружных слоев.

Полученные результаты свидетельствуют в пользу связи преждевременного старения крыс линии ОХУБ с дисфункцией митохондрий. Способность 8кС>1 влиять на развитие катаракты и ХРД у крыс линии ОХУБ свидетельствует о том, что их развитие зависит от скорости образования АФК внутри митохондрий. Направленно изменяя её, проникающий в митохондрии антиок-сидант 8к<31 способен влиять на реализацию программы старения и не только предупреждать развитие катаракты и ХРД, но обеспечивать структурно-функциональные предпосылки к восстановлению зрительной функции: нормализацию микроциркуляции в хориоидее и фагоцитарной функции клеток пигментного эпителия, восстановление структуры мембраны Бруха, а следовательно, гематоофтальмического барьера. Все эти изменения происходили на фоне существенного увеличения содержания в клетках митохондрий, формирования мощного хондриома, отличающегося большой протяженностью и развитой системой крист (Сапрунова В.Б., 2008; Нероев В.В. и др., 2008).

Невозможность изучать молекулярные механизмы развития ВМД на ранних бессимптомных стадиях, этические и правовые нормы, не позволяющие оценивать их в динамике развития заболевания, ограничивают возможности исследования этиологии и патогенеза ВМД и катаракты у людей. Как показали наши исследования, уникальные возможности для изучения этиологии, патогенеза ВМД, его молекулярно-генетических механизмов открывает использование крыс линии ОХУБ - полноценной модели сенильной катаракты и ВМД. Опыт оценки терапевтического потенциала митохондриального антиоксиданта 8к<31 убеждает в высокой эффективности использования модели для объективной оценки эффективности новых терапевтических воздействий.

ВЫВОДЫ

1. У крыс линии ОХУБ параллельно развиваются катаракта и ХРД, которые по клиническим проявлениям биомикроскопической и офтальмоскопической картин соответствуют изменениям хрусталика и сетчатки у пациентов с сенильной катарактой и возрастной макулярной дистрофией.

2. Установлены критические периоды развития катаракты и возрастной макулярной дистрофии у крыс линии ОХУБ: первые признаки этих заболеваний зарегистрированы в 5-6 недель, активно прогрессируют с возраста 12 мес. и достигают выраженных стадий, предполагающих потерю или существенное ухудшение остроты зрения к 14-18 мес.

3. У крыс линии ОХУБ развитие ХРД связано с нарушениями кровообращения и транскапиллярного обмена в хориокапиллярах и вызванной этим хронической ишемией, ведущей к структурно-функциональным изменениям

пигментного эпителия, дистрофическим изменениям мембраны Бруха и, как следствие, гибели клеток фоторецепторного слоя.

4. Развитие дистрофии сетчатки у крыс линии ОХУ8 связано с изменениями экспрессии гена УЕОБ в клетках пигментного эпителия:

а) первичные признаки заболевания формируются на фоне его двукратного снижения по сравнению с контролем, когда между тяжестью заболевания и уровнем экспрессии гена УЕОБ формируется отрицательная связь;

б) в период формирования выраженных патологических изменений средние величины уровня экспрессии гена УЕвБ не отличаются от контрольных, но между ним и выраженностью патологических изменений связь становится положительной.

5. Развитие катаракты и ХРД у крыс линии ОХУ8 с различной эффективностью предупреждают препараты с антиоксидантной активностью, что свидетельствует в пользу адекватности модели, а также о связи патогенеза катаракты и ХРД.

6. Митохондриально направленный антиоксидант ЭкСН при его приеме с кормом и в виде капель в коньюнктивальную полость предупреждает развитие катаракты и дистрофии сетчатки и снижает тяжесть течения этих заболеваний у крыс линии ОХУБ. Лечебный эффект 8к(31 наиболее существенно выражен при начальных, не имеющих грубых органических изменений стадиях заболевания.

7. Терапевтический эффект митохондриально направленного антиок-сиданта 8к(51 при ХРД у крыс линии ОХУБ связан с нормализацией уровня экспрессии гена УЕОБ, восстановлением микроциркуляции на фоне снижения признаков склероза и облитерации сосудов, которые обеспечивают трофику и в результате - сохранность фоторецепторов сетчатки.

8. Терапевтический эффект митохондриально направленного антиок-сиданта 8к<31 при лечении катаракты связан с увеличением уровня экспрессии генов а-кристаллинов.

9. Линия преждевременно стареющих крыс линии ОХУЭ - адекватная модель для исследования этиологии и патогенеза катаракты и ВМД, для оценки эффективности новых способов профилактики и лечения этих заболеваний.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Фурсова А.Ж. Опыт лечения макулярной дегенерации сетчатки в отделении микрохирургии глаза ГНОКБ (1992-1997) / А.Ж. Фурсова // Новые методы диагностики, лечения заболеваний и управления в здравоохранении: Тез. науч.-практ. конф. Новосибирск, 1998. С. 28-29.

2. Колосова Н.Г. Преждевременно стареющие крысы OXYS как модель сенильной катаракты человека / Н.Г. Колосова, П.А. Лебедев, А.Ж. Фурсова и др. // Успехи геронтологии. 2003. Т. 12. С. 143-148.

3. Гусаревич О.Г. Изучение влияния Офтан // Катахрома на развитие макулярной дегенерации сетчатки (экспериментальное исследование) / О.Г. Гусаревич, А.Ж. Фурсова, Н.Г. Колосова // Клиническая офтальмология. 2003. Т. 4. С. 186-190.

4. Фурсова А.Ж. Крысы OXYS - универсальная модель старения органа зрения / А.Ж. Фурсова, П.А. Лебедев, О.Г. Гусаревич и др. // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные и клинические аспекты: Тез. Всерос. науч.-практ. конф. Новосибирск, 2004. С. 311-312.

5. Фурсова А.Ж. Возможности использования диодного лазера в лечении сосудистой патологии сетчатки / А.Ж. Фурсова, Н.В. Чубарь, О.Г. Гусаревич // Сибирский консилиум. 2004. №6 (36). С. 52-55.

6. Lebedev Р.А. Interaction between oxidative stress and cataractogenesis in senescence-accelerated OXYS rats / P.A. Lebedev, A.Zh. Fursova, N.G. Kolosova // International conference Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health. Smolensk, 2003. P. 149.

7. Фурсова А.Ж. Экспериментальная макулодистрофия и катарактоге-нез у преждевременно стареющих крыс OXYS на фоне окислительного стресса / А.Ж. Фурсова, О.Г. Гусаревич, Н.Г. Колосова // Межрегиональная конф. офтальмологов: Тез. докл. Красноярск, 2003. С. 58-59.

8. Колосова Н.Г. Макулодистрофия и катарактогенез у преждевременно стареющих крыс OXYS, их связь с окислительным стрессом / Н.Г. Колосова, А.Ж. Фурсова, П.А. Лебедев и др. // Офтальмологический журнал. 2004. №3. С. 237-242.

9. Фурсова А.Ж. Экстракт черники в профилактике макулярной дегенерации и катаракты у крыс OXYS / А.Ж. Фурсова, О.Г. Гусаревич, А.М. Гончар и др. // Успехи геронтологии. 2005. Вып. 16. С. 76-79.

10. Фурсова А.Ж. Сравнительная эффективность реваскуляризирую-щих операций в лечении дегенеративных изменений сетчатки / А.Ж. Фурсова, О.Г. Гусаревич // V Всерос. о съезд офтальмологов: Тез. докл. М., 2005. С. 346-347.

11. Фурсова А.Ж. Опыт диодной лазеркоагуляции сетчатки в лечении патологии макулярной области / А.Ж. Фурсова, О.Г. Гусаревич // V Всерос. съезд офтальмологов: Тез. докл. М., 2005. С. 404-406.

12. Гусаревич О.Г. Центральная инволюционная хориоретинальная дистрофия / О.Г. Гусаревич., А.Ж. Фурсова // Пептидные биорегуляторы в офтальмологии: Тез. докл. науч.-практ. конф. М., 2005. С. 36-39.

13. Гусаревич О.Г. Ретиналамин в лечении центральной инволюционной хориоретинальной дистрофии / О.Г. Гусаревич, А.Ж. Фурсова // Тера-медика.

2005. №3. С. 46-53.

14. Колосова Н.Г. Разнонаправленное влияние антиоксидантов на тревожность крыс Wistar и OXYS / Н.Г. Колосова, Н.А. Трофимова, А.Ж. Фурсова // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. 2006. Т. 141. №6. С. 59-62.

15. Фурсова А.Ж. Анализ изменения основных гемодинамических показателей орбиты при различных методах лечения ишемических заболеваний сетчатки и зрительного нерва / А.Ж. Фурсова, О.Г. Фенькова, О.Г. Гусаревич // Современные методы диагностики в офтальмологии. Анатомо-физиологи-ческие основы патологии органа зрения: Сб. статей под ред. Х.П. Тахчиди. М.,

2006. С. 134-135.

16. Mitochondria-targeted antioxidant SkQl as therapeutic approach for cataract and retinal dystrophy / N.G. Kolosova, A J. Fursova, N.A. Trofimova et al. // Basic science for medicine: 3 Intern. Conference. Novosibirsk, 2007. P. 33.

17. Опыт использования препарата черники для лечения центральной хориоретинальной дегенерации / А.Ж. Фурсова, О.Г. Гусаревич, A.M. Гончар и др. // Бюл. СО РАМН. 2007. № 1 (123). С. 92-96.

18. Румянцева Ю.В. Возрастные изменения физико-химических характеристик хрусталиков и катарактогенез у крыс OXYS /Ю.В. Румянцева, А.Ж. Фурсова, Н.Г. Колосова // Сибирский консилиум. 2007. №7 (62). С. 230-231.

19. Фурсова А.Ж. Дистрофия сетчатки и катарактогенез у преждевременно стареющих крыс OXYS, их связь с окислительным стрессом / А.Ж. Фурсова, Ю.В. Румянцева, Н.Г. Колосова // Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии: Тез. докл. XV междунар. конф. Гурзуф, 2007. С. 429-430.

20. Румянцева Ю.В. Снижение экспрессии генов а-кристаллинов в хрусталиках предшествует манифестации окислительного стресса при развитии катаракты у крыс OXYS / Ю.В. Румянцева, А.Ж. Фурсова, Н.Г. Колосова // Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека: Тез. докл. 5-й нац. конф. Смоленск, 2007. С. 397-399.

21. Колосова Н.Г. Профилактика и лечение катаракты и дистрофии сетчатки у крыс OXYS митохондриально направленным антиоксидантом SkQl / Н.Г. Колосова, А.Ж. Фурсова, Н.А. Трофимова и др. // Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека: Тез. докл, 5-й нац. конф. Смоленск, 2007. С. 395-397.

22. Snytnikova O.A. Deaminated UV filter 3-hydroxykynurenine O-beta-D-glucoside is found in cataractous human lenses / O.A. Snytnikova, A.Zh. Fursova, E.I. Chernyak, et al. // Experimental Eye Research. 2008. №86 (6). P. 951-956.

23. Румянцева Ю.В. Изменения физико-химических характеристик и экспрессии генов а-криссталинов в хрусталиках крыс OXYS при развитии катаракты / Ю.В. Румянцева., А.Ж. Фурсова, JI.A. Федосеева и др. // Биохимия. 2008. Т. 73. Вып. 11. С. 1467-1475.

