Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Гипоксическая иммуносупрессия: морфофункциональные критерии и способы фармакологической профилактики

^ЙнисМрство здравоохранения и медицинской

2 д щ^м^шленности российской федерации

челябинский государственный медицинский

институт

На правах рукописи

валеева Гузэль Рифхатовна

ГИПОКСИЧЕСКАЯ И ММУ12 О СУПРЕССИЯ : МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ КРИТЕРИИ И СПОСОБЫ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ

14.00.15 - патологическая анатомия 14.00.25 - фармакология

автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск, 1995

Работа выполнена в Челябинском государственном медицинском институт

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор,

член Российского отделения Международной Академии Патологии ВЛ.Ковапенко

доктор медицинских наук, профессор В.И.Ратников

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор, член-

корреспондент Академии Инженерных наук РЗ В.Г.Бычков

доктор медицинских наук, профессор Ф.А.Зарудий

Ведущее учреждение:

Московская Медицинская Академия им. И.М.Сеченова

Защита состоится "_" _ 1995г. в "_" часов н

заседании диссертационного совета К-084.04.04 при Челябинске! медицинском институте (454092, г.Челябинск, ул.Воровского 64)

С диссертацией можно познакомиться в библиотеке Челябинскоп медицинского института.

Автореферат разослан "_"_ 1995 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат медицинских наук

Л.М.Синельникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Гипоксия является одним из ■ниверсальных патогенетических механизмов болезней (Ивановская Т.Е., 985; АнтоненкоВ.Г., 1986; Гиппенрейтер Е.Б., 1990; Адо А.Д., 1990; Солчинская А.З. и др., 1994). В то же время известно, что при гипоксии [асто регистрируются иммунные нарушения, характер и выраженность :оторых зависит от тяжести гипоксического фактора (Козлов В.А. и ;р., 1982; Федулов О.И.,1984; Дурмишидзе Н.С., 1985; Чеглякова В.В. [ др., 1985; Тулебеков Б.Т. и др., 1987; Филев В.В. и др., 1988; Гарыбаева Д.В.., 1990; Kmetz J., Anhony А., 1972; Anhony А., 1980; Jucley P., 1983; Climek N.. 1984; Marion D. e.a., 1985; Spreafico F., 985). Имеющиеся публикации раскрывают лишь отдельные звенья [арушений как гуморального, так и клеточного иммунных ответов при оздействии кислородного голодания, не дают целостного представления I состоянии лимфопоэза в морфофункциональном плане при этом кстремальном воздействии.

Перспективным представлялся путь комплексного юрфофункционального исследования нарушений, возникающих в истеме центральных и периферических органов иммунитета, которые юзволили бы не только расширить наши представления о патогенезе гндуцированного иммунодефицита при острой гипоксической гипоксии, [о и разработать эффективные способы их фармакологической [рофилактики.

В связи с развитием иммунофармакологических исследований Закс A.C. и др., 1980; Ковалев И.Е., 1981; Ратников В.И., 1982-1991; лтешев Б.С., 1984; Лазарева Д.Н., Алехин Е.К., 1985; Макарова Н.В., Госкутов И.А., 1990) большое внимание уделяется изучению [ммунотропной активности различных препаратов. При этом имеются ишь отдельные сведения об особеностях коррекции юстгипоксической иммуносупрессии и целесообразности использования [ммуномодуляторов с различными механизмами действия для [редотвращения неблагоприятного воздействия гипоксии на систему [ммунитета (Важенина З.П., 1986; Курилов И.Н., 1990; Макарова Н.В., 'атников В.И., 1991). Это определило интерес к новым эармакологическим агентам, регулирующее действие которых очеталось бы с их противогипоксическими свойствами. Данных,

указывающих на какую-либо фармакологическую группу, обладающую I комплексе антигипоксическим и иммунопротективным действием I доступной нам отечественной и зарубежной литературе не обнаружено Пирацетам, как и его сернистый аналог изучались мало, особеннс недостаточно представлены иммунокоррегирующее действие препарато] группы альфа-пирролидона при дефекте иммунитета, обусловленнок кислородным голоданием. Значительный интерес представляют также производные гуанилтиомочевины, в частности амтизол (Кулагин В.К. Болдина И.Г., 1981; Виноградов В.М., Урюпов Ю.Ю., 1985 Барсуков С.Ф., 1991; Кашина Е.А.Д995), обладающий антигипоксически\ действием.

Цель исследования состоит в установлении морфофункциональньо критериев экспериментальной постгипоксической иммуносупрессии I эффективности ее фармакологической протекции при использованш ряда препаратов антигипоксического действия.

