Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Функциональное состояние моноцитов периферической крови при поллинозе

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИНСТИТУТ КЛИНИЧЕСКОЙ ШШУНОЛОГИИ

рГ6 оя

На правах рукописи

КРУГЛЕЕВА Ольга Леонидовна

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ МОНОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОШ ПРИ ПОЛЛИВОЗЕ

14.00.35 - Аллергология и иммунология

Автореферат, диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 1994

у

С У

"М

ч

Работа выполнена в Институте клинической иммунологии Сибирского отделения РАШ.

Научный руководитель - академик РАШ, профессор

[Ь Е Лозовой! Научный консультант - доктор медицинских наук В С. Шринский

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Д. Е Маянский; доктор медицинских наук Р. А. Ханферян

Ведущая организация - Институт иммунологии Минздрава РФ

Защита диссертации состоится "_"_1934 года

в _ часов на заседании Специализированного совета

Л 001. 01.01 Института клинической иммунологии СО РАМН (630091, Новосибирск, ул. Ядринцевская 14}

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института клинической иммунологии СО РАМН

Автореферат разослан "_"_1РЭ4 года

Ученый секретарь Специализированного совета

кандидат биологических наук о. Т. Кудаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В последние десятилетия во всем мире наблюдается значительный рост аллергических заболеваний. По данным различных зарубежных и отечественных авторов треть населения экономически развитых стран страдает аллергическчми заболеваниями, в том числе от 3 до 6% населения - поллинозом. Причем наиболее высокие уровни заболеваемости выявлены среди лиц трудоспособного возраста.

Значительное место среди аллергических заболеваний занимают атопические заболевания, в основе которых лежит гиперчувствительность немедленного типа (ГНГ), являющаяся следствием гиперпродукции реагиновых ИгЕ-антител (Адо А.Д. 1976; Шцкий ЕЙ. и др.

1991). Шллиноз или сезонный риноконъюнктивит, вызываемый пыльцой растений, занимает одно из центральных мест среди аллергических атопических заболеваний.

Данные последних лет позволяет предполагать, что моноциты/макрофаги участвуют в реализации иммунного ответа и развитии воспаления при ГНТ (Melewicz F. M. et al. 1981; Boltz-Nitulescu G. et al. 1983; Katz D. H. 1984; Ханферян P. A. 1991 ; Маянский Д. E

1992). Ведущая роль в этих процессах отводится продуктам секреции клеток Ci® - интерлейкину-1 (ИЛ-1) и простатландину ЕЕ (ПГЕ 2) (Но S. N. et al. 1987; Dinarello С. A. et al. 1989; Репе J. et al. 1989). Однако, данные литературы, посвященные изучению продукции ИЛ-1 и ПГЕ 2 единичны, а характеристика функционального состояния моноцитов ограничена сведениями о нарушении фагоцитоза и хемотаксиса ( Furukawa С. Т. , Altman L. С. 1978; Hsieh К.-H. 1980; Godard P. et al. 1982; Atkins P.C. et al. 1985; Carroll M. et al. 1985).

Отсутствие комплексного подхода в изучении основных функций моноцитов, незначительное количество наблюдений и разнородность групп больных не дают возможности оценить.состояние этих клеток при аллергических атопических заболеваниях и их роль в патогенезе.

Изучение субпопуляций моноцитов периферической крови, их многообразных функций у больных поллинозом позволит не . только глубже изучить патогенез заболевания, но и разработать новые подходы к прогнозу течения его клинических вариантов и иммунокоррек-ции.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ Целью настоящего исследования являлось изучение количественных и функциональных характеристик моноцитов периферической крови у больных поллиноаом и их роли в патогенезе аллергических атонических заболеваний.

В соответствии с целью решались следующие задачи:

1. Изучить содержание различных субпопуляций моноцитов в периферической крови у больных поллиноаом в различные периоды заболевания, в зависимости от клинических характеристик и проведения специфической иммунотерапии.

2. Изучить активность фагоцитоза, биоокислителей, продукцию простагландина Е2 и уровни экспрессии Рс- и Сз-рецепторов моноцитами периферической крови у больных поллиноаом с различными клиническими проявлениями и в зависимости от проведения специфической иммунотерапии.

. 3. Оценить продукцию ИЛ-1, экспрессию гена ШЫр моноцитами крови больных поллинозом в зависимости от различных периодов заболевания и клинических характеристик.

4. Провести анализ патогенетических взаимосвязей мевду исследуемыми показателями функциональной активности моноцитов периферической крови и уровнем содержания иммуноглобулина Е в сыворотке крови у больных поллинозом.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. Впервые проведена комплексная ^ оценка ряда регуляторных и зффекторных функций моноцитов периферической крови при различных клинических проявлениях полликоза, в разные сроки заболевания и в зависимости от динамики проведения специфической иммунотерапии.

Установлено, что при поллинозе в период обострения на фоне сниженного абсолютного и относительного количества моноцитов в периферической крови наблюдаются выраженные изменения в структуре циркулирующего пула моноцитов, наблюдающиеся у 50-70% больных и проявляющиеся в снижении содержания Рс- и Сз-позитивных моноцитов, а также уменьшении экспрессии Рс- и Сз-рецепторов. Фагоцитарная активность и НСТ-редукция исследуемых клеток не изменены.

Впервые установлено, что специфическая иммунотерапия активирует фагоцитоз, опосредованный Сз-рецепторами, и кислородный метаболизм. В случае отсутствия эффекта от специфической иммуноте-

рапии у больных выявлены достоверно более низкие показатели Сз-зависимого фагоцитоза.

Впервые показано, что у больных поллинозом снижена продукция ИЛ-1 моноцитами крови, одним из механизмов которого может Сыть ингибирующее действие ПГЕ 2. В то же время, б период обострения заболевания выявлено снижение продукции ПГЕ 2 моноцитами и экспрессии гена ИЛ-1р.

Впервые показано, что с увеличением давности заболевания отмечается повышение продукции ИЛ-1 и ПГЕ 2 интактнымии моноцитами крови больных поллинозом в период обострения.

