Автореферат и диссертация по медицине (14.01.01) на тему:Генетические детерминанты привычного невынашивания беременности: факторы ангиогенеза, гемостаза, ремоделирования экстрацеллюлярного матрикса в эндометрии женщин с синдромом привычной потери беременности I триместра

На правах рукописи

РАШИДОВ ТИМУР НАИЛЬЕВИЧ

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ДЕТЕРМИНАНТЫ ПРИВЫЧНОГО НЕВЫНАШИВАНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ: ФАКТОРЫ АНГИОГЕНЕЗА, ГЕМОСТАЗА, РЕМОДЕЛИРОВАНИЯ ЭКСТРАЦЕЛЛЮЛЯРНОГО МАТРИКСА В ЭНДОМЕТРИИ ЖЕНЩИН С СИНДРОМОМ ПРИВЫЧНОЙ ПОТЕРИ БЕРЕМЕННОСТИ I ТРИМЕСТРА

14.01.01 - акушерство и гинекология 03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 5 ид? ZG12

Москва 2012

005013677

Работа выполнена на кафедре акушерства и гинекологии №1 лечебного факультета Первого МГМУ им. И.М.Сеченова и на базе лаборатории генных и клеточных технологий кафедры биологической и медицинской химии факультета фундаментальной медицины МГУ им. М.В.Ломоносова.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Е.М. Демидова

кандидат медицинских наук, доцент, старший научный сотрудник лаборатории генных и клеточных технологий Факультета фундаментальной медицины

ГОУ ВПО МГУ им. М.В.Ломоносова Л.М. Самоходская

Официальные оппоненты:

профессор кафедры акушерства и гинекологии педиатрического факультета

ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова, д.м.н., проф. Л.М. Каппушева

профессор кафедры семейной медицины ГОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова

Минздравсоцразвития, д.м.н., проф. К.Г.Серебренникова

Ведущая организация:

ГУЗ МО Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии.

Защита состоится «_» марта 2012г. в 11.00 часов на заседании

диссертационного совета Д212.203.01 в Российском университете дружбы народов по адресу 117333, г.Москва, ул.Фотиевой, д.б. С диссертационной работой можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов (117198, г.Москва, ул.Миклухо-Маклая, д.б).

Автореферат разослан «_»_2012 года

Ученый секретарь

диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор И.М. Ордиянц

Общая характеристика диссертации

Актуальность проблемы. Привычная потеря беременности (ППБ) является актуальной проблемой современного акушерства. Частота этого осложнения остается стабильной и высокой в течение многих лет, составляя 15 - 30% от общего числа всех желанных беременностей.

По данным коллегии Минздравсоцразвития (2009), до 50% самопроизвольных прерываний беременности происходит в 1 триместре, а 25% из них приходится на привычное невынашивание.

Изучение патогенеза привычного невынашивания беременности долгое время касалось исследования механизмов, связанных с развитием плацентарной недостаточности, которая на ранних сроках приводит к выкидышам, а на поздних - к внутриутробной задержке роста плода, т.е., как правило, рассматривались процессы, происходящие уже после имплантации. В последнее время все больше внимания уделяется состоянию доимплантационного эндометрия, определяющего после нидации направленность всего гестационного процесса. Изучение молекулярных процессов, происходящих в этот период в эндометрии, является важной предпосылкой поиска возможных терапевтических мишеней для лечения привычного невынашивания беременности.

Недостаточность эндометрия - патофизиологический феномен, состоящий из комплекса нарушений трофической и метаболических функций эндометрия, ведущих к неспособности оказывать адекватную поддержку имплантирующемуся плодному яйцу или развивающемуся хориону (Сидельникова В.М. и соавт., 2010; Fraser Н.М. et al., 2008).

Основными изменениями, происходящими в эндометрии, являются процессы его децидуальной трансформации, процессы ангиогенеза и необходимая для этого перестройка экстрацеллюлярного матрикса (ЭЦМ), а также изменения содержания коагуляционных и фибринолитических факторов. Большинство из этих процессов находятся под прямым или

опосредованным влиянием яичниковых стероидов, что обусловливает их связь с фазами менструального цикла. Все они находятся в тесной взаимосвязи друг с другом и многие молекулярные факторы выполняют роль и рецептора, и лиганда одновременно, таким образом влияют на течение различных локальных биохимических процессов, обеспечивающих имплантацию.

Выявление групп риска по формированию 1111b позволило бы прогнозировать это тяжелое осложнение беременности, осуществлять адекватный мониторинг течения гестационного процесса и проводить своевременную коррекцию выявленных нарушений. (Серов В.Н., 2005).

