Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Функциональное состояние фагоцитирующих клеток при Candida albicans-индуцированном гранулематозном воспалении у мышей разных линий

На правах рукописи

КУРИЛИН Василий Васильевич

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ФАГОЦИТИРУЮЩИХ КЛЕТОК ПРИ CANDIDA Л1Я/С4Д^-ИНДУЦИРОВАННОМ ГРАНУЛЕМАТОЗНОМ ВОСПАЛЕНИИ У МЫШЕЙ РАЗНЫХ ЛИНИЙ

14.00.16 - патологическая физиология 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

/29*9

На правах рукописи

КУРИЛИН Василий Васильевич

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ФАГОЦИТИРУЮЩИХ КЛЕТОК ПРИ CANDIDA TVS'-ИНДУЦИРОВАННОМ

ГРАНУЛЕМАТОЗНОМ ВОСПАЛЕНИИ У МЫШЕЙ РАЗНЫХ ЛИНИЙ

14.00.16 - патологическая физиология 03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

¡IS6fff*

Работа выполнена в Государственном учреждении Научный Центр клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (Новосибирск)

Научные руководители: академик РАМН, доктор медицинских наук,

профессор ШКУРУПИЙ Вячеслав Алексеевич

доктор медицинских наук,

профессор ЦЫРБНДОРЖИЕВ Дондок Дамдинович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор НАЧАРОВ Юрий Владимирович

доктор биологических наук,

профессор БГАТОВА Наталья Петровна

Ведущая организация:

ГУ Научно-исследовательский институт фармакологии Томского Научного Центра Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (Томск).

Защита диссертации состоится «_£_» 2005 г. в /¿-ч. на заседании

диссертационного совета Д 001.048.01 в ГУ Научный Центр клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук по адресу: ул. Академика Тимакова, 2, г. Новосибирск, 630117. Тел./факс 8-(383)-333-64-56

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Научный центр клинической и экспериментальной медицины СО РАМН

Автореферат разослан « / » 2005 года.

Учёный секретарь диссертационного совета,

доктор биологии

сийя&иауючнАль

> Ч'

Н.А. Пальчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из важных проблем современной медицины является хроническое воспаление. Хроническое воспаление протекает, с одной стороны, как самоподдерживающийся экссудативно-деструктивный процесс, а с другой - в виде мононуклеарной инфильтрации, нередко принимающей характер гранулематозного воспаления (Маянский Д.Н., Урсов И.Г., 1997). Многочисленность нозологических вариантов гранулематозного воспаления в зависимости от разнообразия этиологических факторов определяет сложность в изучении патогенетических механизмов развития данного патологического процесса (Маянский Д.Н., 1989, Маянский Д.Н., Урсов И.Г., 1997; Цырендоржиев Д.Д., 1997; Шкурупий В.А. и др., 1998,2001).

В настоящее время наиболее полно проведены экспериментальные и клинические исследования морфологических и иммунологических параметров гранулематозного воспаления при туберкулезе, саркоидозе, БЦЖ- и зимозан-индуцированной гранулеме (Струков А.И., Кауфман О .Я., 1989; Быков В.Л., 1990; Маянский Д.Н., 1991; Шкурупий В.А. и др., 1996; Dannenberg А.М., 1994; Denk H. et al., 1994). В то же время проблема гранулематозного воспаления, индуцированного грибковыми агентами остается до сих пор слабо разработанной, хотя данные клинических исследований свидетельствуют о значительном росте заболеваемости, связанной с грибковой инвазией у больных СПИДом, при трансплантации органов на фоне химиотерапии, после оперативных вмешательств, а также у юных и пожилых лиц (Хмельницкий O.K. и др., 1984, 1993,; Pfaller М.А. et al., 1999; Dictar M.O. et al., 2000; Dupont В. et al., 2000; Gudlaugsson О. et al., 2003; Garcia-Ruiz J.C. et al., 2004; Tortorano A.M. et al„ 2004).

Известно, что ключевыми фигурами гранулематозного воспаления являются макрофаги и их производные - эпителиоидные и гигантские многоядерные клетки (Маянский Д.Н., 1991; Архипов С.А., 1997; Turk

J.L., 1985). Макрофаги, через секрецию хемотаксических факторов (интерлейкин-8; макрофагальный воспалительный белок - loc/ß; макрофагальный фактор активации хемотаксиса; белки хемотаксиса моноцитов - 1,2,3; фактор хемотаксиса лимфоцитов и др.) детерминируют рекрутирование воспалительных клеток (Маянский Д. Н. и др., 1989; Кетлинский С.А.. Калинина Н.М., 1995; Фрейдлин И.С., 1995; Лебедева Т. Н., 2004; Decker К., 1990; Goldin R.D. et al., 1996; Lukacs N.W., Ward P.A., 1996), опосредую! флогогенные функции антиген-реактивных лимфоцитов (Струков А.И. Соловьева И.П., 1980; Boros D.L., 1981).

В связи с вышесказанным, в первую очередь, есть необходимость детального изучения функционального состояния фагоцитирующих клеток при гранулематозном воспалении индуцированных грибковыми агентами, в том

числе, при различной генетической детерминации. Во-вторых, не менее важной задачей является разработка новых подходов коррекции и лечения в связи с низкой эффективностью существующих методов терапии из-за недоступности индукторов (в частности, грибковых агентов) гранулематозного воспаления, персистирующих внутри клеток-мишеней. Отсюда наиболее перспективным является подход, основанный на адресной доставке лекарственного препарата непосредственно в очаг гранулематозного воспаления (Шкурупий В.А. и др.,, 1997-2001).

Таким образом, учитывая актуальность вышеперечисленных проблем, имеющих важное теоретическое и практическое значение, были определены цель и задачи исследования.

Цель исследования. Изучить функциональное состояние фагоцитирующих клеток в динамике развития Candida albicans-индударованного гранулематозного воспаления у мышей разных линий и оценить эффективность комплекса «декстран + противогрибковый препарат амфотерицин В».

Задачи исследования:

1. Провести сравнительную оценку морфологических и морфометрических параметров в динамике развития Candida albicans-индуцированного гранулематозного воспаления в печени мышей линий С57В1/6 и СВА.

2. Изучить клеточный состав периферической крови и количество фагоцитирующих клеток перитонеальной полости и костного мозга в динамике развития Candida а/б/сат-индуцированного гранулематозного воспаления у мышей разных линий.