24. Жданкина А.А. Клинико-морфологические особенности хориоре-тинальной дегенерации у преждевременно стареющих крыс линии OXYS / А.А. Жданкина, А.Ж. Фурсова, С.В. Логвинов и др. // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. 2008. Т. 145. № 10. С. 435-438.

25. Нероев В.В. Производное пластохинона, адресованное в митохондрии, как средство, прерывающее программу старения. Связанные с возрастом заболевания глаз. SkQl возвращает зрение слепым животным / В.В. Нероев, М.М. Архипова, Л.Е. Бакеев и др. // Биохимия. 2008. Т. 73. № 12. С. 1641-1654.

26. Kolosova N.G. Dietary supplementation with bilberry extract prevents macular degeneration and cataracts in senescent accelerated OXYS rats / N.G. Kolosova, A.Z. Fursova, N.A. Stefanova. // Planta Medica. 2008. №74. P. 288.

27. Марковец A.M. Экспрессия гена VEGF-A в сетчатке крыс OXYS при развитии дистрофии сетчатки в лечении митохондриально-направленным анти-оксидантом SkQl / A.M. Марковец, А.Ж. Фурсова, Н.Г. Колосова // Фундаментальные науки - медицине: Тез. науч.-практ. конф. Новосибирск, 2008. С. 40.

28. Румянцева Ю.В. Экспрессия генов кристаллитов в хрусталиках крыс OXYS при развитии катаракты на фоне лечения митохондриально направленным антиоксидантом SkQl / Ю.В. Румянцева, Н.Г. Колосова, А.Ж. Фурсова // Г/съезд Рос. общества биохимиков и молекулярных биологов: Тез. докл. Новосибирск, 2008. С. 232.

29. Колосова Н.Г. Митохондриально направленный антиоксидант SkQl в профилактике преждевременного старения крыс OXYS / Н.Г. Колосова, Т.Г. Амстиславская, Н.А. Стефанова и др. // Г/съезд Рос. общества биохимиков и молекулярных биологов: Тез. докл. Новосибирск, 2008. С. 333.

30. RumyantsevaYu.V. Mitochondria-targeted antioxidant SkQl: therapeutic approach for cataract and its connection with elevation of crystalline genes expression / Yu.V. Rumyantseva, A.J. Fursova, N. G Kolosova // Ageing and individual life history: 6th European Congress of Biogerontology. Netherlands, Noordwijkerhout, 2008. P. 30.

АТФ

АФК

ВМД

ДК

МДА

ПОЛ

РПЕ

ФАГ

ХНВ

ХРД

ЭРГ

взн

УЕОБ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Аденозинтрифосфорная кислота Активные формы кислорода Возрастная макулярная дистрофия Диеновые коньюгаты Малоновый диальдегид Перекисное окисление липидов Ретинальный пигментный эпителий Флуоресцентная ангиография Хориидальная неоваскуляризация Хориоретинальная дистрофия Электроретинография Восстановленный глутатион Фактор роста эндотелия сосудов

Соискатель (¡И*

2008152922

Отпечатано в типографии ООО ИЦ «ДАР» Новосибирск, ул. Фрунзе, 4 Заказ № 10437; формат 60x90/16; печ. л. 3,25; тираж 100 Гарнитура Times New Roman

2008152922

Оглавление диссертации Фурсова, Анжелла Жановна :: 2009 :: Новосибирск

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ПАТОГЕНЕЗА ВОЗРАСТНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ. СПОСОБЫ

ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ

1. ВОЗРАСТНАЯ МАКУЛЯРНАЯ ДИСТРОФИЯ: ЭПИДЕМИОЛОГИЯ И ФАКТОРЫ РИСКА ЗАБОЛЕВАНИЯ

1.1. Генетические основы возрастной макулярпой дистрофии

1.2. Патогенез и клинические проявления возрастной макулярной дистрофии

1.2.1. Липофусциногенез

1.2.2. Друзы, друзогенез и воспаление

1.2.3. Хориоидальная неоваскуляризация

1.2.4. Классификация возрастной макулярной дистрофии

2. ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ХРУСТАЛИКА И КАТАРАКТО-ГЕНЕЗ

2.1. Роль модификации белков в развитии катаракты

2.2. Фотоокисление триптофана

2.3. Изменения экспрессии генов при развитии катаракты

3. ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС В ПАТОГЕНЕЗЕ ВОЗРАСТНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ГЛАЗ

3.1. Антиоксидантный потенциал при возрастных заболеваниях

3.2. Антиоксиданты в терапии и профилактике возрастных заболеваний глаз

3.3. Митохондриально направленный антиоксидант - катионный аналог хинона (SkQ 1)

4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МОДЕЛИ ЖИВОТНЫХ С ВОЗРАСТНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ГЛАЗ

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общие данные

2.2. Характеристика экспериментальной группы животных

2.3. Обоснование выбора линии крыс OXYS для экспериментальных исследований

2.4. Забор материала и его предварительная подготовка к исследованию

2.5. Биохимические методы исследования

2.6. Морфологические методы исследования

2.7. Электрофизиологические методы оценки состояния сетчатки

2.8. Препараты

2.9. Статистическая обработка полученных результатов

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Характеристика результатов офтальмологического обследования крыс OXYS при развитии возрастной патологии глаз

3.2. Характеристика результатов морфологического исследования крыс oxys OXYS при развитии возрастной патологии глаз

3.3. Окислительный стресс и развитие дистрофии сетчатки и катаркты у крыс OXYS

3.4. Исследование показателей липидного обмена

3.5. Экспрессия гена VEGF в хориоретинальном комплексе крыс OXYS разного возраста

3.6. Исследование возможности профилактики и лечения катаракты и дистрофии сетчатки у крыс OXYS препаратами, применяемыми в клинической практике

3.7. Оценка профилактического и лечебного потенциала Митохонд-риально направленного антиоксиданта SkQl у крыс OXYS при развитии возрастной патологии глаз

3.7.1. Профилактический эффект SkQl у крыс OXYS при развитии возрастной патологии глаз

3.7.2. Лечебный эффект SkQl у крыс OXYS при возрастной патологии глаз

3.7.3. Влияние SkQl на содержание в сыворотке крови продуктов пе-рекисного окисления липидов и липидного обмена

3.7.4. Влияние SkQl на экспрессию гена VEGF во внутренних оболочках глаз крыс OXYS

3.7.5. Влияние SkQl на экспрессию генов а-кристаллинов

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ СОБСТВЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Фурсова, Анжелла Жановна, автореферат

Возрастная макулярная дистрофия (ВМД) занимает лидирующее положение в мире среди заболеваний, ведущих к стойкому снижению зрения и слепоте (Егоров Е.А., 2006). Её выраженные проявления в разной степени присутствуют более чем у 50% европейцев старше 65 лет (Акопян B.C., 2004). Заболеваемость ВМД растет на фоне увеличения продолжительности жизни. В России, по разным данным, ВМД страдает от 14 до 46% населения этой возрастной группы. Ситуация осложняется несвоевременной постановкой диагноза и тенденцией к «омоложению» заболевания, что ведет к инвалидизации трудоспособного населения. Патогенез ВМД до конца не ясен, эффективных способов лечения, нет, что обусловлено неполнотой знаний механизмов развития заболевания - комплексного и мпогофакторного, как и сам процесс старения (Cook Н. et al., 2008).

Патогенез ВМД связан с гипоксией и воспалением. Их мишенью становятся пигментный эпителий сетчатки, мембрана Бруха и сосуды хориоидеи. В качестве основного повреждающего звена выступает окислительный стресс - нарушение баланса между генерацией и детоксикацией активных форм кислорода (АФК), его следствием - отек, отслойка пигментного и нейроэпителия, кровоизлияния, неоваскуляризация, потеря зрения. Неоваскуляризацию в условиях гипоксии в тканях внутренних оболочек глаза больных ВМД провоцирует фактор роста эндотелия сосудов (vascular endothelial grows factor - VEGF). Он экспрес-сируется в клетках пигментного эпителия и в физиологических условиях обеспечивает жизнеспособность и пролиферацию эндотелиальных клеток сосудов (Lau L., 2007, Ding X., 2008). Атрофия клеток пигментного эпителия и недостаточная экспрессия гена и синтеза белка VEGF ведут к атрофии хориокапилля-ров и развитию атрофической формы ВМД (Grisanti S., Tatar О., 2008). Ингибиторы VEGF снижают неоваскуляризацию, их всё шире используют в лечении

ВМД, однако механизм участия этого фактора в патогенезе заболевания остаётся до конца не выясненным.

Окислительный стресс, с одной стороны, сопровождает возрастные изменения, с другой - становится их причиной. Несмотря на значительное количество работ, доказывающих связь с ним патогенеза ВМД, конкретные механизмы развития окислительного стресса в процессе старения организма и непосредственно тканей глаза до конца не ясны. Тем не менее, количество антиоксидантов, используемых в профилактике и лечении ВМД, постоянно растет. Объективная оценка их эффективности в профилактике любых возрастных изменений у людей затруднена различиями в базовой обеспеченности антиоксидантами и индивидуальными темпами старения, обусловленными как генетическими, так и социальными детерминантами. Недавно появился принципиально новый класс антиоксидантов, способных проникать и накапливаться в митохондриях - основном источнике АФК в соматических клетках. Впервые адресную доставку в митохондрии антиоксиданта mitoQ - комплекса убихинона (CoQ) и проникающего I катиона трифосфония - осуществили М. Мерфи и соавт. . (Murphy М.Р., 2001; Kelso G.F., 2002). Ещё более эффективным соединением этого класса оказался созданный в России SkQl — катионный аналог хинона, составленный из пла-стохинона, проникающего катиона и деканового линкера (Скулачев В.П., 2007). Комплексные исследования показали, что SkQl является мощным антиоксидан-том многократного действия, поскольку легко восстанавливается в дыхательной цепи митохондрий (Скулачев В.П. и др., 2008; Antonenko Y.N. et al., 2008). Обсуждаются большие потенциальные возможности применения митохондриально направленных антиоксидантов в терапии заболеваний, патогенез которых связан с окислительным стрессом (Cocheme Н.М., 2007), однако их внедрение невозможно без проведения всесторонних фундаментальных исследований.

Один из подходов к выяснению этиологии и патогенеза, к разработке способов терапии - создание биологических моделей социально значимых заболе7 ваний человека. Дистрофию сетчатки моделируют воздействием физических факторов* либо используют генетические модели: животных трансгенных, с нокаутом генов или с определенными мутациями (Ding Н., 2008). По характеру изменений, и механизму развития они не могут быть строго отнесены к моделям ВМД, т.к. воспроизводят, как правило, одну из стадий заболевания, но не дают комплексной картины его развития. У людей ВМД развивается на фоне множественных проявлений старения, возраст манифестации которых различается, затрудняя отделение причин от эффектов старения.

Существует три основных критерия соответствия модели тому или иному заболеванию: адекватность клинических проявлений, изменений на морфологическом уровне и реакция на стандартную терапию (Swanson К. S., 2004). По характеру морфологической и электронно-микроскопической картины близки развивающимся при ВМД у пожилых людей изменения глазного дна преждевременно стареющих мышей SAM(P8), появляющиеся у них к возрасту 10-12 мес. (Maji А.В., 2000). Сегодня эта линия - единственная общепризнанная модель преждевременного старения, однако клиническая картина изменений тканей глазного дна у них не исследовалась.

