Автореферат и диссертация по медицине (14.00.43) на тему:Характеристика резистентности эритроцитарных мембран при бронхиальной астме

Министерство здравоохранения Российской Федерации

Государственный научный центр пульмонологии

На правах рукописи

_ 9 ИЮП 1997

УДК 616.248-07:612. И1-053

НЕСТЕРОВИЧ Ирина Ивановна

ХАРАКТЕРИСТИКА РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЭРИТРОЦИТ АРНЫХ МЕМБРАН ПРИ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ

14.00.43 - Пульмонология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург - 1997

Работа выполнена на кафедре госпитальной терапии имени академика М.В.Черноруцкого Санкт-Петербургского Государственного медицинского университета имени академика И.П.Павлова

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор В.Н.Минеев

Официальные оппоненты: заслуженный деятель науки России,

доктор медицинских наук, профессор А.Н.Кокосов

доктор медицинских наук, профессор А.И.Кирсанов

Ведущая организация: Военно-медицинская академия

Защита диссертации состоится "__"___ 1997 г.

в____часов па заседании специализированного

Совета Д.074.15.01 при Государственном научном центре пульмонологии МЗ РФ (197089, Санкт-Петербург, ул.Рентгена, 12).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного научного центра пульмонологии МЗ РФ.

Автореферат разослан "_"__ 1997 г.

Ученый секретарь специализированного Совета доктор медицинских наук,

профессор Н.А.Богданов

Актуальность темы. Бронхиальная асгма (БА) является одной из важнейших проблем пульмонологии, что связано со значительной распространенностью заболевания, причем результаты эпидемиологических исследований

свидетельствуют, к сожалению, об увеличении заболеваемости (Путов Н.В., Федосеев Г.Б., 1984; Чучалин А.Г., 1985; Величковский Б.Т., 1991; Федосеев Г.Б., 1996).

Вызывает обоснованную тревогу большой процент инвалидности, включая смертность болных БА, а также размеры экономического ущерба, связанного с заболеваемостью БА (Богданов Н.А. и др., 1989; Федосеев Г.Б., 1996).

Повышение эффективности лечения и профилактики БА связывается с необходимостью глубокого знания патогенетических особенностей заболевания. При этом центральным дефектом, составляющим основу патогенеза, как предполагают (Федосеев Г.Б., Хлопотова Г.П., 1988; Минеев В.Н., 1993), является изменение функций клеточного мембрано-рецепторного аппарата.

Это вполне естественно, ибо каждая клетка находится под постоянным воздействием потока разнообразных информационных сигналов (аллергенов, микроорганизмов, гормонов, биологически активных веществ), причем эритроциты, наряду с легкими и кожей, первыми воспринимают информацию о меняющейся окружающей среде (Ольшанский АЛ. и др., 1984).

В целом, регуляция функциональной активности клеток, участвующих в патогенезе БА, сводится к созданию в клетке баланса так называемых вторичных мессенджеров, таких как цАМФ, цГМФ, Са++, инозиттрифосфат, диацилглицерин. При этом существуют две основные сигнальные системы

(аденилатциклазная и фосфоинозитидная), активация которых ведет К накоплению в клетке вторичных мессенджеров.

Несмотря на важную роль регулирующего влияния двух функционально противоположных систем: адренергической (Жихарев С.С., 1984; Минеев В.Н., 1993) и гистаминергической (Сыромятникова Н.В., Гончарова В.А., Котенко Т.В., 1987),

имеется неполная информация об . изменениях клеточного мембрано-рецепторного комплекса при его модуляции адренершческими и, особенно, гистаминергическими агентами.

Кроме этого, практически отсутствуют сведения об особенностях этих изменений при моделировании таких патогенетически важных факторов при БА, как перекисное воздействие, охлаждение и гиперосмолярное воздействие.

Цель исследования: дать комплексную характеристику резистентности эритроцитов в условиях модулирующего влияния адренершческими и гистаминергическими агентами в патогенетических и клинических аспектах при БА.

Основные задачи исследования:

1. Исследовать особенности резистентности эритроцитов по отношению к перекисному воздействию в условиях модуляции адренершческими (адреноагонистом-адреналином, антагонистом - обзиданом) и гистаминергическими (агонистом - гистамином, антагонистом Нл-рецепторов - димедролом, Нг-рецепторов - гистодилом) аг ентами.

2. Изучить резистентность эритроцитов по отношению к гиперосмолярному воздействию при низкой температуре в условиях модуляции адренершческими и гистаминергическими агентами.

'3. Исследовать особенности резистентности эритроцитов при кислотном воздействии.

4. Выявить маркерные для атопического состояния особенности резистентности эритроцитов и рекомендовать их для дифференциальной диагностики первичных клинико-патогенетических вариантов БА, а также для диагностики атопического состояния на этапе предболезни (предастма) и на доклиническом этапе.

Научная новизна исследования:

Впервые применен комплексный подход к оценке резистентности эритроцитов как по отношению к различным воздействиям (перекисному, низкотемпературному

гиперосмолярному, кислотному), так по отношению к модулирующим агентам (адренергическим,

гистамйнергическим).

Впервые изучена резистентность эритроцитов по отношению к низкотемпературному гиперосмолярному воздействию в условиях модуляции гистаминергическими агентами и выявлены изменения резистентности, зависящие от клинико-патогенетического варианта бронхиальной астмы, этапов ее развития, тяжести течения и фазы заболевания.

Впервые исследована резистентность эритроцитов по отношению к перекисному воздействию при модуляции адренергическими и гистаминергическими агентами и выявлена инверсия их эффекта при бронхиальной астме.

Впервые изучена резистентность эритроцитов по отношению к кислотному воздействию и обнаружена повышенная устойчивость к этому воздействию при атопическом варианте бронхиальной астмы, а также на доклиническом этапе и этапе предболезни.

Практическая ценность работы. Выявленные маркерные для атопического состояния особенности резистентности эритроцитов по отношению к низкотемпературному гиперосмолярному, кислотному воздействию позволяют диагносцировать это состояние на различных этапах развития атопического варианта бронхиальной астмы, включая доклинический этап.

Разработан приоритетный способ дифференциальной диагностики первичных клинико-патогенетических вариантов бронхиальной астмы.

Основые положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Для бронхиальной астмы характерны изменения резистентности эритроцитов по отношению к перекисному, низкотемпературному гиперосмолярному и кислотному воздействию, в частности, в условиях модуляции адренергическими и гистаминергическими агентами, зависящие от клинико-патогенетического варианта заболевания, его тяжести и фазы.

2. Обнаружены маркерные для атопического состояния особенности резистентности эритроцитов по отношению к низкотемпературному гиперосмолярному и кислотному воздействию, выявляемые на этапе клинически развернутого

заболевания (БА), предболезни (предастма) и на доклиническом этапе.

3. Обнаружен при обоих клинико-патогенетических вариантах (агопический, инфекционно-зависимый) феномен сдвига соотношения Ш/ЬЬ-гистаминершческой активности, наиболее выраженный при атопическом варианте

заболевания, причем данный феномен сохраняется при этом варианте заболевания и в фазе ремиссии, в отличие от инфекционно-зависимого клинико-патогеяетического варианта бронхиальной астмы.

4. Выявлен при обоих клинико-патогенетических вариантах бронхиальной астмы феномен инверсии эффекта адреноблокатора (обзидана) и эффекта гистамина в присутствии Н]-антагониста (димедрола), причем при инфекционпо-зависимом варианте заболевания данный феномен встречается реже и его частота существенно снижалась в фазе ремиссии в отличие от атопического варианта заболевания.

Апробация работы. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, оформлено изобретение (авторское свидетельство № 1Ь29009), рационализаторское предложение (удостоверение на рационализаторское предложение № 1167).

Основные результаты диссертации доложены на международных конгрессах, конференциях и симпозиумах: на Национальных конгрессах по болезням органов дыхания (Санкт-Петербург, 1992; Москва, 1994; Москва, 1995), на 58-й Ежегодной научной ассамблее (Чикаго, 1992), на 60-й Ежегодной научной ассамблее (Новый Орлеан, 1994), на Европейской конференции (Ницца, 1994), на 1-м Национальном конгрессе по профилактической медицине (Санкт-Петербург, 1994), на научной конференции "Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения" (Санкт-Петербург, 1995), на конференции по клинической медицине (Калининград, 1996), на 19-м международном конгрессе по аллергологии (Хельсинки,

1996), на 1-й Национальной конференции Российской Ассоциации аллергологов и клинических иммунологов(Москва,

1997), на аллергологической секции Санкт-Петербургского

научного общества иммунологов (Санкт-Петербург, 1997).

Первичная апробация работы проведена на совместном заседании проблемных комиссий "Бронхиальная астма" Государственного научного центра пульмонологии МЗ РФ и "Патология системы дыхания" Санкт-Петербургского Государственного медицинского университета им. акад.И.П.Павлова (1997).

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в лечебную практику пульмонологического отделения СПбГМУ

им.акад.И.П .Павлова.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трех глав с результатами собственных наблюдений, обсуждения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, включающего работ ( отечественных и иностранных авторов),

приложения.

Работа изложена на страницах машинописного

текста, иллюстрирована 35 таблицами и 13 рисунками.

Материалы и методы исследования. В работе обобщены результаты обследования 172 больных бронхиальной астмой и 17 больных с внелегочными проявлениями аллергии, наблюдавшихся в клинике госпитальной терапии им.акад.М.В.Черноруцкого СПбГМУ им.акад.И.П.Павлова. В качестве контрольной группы обследовано 38 практически здоровых лиц. Кроме этого, отдельную группу практически здоровых лиц (19 человек) составили кровные родственники больных БА. Всем больным проводилось

комплексное клинико-лабораторное и инструментальное обследование, которое включало общеклинические методы, цитологический и бактериологический анализ мокроты или промывных вод бронхов, исследование функции внешнего дыхания в лаборатории физиологии внешнего дыхания (зав. -канд.мед.наук Т.М.Синицина), по показаниям бронхоскопическое, аллергологическое и микологическое, а также иммунологическое и гормональное исследования. Часть больных обследована в рамках полного исследовательского

комплекса. У некоторых больных проводилось исследование содержания биологически активных веществ в конденсате влаги выдыхаемого воздуха в лаборатории биохимии (зав. - доктор биологических наук, проф.В.А.Гончарова) Государственного научного центра пульмонологии МЗ РФ.

Диагноз БА устанавливали в соответствии с классификацией А.Д.Адо и П.К.Булатова (1969), диагностическими критериями клинико-патогенетических вариантов БА, разработанными Г.Б.Федосеевым (1983).

Подчеркнем, что в ipynny больных, обозначенных как "атопическая БА", вошли больные и с атоническим, и смешанным с преобладанием атопического компонента вариантами БА, а в группу, обозначенную как "инфекционно-зависимая БА", вошли больные, страдающие инфекционпо-зависимой и смешанной с преобладанием инфекционно-зависимого компонента БА.

Комплекс лечебных мероприятий у больных БА полностью соответствовал клинико-патогенетическому варианту заболевания. Больные получали традиционное лечение (гипоаллергенная диета, адреномиметики, метилксантины, аптигистаминныс препараты, интал, антибактериальные препараты). Больные, получающие гшококортикоиды, выделены в отдельную группу.

Методологической основой разработанного нами комплекса методов служит оценка эритроцитарной резистентности по отношению к неспецифическим триггерам гиперреактивности (перекисное воздействие,

низкотемпературное гиперосмолярное воздействие и кислотное воздействие).

Кроме этого, эритроцитарная резистентность оценивалась в условиях модулирующего влияния адрспоагоиистов (адреналин) и антагонистов (обзидан), а также гистаминоагонисгов (гистамин) и . антагонистов Hi-гистаминовых рецепторов (димедрол) и Hi-гастаминовых рецепторов (гистодил).

При изучении перекисной резистентности эритроцитов за основу взяли метод A.A.Покровского, А.А.Абрамова (1964).

Нами совместно с В.Н.Минеевым разработана модификация этого метода (удостоверение на рационализаторское предложение № 1167 от 11.09.96). Исследования перекисной резистентности эритроцитов

проводили путем оценки исходной степени перекисного гемолиза с помощью ФЭК КФК-2 (зеленый фильтр) по оптической плотности супернатанта.

Исследования осмотической резистентности эритроцитов проводили путем оценки степени гиперосмолярного гемолиза при охлаждении с помощью ФЭК КФК-2 (зеленый фильтр) по оптической плотности супернатанта. Данный метод был разработан на кафедре госпитальной терапии им. акад.М.В.Черноруцкого Санкт-Петербургского

государственного медицинского университета

им. акад.И. П. Павлова В.Н.Минеевым, С.С.Жихаревым (авторское свидетельство № 1679380). Нами использована модификация этого метода, разработанная В.Н.Минеевым, Е.А.Шпетной (рац.предл. № 1135 от 31.03.95).

Исследования особенностей резистентности эритроцитов по отношению к перекисному и низкотемпературному гиперосмолярному воздействиям проводили в условиях модуляции адренергическими и гистаминергическими агентами.

С целью исследования кислотной резистентности эритроцитов использовали метод И.И. Гительзона и И.А. Терского (1959).

На основе способа оценки кислотной резистентности эритроцитов нами совместно с В.Н.Минеевым, С.С. Жихаревым разработано изобретение (авторское свидетельство № 1829009).

Статистическую обработку результатов исследования проводили в соответствии с общепринятыми методами, используемыми в медицинской статистике (Каминский Л.С., 1964). Достоверность различий между средними величинами оценивали с помощью критерия Стыодента (0, а силу корреляционных связей - с помощью коэффициента корреляции (г). Обработку проводили с помощью программируемого микрокалькулятора "Электроника МК-61", используя

специально разработанные для него программы (Иванов Ю.И., Погорешок О.Н., 1990).

Результаты исследований и их обсуждение. Известно, что избыточное перекисное окисление мембран клеток нарушает естественное функционирование рецепгорных систем. В связи сэтим нами решено исследовать резистентность эритроцитов при псрекисном воздействии, тем самым моделируя один из основных механизмов патогенеза БА.

Нами выявлены некоторые особенности резистентности эритроцитов по отношению к перекисному воздействию в зависимости от клинико-патогенетического варианта БА. В целом по группе больных БА отмечается пониженная перекисная резистентность эритроцитов, что не является, на наш взгляд, удивительным, учитывая, хорошо известный факт существенного снижения антиоксидантной защиты при БА (Субботина Т.Ф., 1986; Сыромятникова Н.В., Гончарова В.А., Котенко Т.В., 1987; Сыромятникова Н.В., 1996).

Тенденция к большему снижению резистентности при инфекционно-зависимой бронхиальной астме (ИЗБА) также понятна с учетом данных о наиболее выраженной интенсификации перекисного окисления липидов именно при ИЗБА (Сыромятникова Н.В., 1996).

Сниженная перекисная резистентность у практически здоровых кровных родственников больных БА, по нашему мнению, отражает наличие врожденных нарушений функции антиоксидантной системы, как это было ранее предположено С.С.Жихаревым (1984), Т.Ф.Субботиной (1986), Н.В.Сыромятниковой, В.А.Гончаровой, Т.В.Котенко (1987). Таким образом, этот факт может рассматриваться с позиций врожденных биологических дефектов (Федосеев Г.Б., 1996), выявляемых в условиях моделируемой нами чрезмерной активации свободно-радикальных процессов.

В присутствии адреналина во всех обследованных группах отмечалось торможение перекисного гемолиза по сравнению с исходным уровнем. Аналогичный эффект снижения перекисного гемолиза в присутствии адреналина выявлен и при гипертонической болезни (Влчкова Ш., 1994).

В условиях предварительной блокады ß-рецепторов обзиданом под влиянием адреналина было выявлено

дополнительное торможение гемолиза во всех обследованных группах. Исходя из этого можно предположить, что в условиях перекисного воздействия влияние адреналина, а именно, торможение гемолиза опосредуется' преимущественно через а-редепторы.

В условиях изолированного применения обзидана было выявлено торможение перекисного гемолиза. Исключение составила группа больных бронхиальной астмой (БА), где нами выявлен феномен инверсии эффекта обзидана, заключающийся в нарастании гемолиза (исходно - 20.97 ± 1.23 (%); в присутствии обзидана - 24.5 ± 1.32 (%), р < 0.05).

Аналогичные данные о парадоксальном эффекта обзидана были получены ранее при оценке гипотонического гемолиза (Яблонская В.Н., 1990; Минеев В.Н., 1993; Геворкян H.A., 1995), а также при оценке импедансных параметров эритроцитов (Шпетная Е.А., 1996).

С целью интегральной характеристики адренореактивной системы нами был введен индек К, учитывающий баланс соотношений между эффектами адреналина и обзидана, который рассчитывался как отношение процента гемолизированных эритроцитов в присутствии адреналина к проценту гемолизированных эритроцитов в присутствии обзидана.

У практически здоровых лиц значение индекса К составило 0.81. Было выявлено снижение индекса К в группе больных АБА (0.51), больных с внелегочными проявлениями аллергии (0.52) и у практически здоровых кровных родственников больных БА (0.26), что свидетельствует о низком эффекте адреналина и высоком эффекте обзидана в этих группах. Напротив, повышение данного индекса выявлено в группе больных ИЗБА (1.12) и в группе больных, получающих гшококортикоиды (1.01).

При анализе влияния гистамина на перекисную резистентность эритроцитов выявлено торможение гемолиза по сравнению с исходным уровнем: у здоровых 16.99 ± 2.12 (%),

10.56 ± 1.18 (%), р < 0.01; у больных АБА 20.27 ± 2.11 (%), 15.2 ± 1.42 (%), р< 0.02; у больных с внелегочнымн проявлениями аллергии 34.45 ± 2.5 (%), 25.03 ± 1.77 (%), р< 0.05; у практически здоровых кровных родственников больных БА 26.9 ± 2.26 (%), 16.47 ± 1.69 (%), р < 0.01. В этой связи интересны данные литературы о роли гистамина как эндогенного протектора при свободно-радикальном повреждении ткани (Федосеев Г.Б., Жихарев С.С., Гончарова В.А., 1992; MacDonald D.M., 1988). В группе больных ИЗБА, а также у больных,получающих ггаококортикоидные препараты, существенной динамики по сравнению с исходным уровнем не отмечалось.

При анализе влияния гистамина в условиях Hi-гистаминергической блокады димедролом у практически здоровых лиц выявлено нарастание гемолиза (исходно 10.56 ± 1.18 (%), в условиях Hi-блокады - 13.9 ± 1.82 (%), р< 0.05) и торможение гемолиза в условиях Ш-гистаминергической блокады гистодилом (исходно - 10.56 ± 1.18 (%), в условиях Ш-блокады - 3.67 ± 0 73 (° о), р < 0.001).

Аналогичное влияния гистамина в условиях гистаминергической бл э::ады выявлено в группе больных ИЗБА и в группе больных, получающих глюкокортикоиды.

Обратим внимание на то, что в группе больных АБА, больных с внелегочнымн проявлениями аллергии и практически здоровых кровных родственников больных БА нами выявлен феномен инверсии

эффекта гистамина в условиях Hi-гистаминергической блокады, заключающийся в торможении гемолиза.

Возможными механизмами этого феномена могут быть следующие:

Во-первых, это может быть связано с чрезвычайно высокой Hi-активностью. В этом случае применяемая доза Н1антагониста не достаточна.

Еще один возможный механизм может быть связан с дефектом в аденилатчиклазной сигнальной системе, и, возможно, с дефектом, который может быть одним и тем же, что и при проведении сигнала с ß-рецептора, например,

дефектность каталитического белка аденилатциклазы, снижение активности которой хорошо известно при БА.

И, наконец, можно предположить нарушения в системе сопрягающих N-белков, 'как это показано на примере переключения Ns-белка на Ni-белок (Kiss Z., Tkachuk V.A., 1984).

С целью интегральной характеристики баланса Hi- и Ш-гистаминовых рецепторов нами был введен коэффициент Н1/Н2, который расстчитывался как А% гемолиза в присутствии гистамина и гистамииа+гистодила Д% гемолиза в присутствии гистамина и гистамина+димедрола У здоровых значение коэффициента Н1/Н2 составило 1.2 ± 0.2. При обоих вариантах БА (атопический и инфекционно-зависимый) выявлен феномен сдвига Н1/Н2-

гистаминергической активности в сторону Hi-активности (3.06 ± 0.21, р < 0.001; 2.31 ± 0.21, р < 0.01 соответственно), наиболее выраженный при атопическом варианте. При ИЗБА в фазе ремиссии заболевания наблюдается существенное уменьшение выраженности сдвига (с 2.31 ± 0.21 до 0.77 + 0.17, р < 0.01), а при АБА сохранение этого сдвига и в фазе ремиссии (с 3.06 ± 0.15 до 3.12 ± 0.26, р > 0.05), более того, имеется тенденция к его повышению.

Феномен сдвига гистаминергического эффекта в сторону Hi-активности присущ также атопическому состоянию, выявляемому на этапе предболезни и на доклиническом этапе.

Отсутствие изменений этого показателя в фазе ремиссии при АБА позволило нам предположить наличие наследственно обусловленного дефекта либо в звеньях фосфоинозитидного механизма (Hj-гистаминергическая активность), либо в аденилатциклазной сигнал-проводящей системе (Ш-гистаминергическая активность).

Нами проведен корреляционный анализ уровня агониста (содержание гистамина в конденсате влаги выдыхаемого воздуха) и эффекта гистамина на клеточном уровне.

Как известно, высокий уровень агониста (гормона, БАВ)

приводит по механизму с!о\уп-регуляции к снижению плотности соответствующих рецепторов и уменьшению таким образом эффекта агониста (Перцева М.Н., 1989).

Подобное соотношение уровня агониста (гистамина) и его клеточного эффекта обнаружено при ИЗБА: выявлена отрицательная корреляция между указанными

признаками(г=0.463, п-15). При атопической же БА эта взаимосвязь нарушена: нами выявлено наличие положительной корреляции между уровнем гистамина в конденсате влаги выдыхаемого воздуха и клеточным эффектом гистамина, что является важным аргументом в пользу дефекта негативного контроля при АБА.

Аналогичные нарушения регуляции плотности рецепторов уровнем гормона при АБА установлены ранее при исследовании адренергической системы (Жихарев С.С., Перцева М.Н., Кузнецова Л.А., Минеев В.Н. и др., 1988) и инсулинореактивной системы (Колычев А.П., Минеев В.Н., Булатова НЛО., 1994). Таким образом, эти факты свидетельствуют о нарушении механизма отрицательной обратной связи как наиболее общем и характерном феномене при атопии.

Интерес к моделированию реакции клетки на гиперосмолярный стимул обусловил направление исследований по изучению влияния указанного стимула на процесс гемолиза. Вместе с тем, учитывая, что реализация гиперосмолярного гемолиза наиболее эффективна при одновременном охлаждении до температуры вблизи 0°С, нами решено использовать оба эти фактора воздействия для исследования резистентности эритроцитов.

Нами было обнаружено, что по сравнению со здоровыми наиболее резистентными к низкотемпературному гиперосмолярному воздействию оказались эритроциты больных АБА, больных с предастмой и практически здоровых родственников больных БА. Наименее резистентными оказались эритроциты больных ИЗБА. Выявленное в этой группе существенное (р < 0.001) снижение резистентности эритроцитов, по-видимому, отражает те молекулярные

механизмы структурных изменений липидного и белкового матрикса, которые связаны с насыщением мембран холестерином, что проявляется тенденцией к макроцитозу, характерному дтя данного варианта БА (Минеев В.Н., 1993).

В условиях модуляции адренергическими агентами выявлено нарастание гемолиза в присутствии адреналина во всех обследованных группах. Еще больший эффект нарастаниягемолиза был выявлен в присутствии обзидана, по-видимому, за счет стимуляции а-рецепторов под действием катехоламинов, содержащихся в пробе. По-видимому, гемолиз в условиях гиперосмолярности и охлаждения осуществляется при участии а-рецепторов, что было показано ранее в исследованиях Е.А.Шпетной (1996).

Этот феномен связан с тем, что при понижении температуры не только увеличивается микровязкость липидов мембраны, но и изменяются свойства самих рецепторов. Так, исследования с мышечной тканью сердца показали, что при понижении температуры значительно повышается а-адренорецепторная активность, а при возрастании температуры наблюдается переход к ß-адренорецепторной активности (Kunos et al„ 1973; Ahlquist R.P., 1977).

Важно, что рассматриваемый феномен имеет, вероятно, универсальный характер, касаясь и других рецепторных систем. Было показано, что уменьшение температуры изменяло способность связывать Н2- и Hi-антагонисты (Cook D.A. et al., 1977; Karrow A.M., 1977).

При сопоставлении эффекта адреналина и обзидана, используя разработанный нами индекс К, было показано, что характер изменений этого индекса аналогичен выявленному нами на модели перекисного гемолиза.

При анализе влияния гистамина на низкотемпературный гиперосмолярный гемолиз у практически здоровых лиц в условиях Hi-гистаминергической блокады выявлено нарастание гемолиза (исходно - 18.89 ± 1.04 (%), в условиях Hi-блокады - 45.72 ± 2.34 (%)), а в условиях Н2-гистаминергической блокады - его торможение (исходно 18.89 ±

1.04 (%), в условиях Нг-блокады - 3.73 ± 0.4 (%)).

Аналогичная тенденция влияния гистамина в условиях гистаминергической блокада выявлена во всех обследованных группах.

При анализе вышеописанного гистаминергического Н:ЛЬ-коэфф! щиента выявлены те же закономерности его изменения, что и на модели перекисного гемолиза. Обратим внимание на следующую особенность изменения характера этого коэффициента: у больных ИЗБА в фазе ремиссии происходит существенное снижение Н1/Н2-коэффициента (с 0.81 ±0.16 до 0.36Ю.05, р < 0.01) в отличие от больных АБА (с 1.03 ± 0.14 до 0.84 ± 0.25, р > 0.05), что, по-видимому, отражает наследственно обусловленный характер изменений в гистаминергической системе у больных АБА.

Нами получены любопытные данные о влиянии антигнстамшшых препаратов на состояние

гистаминергического баланса.

Так, было выявлено существенное снижение гистаминергического коэффициента у тех больных, в терапии которых были использованы зиртек и кларитин, что, по-видимому, обусловлено повышением Ш-

гистаминергической активности в условиях блокады Н1-гистаминовых рецепторов. Выявленная особенность позволяет, на наш взгляд, создать основу для разработки в будущем критериев эффективности терапии антигистаминными препаратами, и, возможно, прогноза этой эффективности.

Нами были сопоставлены результаты исследований резистентности эритроцитов по отношению к низкотемпературному гиперосмолярному воздействию с результатами исследования функции внешнего дыхания при аналогичном воздействии совместно с кандидатом медицинских наук И.В.Адамовой в лаборатории исследования функции внешнего дыхания (зав. - кандидат медицинских наук Т.М.Синицина).

Учитывая, что гиперреактивность бронхов к тому или иному воздействию может быть оценена с помощью так называемого показателя угол наклона кривой доза-реакция

О^а) (Федосеев Г.Б., Хлопотова Г.П., 1988), был проведен корреляционный анализ результатов наших, исследований с указанным показателем.

Естественно, что нас прежде всего интересовала не столько выраженность связи, сколько направленность ее (знак корреляции), ибо представляло большой интерес оценитьвозможное участие в формировании гиперреактивности бронхов противоположных по эффекту опосредующих сигналов адренергической и гистаминергической рецепторных систем.

Действительно, при сопоставлении у больных преимущественно атопическим вариантом БА значений tga и выраженности низкотемпературного пшеросмолярного гемолиза в условиях модулирующего влияния агониста (адреналин) и антагониста (обзидан) была выявлена разнонаправленная корреляционная связь: г=-0.515, п=9 и г=+0.425, п=9 соответственно.

Для гистаминергической системы корреляционная связь tga составила: с Нг-эффектом гистамина - г=-0.415, п=9; с Н1-эффектом г=+0.314, п=9.

Приведенные корреляционные связи свидетельствуют об участии адепилатциклазной сигнальной системы (эффект адреналина, Нл-эффект гистамина) в качестве механизма, тормозящего бронхоконстрикцшо.

Выбор методического подхода к характеристике резистентности эритроцитов с помощью кислотного воздействия был итогом поиска такого подхода, который бы помог решить в первую очередь задачу отграничения атонического клинико-патогенетического варианта БА, т.е. решить дифференциально-диагностическую задачу. Во-вторых, разработанный И.И.Гительзоном и И.А.Терским (1959) подход предоставляет возможность, оценивая неоднородность популяций эритроцитов по рН-устойчивости, судить о степени зрелости или незрелости эритроцитарной популяции.

При исследовании кинетики кислотного гемолиза нас весьма интересовала информация, позволяющая судить о степени дифференцировки. Этот интерес связан с пред став лениями профессора С.С.Жихарева о концепции

дедифференцировки как о фундаментальной основе формирования атопического состояния, согласно которой природа атопического состояния кроется в онтогенетической незрелости клеток, проявляющаяся, прежде всего, незрелостью мембрано-реценторного комплекса.

При исследовании кислотной резистентности эритроцитов выявлено повышение резистентности по отношению к кислотному воздействию в группе больных АБА, больных с внелегочными проявлениями аллергии и в группе практически здоровых кровных родственников больных БА по таким критериям как длительность гемолиза, значение 50%-го гемолиза, характер кривой интенсивности гемолиза, характер эритрограммы и значение так называемого индекса стойкости.

Анализируя группу больных ИЗБА по упомянутым критериям, выявлено снижение резистентности эритроцитов в данной группе.

Эритроциты больных, получающих гшококортикоиды, по основным показателям, характеризующим кислотную резистентность, мало отличались ог группы практически здоровых лиц.

Нами установлено, что критерий 50%-го гемолиза позволяет надежно дифференцировать инфекционно-зависимый и атопический клинико-патогенетическис варианты БА, что позволило разработать изобретение (авторское свидетельство № 1829009).

Отсутствие динамики исследованных показателей кислотной резистентности эритроцитов в фазе ремиссии при АБА (в отличие от ИЗБА), а также сходный характер изменений на этапе предболезни и на доклиническом этапе, отражает, по-видимому, наследственно-обусловленный характер изменений резистентности при АБА.

Проведенный нами корреляционный анализ связей между содержанием микроцитов и содержанием фракций высокорезистентных эритроцитов, характеризующих наиболее незрелые клетки данной популяции эритроцитов в периферической крови (Леонова В.Г., 1967) выявил достоверную корреляцию между этими признаками: г—+0.673,

п—16, р < 0.01. Не удивительной, кстати, оказалась обратная корреляция уровня высокорезистентных эритроцитов с содержанием макроцитов у тех же больных: г=-0.694, п=16, р < 0.001.

Эти данные подтверждают, на наш взгляд, существующую концепцию о том, что микроциты, являющиеся маркером атопического состояния, являются наиболее незрелыми клетками.

Таким образом, проведенные нами исследования позволили расширить представление о дефектах мембрано-рецепторного комплекса при БА.

Показано, что атопическое состояние как на этапе клинических проявлений, так и на этапе предболезни и на доклиническом этапе характеризуется наличием извращенных реакций не только в адренергической, не только в инсулинергической (как это было ранее показано), но и в гистаминергической системе.

Конкретные механизмы указанных дефектов еще предстоит изучить. Однако можно предположить, что эти дефекты могут локализоваться как в самом рецепторе, так и на пострецепториом уровне.

Во всяком случае уже сегодня выявленные нами особенности мембрано-рецепторного комплекса позволяют использовать эти знания для дифференциальной диагностики первичных клинико-патогенетических вариантов БА, а также диагностики атопического состояния на доклиническом этапе.

ВЫВОДЫ

1. При бронхиальной астме выявлены особенности резистентности эритроцитов по отношению к перекисному, низкотемпературному гиперосмолярному и кислотному воздействию, в частности, в условиях модуляции адренергическими и гистаминергическими агентами, зависящие от клинико-патогенетического варианта заболевания, его тяжести и фазы.

2. Атопический клинико-патогенетический вариант

бронхиальной астмы характеризуется повышенной резистентностью по отношению к низкотемпературному гиперосмолярному и кислотному воздействию. Данная особенность характеризовала также атопическое состояние на этапе предболезни (предастма) и на доклиническом этапе. 3. Для инфскционно-зависимого варианта бронхиальной астмы характерно снижение резистентности эритроцитов по отношению к низкотемпературному гиперосмолярному и кислотному воздействию, причем в отличие от атопическоговарианта заболевания выраженность нарушений менялась в зависимости от тяжести течения и фазы заболевания.

4. При обоих клинико-патогенегических вариантах бронхиальной астмы характерной особенностью является сдвиг соотношения Н1 /Н > -ги ста м ни ер г и ч ее к о й активности в сторону Н1-активности, наиболее выраженный при атопическом варианте заболевания. При инфекционно-зависимом варианте бронхиальной астмы в фазе ремиссии заболевания наблюдается существенное уменьшение выраженности сдвига, а при атопическом - сохранение этого сдвига и в фазе ремиссии, что может отражать наличие наследственно обусловленных нарушений. Феномен сдвига гистаминергического эффекта в сторону Ш-активности присущ также атопическому состоянию, выявляемому йа этапе предболезни (предастма) и на доклиническом этапе.

5. При исследовании резистентности эритроцитов к: кислотному воздействию выявлен феномен сдвига кислотной эритрограммы в сторону высокорезистентных фракций эритроцитов, коррелирующих с микроцитозом, при атопическом клинико-патогенетическом варианте бронхиальной астмы. Этот феномен также выявляется на этапе предболезни (предастма) и на доклиническом этапе.

6. При исследовании резистентности эритроцитов к перекисному воздействию при модуляции адренергическими и гистаминергическими агентами при атопическом клинико-патогенетическом варианте бронхиальной астмы выявлен феномен инверсии эффекта адреноблокатора (обзидана) и

эффекта тистамина в присутствии Hi-антагониста (димедрола). Этот же феномен был обнаружен также на этапе предболезни (предастма) и на доклиническом этапе. При ипфекционно-зависимом клинико-патогенетическом варианте бронхиальной астмы данный феномен встречался реже и его частота существенно снижалась в фазе ремиссии в отличие от атопического варианта заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуется для широкой клинической практики с целью дифференциальной диагностики первичных клинико-патогенетических вариантов БА определение резистентности эритроцитов по отношению к кислотному воздействию как достаточно простой и надежный способ.

2. Рекомендуется для скрининговых исследований с целью диагностики атопического состояния как на этапе клинических проявлений, гак и на доклиническом этане определение резистентности эритроцитов по отношению к низкотемпературному гиперосмолярному воздействию.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Атоническая бронхиальная астма как мембрано-рецепторная патология// 2 Всесоюзный конгресс по болезням органов дыхания: Резюме. - Челябинск, 1991. - С.54 (соавт.В.Н.Минеев, Н.Н.Лукашевская, В.Д.Жарская, В.Н.Яблонская, Ю.М.Богданова, Н.Ю.Булатова).

2. Новые подходы к изучению мембрано-рецепторного комплекса при бронхиальной астме// 3 Национальный конгресс по болезням органов дыхания: Резюме. - СПб., 1992. - С.328 (соавт. В.Н.Минеев, Н.Н.Лукашевская, Н.Ю.Булатова, Е.Р.Самойлова, А.Н.Смирнова, Е.А.Шпетная, Ю.Д.Ямпольская, А.Б.Федосеев, С.Н.Устинов, В.Н.Яблонская).

3. Способ определения формы бронхиальной астмы// Открытия. - М., 1992. - № 27 (соавт.В.Н.Минеев, С.С.Жихарев).

4. Мембрано-рецепторные изменения при бронхиальной аетме// Тезисы докладов 4 Национального конгресса по болезням органов дыхания. - М., 1994. - Тез.132 (соавт.В.Н.Минеев, Н.Ю.Булатова, А.П.Колычев, Н.Н.Лукашевская, Е.А.Шпетная, В.Д.Жарская, В.Г.Скопичев, В.Н.Яблонская, А.Б.Федосесв, Ю.Д.Ямпольская).

5. Доклиническая диагностика атопического состояния// 1 Национальный конгресс по профилактической медицине. -СПб., 1994. - С.16. - Тез. 311 (соавт. В.Н.Минеев, В.НЛблонская, Н.Ю.Булатова, Н.Н.Лукашевская, Е.А.Шпетная, А.Б.Федосеев, Ю.Д.Ямпольская).

6. Итоги исследования мсмбрано-рецепторного комплекса при бронхиальной астме// Тезисы докладов 5 Национального конгресса по болезням органов дыхания. - М., 1995. - Тез.81 (соавт. В.Н.Минеев, В.Н.Яблонская, Н.Н.Лукашевская, Н.Ю.Булатова, О.И.Карпов, Е.А.Шпетная,

A.Б.Федосеев, Ю.Д.Ямпольская, Т.М.Лалаева).

7. Диагностика атопического состояния// Сб. тезисов докладов научной конференции ВМА "Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения". - СПб., 1995. - С. 519 (соавт.

B.Н.Минеев, В.Н.Яблонская, Н.Ю.Булатова, Н.Н.Лукашевская, Е.А.Шпетная, А.Б.Федосеев, Е.М.Кузьмипчук, Н.Н.Гизлер).

8. Липостабил - новое лекарственное средство при бронхиальной астме// Материалы к научной конференции "Клиническая медицина". - Калининград, 1996. - С. 27 (соавт. В.Н.Минеев, Е.Б.Шадрин, Е.А.Шпетная,

Н.Н.Лукашевская, А.Н.Талантова).

9. Атопическая бронхиальная астма как мембрано-рецепторная патология// Сб. трудов 1 Национальной конференции Российской Ассоциации аллергологов и клинических иммунологов "Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии". - М., 1997. - С. 655 (соавт. В.Н.Минеев. Е.А.Шпетная, В.Н.Яблонская, Н.Ю.Булатова, Н.Н.Лукашевская, Т.М.Лалаева, Л.Н.Сорокина, Н.Н.Гизлер).

10. Membrane-receptor disorsers in atopic bronchial asthma// Chest. - 1992. - V. 102, N-2, Suppl. - P. 154 s (co-authors

G.B.Fedoseev, V.N.Mineev, N.N.Lukashevskaya, N.Y.Bulatova, A.N.Smirnova).

11. Regulatory effects of exogenous cyclic AMP in bronchial asthma// Chest. - 1994. - V. 106, N-2. Suppl. - P. 145 s (co-authors G.B.Fedoseev, V.N.Mineev, N.N.Lukashevskaya, E.A.Spetnaya, V .N. Yablonskay a).

12. Cytoskeleton of erythrocytes in bronchial asthma// Eur. Respir. J. - 1994. - V. 7, Suppl. 18 - P. 344 s (co-authors G.B.Fedoseev, V.N.Mineev, V.D.Zharskaya, V.G.Skopichev, N.N.Lukashevskaya, V.N.Yablonskaya, E.A.Spetnaya, A.B.Fedoseev, Ju.D.Yampolskaya).

13. Bronchial asthma as membrano-receptor pathology// Eur. J. of Allergy and Clin. Immunol. - 1996. - v. 51,, N-32, Suppl. -P.l 19 (co-authors V.N.Mineev, V.D.Zharskaya, E.A.Spetnaya,

N .N .Lukashevskaya).

Авторское свидетельство на изобретение № 1829009. Способ определения формы бронхиальной астмы/ соавт.В.Н.Минеев, С.С.Жихарев//Открытия. - 1992. - № 27.

Рационализаторское предложение № 1167 от 11.09.96. Способ дифференциальной диагностики форм бронхиальной астмы (соавт.В.Н.Минеев).