3. Исследовать окислительно-метаболическую функцию фагоцитирующих клеток периферической крови, перитонеальной полости и костного мозга в динамике развития Candida а/б/сага-индуцированного гранулематозного воспаления в печени мышей линий С57В1/6 и СВА.

4. Провести сравнительное исследование морфо-функциональных параметров различных звеньев системы мононуклеарных фагоцитов при использовании комплекса «декстран+противогрибковый препарат амфотерицин В» в динамике развития Candida а/6/саж-индуцированного гранулематозного воспаления у мышей разных линии.

Научная новизна. Впервые выявлены межлинейные особенности, развития Candida a/fe/caw-индуцированного гранулематозного воспаления в печени, характеризующиеся большей интенсивностью и выраженностью гранулемогенеза в печени мышей линии С57В1/6, чем у СВА.

Впервые выявлено различие клеточного состава Candida albicans-индуцированной гранулемы в печени животных разных линий: относительное содержание эпителиоидных клеток в гранулеме печени мышей С57В1/6 достоверно выше, а макрофагов - ниже, чем у мышей СВА.

Установлено, что особенности реакции фагоцитирующих клеток при

4

Candida albicans-индуцированном гранулематозном воспалении в печени мышей линии С57В1/6 в отличие от мышей линии СВА определяют повышение числа нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови и в очаге воспаления с увеличением их функциональной активности и количества костномозговых клеток.

Впервые показано, что модифицированный вариант амфотерицина Б быстрее приводит к «диссоциации» Candida a/bzcans-индуцированных гранулем, чем препарат амфотерицин В. В результате оценки морфометрических параметров Candida а/Ь/сатм-индуиированных гранулем и реакции фагоцитирующих клеток периферической крови, перитонеальной полости и костного мозга впервые показан высокий противовоспалительный эффект модифицированного амфотерицина В, особенно при его использовании у мышей линии С57В1/6.

Научно-практическая значимость работы. Знание морфо-функциональных особенностей развития Candida д/Ь/сатю-индуцированного гранулематозного воспаления расширяет понимание роли фагоцитирующих клеток и генетических факторов в механизмах и вариантности проявления гранулёматоза микотической природы.

Выявленные изменения функционального состояния фагоцитирующих клеток и морфометрических параметров гранулем при Candida albicans-индуцированном гранулематозном воспалении позволили проиллюстрировать эффективность модифицированного варианта амфотерицина В.

Результаты исследования используются в лекционном курсе и при проведении практических занятий на кафедрах патологической физиологии и патологической анатомии Новосибирской государственной медицинской академии ФАСР и 3 РФ.

Положения, выносимые на защиту:

1. Вариантность проявления степени выраженности Candida albicans-индуцированного гранулёматоза в печени, количество и клеточный состав гранулём при спонтанном развитии и лечении амфотерицином В и его модифицированным вариантом зависит от генотипа животных.

2. Реакция фагоцитирующих клеток периферической крови, перитонеальной полости и костного мозга и изменение их окислительно-метаболической функции в динамике развития Candida albicans -индуцированного гранулематозного воспаления отличаются у мышей разных линий.

3. В отличие от амфотерицина В его модифицированный лизосомотропный вариант на иммуномодулирующей матрице обеспечивает более динамичную «диссоциацию» гранулём при Candida albicans-индуцированном гранулематозном воспалении.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на научно-практической конференции «Актуальные проблемы клинической и экспериментальной меди-

5

4

"Ж

цины», попосвященной 50-летию Читинской государственной медицинской академии (Чита, 2003); на конкурсе-конференции студентов и молодых ученых Лвиценна-2004» (Новосибирск, 2004); на научно-практической конференции с •.:кдународным участием «Медицина и образование XXI века» (Новосибирск, 00^); на научно-практической конференции по медицинской микологии (VII ашкинские чтения) (Санкт-Петербург, 2004); на V молодежной научной конференции СО РАМН «Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины» (Новосибирск, 2004); на П-й Всероссийской конференции «Компенсаторно-приспособительные процессы:

фундаментальные, экологические и клинические аспекты» (Новосибирск, 2004); на 1-й Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов «Актуальные вопросы патологической анатомии» (Орёл, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, характеристики материала и методов, главы, содержащей результаты собственных исследований, обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы. Материалы диссертации изложены на 142 страницах машинописного текста, содержат 16 таблиц, 38 рисунков. Список литературы включает 252 источника, из них 54 отечественных и 198 иностранных.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проведены на 110 мышах-самцах линии С57В1/6 массой 2025 г и на 230 мышах-самцах линии СВА массой 20-25 г, полученные из питомника НИИ цитологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск).

Для моделирования Candida а/£>/с<ту-индуцированного системного гранулематозного воспаления (ТВ) использовали суспензию живой культуры Candida albicans, полученной к.м.н. Извековой И.Я.. Культуру Candida albicans выращивали на среде Сабуро-агаре при 37°С в течение 2 суток, затем смывали дистиллированной водой. Полученную суспензию центрифугировали при 1500 об/мин в течение 15 мин. Суспензию Candida albicans готовили ex tempore, разводили живую культуру в стерильном физиологическом растворе и вводили интраперитонеально в объёме 0,2 мл (2,5х109 микробных тел на мышь) (Хмельницкий O.K., Белянин В.Л., 1993).

Исследование проводили на 10, 28, 42, 56 и 84 сут после индукции ГВ у мышей линии СВА и на 10, 28 и 56 сут - у С57В1/6. В каждой точке исследования было по 5-7 мышей. Умерщвление животных производили путём" транслокации шейных позвонков мышей под эфирным наркозом.

Содержание, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР от 12.08.1977г. №755).

Схема эксперимента с применением противогрибкового препарата амфотерицина В и его модифицированного варианта при Candida albicans-индуцированном ГВ:

1. Амфотерицин В (АКО «Синтез», г. Курган) (АМВ) вводили внутрибрюшинно в дозе 250 ЕД/кг массы тела в 0,2 мл 5% раствора глюксзь-(ОАО «Краснофарма», г. Красноярск).

2. Модифицированный амфотерицин В получали смешиванием амфотерицина В диальдегиддекстраном, который, в свою очередь, получали методом радиационного синтеза путём активации декстрана с молекулярной массой 30-40 кД в ускорителе элементарных частиц (ИЯФ СО РАН). Модифицированный амфотерицин В (мАМВ) вводили внутрибрюшинно в дозе 250 ЕД/кг массы тела в объёме 0,2 мл диальдегиддекстрана.