Исследования последних лет показали, что комплексное проявление фе-нотипических признаков преждевременного старения характерно и для крыс линии OXYS, созданной в ИЦиГ СО РАН селекцией крыс Вистар по признаку ранней катаракты. В пяти первых поколениях её развитие провоцировали обогащенной галактозой диетой (Соловьева Н.А., 1975). В дальнейшем отбор шёл по ранней спонтанной катаракте, сцеплено с которой животные унаследовали синдромом преждевременного старения. Его проявлениями становятся сниженная по сравнению с исходной линией крыс Вистар продолжительность жизни и раннее развитие возраст-зависимых заболеваний на фоне ранней инволюции тимуса и снижения активности Т-клеточного звена иммунной системы (Колосова Н.Г., 2001, 2003, 2008; Лоскутова Л.В., Колосова Н.Г., 2000; Маркова Е.В., 8

2003, Bobko A. et al., 2005; Kolosova N.G., 2006). Состояние линии по-прежнему контролируется по признаку ранней спонтанной катаракты, однако до настоящего времени анализ клинической картины возрастных изменений хрусталиков крыс OXYS не проводился. Наши предварительные исследования показали, что наряду с катарактой у крыс OXYS развиваются клинические проявления хорио-ретинальной дистрофии (ХРД), аналогичные наблюдаемым при ВМД у людей. Выяснение механизмов развития у крыс OXYS патологических изменений сетчатки как одного из проявлений преждевременного старения, обоснование соответствия линии критериям модели ВМД, пригодной для изучения молекулярно-генетических основ формирования этого заболевания и оценки эффективности терапевтических воздействий, представляются актуальными как для фундаментальной медико-биологической науки, так и для практической медицины.

ЦЕЛЬЮ настоящей работы явилось изучение особенностей развития хо-риоретинальной дистрофии у преждевременно стареющих крыс линии OXYS, оценка профилактического и терапевтического потенциала митохондриально направленного антиоксиданта SkQl Для её достижения были поставлены следующие

ЗАДАЧИ:

1. Охарактеризовать клинические особенности развития патологических изменений сетчатки и хрусталиков у крыс OXYS.

2. Провести морфологическое исследование особенностей развития ХРД у крыс OXYS.

3. Изучить уровень экспрессии гена фактора роста эндотелия сосудов VEGF в тканях внутренней оболочки глаз крыс OXYS на разных стадиях развития ХРД.

4. Установить связь развития катаракты и ХРД у крыс OXYS с окислительным стрессом и оценить возможность воздействия на их течение препаратов со свойствами антиоксидантов.

5. Изучить влияние митохондриального антиоксиданта SkQl на развитие хориоретинальной дистрофии и катаракты у крыс OXYS и связь его эффектов с влиянием на экспрессию гена VEGF хориоретинальном комплексе и альфа-кристаллинов в хрусталиках.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые показано, что у преждевременно стареющих крыс линии OXYS параллельно с катарактой развивается ХРД, по клиническим и морфологическим проявлениям соответствующая ВМД у людей, что позволяет рассматривать эту линию как адекватную модель этого заболевания. Установлено, что в основе патогенеза ХРД у крыс OXYS лежат склеротические повреждения сосудов хо-риоидеи, нарушение кровотока в них и деструкция пигментного эпителия, которые приводят к ишемии и повреждению нейросенсорных клеток.

Показано, что развитие ХРД у крыс OXYS связано с изменениями уровня экспрессии гена VEGF в хориоретинальном комплексе крыс OXYS: его снижением на ранних стадиях заболевания, влияющим на тяжесть поражения сетчатки, и ростом в период формирования выраженных патологических изменений, когда между экспрессией гена VEGF и тяжестью поражения сетчатки устанавливается положительная связь.

Установлено, что окислительный стресс, выступая в качестве патогенетического фактора развития ХРД и катаракты, не лежит в основе их этиологии у крыс OXYS: он характерен для развитых стадий заболевания.

Впервые выявлен высокий терапевтический потенциал митохондриального антиоксиданта SkQl — пластохинон-децил-трифосфония: его способность при профилактическом приеме с кормом или в виде капель полностью предупреждать развитие катаракты и ХРД у крыс OXYS и снижать выраженность патологических изменений хрусталиков и сетчатки. Отработаны способы введения и оптимальная эффективная доза SkQl для профилактики и лечения дистрофических изменений хрусталиков и сетчатки у крыс OXYS

Показано, что в основе эффектов SkQl лежит нормализация кровотока в сосудах хориоидеи, восстановление функций пигментного эпителия, которые на молекулярном уровне связаны с нормализацией уровня экспрессии гена фактора роста эндотелия сосудов VEGF в хориоретииальном комплексе. Антикатарак-тальный эффект SkQl связан с его способностью повышать экспрессию основных белков хрусталиков а-кристаллинов.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Научно-практическая ценность работы определяется доказательством соответствия линии преждевременно стареющих крыс OXYS критериям модели катаракты и ВМД. Это открывает уникальные возможности для использования этих животных для исследования этиологии и патогенеза этих заболеваний, в том числе на ранних доклинических стадиях развития, а также для корректной оценки эффективности терапевтических воздействий. Использование крыс OXYS позволило выявить новое свойство препарата офтан-катахром («Сантен», Финляндия) - его эффективность в профилактике ВМД, усовершенствовать рецептуру БАД «Окулист» (ОАО «Диод»). Высокая эффективность использования модели для оценки терапевтического потенциала новых препаратов продемонстрирована на примере митохондриально антиоксиданта SkQl («Центр митоин-женерии МГУ»). Установлена перспективность создания лекарственных препаратов на основе SkQl для профилактики и лечения катаракты и ВМД. Результаты исследования легли в основу создания ветеринарного препарата, эффективность которого подтверждена в испытаниях на домашних животных.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Развитие у крыс OXYS хориоретинальной дистрофии по клиническим и морфологическим проявлениям соответствует возрастной макулярной дистрофии у людей, развивается параллельно с формированием катаракты и является одним из проявлений преждевременного старения.

2. В основе патогенеза хориоретинальной дистрофии у крыс OXYS лежат склеротические повреждения сосудов хориоидеи, нарушение кровотока в них, деструкция пигментного эпителия, изменения уровня экспрессии гена фактора роста эндотелия сосудов VEGF в хориоретинальном комплексе: снижение экспрессии на ранних стадиях и повышение по мере прогрессирования заболевания.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Результаты исследований внедрены в практику работы офтальмологического отделения ОГУЗ «Новосибирская областная клиническая больница», а также в учебный процесс Факультета усовершенствования врачей Новосибирского государственного медицинского университета Росздрава, ОАО «Диод», ООО «Митотехнология».

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты работы были доложены и обсуждены на следующих научных собраниях: Всероссийской научно-практической конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные и клинические аспекты» (Новосибирск, 2004); International conference Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health (Смоленск, 2003); межрегиональной конференции офтальмологов (Красноярск, 2003), научно-практической конференции «Пептидные биорегуляторы в офтальмологии» (Москва, 2005); школе офтальмологов «Диагностика и современные методы лечения дистрофических заболеваний глазного дна» (Новосибирск, 2006); V Всероссийской школе офтальмологов (Москва, 2005); 3 International Conference «Basic science for medicine» (Новосибирск, 2007); XV международной'конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Гурзуф, 2007); 5-й> национальной конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиок-сиданты и- здоровье человека» (Смоленск, 2007); 3 Всероссийской научно-практической конференции «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов» (Новосибирск, 2007); конгрессе «Человек и лекарство. Урал-2007» (Тюмень, 2007); 7th Joint Meeting of AFERP, ASP, GA, PSE & SIF Athenaeum Intercontinental (Greece, Athens,2008); I научно-практической конференции «Ионы Скулачева» (Москва, 2007); III Всероссийском семинар научного общества офтальмологов России «Макула 2008» (Ростов-на-Дону, 2008); научно-практической конференции «Фундаментальные науки - медицине» (Новосибирск, 2008); IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008); 6th European Congress of Biogerontology - Ageing and individual life history (Netherlands, Noordwijkerhout, 2008); II международной конференции «Ионы Скулачева» (Суздаль, 2008).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 30 печатных работ, в том числе 15 статей, 8 из них - в рецензируемых ВАК источниках.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 229 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, глав «Материалы и методы исследования», «Результаты собственных исследований», «Обсуждение собственных результатов», выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы. Список литературы включает 311 источников, из них 82 отечественных и 229 иностранных.

Заключение диссертационного исследования на тему "Хориоретинальная дистрофия: особенности развития у преждевременно стареющих крыс линии OXYS и коррекция митохондриальным антиоксидантом"

выводы

1. У крыс OXYS параллельно развиваются катаракта и хориоретинальная дистрофия, которые по клиническим проявлениям биомикроскопической и офтальмоскопической картины соответствуют изменениям хрусталика и сетчатки у пациентов с сенильной катарактой и возрастной макулярной дистрофией.

2. Установлены критические периоды развития катаракты и возрастной макулярной дистрофии у крыс OXYS: первые признаки этих заболеваний зарегистрированы в 5-6 недель, активно прогрессирует с возраста 12 месяцев и достигают выраженных стадий, предполагающих потерю или существенное ухудшение остроты зрения к 14-18 месяцам.

3. У крыс OXYS развитие хориоретинальной дистрофии связано с нарушениями кровообращения и транскапиллярного обмена в хориокапиллярах и вызванной этим хронической ишемией, ведущей к структурно-функциональным изменениям пигментного эпителия, дистрофическим изменениям мембраны Бруха и, как следствие, гибели клеток фоторецепторного слоя.

4. Развитие дистрофии сетчатки у крыс OXYS связано с изменениями экспрессии гена VEGF в клетках пигментного эпителия: а) первичные признаки заболевания формируются на фоне его двукратного снижения по сравнению с контролем, когда между тяжестью заболевания и уровнем экспрессии гена VEGF формируется отрицательная связь; б) в период формирования выраженных патологических изменений средние величины уровня экспрессии гена VEGF не отличается от контрольных, но между ним и выраженностью патологических изменений связь становится положительной.

5. Развитие катаракты и хориоретинальной дистрофии у крыс OXYS с различной эффективностью предупреждают препараты с антиоксидантной активностью, что свидетельствует в пользу адекватности модели, а также о связи патогенеза катаракты и ХРД.

6. Митохондриально направленный антиоксидант SkQl при его приеме с кормом и в виде капель в коньюнктивальную полость предупреждает развитие катаракты и дистрофии сетчатки и снижает тяжесть течения этих заболеваний у крыс OXYS. Лечебный эффект SkQl наиболее существенно выражен при начальных, не имеющих грубых органических изменений стадиях заболевания.

7 Терапевтический эффект митохондриально направленного антиоксидан-та SkQl при ХРД у крыс OXYS связан с нормализацией уровня экспрессии гена VEGF, восстановлением микроциркуляции на фоне снижения признаков склероза и облитерации сосудов, которые обеспечивают трофику и в результате - сохранность фоторецепторов сетчатки.

