Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Гиполипидемическая активность ряда аналогов эстрогенов - связь структуры с биологической активностью

РГ6 од

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И. П. Павлова

На правах рукописи ДСП

ЭКЗ. 13

КАМЕНЕВА Ирина Юрьевна

ГШОЛЩОДЕШЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ РЯДА АНАЛОГОВ ЭСТРОГЕНОВ -СВЯЗЬ СТРУКТУРЫ С БИОЛОГИЧЕСКИ! АКТИВНОСТЬЮ

14.00. 25 -фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт- Петербург

1997

Работа выполнена в лаборатории фармакотерапии нарушений ли-пидного обмена отдела биохимии Научно-исследовательского института экспериментальной медицины РАЫН (директор - академик РАМН Б. И. Ткаченко)

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор В. Е. Рьиенков

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор А. А. Зайцев доктор медицинских наук, профессор Е А. Крауз

Ведущая организация: Санкт-Петербургская государственная мед!

цинская Академия им И. И. Мечникова

Защита диссертации состоится "«" -^-Н-'&^-А-^- 1997г. в " " час на заседании диссертационного совета К. 074.37. 02 по защите канд! датских диссертаций при Санкт-Петербургском государственом мед! цинском университете им. акад. И. П. Павлова (197089, Санкт-Петербур] ул. Л. Толстого, 6/8).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиоте Санкт-Петербургского государственого медицинского университета и акад. И. И Павлова (197089, Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, 6/8).

Автореферат разослан " "-------- 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

\э. Э. Звартау

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Клинические, эпидемиологические и экспериментальные исследования указывает на связь между нарушением липидного и липопротеидяого (Щ> обменов, развитием атеросклероза и наиболее частого клинического его проявления - ИБС. Эпидемиологические исследования выявили меньшую, в сравнении с мужчинами, заболеваемость лэнщин атеросклерозом до менопаузы. При этом показаны различия между полами в липидном и ЛП составах сыворотки крови, выражающиеся в Солее высоком содержании общего холестерина (ХС) и ХС атерогенных ЛП низкой плотности (ЛПНП), и в более низком содержании <*-ХС - Ж антиатерогенных ЛП высокой плотности (ЛПВП) в сыворотке крови у мужчин до 50 лет, в сравнении с женщинами (Савченко, О. Е ,196?; Пдавинская С. Л ,1991; Korhonen,1996). Результаты ряда исследований свидетельствуют, что с возрастом эти различия сглаживаются и в дальнейшем с увеличением возраста величина общего ХС выше у женщин, чем у мужчин (Мак-Конати, 1984; Rymer,1993; Haines, 1996). Частота проявления сердечно-сосудистых заболеваний после наступления менопаузы также выте у женщин (Климов А. Н. ,1987; Сметник а П.,1996; Hill.1996). Все это указывает на участие половых гормонов в липидном и липопротеидном обменах.

Половые гормоны широко используются в медицине. Так, длительное применение оральных контрацептивов, в состав которых входят как эстрогены, так и прогестагены, приводит к заметному изменению липидного и ЛП спектров крови - вместе с гипохолестеринемией и увеличением ы-ХС наблюдается нарастание ТГ в плазме крови (Robinson, 1990; Delplanque, 1993; Malle, 1993). В ряде эпидемиологических исследований гипертриглицеридемия определена как фактор, увеличивающий риск возникновения коронарной болезни сердца (Austin, 1389; Assman, 1992; Manninen, 1992), особенно у женвдш (Плавинская С. И. ,1991; Gas te 111, 1991). Кроме того, применение препаратов с высоким содержанием эстрогенов увеличивает риск венозной тромбоэмболии, а также инсульт и инфаркт миокарда (Весси, 1984-, Стаут, 1985). Заместительная терапия гормонами в постменопаузе и у женщин сравнительно молодого возраста, которым по медицинским показаниям проводится оваризкгомия, также оказывает подобное влияние на липидный обмен (Van Lenten, 1983; Halperin, 1992). При этом значительно возрастает риск возникновения рака молочной

железы и эндометрия (Lobo, 1995; Risch, 1996).

Однако, существует мнение, поскольку эстрогены обладают анти-атеросклеротическими и гипохолестеринесическими свойствами, и способствуют сниятию постклемакгерического синдрома, их применение желательно, особенно женщинам в постменопаузе (Schwartz, 1995; Culliton, 1997). Кроме того, использование эстрогенов у женщин в возрасте 40-49 лет даже приводит к снижению смертности, несмотря на увеличение риска злокачественных образований (Smith, 1997).