Немаловажное место среди факторов риска формирования ППБ занимает генетическая предрасположенность. Носительство тех или иных аллелей определенных генов может видоизменять течение биохимических процессов в организме матери, в том числе и в эндометрии, и способствовать формированию ППБ (Макацария А.Д. и соавт., 2001). Учитывая тот факт, что нарушение эндометриального кровотока является одним из патогенетических механизмов, приводящих к развитию ППБ, большой интерес представляет изучение тех генетических детерминант, которые могут существенно влиять на процессы локального ангиогенеза.

Нарушения этих процессов по мнению некоторых исследователей имеет четкую взаимосвязь с потерей беременности, что подтверждено опытными исследованиями на животных (Rey Е. et al., 2003; Pfarrer C.D. et al., 2006). Данные о нарушениях ангиогенеза в эндометрии человека и их роли в патогенезе ППБ остаются противоречивыми (Rogers P.A. et al., 2009; Podciechowski L. et al., 2005). В связи с этим вопрос о необходимости ДНК-диагностики нарушений локальных процессов ангиогенеза, гемостаза и ремоделирования ЭЦМ у женщин с ППБ остается открытым.

В последние десятилетия все большее внимание уделяется изучению клеточно-молекулярной кооперации эндометрия вне беременности и в ранние ее сроки.

Несмотря на прогресс в области изучения локальных молекулярных механизмов имплантации и плацентации, эти данные являются пока недостаточными для понимания всего спектра молекулярных процессов, происходящих в тканях маточно-плацентарного комплекса. Совершенно очевидно, что необходимы дальнейшие исследования, которые помогут расширить представления о локальных регуляторных взаимодействиях в эндометрии, что, в свою очередь, позволит предложить новые подходы к решению данной проблемы акушерства.

Цель исследования

Целью настоящего исследования является уточнение патогенетических механизмов ППБ путем комплексной оценки эндометриальных молекулярно-генетических маркеров привычного невынашивания: факторов ангиогенеза, гемостаза и ремоделирования ЭЦМ для снижения репродуктивных потерь у данного контингента женщин.

Задачи исследования

- Изучить и сопоставить уровни экспрессии генов факторов ангиогенеза (УЕвР, РГСР, ЬРСБ, АЫС-1), факторов системы гемостаза (РАМ, иРА, иРА11), а также факторов ремоделирования ЭЦМ (ММР-2) в эндометрии женщин с привычной потерей беременности I триместра и женщин с реализованной репродуктивной функцией.

- Определить характер изменений экспрессии генов факторов ангиогенеза (УБвР, РЮБ, ЬБвР, АИО-1), факторов системы гемостаза (РА1-1, иРА, иРАЫ), а также факторов ремоделирования ЭЦМ (ММР-2) в эндометрии женщин с неполноценной секреторной фазой, как с привычной потерей беременности, так и с реализованной генеративной функцией.

- Провести корреляционный анализ морфологических и исследуемых молекулярно-генетических маркеров невынашивания в эндометрии женщин с ППБ в I триместре и уточнить их роль в формировании симптомокомплекса ППБ.

- Обосновать особенности предгравидарной подготовки эндометрия у женщин с синдромом привычной потери беременности I триместра в зависимости от результатов молекулярно-генетического исследования эндометрия.

Научная новизна.

- Впервые получена количественная оценка и проведена сравнительная характеристика уровня экспрессии генов регуляции ангиогенеза (УЕСБ, РЮБ, ЬБвР и Ang-l), фибринолиза (РА1-1, иРА, иРА11), молекул, участвующих в ремоделировании ЭЦМ (ММР-2) в образцах эндометрия у женщин с ППБ и с реализованной генеративной функцией, а также уточнена их роль в патогенезе ППБ.

- Впервые продемонстрировано изменение экспрессии генов изучаемых факторов в рамках окна имплантации в эндометрии женщин с ППБ: снижение экспрессии мРНК УЕвР, повышение экспрессии мРНК РГСБ, снижение экспрессии ММР-2, которые свидетельствуют о доминирующем значении нарушения ангиогенеза во II фазе менструального цикла и ее роли в формировании симптомокомплекса ППБ.

Практическая значимость

Результаты проведенного исследования обосновывают необходимость проведения реабилитационной терапии, нормализующей клеточно-молекулярные взаимодействия в эндометрии на предгравидарном этапе. Комплексная реабилитационная терапия, должна включать стимуляторы ангиогенеза, антитромбофилические, антиоксидантные, гестагенные, витаминные препараты.