8. Терапевтический эффект митохондриально направленного антиоксидан-та SkQl при лечении катаракты связан с увеличением уровня экспрессии генов а-кристаллинов.

9 Линия преждевременно стареющих крыс OXYS - адекватная модель для исследования этиологии и патогенеза катаракты и ВМД, для оценки эффективности новых способов профилактики и лечения этих заболеваний.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Фурсова, Анжелла Жановна

1. Бакарев М.А., Непомнящих JI.M. Структурные проявления нарушений митохондриальной функции в скелетных мышцах у преждевременно стареющих крыс OXYS //Бюлл. эксперим. биол. 2004. - Т. 138. - № 12 . - С. 674-679.

2. Гусаревич О.Г., Фурсова А.Ж Ретиналамин в лечении центральной инволюционной хориоретинальной дистрофии//Тера-медика. 2005. - № 3. С- 46-53.

3. Гусаревич О.Г., Фурсова А.Ж. Центральная инволюционная хориорети-нальная дистрофия// тезисы докладов научно-практической конференции «Пептидные биорегуляторы в офтальмологии»,2005 год

4. Деев А.И., Бабижаев М.А. /Мембранные аспекты патогенеза катаракты // Биологические мембраны.- 2002.- Том 19, №5.- С. 435-448.

5. Днепровская А.И., Харинцева С.В. /Влияние пептида из сетчатки на состояние гемостаза, иммунитета и течение экспериментальных ретинопатии // Цитомедины. Чита: Б.И., 1988. - С. 33 - 35.

6. Егоров Е.А., Прокофьева М.И./ Применение фотодинамической терапии в лечении заболеваний переднего и заднего отрезка глаза.//Вестник офтальмологии.- 2003.- №2.- С. 13-16.

7. Елисеева Т.О., Свирин А.В./ Методы лечения ишемических состояний зрительного нерва и сетчатки // РМЖ Клиническая офтальмология 2002.-Том 3, №3.- С. 17-19

8. Ерошенко Т.М., Титов С.А., Лукьянова Л.Л./ Каскадные эффекты регуля-торных пептидов. М.: ВИНИТИ, 2001.-204 с.

9. Жданкина, А., Фурсова, А., Логвинов, .С., Колосова, Н. Клинико-морфологические особенности хориоретинальной дегенерации у преждевременно стареющих крыс OXYS. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2008 — Т. 145. - № 10. - С. 435-438

10. Журавлёва Л.В., Коскин С.А Мониторинг больных возрастной макулярной дистрофией при комплексном их лечении препаратами растительного происхождения. //РМЖ. Клиническая офтальмология, №1 , 2008 С. 24-28.

11. Завадская Ю.С., Каржаубаква Г.Г. /Значение исследования процессов пе-рекисного окисления липидов при глаукоме // Вестник офтальмологии.-1986.-№5.-с.6-8.

12. Зак П.,Егорова Т.,Розенблюм Ю. Спектральная коррекция зрения: научные основы и практические приложения. //Научный мир, Моск-ва.2005.С.454

13. Зенков Н.К. и др. / Фенольные биоантиоксиданты. Новосибирск: СО РАМН, 2003 -328 с.

14. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б./ Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты. М.: Майк «Наука // Интерпериодика» 2001-343 с.

15. Зольникова И.В., Шамшинова A.M. /Колбочковые дистрофии и дисфункции // Вестн. офтальмол., 2001, 117, N 4, 48-52.

16. Зоров Д.Б./Митохондрия как многоликий Янус//Биохимия.-2007,т. 72,вып.10,с. 1371-1384

17. Кацнелъсон Л.А., Форофонова Т.И., Бунин А.Я./ Сосудистые заболевания глаза // М.: Медицина, 1990. 272 с.

18. Колосова Н.Г., Трофимова Н.А., Фурсова А.Ж. Разнонаправленное влияние антиоксидантов на тревожность крыс Вистар и OXYS // Бюлл. Эксп. Биол. 2006. - Т. 141.-Т 6.-С. 59-62.

19. Колосова Н.Г., Щеглова Т.В., Амстиславская Т.Г., Лоскутова Л.В. /Сравнительный анализ содержания продуктов перекисного окисления липидов в структурах мозга крыс Вистар и OXYS разного возраста // Бюл. эксп. биол. 2003. - Т. 133. - С.54-61.

20. Колосова, Н., Лебедев, П., Фурсова, А., Морозкова, Т., Гусаревич, О. Преждевременно стареющие крысы OXYS как модель сенильной катаракты человека // Успехи геронтологии. 2003. -Т. 12. - С. 143-148.

21. Колосова, Н.Г., Кутаргин, Г.Д., Сафина, А.Ф. Особенности минерализации костной ткани преждевременно стареющих крыс OXYS // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2002. - Т. 133. - № 2. - С. 171174.

22. Колосова, Н.Г., Лебедев, П.А., Айдагулова, С.В., Морозкова, Т.С. Крысы OXYS как модель сенильной катаракты // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. - Т. 136.- № 10. - С. 467-471.

23. Колосова Н.Г., Гришанова А.Ю., Крысанова Ж.С., Зуева Т.В., Синицина О.И. Возрастные изменения окисленности белков и липидов в печени преждевременно стареющих крыс OXYS // Биомедицинская химия. -2004. Т. 50.-№ 1.-С. 73-78.

24. Колосова Н.Г., Трофимова Н.А., Фурсова А.Ж. Разнонаправленное влияние антиоксидантов на тревожность крыс Вистар и OXYS // Бюлл. Эксп. Биол. 2006. - Т. 141. - Т 6. - С. 59-62.

25. Логинова М.Ю.с соавт. Нарушение способности А2-родопсина к регенерации, вызванное видимым (синим) светом.//ДАН,2008,том 419,№ 6,С.838-841.

26. Логинова М.Ю.с соавт. Фотоповреждающее действие полностью транс ретиналя и продуктов его превращения на молекулу родопсина в составе фоторецепторной мембраны. //Биохимия.-2008,том 73,вып.2,С.162-172.

27. Лоскутова Л.В., Щеглова Т.В., Тарабанько В.Е., Колосова Н.Г. /Влияние экстракта черники на способность к однократному обучению преждевременно стареющих крыс OXYS и его возможные механизмы // Бюлл. СО РАМН. 2003. -№1. С. 87-90.

28. Лоскутова, Л.В., Колосова, Н.Г., Щеглова, Т.В., Тарабанько, В.Е. Коррекция нарушений способности к однократному обучению у преждевременно стареющих крыс OXYS экстрактом черники и ее возможные механизмы // Бюллетень СО РАМН. 2

29. Майчук Ю.Ф. /Принципы всемирной инициативы ВОЗ по ликвидации устранимой слепоты. Возможные пути их использования в Российской федерации. «Окулист» №4-2003(44).

30. Максимов И. Б. /Комплексная пептидная коррекция при микрохирургическом лечении травм глаз и их последствий // Дисс. докт. мед. наук. М., 1996.- 318с.

31. Максимов И.Б. /Особенности антиоксиданта ого действия препарата вещества хрусталика при лазерной катаракте // Антиоксидантная терапия в медицине. Гродно, 2000. - С. 14 - 16.

32. Макула 2006,2-й всероссийский семинар-«круглый стол».Тезисы докладов,Ростов-на Дону,2006

33. Макула 2008, 3-й всероссийский семинар-«круглый стол».Тезисы докладов,Ростов-на Дону,2008

34. Малишевская Т.Н.,Долгова И.Г.,Ортенберг Э.А.Изучение влияния препаратов Стрикс и Стрикс-форте на зрительные функции больных с возрастной патологией сетчатки и зрительного нерва. //РМЖ.Клиническая офтальмология ,№1 , 2008 С. 24-28.

35. Маниатис, Т., Фрич, Э., Сэнбрук, Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. М.: Мир, 1982. - 479 с.

36. Маркова, Е.В., Обухова, Л.А. Показатели активности клеточного звена иммунного ответа крыс линий Вистар и OXYS и особенности их поведения в тесте «открытое поле» // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. - Т 136. - № 12. - С. 427-429.

37. Меныцикова Е.Б., Шабалина И.Г., Зенков Н.К. и др. /Роль окислительного стресса в развитии патологических состояний. //Бюл. СО РАМН. 2000. -№ 3 - 4. - С. 43 - 49.

38. Меныцикова, Е., Шабалина, И., Зенков, Н., Колосова, Н. Генерация активированных кислородных метаболитов митохондриями преждевременно стареющих крыс OXYS // Бюлл. эксперим. биол. 2002. - Т. 133. - № 2. -С. 175-177.

39. Меныцикова, Е.Б., Шабалина, И.Г., Зенков, Н.К., Колосова, Н.Г. Генерация активированных кислородных метаболитов митохондриями преждевременно стареющих крыс OXYS // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2002. Т. 133. - № 2. - С. 207-210.

40. Миронова Э.М., Ставицкая Т.В., Шормаз И.Н. /Особенности применения препарата миртикам у больных с центральной инволюционной хориоре-тинальной дистрофией // РМЖ , Клиническая офтальмология, 2003. т. 3, №2, с-56-57.

41. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. //Влияние факторов тимуса на систему циклических нуклеотидов // Вопр. мед. химии. 1992. - Т. 28. - № 4.- С. 114118.

42. Налобнов Ю.В., Егоров Е.А., Ставицкая Т.В./ Влияние препарата миртикам на функциональное состояние сетчатки у больных с центральной инволюционной хориоретинальной дегенерацией. // РМЖ, Клиническая офтальмология, том 4 №1, 2003.

43. Орловская, И., Топоркова, JL, Феофанова, Н., Колосова, Н. Особенности костномозгового гемопоэза у преждевременно стареющих крыс OXYS// Бюлл. эксп. биол. 2007. - Т. 144. - № 4. - С. 96-99.

44. Островский М.А. Молекулярные механизмы действия света на структуры глаза/ЛОшническая физиология зрения.Под ред.проф.А.М.Шамшиновой, 3-е изд.МБН.2006.С. 109-127.

45. Островский М.А.Молекулярные механизмы повреждающего действия света на структуры глаза и системы защиты от такого повреждения// Успехи биологической химии 2005. - Т. 45 . - С. 173-204.

46. Офтальмогериатрия // Под ред. Пучковской Н. А. М.: Медицина, 1992. -С. 149-223.

47. Румянцева Ю.В., Фурсова А.Ж., Колосова Н.Г. Возрастные изменения физико-химических характеристик хрусталиков и катарактогенез у крыс OXYS// Сибирский консилиум. Медико-фармацевтический журнал. -2007. № 7 (62). - С. 230-231.

48. Румянцева Ю.В., Фурсова А.Ж., Федосеева Л.А., Колосова Н.Г. Изменения физико-химических характеристик и экспрессии генов а-криссталинов в хрусталиках крыс OXYS при развитии катаракты // Биохимия, 2008, том 73, вып. 11, с. 1467 1475.

49. Сапрунова В.Б.Ультраструктура митохондрий в условиях окислительного стресса//Москва, 2008, 46 с.200

50. Селицкая Т.И. / Атеросклеротическая центральная хориоретинопатия. -Томск, 1985.-110с.

51. Скулачев, В. Попытка биохимиков атаковать проблему старения: «мега-проект» по проникающим ионам. Первые итоги и перспективы. // Биохимия. 2007. - Т. 72. - № 12. - С. 1700 - 1714.