Препараты вводили через сутки после заражения; курс составил - 10 инъекций, в режиме «через день», в утренние часы (9-10 ч) до кормления животных.

В качестве материала исследования были использованы нейтрофюты крови, фагоциты перитонеально-лаважной жидкости, костного мозга и печени-животных.

Перитонеально-лаважную жидкость (ПЛЖ) получали стандартны, методом (Цырендоржиев Д.Д., 1997), а клетки костного мозга (КМ) по метог Гольдберга Е.Д. и Дыгая A.M. (1992).

Дифференциальный подсчет клеточных элементов крови, перитонеальной полости проводили на цитоцентрифужных препаратах. Общее количество лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева.

На гистологических срезах печени, окрашенных гематоксилином и эозином, подсчитывали численную плотность, диаметр и клеточный состав гранулём и инфильтратов. Для интегральной оценки воспалительного процесса был введен коэффициент общей площади Candida a/è/canj-индуцированныу гранулем в печени мышей разных линий, который получали произведением численной плотности и диаметра гранулем, полученное значение выражали к условных единицах (усл. ед.).

Оценку окислительно-метаболической функции фагоцитирующйх клеток проводили с помощью хемилюминесцентного (XJI) метода исследования (Зенков Н.К. и др., 1993; Цырендоржиев Д.Д., 1993; Tono-oka T. et al., 1983).

Статистическую обработку полученных данных осуществляли с помощь» лицензированных пакетов прикладных программ Statistica 5.0 и Microsoft Exe 7.0. При этом вычисляли среднюю величину (М), стандартную ошибку средней, (ш). Характеристики выборок приведены как М±т. Оценку достоверности различий выборок проводили с использованием t-критерия Стьюдента. различия считались значимыми при величине вероятности ошибочного принятия нулевой гипотезы о равенстве генеральных средних (р), меньшей 0,05 (Реброва О.Ю., 2003).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В работе представлены результаты морфологического и морфометрического исследования Candida а/й/сага-индуцированных гранулем в печени мышей линий СВА и С57В1/6. Так, наибольшее значение численной плотности в динамике Candida а/Ысаля-индуцированных гранулём в печени мышей линии СВА отмечалось на сроках 42 и 84 сут. В то же время максимальный диаметр гранулём в печени данной группы животных наблюдали на 10 и 84 сут, а наименьший на 28 сут.

Обнаруженное волнообразное течение Candida a/fe/caw-индуцированного ГВ в печени мышей, вероятно, связано, прежде всего, с особенностями форм развития гриба (Хмельницкий O.K. и др., 1983, 1991; Stone H.H. et al., 1974). С одной стороны, при дрожжевой форме грибы могут длительно персистировать в макрофагах, а также подвергаться деградации под действием лизосомальных ферментов и биоокислителей (|02, ~02, ROH", Н202 и т.д.) в фаголизосомах клеток (Сергеев А.Ю. др., 2000). В процессе фагоцитоза происходит активация макрофагов в результате чего они начинают продуцировать в окружающую хань большое количество хемотактических факторов таких как ИЛ-8, ЛТВ4, компоненты комплемента С5а и т.д., которые способствуют привлечению новых клеток в очаг воспаления и расширению его площади (Маянский Д.Н., 1991; Маянский Д.Н. и др., 1992). С другой стороны, при мицеллярной форме развития сами грибы посредством собственных ферментов (аспартильные протеиназы, фосфолипазы и т.д.) могут повреждать макрофаги, что, вероятно, объясняет уменьшение площади воспалительного процесса на 56 сут (Odds F.C., 1994; Niewerth М. et al., 2001). Данное положение подтверждается тем, что на этом сроке исследования количество гранулем в печени мышей уменьшается в отличие от сроков 28 сут и 42 сут соответственно в 2,0 и 3,6 раза. Кроме того, известно, что выделяемые грибковыми клетками ферменты и продукты обмена снижают хемотаксис и ингибируют фагоцитарную активность макрофагов (Lerner C.G. et al., 1993). Помимо этого, подавление способности захвата и элиминации патогенного агента может быть также связано с индукцией антигенами Candida albicans клеток-супрессоров (CD8+ лимфоциты супрессоры или CD4+Th2 клетки), вызывая подавление клеточного иммунитета (Jones Р., 1997).

Увеличение коэффициента общей площади ГВ в печени мышей СВА на 84 сут после её снижения на 56 сут, вероятно связано с эффектом действия компонентов мембраны грибов, которые могут поступать в окружающую ткань в процессе клеточной «дефекации», а также при разрушении самих фагоцитов. Основными компонентами мембраны грибов, способных стимулировать макрофаги и индуцировать гранулемы, являются маннано-протеины и в мень-

шей степени р-глюканы (Лазарева Д.Н., Алехин Е.К., 1985; Ibata-Ombetta S. et al., 2003). Однако данное положение требует более детального изучения.

Сравнительный анализ развития Candida айгсага-индуцированного ГВ б печени разных линий мышей выявил, что у мышей линии СВА количество i диаметр гранулём на всех сравниваемых сроках были достоверно ниже, чем у мьпней линии С57В1/6. Так, на 10, 28 и 56 сут численная плотность Candida а/6/сал5-индуцированных гранулем в печени мышей линии C57Bl/f соответственно было больше в 4,4 (р<0,05); в 4,6 (р<0,05) и в 4,0 раза (р<0,05), чем у мышей СВА (рис. 1).

0,35 0,3 0,25 < 0,2 * 0,15 0,1 0,05 0

С57В1/6 -¿У-СВА

Рис. 1. Численная плотность (N„) гранулем и инфильтратов в печени мышей линии С57В1/6 и СВА при экспериментальном кавдидозе.

* - статистически значимые различия между мышами линий C57BI/6 и СВА, р<0,05: ** - статистически значимые различия между данными на сроках 10 и 28 сут у мышей линии С57В1/6, р<0,05

В целом, коэффициент общей площади Candida яШгту-индуцированных гранулем в печени мышей линии С57В1/6 на всех сроках исследования был достоверно выше, чем у мышей СВА (рис. 2).

Морфологическое исследование Candida а/йгсят-индуцированных гранулем в печени показало, что очаг воспаления преимущественно составляют макрофаги, эпителиоидные клетки и лимфоциты. Появление нейтрофильных гранулоцитов в гранулеме и рост их числа отмечался только на ранних сроках исследования (10 и 28 сут) как у мышей линии СВА, так и С57В1У6

5 >>

Рис. 2.