Результаты данной работы свидетельствуют о необходимости проведения молекулярно-генетического исследования эндометрия у женщин с ППБ во П ф.м.ц. (22-23 д.м.ц.).

Положения, выносимые на защиту

1. Молекулярно-генетические процессы в эндометрии у женщин с ППБ ранних сроков следует рассматривать как устойчивую патологическую систему, сформированную в результате первичного взаимодействия патогенного фактора с организмом и регулируемую теми же факторами, которые регулируют течение физиологических процессов в эндометрии.

2. Одно из ведущих значений в системе нарушений клеточно-молекулярной кооперации в эндометрии при ППБ ранних сроков принадлежит изменению экспрессии ангиогенных факторов (VEGF, AngPt, P1GF, FGF), которые наиболее манифестно проявляются в период окна имплантации.

3. В комплекс реабилитационных мероприятий, проводимых женщинам с ППБ ранних сроков вне беременности, следует включить стимуляторы ангиогенеза, антитромбофилические средства, антиоксидантные препараты, как патогенетически обоснованные.

Апробация диссертационного материала.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на семинаре «Человек и лекарство» (Москва, 2006, 2008, 2009), на Первом Международном конгрессе по репродуктивной медицине (Москва, 2006).

Внедрение результатов работы

По теме диссертационной работы опубликовано 7 печатных работ в отечественной и зарубежной печати, из них 5 - в журналах, включенных в перечень ВАК.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 92 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Библиография включает 163 источника литературы (34 - отечественные и 129 - зарубежные). Работа иллюстрирована 8 таблицами и 35 рисунками.

Содержание диссертационного исследования

Программа, контингент, материал и методы исследования. Для решения поставленных задач нами были обследованы 86 пациенток.

Основную группу составили 54 пациентки с привычным невынашиванием беременности I триместра.

Контрольную группу составили 32 женщины с реализованной репродуктивной функцией (имевшие в анамнезе 1 и более своевременные роды здоровыми детьми), проходившие обследование в клинике акушерства и гинекологии по поводу вторичного бесплодия (с выявленным исключительно мужским фактором бесплодия), схожих по возрасту, экстрагенитальной патологии и паритету с пациентками I группы.

Критериями включения являлись: диагноз - привычное невынашивание беременности, который устанавливали на основании следующих критериев: 2 и более самопроизвольных абортов или неразвивающихся беременностей подряд на ранних сроках, детородный возраст.

Критериями исключения являлись: наличие острых воспалительных заболеваний, в т.ч. манифестантной вульвовагинальной инфекции и инфекции мочевых путей, срок с момента последней потери беременности менее 6 мес, наличие гиперпластических процессов эндометрия на момент обследования. Кроме того, из исследования были исключены женщины с тяжелой соматической патологией - стойкой артериальной гипертензией,

декомпенсированным сахарным диабетом, почечной недостаточностью, анемией 2-3 степени, ожирением 2-3 степени.

Всем пациенткам проводилось полное клиническое обследование с проведением общепринятых и специальных лабораторных и инструментальных методов исследования: клиническое обследование с изучением анамнеза, физикальных и лабораторных данных, эхографическое исследование, определение содержания в сыворотке крови пролактина, стероидных гормонов, гемостазиологическое исследование крови, микробиологическое исследование отделяемого влагалища и цервикального канала. Всем обследованным женщинам во П фазу цикла проводилось гистологическое, микробиологическое и генетическое изучение образцов эндометрия. Результаты гистологического анализа явились основанием для проведения второго этапа исследования: оценки особенностей экспрессии изучаемых генов в зависимости от морфологического соответствия эндометрия секреторной фазе.

Существенное значение в плане клинического обследования женщин отводилось изучению анамнестических данных. Анамнез собирали по общему плану, однако целенаправленность его зависела во многом от особенностей течения и потерь предыдущих беременностей, акушерских и соматических осложнений, наследственности, возраста, профессии и др., которые могли бы характеризовать преморбидный фон.

Особое внимание было уделено изучению специфических функций женского организма: менструальной (период становление, характер, болезненность, количество), половой, секреторной, репродуктивной (течение и исход каждой беременности, осложнения). При общем объективном обследовании обращали внимание на телосложение, массу тела, рост, характер оволосения тела.

У всех обследуемых 1 и 2 групп проводилась биопсия эндометрия на 22-23 день менструального цикла.

Производилась оценка изменений экспрессии генов факторов ангиогенеза, гемостаза, ремоделирования экстрацеллюлярного матрикса в эндометрии женщин с ППБ в сравнении с аналогичными показателями обследуемых группы сравнения.