Таким образом, применение натуральных эстрогенов, наряду с положительными эффектами вызывает и ряд отрицательных проявлений, в том числе на сердечно-сосудистую систему. В связи с этим в настоящее время проводится поиск аналогов эстрогенов с ослабленным гормональным действием или лишенных его, но в силу структурного сходства способных окааывать положительное влияние на обмен лшш-дов и Ж

На кафедре природных соединений химического факультета Санкт-Петербургского Государственного Университета под руководством докт. хим. наук А. Г. Шаввы в течение многих лет проводятся работы по синтезу аналогов стероидных эстрогенов с предполагаемым избирательным действием.

Цель и задача исследования. Целью настоящей работы являлось изучение связи между структурой, новых аналогов эстрогенов и их влиянием на показатели липидного обмена и спектр ЛП сыворотки крови в эксперименте.

Конкретные задачи сводились к следующему:

1. Изучить влияние новых аналогов эстрогенов на липиды сыворотки крови и печени интактных животных и в условиях экспериментальной гиперхолестеринемии (ГДО), индуцированной двусторонней ова-риэктомией у крыс.

2. Определить влияние изучаемых соединений на спектр ЛП сыворотки крови.

3. Изучить влияние наиболее активных соединений на липиды сыворотки крови и печени в условиях экспериментальной ГХС, вызванной применением диеты с повышенным содержанием ХС.

4. Выявить закономерности в действии ряда аналогов эстрогенов с различными заместителями на липиды и ЛП экспериментальных животных.

Положения, выносимые на защиту.

1. Введение объемного заместителя в положение С-13 и/или метильных заместителей в положения 4 и 2 приводит к значительному снижению гормональной активности аналогов стероидных эстрогенов 8-изоряда.

2. Метиловый эфир 16,1б-диметил-0-гомо-8-изоэстрона, а также 18-метил-В-нор-0-гомо-9-изоэстрон лишены специфической гормо-нальпой активности и оказывают выраженное гипохолестеринеми-ческое и антиатеросклеротическое действие в эксперимента.

3. Метиловый эфир б-окса-0-гомо-8-изоэстрона обладает ослабленным гормональным действием, окааывает выраженное гиполипидемическое действие и приводит к нормализации спектра ЛП крови у оваризктомированных крыс.

Научная новизна исследования. С помощью аналитического ультрацентрифугирования в настоящей работе впервые показано появление у оваризктомированных крыс фракции ЛПВП, флотирующей в области ДПВП1, сходной по своим свойствам с ЛПБПз. Выявлена важная роль метильных заместителей в положении С-16 у метилового эфира 8-изо-эстрона, йыражаюкдяся в отсутствии у данного соединения гормонального и контрацептивного действия наряду с низкой токсичностью и выраженными гиполипидемическими и антиатеросклеротическими свойствами. Впервые установлено, что метиловый эфир б-окса-О-го-мо-8-изоэетрона проявляет гиполипидемические свойства и способствует нормализации спектра ЛП сыворотки крови оваризктомированных крыс, обладая при этом невысокой гормональной активностью. Показано, что при использовании аналогов эстрогенов возможно разделение не только гормональных и антиатеросклеротических, но и гиполипиде-мических и антиатеросклеротических свойств. Так, 18-метил-В-нор-0-гомо-9-изоэстрон " проявил хорошо выраженный антиатеросклероти-чеекий эффект и не оказал гипохолестеринемического действия. В то же время его применение не приводило к гипертригдицеридемии. Также обнаружены соединения, обладающие ярко выраженной гормональной активностью и не оказывающие влияния на липидный обмен.

Научно-практическое значение работы. _ В процессе исследования показана высокая значимость заместителей в положениях С-13, 4, 2 и 16 в ряду 8-изоаналогов стероидных гормонов, приводящая к значи-

тельным изменениям соотношения гормональной и гиполипидемической активностей. Гипохолестеринешческое и антиатеросклеротическое действие метилового эфира 1б,1б-диметил-0-гомо-8-изоэстрона и 18-метид-В-нор-0-гомо-9-изозстрона, а такие отсутствие у них специфической гормональной активности и низкая токсичность этих соединений позволяет рекомендовать их для дальнейшего более полного изучения с целью возможного применения в качестве гиполипидеми-ческих и антиатеросклеротических средств. Выявленная в эксперименте способность метилового эфира 6-окса-1)-гомо-8-иаозстрана нормализовать липидный и липопротеидный спектр крови у оваризктомиро-ванных животных, а также наличие у него умеренной зстрогенной активности указывают на перспективность дальнейших исследований для • определения возможности использования этого стероида при заместительной терапии.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных статей и получено 4 авторских свидетельства СССР на изобретения.