Коэффициент общей площади Candida я/б!'сан5-индуцированных гранулем в печени мышей линий С57В1/6 и СВА.

* - статистически значимые различия по сравнению с мышами линии СВА, р<0,05

В динамике развития Candida яШсдаю-индуцированных гранулем в печени мышей обеих линии относительное содержание макрофагов в очаге воспаления было выше, чем эпителиоидных клеток. При этом, относительное число макрофагов у мышей линии С57В1/6 было достоверно ниже (рис. ЗА), а эпителиоидных клеток - напротив, достоверно выше (рис. ЗБ), чем у мышей СВА.

10

28 56 сутки

ICBA ЫС57В1/6

10

*

■

28 56 сутки

ICBA ВС57В1/6

Рис. 3. Относительное содержание макрофагов (А) и эпителиоидных клеток в Candida a/bicans-индуцированных гранулемах в печени разных линий мышей.

* - статистически значимые различия по сравнению с мышами линии СВА р<0,05

(

i

I

Что касается «минорных» фракций клеток в Candida albicans-индуцированных гранулемах в печени мышей, то на всех сроках исследования количество нейтрофильных гранулоцитов, а лимфоцитов, исключая 10 сут наблюдения, было достоверно высокими у мышей линии C57BI/6.

Таким образом, у мышей линии С57В1/6 был выявлен более сильный, чем у мышей СВА воспалительный ответ, который может быть обусловлен высокой реактивностью их организма. Об этом свидетельствуют результаты исследования В.А. Шкурупия с соавт. (1980), которые выявили высокую реактивность мышей линии С57В1/6 на продолжительное стрессирующее воздействие и низкую - линии СВА.

Для понимания механизма развития и особенности течения Candida ай>/сот-индуцированных гранулем в печени мышей разных линий важно оценить реакцию, как центрального, так и периферического звена фагоцитирующих клеток, которые составляют и формируют ГВ.

Результаты исследования показали, что в динамике развития Candida я/Ь/'саи5-индуцированных гранулем в печени мышей линии СВА изменения общего числа и клеточного состава периферической крови, а также клеток-костного мозга имели маловыраженный характер по сравнению с мышамк линии С57В1/6. В то же время на фоне низкой функциональной активност," фагоцитов периферической крови XJT ответ фагоцитов КМ у мышей линии СВА был высоким и, по сути, отражал воспалительную реакцию на введение Candida albicans. Известно, что в КМ мышей, наибольшую клеточную массу составляют гранулоциты разной степени зрелости (Гольдберг Е.Д., 1989), можно предположить, что именно они определяют высокий XJI ответ клеток КМ, которые могут быть подвергнуты активирующему влиянию со стороны макрофагов микроокружения. Помимо этого, различия между изменением количества клеток КМ и лейкоцитами периферической крови мышей в динамике микотического ГВ могут быть связаны со скоростью выхода клеток из КМ в периферическое русло, а с другой стороны - с низким уровнем хемотактических факторов, как в крови, так и в очаге воспаления (Дыгай A.M. и др., 1992; Traynor T.R. et al., 2001).

Следует отметить, что на сроке 28 сут после индукции микотического ГВ в периферической крови мышей линии СВА было отмечено снижение количества нейтрофильных гранулоцитов в 1,7 раза по сравнению с их числом у контрольных животных (0,5±0,1х109/л - опыт; 0,8±0,1х109/л - контроль, р<0,05 >. В то же время их число у мышей линии С57В1/6 на 10 сут в крови возрастало в 2,7 раза (2,3±0,4х10% - опыт; 0,9±0,1х109/л - контроль, р<0,05), а на 28 су; снижалось по сравнению с предыдущим сроком в 3,7 раза (0,6±0,1х109/л, р<0,05). При анализе соотношения числа нейтрофилов в периферической крови и их процентного содержания в составе гранулем видно, что эти клеткл наиболее значимо представлены в очаге воспаления в печени мышей линии

С57В1/6. Отсюда, видно, что в зону ГВ в печени мышей линии С57В1/6 активно мигрируют нейтрофильные гранулоциты, имеющие мощный саногенный и/или деструктивный потенциал.

Что касается клеток ПЛЖ, то наиболее выраженные изменения числа фагоцитов и их функционального состояния отмечены на 28 сут исследования. Так, у мышей линии СВА число фагоцитов ПЛЖ достоверно снижалось, а у С57В1/6, напротив, повышалось. При этом ХЛ ответ фагоцитов ПЛЖ у мышей СВА был достоверно высоким, а у мышей С57В1/6 - низким, чем у контрольных животных. Из этого, вероятно, следует, что в ответ на введение Candida albicans противогрибковый потенциал фагоцитирующих клеток ПЛЖ мышей СВА реализуется за счет повышения биоцидной активности, а С57В1/6 - повышением количества фагоцитов.

Таким образом, различия в формировании стресс-реакции, воспаления, регенерации и многих других процессов у отдельных индивидов могут быть генетически детерминированы. Это является естественным и важным фактором, способным определять возможность возникновения и особенности развития патологических процессов в случаях сходных альтерирующих воздействиях. Помимо этого в работе С. Sunderkotter и соавт. (1993) показано, что при иммунном гранулемогенезе у мышей линии С57В1/6 скорость созревания макрофагов примерно в 2 раза выше, чем у мышей линии BALB/c, что, вероятно, связано с продукцией колониестимулирующих факторов миелоцитов и гранулоцитов-макрофагов. Другие индукторы, в частности, не иммунных гранулем также эффективно индуцируют продукцию этих факторов, и, соответственно, моноцитоз, таким образом, повышая число клеток, способных рекрутироваться в очаг инфильтрации (Takahashi К. et al., 1994). Поэтому результаты С. Sunderkotter и соавт. (1993) хорошо согласуются с полученными данными о высокой способности мышей линии С57В1/6, но не СВА генерировать прекурсоры макрофагов. В конечном итоге, судя по полученным данным, характер течения воспаления или любого другого патологического процесса прямо зависит от реактивности и/или исходного функционального юстояния фагоцитирующих клеток, которое во многом имеет генетическую детерминированность (Staats J., 1972).