Задачи работы:

1. На модели гипоксической гипоксии оценить характер и динамик} структурно-функциональных изменений в органах иммунопоэза (костньп мозг, тимус, селезенка, лимфоузлы).

2. Исследовать состояние гуморального и клеточного иммунны) ответов, а также функции мононуклеарных макрофагов, выделенные из костного мозга и селезенки у мышей, подвергнутых воздействии гипоксического фактора.

3. Установить действие антигипоксанта пирацетама, еп серосодержащего аналога (тиопирацетам) и производного гутимина амтизола как возможных иммунопротекторов на основе анализ! проявлений фармакоиндуцированного патоморфоза гипоксическо! иммуносупрессии.

Научная новизна результатов проведенного исследованиз заключаются в раскрытии малоизученных звеньев морфо- и патогенез, постгипоксических нарушений в центральных и периферических орган аз иммунитета на основе комплексного морфофункционального анализ; экспериментальной модели гипоксии. Впервые выявлено, что выраженно« снижение содержания Т- и В-лимфоцитов в исследуемых органам возникает в связи с преобладанием некротических изменений и апоптоз; лимфоцитов над процессами регенерации и нарушениями циркуляцш лимфоидных клеток. Новыми являются данные о снижении адгезивны) возможностей при клеточно-клеточном взаимодействии лимфоцитов макрофагов, эпителиоретикулоцитов, кубического эндотели]

госткапилляров как существенном явлении в патогенезе гипоксической шмуносупрессии, характеризующейся нарушением рециркуляции и сооперации иммунокомпетентных клеток в лимфоидных органах.

Новым направлением, почти не представленным ранее, является «учение ноотропных препаратов из группы пирацетама в качестве шмунопротективных средств при дефиците кислорода в организме. -Гаучная новизна работы заключается также в раскрытие особенностей 1атоморфоза гипоксической иммуносупрессии, совокупность которых юзволяет охарактеризовать амтизол как перспективный иммуномодулятор 1ри указанном патологическом состоянии.

Практическая значимость работы. Установленные закономерности логут служить методической основой для скриннга и изучения химических ¡еществ с иммунотропными и антигипоксическими свойствами, в которых 1уждается практическое здравоохранение.Иммуноморфологическая сарактеристика воздействия амтизола позволяет рекомендовать расширение слинического изучения его как препарата доя коррекции иммуносупрессии 1ри различных состояниях, сопровождающейся развитием кислородной ^достаточности.

Внедрение результатов исследования. Данные о изменениях органов шмунной системы и иммунопоэза при гипоксии, а также терапевтическом 1атоморфозе постгипоксической иммуносупрессии используются в небном процессе, при изложений соответствующих разделов на кафедрах татологической анатомии Челябинского и Башкирского медицинского шститута, на кафедре клинической фармакологии с курсом иммунологии эГМИ. По результатам проведенного исследования Челябинским медицинским институтом выданы удостоверения на рац. предложения:

от 17.03.86 «Способ изготовления микрокамер», № 58 от 27.11.87 <Микрометод оценки функциональной активности моноцитов и {ейтрофилов». Башкирским медицинским институтом - № 1401 от 17.11.91 «Способ морфометрической оценки клеточного взаимодействия t лимфатичеких узлах», № 1402 от 27.11.91 «Способ морфометрической щенки циркулирующего пула лимфоцитов в лимфатических узлах». Эти )ац. предложения внедрены в практику работы лабораторий ЦНИЛ БГМИ, щагностической лаборатории ЦПАО больницы № 13 г. Уфы.

На защиту выносятся следующие положения.

1. При комплексном морфофункциональном исследовании органов шмунопоэза, динамики альтеративных, репаративных и циркуляторных вменений, развившихся в постгипоксическом периоде, установлено, что

острая гипоксическая гипоксия приводит к развитию комбинированного иммунного дефицита. В восстановительном периоде постгипоксической иммуносупрессии наряду с увеличением числа клеточных элементов мононуклеарно-фагоцитирующей системы в лимфоидных органах и усилением их фагоцитирующей функции сохраняется тенденция к снижению интенсивности контактов лимфоцитов с макрофагами.

2. Протективное воздействие фармакологических препаратов группы альфа-пирролидона при указанной индуцированной патологии проявилось восстанолением гуморального иммунного ответа в ранние сроки постгипоксического периода (5 и 10 сутки), что сопровождалось снижением проявлений циркуляторных расстройств в иммунных органах, влиянием на пролиферацию и дифференцировку лимфоцитов костного мозга и ослаблением деструкции в тимусе.