52. Смолякова Т.П., Лысенко В. С. / Патогенетические подходы к лечению возрастных ЦХРД // Методические рекомендации. Хабаровск, 2000. - 35 с.

53. Соловьева, Н.А., Морозкова, Т.С., Салганик, Р.И. // Генетика. 1975. - Т. 11. -№ 11.-С. 63-71

54. Терёхина Н.А., Петрович Ю.А., Батуева Р.А. и др. / Антиоксиданты слезы и слюны при вирусной инфекции // Биохимическая и лабораторная диагностика, №1, 1998, С. 13-15.

55. Трофимова С.В. / Применение пептидных биорегуляторов при лечении диабетической ретинопатии // Автореф. дисс. канд. мед. наук. СПб., 1999.- 15 с.

56. Трофимова С.В., Максимов И.Б., Нероев В.В. //Регуляторное действие пептидов сетчатки. СПб., «Наука» 2004 -С. 157

57. Тутельян В.А., Княжев В.А., Хотимченко С.А. и др. // Селен в организме человека.- Москва, 2002.

58. Фельдман Т.Б. с соавт.Молекулярое моделирование зрительного пигмента родопсина с точечной м утацией Е181 К,связанной с патогенезом пигментного ретинита./Юфтальмохирургия.-2008.-№1.

59. Фурсова А., Гусаревич, О., Гончар, А., Трофимова, Н., Колосова, Н. Экстракт черники в профилактике макулярной дегенерации и катаракты у преждевременно стареющих крыс OXYS. // Успехи геронтологии. Вып. 16.-2005.-С. 76-79.

60. Фурсова А.Ж., Гусаревич О.Г. Опыт диодной лазеркоагуляции сетчатки в лечении патологии макулярной области// Тезисы V Всероссийского съезда офтальмологов. -2005. С. 404-406.

61. Фурсова А.Ж., Гусаревич О.Г., Гончар A.M., Колосова Н.Г. Опыт использования препарата черники для лечения центральной хориоретинальной дегенерации // Бюлл. СО РАМН. 2007. - №1 (123). - С. 92-96.

62. Фурсова А.Ж., Гусаревич О.Г., Гончар A.M., Трофимова Н.А., Колосова Н.Г. Экстракт черники в профилактике макулярной дегенерации и катаракты у крыс OXYS// Успехи геронтологии. 2005. - Вып. 16.—С. 76-79

63. Фурсова А.Ж., Фенькова О.Г., Гусаревич О.Г., Анализ изменения основных гемодинамических показателей орбиты при различных методах лечения ишемических заболеваний сетчатки и зрительного нерва.//сб.статей под ред. Х.П. Тахчиди, Москва 2006

64. Фурсова. А.Ж., Гусаревич О.Г. Сравнительная эффективность реваскуля-ризирующих операций в лечении дегенеративных изменений сетчат-ки//Тезисы V Всероссийского съезда офтальмологов. -2005. С 346-347.

65. Хавинсон В.Х., Хокканен В.М., Трофимова С.В. / Пептидные биорегуляторы в лечении диабетической ретинопатии

66. Хавинсон В.Х.,Анисимов В.Н. //Пептидные биорегуляторы и старение. -СПб., «Наука» 2003 120с.

67. Шведова А.А. / Роль процессов ПОЛ в повреждении мембранных структур сетчатки и использование антиоксидантов как средств химической профилактики лечения глаз.- Томск.- 1986.

68. Щеглова Т.В., Амстиславекая Т.Г., Колосова Н.Г. /Особенности метаболизма серотонина в структурах мозга преждевременно стареющих крыс OXYS// Нейрохимия. 2003. - Т. 20. - № 1. - С. 261-262.

69. Alastair J,J,. Wood M,D-. Age-related macular degeneration//Drug therapy.2008.-№3.-P.-483-487

70. Algvere, P., Seregard, S. Drusen maculopathy: a risk factor for AMD. Can we prevent visual loss? // Acta Ophthalmol Scand. 2003. - N 81. - P. 427 -429.

71. Allikmets, R., Singh, N., Sun, H., Shroyer, N.F., Hutchinson, A., Chidambaram,

72. A., et al. A photoreceptor cell-specific ATPbinding transporter gene (ABCR) is mutated in recessive Stargardt macular dystrophy. // Nat. Genet. 1997. - N 15.-P. 236-246.

73. Amol, D., Kuppermann, D. Wet age-related macular degeneration. // Advanced

74. Drug Delivery Reviews. 2005. - N 57.

75. Anderson, D., Mullins, R., Hageman, G., Johnson, L. A role for local inflammation in the formation of drusen in the aging eye. // Am J Ophthalmol. 2002. -N 134.-P. 411-431.

76. AntonenkoYN. Mitochondria-Targeted Plastoquinone Derivatives as Tools to Interrupt Execution of the Aging Program. 1. Cationic Plastoquinone Derivatives: Synthesis and in vitro Studies. Biochemistry (Mosc). 2008 Dec;73(12): 1273-87.

77. AREDS Research Group. Potential Public Health Impact of Age-Related Eye

78. Disease Study Results, AREDS Report No.ll; Arch Ophthalmolology 2003; 121:1621-1624 99

79. Augood С A, Vingerling JR, de Jong PT,Chakravarthy U, Seland J, Soubrane

80. G,Tomazzoli L, Topouzis F, Bentham G, RahuM, Vioque J, Young IS, Fletcher AE Prevalence of age-related maculopathy inolder Europeans: the European Eye Study

81. Azarian, S., Travis, G. The photoreceptor rim protein is an ABC transporter encoded by the gene for recessive Stargardt's disease (ABCR). // FEBS Lett. -1997. N 409. - P. 247-252.

82. Babizhayev, M.A., Deyev, A.I. Lens opacity induced by lipid peroxidation products as a model of cataract associated with retinal disease Biochim Biophys Acta. 1989. - V.1004. - №1. p.124-133.

83. Barron, M., Johnson, M., Andrews, R., Clarke, M., Griffiths, P., Bristow, E., He,1., Durham, S., Turnbull, D. Mitochondrial abnormalities in ageing macular photoreceptors. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2001. - N 42. - P. 3016-3022.

84. Beatty, S., Murray, I., Henson, D., Carden, D., Koh, H., Boulton, M. Macular pigment and risk for age-related macular degeneration in subjects from a Northern European population. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2001. - N 42. -P. 439-446.

85. Becerra, S. Focus on molecules: Pigment epithelium-derived factor (PEDF). // Experimental Eye Research. 2006. - V. 82. - N 5. - P. 739-740.

86. Benedek, G. B. Cataract as a5 Protein Condensation Disease // Investigative Ophthalmology & Visual Science. 1997. - V. 38.- № 10. P. 1911-1921.

87. Bicknell IR, Darrow R, Barsalou L, et al. Alterations in retinal rod outer segment fatty acids and light-damage susceptibility in P23H rats. Mol Vis 2002;8:333-40

88. Binder, S., Stanzel, V., Krebs, I., Glittenberg, C. Transplantation of the RPE in AMD. // Prog Retin Eye Res. 2007. - N 5. - P. 516-54.

89. Bobko, A., Sergeeva, S., Bagryanskaya,1 E., Markel, A., Khramtsov, V.,

90. Reznikov, V., Kolosova, N. 19F NMR measurements of NO production in hy206pertensive ISIAH and OXYS rats. // Biochem Biophys Res Commun. 2005. -N330(2).-P. 367-70.

91. Bradford, M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle ofprotein-dye binding. // Anal. Biochem. 1976. - №72. - P. 248-254.

92. Brown, H.G., Poppas, J.D., Ireland, M.E., Kuszak, J.R. ltrastructural, Biochemical and Immunologic Evidence of Receptor-Mediated Endocytosis in the Crystalline Lens. // Investigative Ophthalmology & Visual Science. 1990. -№31.-P. 138-143.

93. Cell J Ando A, Yang A, Mori K, Yamada H, Yamada E, Takahashi K, Sailcia J, Kim M, Melia M, Fishman M, Huang P, Campochiaro PA. Nitric oxide is proangiogenic in the retina and choroid // Physiol. 2002 Vol. 191(1). P. 116124

94. Chang, В., Wang, X., Hawes, N.L., Ojakian, R., Davisson, M.T., Lo, W., Gong, H. A Gja8 (Cx50) point mutation causes an alteration of a-3 connexin (Cx46) in semi-dominant cataracts of Lop 10 mice. // Human Molecular Genetics. -2002. -№ 11. P. 507-513.

95. Chen, J., Connor, K., Smith, L. Overstaying their welcome: defective CX3CR1 microglia eyed in macular degeneration. // J Clin Invest. 2007. - N 117(10). -P. 2758-2762.

96. Chong, E., Wong, Т., Kreis, A., Simpson, J., Guymer, R. Dietary antioxidants and primary prevention of age related macular degeneration: systematic review and meta-analysis. // BMJ. 2007. -N 335(7623). - электронная публикация.

97. Christopher P. Changes in Growth Factor Expression in Normal Aging of the Rat Retina.Exp Eye Res,2008,Desember 86(4), C.817-824

98. Churchill, A., Carter, J., Lovell, H., et al. VEGF polymorphisms are associated with neovascular age-related macular degeneration. // Hum Mol Genet. 2006. -N 15.-P. 2955-2961.

99. Chylack, L., Khu, P. M. Subjective classification andobjective quantification of human cataract. // In Principles and Practice of Ophthalmology. 1994. - № 1. -P. 591-602

100. Clemons, Т., Milton, R., Klein, R., et al. Risk factors for the incidence of Advanced Age-Related Macular Degeneration in the Age-Related Eye Disease Study (AREDS) AREDS report no. 19. // Ophthalmology. 2005. -N 112. - P. 533-539.

101. Cobb, B.A., Petrash, J.M. Characterization of a-Crystallin-Plasma Membrane Binding // J. Biol. Chem. 2000. - № 275. - P.6664-6672.

102. Crabb, J., Miyagi, M., Gu, X., Shadrach, K., West, K., Sakeguchi, H., Kamei, M., et al. Drusen proteome analysis: an approach to the etiology of age-related macular degeneration. // Proc Nat Acad Sci USA. 2002. - N 99. - P. 1468214687.

103. Cruickshanks, K., Klein, R., Klein, B. Sunlight and agerelated macular degeneration: the Beaver Dam Eye Study. // Arch. Ophthalmol. 1993. - N 111. - P. 514-518.

104. Cunningham LL and Gonzalez-Fernandez F. Internalization of interphotorecep-tor retinoid-binding protein by the Xenopus retinal pigment epithelium. J Comp Neurol 466: 331-342, 2003

105. Cunningham, E.T. World blindness-no end in sight // Br. J. Ophthalmol. 2001. -№85.-P. 253-254.

106. Das, A, McGuire, P. Retinal and choroidal angiogenesis: pathophysiology and strategies for inhibition. // Prog Retin Eye Res. 2003. - N 22. - P. 721-748.

107. Delcourt, C., Cristol, J.P., Tessier, F., Leger, C.L., Michel, F., Papoz, L. Risk factors for cortical, nuclear, and posterior subcapsular cataracts. // Am. J. Epidemiol. 2000. - № 151. - P.497-504.