Дальнейшие исследования были направлены на оценку эффективности противогрибкового препарата АМВ и мАМВ в отношении изменения •¿орфометрических параметров гранулем и клеточного состава периферической ¿:рови, количества клеток ПЛЖ и КМ у мышей разных линий. Основанием для ;равнительной оценки эффекта противогрибкового препарата АМВ и мАМВ на функциональную активность фагоцитирующих клеток явились работы ряда авторов, посвящённых изучению вопросов лизосомотропизма. Так, в работах Шкурупия В.А. и соавт. (1996-1999) было показано влияние декстрана и его коньюгата с изониазидом на фагоцитарную активность и эффективность коньюгированного препарата при туберкулёзном ГВ. С учётом этих данных,

было проведено исследование влияния коньюгата АМВ с декстраном, как лекарственного препарата, обладающего противогрибковым эффектом АМВ и свойствами декстрана (лизосомотропностью, способность модулировать функциональное состояние макрофагов), на течение Candida albicans -индуцированного ГВ.

При введении АМВ и мАМВ было отмечено снижение морфометрических параметров Candida я/бгсаш-индуцированных гранулем в печени мышей СВА по сравнению с нелеченными животными. При этом наиболее выраженное уменьшение численной плотности гранулем и, в конечном итоге, площади воспаления в печени было у мышей, которым вводили мАМВ (рис. 4).

10_28_42 56_84 суг

Н Кавдидоз И Кацдидоз+АМВ И Кавдвдоз+мАМВ

Рис. 4. Коэффициент общей площади гранулём и инфильтратов в печени мышей линии СВА при применении амфотерицина В и его модифицированного варианта при экспериментальном кандидозе.

* - статистически значимые различия по сравнению с группами «Кандидоз» и «Кандидоз+АМВ», р<0,05; ** - статистически значимые различия по сравнению с группами «Кандидоз», р<0,05; X - статистически значимые различия по сравнению с группами «Кавдндоз+АМВ», р<0,05

Сравнительный анализ исследования влияния АМВ и мАМВ при Candida albг'сяти-индуцированном ГВ у мышей линии С57В1/6 показал, что у мышей получавших мАМВ гранулёмы в печени не выявляли уже на 28 сут наблюдения. В то же время у животных этой линии, не получавших препараты, гранулёмы в печени определяли до конца срока наблюдения (56 сут). При лечении АМВ, в отличие от мАМВ был выявлен отсроченный эффект действия и «диссоциация» гранулём в печени приходилась на 56 сут наблюдения (рис. 5).

8 Л

10___28 _ 56 сут

0 Кана ид оз □ Кавдвдоз+АМВ П Кандвдоз+мАМВ

Рис. 5. Коэффициент общей площади гранулём и инфильтратов в печени мышей шнии С57В1/6 при применении амфотерицина В и его модифицированного варианта при экспериментальном кандидозе (М±т)

* - статистически значимые различия по сравнению с группами «Кандидоз» и (Кандидоз+АМВ», р<0,05

Особенность действия мАМВ, по-видимому, связана с эффектами декстрановой составляющей, входящей в его состав: лизосомотропностью и способностью стимулировать метаболический обмен в макрофагах (Шкурупий В.А. и др., 1991). Благодаря этим свойствам полимера, АМВ, коньюгированный с декстраном, проникает в лизосомальный аппарат макрофага, создавая высокую концентрацию антимикотика в зоне локализации Candida albicans. Помимо этого, декстран, метаболизируясь в макрофаге, активирует энергетический, пластический обмен, повышая его противомикробный потенциал (Шкурупий В.А. и др., 1999).

При введении мАМВ у мышей обеих линий в Candida albicans-индуцированных гранулемах печени относительное содержание макрофагов -

увеличивалось, а эпителиоидных клеток - уменьшалось. По-видимому, это связано с привлечением новых макрофагальных клеток и отчасти формирования /енее плотных, по сравнению с эпителиоидными гранулёмами, макрофагальных *

«фильтратов. Количество эпителиоидных клеток на 28 сут в группах животных, получавших АМВ и мАМВ, по сравнению с предыдущим сроком уменьшилось, причём, на фоне применения мАМВ это снижение было более выраженным. Возможно, уменьшение числа эпителиоидных клеток, как неотъемлемой части гранулёмы, связано с фунгицидным эффектом этих препаратов. Основываясь на этой точке зрения, а также на низких значениях относительного количества эпителиоидных клеток на 28, 42 и 56 сутки, и на уменьшении численной плотности гранулём и инфильтратов на этих сроках,

можно предположить, что мАМВ обладает более выраженными противогрибковыми свойствами, что, по-видимому, можно объяснить введённой в состав препарата декстрановой матрицей.

Помимо этого, на 28 сут у мышей на фоне применения мАМВ, относительное содержание нейтрофилов было достоверно меньше по сравнению с остальными экпериментальными группами.

У Candida а/й/соиз-инфицированных мышей линии СВА, которым вводили АМВ, изменения клеточного состава периферической крови были более выражеными по сравнению с животными, получавшими мАМВ Уменьшение количества лейкоцитов на 42 и 84 сут в обеих экспериментальных группах, сопровождалось повышением уровня продукции активных форм

> кислорода (АФК) нейтрофилами периферической крови только у животных, которым вводили АМВ (табл. 1), что может быть связано с провоспалительным и/или токсическим свойством данного препарата. Функциональная активность

\ клеток ПЛЖ у мышей, получавших АМВ, была выше, а число клеток ниже, как

по сравнению с мышами без лечения (на 10,28 и 56 сут) и получавшими мАМВ.

По-видимому, отсутствие увеличения продукции АФК фагоцитами мышей, получавших мАМВ, можно объяснить уменьшением провоспапительного и повреждающего действия АМВ на фагоцитирующие клетки.

При введении АМВ и мАМВ, в периферической крови наблюдали снижение количества лимфоцитов, нейтрофилов и моноцитов. Данное уменьшение в группе животных, получавших мАМВ, было менее выраженным, чем при применении АМВ.

Это изменение числа лейкоцитов периферической крови, по-видимому, связано с активацией ГВ, и усиленной миграции этих клеток в очаг воспаления, об этом также может свидетельствовать увеличение клеточности костного мозга в данных экспериментальных группах.

У мышей СВА, которым вводили АМВ при кандидозе, количество клеток перитонеальной полости было меньше на 10, 28, 42 и 56 сутки по сравнению с животными без лечения и получавших мАМВ. При применении мАМВ количество клеток ПЛЖ на 84 сут было больше по сравнению с нелеченными животными и получавшими АМВ, что, возможно, связано с отдалённым эффектом действия декстрановой матрицы.