Реализация работы. Установленное в ходе иследования гиполили-демическое и антиатеросклеротическое действие некоторых аналогов стероидных эстрогенов, наряду с отсутствием у них гормональной активности и низкой токсичности, возможность разделения у них гиполипидемической и антиатеросклеротической активностей, а также значение заместителей аналогов половых гормонов 8-изоряда, указывает на возможность целенаправленного поиска новых соединений избирательного действия. Эти данные испольауются при чтении лекций и при подготовке специалистов в Санкт-Петербургском государственной университете.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, четырех глав, обсуждения результатов исследования, выводов и списка литературы, включающего источников.

Работа изложена на стр. машинописного текста, иллюстрирована рисунками и .'?. таблицами.

СОДЕРШШЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Работа выполнена на живот-

- Б -

ных-самцах: 30 белых мьшах (18-20 г), 464 белых крысах (140-300 г), 27 морских свинках (300-450 г), 45 крошках (3.0 - 3.5 кг), а также на 749 самках белых крыс (35-65 г).

Было исследовано 35 соединений, аналогов стероидных гормонов зстрона, зстрадиола и меетранола. Исследовали их влияние на уровень липидов и ЛП сыворотки крови, а также на содержание липидов в печени и аорте. Все вещества синтезированы на кафедре природных соединений Санет-Петербургского государственного Университета по методу ЛЕТоргова и С. Н. Ананченко (Торгов И. Е ,1982), их строение доказано методами УФ-, ИК- и ШР-спектроскопии.

В опытах на мышах изучена острая токсичность; показано, что при однократном введении исследуемые вещества не оказали токсического действия в дозах, в 10 раз превышавших терапевтическую. Дозы, примененные в экспериментах составляли от 50 мг/кг до 0.0001 мг/кг для различных соединений. В качестве контрольных препаратов использовали эстрадиол, этинилэстрадиол, эстрон, местранол и диэ-тилстильбэстрол. Вещества вводили внутрибршинно, внутримышечно или перорадьно. Интактным животным исследуемые вещества вводили в течение 10 дней.

Экспериментальные дислипопротеинемии (ДЛП) у крыс вызывали введением в стандартную диету 2.5% холестерина (ХС), 0.12%6-ме-тилтиоурацила и 30% прогретого подсолнечного масла (Метод, рекомендации Минздрава СССР под ред. А. а Климова, & Е. Рыженкова, 1988). В части опытов в диету добавляли витамин Б в дозе 300 ООО ЕД/кг. Продолжительность опытов составляла 28 дней. ДЛП у морских свинок вызывали введением Ж в количестве 0.5 г/кг массы тела в смеси свиного жира и подсолнечного масла (4:1) через зонд в течение 20 дней. В опытах на кроликах вводили 0.5 г/кг ХС в 5 мл прогретого подсолнечного масла через зонд в течение 60 или 90 дней.

Гипе рт риг лице ридемию у крью вызывали однократным введением 50% етанола перорально из расчета 10 г/кг массы тела. Исследуемые вещества вводили предварительно в течение 3-х дней и вместе с этанолом. Через 2 часа после введения этанола животных забивали . Ги-перлипидемию у крыс индуцировали инъекцией детергента "Тритон Ж-1339" (225 мг/кг, внутрибршинно).

в конце опытов крыс и морских свинок забивали после 16-18 часового голодания быстрой декапитацией, кроликов - воздушной эмболией в условиях барбитуратного наркоза. Для определения липидов

- б -

и ЛП забирали кровь, печень и аорту.

Была разработана экспериментальная модель ДЛП, индуцироваен-ной двусторонней оваризктомией у крыс. Для этого у 4-х недельных крыс-самок удаляли оба яичника под эфирным наркозом. Контрольной группе крыс проводили ложную операцию. После операции животные содержались на обычном лабораторном рационе в течение 45 дней. Затем они получали в течение 10 дней исследуемые соединения.

Содержание общего ХС в сыворотке крови определяли унифицированным методом по реакции с хлорным железом после экстракции изоп-ропанолом. Для определения °<-ХС осаждали пре-А-Ш гепарином в присутствии марганца (Лабораторные методы исследования, 1987). Содержание липидов в гомогенатах печени оценивали после предварительной их экстракции по методу Bregdon С19603; содержание Ж определяли с использованием цветной реакции Либермана-Бурхарда, ТГ -по методу Neri [19733. Оценка степени атеросклеротического поражения проводилась по методике Г. Г. Автандилова [19903. Изучение спектра ЛП сыворотки крови животных проводили, используя ультрацентрифугирование ее в градиенте плотности КВг по методу Terpstra [19813, а также при аналитическом ультрацентрифугировании на ультрацентрифуге модели Е фирмы "Bookman" (США) (КаЫоп, 1986).