108. Derham, B.K., Handing, K.J. Effects of modifications of a-crystallin on its chaperone and other properties // Biochem. J. 2002. - № 364. - P. 711-717.

109. Dillon, J:, Zheng, L., Merriam, J.C., Gaillard, E.R. The optical properties of the anterior segment of the eye: implications for cortical cataract. // Exp. Eye Res. 1999.-№68. P. 785-791.

110. Ding X., Patel M. Molecular patology age- macular degeneration of //Progress in Retinal and Eye Research.-2008- № 30. P. 1-18.

111. Donoso, L, Kim, D., Frost, A., Callahan, A., Hageman, G. The Role of Inflammation in the Pathogenesis of Age-related Macular Degeneration. // Survey of ophtalmology. 2006. -N51.

112. Drazins, P., Mitchell, P., Heller, R. Sun exposure and agerelated macular degeneration: an Australian case-control study. // Ophthalmology. 1997. - N 104.-P. 770-776.

113. Edwards, A., Ritter, I., Abel, K., Manning, A., Panhuysen, C., Farrer, L. Complement factor H polymorphism and age-related macular degeneration. // Science. 2005. - N 308. - P. 421-^424.

114. Ehrlich R, Harris A, Kheradiya NS, Winston DM, Ciulla ТА, Wirostko B. Age-related macular degeneration and the aging eye // Clin Interv Aging. 2008;3(3):473-82).

115. Evans, J. Risk factors for age-related macular degeneration. // Prog Retin Eye Res.-2001.-N20.-P. 227-253.

116. Feher J.et al. Mitoxondrial alterations of retinal pigment epithelium in age-related macular degeneration //Neurobiology of aging .-2006. № 6,P.983-993.

117. Feher, J., Kovacs, I., Artico, M., Cavallotti, C., Papale, A., Balacco, G. Mitochondrial alterations of retinal pigment epithelium in age-related macular degeneration. // Neurobiol Aging. 2006. - N 27(7). - P. 983-93.

118. Ferrara N.et al. The biology of VEGF and its receptors// Nat.Med.-2003- № 9. P.669-676.

119. Ferrara, N. Vascular endothelial growth factor: molecular and biological aspects. // Curr. Top. Microbiol. Immunol. 1999. -N 237. - P. 1-30.

120. Ferrer, V., Gasca, E., Sastre, J., Pallardo, F.V. Age-related changes in glutathione synthesis in the eye lensJose // Biochem. J. 1990. - № 269. - P. 531534.

121. Ferris, F., Fine, S., Hyman, L. Age-related macular degeneration and blindness due to neovascular maculopathy. // Arch Ophthalmol. 1984. - N 102. - P. 1640-1642.

122. Fischbarg, J., Diecke, F., Kuang, K., Yu, В., Kang, F., Iserovich, P., Li, Y., Rosskothen, H., Koniarek, J.P Transport of fluid by lens epithelium // Am. J. Physiol. Cell. 1999. -№ 276. - P. 548-557.

123. Friedman, D., Colmain, В., Munoz, В., et al. Diseases prevalence research group. Prevalence of age-related macular degeneration in the united states. // Arch ophthalmol. 2004. - N 122(4). - P. 564-572.

124. Fukui H, Moraes CT. Mechanisms of formation and accumulation of mitochondrial DNA deletions in aging neurons. // Hum Mol Genet. 2008 Dec.N 18.i1. P.124-129

125. Fuh, G., Li, В., Crowley, C., Cunningham, В., Wells, J.A. Requirements for binding and signaling of the kinase domain receptor for vascular endothelial growth factor. // J. Biol. Chem. 1998. - N 273. - P. 11197-11204.

126. Gaillard, E.R., Zheng, L., Merriam, J.C., Dillon, J. Age-related changes in the absorption characteristics of the primate lens. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2000. V.41.P.1454-1459.

127. Gale, C., Hall, N., Phillips, D., Martyn, C. Lutein and zeaxanthin status and risk of age-related macular degeneration. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2003. -N44.-P. 2461-2465.

128. Girottia, A.W. Lipid hydroperoxide generation, turnover, and effector action in biological systems // The Journal of Lipid Research. 1998. - № 39. - P. 15291542.

129. Gold, В., Merriam, J., Zernant, J., Hancox, L., Taiber, A., Gehrs, K. et al. Variation in factor В (BF) and complement component 2 (C2) genes is associated with age-related macular degeneration. // Nat Genet. 2006. - N 38(4). -P. 458-462.

130. Gotoh, N., Yamada, R., Hiratani, H., Renault, V., Kuroiwa, S., Monet, M. et al. No association between complement factor H gene polymorphism and exudative age-related macular degeneration in Japanese. // Hum Genet. 2006. - N 120.-P. 1-5.

131. Goverdhan, S., Howell, M., Mullins, R., Osmond, C., Hodgkins, P., Self, J. etal. Association of HLA Class I and Class II polymorphisms with age-related211macular degeneration. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2005. - N 46(5). - P. 1726-1734.

132. Graw J. Congenital hereditary cataract. //Int. J. Dev. Biol. 2004. - № 48(8-9). -P. 1031-1044.

133. Grisanti S.,Tatar O. The role of vascular endotehelial growth factor and other endogenous interplayers in age-macular degenerati on//Progress in Retinal and Eye Research.-2008.- № 27. P.372-390.

134. Haddad, S., Chen, C., Santangelo, S., Seddon, J. The genetics of age-related macular degeneration: a review of progress to date. // Surv Ophthalmol. — 2006. -N51(4).-P. 316-363.

135. Haines, J., Hauser, M., Schmidt, S., Scott, W., Olson, L., Gallins, P. et al. Complement factor H variant increases the risk of age-related macular degeneration. //Science. -2005. -N 308. P. 419-421.

136. Hammond, C.J., Duncan, D.D., Snieder, H., Lange, M., West, S.K., Spector, T.D., Gilbert, C.E. The Heritability of Age-Related Cortical Cataract: The Twin Eye Study // Investigative Ophthalmology and Visual Science. 2001. - № 42. -P.601-605.

137. Hammond, С.J., Snieder, H., Spector, T.D., Gilbert, C.E. Genetic and environmental factors in age-related nuclear cataracts in monozygotic and dizygotic twins. //New England Journal of Medicine. 2000. - № 342. - P. 1786-1790.

138. Harman, D., The aging process. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. - N 78. - P. 7124-7128. (99) цитируется no (Binder et.al.,2007).

139. Hendrik, P., Scholl, M., Charbel P., Keilhauer, C., Holz, F., Weber, B. An update on the genetics of age-related macular degeneration. // Molecular Vision. -2007.-N 13.-P. 196-205.

140. Hiratsuka, S., Minowa, O., Kuno, J., Noda, Т., Shibuya, M. Flt-1 lacking the tyrosine kinase domain is sufficient for normal development and angiogenesis in mice. // Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1998. -N 95. - P. 9349-9354.

141. Ho L, Boekhoorn SS, Liana, van Duijn CM, Uitterlinden AG, Hofman A, de Jong PT, Stijnen T, Vingerling JR. Cataract surgery and the risk of aging macula disorder: the rotterdam study //Invest Ophthalmol Vis Sci. 2008ю - Vol. 49(11).-P. 4795-800)

142. Ho, Y.S., Xiong, Y., Ma, W., Specto,r A. Mice lacking catalase develop normally but show differential sensitivity to oxidant tissue injury. // J. Biol. Chem. 2004. № 279 - P. 32804-32812.

143. Hodge, W.J., Whitcher, J.P., Satariano, W. Risk Factors for Age-related Cataracts. // Epidemiologic reviews. 2000. - V. 17. - № 22. - P. 336-346.

144. Holz, F., Sheraidah, G., Pauleikhoff, D., Bird, A.C. Analysis of lipid deposits extracted from human macular and peripheral Bruch's membrane. // Arch. Ophthalmol. 1994. - N 112. - P. 402-406.

145. Horwitz, J. a-crystallin can function as a molecular chaperone. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. - № 89. - P. 10449-10453.

146. Hughes, S; Gardiner, T; Ни, P; Baxter, L; Rosinova, E; Chan-Ling, T. Altered pericyte-endothelial relations in the rat retina during aging: implications for vessel stability. Neurobiol Aging. 2006;27(12): 1838-47

147. Inomata, M., Hayashi, M., Shumiya, S., Kawashima, S., Ito Y. Aminogua-nidine-treatment results in the inhibition of lens opacification and calpain-mediated proteolysis in Shumiya cataract rats (SCR). // J. Biochem. 2000. - № 128(5). -P.771-778.

148. Inomata, M., Nomura, K., Takehana, M., Saido, T.C., Kawashima, S., Shumiya, S. Evidence for the involvement of calpain in cataractogenesis in Shumiya cataract rat (SCR). // Biochim Biophys Acta. 1997. - № 28. - P.ll-23.

149. Jain, N.K., Rawal, U.M. Influence of UV-irradiation on enzymes in mouse ocular lens: in vitro studies. // Indian. J. Ophthalmol. 1999. - № 47(1). - P.25-29.

150. Johnson EJ et al., Nutritional Manipulation of Primate Retinas, III: Effects of Lutein or Zeaxanthin Supplementation on Adipose Tissue and Retina of Xan-thophyll-Free Monkeys. Investigative Ophthalmology & Visual Science, February 2005, Vol. 46, No. 2

151. Jones, В., Marc, R. Retinal remodeling during retinal degeneration. // Experimental Eye Research. 2005. -N 81. - P. 123-137.

152. Kamei, A., Matsuura, N. Analysis of Crystallin-Crystallin Interactions by Surface Plasmon Resonance. // Biol. Pharm. Bull. 2002. - № 25(5). - P. 611— 615.

153. Kannabiran, C., Balasubramanian, D. Molecular genetics of cataract. // Indian J Ophthalmol. 2000. - № 48. - P.5-13.

154. Kantorow, M, Horwitz, J, Carper, D. Up-regulation of osteonectin/SPARC in age-related cataractous human lens epithelia. // Mol. Vis. 1998. - № 4. P. 4753.

155. Kelley, M.J., David, L.L., Iwasaki, N., Wright, J., Shearer, T.R. Alpha-Crystallin chaperone activity is reduced by calpain II in vitro and in selenite cataract// J. Biol. Chem. 1997. - № 268. - P. 18844-18849.

156. Kelso, G., Porteous, C., Hughes, G., Ledgerwood, E., Gane, A., Smith, R., Murphy, R. Prevention of mitochondrial oxidative damage using targeted antioxidants. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2002. -N959. - P. 263-274.

157. Kelz, M.B., Kuszak, J.R., Yang, Y. DeltaFosB-induced cataract. // Invest Ophthalmol. Vis. Sci. 2004. - № 41.- P.3523-3538.

158. Kiel, J., Chen, S. Contusion injuries and their ocular effects. // Clin. Exp. Op-tom. 2001. - № 84. - P. 19-25.

159. Kijlstra, A., La Heij, E., Hendrikse, F. Immunological factors in the pathogenesis and treatment of age-related macular degeneration. // Ocul Immunol Inflam. -2005.-N13.-P. 3-11.

160. Klaver, C., Kliffen, M., van Duijn, C., Hofman, A., Cruts, M., Grobbee, D., et al. Genetic association of apolipoprotein E with age-related macular degeneration. // Am J Hum Genet. 1998. -N 63(1). - P. 200-206.