3. Амтизол превосходил эффекты пирацетама и его сернистого деривата в отношении предупреждения постгипоксической иммуносупрессии с более выраженной репарацией в В-зависимых зонах, стабилизацией межклеточных контактов в органах иммунопоэза, сокращением сроков восстановления функций иммунокомпетентных клеток.

Апробация работы и публикации. Материалы исследования были доложены на общесоюзной конференции «Молодые ученые ускорению теории и практики медицинских наук».- Самарканд, 1986; на конференции «Роль молодых ученых и специалистов в совершенствовании медицинской помощи населению области».- Челябинск, 1987; на 1 межрегиональной конференции патологоанатомов.- Тюмень, 1991; на областном заседании патологоанатомов Челябинской области (1988), на заседании общества патологоанатомов в г.Уфе (1989), на заседании кафедр патологической анатомии и фармакологии по экспертизе диссертационного исследования (1995). По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания использованных методов исследований, 3 глав с изложением собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы, включающего источника, из которых - отечественных и

- зарубежных, работа иллюстрирована таблицами, рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Эксперименты проведены на 1750 линейных мышах (СБА и ÜBAx C57B1/F1). В основных сериях моделирование гипоксии достигалось жспозицией животных в барокамере при 0,42 атм в течение 12 часов. "Гостроение экспериментов было следующим: 1 серия - индукция гипоксии; I серия - трехкратное введение пирацетама перед индукцией гипоксии, юследняя производилась инъекция за полчаса перед помещением кивотных в барокамеру (IIa серия в дозе ЮО мг/кг, Нб серия - в дозе >00 мг/кг, Ив серия - доза 800 мг/кг); III серия - введение тиопирацетама i дозе 50 мг/кг перед индукцией гипоксии (Illa серия - 1 раз, Шб серия 3 раза); IV серия - введение амтизола в дозе 25 мг/кг 3 раза перед пвдукцией гипоксии.

В работе использованы субстанции пирацетама, его структурного ;еросодержащего аналога и амтизола. Пирацетам, амтизол разводили физиологическим раствором, а водонерастворимое производное пирацетама 1рименяли в виде эмульсии с незначительным количеством Твина-80. Трименяемый для разведения реактив не оказывал влияния на иммунные >еакции, что имело опытное подтверждение. Контрольные исследования ¡ыполнены на интактных мышах, содержавшихся в одинаковых условиях : подопытными и не подвергавшихся воздействию гипоксического фактора.

Сравнительное морфогистохимическое изучение* иммунных органов доводилось в динамике на 1, 5, 15 и 25 сутки постгипоксического 1ериода. В связи с тем, что иммунологические методы требовали :пециальной подготовки (введение эритроцитов барана), сроки их анализа 5ыли несколько сдвинуты к 5, 10, 15 и 25 суткам.

Из опытов мышей выводили путем цервикапьной дислокации на фоне поверхностного эфирного наркоза.

Макроскопическое исследование органов иммунопоэза (костный ¿озг, тимус, селезенка, лимфатические узлы) включало также измерение дассы органов и тела животных. Гистологический анализ, проводился m срезах окрашенных обычными и специальными методами, в том [исле пиронином G - метиленовым зеленым по Браше, азур-эозином ю Романовскому-Гимзе, реактивом Шиффа после воздействия йодной :ислотой - ШИК - реакция (Меркулов Г.А.,1969). Исследовали также 1Ктивность окислительно-восстановительных энзимов в цитоплазме

* Часть иммунологических и морфологических исследований проведена ! ЦНИИ ЧМИ (зав. - профессор С.Н.Теплова)

лимфоцитов - сукцинатдегидрогеназы (СДГ-К.Ф. 1.3.99.1), гликолиза -лактатдегидрогеназы (ЛДГ-К.Ф.1.1.1.8), транспорта электронов - НАД.Н2 (К.Ф. 1.6.2.1.) и НАДФ.Н2 - диафоразы (К.Ф. 1.6.2.3). Идентификация Ти В-клеток, изучение функционального состояния макрофагов регистрировались по интенсивности реакций на неспецифическую эстеразу (НЭ-К.Ф.3.1.1.1.), щелочную фосфатазу (ЩФ-К.Ф.3.1.3.1.) и кислую фосфатазу (КФ-К.Ф.3.1.3.2). Реакции контроля проводили без субстрата (Пирс Э., 1962; Берстон Р., 1965).

Сравнительный морфометрический анализ основывался на принципах, предложенным Г.Г.Автандиловым (1980).