Последующий анализ проходил по следующей схеме:

1. Выделение тотальной РНК

2. Постановка обратной транскрипции

3. Анализ экспрессии изучаемых генов путем определения концентрации кДНК на приборе Real-time ПЦР с использованием интеркалирующего красителя SYBR-green методом относительного количественного анализа (AACt):

• P1GF, FGF, VEGF, AngPt, участвующих в регуляции процессов ангиогенеза

• Регуляторов фибринолиза: uPa, uPA-r, PAI-1

• Регуляторов моделирования ЭЦМ: ММР-2

4. Данные обрабатывались статистически по непараметрическому критерию Mann-Whitney с использованием статистического анализа Statistica 6.0.

Результаты исследования и их обсуждение

Средний возраст женщин в исследуемых группах достоверно не отличался и составил в I группе 33+4,2 года; во П - 34+5,2 года (р>0,05). Большинство обследованных пациенток были в возрасте 31-35 лет.

При анализе общесоматического анамнеза существенных различий у обследованных женщин I и П групп выявлено не было. С сопоставимой частотой в анамнезе обследуемых в I и П группах встречались заболевания сердечно-сосудистой системы: у 19(35,3%) и 9(28,1%), мочевыделительной системы: у 8(14,8%) и 3(9,3%), желудочно-кишечного тракта: 12(22,2%) и 5(15,6%), хронический тонзиллит: у 7(13%) и 6(18,8%) соответственно.

и

Все выявленные заболевания женщин в изучаемых клинических группах были в стадии компенсации и не приводили к существенному изменению общего состояния обследуемых. В момент включения в исследование все пациентки находились в удовлетворительном состоянии.

Средний возраст менархе (12,6±1,0 и 13,1+1,6 лет) соответствовал популяционным значениям и не имел различий в обеих группах женщин. Длительность менструального цикла (28,6+2,9 и 29,5+2,6 дней) и продолжительность менструаций (4,5+1,2 и 4,5+0,5 дня) также были сопоставимы у женщин 1 и 2 групп и соответствовали физиологическим параметрам.

Структуру гинекологических заболеваний составили следующие нозологии: воспалительные заболевания, внематочная беременность, миома матки, наружный и внутренний генитальный эндометриоз и др. Анализ гинекологической заболеваемости выявил значительно более частую встречаемость воспалительных заболеваний женских половых органов среди обследуемых первой группы.

Исходы предшествующих беременностей у повторнобеременных женщин обеих клинических групп представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Исходы предыдущих беременностей у женщин изучаемых групп.

Исходы предыдущих беременностей

Группы обследуемых Искусственные аборты Самопроизвольный ранний выкидыш, неразвивающаяся беременность 1 триместра Преждевременные Внематочная береме

1 2 >3 всего 1 2 >3 всего роды нность

1 а 6с 5 2 - 7 - 38 16 54 - -

(п=54) % 9,3 3,7 - 13 - 70,4 29,6 100 - -

II абс 4 2 2 8 5 - - 5 1 1

(п=32) % 12,5 6,25 6,25 25 15,6 - - 15,6 зд 3,1

В группе с привычным невынашиванием беременности акушерский анамнез был отягощен артифициальными абортами у 7 пациенток (13%), в сравнении с 8 случаями (25%) в группе здоровых женщин.

В группе здоровых женщин у 5 (15,6%) обследуемых анамнез был отягощен спорадическими потерями беременности на ранних сроках, кроме того, у одной пациентки были преждевременные роды в 30 недель, еще у одной правостороння трубная беременность.

Таким образом, анализ гинекологического анамнеза женщин обеих групп выявил у женщин с привычной потерей беременности достоверное увеличение частоты воспалительных заболеваний гениталий, как возможного предиктора последующего привычного невынашивания беременности.

В результате анализа гемостазиограмм оказалось, что у пациенток с привычной потерей беременности наблюдалась тенденция к гиперкоагуляции в 37 случаях, что составило 68,5%. В группе сравнения данная патология выявлена лишь у 6 (18,8%) женщин.

Так, у пациенток группы сравнения уровень фибриногена не превышал нормативные показатели и составил в среднем 3,34 ± 0,36 г/л. В то же время у женщин с привычным невынашиванием беременности содержание фибриногена было достоверно выше и составило 4,43 ± 0,39 г/л (табл.2). Достоверных различий в значениях протромбинового индекса, количества и агрегации тромбоцитов, Д-димеров не было выявлено.

При гистологическом исследовании образцов эндометрия, взятых на 22-23 день менструального цикла, у 17 пациенток из обеих групп (12 пациенток с привычным невынашиванием, 5 - из группы здоровых женщин) была выявлена неполноценная фаза секреции.