> Введение АМВ мышам линии СВА вызывало усиление продукции АФК нейтрофилами периферической крови на 42 и 56 сут наблюдения, по сравнению с нелеченными животными и группой мышей, которые получали мАМВ.

Применение АМВ и его мАМВ при микотическом воспалении у мышей .линии СВА на 42 сут наблюдения снижает, а на 56 сут - повышает окислительно-метаболическую функцию (ОМФ) фагоцитов КМ. При этом в группе экспериментальных животных, которым вводили мАМВ, эти колебания

были менее выражеными по сравнению с аналогичным показателем у животных, которым вводили АМВ.

Таблица 1

Суммарный хемилюминесцентный ответ нейтрофилов периферической крови, фагоцитирующих клеток перитонеально-лаважной жидкости и костного мозга при применении амфотерицина В и его модифицированного варианта в динамике развития Candida albicans-тдуцировшного гранулематозного воспаления в печени мышей линий

СВА и С57В1/6 (М±т)

Сроки (сут) Экспериментальные группы Нейтрофи-лы крови Фагоциты

ПЛЖ КМ

СВА

Контроль 303,6±30,4 44,4±4,6 53,1110,2

10 Кандидоз (6) 241,6±60,7 43,1±4,9 69,9116,4

Кандидоз+АМВ (6) 234,9±48,2 90,116,7*/х 56,018,7

Кандидоз+мАМВ(6) 377,9±49,4 42,317,9х 43,816,7

28 Кандидоз(5) 375,8±57,1 145,7+19,9 435,51111,9

Кандидоз+АМВ (7) 498,0±104,6 276,6+35,0* 496,8180,1

Кандидоз+мАМВ(6) 514,5±92,5 209,6±31,8 517,7144,9

56 Кандидоз (5) 373,5+54,5 130,8115,5 105,419,3

Кандидоз+АМВ (5) 398,0±36,4Х 229,2125,4* 386,8+96,8*

Кандидоз+мАМВ(5) 230,9±26,5Х 122,5148,8 205,9171,5

С57В1/6

Контроль 230,0+24,8 82,0111,1 108,2114,7

10 Кандидоз (5) 114,6121,9 79,313,5 37,316,7

Кандидоз+АМВ (5) 246,0132,7* 343,3165,5*^ 46,715,6

Кандидоз+мАМВ(5) 159,1±16,9 127,5±29,0Х 42,4±9,1

28 Кандидоз (5) 330,4±40,1 46,514,2 225,4128,7

Кандидоз+АМВ (5) 249,7±30,9 90,2118,3 145,0129,6х

Кандидоз+мАМВ(5) 269,3±59,1 94,0±16,9* 307,2± 14,9х

56 Кандидоз (5) 364,3±7,0 58,1110,2 93,9115,1

Кандидоз+АМВ (5) 330,1±38,0 29,614,9х 52,619,1

Кандидоз+мАМВ(5) 240,7±53,6 78,3±12,3Х 50,6±4,-0*

Примечание: в скобках - количество животных; ПЛЖ - перигонеально-лаважная жидкость; КМ - костный мозг; * - статистически значимые различия по сравнению группой «Кандидоз», р<0,05; х - статистически значимые различия между группами «Кандидоз+АМВ» и «Кандидоз+ мАМВ», р<0,05

Введение АМВ мышам линии СВА на фоне микотического воспаления вызывает усиление продукции АФК фагоцитами ПЛЖ (см. табл. 1).

Таким образом, при применении различных вариантов АМВ выявились следующие тенденции изменения ОМФ фагоцитов периферической крови, ПЛЖ и КМ: в группе, получавших АМВ, как правило, наблюдали активацию продукции АФК фагоцитами периферической крови, КМ и ПЛЖ, а пру введении мАМВ - изменений не было, либо показатели ОМФ снижались.

У мышей линии С57В1/6 при применении мАМВ на фоне Candida я/б/сяя-индуцированного воспаления была выявлена более выраженная клеточная реакция периферической крови (в частности со стороны моноцитов и лимфоцитов), чем у мышей, которым вводили АМВ, и у нелеченных мышей. При введении АМВ Candida а№/'саш-инфицированным мышам число нейтрофилов периферической крови на 10 сут было меньше по сравнению с нелеченными животными.

Применение АМВ у мышей линии С57В1/6 при Candida albicans-индуцированном воспалении снижает количество клеток КМ на 10 сут наблюдения по сравнению с нелеченными животными и получавшими мАМВ. В тоже время применение как АМВ, так и мАМВ приводит к увеличению количества клеток КМ на 56 сут.

Введение мАМВ мышам линии С57В1/6 на фоне Candida albicans индуцированного воспаления вызывало менее выраженное колебание клеточности ПЛЖ по сравнению с мышами, которые получали АМВ. На 10 сут у мышей, которым вводили мАМВ, количество клеток ПЛЖ было меньше, чем у нелеченных мышей и у животных, которым вводили мАМВ.

При введении мАМВ мышам линии С57В1/6 не наблюдали снижения ХЛ ответа фагоцитами КМ на 28 сут наблюдения ГВ в отличие от АМВ (см. табл. 1).

Применение АМВ при микотическом воспалении у мышей линии С57В1/6 вызывало усиление продукции АФК фагоцитами ПЛЖ на 10 сут, как по сравнению с нелеченными мышами, так и с группой животных, которым вводили мАМВ. На 56 сут у мышей, получавших АМВ, наблюдали уменьшение уровня продукции АФК по сравнению с группой животных которым вводили мАМВ (см. табл. 1).

Таким образом, снижение ОМФ фагоцитов при введении мАМВ может быть свидетельством уменьшения провоспалительного потенциала, а также уменьшения токсического эффекта противогрибкового препарата.

В конечном итоге, выявленные различия в формировании и развитии гранулём в печени у мышей линий СВА и С57В1/6, вероятно связаны, с разным исходным функциональным состоянием эффекторных клеток воспаления и их реактивности. Кроме того, следует отметить, что мАМВ обладал большим

противовоспалительным эффектом, чем АМВ. При этом снижение размеров и численной плотности гранулем и их «диссоциация» при применении мАМВ происходила раньше у мышей линии С57В1/6.

ВЫВОДЫ

1. Течение Candida а/б/салу-индуцированного гранулематозного воспаления в печени мышей носит волнообразный характер. На всех сроках эксперимента численная плотность и размеры гранулём в печени мышей линии С57В1/6 достоверно превышали эти показатели у мышей СВА.