В костном мозге изучалось содержание основных ростков кроветворения. В тимусе, как и других исследуемых органах, подсчитывали площади зон и клеточное содержание всех видов клеток во всех функциональных зонах. По кариопикнотичным и сморщенным тимоцитам - уровень их гибели, производили подсчет телец Гассаля и отдельных эпителиоретикулоцитов, описывали клеточные взаимоотношения между гистиоцитами-лимфоцитами и эпителиоретикулацитами. В селезенке дополнительно анализировали клеточно-клеточные реакции герминативных центрах, маргинальной зоне, красной пульпе, в лимфатических узлах - в центрах и мякотных тяжах и паракортексе. С целью оптимизации исследования и уточнения процессов миграции Т-клеток с учетом рекомендации Р.М.Хаитова (1977) и в собственной модификации, в паракортексе изучали рециркуляцию и созревание лимфоцитов (рац. предпож. №1401 от 20.06.91). Процессы кластерообразования по типу «гроздьев» в красной пульпе селезенки и по типу «розеток» в синусах лимфоузлов регистрировали по количеству активно вступающих в взаимодействие макрофагов и лимфоцитов (рац.предл .№1402 от 20.06.91).

Функциональные методы исследования заключались в изучении гуморальной иммунной реакции в селезенке и периферической крови (Jerne-Nordin, 1963; Cuningam, 1968; Никитин В.М.,1982), клеточной иммунной реакции in vivo (Langrade,1980), мононуклеарных макрофагов костного мозга, селезенки по тестам поглотительной активности микрочастиц латекса и лизосомальной активности (Фрейдлин И.С., 1984; Эберт Л.Я. и др., 1983; Маянский Д.Н., 1986).

Экспериментальные данные обрабатывали методами вариационной статистики с вычислением средней арифметической (М), стандартной ошибки (т). Достоверность различий между сериями и сроками определяли с помощью критерия Стьюдента (t), позволяющему установить статистическую значимость разницы (р). Результаты принимались за

достоверные при р<0,05 (Большаков JI.H., Смирнов A.B., 1983).

Результаты исследования и их обсуждение

Изучение динамики морфологических изменений в органах иммунопоэза, функциональных нарушений в системе мононуклеарных фагоцитов, иммунологических тестов свидетельствовало о развитии у иышей в постгипоксическом периоде комбинированной иммунной недостаточности. При этом регистрировалась определенная совокупность цисциркуляторных, некробиотических и регенераторных процессов в зависимости от срока исследования после воздействия гипобарической гипоксии.

У животных I серии отмечалось достоверное снижение содержания нимфоидной популяции клеток костного мозга, особенно выраженное з первые 5 суток периода наблюдения (рис.1). Обнаруженные изменения иогут свидетельствовать, как известно, о прямом токсическом эффекте, э сдвигах циркуляции Т- и B-клеток из других органов и нарушениях поэза B-лимфоцитов in situ.

Совокупность морфологических сдвигов в тимусе оценена нами сак проявления акцидентальной трансформации его, что нашло частное этражение в динамике изменения массы железы (рис.2). Многократно превышающая «интактный» фон гибель тимоцитов, сопровождалась коллапсом коры и значительным снижением корково-медуллярного индекса (КМИ) до 15 суток ребаунда (рис.2). При этом регистрировалось уменьшение интенсивности реакций на СДГ и НЭ в цитоплазме гистиоцитов, особенно в первые сутки наблюдения. Подобные язмеменения макрофагов по B.C. Утешеву (1984) могли отражать блокаду функции гистиоцитов. В нашем эксперименте сохранение альтеративных процессов в вилочковой железе до поздних сроков наблюдения (при восстановлении гистоэнзимологических свойств макрофагов на 5 сутки) :очеталось с фиброзированием органа, что обусловливало персистенцию ;е иммунорегуляторной дисфункции.

В тельцах Гассаля обнаружены изменения, отражающие определенную фазность в различные периоды постгипоксического состояния. С одной стороны, отмечены характерные .юрфогистохимические критерии гиперфункции эндокринной части келезы: увеличение содержания эпителиоретикулоцитов с набуханием ix цитоплазмы на фоне возрастания ШИК-позитивных включений, разрыхления клеточных групп. С другой стороны,- развивался комплекс щстрофических изменений с накоплением кератогиалина и появлением

Рис.1. Динамика изменения лимфоцитоподобных клеток костного мозга в миелограмме в постгипоксический период в сериях эксперимента

37

32

ю 27

и к

5

cL 22к

I

U

17

12

\

X N \ V

S V -. |___ __г<

________--—

^————

• •

•--

Серия Т Серия Па Серия 116 Серия Пв Серия Illa Серия Шб Серия IV Контроль

15

25 (сутки)