При сравнении уровней экспрессии мРНК у женщин с привычным невынашиванием и здоровых были выявлены достоверные различия в экспрессии мРНК УЕСР, РЮР и ММР-2.

Таблица 2. Показатели свертывающей и противосвертывающей системы крови у женщин изучаемых групп (М ± ш).

Показатели

Агрегация д-

Гр. АВР, сек АЧТВ, сек ПИ, % Фибр., г/л Тр., * 10/л ВС, мин тромбоцитов димеры,

С коллагеном, % С АДФ, % мкг/мл

I 55,8 + 31,3 89,6 4,43 + 0,39* 216,9 4,53 ± 31 + 2,1 84 + 2,5 0,5-3,0

3,9* 2,1* + 5,4 ± 13,1 0,21*

II 69,2 + 37,8 + 2,2 87,7 3,34 222,5 5,36 ± 30 79 0,5-3,0

3,6 ±5,2 0,36 ± 10,9 0,29 1,9 2,6

Примечание: * - достоверные различия между пациентками сравниваемых групп

Уровень экспрессии VEGF в I группе пациенток (26.9 (4.4 - 97.2)) был достоверно ниже по сравнению со II группой (101,3 (61,1 - 220,7)) (рис.1), что может оказывать негативное влияние на состояние эндометрия. Это совпадает с литературными данными о том, что, эксперименты с блокированием действия VEGF приводили к полному прекращению неоангиогенеза и значительному снижению реэпителизации эндометрия (Fan X. et al„ 2008).

Уровень экспрессии P1GF женщин I группы (112,2 (42,8 - 554,8)) также был достоверно выше по сравнению со П группой (11,7 (5,0 - 49,4)) (рис.1). Принимая во внимание, что повышение P1GF, как правило, сопровождает гипоксические состояния тканей, можно предположить, что повышенный уровень P1GF стимулирует ангиогенез в ишемизированных тканях.

Уровень экспрессии ММР-2 в I группе (516,0 (72,1 - 3103,2)) был достоверно ниже по сравнению со II группой (6019,6 (2977,5 - 20178,4)) (рис.1). Снижение активности этого фермента, специфично тропного к

коллагену IV, ведет к развитию склероза стромы, неполноценности децидуальной трансформации эндометрия. Следует отметить, что снижение уровня ММР-2 характерно для хронического эндометрита (Соболева Г.М., 2007).

р<0,05

ММР-2

Рисунок 1

Уровни экспрессии ЬИСР и Аг^рЫв I группе были несколько ниже по сравнению с группой сравнения, однако эти результаты не были статистически достоверными. Снижение уровня ангиопоэтина-1, высвобождаемого перицитами (мезенхимальными клетками, поддерживающими эндотелий), способствует депрессии ангиогенеза.

Различия между уровнем экспрессии мРНК иРА, иРАЯ и РАГ1 в группе женщин с привычным невынашиванием и в группе контроля отсутствовали.

На втором этапе исследования нами были проанализированы полученные результаты в зависимости от морфологической картины эндометрия.

Эндометрий с неполноценной секреторной фазой был обнаружен у 12 (22,22%) пациенток I группы и 5 (15,62%) пациенток из П группы, в то время как нормальный эндометрий у 42 (77,78%) пациенток I группы и 27 (84,38%) пациенток II группы.

Учитывая данные литературы об отсутствии прямой линейной зависимости степени созревания эндометрия от уровня прогестерона в периферической крови, нами была проведена оценка изменений экспрессии генов факторов ангиогенеза, гемостаза и моделирования ЭЦМ опосредованно, исходя из особенностей морфологической характеристики эндометрия обследованных женщин.

При сравнении уровня экспрессии мРНК изучаемых факторов в этих группах были получены следующие результаты (рис.2).

Уровень экспрессии УЕОБ в группе женщин с неполноценной секреторной трансформацией эндометрия (2,6 (0,9 - 7,6)) был достоверно ниже соответствующих показателей женщин с нормальными морфологическими характеристиками эндометрия (61,1 (29,8 - 92,3)).

В то же время уровень экспрессии РЮБ в группе женщин с неполноценной секреторной трансформацией эндометрия (745,2 (602,0 — 982,2)) превышал аналогичный показатель женщин с нормальными морфологическими характеристиками эндометрия (37,3 (9,3 - 183,0)).

Уровень экспрессии Angpt-l женщин с неполноценной секреторной трансформацией эндометрия (1,2 (0,5 - 2,2)) был достоверно ниже чем в группе женщин с нормальными морфологическими характеристиками эндометрия (33,1 (10,0-62,5)).