2. Обнаружены межлинейные различия клеточного состава гранулем, количества клеток центрального и периферических звеньев системы мононуклеарных фагоцитов в динамике Candida alb / сага-инду цир ованно го гранулематозного воспаления:

а) Относительное содержание макрофагов в составе Candida albicans-индуцированных гранулем в печени мышей линии С57В1/6 было достоверно ниже, а эпителиоидных клеток и нейтрофилов - выше, чем у мышей линии СВА.

б) Реакция фагоцитирующих клеток в динамике развития Candida а/6/сат-индуцированных гранулем в печени мышей линии С57В1/6 по сравнению с СВА характеризуется достоверным увеличением общего числа клеток периферической крови, костного мозга и перитонеальной полости.

3. Функциональное состояние фагоцитирующих клеток крови, костного мозга и перитонеальной полости в динамике Candida сг/бгсаш-индуцированных гранулем в печени мышей линии С57В1/6 характеризуется достоверным снижением их хемилюминесцентного ответа на ранних сроках (10 сут) и с последующим его увеличением, начиная с 28 сут наблюдения. У мышей СВА хемилюминесцентный ответ фагоцитирующих клеток постепенно повышается, достоверно превышая контрольные значения на 28 и 56 сут развития Candida albicans-гранулем.

4. Применение модифицированного амфотерицина В приводит к1 «диссоциации» Candida а/й/сапу-индуцированньпс гранулем в печени мышей раньше, чем при использовании только амфотерицина В. Эффективность модифицированного амфотерицина В была выше у мышей линии С57В1/6.

5. Быстрая «диссоциация» Candida a/fe/cam-индуцированных гранулем в печени мышей при применении модифицированного амфотерицина В сопровождается нормализацией числа и функционального состояния нейтрофильных гранулоцитов, фагоцитов костного мозга и перитонеальной полости, чем при использовании амфотерицина В.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Макарова О.П. Реактивность альвеолярных макрофагов при развитии гранулематозного воспаления легких в условиях острой массивной кровопотери / О.П. Макарова, A.A. Зубахин, В.В. Курилин, Х.Ц. Далаева // Актуальны? проблемы клинической и экспериментальной медицины: Матер. Всеросс научно-практ. конф., посвященной 50-летию образования Читинской государственной медицинской академии.- Чита, 2003,- С.289-291.

2. Далаева Х.Ц. Клеточные реакции и функциональная характеристика СМФ при фагоцитарной гиперчувствительности на пике гранулемогенеза / X TI Далаева, В.В. Курилин // Тез. докл. ежегод. конкурс-конференции студентов к молод, ученых «Авиценна-2004»,- Новосибирск, 2004.- С.217.

3. Курилин В.В. Характеристика реакции фагоцитов в динамике Candida-индуцированного гранулематозного воспаления / В.В. Курилин, Х.Ц. Далаева М.А.Травин // Тез. докл. ежегод. конкурс-конференции студентов и молол ученых «Авиценна-2004»,- Новосибирск, 2004.- С.219-220.

4. Цырендоржиев Д.Д. Реактивность макрофагов на разных фазах развития гранулематозного воспаления / Д.Д. Цырендоржиев, Х.Ц. Далаева, В.В. Курилин // Медицина и образование в XXI веке: Тез. докл. научно-практ. конф. с межд. участием,- Новосибирск, 2004.- С. 153-155.

5. Травин М А. Структурные особенности организации гранулём и инфильтратов в печени мышей при экспериментальном кандидозе и его лечении комплексным противогрибковым средством в эксперименте / М.А. Травин, А.П Надеев, В.А. Шкурупий, В.В. Курилин // Тез. докл. научн. конф. с межд. участием «Проблемы лимфологии и интерстициального массопереноса», посвящ. 75-летию и 50-летию научно-педагогич. деятельности академика РАМН Ю.И. Бородина.- Новосибирск, 2004,- C.1I3-117.

6. Курилин В.В. Реакция фагоцитирующих клеток в динамике Candida а/бг'сага-индуцированного гранулематозного воспаления и при использовании комплексного противогрибкового препарата / В.В. Курилин, Х.Ц. Далаева, М.А. Травин, А.П. Надеев, В.А. Шкурупий, Д.Д. Цырендоржиев // Проблемы лимфологии и интерстициального массопереноса: Тез. докл. научн. конф. с межд. участием, посвящ. 75-летию и 50-летию научно-педагогической деятельности академика РАМН Ю.И. Бородина.- Новосибирск, 2004,- С.228-231.

7. Курилин В.В. Функциональное состояние фагоцитов в динамике Candida albicans - индуцированного гранулематозного воспаления / В.В Курилин, Х.Ц. Далаева, М.А. Травин, Д.Д. Цырендоржиев // Проблемы медицинской микологии,- 2004,- Т.6, №2,- С.90.

8. Далаева Х.Ц. Реакция фагоцитирующих клеток при введении липополисахарида в комплексе с липопротеинами различной плотности на фоне максимального роста гранулем в печени / Х.Ц. Далаева, В.В. Курилин //

Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины: Матер. V-й молод, научн. конф. СО РАМН.- Новосибирск, 2004,- С. 14-16.

9. Куршшн В.В. Влияние амфотерицина В на окислительно-(¿таболическую функцию фагоцитов при Candida a/bicans-инцуцированном , пэнулематозном воспалении / В.В. Куршшн, Х.Ц. Далаева // Фундаментальные '! прикладные проблемы современной медицины: Матер. V-й молод, научн.. хэнф. СО РАМН.- Новосибирск, 2004.- С.22-23

10. Цырендоржиев Д. Д. Особенности формирования зимозан-индуцированной гранулемы в печени преждевременно стареющих крыс OXYS / Д.Д. Цырендоржиев, С.Н. Кутина, Х.Ц. Далаева, В.В. Курилин, Н.Г. Колосова // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты: Матер. И-й Всеросс. конф.-Новосибирск; 2004,- С.82-83.

11. Приставка A.A. Сравнительная морфологическая оценка терапевтической эффективности пролонгированного амфотерицина при лечении экспериментального кандидоза почек / A.A. Приставка, М.А. Травин, А.П. Надеев, В.А. Шкурупий, В.В. Курилин // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты: Матер. 11-й Всеросс. конф.- Новосибирск, 2004.- С.68-69.

12. Травин М.А. Компенсаторные реакции в печени при воздействии амфотерицина В и его пролонгированной формы / М.А.Травин, А.Г1. Надеев, В.А. Шкурупий, И.Я. Извекова, В.В. Курилин // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты: Матер. П-й Всеросс. конф.- Новосибирск, 2004,- С.72-74.