Рис.2. Динамика изменений показателей в тимусе в постгипоксический период: индекса массы тимуса (ИМТ) и корково-мозгового индекса (КМИ)

ИМТ КМИ

Гиперфункция эпителиоретикулоцитов отражает, вероятно, прис-побительную реакцию органа на выраженный лимфоцитолиз. В то же время следует принять во внимание результаты исследования А.А.Ярилина и др. (1986), свидетельствующие о том, что высокие концентрации тимозина могут угнетать'миграцию клеток-предшественников в тимус. К тому же данные М.А.Меньшовой (1986) показывают, что при гиперфункции железы увеличивается пролиферация Т-супрессоров. Все эти сдвиги несомненно обусловили и прослеженные нарушения межклеточного взаимодействия между тимоцитами, макрофагами и эпителиоретикулоцитами, что являлось, по-видимому, одной из предпосылок к развитию дефектов последующих этапов иммуногенеза.

Проведенными исследованиями установлено, что гипобарическая гипоксия вызывает существенные изменения и в периферических органах иммунной системы. Так, значительно уменьшалось количество лимфоцитов в Т- и В-зависимых зонах селезенки и лимфатических узлов на фоне появившихся в В-зависимых зонах признаков репарации на 5 сутки постгипоксического ребаунда, накопления плазмобластов и плазмоцитов в маргинальной зоне фолликулов, красной пульпе селезенки и мякотных тяжах лимфоузлов. Одновременно в герминативных центрах лимфоидных фолликулов периферических органов состояние компонентов клеточно-клеточного взаимодействия дендритных клеток и лимфоцитов было резко нарушенным. Причем, на фоне некробиоза лимфоидной ткани светлых центров дендритные клетки их трансформировались, приобретали способность к фагоцитозу. Встречались в основном единичные лимфоциты, что могло означать их недостаточную пролиферативную активность со снижением выработки первичных форм антител (Ляшенко В.А., 1988). Данный феномен имел подтверждение в иммунологическом тесте на антителообразование, а именно регистрировалось снижение АОК в селезенке более, чем на 50% до 15 суток наблюдения (табл.1).

Процессы усиления регенерации в указанных выше зонах сопровождались наколением пиронинофильных элементов, что предполагало всплеск адаптации за счет иммуноглобулинов разных классов. Однако, усилившиеся явления апоптоза с 5 до 15 суток постгипоксического периода и активация фагоцитоза снижали, по-видимому, значимость этой адаптивной реакции. Результаты анализа клеточно-клеточного взаимодействия между макрофагами и лимфоцитами как в красной пульпе селезенки, так и в синусах лимфоузлов подтверждали это предположение (рис.3). Известна важная роль подобного взаимодействия:

Таблица 1

Динамика, изменения числа антителообразующих клеток (АОК) селезенки в сериях эксперимента в постгипоксический период

(М±ш), п-15

Серии Число АОК на 106 селезенки

5 10 15 25

I 139,0±12,5*** 188,0+11,4*** 201,0+15,0*** 314,3±19,5

Па 143,0+12,7*** 203,4+19,9*** 240,0+16,4*** 316,0±20,6

Иб 200,0+16,8*** 337,9±18,4 367,0±17,8 415,3±16,1

Ив 205,0+14,0*** 336,4±21,3 359,0+15,7 394,2±27,4

Illa 192,3+14,9*** 374,6±18,3 396,9±23,3 403,0+12,8

Шб 197,5+23,0*** 2730б±33,5* 346,2±12,8 402,б±27,5

IV 348,0+23,1 414,6+17,2 400,6±23,8 418,8+16,7

Примечание: Контроль 389,0+21,2 *р<0,05 **р<0,01 ***р<0,001

Таблица 2

Динамика изменения повышенной чувствительности замедленного типа (ПЧЗТ) в сериях эксперимента в постгипоксический период (М±ш), п-15

Серии ПЧЗТ (х10"2мм) log

5 10 15 25

I 30±3,1*** 37±3,8*** 57+4,1 60±4,2

Па 32±2,6*** 41±4,2** 55±3,8 63+2,1

Пб 47+3,4** 50+2,8* 58+4,8 64±4,3

Пв 53+2,2* 58±3,9 61±2,1 65±2,9

Ша 41+2,1*** 48+3,7* 52±3,4 62+3,8

Шб 39+2,9*** 40+2,4*** 50+3,3 50±3,2

IV 50+2,7* 53+2,3* 60+3,8 65+2,7

1римечание: Контроль 63+2,5 (х10"2мм) *р<0,05 **р<0,01 ***р<0,001 5, 10, 15, 25 - сутки