Показателем специфической гормональной активности служил утв-ротропный аффект, при определении которого использовали неполовозрелых мышей самок. Вычисляли величину ЕД2*, вызывающую эффект, равный удвоенной величине массы матки контрольных животных [Никитина Г. а ,19833. Данный показатель определяли при помощи и содействии с. н. с. Санкт-Петербургского института акушерства и гинекологии РАМН Г. Е Никитиной.

Статистическая обработка результатов, подученных в ходе исследования, проведена с использованием параметрического критерия t Стъюдента. Достоверность различий считали установленной при PCO. 05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Характеристика модели гиперлипидемии и дислипопротеидемии, индуцированной двусторонней оваризктомией у крыс

Для изучения влияния аналогов стероидных гормонов на спектр

ЛП и липидов была использована модель ГХС, индуцированной двусторонней овариэктомией у крыс (Rejan, 1984) с модификацией. Был проведен анализ изменения уровней общего Ж и ТГ сыворотки крови с 37 по 76-й день после операции, а также изучены изменения спектра ЛП сыворотки крови в эти же сроки. Достоверное увеличение содержания общего ХС в сыворотке крови наблюдалось в интервале с 42 по 54 и на 70-й день. Так, на 54-й день после операции происходило увеличение данного параметра с 1.78+0.08 ммоль/л до 2.30+0.13 ммоль/л (Р<0.01), а на 70-й день с 1.59+0.09 ммоль/л до 2.25+0.10 ммоль/л (Р<0.01). Стойких изменений уровня ТГ при этом не наблюдалось.

В последующих экспериментах при определении «<-Ж методом осаждения ало-В-содержащих ЛП гепарином в присутствии Мп4л было показано, что доля л-Ж! в процентном отношении к величине общего ХС снизилась после овариэктомии на 6.45+1.33% (Р<0.01), что согласуется с данными о снижении <*-ХС у женщин в постменопаузе. Однако, исследование спектра ЛП с помощью аналитического ультрацентрифугирования показало, что после кастрации на 40-й и 68-я день увеличивалась концентрация ЛПВП, особенно в области флотации ЛПВП1; что, на первый взгляд, противоречило полученным ранее данным. Дальнейшее изучение спектра ЛП с помощью ультрацентрифугирования в градиенте плотности КВг установило, что после овариэктомии наблюдалось реличение "аномальных" частиц, расположенных между ЛПВП и ЛПНП. В литературе описаны "аномальные" ЛПВП (ЛПВПс), обогащенные ХС , выделенные при скармливании животным пищи с повышенным содержанием XD (Mahley, 1978). Эти частицы осаждались гепарином в присутствии магния (или марганца), в отличие от ЛПВПа и ЛПВП!. ЛПВПс не содержли апо-В - основного белка ЛПНП, но имели в своем составе апопротеины А и Е. Эта фракция напоминает, а может быть идентична ЛПВП в нормальной плазме, которые тоже осаждаются гепарином в присутсвии ионов марганца (Леви, 1983).

Таким образом, в результате проведенного исследования изменений липидного и ЛП спектров сыворотки крови у крыс самок после двусторонней овариэктомии происходит развитие гиперхолестеринемии. При этом с помощью аналитического и градиентного удьтрацентрифуги-рования сыворотки крови было обнаружено появление "аномальных" ЛПВП, в области флотации ЛПВП выявить которые обычным методом количественного определения *-ХС не представляется возможным, поскольку эти частицу, скорее всего, осаждаются гепарином в

присутствии ионов марганца,

2. Экспериментальное изучение аналогов эстрогенов 8-изорнда

В результате экспериментальных исследований и клинических наблюдений было установлено наличие рецепторного механизма для стероидных подовых гормонов в клетках органов-мишеней, чем и обусловлено их гормональное действие. Ш мнению ряда авторов, наличие рецепторных механизмов является одним из основных условий при поиске новых фармакологических средств (Розен В. Б. ,1981; Михайлович Б. А. ,1990; Игнатов Ю. Д. ,1994). При изучении лигандкой специфичности рецепторов зстрадиола было показано, что гидроксиль-ные группы при С-3 и С-17 играют важную роль в связывании с рецептором (РапсЬепко, 1979). Если рассмотреть соединения природного ряда и их 8-изоаналоги, то можно видеть, что изменение конфигурации молекулы ведет к значительным различиям в ориентации гидрокси-ла в положении С-17, что неизбежно влияет на величину относительного сродства к рецептору, чем и объясняется более низкая гормональная активность аналогов эстрогенов 8-изоряда. В литературе имеются сообщения о синтезе 8-изоаналогов стероидных эстрогенов, обладающих гиполипидемической активностью (Шт. Англ N1069845, 1967; Пат. США N3407217, 1968; Пат. США. N3546292, 1970). Однако, многие .из них имели остаточное эстрогенное (утеротропное) действие СТотогеШ, 19661, несмотря на улучшенное соотношение мевду гипо-холестеринемической и утеротропной активностью. В доступной литературе не удалось обнаружить данных о влиянии 8-изоаналогов эстрогенов на спектр ЛП сыворотки крови.