161. Klein R et al. The Epidemiology of Age-Related macular Degeneration. //Am J Ophthalmol. 2004; 137:486-495.

162. Klein R et. The association of cataract and cataract surgery with the long-term incidence of age-related maculopathy: the Beaver Dam eye study.//Arch Ophthalmol. 2002 Nov; 120(11): 1551-8

163. Klein, M., Francis, P. Genetics of age-related macular degeneration. // Ophthalmol Clin North Am. 2003. - N 16(4). - P. 567-574.

164. Klein, R., Klein, В., Linton, R., Demets, D. The Beaver Dam Eye Study: the relation of age-related maculopathy to smoking. // Am. J. Epidemiol. 1993. - N 137.-P. 190-200.

165. Klein, R., Zeiss, C., Chew, E., Tsai, J., Sackler, R., Haynes, C., et al. Complement factor H polymorphism in age-related macular degeneration. // Science. -2005. N 308. - P. 385-389.

166. Koh, H. et al. Plasma and macular responses to lutein supplement in subjects with and without age-related maculopathy: a pilot study. Experimental Eye Research 79 (2004) 21-27

167. Kolosova N.G, Fursova A.Z, Stefanova N.A. Dietary supplementation with bilberry extract prevents macular degeneration and cataracts in senescent accelerated OXYS rats // Planta Medica. 2008. • Volume 74, p. 288.

168. Kolosova N.G, Fursova A.J., Trofimova N.A., Skulachev V.P. Mitochondria-targeted antioxidant SkQl as therapeutic approach for cataract and retinal dystrophy // 3 Intern. Conference «Basic science for medicine». Novosibirsk. -2007.-P. 33.

169. Kolosova, N., Shcheglova, Т., Sergeeva, S., Loskutova, L. Long-term antioxidant supplementation attenuates oxidative stress markers and cognitive deficits in senescent-accelerated OXYS rats. // Neurobiology of Aging. 2006. - N 27(9).-P. 1289-1297.

170. Korte, G., Reppucci, V., Henkind, P. RPE destruction causes choriocapillary atrophy. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1984. - N 25. - P. 1135-1145.199: Kroemer G.et al. Mitochondrial control of cell death// Nat.Med.-2000- № 6. -P.513-519.

171. Li, H., Grami, V., Marrero, Y., Tang, D., Borchman, D. Human Lens Phospholipid Changes with Age and Cataract Investigative Ophthalmology and Visual Science. 2005. - № 46. - P. 1682-1689.

172. Liu X, Shibata T, Hisaka S, Osawa T. Astaxanthin inhibits reactive oxygen species-mediated cellular toxicity in dopaminergic SH-SY5Y cells via mitochondria-targeted protective mechanism. // Brain Res. 2008 Dec.-P.123-126

173. Liang, F., Godley, В. Oxidative stress-induced mitochondrial DNA damage in human retinal pigment epithelial cells: a possible mechanism for RPE aging and age-related macular degeneration. // Experimental Eye Research. 2003. -N76.-P. 397-403.

174. Liberman, E., Topali, V., Tsofina, L., Jasaitis, A., Skulachev, V. Mechanisms of coupling of oxidative phosphorylation and the membrane potential of mitochondria. //Nature. 1969. -N 222. - P. 1076-1078.

175. Liew SHM et al; Heritability of macular pigment: A twin study. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2005;46(12):4430-6.

176. Lip, P., Blann, A., Hope-Ross, M., Gibson, J., Lip, G. Age-related macular degeneration is ssociated with increased vascular endothelial growth factor, hemorhe'ology and endothelial dysfunction. // Ophthalmology. 2001. - N 108.-P. 705-710.

177. MacDonald, I. Genetic aspects of age-related macular degeneration. // Can J Ophthalmol. 2005. - N 40. - P. 288-292.

178. Majji, A., Cao, J., Chang, K., et al. Age-related retinal pigment epithelium and Bruch's membrane degeneration in senescence-accelerated mouse. // Invest Ophthalmol Vis Sci.-2000 .-N 41.-P. 3936-3942.

179. Martin Mc E., Wallace K. B.Calcium Oxalate Monohydrate, a Metabolite of Ethylene Glycol, Is Toxic for Rat Renal Mitochondrial Function Toxicol. Sci., March 1, 2005; 84(1): 195 200

180. Maruyama, Y., Uga, S., Mizuno, A., Sakuma, S Lens development and crystal-lin distribution of the early onset hereditary cataract in the UPL rat. // Jpn. J. Ophthalmol. 1996. - № 40(1). - P. 42-52.

181. Mata, N., Tzekov, R., Liu, X., Weng, J., Birch, D., Travis, G. Delayed dark-adaptation and lipofuscin accumulation in abcr+/ mice: implications for involvement of ABCR in agerelated macular degeneration. // Invest. Ophthalmol.

182. Vis. Sci.-2001.-N42.-P. 1685-1690.218

183. Mathias, R. Т., Rae, J. L., Baldo, G. J. Physiological properties of the normal lens. // Physiol. Rev. 1997. - № 77.- P.21-50.

184. McCarty, C.A., Taylor, H.R. Recent Developments in Vision Research: Light Damage in Cataract // Investigative ophthalmology & visual science. 1996. -№ 37.- P. 1720-1723.

185. Meyers, S. A twin study on age-related macular degeneration. // Trans Am Ophthalmol Soc. 1994. -N 92. - P. 775-843.

186. Meyers, S.,Ostrovsky M.A model of spectral Filteing to reduce Photochemical Damage in age-related macular degeneration// Trans Am Ophthalmol Soc. -2004:-N 102.-P. 83-95.

187. Miesbauer, L.R., Zhou, X., Yang, Z., Yang, Z., Sun, Y., Smith, D.L., Smith, J.B. Post-translational modifications of water-soluble human lens crystallins from young adults // J. Biol. Chem. 1994. - №269. - P. 12494-12502:

188. Mingatto F. E., Rodrigues Т., Pigoso A. A.,. Uyemura S. A The Critical Role-of Mitochondrial Energetic Impairment in the Toxicity of Nimesulide to Hepa-tocytes J. Pharmacol. Exp. Ther., November 1, 2002; 303(2): 601 607

189. Miquel, J. An update on the mitochondrial-DNA mutation hypothesis of cell aging. // Mutation Research. 1992. - N 275. - P. 209-216.

190. Mori, M., Li, G., Abe, I. Lanosterol synthase mutations cause cholesterol deficiency-associated cataracts in the Shumiya cataract rat // The journal of clinical investigation. 2006. - V. 116. - N 2. - P. 395-404.

191. Murphy, M. Development of lipophilic cations as therapies for disorders due to mitochondrial dysfunction. // Expert Opin. Biol. Ther. — 2001. N 1. - P. 753763.

192. Nabekura, Т., Minami, Т., Enomoto, S., Tomohiro, M., Ito, Y., Kitagawa, S. Transport of trace elements in lenses of normal and hereditary cataract UPL rats. //Journal of Environmental Radioactivity. -2001. № 191. - P.227-232.

193. Neroev V.V. et al. Mitochondria-targeted plastoquinone derivative as a tool to interrupt execution of an aging program. 4. Age-related eye disease. SkQ returns vision to blind animals // Biochemistry (Moscow). 2008. - Vol. 73, N. 11.-P. 1641-1654.

194. Nishimoto, H., Uga, S., Miyata, M., Ishikawa, S., Yamashita, K. Morphological study of the cataractous lens of the senescence accelerated mouse. // Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 1993. - № 231(12). - P. 722-728.

195. Nolan J et al. Macular pigment optical density in healthy subjects with and without a confirmed family history of age-related maculopathy. ARVO P. 2967

196. Nolan, Т., Hands, R., Bustin, S. Quantification of mRNA using real-time RT-PCR.//Nature protocols. 2006.-V. 1.-N3.-P. 1560-1581.

197. Noriaki, N., Noriko, Т., Akira, K. and Yoshimasa, I. Involvement of DNase II-Like Acid DNase in the Cataract Formation of the UPL Rat and the Shumiya Cataract Rat // Biological & Pharmaceutical Bulletin. 2006. - V. 29 - № 12 -P.236-248.

198. Nowak, J. Age-related macular degeneration (AMD): pathogenesis and therapy. // Pharmacological Reports. 2006. - N 58. - P. 353-363.

199. Nowak, M., Swietochowska, E., Szapska, В., Marek, В., Wielkoszynski, Т., Koziol, H., et al. The apolipoprotein E polymorphism in age related macular degeneration. // Klin Oczna. 2004. - N 106. - P. 427-428.

200. О'Donovan et al. Percentage body fat and macular pigment optical density. ARVO.- P. 2969.

201. Ohkawa, H., Ohishi, N., Vagi, K. Assay for lipid peroxides in animal tissues bythiobarbituric acid reaction //Analyt. Biochem. 1979. - V.95. - P.351 - 358.220

202. Okafor, M.C., Dean, W.L., Delamere, N.A. Thrombin Inhibits Active Sodium-Potassium Transport In Porcine Lens. // Investigative Ophthalmology and Visual Science. 1999. -№ 40. - P. 2033-2038.

203. Okano, Т., Uga, S., Ishikawa, S., Shumiya, S. Histopathological study of hereditary cataractous lenses in SCR strain rat. // Exp Eye Res. 1993. - № 57(5). - P. 567-576.

204. Olaf Strauss. The Retinal Pigment Epithelium in Visual Function // Physiol. Rev. 85: 845-881,2005

205. Ottonello, S., Forono, C., Carta, A., Petrucco, S. and Maraini, G. Oxidative stress and age-related cataract. // Ophthalmologica. 2000. - № 214. - P. 78-85.

206. Ozaki, H. Hypoxia Inducible Factor- increased in ischemic236. retina:.temporal and Spatial Correlation with VEGF Expression! //I0VS.-1999.-Vol. 40, № 1 P. 183-189

207. Paskowitz D M, LaVaiLM M and J L Duncan Light and inherited retinal degeneration//British Journal of Ophthalmology 2006;90:1060

208. Patel, N., Adewoyin, Т., Chong, N. Age-related macular degeneration: a perspective on genetic studies. // Nature Eye. 2007. - электронная публикация.

209. Pendergrass, W., Penn, P., Possin, D., Wolf, N. Accumulation of DNA, Nuclear and Mitochondrial Debris, and ROS at Sites of Age-Related Cortical Cataract in Mice // Investigative Ophthalmology and Visual Science. 2005. - № 46. -P.4661-4670.

210. Penfold, P., Liew, S., Madigan, M., Provis, J. Modulation of major histocompatibility complex class II expression in retinas with age-related macular degeneration. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 1997. - N 38(10). - P. 2125-2133.

211. Piehl, L., Capania, F., Facorro, G., Lopez, E., Rubin de Celis, E., Hagerb, P., Coirini, H., Lopez-Gosta, J. Nitric oxide increases in the rat retina after continuous illumination. // Brain Res. 2007. - N 21 - P. 1156;

212. Ponce,- A., Sorensen, C., Takemoto, L. Role of short-range protein interactions in lens opacifications // Mol Vis. 2006. - № 12. - P. 879-884.