Рис.3. Динамика изменения интенсивности клеточно-клеточного контакта в синусах лимфатических узлов в постгипоксический период в сериях экспериментов

Число лимфоцитов во взаимодействии с макрофагами

Процент активных макрофагов-участников взаимодействия

5,0 4,5

g 4,0

* 3,5

<и

5 з-°

2,5 2,0

к с с ::

к< 1——1 L... • vijesá

7-П

R »

•у

•

15

30

25 (сутки)

» Серия I

_9_ Серия Иа

_Д_ Серия 116

_± Серия Пв

—о— Серия Illa

___Серия Шб

.....Серия IV

к Контроль

15

25 (сутки)

1

[редположение (рис.3). Известна важная роль подобного взаимодействия: распознавание антигенов, их метаболическая деградация и последующая резентация клеткам-эффекторам (Сапов В.Ф.,Карпов B.C., 1980; алактионов В.Г., 1983; Гольдберг Е.Д. и др., 1993; Eertwegh е.а., 1992; Litter е.а., 1993).

О существенных изменениях созревания и миграционных свойств ммуноцитов свидетельствовало подавление адгезии лимфоцитов к эндотелию юсткапилляров в лимфатических узлах, хорошо выраженное с 1 суток [аблюдения, снижение эритроцитарно-лимфоцитарного соотношения в торону уменьшения числа последних в просвете посткапилляров. Причем, просвете венул чаще встречались плазматические клетки, что не было арактерным для контроля. Согласно точки зрения Р.М.Хаитова (1975), ^.А.Ярилина и др. (1985) подобные сдвиги могут отражать подавление уморального и клеточного иммунных ответов при экстремальных оздействиях.

На фоне увеличения количества макрофагов в центральных и [ериферических органах поглотительная и лизосомальная активность анных клеток их не возростала, что объясняется, возможно, большей их функциональной нагрузкой из-за массовой гибели лимфоцитов не только следствии гипоксии, но и нарушений в системе иммунорегуляции.

При проведении фармакологических экспериментов установлено, что зученные нами препараты оказывали отчетливый иммунопротективный ффект в опытах с моделированием гипоксической гипоксии. Указанное ействие проявилось в двух аспектах: во-первых, уменьшением выраженности юрфогистохимических сдвигов, во-вторых, укорочением сроков осстановительного периода в органах иммунопоэза и со стороны гуморальных [ клеточных имунных реакций (табл.1 и 2).

В сериях опытов с использованием пирацетама установлена озозависимая динамика морфологических и иммунологических показателей, 'ак, указанный препарат в дозе 100 мг/кг массы тела практически не [зменял сроков восстановления по данным изученных тестов. При величении дозы пирацетама до 500 мг/кг отчетливо проявлялось [ммунопротективное действие препарата. Это выразилось в нормализации роцента лимфоидных клеток по данным миелограммы (рис.1), в тимусе [мело место укорочение сроков восстановления количества средних и ольших по размеру лимфоцитов. В указанной экспериментальной руппе, начиная с 5 суток ребаунда, регистрировались признаки активации епаративных процессов по данным увеличения количества [иронинофильных зрелых клеток в селезенке. Подобная направленность

документировалась и восстановлением гуморального иммунного ответг и гиперчувствительности замедленного типа на Ю сутки (табл.1 и 2) тогда как в I серии упомянутые изменения нивелировались только ? 25 суткам восстановительного периода. В лимфатических узлах В-зависимые зоны по площади и клеточности превосходили таковые } мышей, помещенных в барокамеру без предварительного введенш препарата. Основой позитивного влияния пирацетама является, по видимому, известное антигипоксическое действие данного ноотропа. Нг это, в частности, указывала направленность гистохимических сдвигов, < именно меньшая активность лактатдегидрогеназы (у мышей I cepw активность данного энзима в клетках резко возрастала). Одновременнс наблюдаемые повышение NAD- и NADP-112-редуктаз отражал* интенсификацию под влиянием пирацетама реакций окислительно восстановительного потенциала клеток, что соответствовало имеющим« представлениям о фармакодинамике этого препарата (Ковалев Г.В.,1990)

Установлено сходство иммунопротективного действия пирацетамг в дозах 500 и 800 мг/кг. У животных Пв серии сроки восстановлена как морфологической картины, так и показателей иммунных ответо! укорачивались в среднем на Ю дней (табл.1). Отличительно* особенностью данных, полученных в этой подсерии опытов, былс обнаружение признаков большего нормализующего влияния н; кровообращение в центральных и периферических органах иммунно* системы. Характерен факт отсутствия изменения соотношенш функциональных зон тимуса и кластерообразования в синуса? лимфатических узлов (рис. 3).