Аналогичная ситуация выявлена в уровнях экспрессии иРА женщин с неполноценной секреторной трансформацией эндометрия: его уровень был ниже (0,6 (0,5 - 0,7)), чем у женщин с нормальными морфологическими характеристиками (28,1 (3,0 - 50,9)). Это также подтверждает выраженное снижение ангиогенеза у пациенток с НЛФ.

(p<0,0S)

AnS-! uPA

/ нормальный эндометрий эндометрий с признаками НЛФ

Рисунок 2

Отмечалась тенденция к снижению экспрессии bFGF, uPAR и ММР-2 у женщин с неполноценной секреторной трансформацией эндометрия в сравнении с уровнем экспрессии в нормальном эндометрии, что согласуется с литературными данными о стероидзависимом синтезе bFGF, и может приводить к возможным нарушениям процессов имплантации (Welter et al., 2006; Chou C-S. et al., 2004). Однако эти результаты не были статистически достоверными.

Интересно отметить, что, в отличие от выявленных особенностей экспрессии факторов ангиогенеза, различий по уровню экспрессии PAI-1 в группе с неполноценной секреторной трансформацией эндометрия по сравнению с группой женщин с нормальными морфологическими характеристиками эндометрия не было обнаружено. Полученные данные позволяют предположить ключевую роль нарушений ангиогенеза в потере беременностей и первоочередность этих нарушений по отношению к тромбофилическим нарушениям.

В секреторной фазе менструального цикла выделяют раннюю, среднюю и позднюю стадии; дополнительный анализ полученных данных в зависимости от фазы секреции у женщин с неполноценной секреторной трансформацией, так и с нормальным эндометрием выявили

достоверные различия уровня транскрипции VEGF, P1GF, Angpt-1, uPA и ММР-2, (рис.3). В любую из стадий секреторной фазы уровень экспрессии мРНК VEGF был выше (в раннюю (94,1 (82,7 - 272,2)) и среднюю (49,0 (29,2 - 106,3)) достоверно), чем у женщин с неполноценной секреторной фазой (2,6 (0,9 - 7,6)).

Экспрессия мРНК PIGF была достоверно ниже в раннюю (221,6 (3,7 -492,2)) и позднюю (12,1 (4,0 - 101,7)) стадии секреции здоровых женщин, по сравнению с неполноценной фазой секреции (745,2 (602,0 - 982,2)), что может свидетельствовать о гипоксии эндометрия при НЛФ.

Характер изменений экспрессии мРНК Angpt-1 и uPA был аналогичен изменениям экспрессии мРНК VEGF, что является дополнительным подтверждением недостаточности ангиогенеза у женщин с НЛФ.

Статистически значимые различия в уровнях экспрессии мРНК ММР-2, FGF, PAI-1 и uPAR между НЛФ, ранней, средней и поздней стадиями секреторной фазы не были выявлены, что лишний раз подтверждает первичность нарушений ангиогенеза в эндометрии женщин с НЛФ.

к

т

Ш Щвг / поздняя секреторная / средняя секреторная • / ранняя секреторная ^^ / эндометрий с признаками ИЛФ

W ■

VEGF

PIGF

Ang-1 ирд

ММР-2

Рисунок 3

На заключительном этапе исследования нами была проведена оценка корреляции в экспрессии факторов. Следует отметить, что достоверная

положительная корреляция была получена в парах VEGF-Angpt-1 (г=0.6, р<0.05), VEGF - ММР-2 (г=0.8, р<0.05), Angpt-1 - ММР-2 (г=0.7, р<0.05), uPA-uPAR (г=0.7, р<0.05).

Выявленная положительная корреляция между экспрессией факторов роста VEGF и Angpt-1 подтверждает их однонаправленный эффект на процессы ангиогенеза в эндометрии.

Корреляции в парах VEGF - ММР-2 и Angpt-1 - ММР-2 подтверждают непосредственное участие металлопротеиназ в неоангиогенезе не только за счет разрушения экстраклеточного матрикса, что необходимо для роста новых сосудов, но и за счет высвобождения ангиогенных ростовых факторов в процессе внеклеточного протеолиза, приводящего к формированию проангиогенных центров связывания интегрина и активных факторов клеточной миграции. ММР-2 играет критическую роль в процессе неоангиогенеза и инициируют образование сосудов в начальной стадии васкуляризации.

Таким образом, в результате проведенной нами оценки генетических маркеров 111 lb была выявлена первоочередная роль нарушений ангиогенеза как основного предиктора формирования хронической потери беременности.

ВЫВОДЫ

1. В эндометрии женщин с ППБ ранних сроков наблюдается достоверное снижение экспрессии генов VEGF (26,9 (4,4 - 97,2) и ММР-2 (516,0 (72,1 - 3103,2)) и увеличение экспрессии гена P1GF (112,2 (42,8 - 554,8)), в сравнении с уровнем экспрессии этих генов в эндометрии здоровых женщин с (VEGF - 101,3 (61,1 - 220,7), ММР-2 - 6019,6 (2977,5 - 20178,4), P1GF -11,7 (5,0 - 49,4)) а также отмечается тенденция к снижению экспрессии генов bFGF, Ang-1, uPA и uPAR.

2. В эндометрии женщин с неполноценной секреторной фазой, как с привычной потерей беременности, так и у здоровых, отмечается снижение экспрессии генов УЕСР (2,6 (0,9 - 7,6)), Ang~l (1,2 (0,5 -2,2)) и иРА (0,6(0,5 - 0,7)), повышение экспрессии гена РЮР (745,2 (602,0 - 982,2)) в сравнении с уровнем экспрессии этих генов в эндометрии женщин с нормальной морфологической картиной (УЕСБ - 61,1 (29,8 - 92,3), Ап§-1 - 33,1 (10,0 - 62,5), иРА - 28,1 (3,0 - 50,9) , РЮР - 37,3 (9,3 - 183,0)), а также отмечается тенденция к снижению экспрессии генов ЬРвР, иРАЛ и ММР-2, что может обусловить последующее развитие невынашивания беременности в группе женщин с НЛФ.

3. Проведенный корреляционный анализ позволяет предполагать, что молекулярно-генетические изменения эндометрия у женщин с ППБ ранних сроков носят устойчивый патологический характер, не имеющий строгой специфичности, однако свидетельствуют о ключевом и преимущественном значении изменений ангиогенеза и ремоделирования ЭЦМ в патогенезе данной патологии.

4. Перспективное использование стимуляторов ангиогенеза в комплексной предгравидарной подготовке, наряду с применением антикоагулянтов, антиагрегантов, антиоксидантов и гестагенов, является патогенетически обоснованной терапией, направленной на нормализацию клеточно-молекулярной кооперации в эндометрии у женщин с привычной потерей беременности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Демидова Е.М., Рашидов Т.Н. Локальные клеточные взаимодействия в эндометрии и их роль в генезе невынашивания беременности // Российский вестник акушера-гинеколога.-2006. - №4,- том6.-С.12-16.

2. Радзинский В.Е., Волощук И.Н., Мельников А.П., Демидова Е.М., Демидов Б.С., Белоусов Д.М., Рашидов Т.Н., Значение локальных клеточных взаимодействий в эндометрии в процессе невынашивания беременности // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. -2006,- №1, том5.-С.67-74.

3. Демидова Е.М., Демидов Б.С., Никитина Л.А., Рашидов Т.Н., Сысолятина Е.В. Клеточно-молекулярные взаимодействия в эндометрии. Роль в генезе потерь беременности // Сборник материалов научно-практической конференции «Новые медицинские технологии в поликилиническойпрактике».- Москва. - 2006.

4. Радзинский В.Е., Волощук И.Н., Мельников А.П., Демидова Е.М., Демидов Б.С., Белоусов Д.М., Рашидов Т.Н. Локальные клеточные взаимодействия в эндометрии и их роль в процессе вынашивания беременности // Вестник РУДН, Серия Медицина, Акушерство и гинекология. - 2006. - №4(36)

5. Nikitina LA, Sadekova ON, Rashidov TN, Voloschuk IN, Bochkov VN, Demidova EM, Samokhodskaya LM, Tkachuk VA. Reccurent early pregnancy loss endometrium is accompanied by decreased VEGF and increased P1FG gene expression // Abstract Book of 3d EMBIC Summer School., Jena, Germany. - 2007. - № 6. - C.9-17.

6. Садекова O.H., Никитина Л.А., Вознюк Д.А., Рашидов Т.Н., Демидова Е.М., Самоходская Л.М., Радзинский В.Е. Особенности экспрессии ключевых генов ангиогенеза в эндометрии женщин с привычным невынашиванием беременности и недостаточностью лютеиновой фазы // Вестник РУДН, Серия Медицина, Акушерство и гинекология. - 2009. - № 6. - С.25-29.

7. Радзинский В.Е., Демидова Е.М., Самоходская Л.М., Ткачук В.А., Садекова О.Н., Никитина Л.А, Вознюк ДА., Рашидов Т.Н. Транскрипционные и морфологические особенности предимплантационного эндометрия у женщин с привычным невынашиванием беременности // Вестник РУДН, Серия Медицина, Акушерство и гинекология. - 2010. - №6. - С.9-17.

Генетические детерминанты привычного невынашивания беременности: факторы ангиогенеза, гемостаза, ремоделирования экстрацеллюлярного

матрикса в эндометрии женщин с синдромом привычной потери беременности I триместра

РАШИДОВ ТИМУР НАИЛЬЕВИЧ (Россия)

В работе проведено исследование активности генов факторов ангиогенеза, гемостаза и ремоделирования экстрацеллюлярного матрикса в эндометрии женщин с синдромом привычной потери беременности I триместра в период «окна имплантации». Обследовано 54 пациентки с диагнозом привычное невынашивание беременности и 32 практически здоровых женщин с реализованной генеративной функцией, составивших контрольную группу.

На I этапе проводилось исследование уровней активности генов факторов ангиогенеза (УЕСБ, РЮР, ЬБОБ, А^-1), факторов системы гемостаза (РА1-1, иРА, иРАЯ), а также факторов ремоделирования ЭЦМ (ММР-2) в эндометрии женщин с привычной потерей беременности I триместра и женщин с реализованной репродуктивной функцией.

Полученные результаты свидетельствовали об устойчивой связи привычного невынашивания беременности I триместра с изменением активности генов УЕОБ и ММР-2 в эндометрии в период окна имплантации.

На II этапе проводилось исследование уровней активности генов факторов ангиогенеза (УЕОР, РГСИ, ЬРвР, АЫв-1), факторов системы гемостаза (РА1-1, иРА, иРАК), а также факторов ремоделирования ЭЦМ (ММР-2) в эндометрии женщин в зависимости от морфологических критериев степени секреторной трансформации эндометрия.

Полученные результаты дают основания рассматривать УЕвИ в качестве основного индикатора хронической эндометриальной недостаточности, и позволяют еще раз подтвердить участие ММР-2 в формировании хронического эндометрита.

С учетом полученных данных представляется перспективным использовать уровни активности генов УЕОБ и ММР-2 для оценки эффективности проведенной предгравидарной подготовки эндометрия у женщин с привычной потерей беременности I триместра.

Genetic determinants for recurrent pregnancy loss: factors of angiogenesis, haemostasia, remodeling of extra-cellular matrix in the endometrium of women with recurrent pregnancy loss during the Is' trimester

RASHIDOV TIMUR NAILffiVICH (Russia)

Research of activity of genes factors of angiogenesis, haemostasia, remodeling of extra-cellular matrix in endometrial of women with recurrent pregnancy during the 1st trimester in the period of "implantation window" was carried out in

The research was done on 54 female patients with the diagnosis of habitual miscarriage (recurrent pregnancy loss) and 32 practically healthy women who have implemented their generative function and who made up a control group.

At the 1st stage a research was done of the levels of activity of genes factors of angiogenesis (VEGF, P1GF, bFGF, ANG-1), of the factors of the haemostasia system (PAI-1, uPA, uPAR) as well as of the factors of remodeling of ECM (Extra-cellular matrix) (MMP-2) in the endometrial of the women with recurrent pregnancy loss during the 1st trimester and of the women who have fulfilled their reproductive function.

The results obtained during the research spoke about the stable connection between habitual miscarriage in the first trimester and alternation of activity of genes VEGF and MMP-2 in the endometrial in the period of "implantation window".

At the 2nd stage a research was conducted of levels of activity of genes factors of angiogenesis (VEGF, P1GF, bFGF, ANG-1), of the factors of the haemostasia system (PAI-1, uPA, uPAR), as well as of the factors of remodeling of ECM (Extra-cellular matrix) (MMP-2) in the endometrial of women depending on morphological criteria of the grade of the secretory transformation of endometrium.

The results obtained in the research provide all the grounds to consider VEGF as the main indicator of the chronic endometrial insufficiency and again confirms the fact that MMP-2 is one of the causes of chronic endometrial.

Based on the obtained data there appears a real perspective to use the levels of activity of the genes VEGF h MMP-2 for assessment of efficiency of the rehabilitation methods in pregravidarum preparation of endometrium in women with recurrent pregnancy loss in the 1st trimester.

Подписано в печать 22.02.2012г.

Усл.п.л. - 1.5 Заказ №08018 Тираж: ЮОэкз.

Копицентр «Чертеж.ру» ИНН 7701723201 107023, г.Москва, ул.Б.Семеновская 11, стр.12 (495) 542-7389 www.chertez.ru