Впервые установлено, что в период ремиссии заболевания функциональная активность моноцитов периферической крови не возвращается к нормальному уровню, поскольку наблюдается снижение экспрессии Сз-рецепторов, активности Рс-зависимого фагоцитоза и содержания мРНК ИЛ-1р в интактных клетках. Также остается сниженным абсолютное и относительное содержание моноцитов крови. Характерной особенностью периода ремиссии является повышение уровня кислородного метаболизма моноцитов периферической крови.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ Полученные результаты свидетельствуют о патогенетической роли популяций мо-нонуклеарных фагоцитов и их субпопуляций в развитии аллергических атопических заболеваний. Это обосновывается данными об изменении функциональной активности моноцитов как клеток-эффекторов аллергии и регуляторов иммунного ответа: снижение Рс- и Сз-позитивньи моноцитов периферической крови, активности фагоцитоза, биоокислителей, продукции ИЛ-1 и ПГЕ 2, экспрессии гена ИЛ-1р, связанных с периодами поллиноза и результатами специфической иммунотерапии.

Используемый комплекс методов оценки функционального состояния моноцитов периферической крови может быть рекомендован для диагностики нарушений функциональной активности этих клеток у больных аллергическими атопическими заболеваниями и их коррекции при разработке методов индивидуальной патогенетической терапии.

ОСЮБНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Изменения субпопуляционной структуры моноцитов периферической крови, их функционального состояния является одним из звеньев иммунопатогенеза аллергических атонических заболеваний, связанных с периодами'обострения и ремиссии, клиническими проявлениями, а также корреляционной зависимостью ряда исследуемых показателей с содержанием иммуноглобулина Е в сыворотке крови.

2. Обострение поллиноза характеризуется снижением относительного и абсолютного содержания моноцитов в крови, количества Гс- и Сз-позитивных моноцитов, изменением уровня экспрессии соответствующих рецепторов, изменением соотношения активности ИЛ-1 и ПГЕ 2, снижением содержания мРНК Ш1-1р в нестимулированных моноцитах, выявляемых у большинства больных.

3. Ремиссия заболевания, характеризуясь исчезновением клинических проявлений, не сопровождается восстановлением функциональной активности моноцитов периферической крови. Сохраняется снижение общего количества'моноцитов и субпопуляции Сз-позитивных моноцитов крови, активности Гс-зависимого фагоцитоза, экспрессии гена ИЛ-1р в ингактных моноцитах, а также способности этих клеток отвечать на стимуляцию продукции ИЛ-1.

4. Моноциты периферической крови больных поллинозом являются одной из точек приложения действия специфической иммунотерапии, так как в динамике лечения меняется активность Сз-зависимого фагоцитоза и кислородного метаболизма по сравнению с больными, которым не проводилась специфическая иммунотерапия.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ. Материалы диссертации доложены на Международном симпозиуме "Система мононуклеарных фагоцитов в норме и при патологических состояниях" (Новосибирск, 1990), 2-м Международном симпозиуме "Молекулярные факторы гемопоэза" (Москва, 1990), 3-ей сессии Института клинической иммунологии СО РАМН (Новосибирск, 1992), 1-м съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992), на научно-практическом семинаре в медицинском госпитале г. Халмстат (Швеция, 1992). Апробация диссертации состоялась на расширенном научном семинаре Института клинической иммунологии СО РАМН в июле 1993 г. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Материалы диссертации изложены на страницах машинописного текста, иллюстрирована 20 таб-

лицами и 7 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов исследования и их обсуждения в 3 главах, заключения и выводов. Список литературы включает 257 источников, из них 49 на русском языке.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Проведено обследование 110 здоровых доноров и 237 больных поллинозом. Специфическая диагностика заболевания включала анамнез, объективные клинические данные и кожные пробы. Для решения поставленных задач были выделены группы больных, различающиеся по следующим клиническим характеристикам: по периодам заболевания -обострение и ремиссия, по клиническим проявлениям - ринокон'ыонк-тивит, риноконъюнктивит в сочетании с бронхообструктивным синдромом, в зависимости от проведения предсезонной специфической иммунотерапии (СИТ) - первичные или впервые выявленные больные и больные, прошедшие курсы СИТ. Эффективность СИТ оценивали по пятибалльной шкале (А.Д.Адо, 1976) - эффективное (4-5 баллов) и неэффективное лечение (1-3 балла).

Моноциты (Мц) периферической крови получали методом адгезии к плоским поверхностям из мононуклеарных клеток, выделенных из гепаринизированной венозной крови центрифугированием в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина (А. Воуит, 1968). Использовали обогащенную суспензию Мц и обогащенный монослой Мц на покровном стекле (Т. Е Михеенко, Е КХГромыхина, К А. Козлов, а П. Лозовой, 1991). Чистоту полученной клеточной популяции оценивали при окраске по Романовскому-Гимзе и на неспецифическую эсте-разу. Мц составляли 90-94%, жизнеспособность при окраске трипано-вым синим - 97%.

В обогащенном монослое Мц с помощью методов ЕА- и ЕАС-розет-кообразования определяли содержание Рс- и Сз-позитивных клеток (МцГс1?+ и МцСзН+, %) и уровень экспрессии соответствующих рецепторов (ГсЯ и СзК, усл. ед.) по количеству присоединившихся эритроцитов барана, в пересчете на один Мц.

Фагоцитарную активность Мц оценивали по поглощению ЕА- и ЕАС-комплекеов. Учитывали процент фагоцитирующих Мц - фагоцитар-

ное числю (ФЧ) и среднее количество ЭБ, поглощенных одним фагоцитирующим Мц, - фагоцитарный индекс (ФИ). ФИ вычисляли как общэе число поглощенных ЭБ, деленное на число фагоцитировавших клеток.

Для оценки кислородного метаболизма Щ использовали тест восстановления нитросинего тетразолия в формазан (ВСТ-тест) (R. van Furth, 1981). Определяли процент формазан-позитивных Мц (ФПМ) и цитохимический показатель активности (ЦП, усл. ед. ) с учетом интенсивности восстановления HCT ( К. А. Бойткевич, 1977).

С целью получения супернатантов для определения продукции ИЛ-1 обогащенную суспензию Мц в концентрации 1x1О6 кл/мл инкубировали 20-24 часа при 37° С в увлажненной атмосфере с 5% СО> в среде RPMI-1640 (Flow Lab.) с 27. пулированной инактивированной сыворотки человека AB(1V) группы, 2 мМ L-глютамина, 5 мМ HEPES-буфера (Flow Lab.) и 0,08 мг/мл гентамицина (Хиноин). Культивирование клеток проводили в 24-луночных плоскодонных планшетах (Nunklon). В параллельные опыты в полную культуральную среду дополнительно вносили 25 мкг/мл ЛПС Е.Coli Вб:02б (Serwa) для стимуляции продукции ИЛ-1 или 1 мкг/мл индометацина (Merk) в качестве ингибитора простат ландинсинтетазы.

Активность ИЛ-1 в супернатантах суточных культур Мц определяли стандартным методом R.Phillips и соавт. (1983) по усилению индуцированной субоптимальныш дозами конкаяавалином А пролиферации тимоцитов мышей при добавлении в культуру исследуемого супер-натанта Уровень пролиферации тимоцитов оценивали по включению ^Н-тимидина Результаты выражали в индексах влияния (ИВ), которые вычисляли по формуле:

число импульсов/мин, опыт

ИВ = -

число импульсов/мин, контроль Содержание ПГЕ в супернатантах Мц периферической крови определяли с помощью наборов реактивов ( ^Н-Prostaglandin Е Radioimmunoassay kit, USA).

Определение содержания мРНК ИЛ-lp в Мц проводили методом дот-гибридизации 32р~меченого 30нда к ИЛ-1р с цитоплазматической РНК из клеток. Исследовали интагсгные Мц непосредственно после выделения' из периферической крови и Щ, инкубированные в 24-луночных плоскодонных планшетах в концентрации 1х106 кл/млн в полной

культуральной среде при 37°С в увлажненной атмосфере с 5Х СС^без стимулятора синтеза ИЛ-1 и в присутствии ЛПС Е. coll в конечной концентрации 25 мкг/мл. Через 24 часа культивкризания клетки снимали с пластика раствором Версена и осаждали центрифугированием. Цитоплазматическую РНК из Мц выделяли по методу N. Gouch (1988). Дот-гибридизация 32Р-меченого зонда к ИЛ-ljj с цитоллазматической РНК из Ыц выполнялась сотрудниками ИКИ СО РАМН к. б. н. Мордвиновым В. А и Куприяновой О. А. В качестве зонда использовали 32р-ме~ ченую репликативную форму ШЗ-IL-l^, содержащую фрагмент проин-терлейкина 1} человека (В.Носиков, 1989). Результаты получали с помощью радиоавтографии, используя рентгенографическую пленку PM-R Для учета данных нами была использована четырехбалльная шкала, где за О принимался уровень сигнала отрицательного контроля с гетерологичной РНК, а за 4 балла - максимальная интенсивность сигнала в пробах.

Количество общего ИгЕ в сыворотке крови больных поллинозом определяли с помощью наборов "Phadebas IgE PRIST" (Pharmacia, Швеция).

Статистическая обработка данных включала посчет средних арифметических величин (М), ошибок средних (м), частоты повышения иди снижения исследуемого параметра, выраженной в процентах. Достоверность различий в сравниваемых группах оценивалась по критерию U Вилкоксона-Манна-Уитни и критерию Х-квадрат. Выявление взаимосвязей между исследуемыми параметрами проводилось с помощью метода ранговой корреляции Спирмена с учетом коэффициента корреляции (г).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ИЗМЕНЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ моноцитов ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ПОЛЛИНОЗОМ В ПЕРИОД ОБОСТРЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ

Установлено, что при поллинозе в период обострения по сравнению с группой здоровых людей наблюдается статистически достоверное снижение содержания моноцитов (Ыц) в периферической крови (0,21х 109/л+0,02 и 0,34х 109/лН),03, соответственно).

При анализе содержания Щ в крови больных с различными кли-

ническими проявлениями поллиноза выявлено, что снижение абсолютного и относительного количества Ыц в крови наиболее выражено у больных с классическим риноконъюнктивитом (0,19x10 /л+0,02, р<0,05) и встречается в 751 случаев.

Исследования содержания Мц с различным фенотипом показали, что у больных поллинозом в 1,5 раза снижено количество MuFcR+ и 1ÍUC3R+ при сравнении со здоровыми донорами. Одновременно с этими изменениями наблюдается снижение уровня экспрессии Fe- и Сз-ре-цепторов Мц (Табл. 1). При оценке частоты снижения исследуемых показателей относительно нормативных значений обнаружено, что у 54+6% больных встречается уменьшение количества MnFcR+ и у 60+6%

- уменьшение количества МцСзй+. Сниженные значения экспрессии Fc-рецепторов выявляются у 49+6% больных и Сз-рецепторов - у 62+6% больных поллинозом в период обострения.

При анализе содержания различных субпопуляций Мц в группах больных с низким (до 100 KIJ/л) и высоким (101-1000 KU/л) содержанием ИгЕ в сыворотке крови установили, что наиболее выраженное снижение количества tofcR+ и уровня экспрессии Fc-рецепторов наблюдается у больных с высоким содержанием ИгЕ в сыворотке (MufcR+

- 32,8+3,4, FcR - 1,72+0,22, р<0,01). Эти данные подтверждаются и при анализе корреляционных взаимосвязей между исследуемыми показателями (Табл. 2). Установлено, что в период обострения поллиноза выявляется отрицательная корреляционная зависимость между количеством MnFcR+ и уровнем ИгЕ в сыворотке крови (г=-0,236, р<0,05).

Анализ фенотипических характеристик Мц крови больных с различными проявлениями поллиноза выявил, что в случае более тяжелого течения периода обострения (риноконъюнктивит в сочетании с бронхоспастическим синдромом) наблюдается достоверное увеличение количества МцСзК+ (53,4+4,7%) и уровня экспрессии C3R (3,12+0,31 усл. ед.) по сравнению со значениями, полученными в группе больных с классическим риноконъюнктивитом (МцСзй+ - 40,6+3,1%, C3R -2,25+0,22 усл. ед.). Аналогичные изменения Сз-рецепции выявляются при анализе состояния рецепторного аппарата в зависимости от длительности заболевания, поскольку полисиядромный вариант поллиноза, как правило, появляется у длительно страдающих данным заболеванием лиц. У больных с давностью поллиноза более 8 лет также

Таблица 1.

Показатели функциональной активности моноцитов периферической крови здоровых людей и больных поллинозом (М+п).

1................... —-.......... I Показатели ..... Здоровые доноры 1...........1 | Больные поллинозом | 1 ...... -....... ■■ 1 ■■ ■■ I | обострение ! ремиссия | 1 1 1

¡Содержание МцРсй+ (X) 60,4+2,6 1 140,4+2,8 1 ** 1 1 158,5+2,2 | 1 1

I Уровень экспрессии РсН 3,59+0,18 1 12,17+0,18 л* 1 1 13,59+0,17 1

I (усл. ед.) 1 1 1

(Содержание МцСзЯ+ (7.) 63,4+2,7 144,5+2,7 1 *г* (56,1+2,4 * | 1 |

I Уровень экспрессии СзИ 3,89+0,24 1 12,52+0,18 *Я 1 I 13,52+0,20 |

I (усл. ед.) 1 1 !

|Рс-фагоцитоз: 1 1 1

1 ФЧ (X) 27,8+3,4 121,7+2,2 1 123,8+2,2 | 1 1

| ФИ (усл. ед.) 1,93+0,08 1 11,82+0,05 1 1 1 11,30+0,04 * 1 1 |

!Сз-фагоцитоз: 1 1 1 1 1 1

1 ФЧ (%) 16,0+3,0 113,7+1,9 1 117,8+2,4 | 1 1

| ФИ (усл. ед.) 1,73+0,07 1 11,75+0,07 1 1 1 11,76+0,05 | 1 |

¡НСТ-редукция: 1 1 1 1 ! 1

I ФПМ (X) 5,19+0,55 15,91+1,32 17,97+0,88 **|

| ЦП (усл. ед.) | 0,08+0,01 10,10+0,02 I ¡0,12+0,01 | 1 .............1

* - р<0,05, ** - р<0,01 - в сравнении со здоровыми донорами

Таблица 2.

Значения коэффициента корреляции между уровнем ИгЕ в сыворотке крови и показателями функциональной активности моноцитов периферической крови у больных поллинозом.

1 1 | Показатели | 1 1 обострение, г 1 ремиссия, г |

1 1 (Содержание ЫцРсИ+ | - 0,236 * нд 1

|Уровень экспрессии ГсИ | нд 0,301 * |

(Содержание МцСз!?+ I 0,332 * нд |

¡Уровень экспрессии Сзй | 0,400 ** нд I

IРс-зависимый фагоцитоз, Фй| нд нд I

|Сз-зависимый фагоцитоз, ФИ| 0,303 * нд 1

|НСТ-тест, ЦП | НД нд 1

¡Продукция ИЛ-1: ИВ сп. | нд НД |

I ИВ шс | нд нд I

| ИВ индом. | нд нд 1

Содержание мРНК ИЛ-1|: |

I Мц интактные | 0,444 * нд 1

| Мц нестимулированные| НД - 0,584 ** |

| Мц стимулированные | 1 .1, нд нд | 1 1

г - коффициент ранговой корреляции Спирмена * - р<0,05; ** - р<0,01. нд - недостоверно.

наблодается увеличение-МцСз(?+ (52,1+4,6) и уровня экспрессии СзЯ (3,01+0,32) по сравнению со значениями, вдавленными у больных с длительностью заболевания до 8 лет (42,3+3,я и 2,38+0,22, соответственно, р<0,05).

В результате проведения корреляционного анализа выявлена положительная зависимость между уровнем ИгЕ в сыворотке крови и количеством Ыц0з1?+, а также экспрессией Сз-рецепторов (Табл. 2),

Таким образом, у больных поллинозом в период обострения обнаружены выраженные изменения в структуре циркулирущего пула Мц, которые связаны с основным звеном патогенеза аллергических атопи-ческих заболеваний - повышенной продукцией ИгЕ.

фи исследовании средних показателей Гс-зависимого фагоцитоза у Сольных поллинозом в период обострения и здоровых людей достоверных различий выявлено не было. Однако, при исследовании частотных характеристик установлено, что 73+6Х больных имели нормативные значения ФЧ ЕА-фагоцитоза и 63+7% - нормативные значения ФИ ЕА-фагоцитоза, у небольшой части больных эти показатели были изменены.

Анализ средних значений показателей фагоцитоза, опосредованного Рс-рецепторами, и использование частот отклонения показателей от их нормативных значений не выявили достоверных различий в группах больных поллинозом с различными проявлениями периода обострения заболевания, а также в группах больных с низким и высоким содержанием ИгЕ в сыворотке крови.

Фагоцитарная активность Мц периферической крови, опосредованная Сз-рецепторами, у больных поллинозом в период обострения также не отличалась от здоровых людей. При анализе частотных характеристик установлено, что нормативные значения ФЧ были выявлены у 59+7%, ФИ - у б9+7Х больных поллинозом, причем, значительно чаще у сольных с полксиндромной формой поллиноза Кроме этого, корреляционный анализ позволил обнаружить положительную взаимосвязь между ФИ Сз-зависимого фагоцитоза и давностью заболевания, а также уровнем ИгЕ в сыворотке крови (Табл. 2).

Таким образом, закономерности, выявленные при изучении Мц крови с различным фенотипом аналогичны данным, полученным при исследовании фагоцитарной активности этих клеток, опосредованной соответствующими рецепторами. Одновременное определение фагоци-

гарной активности и фенотипа Мц позволяет выявить закономерность сопряжения уровня экспрессии Рс- и Сз-рецепторов с реализацией способности к фагоцитозу. Учитывая снижение количества Рс- и Сз-позитивных ¡¿I и экспрессии Гс(? и СгР„ при неизмененных, по сравнению с контоолем, показателях фагоцитарной активности, опосредованной этими рецепторами, можно предположить, что у больных поллинозом в период обострения наблюдается ускорение начальных этапов фагоцитоза, связанных с захватом и переработкой антигенного.. материала.

фи оценке кислородного метаболизма Мц крови у больных поллинозом в период обострения не обнаружено достоверных различий средних значений НСТ-редукции по сравнению с группой здоровых доноров. Частотный анализ выявил, что нормативные значения ФПМ отмечаются у 69+7Х и ЦП - у 60+8Ж больных. Можно предположить, что у больных поллинозом в период обострения продукция медиаторов аллергии опосредована не Мц, а другими типами клеток и не сопряжена с накоплением активных форм кислорода.

ГЬскольку элиминация аллергена в составе иммунных комплексов обусловлена повышенной фагоцитарной активностью и продукцией биоокислителей моноцитами, можно также предположить, что наши данные о снижении фагоцитоза и НСТ-редукции характеризуют патогенетический механизм поддержания уровня сенсибилизации у больных поллинозом.

Мц крови участвуют в развитии воспаления не только как клетки-эффекторы, но и как инициаторы и регуляторы иммунного ответа, что обусловлено продукцией многочисленных монокинов.

С целью изучения продукции ИЛ-1 оцешшали способность супер-натантов суточных культур Мц крови больных поллинозом и здоровых доноров изменять пролиферацию тимоцитов мышей, стимулированных субмитогенной дозой Кон А,

Установлено, что в период обострения поллиноза супернатанты суточных культур икгактных Мц не только не стимулировали, но и подавляли Кон А-индуцированную пролиферацию тимоцитов мышей по сравнению с воздействием супернатантов культур Мц доноров (Рис. 1). Эти данные подтверждаются при сравнительном анализе частот отклонения индексов влияния от их нормативных значений. У 53+7% больных поллинозом в период обострения заболевания супер-

здоровые обострение ремиссия

тштп 1 шя г дашя з

1. ИЯ-1-активность супернатантов моноцитов крови здоровых доноров и больных поллинозом.

1 - интактные моноциты

2 - моноциты, культивированные с индометацином

3 - моноциты, стимулированные ЛПС Е. coli Р<0,01 по сравнению с группой здоровых доноров

1800

1600

1400

3 1200

S 1000

w 800 uJ

с ¿00 400 200 0

здоровье обострение

! 1 ЩШ 2 I

Рис. 2. Содержание ПГЕ в супернатантах моноцитов крови здоровых доноров и больных поллинозом в период обострения.

1 - интактные моноциты

2 - моноциты, стимулированные ЛПС Е. coli * - Р<0,05 по сравнению с группой здоровых доноров

Рис.

Ус* -

натанты суточных культур нестимудированных Мц подавляли пролиферг цию тимоцитов.

Для оценки способности активированных Мц продуцировать ЮН е культуральную среду добавляли ЛПС Е. coll в конечной концентрации 25 мкг/мл. В результате под влиянием супернатантов стимулированных Мц крови наблвдалось усиление пролиферации тимоцитов мышей, т. е. в этом случае обнаруживается наличие ИЛ-1-активности ; супернатантах (Рис. 1). При этом продукция ИЛ-1 у больных полли нозом не отличалась от таковой у здоровых людей, индексы влияни в обеих группах были близки по значениям.

Можно предположить, что подавляющее действие сулернатанто: интактных Мц крови больных поллиноаом в период обострения, воз можно, обусловлено выработкой фактора или факторов, оппозитны ИЛ-1. Учитывая возможное ингибирующее действие ПГЕ 2 как на про дукцию ИЛ-1 данными клетками (Knudsen P.J., 1986), так и на про лиферацию мышиных тимоцитов, была проведена оценка ИЛ-1-активное ти супернатантов нестимудированных Ыц крови в условиях блокад синтеза иростагландинов индометацином. Установлено, что добавле ние индометацина в культуру Мц крови больных поллинозом приводи к отмене ингибирующэго эффекта супернатантов на пролиферацию ть моцитсв. Следует заметить, что значения ИВ при добавлении супер натантов культур Мц с индометацином достигали только значений У супернатантов интактных Мц здоровых доноров, тогда как в групг здоровых лиц отмечено двухкратное увеличение ИВ по сравнению воздействием супернатантов нестимудированных Мц крови (Рис. 1) Можно считать, что подавление пролиферации тимоцшгор мыши cynei натантами кнтактньк Ми крови больных в период обострения опоср« дована ЛГВ С. Это свидетельствует о том, что в период обострен! поллинсга изменено соотношение активности ИЛ-1 и ПГЕ 2: на фо! сниженного сазального уросня ИЛ-1 преобладает ингябирукщее в ли: ние ПГЕ 2.

Для более точного от Бета на -"тп вопросы было произведено к< личественное определение содержания ЛГК в супернатантах интактн; и ЛИС-стимулированных Мц. Установлено, что уровень ПГЕ в суперн. тантах нестимудированных Мц больных в период обострения е дна р. за ник, чем у здоровых доноров (Рис. 2). При стимуляции Щ Л откачено увеличение содержания ПГЕ в супернатантах по сравнению

гсходным уровнем как у больных, так и у здоровых лиц. Эти данные ¡видетельствуют, что в период обострения поллиноза в Мц снижен 5азальньй уровень не только Ш, но и ИГЕ 2.

Таким образом, ингибиция пролиферации тимоцитов мыши, выз-$анная добавлением супернатантов интактяых Мц крови больных в пе-шод обострения, опосредована ПГЕ 2. Однако, не исключено, что в ¡упернатантах Мц при поллинозе в период обострения содерлатся даугие факторы - ингибиторы ИЛ-1-акгивности, так как блокада синтеза простагландинов индометацином отменяет ингибирующее влияние ¡упернатантов, но не приводит к проявлению продукции ИЛ-1 Мц в 'акой же степени, как у здоровых доноров и больных в период ре-«иссии заболевания.

Следует отметить, что на основании исследования супернатан-'ов суточных культур Мц методом оценки биологической активности 1Л-1 можно судить только о секреции данного монокина. Изменение фодукции ИЛ-1 дает основание предполагать, что возможны измене-1ия и экспрессии генов этого цитокина, представление о которой (ает оценка содержания соответствующих мРНК в клетке. Известно, 1то в Мц крови человека мРНК, кодируются ЯЛ-lp, преобладает над (РНК ИЛ-la/(March С. et al, 1985). Определение уровня мРНК ИЛ-1р юзволяет оценить функциональное состояние Мц и их способность к 1родукции данного цитокина в ответ на индукцию.

Установлено, что Мц крови больных поллинозом в период обост->ения не отличаются от Ыц здоровых людей по способности к синтезу (РНК ИЛ-1р как непосредствено после выделения, так и после куль-■ивирования в присутствии ЛГО Е. coli. Выявлено, что содержание iPHK ИЛ-1р в стимулированных клетках больных и здоровых повышаюсь по сравнению с исходным уровнем в интактных Щ. При этом >азличий между больными в период обострения и здорЪвыми донорами ге отмечается (Рис. 3).

Однако, при культивировании Мц в течение 20-24 часов без ин-[уктора синтеза ИЛ-1 наблюдается снижение уровня мРНК ИЛ-1р в метках больных поллинозом по сравнению с исходным уровнем и фовнем в контрольной группе (Рис. 3).

Таким образом, Мц периферической крсви больных поллинозом в [ериод обстрения характеризуются нормально«} способностью к синте-,у ИЛ-1. Снижение уровня экспрессии гена ШМр в Мц в результате

здоровые обострение ремиссия

ШЩ 1 ЕШЗ 2 МД 3

Рис. 3. Содержание мРНК в моноцитах крови здоровых доноров и больных поллиноаом.

1 - ингактные (некультивированные) моноциты

2 - монациты, культивированные без стимулятора

3 - моноциты, культивированные с .ЛЯС Е. соП ** - Р< 0,131 по сравнению с группой здоровых доноров

культивирования без индуктора синтеза М-1 по сравнению с исходным уровнем отражает, вероятно, особенности функционального состояния Мц крови больных поллинозом в период обострения.

Анализ содержания мРНК ЮМр в интактных Мц у больных с различным уровнем ИгЕ в сыворотке крови показал, что количество мРНК у больных с низким содержанием ИгЕ (до 100 К1)/д) достоверно снижена (0,43+0,18 усл. ед.) по сравнению с этим показателем (1,00+0,19 усл. ед.) у больных с еьеоким содержанием ИгЕ. Зтк данные подтверждаются наличием прямой корреляционной взаимосвязи содержания ИгЕ в сыворотке крови и уровня экспрессии гена ИЛ-1р в интактчых Мц (г=0,444) (Табл. 2).

Возможно, нарушение продукции ИЛ-1 может быть связано не только с процессами транскрипции, а с трансляцией и процессиьтом

молекул белка Кроме этого, возможны нарушение высвобождения ИЛ-1, либо этот медиатор секретируется в функционально неактивной форме (Itosley В. et al. , 1987).

Не исключено, что в подавлении продукции ИЛ-1 в период обострения поллиноза играют роль медиаторы аллергической реакции, например, гистамин, известный как ингибитор продукции данного мо-нокина (Manosroi J-. et al. | 1987). Известно также, что продукцию ИЛ-1 моноцитами может подавлять ИЛ-4 (Essner R. et al., 1989; Donnelly R. Р. et al., 1990; Hart P. H. et al., 1989), который играет решающую роль в индукции синтеза ИГЕ. ИЛ-4 способны продуцировать не только лимфоциты, но и активированные'тучные клетки (Plaut М. et al. , 1989).

Заслуживает внимания наличие прямых корреляционных взаимосвязей между давностью заболевания и ИЛ-1-активностью супернатан-тов интактных Мц крови больных (г=0,251, р<0,05), давностью заболевания и ИВ супернатантов Мц, культивированных в присутствии ин-дометацина (г=0,535, р<0,01). Кроме этого, у больных с давностью поллиноза более 8 лет ИВ супернатантов Мц, обработанных индомега-цином, достоверно превышают этот показатель в группе больных с давностью заболевания до 8 лет. Следовательно, с увеличением давности заболевания отмечается повышение продукции ИЛ-1 и ПГЕ 2 нестимулированными Мц крови больных поллинозом в период обострения.

Таким образом, при лоллинозе в период обострения выявлены разнонаправленные нарушения содержания и функциональных свойств моноцитов периферической крови. Обнаружено снижение абсолютного и относительного содержания Мц в крови, количества Fe- и Сз-пози-тивных Мц, уровней экспрессии Fe- и Сз-рецепторов, "абсолютных показателей фагоцитоза и кислородного метаболизма, продукции ИЛ-1 и ПГЕ 2, а также снижение способности зкспрессировать ген ИЛ-1р без дополнительной стимуляции. Бри этом важно отметить, что данные изменения наблюдаются у 50-70% больных. И это позволяет предполагать, что в этой подгруппе больных изменение функциональной активности моноцитов/макрофагов является одним из звеньев патогенеза поллиноза

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ МОНОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ПОЛЛИНОЭЕ В ПЕРИОД РЕМИССИИ.

В период ремиссии заболевания наблюдается достоверное снижение содержания Мц в крови в сравнении со здоровыми людьми. При этом и относительное, и абсолютное количество Мц в крови у больных поллинозом в период ремиссии примерно равны значениям данных показателей у больных в период обострения, а наиболее выраженные изменения были отмечены в подгруппе больных с высоким содержанием ИгЕ в сыворотке. Вероятно, подавление моноцитопозза может быть связано с механизмами гиперпродукции ИгЕ, уровень которого в сыворотке крови больных поллинозом остается повышенным и в период ремиссии, в отсутствие поступления аллергена в организм.

'При исследовании содержания Рс- и Сз-позитивных Мц в крови больных поллинозом в период ремиссии, а также уровня экспрессии соответствующих рецепторов, обнаружено статистически достоверное увеличение количества МцРс1?+ и повышение уровней экспрессии Рс- и Сз-рецепторов по сравнению с периодом обострения. При этом перечисленные показатели достигают нормативных значений. Количество ЫцСзРМ- и в период ремиссии, как и в период обострения заболевания, остается достоверно снижено по сравнению со здоровыми людьми (Табл. 1).

Анализ корреляционных взаимосвязей свидетельствует, что в период ремиссии выявляются отрицательные зависимости между показателями ЕА-розеткообразования и давностью заболевания (МцРсИ+ : г = -0,424, р<0,01, РсН: г = -0,468, р<0,01). Это позволяет предполагать, что с увеличением давности поллиноза наблюдается снижение способности мононуклеарных фагоцитов крови в период ремиссии восстанавливать структуру циркулирующего пула этих клеток, а также уровень экспрессии рецепторов.

В отличие от данных корреляционного анализа в период обострения поллиноза, для периода ремиссии не характерны взаимосвязи уровня ИгЕ в сыворотке крови с количественными показателями различных субпопуляций Мц и экспрессией Рой и Сз1? (Табл. 2).

В результате исследования фагоцитоза, опосредованного Рс-ре-цепторами, в ремиссию обнаружено достоверное снижение фагоцитарного индекса по сравнению со здоровыми донорами и больными в пе-

риод обострения (Табл. 1). Этот факт может отражать, вероятно, снижение резервных способностей мононукдеарных фагоцитов крови в результате напряжения фагоцитарной активности в период обострения заболевания.

Установлено, что показатели Оз-опосредованного фагоцитоза в периоды обострения и ремиссии не отличаются от показателей здоровых людей, в то же время показана зависимость Сз-опосредованного фагоцитоза от стадии заболевания, значение фагоцитарного индекса у больных в ремиссии ниже, чем в период обострения (Табл. 1).

Анализ кислородного метаболизма Мц крови у больных поллинозом в период ремиссии выявил достоверное увеличение количества формазан-позитивных Мц как по сравнению с группой здоровых лиц, так и с группой больных поллинозом в период обострения заболевания (Табл. 1). Таким образом, увеличение продукции активных форм кислорода является характерной особенностью периода ремиссии.

В результате исследования продукции ИЛ-1 Мц крови больных э период ремиссии обнаружено, что ИВ супернатантов интактных Мц крови больных близки по значениям таковым в группе здоровых доноров. Стимуляция Ыц ЛПС не приводила к увеличению ИЛ-1-активности• супернатантов (Рис. 1). Эти данные свидетельствуют о том, что у больных поллинозом в период ремиссии происходят глубокие изменения Мц, связанные с продукцией ИЛ-1, не.отвечающих на такой мощный активатор, как ЛИС Б. coli. Для объяснения причин этих изменений использовался метод дот-гибридизации Р-меченого зонда к ИЛ-lp с цитоплазматической РНК Мц крови.

Установлено, что интактные клетки больных отличаются сниженным уровнем мРНК ИЛ-1в по сравнению со здоровыми донорами (Рис. 3). Поскольку, синтез ИЛ-1 в моноцитах индуцируется активацией Fe- и Сз-рецепторов, возможно, что снижение активности фагоцитоза приводит к снижению уровня экспрессии генов этого цитокина в Мц крови больных поллинозом в период ремиссии. В данном случае наблюдается взаимосвязь фагоцитарной и секреторной функций мононук-леарных фагоцитов крови.

При анализе показателей, характеризующих продукцию ИЛ-1 нестимулированными Мц крови в зависимости от уровня ИгЕ в сыворотке крови, отмечено, что у больных с уровнем ИгЕ до 100 KU/л наблюдается достоверно более высокое содержание мРНК ИЛ-1р

(l,42jp,17 усл. ед.) по сравнению с больными, у которых уровень ИгЕ в сыворотке выше 100 KU/л (1,00+0,19 усл. ед.). Это подтверждается и корреляционным анализом - наблюдается отрицательная взаимосвязь между уровнем ИгЕ и содержанием мРНК в Мц, культивированных без MC Е. coli (Габл. 2).

Таким образом, в период ремиссии заболевания наблюдается сниженная способность интактных Мц к синтезу мРНК ИЛ-1р и нарушение продукции ИЛ-1 стимулированными клетками, несмотря на увеличение количества мРНК под влиянием индуктора синтеаа ИЛ-1.

При рассмотрении групп больных поллинозом с различной давностью ааболевания выявлено, что у больных с давностью поллиноза более 8 лег в период ремиссии наблвдаются достоверно более низкие значения ИВ супернатантов интактных Мц крови на пролиферацию ти-моцит'ов, но при этом более высокое содержание мРНК ИЛ-1^ в Мц, культивированных как в присутствии индуктора синтеза ИЛ-1, так и без него. Вероятно, с увеличением давности заболевания одновременно с повышением способности Мц крови больных поллинозом в период ремиссии к синтезу мРНК ИЛ-1р, усиливается продукция ингибитора этого монокина, либо нарушается процесс его высвобождения.

Таким образом, на основании результатов изучения основных характеристик Мц крови больных поллинозом, можно заключить, что в период ремиссии заболевания функциональная активность исследуемых клеток не восстанавливается до уровня, наблюдаемого у здоровых лиц. Несмотря на отсутствие экспозиции аллергенов и клинических проявлений поллиноза, в период ремиссии на фоне не восстановленного моноцитопоэза и измененной структуры циркулирующего пула Мц крови наблюдаются следующие нарушения функционального состояния Щ- повышение уровня кислородного метаболизма, подавление Fc-за-висямого фагоцитоза, снижение количества мРНК ИЛ-1£ в интактных клетках и отсутствие способности адекватно отвечать на индукцию синтеза ИЛ-1.

- С.1 -

ИЗМЕНЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МОНОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ ГОЛЛИНОЗОМ ПОД ВЛИЯНИЕМ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИММУНОТЕРАПИИ.

Специфическая иммунотерапия (СИТ) является наиболее эффективным способом лечения атопических аллергических заболеваний. Его эффективность составляет 55-90% (Ало А. Д. 1976; Пыцкий а И. и др. 1984). Несмотря на значительный срок использования СИТ для лечения больных поллинозом, механизм ее гипосенсибилизирующего действия до сих пор не выяснен.

С целью изучения влияния СИТ на основные функции Мц периферической крови нами было проведено сравнение значений исследуемых характеристик этих клеток в двух подгруппах больных поллинозом: впервые выявленные больные в период обострения и больные в период обострения после предшествующей терапии СИТ.

Было установлено, что средние значения количественных показателей Мц крови в этих двух подгруппах больных не отличались. Показатели, характеризующие Гс-зависимый фагоцитоз и продукцию ИЛ-1, ташке не различались по средним значениям в группах больных, не получавших лечения, и больных, проиедших СИТ. Достоверные изменения были выявлены в показателях фагоцитоза, опосредованного Сз-рецепторами, и НСТ-редукции (Рис. 4).

Мы попытались на основании ретроспективного анализа количественных и функциональных характеристик Мц крови и результатов СИТ выявить такие лабораторные показатели, которые послужили бы дополнительными показаниями для проведения СИТ. Однако, детальный математический анализ подгрупп больных с эффектом и без эффекта СИТ не позволил выявить комплекс показателей, прогнозирующий эффективность СИТ, возможно, из-за небольшой группы больных с отсутствием эффекта. Тем не менее, было установлено, что в случае отсутствия эффекта от СИТ, у больных в период обострения выявлены достоверно более низкие показатели Сз-зависимого фагоцитоза (как фагоцитарного числа, так и фагоцитарного индекса).

В период ремиссии у больных с отсутствием эффекта от СИТ

Функциональные показатели

Количественные показатели

после СИТ

здоровые доноры

ярр

Рис. Д. Влияние СИТ на активность Мц крови больных поллиноаом в период, обострения.

также снижена активность Сз-фагоцитоза (ФЧ - 14,4+8,7, р<0,05) по сравнению с этим показателем у больных, прошедших курс СИТ с хорошим или отличным эффектом (25,1+5,1).

Таким образом, СИТ оказывает влияние не на комплекс показателей, характеризующих функциональные свойства Мц крови, а на фагоцитоз, опосредованный Сз-рецепторами и на накопление биоокислителей.

ВЫВОДЫ

1. У больных поллинозом в периоды обострения и ремиссии выявляются разнонаправленные изменения субпопуляционной структуры моноцитов периферической крови, их зффекгорных и регуляторных »функций.

2. Обострение поллиноза сопровождается сниманием относительного- и абсолютного количества моноцитов, содержания Рс- и Сз-позитивных моноцитов, уменьшением уровня экспрессии соответствующих рецепторов, снижением продукции ИЛ-1 и ПГЕ 2, содержания мРНК ИЛ-1р, определяемых у 50-70% больных. Эффакторная функция моноцитов, характеризующаяся фагоцитарной активностью и продукцией биоокислителей, у 60-70Х 'больных остается неизмененной.

3. Изменение структуры циркулирующего пула моноцитов связаны с клиническими вариантами поллиноза и содержанием иммуноглобулина Е в сыворотке крови. Увеличение содержания Сз-позитивных моноцитов и экспрессии Сз-рецепторов выявляется при длительном и более тяжелом течении болезни, снижение числа Рс-позитивных моноцитов и уровня экспрессии Рс-рецепторов ассоциируется с повышенным содержанием иммуноглобулина Е.

4. Ремиссия поллиноза сопровождается нормализацией субпопуляционной структуры моноцитов и их некоторых функциональных характеристик: увеличением содержания Рс-позитивных моноцитов, экспрессии Рс- и Сз-рецепторов, активных форм кислорода, продукции М-1 нестимулированньши клетками. Содержание Сз-позитивных моноцитов, активность Рс-фагоцитоза, уровень мРНК ИЛ-1р в интагсгных моноцитах и их способность продуцировать ИЛ-1 при стимуляции остаются сниженными.

5. Одним из механизмов клинической эффективности специфической иммунотерапии у больных поллинозом является ее влияние на функциональные свойства моноцитов. У больных с с эффектом от лечения выявлены повышенные значения ШТ-редукции и Сз-зависимого фагоцитоза, тогда как отсутствие эффекта сопровождается снижением фагоцитарной активности, опосредованной Сз-рецепторами.

6. Особенности изменения субпопуляционной структуры моноцитов периферической крови у больных поллинозом, их функциональных свойств в периоды обострения и ремиссии, взаимосвязь этих измене-

ний с продолжительностью заболевания, содержанием иммуноглобулина

Е в сыворотке крови и результатами специфической иммунотерапии

свидетельствует об участии моноцитов в патогенезе болезни.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Круглеева О. Л. Продукция интерлейкина-1 и простатландина Е2 моноцитами периферической крови при поллинозе // Молодые ученые-медики - науке и практическому здравоохранениа Тез. докл. конференции молодых ученых СО АМН СССР. - Новосибирск, 1989. -С. 84.

2. Круглеева О. Л. Продукция регуляторных монокинов при поллинозе //-I Всесоюзный съезд иммунологов. Тез. докл. - Дагомыс, Сочи, 1989. - Т. 2, С. 337.

3. Kupriyanova O.A., Ivanova I. P., Krugleeva O. L. , Mordvinov V. A. , Sennikov S. V. , Nosikov V. V., Braga E. A. , Kotenko S. V., Kozlov V.A., Tananko E.M. , Losovoy V.P. Expression of interleukin-lp and tumor nekrosis factor a.genes in pollinosis // Mononuclear phagocyte system in normal and pathological states. Abstracts. - Novosibirsk, 1990. - P. 174-176.

4. Kozlov V. A., Kfordvinov V. A. , Kupriyanova 0. A., Ivanova I. P., Krugleeva O. L., Sennikov S. V., Nosikov V. V. , Braga E. A., Oreshkova S. F. , Iliychev A. A. , Petrenko V. A. Lynphokine gene expression in normal and pathology // 'Molekular faktor of hematopoiesis and stem cell. Abstracts. - Moscow, 1990.

P. 26.

5. Куприянова 0. A., Мордвинов E A., Иванова И. IL , Круглеева О. JL , Козлов В. А., Носиков В. Е Использование ДНК-зондов для оценки иммунного статуса // 1 Всесоюзная конференция "Геном человека". Тез. докл. - Москва, 1990. - С. 164-165.

6. Круглеева 0. Л , Тананко Э. М., Носикова Т. А. Функциональное состояние моноцитов периферической крови больных поллинозом // Экспериментальная и клиническая иммунология на Востоке страны. Тез. докл. научной конференции. - Красноярск, 1931. - Т. 2. -С. 30.

-257. Куприянова О. А., Мордвинов В. А., Иванова И. П., Круглеева О. Л , Брага Э. А., Носиков Е В., Козлов В. А., Лозовой Е П. Оценка экспрессии мРБК интерлейкина 1р в норме и при патологии // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1991. - N 12. - С. 619-621.

8. Куприянова О. А. , Мордвинов а А. , Иванова И. П., Круглеева О. Л , Тананко Э. М., Брага Э. А., Носиков В Е , Козлов Е А., Лозовой Е П. Оценка активности генов цитокинов - новый диагностический тест в иммунологии // Вестник Академии медицинских наук СССР. - 1991. - N 12. - С. 16-19.

9. Лозовой Е Л., Иванова И. П. , Круглеева 0. Д , Мордвинов В А. , Куприянова О. А., Громыхина Н Е , Тананко Э. М. Интерлейкин 1 активность фагоцитирующих клеток у больных поллинозом // Международный симпозиум по аллергологии и клинической иммунологии. Тез. докл. - Алма-Ата, 1992. - Раздел 1. - С. 117.

10. Круглеева О. Л., Громыхина Н.Ю.., Тананко 3. М., Мордвинов ЕА., Куприянова О. А. Изучение возможных, причин снижения продукции интерлейкина-1 моноцитами при поллинозе // 1 съезд иммунологов России. Тез. докл. - Новосибирск, 1992. - С. 255.

11. Мордвинов ЕА., Куприянова О. А., Иванова И. П., Круглеева 0. Л. , Брага Э. А. , Носиков Е Е , Тананко Э. М., Козлов Е А. Экспрессия генов интерлейкинов при аллергии // 1 съезд иммунологов России. Тез. докл. - Новосибирск, 1992. - С. 311.

12. Круглеева о. Я , Якобишвили М. А., Громыхина Н. Ю. , Тананко Э. М., Сепиашвили Р. И. , .Козлов Е А. Интерлейкин-1-активность супернатантов моноцитов периферической крови при поллинозе // Иммунология. - 1994. - N 2. - С.

Зак. 26. Тир. 100 экз. Печ. л. 1,5. Формат 60 х 84/16. Бумага офсетная N 1. Тип. СО РАМН г. Новосибирск. 1994 г.