Таким образом, эксперименты с использованием пирацетама i качестве иммунопротективного средства показали перспективу егс применения с указанной целью.

При сопоставлении иммунопротективных эффектов пирацетама i его сернистого аналога получены данные, свидетельствующие о том, чтс однократное введение тиопирацетама способствовало развитию эффектов сходных с таковыми у мышей 116 серии. Причем, однократное введенш тиопирацетама способствовало снижению комплекса дистрофических * кистозных изменений телец Гассаля, разгруппировке эндокринньи телец на отдельные клетки.

В тоже время увеличение кратности введения препарата до : раз, т.е. по схеме не только не сопровождалось дальнейшим приростох протективного эффекта, но наоборот, индуцировало изменения свидетельствующие о признаках иммуносупрессии. Особенно это касалоо

неточного звена иммунных процессов (табл.2).

В эксперименте с использованием амтизола получены данные, видетельствующие о наличие у указанного препарата выраженных [ммунопротективных свойств. В органах иммунопоэза у интактных 1ышей, которым внутрибрюшинно вводили амтизол, выявлялись признаки [ммунопротективной эффективности по критериям: увеличение числа [иронин-положительных клеток, созревание герминативных центров, юрмализация числа лимфоцитов в межклеточном взаимодействии в инусах лимфатических узлов (рис.3), по реакции антителообразования n vitro (табл.1). Важной особенностью иммунопротективного действия мтизола явилось более значительное сокращение восстановительного [ериода в сравнении с сериями опытов, в которых использовались [ирацетам или тиопирацетам. Так, восстановление антителообразующей функции достигалось к 5 суткам, а к 15 суткам периода наблюдения. )бращал на себя внимание тот факт, что амтизол в большей степени, :ем другие изученные ноотропы оказывал позитивное действие на истиоциты в исследуемых органах. Данный фармакологический агент пособствовал также восстановлению фагоцитарной активности елезеночных и костномозговых макрофагов.

Таким образом, в процессе выполнения работы по изучению фармакологической профилактики развития постгипоксической [ммуносупрессии получены данные, что с подобной целью адекватно [рименение изученных антигипоксических препаратов. Их использование южет быть обоснованным в случаях предполагаемого воздействия на |рганизм гипоксических факторов во многих жизненных ситуациях. 1ри этом возможен также дифференцированный подход к их выбору учетом того, что пирацетам в равной степени защищал гуморальный [ клеточный иммунные реакции, тоща как амтизол особенно эффективно осстанавливал антителообразование, а его влияние на клеточную [ммунную реакцию существенно не отличалось от действия других [зученных производных альфа-пирролидонов.

ВЫВОДЫ

1. На основании комплексного морфофункционального [сследования органов иммунопоэза, динамики альтеративных, епаративных и циркуляторных изменений, развившихся в юстгипоксическом периоде, установлено, при острой гипоксической ипоксии формируется комбинированный иммунный дефицит.

2. Нарушения регулирующей роли центральных органов иммупоэза проявляются значительной, особенно в первые пять суток постгипоксического периода, репрессией лимфоидного ростка кроветворения с изменением дифференцировки клеток, развитием выраженных фаз акцидентальной трансформации тимуса при незавершенности репаративных процессов в последнем к 25 суткам после воздействия гипоксического фактора.

3. Структурно-функциональные повреждения клеточного звена иммунитета документируются снижением содержания лимфоцитов в Т-зависимых зонах периферических органов, изменениями миграционных способностей Т-клеток и их взаимосвязей в синусах лимфоузлов, красной пульпе селезенки, а также in vivo по результатам реакции гиперчувствительности замедленного типа.

4. Динамика реакции зародышевых центров фолликулов селезенки, лимфатических узлов, других В-зависимых зон, в частности мякотных тяжей и красной пульпы, их плазматизации, изменений антителообразующей функции лимфоцитов селезенки свидетельствовала о повреждении В-звена иммунитета с более ранней его репарацией.

5. В восстановительном периоде наряду с увеличением числа клеточных элементов мононуклеарно-фагоцитирующей системы в лимфоидных органах и активацией их фагоцитирующей функции наблюдается снижение интенсивности контактов этих клеток с лимфоцитами.