В данной главе представлены результаты экспериментального изучения новых 8-изоаналогов стероидных гормонов, синтезированных на кафедре природных соединений СШГУ. Для более удобного рассмотрения их свойств они были разделены на несколько групп в соответствии с химическим строением.

2.1. Гиполипидемическая и гормональная активность аналогов стероидных эстрогенов 8-иаоряда с метильной группой в положении 2

Из изученных 7-и новых соединений данной группы гиполипидемической активностью обладали только три:

СИ

УН-150 гип. ак. =5мг/кг ут. ак. =5мг/кг

он

УН-145 гип. ак. -ЗОмг/кг ут. ак. =25мг/кг

ОН

УН-178 гип. ак. =2Бмг/кг ут. ак. > 25мг/кг

Можно отметить, что увеличение цепи в положении С-13 (УН-145) или расширение кольца И до шестичленного приводило к снижению как гормональных, так и гиполипидемических свойств. В целом, соединения с метильной группой в положении 2 оказались мало перспективными, поскольку гиполипидемическое действие проявлялось в достаточно высокой дозе и практически равной их утеротропной активности.

2.2. Гиполипидемическая и гормональная активность 8-изоа-налогов стероидных эстрогенов, содержащих метальные группы при С-16

В литературе имеются сведения, что рацемический 16,16-диме-тил-0-гомо-8-изоэстрон не оказывает зстрогенного действия (Сорокина И. Б. ,1973). Высказано предположение, что при наличии у подобных соединений метоксильной или ацетильной групп при С-3 возможно более сильное разделение гиполипидемической и эстрогениой активностей (Агио1<3,1966). Нами было изучено 5 соединений, содержав»« метильные группы при С-16. Все они были практически лишены гормональных свойств в исследуемых дозах.

Наиболее полно был изучен метиловый эфир 16,16-днметил-и-гомо-8-иааэстрон (УК-30). Введение УН-30 в дозе 10 мг/кг интактным крысам приводило к снижению уровня общего ХС (с 1.55+0.07 до 0.77+0. 07) ммоль/л (Р<0. 01) , без изменения содержания ТГ в сыворотке крови и липидов печени, в го время как применение зстрадиола вызывало увеличение ТГ сыворотки крови (с 0.59+0.05 до 1.16+0.09) ммоль/л (Р<0.01).

У крыс, получавших ГХС диету введение УН-30 снижало повышенное содержание Ж в крови на 4Б,4Х и печени на 45,4%. У крыс с ги-

перлипидемией, индуцированной введением детергента "Тритон №-1339" изучаемое соединение снизило уровень как ХС в сыворотке крови на 24.8%, так и ТГ - на 9.5%. При гипертриглицеридемии, вызванной применением этанола, использование исследуемого стероида снижало уровень ТГ в сыворотке крови на 16.4%.

В опытах на морских свинках с гиперлшщемией, обусловленной скармливанием ХС вместе с животными жирами также отмечено достоверное снижение содержания общего ХС в крови и в печени под влиянием УН-30 на 57.0% и 71.77., соответственно. У кроликов с ГХС изучаемое соединение достоверно снижало уровень ХС в сыворотке крови и ТГ в печени на 36.2% и 18.15%, соответственно. Кроме того, содержание ХС в аорте также снижалось на 40.8X. Степень атеросклеро-тического поражения аорты у животных, получавших УН-30 снижалась с 57. 5+5.9Х до 31.8+7.71 (Р<0.05).

УН-30 не оказывал угнетающего действия на гонадотропную функцию гипофиза Также у него не было обнаружено и канцерогенного действия, присущего классическим эстрогенам. При определении острой токсичности было установлено, что его ЛД » 2.584 г/кг.

Шдученные данные показали возможность получения 8-изоанало-гов, обладающих низкой токсичностью, выраженной гшгалшщемической и антиатеросклеротической активностью, при отсутствии гормонального и канцерогенного действия.

Z. 3. 8-иаоаналоги стероидных эстрогенов с удлиненной цепью в положении С-13

ГЪ аналогии с вещэствами природного ряда, можно предположить, что присутствие более объемистого заместителя при С-13 у соединений 8-изоряда приведет к снижении гормональной активности. Шэтому было исследовано 12 новых стероидных 8-изоаналогов с увеличенной цевыо в положении С-13.