213. Rakoczy P,. Meaghan J,. Yu, S., Chang, В., Heckenlively, J. Mouse models of age-related macular degeneration. // Experimental Eye Research- 2006. - N 82. - P. 741-752. (76)

214. Ramon E, del Valle LJ, Garriga P. Unusual thermal and conformational properties of the rhodopsin congenital night blindness mutant Thr-94-Jle. J' Biol Chem 2003;278:6427-32.

215. Ramrattan, R., van der Schaft, Т., Mooy, C., de Bruijn, W., Mulder, P., de Jong, P. Morphometric analysis of Bruch's membrane, the choriocapillaris, and the choroid in aging. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1994. - N 35. - P. 28572864.

216. Rat Genome. Inbred Strains of Rats. 1996. -V.2. - N 2. - P.52-54.

217. Rathbun, W.B., Schmidt, A.J., Holleschau, A.M: Activity loss of glutathione synthesis enzymes associated with human subcapsular cataract. // Invest. Ophthalmol. Vis Sci. 1993. - № 34. P. 2049-2054.

218. Reddy, M.A., Francis, P.J., Berry, V., Bhattacharya, S.S., Moore A.T. Molecular genetic basis of inherited cataract and associated phenotypes. // Surv Ophthalmol. 2004. -№ 49. - Pi 300-315.

219. Reddy, V.N., Giblin, F.J., Lin, L., Dang, L., Unakar, N.J., Musch, D.C., Boyle,

220. D.L., Takemoto, L.J., Ho, Y., Knoernschild, Т., Jueneman; A., Lutjen-Drecoll,222

221. E. Glutathione Peroxidase-1 Deficiency Leads to Increased Nuclear Light Scattering, Membrane Damage, and Cataract Formation in Gene-Knockout Mice. // Investigative Ophthalmology and Visual Science. 2001. - № 42. - P.3247-3255.

222. Reddy, V.N., Glutathione and its function in the lens the overview. // Exp. Eye. Res. - 1990. - № 150. - P. 771-778.

223. Robman,' L., Taylor, H., External factors in the development of cataract // Exp. Eye. Res. 2005. - № 19. - P. 1074-1082.

224. Rosenfeld, P., Brown, D., Heier, J., et al. Ranibizumab for neovascular age-related macular degeneration. // N Engl J Med. 2006. - N 355. - P. 14191431.

225. Scatena R.et al The role of mitochondria in pharmacotoxicology: a reevaluation of an old, newly emerging topic Am J Physiol Cell Physiol, July 1, 2007; 293(1): C12-C21.

226. Schaumberg, D., Hankinson, S., Guo, Q., Rimm, E., Hunter, D. A prospectivestudy of 2 major age-related macular degeneration susceptibility alleles and in223teractions with modifiable risk factors. // JAMA. 2007. - N 297(4). - P. 401402.

227. Schon EA et al- Neuronal degeneration and mitochondrial dysfunction in age-related macular degeneration //Jdimlnvest. -2003 111 ,P. 176-188.

228. Schrader, W. Age-related macular degeneration: a socioeconomic time bomb in our aging society. // Ophthalmologe. 2006. - N 103(9). - P. 742-748.

229. Shaban H.et al.Phosatidylglycerol potently protects human retinal pigment epithelial, cells against apoptosis induced by A2E ,a compound suspected to cause in age-relatedmacular degeneration//Exp Eye Research,2002,№j75;P;99-108.

230. Shalaby, F. et al. Failure of blood-island formation and vasculogenesis in Flk-1 -deficient mice. // Nature. 1995. N 376. - P. 62—66.

231. Shang, F., Nowell, T. Jr., Gong, X., Smith, D.E., Dallal, G.E., Khu, P., Taylor, A. Sex-linked differences in cataract progression in Emory mice. // Exp Eye Res. 2002. - V. 5. - № 1. - P.109-111.

232. University of Oulu, Oulu, Finland. 1999.224

233. Sivaprasad, S., Chong, N. The complement system and age-related macular degeneration. // Eye. 2006. - N 20(8). - P. 867-872.

234. Smith, T. Age related macular degeneration. // Australian Family Physician. -2007. V. 36.-N. 5.

235. Smith, W., Assink, J., Klein, R., et al. Risk factors for age-related macular degeneration: pooled findings from three continents. // Ophthalmology. 2001. -N 108.-P. 697-704.

236. Smith, W., Mitchell, P. Family history and age-related maculopathy: the Blue Mountains Eye Study. // Aust N Z J Ophthalmol. 1998. - N 26(3). - P. 203206.

237. Smith, W., Mitchell, P., Leeder, S. Smoking and age-related maculopathy: the Blue Mountain Eye Study. // Arch. Ophthalmol. 1996. - N 114. - P. 15181523

238. Smith, W. and Steinle S. Changes in Growth Factor Expression in Normal Aging of the Rat Retina // Exp Eye Res. 2007 December; 85(6): 817-824.

239. Snytnikova OA, Fursova AZh, Chernyak EI, Vasiliev VG, Morozov SV, Kolosova NG, Tsentalovich YP. Deaminated UV filter 3-hydroxykynurenine O-beta-D-glucoside is found in cataractous human lenses. Exp Eye Res. 2008 Jun;86(6):951-6.

240. Sparrow, J., Boulton, M. RPE lipofiiscin and its role in retinal pathobiology. // Exp Eye Res. 2005. - N 80. - P. 595-606.

241. Spector, A. Oxidative stress-induced cataract: mechanism of action. // FASEB J.- 1995.-№ 9.-P. 1173-1182.

242. Spector, A., Li, D., Ma, W., Sun, F., Pavlidis, P. Differential Amplification of Gene Expression in Lens Cell Lines Conditioned to Survive Peroxide Stress. // Investigative Ophthalmology and Visual Science. 2002. - № 43.- P. 32513264.

243. Srivastava, P.O., Kirk, M.C., Srivastava, K. Characterization of Covalent Mul-timers of Crystallins in Aging Human Lenses. // J. Biol. Chem. 2004. - № 279. - P. 10901-10909.

244. Steinle, J., Sharma, S., Chin, V. Normal aging involves altered expression of growth factors in the rat choroid. // Gerontol J A Biol Sci Med Sci. 2008 - N 63(2)-P. 135-40.

245. Strauss, O. The retinal pigment epithelium in visual function. // Physiol rev. -2005.-N85.-P. 845-881.

246. Sun, Т., Das, B.K., Liang, J.J-N. Conformational and Functional Differences between Recombinant Human Lens aA- and aB-Crystallin. // J. Biol. Chem. -1997. № 272. - P. 6220-6225.

247. Szeto, H/ H. Development of mitochondria-targeted aromatic-cationic peptides for neurodegenerative diseases.//Ann N Y Acad Sci. 2008 Dec; 1147.P.-112-21.

248. Takikawa, O., Tamantha, K., Little'john, Т.К., Truscott, R.J. Indoleamine 2,3-dioxygenase in the human lens, the first enzyme in the synthesis of UV filters. // Exp. Eye Res. 2001. - № 72. P. 271-277.

249. Taylor, A., Moeller, S. Fat cataract. // Am. J. Clin. Nutr. 2000. - № 72. - P. 1417-1418.

250. Taylor, H.R., Keeffe, J.E. World view World blindness: a 21st century perspective // Br. J. Ophthalmol. 2001. - № 85. - P. 261-266.

251. Taylor, V.L., Al-Ghoul, K.J., Lane, C.W., Davis, V.A., Kuszak, J.R., Costello, M.J. Morphology of the Normal Human Lens // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. -1996.-№37. P. 1396-1410.

252. Toescu EC Age-related structural and functional changes of brain mitochondria. //Cell Calcium ,2006, № 28,P.329-338.

253. Tomohiro, M., Maruyama, Y., Yazawa, K., Shinzawa, S., Mizuno, A.-The UPL rat: a new model for hereditary cataracts with two cataract formation types. // Exp Eye Res. 1993. - № 57. - P. 507-510.

254. Tong, J., Yu-Feng, Y. Contribution of VEGF and PEDF to choroidal angio-genesis: A need for balanced expressions. // Clinical Biochemistry. 2006. - V. 39.-I. 3.-P. 267-276.

255. Tsai, D., Charng, M., Lee, F., Hsu, W., Chen, S. Different plasma levels of vascular endothelial growth factor and nitric oxide between patients with choroidal and retinal neovascularization. // Ophthalmologica. 2006. - N 220. - P. 246251.

256. Tuo, J., Smith, В., Bojanowski, C., Meleth, A., Geiy, I., Csaky, K., et al. The involvement of sequence variation and expression of CX3CR1 in the pathogenesis of age-related macular degeneration. // Faseb. 2004. - N 18(11). - P. 1297-1299.

257. Vasavada, A.R., Thampi, P., Yadav, S., Rawal, U.M. Acid phosphatase and lipid peroxidation in human cataractous lens epithelium. // Indian J Ophthalmol. 1993. -№41. - P. 173-175.

258. Walsh N, van Driel D, Lee D, et al. Multiple vulnerability of photoreceptors to mesopic ambient light in the P23H transgenic rat. Brain Res 2004; 1013:194203

259. Waltenberger, J., Claesson-Welsh, L., Siegbahn, A., Shibuya, M., Heldin, C.H. Different signal transduction properties of KDR and Fltl, two receptors for vascular endothelial growth factor. // J. Biol. Chem. 1994. - N 269. -P. 26988-26995.

260. Wang, A., Lukas, Т., Yuan, M., Neufeld, A. Increased mitochondrial DNA damage and down-regulation of DNA repair enzymes in aged rodent retinal pigment epithelium and choroid. // Mol Vis. 2008. - N 14. - P. 644-651.

261. Wang, F., Rendahl, K., Manning, W., Quiroz, D., Coyne, M., Miller, S. AAV-mediated expression of vascular endothelial growth factor induces choroidal neovascularization in rat. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003. - N 44(2). - P. 781-90.

262. Wang, K., Spector, A. a-Crystallin Can Act As a Chaperone Under Conditions of Oxidative Stress. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1995. - № 36. - P. 311321.

263. Warburton, S., Southwick, K., Hardman, R., Secrest, A., Grow, R., Xin, H., Wooley, A., et al. Examining the proteins of functional retinal lip о fuse in using analysis as a guide for understanding its origin. // Mol Vis. 2005. - N 11. - P. 1122-1134.

264. Williams, D.L. Oxidation, antioxidants and cataract formation: a literature review. // Veterinary Ophthalmology. 2006. - № 9. - P.292-298.

265. Winkler, Oxidative stress in age-related macular degeneration//Exp Eye Research, 2006, № 75,P.99-108.

266. Witmer, A., Vrensen, G., Van Noorden, C., Schlingemann, R. Vascular endothelial growth factors and angiogenesis in eye disease. // Retinal and Eye Research. 2003.-N 22.

267. Wang, F., Rendahl, K., Manning, W., Quiroz, D., Coyne, M., Miller, S. AAV-mediated expression of vascular endothelial growth factor induces choroidal neovascularization in rat. // Invest Ophthalmol Vis Sci. 2003. - N 44(2). - P.

268. World Health Organization. The world health report. 2006. Geneva: WHO, 1998

269. World Health Organization. The world health report. 2008. Geneva: WHO, 2008

Оглавление диссертации Фурсова, Анжелла Жановна :: 2009 :: Новосибирск

Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Фурсова, Анжелла Жановна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Фурсова, Анжелла Жановна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций