Гамма-дельта Т-ориентированная иммунотерапия при атопическом дерматите

Задионченко, Екатерина Владимировна

Диссертации по медицине → Аллергология и иммулология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Гамма-дельта Т-ориентированная иммунотерапия при атопическом дерматите

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Задионченко, Екатерина Владимировна Москва 2005 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.36

Автореферат диссертации по медицине на тему Гамма-дельта Т-ориентированная иммунотерапия при атопическом дерматите

На правах рукописи

Задионченко Екатерина Владимировна

ГАММА- ДЕЛЬТА Т-ОРИЕНТИРОВАННАЯ ИММУНОТЕРАПИЯ ПРИ АТОПИЧЕСКОМ ДЕРМАТИТЕ

14.00.36.- аллергология и иммунология 14.00.11.- кожные и венерические болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 2005

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Минсоцздрава РФ

Научные руководители: д.м.н.проф.Трофимова

Ирина Борисовна. к.м.н. доц. МацАлександр Наумович

Официальные оппоненты: д.м.н. проф. Краснопрошина

Людмила Ивановна, д.м.н. проф.Акимов Владислав Георгиевич

Ведущая организация: ГУ Государственный научно-

исследовательский институт Контроля и стандартизации медицинских биологических препаратов им. АЛ. Тарасевича

Защита диссертации состоится «_»_2005 в «_»

часов на заседании диссертационного совета Д 001.035.01 при ГУ Научно-исследовательский институт вакцин и сыворотоким. И.И. Мечникова РАМН по адресу; 105064 г. Москва, Малый Казённый пер., 5а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН

Автореферат разослан ч__________» ?005 г

Ученый секретарь диссертационного Совета к.б.н. Яковлева И.В.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ар Т-клетки - альфа-бета Т-клетки

у8Т- клетки - гамма-дельта Т-клетки

АД - атопический дерматит

Аф - аффинолейкин

ГА - группа аффинолейкина

ГЗТ - гиперчуствительность замедленного типа

ГНТ - гиперчуствительность немедленного типа

ГС - группа сравнения

ЛТ - легкое течение АД

СТ- среднетяжелое течение АД

ТАБ - растворимые антигенсвязывающие Т-клеточные белки ТТ - тяжелое течение АД

ТФ - трансфер-факторный препарат

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Проблема атопического дерматита (АД) остается одной из наиболее актуальных для современной дерматологической науки и практики. Высока и продолжает увеличиваться распространенность АД: 3-5% населения земного шара страдает этим заболеванием (Кочергин Н.Г.,2001). В развитых странах заболеваемость АД составляет от 1 до 3% у взрослых и 10 - 20% у детей. [Суворова К.Н., 1998; Скрипкин Ю.К., 1999; Балаболкин И.И., 2003; Кунгуров Н.В., 2004; Bos J.D., 1998; Leung D.Y.M., 2004].

Значимость проблемы АД связана, кроме того, с увеличением числа больных с тяжелыми, устойчивыми к лечению формами заболевания, что нередко обусловлено размножением в поражённой коже условнопатогенной микрофлоры (стафилококков, дрожжеподобных грибов и герпесвирусов) [Бутов Ю.С., Подолич О.А., 2000; Сергеев Ю.В., 2002; Молокова А.В., 2004; Hoeger P.H., 2000; Lubbe J., 2003; Roll A., 2004; Cookson W., 2004].

По данным открытых наблюдений, современная терапия обострений АД, соответствующая российскому стандарту [Приказ Минздрава РФ № 286 от 23 ноября 2004 г.] позволяет добиться клинической ремиссии в среднем в 80% случаев. Однако, немногочисленные закрытые контролируемые рандомизированные исследования, как правило, дают показатели эффективности на 15 - 20% ниже из-за рефрактерных, не уступающих лечению, клинических форм заболевания [Молокова А.В., 2004; Сурков А.Г., Ревякина В.А., 2004; Hanifin J.M., 2003; Furue M., 2003; Roos T.C., 2004].

Трудности разработки новых методов лечения АД связаны, главным образом, с недостаточно изученными молекулярными и иммунными механизмами аллергического воспаления в коже, а также характером взаимосвязей между генетическими дефектами метаболизма церамидов и синтеза антимикробных пептидов в клетках эпидермиса [Смирнова Г.Н., 2004; Chamlin S.L., 2002; Nomura I., 2003], наследственными нарушениями иммунорегуляции, продукции цитокинов и хемокинов и экспрессии цитокиновых и хемокиновых рецепторов на кератиноцитах и дендритных клетках кожи [Galli H., 2003; Kakinuma Т., 2003; Pivarcsi A., 2005].

Повышение эффективности терапии АД может быть достигнуто вмешательством в иммунопатогенез с целью подавления воспалительной реакции, вызванной аллерген-реактивными ар Т-клетками, и восстановлением угнетённого антимикробного и антистрессового клеточного иммунитета. Мишенью такого воздействия может служить особая субпопуляция Т-клеток, которые встречаются в циркуляции (до 10% всех Т-лимфоцитов) и заселяют эпидермис в виде межэпителиальных дендритных гамма-дельта Т-клеток (у5Т-кл), прямо распознают своим гамма-дельта рецептором микробные (например, стафилококковый токсин) и собственные (экспрессированные стрессом или воспалением) белковые и небелковые антигенные детерминанты и играют ключевую роль в защите кератиноцитов от микробной инвазии и воспалительной альтерации [Fujita M.et al. 1993; Dieli F. Et al., 1997; Olivry Т., 1997; Holtmeier W., 2001; Girardi M., 2002; Girardi M., 2004; Campbell D.J., 2004; Kalyan S., Chow A.W.,

2004; Ziegler H.K., 2004; Toth В., 2004; Jameson J.M., 2004]. Во время обострений АД содержание гамма-дельта Т-клеток увеличивается в воспалённых участках эпидермиса и дермы, но падает ниже нормы в периферической крови [Schauer U., 1991; FujitaM., 1993]. Часть циркулирующих yST-клеток человека несёт CD8 и CD56 (маркер NK-клеток) [Satoh M., 1996].

В настоящей работе для воздействия на иммунопатогенез АД, на гамма-дельта Т-клетки с целью повышения эффективности комплексной фармакотерапии обострений у больных АД был использован отечественный полиспецифический иммунотерапевтический препарат «Аффинолейкин» (аналог зарубежных трансфер-факторных препаратов), представляющий собой комплекс низкомолекулярных (5 - 8 кД) белков, экстрагированных из мембран донорских лейкоцитов, которые способны, подобно антителам (но с меньшей аффинностью), специфически связываться с нативными микробными антигенами и переносить антиинфекционный иммунитет от иммунного донора неиммунизированному реципиенту [Мац А.Н., 2004, 2005]. Кроме этого, они способны воздействовать на моноциты и эндотелиальные клетки, супрессировать повышенную при АД активность фактора транскрипции NF- кВ в кератиноцитах и лейкоцитах] и продукцию фактора некроза опухолей альфа [Ojeda M.O., 2000; Fernandez-Ortega С, 2004; Xie Z.Q., 2004; Ojeda M.O., 2005. ]

Известная способность препаратов «трансфер-фактора» восстанавливать угнетённый противоинфекционный клеточный иммунитет [Viza D., 2000; Fudenberg H.H., 2003] стала общей патогенетической предпосылкой их применения для иммунотерапии АД. Из 30 публикаций (MEDLINE) 28 свидетельствуют о положительном клиническом эффекте этих препаратов при АД у 70 - 80% больных [Jarisch R., 1881; Zachariae H., 1985; Cordero-Miranda М.А., 1999; Sosa M. et al., 2001; Garcia Angeles J. et al., 2003; Beltran de Paz C, 2003; Orozco T.T.,2004]. Однако, терапевтический потенциал, фармакодинамика и нежелательные побочные эффекты этих препаратов как «биологических модификаторов иммунного ответа» до сих пор исчерпывающе не исследованы и их рациональные схемы и дозы введения не разработаны. Кроме того, отсутствие международных стандартов на препараты «трансфер-фактора» и разнообразие исходного сырья и технологии приготовления приводят к тому, что препарат каждого производителя существенно отличается от своего «аналога» по иммуноспецифическим и иммунофармакологическим свойствам, и должен изучаться в отдельных клинических исследованиях [Мац А.Н., 2005].

Цель исследования

Клинико-лабораторная оценка эффективности иммунобиологического препарата Аффинолейкина и разработка рациональных схем его применения в комплексной терапии больных атопическим дерматитом.

Задачи исследования

1. Определить при каких формах клинического течения АД целесообразно присоединение Аффинолейкина к базисной терапии.

2. Установить, что положительный эффект трансферфакторной терапии обусловлен переносом противоинфекционного клеточного иммунитета.

3. Оценить влияние Аффинолейкина на содержание гамма-дельта Т-клеток в периферической крови больных атопическим дерматитом.

4. Выявить характер и частоту побочных реакций на введение Аффинолейкина. Научная новизна

В результате исследований показано, что новый отечественный иммунотропный препарат Аффинолейкин, обладает клинической

эффективностью при лечении больных атопическим дерматитом особенно при тяжёлом и среднетяжёлом его течении. Аффинолейкин способствует нормализации содержания эозинофилов и клеток, несущих маркёр готовности к аппоптозу (CD95), а также стабилизирует или повышает содержание гамма-дельта Т-клеток в периферической крови больных атопическим дерматитом.

Разработаны схемы лечения Аффинолейкином у больных атопическим дерматитом, способствующие повышению эффективности лечения заболевания.

Практическая значимость

Предложен новый метод комплексного лечения больных атопическим дерматитом с применением Аффинолейкина (Патент на изобретение РФ № 2248804) по схемам, адекватным степени выраженности кожного процесса, доступный для широкого применения в кожно-венерологических, аллергологических и терапевтических стационарах и амбулаториях.

Основные положения выносимые на защиту

1. Включение курса инъекций Аффинолейкина в комплексную фармакотерапию больных атопическим дерматиом целесообразно проводить при тяжелом и среднетяжёлом течении АД.

2. Наибольший положительный иммунотерапевтический эффект Аффинолейкина проявляется при тяжёлом и среднетяжёлом течении заболевания и пропорционален величине суммарной курсовой дозы препарата (доза-эффект).

3. Аффинолейкин способствует нормализации (отражающей эффективность лечения) содержания эозинофилов и клеток, несущих маркёр готовности к аппоптозу (CD95), а также стабилизирует и повышает исходно сниженное содержание гамма-дельта Т-клеток в периферической крови больных атопическим дерматитом.

Апробация работы

Апробация диссертации проведена на конференции сотрудников Кафедры кожных и венерических болезней Московского государственного медико-стоматологического университета 23 октября 2004 г.. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на II Международном симпозиуме Европейской Академии дерматовенерологии (Будапешт, 2004 г.) и на X Междисциплинарном симпозиуме «Новое в дерматовенерологии, андрологии, акушерстве и гинекологии: наука и практика» (Москва, 2005 г.)

Внедрение результатов исследования

инструкция по его применению, представленная для утверждения в Государственный Фармакопейный Комитет РФ.

2. Подготовлено, утверждённое Минсоцздравом РФ протокол №2 от 25.11.05., методическое пособие «Лечение больных псориазом и атопическим дерматитом с применением препарата тансфер-факторной природы под контролем иммунных факторов воспаления»

3. Комплексный метод лечения атопического дерматита с применением Аффинолейкина внедрен в практику работы Городской клинической больницы №14 им. В.Г Короленко и кожно-венерологических диспансеров №7 и №8 г. Москвы. Результаты исследования используются в учебной работе (на лекциях и семинарах) Кафедры кожных и венерических болезней Московского государственного медико-стоматологического университета.

Публикации. По результатам проведенного исследования имеется 12 публикаций, в том числе 3 статьи и 1 патент РФ на изобретение.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 113

страницах. Библиографический указатель, включает 63 отечественных и 172 зарубежных источника. Иллюстрирована 17 таблицами, 8 рисунками и 3 клиническими примерами.

Работа выполнена по плану Кафедры кожных и венерических болезней Московского государственного медико-стоматологического университета. Основные материалы собраны диссертантом на клинической базе этой кафедры - в Городской клинической больнице № 14 им. В.Г Короленко (главный врач -А.В. Дударев). В работе использованы также материалы, полученные в ходе Государственных клинических кооперированных исследований Аффинолейкина на двух других клинических базах - в Отделе дерматологии ГУ Центральный научно-исследовательский кожно-венерологический институт Минздрава РФ (директор - акад. РАМН проф. А.А. Кубанова) и в лаборатории клинической аллергологии ГУ Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН (директор - акад. РАМН проф. Б.Ф. Семенов), а также на клинической базе этой лаборатории - в Городской детской больницы, г. Люберц Московской области (зав. терапевтическим отделением - к. м. н. Т.В. Ляпорова).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Характеристика больных и методы исследования

В клинических исследованиях приняли участие 187 больных с АД в стадии обострения (90 женского и 97 мужского пола). В группе детей и подростков было 44 чел. У больных был диагностирован АД 2-го и 3-го возрастного периода (возраст от 2 до 60 лет). У всех больных, участвовавших в исследованиях, был диагностирован АД в стадии обострения. У большинства заболевание протекало с детства, часто рецидивировало и имело выраженный воспалительный характер. В 80% случаев наблюдалось поражение более 50% кожного покрова (распространенная форма), у 10% пациентов была диагностирована универсальная форма АД. В зависимости от длительности предшествующей ремиссии, активности воспаления, исходной

величины SCORAD и степени пиогенизации, процесс был охарактеризован как «лёгкий» (24%), «среднетяжёлый» (45%) и «тяжёлый» (31%) (Рис.1). Примерно в половине случаев наблюдалась разнообразная сопутствующая хроническая соматическая патология (в том числе атонического генеза): ринит, риносинусит, бронхиальная астма, бронхит, дерматомикоз, парадонтоз, тонзиллит, гастрит, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, гипертоническая болезнь и ишемическая болезнь сердца.

В Легкое течение

Рис. 1 Клиническая характеристика кожного процесса у больных АД

При легком течении АД кожный процесс носил ограниченный, воспалительный характер и, как правило, локализовался на лице, что проявлялось усиленной гиперпигментацией и складчатостью век, легким шелушением, инфильтрацией, отечностью углов рта, явлениями хейлита. Кроме того, на коже локтевых и подколенных ямок выявлялись единичные участки эритематозно-сквамозного характера с выраженной лихенизацией.

При среднетяжёлом и тяжёлом течении АД (SCORAD - 20-40 баллов и выше) наблюдались ярко выраженные эритематозно-папулезные высыпания, сопровождавшиеся интенсивным, почти постоянным зудом, усиливающимся в ночное время, множественные экскориации и гнойно-геморрагические корочки. У 28 пациентов отмечалась пиогенизация, в 16 случаях был выявлен сопутствующий ксероз. Обострения дерматоза чаще возникали в осенне-зимний и весенне-осенний сезон (у 23.3% и 20% пациентов, соответственно). При тяжёлом течении АД высыпания существовали круглогодично.

Методика клинических исследований. Пациенты находились вначале на стационарном, а затем на амбулаторном лечении. Исследования проведены как кооперированные открытые с рандомизацией больных между группами сходной тяжести течения АД и по принципу «случай - контроль». Пациенты были сгруппированы по полу, возрасту и исходной тяжести течения АД и распределены на группы: группу Аффинолейкина (базовая терапия + Аффинолейкин - 94 чел. (ГА) и группу сравнения (основная терапия - 93 чел. (ГС). У всех пациентов проводили клинический, биохимический анализ крови и мочи. В зависимости от выраженности клинической картины дерматоза все пациенты получали

комплексное лечение в стационаре в течение 5 - 8 нед. (в некоторых случаях амбулаторно - до 12 нед.) десенсибилизирующими (тилсульфат натрия, глюконат кальция), антигистаминными (фенкорол, кларитин, тавегил), ферментными и седативными (феназепам) лекарственными средствами, а также наружную терапию (пасты, мази, кремы, содержащие глюкокортикостероиды и другие активные вещества). Всем больным была предоставлена подробная информация о препарате и получено добровольное согласие на участие в исследованиях.

Аффинолейкин (Аф) (Регистрационный No. 98/366/1; Сертификат производства No. 000740 2000 - 73024; ВФС 42-3187-98). Каждую серию Аф получают из смеси образцов лейкоцитарной массы не менее 3000 здоровых доноров крови, лейкоциты активируют вирусом Сендай, культивируя 18 часов, затем селективной экстракцией и дифференциальной ультрафильтрацией выделяют из лейкоцитарных мембран комплекс белков с мол. массой 5 - 8 кДа, которые лиофилизируют с добавлением глицина в качестве стабилизатора (эта технология обеспечивает в каждой дозе препарата сбалансированное представительство "трансфер-факторных" молекул разной специфичности, образовавшихся у доноров в результате перенесённых инфекций, вакцинаций и латентной иммунизации, что делает готовый препарат «полиспецифическим»). Количество препарата, приготовленного из 500 млн лейкоцитов донорской крови, обладает 1 ед активности; препарат выпускается в ампулах, содержащих от 0,05 до 0,3 мг белка Аффинолейкина (соответственно 1 или 2 ед) и 5,4 мг глицина. Содержимое ампулы растворяли в 1 мл 0,9% изотонического раствора натрия хлорида для инъекций и вводили подкожно 1 раз в день 1 -3 раза в неделю, при первой инъекции - 0,25 - 0,5 ед., затем при отсутствии побочных реакций увеличивали дозу до 1 ед. для детей и 2 ед. для подростков и взрослых (Разовое введение некоторым больным в начале испытаний 4 ед вызывало ощущение боли в месте инъекции и не применялось в дальнейшем).

Суммарная курсовая доза составила 20 ед при лёгком течении АД, 20 - 40 ед при средней тяжести и 30 - 50 ед при тяжёлом клиническом течении АД. Необходимое количество препарата было безвозмездно предоставлено производителем - Пермским НПО "Биомед" (Филиал ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ).

Внутрикожные аллергические пробы. В кожу внутренней поверхности предплечья в объёме 0,05 мл забуференного фосфатами изотонического раствора хлорида натрия (ЗФР Кока) вводили 1 ед. очищенного туберкулина ( РАО «Биопрепарат», Санкт-Петербург); 10 биол. ед. кандидина («Бул-Био» НЦЗПБ ЕООД, Болгария); 0,05 Lf очищенного концентрированного дифтерийного и 0,025 Lf столбнячного анатоксина (ОАО «Биомед» им. И. И. Мечникова, Красногорск), а также ЗФР без антигенов. Через 20 - 30 мин и 48 ч измеряли два перпендикулярных диаметра, соответственно, волдыря и папулы, возникших в месте инъекции. Реакцию на аллерген считали положительной, если полусумма диаметров составила 8 мм и более (при отсутствии ответа на чистый ЗФР).

Субпопуляционный состав циркулирующих лимфоцитов определяли проточной цитофлуориметрией (FACS «EPIX» CS System. Becton Dickinson, США), используя панель моноклональных антител к CD-антигенам лимфоцитов и к антигенраспознающему рецептору убТ-КЛетсж, конъюгированных с изотиоцианатом флуоресцеина и фикоэритрином (ТОО «Сорбент», Москва и Caltag Labs, США).

Содержание общего IgE и аллергенспецифических антител класса Е в сыворотке определяли в ИФА, используя наборы пыльцевых аллергенов (ГУП

«Аллерген», Ставрополь), пищевых и пылевых аллергенов (ОАО «Биомед» им. И.И.Мечникова, Красногорск), а также моноклональные антитела к 1дЕ и стандартный образец 1дЕ (ООО «Полигност», Санкт-Петербург и 00 0 «Центр клинической фармакологии и фармакотерапии», Ставрополь).

Эффективность комплексного лечения АД оценивали по ряду критериев: по частоте выявления «значительного клинического улучшения» и «клинического улучшения» (соответственно, исчезновение около 50% и 75% проявлений АД); по выраженному в % снижению индекса бальной характеристики процесса (БСОРАй), т.е. по показателям индивидуальной терапевтической эффективности (ИТЭ); по сроку достижения 50% терапевтического эффекта, при снижении БСОРАй наполовину; по частоте нормализации элементов лейкограммы и «иммунограммы» (определение субпопуляционного состава лимфоцитов венозной крови). Нормализация рассматривалась как возвращение повышенных или сниженных показателей абсолютного содержания субпопуляций лимфоцитов в пределы доверительных интервалов, установленных для здоровых доноров (по данным лаборатории Отделения клинической иммунологии и иммунотерапии ГУ «ЦНИИКВИ»).

Для статистической обработки результатов были использованы приёмы параметрической ^-критерий Стьюдента), также непараметрической

статистики [Вилкоксона-Манна-Уитни, Пирсона ) ], точной вероятности Фишера, «хвостов» Розенбаума и медианный] в тех случаях, когда характер распределения полученных величин был не известен.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Фармакотерапия как с добавлением Аф так и без него в течение 5 - 8 нед. существенно изменила клиническую картину в сторону улучшения. В ГА на 13-15 день лечения наблюдалось стихание воспалительного процесса - уменьшилась выраженность высыпаний, отёчности, мокнутья и интенсивности зуда, снизилось количество экскориаций, серозно-гемморагических и гнойно-геморррагических корок, стали быстрее заживать расчесы, кроме того, уменьшилась пиогенизация. Та же положительная клиническая динамика имела место и в ГС, но значительно позже - на 18-19 день.

Результаты сравнительной оценки эффективности включения Аффинолейкина в комплексную фармакотерапию АД представлены в табл. 1. По всем критериям эффективности: темпам снижения БСОРАй (показателям ИТЭ); срокам достижения 50%-го клинического эффекта и купирования пиогенизации, а также по частоте «значительного улучшения» - в ГА при тяжелом и среднетяжёлом АД положительная динамикапроисходила существенно быстрее, чем в ГС. Однако, при лёгком течении АД иммунотерапия Аф не только не ускорила, а в некоторых случаях даже задерживала наступление ремиссии, снизив частоту эпикриза «значительное клиническое улучшение» и «клиническое улучшение».

При тяжёлом и среднетяжёлом течении АД добавление Аф позволило у значительного числа больных на 2 - 3 недели сократить срок достижения 50%-го лечебного эффекта и на 1 - 2 нед. раньше купировать пиогенизацию. Показатель ИТЭ 40 и выше обычно принимают как проявление «сильного» терапевтического эффекта. В ГС его удалось достичь у 34 (59%) пациентов, а при добавлении Аф -у 46 (75%) (критерий Пирсона = 3,82; Р < 0,01).

Положительный эффект Аф прямо зависел от его курсовой дозы. Так, в 22 случаях «клинического улучшения» было введено 17,2 ±1,1 ед., а в 39 случаях «значительного клинического улучшения» и «клинического улучшения» - 26 ± 4,4 ед. (критерий Стьюдента - Р <0, 05) положительный эффект Аф достоверно проявлялся и после завершения курса инъекций. В течение последующих 9 мес. было отмечено сокращение частоты, тяжести и продолжительности обострений у 63% пациентов из ГА и только у 27% больных из ГС (Р < 0, 05). При этом пиогенизация при обострениях АД наблюдалась только у 12% больных в ГА и у 45% пациентов в ГС (Р < 0, 05).

Нормализация лейкограммы и «иммунограммы» Добавлен ие Аф (рис. 2) повысило частоту нормализации исходно пониженного абсолютного содержания в крови общей популяции СDЗ+Т-клеток и нарушенного соотношения субпопуляций CD4+T- и СD8+Т-лимфоцитов, правда, вероятность этого эффекта, как и нормализации содержания моноцитов (от монопении), была не выше 80%. Однако под влиянием Аффинолейкина чаще происходила нормализация исходно повышенного содержания клеток с маркером готовности к апоптозу CD95+ и с существенно большей частотой - нормализация исходно повышенного содержания эозинофилов.

й Группа аффинолейкина

СС>3+,4+,8+ С095+ Эозинофилы Моноциты Р*0.05 Р<0.02

Рис.2 Эффект Аффинолейкина на частоту нормализации иммунограммы при атопическом дерматите

Динамикауб Т-лимфоцитов. При АД (табл. 2) до лечения оказалось значимо сниженным абсолютное и относительное содержание убТ-лимфоцитов в крови. Этот факт был известен и раньше [ Schauer U. et al. 1991; Fujita M. et al., 1993], но мы выяснили новые обстоятельства. По средним показателям лечение АД с Аф и без него не только не нормализовало, но и в некоторой степени, хотя и незначимо, снизило исходное абсолютное содержание в крови уб Т- лимфоцитов. Некоторое нарастание наблюдалось лишь по средним относительным показателям. Однако, в зависимости от результата лечения между ГА и ГС наблюдались принципиальные и значимые различия в направленности изменений числа убТ-лимфоцитов. Так, в ГА среди пациентов, выписавшихся со «значительным улучшением», у большинства содержание убТ-клеток нарастало или стабилизировалось (рис. 3). Иными словами, абсолютное содержание уб Т-лимфоцитов в крови может служить прогностическим показателем

динамики процесса, поскольку «значительное клиническое улучшение», как правило, гарантирует более длительную ремиссию, чем «клиническое улучшение».

Без эффекта Значительное

улучшение

Рис. 3 Связь частоты увеличения или стабилизации содержания уб Т-клеток в крови с эффектом лечения у больных атопическим дерматитом

В этой связи вызывает особый интерес обнаруженная недавно ведущая роль уб Т-клеток в инволюции воспаления при АД. [Satoh М., 1996; Cai Ji-Lian, Tucker Ph., W., 2001 ;Holtmeier W., 2002;] Например, введённые в вену убТ-клетки способны излечить дерматит, который развивается у мышей, утративших гены у-и б-цепей Т-клеточного рецептора и напоминает АД человека. Предполагается, что уб Т-клетки продуцируют растворимые антигенсвязывающие Т-клеточные белки (ТАБ), низкомолекулярные антигенспецифичные фрагменты которых, вероятно, представляет собой действующее начало препаратов ТФ, в том числе Аффинолейкина.

Судя по результатам кожных проб гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (реакция Манту), анергия в отношении туберкулина-PPD, столбнячного анатоксина, дифтерийного анатоксина и кандидина среди больных АД была обнаружена до лечения, соответственно в 75, 85, 75 и 24%. Курс Аф (табл. 2) вызвал восстановление или усиление ГЗТ к тем же антигенам, в 82, 46, 64 и 54% соответственно. В ГС положительная «конверсия кожных проб» наблюдалась лишь на кандидин и только в 10% случаев.

Утрата противоинфекционного клеточного иммунитета (иммунологической памяти) к инфекционным возбудителям - характерный признак АД [McGeady S.J., Buckley R.H., 1975; Akasawa A., 1991; Bos J.D., 1992], а его восстановление под действием препаратов «трансфер-фактора» давно известный факт. Наши результаты позволяют утверждать, что Аф действительно обладает иммунокорригирующим эффектом, который обусловлен его иммуноспецифической («трансфер-факторной») активностью, возникшей благодаря тому, что все доноры лейкоцитарной массы (исходное сырьё для производства Аф) были исходно туберкулин-положительными и неоднократно иммунизировались адсорбированными дифтерийным и столбнячным

анатоксином.

У 22 пациентов (дети и подростки) были получены принципиально те же результаты [Мокроносова М.А., 2002]. Однако, у них положительный эффект включения Аф в фармакотерапию больных АД выше (Р < 0,05), чем у взрослых. Эффективность иммунотерапии Аф находилась в прямой зависимости от исходной величины SCORAD. Когда пациентов ГА разделили на две подгруппы: первую (18 чел.), у которых лечение было успешным, и вторую (15 чел.), которым применение Аф не помогло, то исходные уровни SCORAD первой группы оказались достоверно выше индексов второй (Р < 0,01), т. е. чем тяжелее было течение АД, тем с большей частотой проявлялась иммунотерапевтическая эффективность Аф. У 22 больных из ГА через 3 мес. после прекращения иммунотерапии показатели ИТЭ приблизились к показателям ГС. В течение этого времени у 7 (32%) больных обострений не возникало, хотя они не получали лечения. А у 15 (68%) больных активность дерматита сохранялась, вопреки продолжающейся основной фармакотерапии.

Эффективность применения Аффинолейкина в комплексном лечении больных атопическим дерматитом

Тяжесть процесса Группа Число больных Положительная динамика процесса SCORAD ínoí — SCORAD (после) •/„ Отличие группы Аффинолейкина raor^Cfl^ лечебного эффооа Оетичие группы Аффинолейкина эфф ечная оценка екта лечения Отличие группы Аффинолейкина

SCORADOlo) (показатели отдельных больных, расположеннные по ранжиру) Улучшение Знач. улучшение Клинич. выздоровление

Тяжелый Аффинолейкина 18 18,25,27,37,43,44,45,48,48,49,53,55, 59,59,60,66,67,68 Критерий М-У** Р <0,05 3(2-3) Различие медиан p<aoi 5 13 0 Критерий Фишера Р<0,01

^Уйпмш ч^шыни 10 36,36,36,41,43,43,44,49,50,53 4(4-5) 8 2 0

Сред-нетя-ЖЕЛЬЙ Аффинолейкина 28 25,28,35,35,39,41,42,42,45,45, 46,47,48,50,53,54,55,57,59,61, 63, 65,65,66, 67,71,72,84 Критерий М- У** Р<0,01 2(2-3) Критерий Розен-баума Р< 0,01 8 20 0 Критерий Пирона Р < 0,05

СравнеНия 23 19,19,21,22,23,25,27,28,29,29, 32,38,45,46,49,56,57,62,64, 65,69,72,81 ЗР-4> 13 10 0

Лзхий Аффинолейкина 15 17,19,26,35,35,36,42,47,50, 50,52,53,53,55,100 Различие незначимо 3(2-3) Различие незначимо 9 5 1 Различие незначимо

Сринк> НИИ 25 10,19,29,30,30,30,30,35,38, 40,47,47,50,54,56,59,62,62, 64,71,73,76,77,78,87 2(2-3) 9 14 2

Сроки купирования пиогенизации Группы Число больных М ± m (над) Отличие группы Аффинолейкина

Аффинолейкина 15 1,4 ± 0,13 Критер 1й Стьюдента р < 0,01

сравнения 13 2,2 ± 0,2

*Медиана и ее 95%-й доверительный интервал по Ван дер Вардену. ** Уилкоксона-Манна-Уитни.

Влияние Аффинолейкина на содержание убТ-клеток в периферической крови и восстановление ГЗТ к микробным

антигенам у больных АД

Группа Численность групп Содержание у5 Т-клеток Динамика содержания убТ-клеток в связи с эффектом лечения2 Восстановление и усиление ГЗТ в результате лечения2

До лечения После лечения Без эффекта Улучшение Значительное улучшение Туберкулин-PPD Дифтерий-ный анатоксин Столбняч-ный анатоксин Кандидин

в мкл крови % от CD3+T- клеток в мкл крови % от CD3+T- клеток I5 т 6 1 ? 1 II —►

Здоровые 6 121±13 8 ± 1

Группа Аффинолейкина 18 78 ±71 4,8±0.б1 73±6 6,2±0,5 - - 6/9 3/9 2/9 7/93 9/114 9/114 7/114 9/174

Группа сравнения 10 80 ±81 5,4±0,71 75±6,5 5,9±0,6 1/1 _ 3/8 5/8 1/1 - 0/8 0/8 0/8 2/20

1 При атопическом дерматите до лечения содержание убТ-клеток в крови снижено (критерий Стьюдента - Р < 0,05)

2 В числителе - число больных, давших соответствующую реакцию, из группы, численность которой указана в знаменателе.

3 В группе аффинолейкина среди пациентов, выписавшихся со «значительным улучшением», у большинства нет падения содержания убТ-клеток (критерий Пирсона - Р < 0,02).

4 Отличие группы Аффинолейкина значимо (критерий точной вероятности Фишера — Р < 0,025).

5 Уменьшение содержания убТ-клеток.

6 Увеличение или стабилизация содержания убТ-клеток.

Сводная оценка эффективности Аффинолейкина приведена на графике (рис. 4). Даже такой сверхформализованный показатель, как частота выявления «значительного клинического улучшения» и

«клинического улучшения», выявил значимый положительный эффект включения Аф в комплексное лечение больных АД при тяжелом и среднетяжелом течении дерматоза (до 80%).

Рис. 4. Эффективность комплексного лечения обострений атопического дерматита (% больных, результаты лечения которых оценены как «значительное клиническое улучшение» и «клиническое улучшение».

Общая характеристика и частота нежелательных побочных эффектов фармакотерапии АД представлены в табл. 3. Пациентам в ГС не делали инъекций плацебо, поэтому местные и общие реакции на введение препарата, несвязанные с кожным процессом, были учтены только в ГА.

У 5 пациентов наблюдались одновременно местные и системные побочные реакции, например 15 - 20-минутное ощущение жжения в месте инъекции и повышенное потоотделение или головная боль и субфебрилитет в течение нескольких часов после инъекции препарата. Эти осложнения иммунотерапии во всех случаях были лёгкими, не повторялись при последующих введениях препарата, ни в одном из случаев не были причиной отмены Аф и суммарно имели место лишь у 13% больных АД. Второй тип системных побочных реакций в виде незначительного скоропреходящего усиления проявлений АД - гиперемии, экссудации и зуда - после 4-6 инъекций Аф наблюдался у 21% больных. Транзиторное обострение АД продолжалось не более 1 нед, не требовало дополнительных лечебных мер и стихало после последующих инъекций препарата. Однако у 3 больных курс Аф был преждевременно закончен именно по этой причине. Тем не менее, большинство случаев транзиторного обострения нельзя интерпретировать как реакцию на Аф, поскольку оно наблюдалось в среднем и у 18% пациентов в ГС. Аф как изогенный природный биофармацевтический препарат при иммунотерапии АД не вызывает ни одного из тех осложнений наружной и системной фармакотерапии, которые характерны для применения глюкокортикостероидов, иммуносупрессивных макролидов и цитостатиков.

Иммунотерапия Аффинолейкином не влияла на содержание аллерген-специфичных IgE в крови больных АД. Из 23 больных, обследованных до лечения у 9 были выявлены ^ антитела к пищевым (коровье молоко, цитрусовые, мясо трески и курицы, куриные яйца), пылевым (шерсть собаки и кошки) и пыльцевым (амброзия) аллергенам. Удалось проследить динамику этого показателя у 12 больных из ГА и у 5 - в ГС. Во всех случаях он существенно не изменился. Однако, реализация положительного терапевтического эффекта Аф может быть связана с вмешательством в аллергопатологию АД. Об этом свидетельствуют результаты немедленной кожной реакции на туберкулин, анатоксины и кандидин - до лечения они были положительными у более 50% больных. Фармакотерапия без Аф не влияла на частоту немедленных реакций на туберкулин и анатоксины, но вдвое снизила частоту реакций на кандидин. Добавление Аф у 4 пациентов из 11 усилило реакции гиперчувствительности немедленного типа к туберкулину и анатоксинам, особенно к дифтерийному, но не к кандидину. Вероятно, у пациентов с атопией иммуноадъювантый эффект Аф проявился не только в стимуляции ГЗТ, но и в отношении продукции соответствующих ^-антител. Кроме того, был обнаружен и другой аспект воздействия Аф на аллергические реакции при АД.

Из ГА и ГС были выбраны, соответственно, 32 и 22 пациента, АД у которых по наличию или отсутствию сопутствующей аллергопатологии и сенсибилизации можно было отнести к «аллергическому» или «неаллергическому» типу, а

затем распределили по подгруппам в зависимости от эпикриза: «без эффекта», «клиническое улучшение» и «значительное клиническое улучшение» (табл. 4).

Побочные эффекты иммунотерапии применения Аффинолейкинау больных атопическим

дерматитом

Побочные эффекты Число больных %

с побочными эффектами общее

Несвязанные с кожным процессом* Местные Боль, парастезии, эритема в месте инъекции 11 94 12

Системные Озноб, лихорадка, уртикар- ная сыпь, потливость 6 6

Всего 12"' 13*"

«Обострение» дерматита Группа Аффинолейкина** 20 21

Группа сравнения 17 93 18

Различия между группами Незначимы

* Реакция на 1 - 3 инъекцию Аффинолейкина в суммарной дозе 1 - 6 ед. ** Реакция на 4 - 6 инъекцию Аффинолейкина в суммарной дозе 8-12 ед. *** У 5 больных одновременно наблюдались местные и системные реакции.

Таблица 4

Терапевтическая эффективность и побочные эффекты Аффинолейкина у больных атопическим дерматитом различного иммунопатогенеза

Конечный эффект терапии Группа Аффинолейкина Группа сравнения

Аллергический дерматит Неаллергический дерматит Аллергический дерматит Неаллергический дерматит

Без эффекта 0 0 1/7 (14%) 1/15 (7%)

Улучшение 4/16(25%) 11/16(69%) 5/7 (72%) 14/15 (93%)

Различия Критерий Фишера Р<0, 025 Критерий Фишера Рй0,01

значительное улучшение 12/16 (75%) | 5/16 (31%) 1/7 (14%) 0

Различия Критерий Фишера Р<0, 025 Незначимо

Побочные эффекты Местные 3/16 (19%) 3/16 (19%) — —

Системные 12/16 (75%) 5/16 (31%) 4/7 (57%) 2/15(13%)

Различия Критерий Фишера Р<0, 025 Критерий Фишера Р = 0, 025

Было выявлено, что «клиническое улучшение» при лечении с Аф и без него значимо чаще встречалось при неаллергическом АД. Добавление к основной терапии Аф достоверно повышало частоту выявления «значительного клинического улучшения», при этом положительный эффект препарата реализовался преимущественно при АД «аллергического» типа. Системные побочные реакции фармакотерапии с Аф и без него также наблюдались достоверно чаще при аллергическом АД, а частота местных реакций на Аф не зависела от типа АД. Частота транзиторных «обострений» дерматоза в ГА (53%) была несколько выше, чем в ГС (27%) Эта способность Аффинолейкина транзиторно усиливать воспаление может быть отражением механизма его положительного клинического эффекта. Вполне возможно, что содержащиеся в препарате антигенсвязывающие фрагменты ТАБ конкурентно разрушают иммунодепрессивные комплексыАнтиген+ТАБ+И-Ю (или TGFp), временно освобождая проявления активности основных инициаторов воспаления при АД (сфТ-клеток, несущих «кожный лимфоцитарный антиген»). Эти клетки в активированном состоянии становятся мишенью для цитотоксического или цитостатического (противовоспалительного) действия иммунорегуляторных CD8+aPT- и CD8+Y6T--лимфоцитов [Werfel S. etal., 1995; Novak N. eta!., 2004].

Отдаленные результаты комплексного лечения больных атопическим дерматитом были проанализированы у 38 больных (24 больных - ГА и 15 больных- ГС) в течение 3-9 месяцев. У 62.5 % пациентов ГА и 26.6% ГС отмечались изменения в выраженности клинической картины последующих обострений дерматоза (уменьшение площади поражения, воспалительной реакции, интенсивности зуда). Присоединение пиогенизации в ГА наблюдалось в 12.5% случаев, тогда как в ГС в 45%.

Таким образом, на основе полученных клинико-лабораторных результатов был разработан новый индивидуально ориентированный комплексный метод лечения больных атопическим дерматитом с включением в его состав трансферфакторного препарата - Аффинолейкина.

ВЫВОДЫ

1. Выраженный положительный иммунотерапевтический эффект Аффинолейкина проявляется при лечении больных с тяжёлым и среднетяжёлым течением АД и пропорционален величине суммарной курсовой дозы препарата. Применение Аффинолейкина не целесообразно у больных с лёгким течением атопического дерматита.

2. Включение Аффинолейкина в комплексную терапию больных атопическим дерматитом повышает частоту положительного лечебного эффекта до 80%, позволяет на 1-2 недели ускорить купирование пиогенизации, на 2 - 3 недели сократить срок достижения 50%-го лечебного эффекта, снизить частоту, тяжесть и продолжительность последующих рецидивов.

иммунитет в отношении широко распространенных инфекционных возбудителей, нормализует содержание эозинофилов и клеток, несущих маркёр готовности к аппоптозу (CD95), а также стабилизирует и повышает исходно сниженное содержание убТ-клеток в периферической крови больных атопическим дерматитом.

4. Присоединение Аффинолейкина к комплексной фармакотерапии атопического дерматита у 13% пациентов вызывает лёгкие скоропроходящие несвязанные с кожным процессом побочные реакции в виде боли, парастезии и гиперемии кожи в месте введения, субфебрильной температуры, которые, однажды появившись, при последующих инъекциях, как правило, не возникают.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Курс инъекций Аффинолейкина (до 50 ед. у взрослых и подростков , до 20 ед. у детей) целесообразно применять как дополнение к общепринятой терапии обострений атопического дерматита в случаях тяжёлого и среднетяжёлого распространённого процесса, осложненного присоединением инфекции при выраженных патологических сдвигах гемограммы и иммунограммы (в частности, при дефиците в крови убТ-кпеток).

2. Аффинолейкин рекомендуется вводить подкожно 1 раз в день 1-3 раза в неделю, при первой инъекции - 0,25 - 0,5 ед., затем при отсутствии побочных реакций увеличить разовую дозу до 1 ед. для детей и 2 ед. для подростков и взрослых. Для поддержания ремиссии по завершению основного курса инъекций Аффинолейкина целесообразно вводить 1 - 2 ед препарата 1 раз в 2 - 4 недели.

3. Иммунотерапия Аффинолейкином может сочетаться с применением любых других средств патогенетической и симптоматической терапии атопического дерматита.

5. Не рекомендуется применять Аффинолейкин при лёгком клиническом течении атопического дерматита, а также начинать его применение во время ремиссии.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Трофимова И.Б., Мац А.Н. Задионченко Е.В. - Применение Аффинолейкина в комплексном лечении больных атопическим дерматитом - Материалы IX Российского Национального Конгресса «Человек и лекарство» М., 2002, 460 -461.

2. Трофимова И.Б., Мац А.Н., Задионченко Е.В. и др. «Трансфер-факторный препарат в лечении атопического дерматита». // Вестн. постдипломн. мед. образования., 2002,1,47-48.

3. Trofimova I.B., Matz A.N., Zadionchenko E.V.- Transfer factor therapy with Afinoleukinum in patients with atopic dermatitis - J. Eur. Acad. Derm. Vener., 2002,16, SUPPI. 1.P2.48Í

4. Trofimova I.B., Zadionchenko E.V., Matz A.N., Yashin M.M. - The evaluation of gamma-delta T-cells in patients with atopic dermatitis - J. Eur. Acad. Dermat.Vener., 2003,17, suppl. з, Р2-13;

5. Трофимова И.Б., Мац А.Н., Задионченко Е.В., Резайкина А.В., Яшин М.М. -Определение гамма-дельта Т-клеток в периферической крови больных атопическим дерматитом - Медицинская иммунология, 2003, т.5, № 3-4, 240;

6. Трофимова И.Б., Мац А.Н., Задионченко Е.В. «Изучение эффективности Аффинолейкина в комплексной терапии больных атопическим дерматитом» // Материалы конференции посвященной 75-летию проф. Машкиллейсона А.Л., Москва, 2004, стр.74 - 75.

7. Trofimova I.B., Matz A.N., Zadionchenko E.V «Transfer factor therapy in patients with atopic dermatitis».// 2-nd spring symposium EADV. Budapest., 2004, p. 101.

8. Самсонов В.А, Трофимова И.Б., Мац А.Н., Знаменская Л.Ф., Надгериева О.В, Фяттяхетдинова З.Г., Задионченко Е.В. - Лечение больных псориазом и атопическим дерматитом с применением препарата тансферфакторной природы под контролем иммунных факторов воспаления // Экспериментальная и клиническая дерматокосметология, 2004,3, 37- 40.

9. Задионченко Е.В., Надгериева О.В., Мокроносова М.А., Знаменская Л.Ф., Яшин М.М., Трофимова И.Б., Мац А.Н. «Иммунотерапевтическая эффективность аффинолейкина при атопическом дерматите» // Биопрепараты, 2004, 4(16), 25 -31.

10. Трофимова И.Б., Задионченко Е.В. «Гамма-дельта-Т-ориентированная терапия при атопическом дерматите». // Вестник постдипломного медицинского образования, 2005, №1, 21.

11. Трофимова И.Б., Мац А.Н., Задионченко Е.В., Мокроносова М.А., Кочетова Ю.И. - Патент РФ № 2248804 «Способ лечения атопического дерматита»-Бюллетень изобретений, 2005, №9.

12. Трофимова И.Б., Задионченко Е.В. Гамма-дельта Т-клетки. // Вестник дерматологии и венерологии, 2005, 2, 15-21 (в печати).

Заказ № 344. Объем 1 п.л. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Петроруш». г. Москва, ул. Палиха-2а, тел. 250-92-06 www.postator.ru

07 МДЙ 2005 f И < - i *

. / m

"s*

Оглавление диссертации Задионченко, Екатерина Владимировна :: 2005 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I Обзор литературы.

1.1. Патогенетические аспекты атопического дерматита.

1.2. Роль гамма-дельта Т-клеток в иммунной системе организма.

1.3. Гамма-дельта Т-клетки и кожа.

1.4. Иммунокоррегирующая терапия больных атопическим дерматитом.

1.5. Препараты трансферфакторнонго происхождения.

ГЛАВА II Материалы и методы исследования.

2.1. Клиническая характеристика и критерии отбора пациентов.

2.2. Клинические методы исследования.

2.3. Лабораторные методы исследования.

ГЛАВА III Исследование эффективности Аффинолейкина при комплексном лечении больных атопическим дерматитом.

3.1. Ближайшие результаты лечения иклинико-лабораторных показателей у больных атопическим дерматитом после комплексной терапии с включением аффинолейкина.

3.2. Отдаленные результаты лечения больных атопическим дерматитом с использованием аффинолейкина.

Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Задионченко, Екатерина Владимировна, автореферат

Актуальность темы

Проблема атопического дерматита (АД) остается одной из наиболее актуальных для современной дерматологической науки и практики. Высока и продолжает увеличиваться распространенность АД: 3-5% населения земного шара страдает этим заболеванием (21). В развитых странах заболеваемость АД составляет от 1 до 3% у взрослых и 10 - 20% у детей. [2,45,51].

Трудности разработки новых методов лечения АД связаны, главным образом, с недостаточно изученными молекулярными и иммунными механизмами аллергического воспаления в коже, а также характером взаимосвязей между генетическими дефектами метаболизма церамидов и синтеза антимикробных пептидов в клетках эпидермиса [6,65,9], наследственными нарушениями иммунорегуляции, продукции цитокинов и хемокинов и экспрессии цитокиновых и хемокиновых рецепторов на кератиноцитах и дендритных клетках кожи [13,44,77].

Повышение эффективности терапии АД может быть достигнуто вмешательством в иммунопатогенез с целью подавления воспалительной реакции, вызванной аллерген-реактивными ар Т-клетками, и восстановлением угнетённого антимикробного и антистрессового клеточного иммунитета. Мишенью такого воздействия может служить особая субпопуляция Т-клеток, которые встречаются в циркуляции (до 10% всех Т-лимфоцитов) и заселяют эпидермис в виде межэпителиальных дендритных гамма-дельта Т-клеток (у5Т-кл), прямо распознают своим гамма-дельта рецептором микробные (например, стафилококковый токсин) и собственные (экспрессированные стрессом или воспалением) белковые и небелковые антигенные детерминанты и играют ключевую роль в защите кератиноцитов от микробной инвазии и воспалительной альтерации [109, 165,230,222]. Во время обострений АД содержание гамма-дельта Т-клеток увеличивается в воспалённых участках эпидермиса и дермы, но падает ниже нормы в периферической крови [221,230]. Часть циркулирующих у5Т-клеток человека несёт CD8 и CD56 (маркер NK-клеток) [209].

В настоящей работе для воздействия на иммунопатогенез АД, на гамма-дельта Т-клетки с целью повышения эффективности комплексной фармакотерапии обострений у больных АД был использован отечественный полиспецифический иммунотерапевтический препарат «Аффинолейкин» (аналог зарубежных трансфер-факторных препаратов), представляющий собой комплекс низкомолекулярных (5-8 кД) белков, экстрагированных из мембран донорских лейкоцитов, которые способны, подобно антителам (но с меньшей аффинностью), специфически связываться с нативными микробными антигенами и переносить антиинфекционный иммунитет от иммунного донора неиммунизированному реципиенту [25]. Кроме этого, они способны воздействовать на моноциты и эндотелиальные клетки, супрессировать повышенную при АД активность фактора транскрипции NF- кВ в кератиноцитах и лейкоцитах] и продукцию фактора некроза опухолей альфа [112,134,222]

Известная способность препаратов «трансфер-фактора» восстанавливать угнетённый противоинфекционный клеточный иммунитет [188,220,203] стала общей патогенетической предпосылкой их применения для иммунотерапии АД. Из 30 публикаций (MEDLINE) 28 свидетельствуют о положительном клиническом эффекте этих препаратов при АД у 70 - 80% больных [143, 166, 200]. Однако, терапевтический потенциал, фармакодинамика и нежелательные побочные эффекты этих препаратов как «биологических модификаторов иммунного ответа» до сих пор исчерпывающе не исследованы и их рациональные схемы и дозы введения не разработаны. Кроме того, отсутствие международных стандартов на препараты «трансфер-фактора» и разнообразие исходного сырья и технологии приготовления приводят к тому, что препарат каждого производителя существенно отличается от своего «аналога» по иммуноспецифическим и иммунофармакологическим свойствам, и должен изучаться в отдельных клинических исследованиях [25].

Цель исследования

Задачи исследования

4. Выявить характер и частоту побочных реакций на введение Аффинолейкина.

Научная новизна

В результате исследований показано, что новый отечественный иммунотропный препарат Аффинолейкин, обладает клинической эффективностью при лечении больных атопическим дерматитом особенно при тяжёлом и среднетяжёлом его течении. Аффинолейкин способствует нормализации содержания эозинофилов и клеток, несущих маркёр готовности к аппоптозу (CD95), а также стабилизирует или повышает содержание гамма-дельта Т-клеток в периферической крови больных атопическим дерматитом.

Практическая значимость

Основные положения выносимые на защиту

1. Включение курса инъекций Аффинолейкина в комплексную фармакотерапию больных атопическим дерматиом целесообразно проводить при тяжелом и среднетяжелом течении АД.

2. Аффинолейкин способствует нормализации (отражающей эффективность лечения) содержания эозинофилов и клеток, несущих маркёр готовности к аппоптозу (CD95), а также стабилизирует и повышает исходно сниженное содержание гамма-дельта Т-клеток в периферической крови больных атопическим дерматитом.

Внедрение результатов исследования

1. На основании результатов «Государственных клинических исследований эффективности и безопасности иммунобиологического Аффинолейкина в лечении атопического дерматита и псориаза», была подготовлена Новая инструкция по его применению, представленная для утверждения в Государственный Фармакопейный Комитет РФ.

Заключение диссертационного исследования на тему "Гамма-дельта Т-ориентированная иммунотерапия при атопическом дерматите"

ВЫВОДЫ

2. Включение Аффинолейкина в комплексную терапию больных атопическим дерматитом повышает частоту положительного лечебного эффекта до 80%, позволяет на 1-2 недели ускорить купирование пиогенизации, на 2 — 3 недели сократить срок достижения 50%-го лечебного эффекта, снизить частоту, тяжесть и продолжительность последующих рецидивов.

3. При обострении АД Аффинолейкин ускоряет достижение ремиссии, восстанавливая нарушенную иммунорегуляторную и тканезащитную функцию Т-лимфоцитов, в частности гамма-дельта Т-клеток. Коррегирует клеточный иммунитет в отношении широко распространенных инфекционных возбудителей, нормализует содержание эозинофилов и клеток, несущих маркёр готовности к аппоптозу (CD95), а также стабилизирует и повышает исходно сниженное содержание у8Т-клеток в периферической крови больных атопическим дерматитом.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Курс инъекций Аффинолейкина ( до 50 ед. у взрослых и подростков , до 20 ед. у детей) целесообразно применять как дополнение к общепринятой терапии обострений атопического дерматита в случаях тяжёлого и среднетяжёлого распространённого процесса, осложненного присоединением инфекции при выраженных патологических сдвигах гемограммы и иммунограммы (в частности, при дефиците в крови у5Т-клеток).

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2005 года, Задионченко, Екатерина Владимировна

1. Адаскевич В.П., Ягодвик Н.З. Патогенез и клинические варианты атопического дерматита // Здравоохранение Белорусии,1995;№1, с.10-13.

2. Балаболкин И.И., Гребенюк В.Н. Атопический дерматит у детей.М., Медицина, 1999, 240 с.

3. Бережная Н.М.В-лимфоциты и патогенез атопических заболеваний. // Международный журнал по иммунореабилитации, ,№6, с. 101-108; 1997.

4. Гасич Н.А., Изменение иммунного статуса и оптимизация терапии больных атопическим дерматитом//Дисс.канд. -Красноярск — 1996.

5. Глухенький Б.Т., Грандо С.А. Иммунозависимые дерматозы.// Киев. -«Здоровье».-1990. с.98.

6. Горланов И.А. Клинико-иммунологическая характеристика детей, больные нейродермитом, дис. канд. мед. наук, М., 1984, с. 191.

7. Горланов И.А., Монаков К.Н., Лаврова O.B.HLA-антигены у больных атопическим дерматитом. Актуальные вопросы дерматологии и сифилид ологии.Ст-Петербург.2:17-18; 1994.

8. Гребенюк В.Н. Веркович Н.В. К вопросу о профилактической роли семейного подхода при атопическом дерматите // Сборник тезисов: Материалы конференции «Современные вопросы патогенеза и терапии псориаза и распространенных дерматозов»,М.Д998, с.23.

9. Гущин И.С. Аллергическое воспаление и его фармакологический контроль, 1973.

10. Двойрин В.В., Клименков А.А. Методика контролируемых клинических испытаний - Медицина, М., 1985, стр.34.

11. П.Дидковский Н.А., Малашенкова И.К., Тазулахова Э.Б.Индукторы интерферонов новый перспективный класс иммуномодуляторов // Аллергология, 1999, №4, 26-32.

12. Димиева Г.М. Особенности цитокинового и иммунокомплексного механизмов регуляции содержания IgE у больных атопическим дерматитом. Автореф. дис. канд.мед.наук, М., 1999, с.12-15.

13. Ерохина Е.В. Комплексное лечение больных атопическим дерматитом с использованием иммуномодуляторов, магнитного поля, йодобромных ванн и традиционной терапии. Автореф. Дис.канд.мед.наук, М., 1995, с.8, с.10-14.

14. Жуматова Г.Г.// Материалы к изучению роли бактериальной аллергии в патогенезе экземы и нейродермита у детей и вопросы терапии.// Автореф. дис. Канд .мед. наук, М., 1976,с.24.

15. Зверькова Ф.А.Болезни кожи детей, С-П, Сотис, 1994, с. 180-195 1984.

16. Знаменская Л.Ф. Клинико-иммунологическая характеристика и терапия миелопидом больных атопическим дерматитом. Автореф. Дис.канд.мед. наук, М., 1994, с.6, с.11, с.13.

17. Калюжная Л.Д. Принципы коррекции атопического дерматита, М., Медицина, 1991; с.222.

18. Калюжная Л.Д., Поцыбина В.В. Радионуклеидное исследование функционального состояния печени у больных атопическим дерматитом.// вестн. дерматол. -1987. -№3. с.52-54, 1987.

19. Керимова А.С. Обоснование комплексной терапии больных атопическим днрматитом лейкинферроном на основании изучения показателей интерферонового статуса) Дис.канд.мед.наук, М., 1991, с.77,с.81-82.

20. Корсунская И.М., Антоньев А.А. Реоэнцефалография у детей, больных атопическим дерматитом.//Вестн. Дерматол. 1981.-№2. - с.54-56.

21. Кочергин Н.Г. Основные аспекты патогенеза, клиники и современной терапии атопического дерматита.// Автореф.дис.док. мед.наук, М.,2001.

22. Кочергин Н.Г.// Российский журнал кожных и венерических, болезней, 1998; 5: 59-64.

23. Кунгуров Н.В. Особенности типов течения атопического дерматита. Принципы терапии. Автореф.дис.д-ра мед.наук, М., 1998. С. 19-29.

24. Кунгуров Н.В., Герасимова H.JL, Кохан М.М, Базарный В.В. Типы течения и иммунологические особенности атопического дерматита // Сборник тезисов: Материалы конференции, псвященной 60-летию кафедры кожнх и венерических болезней МГМСУ, М., 1999; с. 18.

25. Мац А.Н. Вновь о препаратах "трансфер-фактора" как средстве специфической иммунотерапии - Медицинская иммунология, 2001, 1, 2, 328 -329.

26. Мельник И.В. Исследования клинико-иммунологических показателей у больных атопическим дерматитом на фоне лечения сандимуном- неоралом // Сборник тезисов РГМУ: Материалы конференции «Вопросы дерматологии и косметологии», М., 1998, с.35-36.

27. Мишурис JI.A. Комплексная терапия клинико-иммунологических нарушений у больных атопическим дерматитом с включением имунофана. Дис.канд.мед.каук М., 2000, с.98.

28. Мухамед В.Ш. Атопический дерматит у детей. Совершенствование патогенетического лечения на основаниии комплексног изучения паоказателей иммунитета. Автореф. Дис. Канд.мед.наук, М., 1996, с. 71.

29. Потапнев М.П. В-лимфоциты цитокинообразующая функция//Иммунология,М., Медицина, 1994,№4, с.4-6.

30. Потекаев Н.С., Грабовская О.В., Наполов Ю.К., и др. Динамика активации комплемента по альтернативному пути в процессе различных методов терапии больных атопическим дерматитом // Вестник дерматологии и венерологии., 1997,№3, с.30-32.

31. Прохоренков В.И., Протопопов Б.В., Гасич М.А. Иммунологические нарушения и экпрессия HLA-DR АГ мононуклеарными клетками крови у больных атопическим дерматитом // Вестник, 1995.

32. Резайкина С.Ю.: Ликопид в комплексной терапии больных атопическим дерматитом Автореф. Дис.канд.мед.наук.М., 1999, с.32-34, с.68-71.

33. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. « Иммунология», М., 2000.

34. Романов Г.И. Романова Н.В. иммунопатология атопического дерматита и подходы к терапии больных // Сборник тезисов: материалы конференции «Современные вопросы патогенеза и терапии псориаза и распространенных аллергических дерматозов», М., 1998, с.97-98.

35. Российский национальный согласительный документ по атопичекому дерматиту. Под редакцией Хаитова P.M., Кубановой А. А. М.,2002. с.8.

36. Самсонов В.А., Мазина Н.М., Заменская Л.Ф. Комплексный метод лечения больных атопическим дермпатитом с использованиемотечественного имммуномодуклятора миелопида // Вестн. Дерматологии и венерологии, 1993, №1. с. 65.

37. Самсонов В.А., Мазина Н.М., Знаменская Л.Ф. Комплексный метод лечения больных атопическим дерматитом с использованием отечественного иммуномодулятора миелопида // Вестник дерматологии и венерологии, 1993, №1, с.65.

38. Севидова Л.Ю. Кочергин Н.Г., Шинаев Н.Н. // Терапевтическая эффективность димоцифона при атопическом дерматите. // Вестник дерматологии и венерологии, 1986, №9, с.55-58.

39. Сергеев Ю.В., Иванов О.Л., Новиклв Д.К., Сергеев А.Ю. Атопический дерматит: современная диагностика и лечение. Иммунопатол. Аллергол. Инфектолог.2001;4;28-48.

40. Сидоренко О.А. Состояние свободнорадикального окисления липидов, калликреин-кинниновой системы, микрофлоры кожи у детей с атопическим дерматитом, осложненным пиодермией и совершенствование его лечения.// Вестник дерматологии и венерологии //№3; 4:1998.

41. Скрипкин Ю.К., Кубанова А.А., Левин М.М., Селисский Г.Д., Федоров. С.М.Дерматозы и заболевания, передаваемые половым путем.Нейродерматозы., Москва-Смоленск. 1996, с.80-81.

42. Скрипкин Ю.К., Машкилейсон А.Л., Шарапова Г.Я, кожные и венерические болезни. М., Медицина, 1995

43. Скрипкин Ю.К., Сомов Б.А., Бутов Ю.С. Аллергические дерматозы.-М.Медицина.-, 1975-С.55-68.

44. Соколов Е.И., Глан П.В., Гришина Т.И. Клиническая иммунология. М., Медицина. 1998.

45. Суворова К.Н. Иммунопатология и иммунотропные средства в дерматологической практике //Русский медицинский журнал, 1998,№6, с.344-347.

46. Суворова К.Н. Атопический дерматит: иммунопатогенез и стратегия иммунотерапии. // Русский медицинский журнал. Специальный выпуск. Дерматология.//1998, №6, с.363-367.

47. Суворова К.Н., Соколова Т.В., Шибанова B.C. Сочетание атопического дерматита с врожденным иммунодефицитом //Вестник постдипломного медицинского образования, М., 1998, №19, с.8-9.

48. Теструп-Педерсен К., Ринг И. // Атопический дерматит (атопическая экзема)- 1998 1-й Международный симпозиум Гелргп-Райка // Российский журнал кожных и венерических болезней, Изд-во Медицина, 1999, №4, с.69-80)

49. Торопова Н.П., Синявская О.А., и др. Новые тенденции в топической терапии атопического дерматита у детей. //Тезисы докладов 7-го Российского съезда дерматологов и венерологов. Часть 1.- Казань- 1996.-С.71-72 1996.

50. Торопова Н.П., Синявская О.А. Экзема и нейродермит у детей. Екатеринбург, 1993, с.446.

51. Трофимова И.Б., Мишурис JI.A., Вестник дерматологии и венерологии., 2001, №4; с.34-37.

52. Тура А.И. Изменение иммунного статуса у детей, больных атопическим дерматитом и подходы к терапии // Сборник тезисов: Материалы конференции посвященной 60-летию кафедры кожных и венерических болезней МГМСУ, М., 1999, с.58-59.

53. Феденко Е.С. Атопический дерматитюбоснование поэтапного подхода к терапии. Лечащий врач. 4.2001.;с.4-11.

54. Федоров С.М., А.А. Кубанова, адо В.А.и с соавт. //Вестник дерматологии и венерологии.//4:33-7; 1996.

55. Федоров С.М., А.Н. Гура. Иммунные механизмы развития аллергических дерматозов // Вестн. дермат. и венерол., 1999,№6,с.11-14.

56. Федоров С.М., Гура А.Н. Иммунные механизмы развития аллергических дерматозов //Вестник дерматологии и венерологии //1999, №6,с.11-14.

57. Хаитов P.M., Кубанова А.А. «Российский национальный согласительный документ по атопическому дерматиту», 2002.

58. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах // Иммунология, М., Медицина, 1994, №4, с.4-6.

59. Шамов Б.А. Атопический дерматит у детей старшего возраста, совершенствование и лечение с учетом особенностей клиники, состояния иммунитета и средовых факторов в промышленном городе. Автореф. дис.канд.мед. наук, М., 1997, с.9-12.

60. Шамов Б.А., Шамова А.Г. Эндотоксин и состояние эндотоксиновой защиты у детей с атопическим дерматитом.// Вестн.дерматол. // 2002; 1 :с. 4849.

61. Шахмейстер И.Я. Патогенез и лечение экземы и нейродермита, М., Медицина, 1970, с. 176.

62. Шеклаков М.Н., Масюкова С.А. «Нейродермит» Консилиум-Медикум, 1999, т. 1, №4, с.161-165

63. Шортанбаева Ж.А. В-лимфоциты у больных нейродермитом // Сборник тезисов: Материалы конференции «Современные вопросы патогенеза и терапии псориаза и распространенных аллергических дерматозов», М, 1998, с.136-137.

64. Autran В., Treble F., Katlama C. et all.T-cell receptor gamma/delta lymphocyte subsets duaring HIV invection. Clin. Exp. Immunol., 1989:75;206-210/

65. Assman Т., Homey В., Ruzika T.Applications of tacrolimus for the treeatment skin disorders. Immunopharmacology, 2000;47:203-13.

66. Ayala-de la Cruz M.C., Rodriquez-Padilla C., Tamez-Guerre R. -Management of Hypereosinophilia with the Transfer Factor Xlth International Congress on ransfer Factor - Monterrey, Nuevo Leon, Mexico, 1999, p.13.

67. Bjerring P., Thestrup Pedersen K., Zachariae H. Treatment of Kaposi's varicelliform eruption with adenine arabinoside (Vira-A) and transfer factor - Acta Derm Venereol, 1982, 62,1, 85 - 87.

68. Balaji K.N., Schwander S.K., Rich E.A., Boom W.H.: Alveolar macrophages as accessory cells for human уб T cellsactivated by Mycobacterium tuberculosis. J Immunol 1995;22:1767.

69. Balasubramaniam V., Appasamy P.M.,: Development of murine pre-T cells into gamma delta T cell receptor bearing cells. Dev Comp Immunol 1994; 18:179191.

70. Bank I., Reshewf A., Beniaminov M., Rosenthal E., Rechavi G., Monselise Y.: Role of y5 T cells in patient with CD4+CD3- lyphocytosis, hypereosinophilia and Hight levels f IgE. J Allergy Clini Immunol 1998: 102:621-630.

71. Behr C., Dubois P.: Preferential expansion of Vy9V<52 T cells following stimulation of peripheral blood lymphocytes with extracts of Plasmodium falciparum. Int Immunol 1991;4:361-366.

72. Bentley G.A., Mariuzza R.A.: The structure of the T cell antigen receptor. Ann Rev Immunol 1996; 15:563-590.

73. Bert-Jones J. et al. Longterm efficacy and serfety of cyclosporin in severe adult atopic dermatitis // British Journal of dermatology // 1997,136, P.76-81.

74. Boismenu R., Feng I., Chang J.C.C. et all: Chemokine expression by intrepitelial уб T -cells: Implications for the recruitment of inflammatory cells to damaged epitelia. J.immunol.l997;158: 1533-1540.

75. Boismenu R., Harvan W.L.: Modulation of epithelial cell growth by intraepithelial уб T-cells // Science.l994;266:1253-1255.

76. Boismenu R., Hobbs M.V., Boulier S., et all: Mollecular and cellular biology of dendritic and epidermalT-cells. Semin.Immunol.1996; 8:323-331.

77. Borelli S., Michailov P. et al. Die Verander ungen der allergichmediatorischen Reaktivitat bei Neurudermitis constitutionalis.// Hautarzt/ 1967. - Bd.18. №18.p.465-468.

78. Borst J., van Dongen J.J., Bolhuis R.L., Peters P.J., Halfer D.D.A., van de Griend R.J.: Distinct molecular forms of human T cell receptor yd detected on varieble T cells by monoclonal antibody. J Exp Med 1988;167:p.1625-1644.

79. Boulier S., Poquet Y., Debored T. et all: Regulation by cytokines of the VyV52 T cell response to mycobacterial phosphoantigens in responder and anergic HIV-infected persons. Eur J Immunol 1999;29:90-99.

80. Bucy P., Chen C.L., Cihak J., Losch U., Cooper M.: Avian T cells expressing yd receptors localize in the splenic sinusoids and the intestinal epithelium. J Immunol 1988;141:2002-2205.

81. Bukovsky J.F., Morita C.T., Berner M.B.: Recognition and destruction of virus-infected cells by human gamma-delta T-cells.J.Immunol.1994;153:5133-5140.

82. Burns J., Bartholomew В., Lobo S.: Induction of Vy9 V82 cell proliferation by activated antigen-specific CD4+ T cells and IL-2. Clin. Immunol. Immunopatol. 1996;80:38-46.

83. Backman E.M., Bukowski J.F. et all: Direct presentation of nonpepted prenyl pyrophosphate antigens to human уб T cells. Immunity. 1995;3:495-507.

84. Cardilo F, Nomizo A, Mengel J/: The role of the thymus in modulating y8 cell suppressor activity during experemental Trypanosoma cruzi infection. Int/ Immunol. //1998;10:107-116.

85. Casale Т. В., Bowman S., Kaliner M. Induction of human cutaneus mast cell degranulation by opiates and endogeneus opioid peptides:J. //Allergy. Clin. immunol.1984, v.73, p.775-781.

86. Casorati G, De Libera G.Lanzavecchia A, Migone N: Molecular analysis of human уд+ T clones from thymus and periferal blood. J exp med 1989; 170:15211535.

87. Chomarat P., Kjeldsen-Kragh J. et all: Different cytokine production profiles of gamma/delta T cell clo9nes: Relation to inflammatory arthritis. Eur J Immunol 1994;2087-2091.

88. Chung B.S., Bergstresser P.R. et all: Mouse dendritic epidermal T-cells exhibit chemotactic migration toward РАМ 212 keratinocyte culture supernatants. J.Investig.Immunol. 1993;101:371-376.

89. Clevers H., Alarcon В., Wileman Т., et al: the T cell receptor/CD3 complex: dinamic protein ensembler. Ann Rev Immunol 1988; 6:629-662.

90. Cone R.E., Georgiou G.M., Little C.H. Soluble T-lymphocyte antigen specific immunoproteins: a progress report - Exp. Biol. Med., 2002, 227, 7, 438 -344.

91. Constant P., Davodeau F., Peyrat M.A., Poquet Y., Puzo G., Bonneville M., Fopurnie J.J.: Stimulation of human уд T cells by nonpeptidic mycobacterial ligands. Science 1994;264:267-270.

92. Cordero-Miranda M.A., Flores-Sandoval G., Orea-Solano M., Estrada-Parra S., Serrano-Miranda E. Safety and efficacy of treatment for severe atopic dermatitis with cyclosporin A and transfer factor -Rev. Alerg. Мех., 1999, 46, 2, 49 - 57.

93. Correa-Meza В., Ramirez R., Badillo-Flores A., Estrada-Parra S. Treatment of atopic dermatitis with Transfer factor and Cyclosporin A - Ith International Congress on Transfer Factor -Monterrey, Nuevo Leon, Mexico, 1999, - p.2.

94. De Libero Gennaro: Control of gamma/delta T cells by NK receptors. Micro infect 1999;1:263-267.

95. Del Prete G. et all. Human TH1 and Th2 lymphocytes:theire role in the pathophisiology of atopy // Allergy. 1992;47:450-5.

96. De Paoli P., Gennary D., Martelly P.,Comorretto R. et all. gamma/delta T-cell receptor-bearing lymphocytes duaring Epstein-Barr virus infection.J.Infect. Dis., 1990;161:1013-1016/

97. Dieli F., Ptak, Sireci G. et all:Cross -talk between V(38+ lymphocytes in contact sensitivity. Immunol 1998; 469-477.

98. Dobmeyer T.S., Dobeyer J.M., Klein S.A. et all:Mechanism of y8 cells-mediated inhibition of srem cell differentiation in vitro: Possible relevance for myelosuppression in HIV-infected individuals.// Cell.Imunol. 1998;184:26-36.

99. Dumon D. Courtois D, Vainio O, Six A , Chen CH, Cooper MD, Dangy JP, Imhof BA: Ontogeny of the immunre systejm: Gamma/delta and alph/beta T cells migrate from thymus to the perephery in alternating waves. J Exp Med 1997;186:977-988.

100. Dumonde D.C. Kirkpatrick C.H., Pizza G. 11-th International Congress on Transfer Factor. March 1-4,1999- Monterrey, Nuevo Leon,Mexico- J. Interferon Cytokin Reserch.,200;20: p.439-441.

101. Ebert M.P., Ademmer К., Muller-Ostermeyer F., Friess H. et all: CD8+CD103+ T cells analogous to intestinal intraepithelial lymphocytes infiltrate the pancreatitis. Am J Gastroenterol 1998;93:2141-2147.

102. Europian FK506 Multicenter Liver Study Group/ Randomised trial comparing tacrolimus and cyclosporin in prevention of liver allograft rejection/ Lancet 1994;344:423-8.

103. Faure F., Jitsukawa S., Triebel F., Hercend Т.: Characterization of human peripheral lymphocytes expressing the CD3-.yc5 complex with anti-receptor monoclonal antibodies. J. Immunol. 1988;141:3357.

104. Ferrick D.A., Schrenzel M.D., Mulvania Т., Hsien В., Ferlin W.G., Lepper H.: Differential production of interferon gamma and interleukin-4 in response to Thl- and Th2- stimulation patogens by gamma/delta T cells in vivo. Nature 1995;373:255-257.

105. Fischer S., Scheffler A., Kabelits D.,: Activation of human уд T cells by heat-treated mistletoe plant extracts. Immunol Lett 1996;52:69-72.

106. Follows G.A., Munk M.E., Gatrill A.J. et all: Gamma interferon and interleukin 2 but not interleikin 4 are detectable in gamma/delta cell cultures after activation with bacteria. Infect Immun 1991;60:1229-1231.

107. Fournie J. J., Bonneville M.: Stimulation of yd T cells by phoshoantigens. Res Immunol 1996;147:338-346.

108. Fudenberg H. Hugh, Fudenberg H. Haskell Transfer Factor: Past, Present and Future Research and Application of Transfer Factor and DLE. Ed. Huo Bao-lai, Wang Ru-zhang, Zou Zhao-fen - Xue Yuan Press Beijing, 1989, pp. 557-626.

109. Fujihashi K., Taguchi Т., Aichcer W.K. et all: immunoregulatory functions for murine intraepitelial lymphocytes: уб T cell receptor-positiv (TCR+) T cells abrogate oral tolerance while aP TCR+ T cells provide B-cell help.J Exp Med 1991;175:695-707.

110. Garcia V.E., Sieling P.A., Gong J.H., Barnes P.F. et all: Single-cell cytokine analisis of у8 cell responses to nonpeptede mycobacteria antigens. J Immunol 1997;159:1328-1335.

111. Giacomelli R., Matucci-Cerinic M. et all: Circulating V(5l+ T-cells and accumulate in the skin of systemic sclerosis patients. Arthritis Rheum 1998; 41: 327-334.

112. Girardi M., Lewis J., Glusac E. et al. J. Exp. Med., 2002, 195, 855 - 867;

113. Giacomelli R., Parzenese I., Frieri G.D. et all: Increase ofd circulating уб T lymphocytes in the perepheral blood of patients affacted by active inflammatory bowel disease. Clin Exp Immunol 1994;98:83-88.

114. Goodier M.R., Lundqvist C. et all: Cytokine profile for human Vy9+ T cells stimulated by Plasmodium falciparum. Parasite Immunol 1995;17:413-423.

115. Goodman Т., leFrancois L.: Expression of the уд T cell receptor on intestinal CFD8(+) intraepithelial lymphocytes. Nature 1988;4433:855-858.

116. Goring H.D., Karl M., Franke H., Schwalm I. Transfer Factor Therapy in Dermatology - Leukocyte Dialysates and Transfer Factor - Ed. Mayer V. and Borvak J. - Institute of Virology Slovak Academy of Sciences, Bratislava, 1987; pp. 597-602.

117. Haanen J.B.A.G., de Waal Malefijt R. et all: Selection of a human T helper type 1-like T cell subset by mycobacteria. J Exp Med 1991;174:583-592.

118. Halary .F, Peyrat M.A., Champagne E. et all: Control of self-reactive cytotoxic T lymphocytes expressing y5 T-cell receptors by natural killer inhibitory receptors. Eur J immunol 1997; 27:2812-2821.

119. Halstensen T.S., Scott H., Brandtzaeg P.: Intraepithelial t cells of the TCR yd+ CD8- V<51 /J<51 + phenotypes are increased in coeliac disease/ Scand J Immunol 1989;30:665-672.

120. Hanifin J., Sai C. Chan.: Diagnosis and treatment of atopic dermatitis // Dermatological Therapy,v. 1,1996, p.9-18.

121. Hanifin J.M. Atopic dermatitis // Allergy, 1988, v.43,#8,p.36-38.

122. Haskell H.: Transfer Factor: Past, Present and Future Research and Application of Transfer Factor and DLE. Ed. Huo Bao-lai, Wang Ru-zhang, Zou Zhao-fen Xue Yuan Press, Beijing, 1989, pp. 557 - 626.

123. Hay day A.C.: уб T cells: A right time and right place for a conserved third way of protection. Annu Rev Immyunol. 2000;18:975-1026.

124. Heim L.R.: Atopic dermatitis, specific virus infections, and Behcet's syndrom, ransfer Factor therapy Immunoregulators in ransfer Factor - Ed. Khan A.,Kirkpatrick Ch.H., Hill N.O. - Academic Press, 1979; N.Y. - pp .530-535.

125. Hein W.R., Mackey C.R.: Prominence of уд T cells in the ruminant immune system. Immunol Today 1991;12:30-34.

126. Hinz Т., Wesch D., Halary F., Marx S., Choudhary A., Arden В., Janssen O., Bonneville M., Kabelits D.: Identification of the complete expressed human TCR V gamma repertoire by flow cytometry. Int Immunol. 1997;9:1065-1072.

127. Hoeger P.H., Ott H.-http://www.mmm.spb.ru/Allergology/2004/2/Art7.php?L=ENG;

128. Holtmeier W., Pfander M., Zollner T.M. et al. Exp. Dermatol., 2002, 11, 527-531;

129. Julia M.R., Serra P., Matamoros N., Raga S. et all. Small cytoplasmic antigens from Pseudomonas auruginosa stimulate gamma/delta t-cells. Scand. J., Immunol.1998; 48;672-678.

130. Itohara S., Farr A., Lafaille J.J., Bonneville M., Takagaki Т., Haas W. et al: Homming of a yd thymocyte subset with homogeneous t cell receptors to mucosal epithelia. Nature 1990:343:754-757.

131. Jacobs M.R., Haynes B.F.: Increase in TCR y5 T lymphocytes in synovia from rheumatoid artritis patients with active synovitis. J Clini Invest 1992; 12:2.

132. Jan d. Bos, Edwin J. m., Van Leent. New topical immunosuppressant //7-th Congress europian Academy of Dermatology and Venerology (EADV), 7-11 October, 1998, Nice-France, abstract:w-7-5.

133. Jitsukawa S., Faure F., Lipinski M., Triebel F., Hercend T.:A novel subset of human lymphocytes with ca T cell receptor-y complex. J Exp Med 1987; 166:11921197.

134. Jung Т., Schulz S., Zachmann K., Neumann C. Int. Arch. Allergy Immunol., 2003, 130, 143 - 149;

135. Jones J.F., Schumacher M.J., Jeter W.S., Hichs M.J. Oral bovine Transfer Factor (OTF) use in the hyper-IgE syndrome -Immunobiology of Transfer Factor - Ed. Kirkpatrick C.H., Burger D.R. and Lawrence H.Sh. - Academic Press, 1983; N.Y. - pp. 261-270.

136. Kabelits D, Bender A Schondelmaier S, Schoel B, Kaufman SH: A large fraction of human peripheral blood yd T cells is activated by Mycobacterium tuberculosis but not by its 65 kD heat shock protein. J Exp Med 1990; 171:667-679.

137. Kabelits D, Wesch D, Hins T: уд. T cells, their T cell receptor usage and role in human diseases. Springer Semin Immunopatol 1999;21:55-75.

138. Kapp A., Papp K., Bingham A. Et al. Long -term managment of atopic dermatitias in infantswith topical pimecrolimus. A nonsteroid anti-inflammatory drug. J. Allergy Clin. Immunol.2002; 110;227-284.

139. Kirkpatrick Ch. H. Transfer Factors. Encyclopedia of Immunlogy 2ed.Academic Press./N-Y. 1998, pp.2385-2389.

140. Kock A., Schwarts Т., et all: Human keratinocytes are a source for tumor necrosis factor alfa: evidence for synthesis and release upone stimulation with endotoxin or ultraviolet light. J.Exp.Immunol. 1995; 104:318-322.

141. Krangel M.S., Yessel H., Brocklehurst C., Spits H.: A distinct wave of human T cell receptor gamma/delta lymphocytes in the early fetal thymus: Evidence forcontrolled gene rearrengement and cytokine production . J Exp Med 1990:172:847859.

142. Kuziel W.A., Takashima A., Bonyhady M., Bergstresser P.R., Allison J.P., Tigelaar R.E., Tucker P.W. Regulation of T cell receptor у chain expression in murine thy-l(+) dendritic epidermal cells .nature 1987;328:263-266.

143. Lahn M., Kanehio A., Takeda K. et all: Negative regulation of airway responsiveness is depended on уб T cells and independed of y5 T-cells. Nat Med 1999;5:1150-1156.

144. Lang F., Peyrat M.A., Constant P. et all: Early activation of human Vy9V52 T cell broad cytotoxicity and TNF production by nonpeptedic mycobacterial ligands. J Immunol 1995;154:5986-5994.

145. Lanier L.L., Ruitenberg J., Bolhuis R.L., Borst J., Philip J.H.: Testi R:Structural and serological heterogeneity of уд T cell antigen receptor expression in thymus and pereferal blood. Eur J Immunnol 1988;18;1985-1992

146. Lanier L.L.: NK cell receptors. Annu Rev Immunol 1998;16:359-393.

147. Lefrancois L.: Extrathymic differentiation of intraepithelial lymphocytes: Generation of separate and unequal T-cell repertoire? Immunol Today 1991:12;436-438.

148. Lefrancois L.: Phenotypic complexity of intraepitelial lymphocytes of the small intestine. J Immunol 1991;147:1746-1751.

149. Lundqvist C., Baranov V., Teglund S. et all: Cytokine profile and ultrostructure of intraepitelial y5 cells in chronically inflamed human gingiva suggest a cytotoxic effector function. J Immunol 1994;153:2302-2312.

150. Mallick-Wood С.A., Lewis J.M., Richie L.I., Owen M.J., Tigelaar R.E., Hay day A.C.: Conservation of T cell receptor coformation in epidermal yd cells with dirupted primary V gamma gene usage. Science 1998;279:1729-1733.

151. Marcucci F., Sensi L.G., Bissari G. Et al. Specific IgE to blood and inhalant allergens in intestinal washings of children effected with atopic eczema.// Clin. Allergy. -1985.- Voll5. №4.- p. 345-354.

152. Matsue H., crus P.D., Takashima A.: Profiles of cytokine mRNA expressed by dendritic epidermal T-cells in mice. J.Investig. Dermatol.l993;23P:1715-1718.

153. McGeady S.J., Buckley R.H. J. Allergy Clin. Immunol., 1975, 56, 393 -406.

154. McVay L.D., Carding S.S.S.R.: Extrathymic origin of human gamma/delta T cells during fetal development. J Immunol 1996;157:2873-2882.

155. McVay L.D., Jaswal S.S., Kennedy C., Hhhhayday A., Carding S.R.: The generation of human gamma/delta T cell repertoires during fetal development. J Immunol 1998;160:5851-5860.

156. McVay L.D., Li В., Biancaniello R. et all: changes in human mucosal yS T cells repertoire and function assosiated with the disease process i inflammatory bowel disease. Mol Med 1997; 183-203.

157. Mombaerts P, Mizoguchi E, Grusby MJ, Glimcher LH et all Spontaneous development of inflammatory bowel disease in T cell receptor mutant mice. Cell 1993;75:275-282.

158. Mombaerts P., Arnoldi J., Russ F. et all: Different roles of aP and y8 T-cells in immunuty against an intracellular pathogen. Nature 1993;365:53-56.

159. Moretta A., Bonito C., Vitale M., Pende D., Biasoni R., Mingrani M.C., Moretta L.: Receptors for HLA class-1 molocules in human natural killer cells/ AnnuRev Immunol 1996;14:619-648.

160. Morita C.T., Backman E.M.„ Bukowski J.F., Tanaka Y., Band H., Bloom B.R., Golan D.E., Brener M.B.: Direct presentation of nonpepted prenyl pyrophosphat antigens to human уд T cells. Immunity. 1995;3:495-507.

161. Mukasa A., Born W.K., O'Brien R.L.: Inflammation alone evokes the response of a TCR-invarient mouse y5 T-cells subset. J Immunol 1999; 162:49104913.

162. Munro C.S., Higgins E.M., Mark J.M. et al. Cyclosporins A in atopicdermatitis: therapeutic response is dissociated from effects on allergic reactions//Brit. J. Dermatol. 1991, v.124№1, p.43048.

163. Nakata M., Smith M.J., Norihisa Y. et all: CoOnstitutive expression of pore-formingn protein in perepheral blood y5 T-cells: Implication for their cytotoxic role in vivo. J Exp Med 1990; 172:1877-1880.

164. Navarro-Cruz D., Serrano-Miranda E., Orea M., Estrada-Parra S. Teran-Ortiz L., Gomez-Vera J., Flores-Sandoval G. Transfer factor in moderate and severe atopic dermatitis - Rev. Alerg. (Мех)., 1996, 43; 5:116-123.

165. Novak N., Allam J.P., Hagemann T. et al.- J. Allergy Clin. Immunol., 2004,14,364-370.

166. Parker C.M., Groh V., Band H., Porcelli S.A., Morita C., Fabbi M., Glass D., Strominger J.L., Brenner M.B: Evidence for extrathymic changes in the T cell receptor gamma/delta repertoire/ J Exp Med 1990; 171:1597-1612.

167. Pawelec G., Sayers Т., Busch F.M.: Regulation of normal myelopoiesis and chronic myelogenous leukemia cell proliferation thruogh a non-cytotoxic mechanism by ay5 cell clone. Immunol Lett 1989;22:199-204.

168. Pfefer K., Schoel В., Guile В., Kaufman Sh., Wagner H.: Primary responses of human T-cells to mycobacteria: A frequent set of yd T-cells are stimulated by protease-resistant ligands. Eur J Immunol 1990; 20: 1175-1179.

169. Porcelli S., Brenner M.B., Band H.: Biology of the human уд T cell receptor Immunol Rrev 1991;120:137-183.

170. Rock EP, Sibbald PR, Davis MM & Chien YHJ Exp Med 1994; 179:323328.

171. Salgado G. C., Nakamura K. Et all functional CD40L is expressed on Langerhans cells.J.Leukoc. Biol.l999;l 13:1021-1025.

172. Samaridis J., Colonna M.: Cloning of novel immunoglobulin superfamylynreceptors expressed on human myeloid and lymhpoid cells: Structural evidence for new stimulatory and inhibitory paphways. Eur J Immunol 1997;27:660-665.

173. Sanchez M.J., Gutierrez-Ramos J.C., Fernandes E., Leonardo E., Lozano J., Martinez C., Torbio M.L.: Putative prethymic T cell precursors within the early human embryonic liver: A molecular and functional analysis. J Exp med 1993;177:19-33.

174. Schild H., Mavaddat N., Litzenberger C. Ehrich E.W., Davis M.M., Bluestone J.A., Matis L., Draper R.K. & Chien Y.H.: Cell 1994: 76;29-37.

175. Schoel В., Sprenger S., Kaufmann SH: Phosphate is essential for stimulation of Vy9 V(52 T lymphocytes by microbacterial low molecular weight ligand. Eur J Immunol 1994;24:1886-1892.

176. Schon M.P., Arya A., Murphy E.A., Adams C.M., Grusby M.J., Parker C.M.: Mucosal T lymphocyte numbers are selectively reduced in integrin alpha E (CD 103) Deficient mice. J Immunol 1999;162:6641-6649.

177. Seymour B.W., Gershwin L.J., Coffman R.L.: Aerosol-induced immunoglobulin E unresponsiveness to ovalbumin does not requre CD8+ or T cellreceptor yS+ T-cells or interferon gamma in a murine model of allergen sensitization. J Eexp Med 1998;187:721-731.

178. Spergel J.M., Paller A.S.- Allergy Clin. Immunol., 2003; 112: Suppl. 6, 118 — 127.

179. Shiohara T.,Moria N., Hayakava J. et all: Bone-marrow derived dendritic epidermal T-cell express T-cell receptor a(3 Cd3 and CD8. Evedence for their extratimicmaturation.J.Invest. Immunol. 1993; 150:4323-4330.

180. Shah M., Mohanraj M. Hight levels of fusidic acid-resistant stafilococcus aureus in dermatology patients. Br J. dermatol.2003:148; 1018-20.

181. Skeen MJ, Ziegler HK: Activation of уб T cells for INF-y production is mediated by bacteria via macrophage-derived cytokine IL-1 and IL-2. J Immunol 1995;154:5832-5841.

182. Sosa M., Flores G., Estrada S.,Orea M., Gomez Vera J. Comparative treatment between thalidomide and transfer factor in severe atopic dermatitis -Rev. Alerg. Мех., 2001, 48, 2, 56 - 64.

183. Sosa Vazquez M, Orea M, Flores G -New concepts about atopic dermatitis. Rev Alerg Мех. 2001, 48, 1, 15-24.

184. Spencer J., Issaacson P.G., Diss T.C., MavDonald T.T.: Expression of disulfide-linked and non-disulfide- linked forms of the T cell receptor yd heterodimer in human intestinal intraepithelial lymphocytes. Eur J Immunol 1989; 19:1335-1338.

185. Stingl G., Koning F.,. Yamada H., Yokoyama W.M., Tschachler E, Bluestone JA, et al:Thy-l(+) dendritic epidermal T cells express T3 antigen and the T cell receptor 7 chain. Proc Natl Acad Sci USA 1987;84:4586-4589.

186. Schauer U., Dippel E., Gieler U. et al. Clin. Exp. Immunol., 1991,86, 440 - 443.

187. Sturm E., Braakman E., Fisch P., Vreugdenhil R.J., Sondel Т., Bolhuis R.L.H.: Human Vy9V<52 T cell receptor yd lymphocytes show specificity to Daudi Burkitf s lymphoma cells J Immunol 1990;145:3202-3208.

188. Szezpanik M., Anderson L.R. et all: y5 T-cells from tolerized сф T-cell receptor (TCR)-deficient mice inhibit contact sensitivityOeffector T-cells in vivo, and theire interferon -gamma production in vitro. J.Exp.Med.l996;184:2129-2139.

189. Takahashi Т., Sasaki Y., Hamak et all. production of IL-4-2, INF-gamma and INF-alfa by pereferal blood monocular cells of patients with atopic dermatitis.// J. Dermatol. Sci., 1992,V.3, #3, p. 172-180.

190. Tamaki K., Yasaka N., Chang C.H.identification and caracterisation of novel dermal Thy-lbantigen -bearing dendritic cells in murine skin. J. Investig.Dermatol. 1996; 106:571 -575.

191. Tanaka Y., Morita C.T., Nieves E., Brenner M.B., Bloom B.R.: Natural and synthetic nonpepted antigens recognized by human yd T cells. Nature 1995;375:155-158.

192. Tatsuzawa O., Nagata M., Wada Y., Satoh Т., Koike Y., Nihei K., Wada N. Clinical application of transfer factor suppository - Recent advances in Transfer Factor and Dialyzable Leucocyte Extracts - Ed.

193. Fujisawa Т., Sasakawa S., Ikura Y., Komatsu F., Yumaguchi Y. -Maruzen Co., Ltd., Tokyo, 1991. pp.243-246.

194. Tige K., Harvan W., Chien Y., Allison J.: Recognition of self antigens by skin derived T cells with invarient y8 antigen receptrors. Science 1991 ;252; 1430-1432.

195. Trautmann A., Akdis M. et all. T-cell mediated Fas-induced kerzatinocyte apoptosis play a key pathogenic role in examatose dermatitis.J.Clin. Inv. 2000;106:25-35.

196. Triebel .F, Faure F., Graziani M., Jitsukawa S., Lefranc M.P., Hercend Т.: A unuque V-J-C rearranged gene encodes а у protein expressed on the majority of the CD3+ T cell receptor a/? circulating lymphocytes. J Exp Med 1998; 169:694.

197. Triebel F., Faure F., Jitsukawa S., Griscelli A., Genevee C., Roman R.S., Hercend Т.: A novel human V5 gene expressed predominately in the tigA fraction ofytH peripheral lymphocytes. Eur J Immunol 1988; 18:2021.

198. Tsukaguchi K., Balaji K.N., Boom W.H. CD4+alfa-betta T-cell and gamma T-cell responces to mycobacterium tub., similarities and differences in Ag recognition cytotoxic effector function and cytokine production.J.Immunol.,1995

199. Ullrich R., Schieferdecker H.L., Jahn H.U., Zeits M.: уд T cells in the human intestine. Immunol Res 1991;10:306-309.

200. Vila L.M., Haftel H.M., Park H.S. et all: Expansion of mycobacterium-reactive y5 T cells by a subset of memory helper T cells. Infect Immunol 1995;63:1211-1217.

201. Vincent M.S., Roessner K., Lynch D. et all: Apoptosis of Fas high CD4+ synovial T cells by borrelia-reactive Fas- ligand(high) уб T cells in lyme arthritis. J Exp Med 1996;184:2109-2117.

202. Wen L., Barber D.F., Pao W., Wong F.S., Owen M.J., Hayday A.C.: primary gamma/delta cells clones can be defined sa Thl/'Th2 cells and illustrate the association of CD4 with Th2 differention. J Immunol 1998;160:1965-1974.

203. Wen L., Hay day A.C.: gamma/delta cell help in response to patogens and in the development of systemic autoimmunity. Immunolo res 1997;16:229-241.

204. Werfel S., Massey W., Lichtenstein LM., Bochner B.S. J. Allergy Clin. Immunol.,1995, 96, 57 - 65;

205. Wesch D., Hinz T. Kabelits D.: Analysis of the TCR gamma repertoire in healthy donors and HIV-1-infected individuals. Int Immunol 1998;10:1067-1075.

206. Wite В., yurrovsky V.V.: Oligoclonal expansionof V<31+ gamma-deta T-cells. systemic sclerosis patients. Ann.N.Y.Acad.Sci.1995;756:382-391.

207. Yin Z., Zhang D.H., Welte T. et all: Dominanse of IL-12 over IL-4 in gamma/delta T cell differentiation leads to default production of INF-gamma: Failure to down-regulate IL-12 receptor beta 2-chain expression. J Immunol 2000;164:3056-3064.

208. Yong J.L., Goodall J.C., Beacock-Sharp H., Gaston J.S.: Human yd T-cell recognition of Yersinia enterocolitica. Immunol 1997;91:503-510.

209. Zachariae H., Cramers M., Herline Т., Jensen J., Kragballe K., Ternowitz Т., Thestrup-Pedersen K. Non-specific immunotherapy and specific hyposensitization in atopic dermatitis - Acta Derm.Venerol. (Stockh), 1985, 114, Suppl.,48 - 54.

210. Zuany-Amorim C., Ruffle C., Haile S., Vargaftig B.B., Pereira P., Pretolani M.: Requirement for уб T cells in allergic airway inflammation. Science 1998;280:1265-1267.