УН-18 ут, ак. =0.5 мг/кг

УН-18а ут. ак. *=0.5МГ/КГ

Стероиды УН-18 и УН-1Ва проявили выраженную утеротропную активность в дозе 0.5 мг/кг в день. При этом их применение не вызывало значимых изменений липидов сыворотки крови и печени.

Из соединений, обладающих гиполипидвмичеекой активностью были выделены следующие:

cw.o

УН-180 УН-188

гип. ак. =1 мг/кг гип. ак. =0.5мг/кг

ут. ак. -0.5мг/кг ут. ак. =10мг/кг

УН-24

CHJ)

УН-179

гип. ак. =10мг/кг гип. ак. -0. Змг/кг ут. ак. - ут. ак. -5мг/кг

Наиболее высокую утеротропную активность (0.5 мг/кг в день) проявил УН-180. Увеличение цепи в положении С-13 до пропиловой (УН-188) приводило к резкому снижению утеротропной активности (в 20 раз). Гиполипидемическая активность увеличивалась при этом в 2 раза. Самую низкую гиполипидемическую активность мы наблюдали у УН-24 (10 мг/кг). При увеличении цепи в положении С-13 гиполипидемическая активность значительно воарастала (более, чем в 30 раз) (УН-179). При. сравнении соединений УН-179 и УН-188 мокко видеть, что наличие кислорода в положении 6 и ацетатного заместителя в положении 17л (УН-188) приводит к снижению гормональной активности в 2 раза, тогда как гиподипидемические свойства этих веществ меняются мало.

При ультрацентрифугировании в градиенте плотности Kbr после

овариэктомии наблюдалось появление "аномальных" ЛП, расположенных между ЛПВП и ЛПНП. После применения УН-179 в дозе 3 мг/кг и 188 в дозе 5 мг/кг происходило полное исчезновение "аномальных" частиц. Важно отметить, что эффективная доза обоих стероидов была меньше, чем их утеротропный эффект.

Таким образом, можно отметить, что увеличение цепи в положении С-13 до пропиловой может приводить как к значительному снижению гормональной компоненты, так и к увеличению гиполипидемическо-го действия.

г. 4. Экспериментальное изучение б-окса-В-изоакалогов эстрогенов

В данной группе было изучено 7 новых соединений. Все они обладали утеротропной активностью. Среди 3-х 8-изоанадогов эстрадио-ла у 2-х веществ гиполипидемические свойства выявлены не были, но при расширении кольца Б до 6-и членного (УН-199) наблюдалась нормализация уровня общего ХС в сыворотке крови овариэктомированных крыс, содержание ТГ не изменялось. Однако, УН-199 имел не очень удачное соотношение гиполипидемической и утертотропной активностей (гиполипидемическая была более, чем в 3 раза ниже утеротропной). Применение 6-окаа-8-изозстрока приводило к снижению уровня 303 у иктактных крыс на 15Х. Содержание ТГ в сыворотке крови не изменялось, а его метиловый эфир не влиял на липиды сыворотки крови.

Наиболее полно были изучены 6-окса-0-гош-8-ивоэстрок (УН-196) и его метиловый эфир (УН-193). УН-195 проявил более высокую гиполипидемическую активность (О. 05 мг/кг), его утеротропныа свойства были выявлены в той же дозе. Гиполипидемические свойства УН-193 были выявлены в доае 0.1 мг/кг, а его утеротропный эффект проявился в дозе в 5 раз большей, чем гишлипидемииеский, что является удачным соотношением этих величин.

о

НО -К^о^

УН-195 гип. ак. =0.05мг/кг ут. ак. =0. Обмг/кг

При ультрацентрифугировании сыворотки крови в градиенте плотности КВг как в случае УН-195, так и УН-193 "аномальные" ЛП, которые появлялись у крыс после овариэктомии, полностью исчезали. Использование аналитического ультрацентрифугирования показало, что применение эстрадиола в дозе 0.01 мг/кг и УН-195 в дозе 0.05 мг/кг не приводило к нормализации спектра ЛП сыворотки крови овариэктомированных крыс, а введение УН-195 в до8е 0.0 мг/кг полностью нор-

0

УН-193 гип. ак. =0.1 мг/кг ут. ак. =0.5мг/кг

мализовало липидный спектр. При изучении влияния данных соединений на спектр ЛП интактных животных было показано, что их введение практически не изменяло его, тогда как после введения эетрадиола появлялись ЛПВП, флотирующие в области ЛПВГ^.