6. Установлен иммунокорригирующий эффект пирацетама, примененного перед индукцией гипоксической гипоксии трехкратно е дозе 500 мг/кг, проявляющийся на 10-е сутки постгипоксическогс периода достоверным ограничением морфологических признаков повреждения В-звена иммунитета с последующим усилением процессон репарации в органах - исполнителях. Увеличение дозы этого препарате до 800 мг/кг при указанной кратности введения ограничивает репрессии: лимфоидных клеток центральных органов с изменением ряда параметроЕ акцидентальной трансформации тимуса, нормализацией массы селезенки,

7. Серосодержащий аналог пирацетама в дозе 50 мг/кг также способствовал пролиферации и накоплению лимфоцитоподобных клеток костного мозга в раннем постгипоксическом периоде, однако без четкой их тенденции к дифференцировке, особенно при трехкратном введении этого вещества. Одновременно регистрируется сокращение сроков восстановления антелообразования по сравнению с использованием пирацетама.

8. Амтизол (доза 25 мг/кг, трехкратно) превосходил эффекты ирацетама и его деривата в отношении предупреждения остгипоксической иммуносупрессии с более выраженной репарацией в I-зависимых зонах, стабилизацией межклеточных контактов в органах ммунопоэза, сокращением сроков восстановления функций ммунокомпетентных клеток.

СПИСОК НАУЧНЫХ ТРУДОВ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Иммунологические нарушения и проблемы их коррекции при строй гипоксии //Факторы клеточного и гуморального иммутета при азличных физиологических и патологических состояниях: Тез.докл. аучн. конф,- Челябинск, 1986.- вып.Ю.- С. 26-27.

2.Пролиферация полипотентных стоволовых кроветворных клеток условиях комбинированного воздействия на организм гипоксии и

блучения //Кроветворные клетки-предшественники в механизмах овреждения и компенсации системы крови при действии на организм кстремальных факторов: Тез.докл. к симп.- Челябинск, 1986.- С. 15 :оавт. Рябинина Н.Е.)

3. Морфология лимфоидной ткани при острой экспериментальной ипоксии и ее коррекции //Молодые ученые - ускорению теории и рактики медицинских наук: Тез.докл.- Самарканд, 1986.-С.15-16.

4. Иммунный компонент антигипоксических эффектов пирацетама 'Здоровье человека в Сибири: Тез.докл.конф.- Красноярск, 1986.-!.93 (соавт. Важенина З.П.).

5. Морфофункционапьная характеристика иммунного дефицита при ипоксической гипоксии и введении иммунокорректоров //Заболевания рганов дыхания у детей: Сб. научн.тр. - Челябинск, 1987.- С. 159-164 :оавт. Ратников В.И.).

6. Иммунологические критерии эффективности производных альфа-ирролидона при терапии иммунодепрессивных состояний различного гнеза //Актуальные проблемы иммунологии. Иммунодефициты и ммунокоррекция: Тездокл. научн.конф.- Владивосток, 1987.- С.123-124 ;оавт. Важенина З.П.).

7. Влияние амтизол а на динамику морфологических изменений в рганах иммунопоэза мышей подвергнутых острой гипоксической ипоксии //Иммуномодуляторы и их значение в инфекционной и

неинфекционной патологии: Мат. Всесоюзного пленарн. зас. научн Совета по проблемам антибиотиков. - Москва, 1987.- С. 134-136 (соавт. Ратников В.И., Коваленко B.JI.).

8. Влияние экзогенной гипоксии на макрофаги селезенки //Рол1 молодых ученых и специалистов в совершенствовании медицинской помощи населению области: Тез. докл. научн. конф,- Челябинск 1987.- С.20-21.

9. Фармакоиммунокоррекция при гипоксических состояния? //Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различны? физиологических и патологических состояниях: Тез. докл. научн конф.- Челябинск, 1988.- вып.11.- С.162-163. (соавт. Корянов А.И. Лоскутов И.А.).

10. Сравнительная оценка состояния иммунной системы прг действии различных экстремальных факторов на организм //Патологш дыхания, крови и регулирующих систем организма и принципы и> коррекции нарушений: Тез. докл. научн. конф,- Ижевск, 1989.- C.10-li (соавт. Егрищин A.B.).

11. Кинетика клеточных реакций костного мозга i постгипоксическом периоде //Актуальные вопросы патологическо* анатомии заболеваний населения Урала и Западной Сибири: Мат. докл 1 межрегиональной конф. патологоанатомов.- Тюмень, 1991.- С. 150 152.

12. Актуальные вопросы морфогенеза патологической анатомш важнейших заболеваний человека //Актуальные вопросы npaKTH4ecKoi и теоритической медицины: Мат. . научн. конф. института.-Челябинск, 1994.- С. 158-164 (соавт. Коваленко B.JI., Самохин П.А. Гиниатуллин Р.У. и др.)