Таким образом можно отметить, что применение УН-193 приводило не только к снижению уровня общего Ж сыворотки крови овариэктоми-рованных и интактных крыс, но, и нормализовало спектр ЛП крови овариэктомированных животных. При этом, что такмэ существенно, не происходило увеличения концентрации ТГ в сыворотке крови.

На основании вышеизложенного можно сделать вывод, что УН-193 может является перспективным для дальнейшего изучения с целью возможного использования его при заместительной терапии вместо эетрадиола.

2.5. Аналоги эстрогенов 8-изоряда с этинильной группой в положении 17«¡

Известно, что при введении этинильной группы в положение 17«< резко возрастает сродство стероидов к рецепторам эетрадиола в различных органах/мишенях (Jonne, 1974; Фанченко а Д. ,1978). Соединения с высокой гормональной активностью необходимы в контрацепции и заместительной терапии и при этом важно, чтобы такого рода вещества не оказывали неблагоприятного действия на содержание липидов и спектр ЛП. Вами было исследовано 4 новьк аналога местранола.

снл

УН-173 УН-197 УН-189 УН-186

гип. ак. =0.01мг/кг тип. ак. =о. 15мг/кг гип. ак. =о. змг/кг гип. ак. =о

у. ак. "0.01Бмг/кг у. ак.-0.05мг/кг у. ак.-0.1Бмг/кг у. ак. =0. 5мг/кг

Изученные стероиды, наряду с гшшипидемическим показали достаточно выраженный гормональный эффект. УН-173 обладал очень сильным гиполипидемическим действием. Даже в дозе 0.01 мг/кг (в/м) происходило снижение общего Ж на 33.27., при этом содержание ТГ

сыворотки крови не менялось. Его гормональная активность также была самой высокой среди стероидов этой гррпы. Введение метильного заместителя в положение 2 (УН-197) приводило к значительному снижении гиполипидешческой активности (в 15 раз) и несколько меньшему - утеротропкой (в 3 раза). Введение же метальной группы в положение 4 (УН-186) полностью устраняло гиподипидемическиа свойства и значительно снижало утеротропные (более, чем в 30 раз). Удлинение цепи в положении С-13 (УН-189) снижало как гиполипидемические (в 30 раз), так и утеротропные (в 10 раз) свойства.

В целом можно отметить, что практически все изученные соединения данной группы обладали высокой гормональной активностью. Ги-похолестеринемическая активность била также достаточно выраженной, и, что особенно важно, исследованные стероиды не оказывали гиперт-риглицеридемического действия, свойственного многим эстрогенам.

3. Изучение гиполипидешчеекой активности 18-метил-В-нор-Р-гомо-9-иэоэстрова

Известно, что некоторые 9-изошшоги стероидных эстрогенов имеют очень низкую эетрогенную активность (Злобина И.В., 1981), поэтому можно предположить, что в этом ряду возможно получить соединения, пшенные гормонального действия. Наличие у веществ подобной структуры пятичлениого кольца В вместо шестичленного, при расширенном кольце Ь приводит к существенному изменению геометрии молекулы, чем И обусловлено значительное снижение специфического гормонального действия ((ЗайЬагй, 1983).

В связи с этим нами был изучен 18-метил-В-нор- О-Г0М0-9-изо-зстрон (УН-51). В экспериментах на кроликах, получавших в течение

кам, получавшим диету обогащенную Ж в течение 90 дней значимых изменений уровней ХС и ТГ не отмечалось, однако снизилось содержание «<-ХС на 52.2%, и содержание ХС в аорте на 55.7%. Степень ате-росклеротического поражения снизилась с 57.5+5.9% до 27.5+9,82 (Р<0.05).

Введение кроликам, получавшим перорально Ж и УН-51 (20

о

60 дней диету, обогащенную ХС введении стероида 51 в дозе 20 мг/кг перорально привело к снижению уровня ТГ в сыворотке крови на 42.3% и Х0 в аорте на 54.0%. При введении данного соединения в дозе 7.5 мг/кг кроли-

мг/кг) и внутривено меченые I ЛПНП привело к уменьшению проникновения в аорту лшш. При этом наблюдалось и увеличение скорости выведения меченых ЛП из плазмы крови. При гипертриглицеридеши, индуцированной этанолом, применение УН-51 снижало на 147. уровень ТГ в сыворотке крови, а при введении его крысам с ДЛП, индуцированной детергентом "Тритон ЗД?-1339", уровень ХС снижался на 18%, а ТГ - на ггг. ун-51 не оказывал угнетающего действия на гонадотроп-ную функцию гипофиза Его ЛД^ 1.3 г/кг.

Таким образом, при отсутствии гормонального и гиподипидеми-ческого эффектов стероид 51 обладал выраженным антиатеросклероти-ческим действием. Кроме того, его применение не вызывало гипертриглицеридеши, а в ряде случаев способствовало снижению уровня ТГ в сыворотке крови и печени.

Все эти свойства, а также низкая токсичность исследованного стероида указывают на перспективность дальнейшего его изучения с целью получения разрешения на апробацию в качестве средства профилактики и лечения атеросклероза.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что 18-мстил-В-нор-0-гомо-9-иаоэстрон с низкой

токсичностью, полностью лишен гормонального действия, не увеличивает содержание ТГ в сыворотке крови, а такте оказывает выраженный антиатеросклеротический эффект, не изменяя содержания Ж в сыворотке крови.

2. Показано, что метиловый эфир 16,1б-диметид-В-гомо-8-изоэстрона обладает нивкой токсичностью, лишен гормональных и канцерогенных свойств и проявляет высокое гипохолесгеринемическов и анти-атеросклеротическое действие.

3. Использование метилового эфира б-окса-1>гомо-8-изоэстрона нормализует липидный спектр сыворотки крови овариэктомированных крыс. При этом гиполипидемическая активность в пять раз превышает его гормональное действие.

4. Установлено, что синтезированные новые 8-изоаналоги УН-190, УН-18 и УН-18а с выраяенным гормональным действием, не оказывают влияния на липиды сыворотки крови и печени.

5. Показано, что введение метильного заместителя в положение 4 в

ряду 8-изоаналогов, приводит к сиц^нт гиполипвдемическойи

цТероТропнсй

активности, а увеличение цепи в положении С-13 может выавать как значительное снижение гиполипидемической активности, так и уменьшение гормональной компоненты.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ;

1. Гиполипидемическое действие рацемического метилового эфира 16,16-диметил-0-гомо-8-иэозстрона//Вопр. мед. химии. -1987. -N8. -С. 6568 (совместно с ЕЕ. Рыженковым, А. А. Прокофьевым, Г. Г. Версисяном,

A. Г. Шаввой)

2. Ацетат рацемического 18-метил-0-гомо-8-изозстрона, обладающий антигонадотропной активностью //Авторское свидетельство N1351073 от 8.07.87 (совместно с А. Г. Шаввой, Т. Р. Вороное вой, а А. Гиндиным, а Е. Рыженковым, Е. В. Цирлшюй, В. а Корховым, Г. В. Никитиной)

3. Рацемический 4-метил-0-гомо-8-ивоэстрон, обладающий контрацептивной активностью //Авторское свидетельство N1351074 от 8.07.87 (совместно с А. Г. Шаввой, И. И. Елисеевым, В, А. Гиндиным, Е. Е Цирлиной, В. В. Корховым, а П. макушевой, Г. Е. Лупановой)

4. Диацетат рацемического 6- кета- Э- гомо-8- изоэстрадиола в качестве ингибитора биосинтеза тестостерона //Авторское свидетельством! 409900 от 8.04.89 (совместно с А. Г. Шаввой, И. В. Ивдэнко, Е. К Гриненко, & В. Корховым, Г. а Никитиной, а Л. Бородиной, Е. В. Цирлиной)

5. Диацетат рацемического 2- метил.-0- гомо-8-изоэстрадиола, обладающий контрацептивной активностью //Авторское свидетельство N1568498 от 1.02.90 (совместно с А. Г. Шавой, Е. а Гриненко, а а Корховым, Г. В Никитиной)

6. Гиполипидемическая активность рацемического 18-метил-И-го-мо-В-нор-9-изоэстрона//Хим. фарм. журн.-1991.-N8.-С. - (совместно с

B. Е. Рыженковым, А. А. Прокопьевым, И. Е Ишэкко, А. Г. Шаввой)

7. Изменение липидов и липопротеидов сыворотки крови крыс при оваризктомии и введении метилового эфира б-окса-О-го-мо-8-изоэстрона //Вюл. экс. биол. и мед. -1992. -N8. -с. 148-150 (совместно с А. Г. Шаввой, а Т. Лозовским, В. Е. Рыженковым)

8. Оценка некоторых моделей экспериментальной диелиполро-теидемии при изучении веществ гиполипидемического действия //Пат. физиол. и экс.тер. -1994. -N4. -С.33-36 (совместно

с В..Е. Рыженковым, А. М. Чистяковой, Ю. В. Фроловой, Е Т. Лозовским, Л. Б. Васильевой)

9. Гиполипидемическое действие б-окса-0~гомо-8-изоэстрона и его метилового эфира. //Вол. эксп. биол. и мед. -1994. -N3. -

C. 262-264 (совместно с А. Г. Шаввой, В. Т. Лозовским, В. Е. Рыженковым).