13. Травин М.А. Компенсаторные реакции в печени при моделировании экспериментального висцерального кандидоза и его лечении амфотерицином В и его пролонгированной формы / М.А. Травин, А.П. Надеев, В.А. Шкурупий, В.В. Курилин // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты: Матер. И-й Всеросс. конф.- Новосибирск, 2004,- С.74-75.

14. Курилин В.В. Амфотерицин В - индуцированные клеточные реакции фагоцитов / В.В. Курилин, Х.Ц. Далаева, О.П. Макарова, А.П. Надеев, М.А. Травин // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные, экологические и клинические аспекты: Матер. Н-й Всеросс. конф.-Новосибирск, 2004.- С. 44-45.

15. Травин М.А. Морфологические изменения в печени мышей линии СВА и С57В1/6 при экспериментальном кандидозе и его лечении амфотерицином В / М.А. Травин, А.П. Надев, В.А. Шкурупий, В.В. Курилин, Х.Ц. Далаева // Актуальные вопросы патологической анатомии: Сб. науч. трудов 1-й Всеросс. науч.-практ. конф. патологоанатомов,- Орёл, 2005.- С. 82-84.

Соискатель

Курилин В.В.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АФК - активные формы кислорода

АМВ - амфотерицин В

ГВ - гранулематозное воспаление

КМ - костный мозг

мАМВ - модифицированный амфотерицин В

ОМФ - окислительно-метаболическая функция

плж - перитонеальная лаважная жидкость

хл - хемилюминееценция, хемилюминесцентный и т.д.

Подписано к печати 25.08.2005 г.

Формат бумаги 60 х 90. Печ. л. 1,0. Бумага офсетная.

Тираж 100 экз. Заказ 58

ИПП «Арт-Авеню»

630090, Новосибирск,, ул. Институтская 4/1.

РНБ Русский фонд

2006-4 12969

Актуальность темы. Одной из важных проблем современной медицины является хроническое воспаление. Хроническое воспаление протекает, с одной стороны, как самоподдерживающийся экссудативно-деструктивный процесс, а с другой - в виде мононуклеарной инфильтрации, нередко принимающей характер гранулематозного воспаления (Ма-янский Д.Н., Урсов И.Г., 1997). Многочисленность нозологических вариантов гранулематозного воспаления в зависимости от разнообразия этиологических факторов определяет сложность в изучении патогенетических механизмов развития данного патологического процесса (Маянский Д.Н., 1989, Маянский Д.Н., Урсов И.Г., 1997; Цырендоржиев Д.Д., 1997; Шкуру-пийВ.А. и др., 1998, 2001).

В настоящее время наиболее полно проведены экспериментальные и клинические исследования морфологических и иммунологических параметров гранулематозного воспаления при туберкулезе, саркоидозе, БЦЖ- и зимозан-индуцированной гранулеме (Струков А.И., Кауфман О.Я., 1989; Быков В.Л., 1990; Маянский Д.Н., 1991; Шкурупий В.А. и др., 1996; Dannenberg A.M., 1994; Denk Н. et al., 1994). В то же время проблема гранулематозного воспаления, индуцированного грибковыми агентами остается до сих пор слабо разработанной, хотя данные клинических исследований свидетельствуют о значительном росте заболеваемости, связанной с грибковой инвазией у больных СПИДом, при трансплантации органов на фоне химиотерапии, после оперативных вмешательств, а также у юных и пожилых лиц (Хмельницкий O.K. и др., 1984, 1993; Pfaller М.А. et al., 1999; Dictar М.О. et al., 2000; Dupont В. et al., 2000; Gudlaugsson O. et al., 2003; Garcia-Ruiz J.C. et al., 2004; Tortorano A.M. et al., 2004).

Известно, что ключевыми фигурами гранулематозного воспаления являются макрофаги и их производные - эпителиоидные и гигантские многоядерные клетки (Маянский Д.Н., 1991; Архипов С.А., 1997; Turk J.L.,

1985). Макрофаги, через секрецию хемотаксических факторов (интерлей-кин-8; макрофагальный воспалительный белок - la/р; макрофагальный фактор активации хемотаксиса; белки хемотаксиса моноцитов - 1,2,3; фактор хемотаксиса лимфоцитов и др.) детерминируют рекрутирование воспалительных клеток (Маянский Д. Н. и др., 1989; Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1995; Фрейдлин И.С., 1995; Лебедева Т. Н., 2004; Decker К., 1990; Goldin R.D. et al., 1996; Lukacs N.W., Ward P.A., 1996), опосредуют флогогенные функции антиген-реактивных лимфоцитов (Струков А.И., Соловьева И.П., 1980; Boros D.L., 1981).

В связи с вышесказанным, в первую очередь, есть необходимость детального изучения функционального состояния фагоцитирующих клеток при гранулематозном воспалении индуцированных грибковыми агентами, в том числе, при различной генетической детерминации. Во-вторых, не менее важной задачей является разработка новых подходов коррекции и лечения в связи с низкой эффективностью существующих методов терапии из-за недоступности индукторов (в частности, грибковых агентов) грану-лематозного воспаления, персистирующих внутри клеток-мишеней. Отсюда наиболее перспективным является подход, основанный на адресной доставке лекарственного препарата непосредственно в очаг гранулематоз-ного воспаления (Шкурупий В.А. и др., 1997-2001).

Таким образом, учитывая актуальность вышеперечисленных проблем, имеющих важное теоретическое и практическое значение, были определены цель и задачи исследования.

Цель исследования. Изучить функциональное состояние фагоцитирующих клеток в динамике развития Candida я/б/сага-индуцированного гранулематозного воспаления у мышей разных линий и оценить эффективность комплекса «декстран + противогрибковый препарат амфотерицин В».

Задачи исследования:

1. Провести сравнительную оценку морфологических и морфометри-ческих параметров в динамике развития Candida albicans-индуцированного гранулематозного воспаления в печени мышей линий С57В1/6 и СВА.

2. Изучить клеточный состав периферической крови и количество фагоцитирующих клеток перитонеальной полости и костного мозга в динамике развития Candida я/Ысят-индуцированного гранулематозного воспаления у мышей разных линий.

3. Исследовать окислительно-метаболическую функцию фагоцитирующих клеток периферической крови, перитонеальной полости и костного мозга в динамике развития Candida а/6/с<ту-индуцированного гранулематозного воспаления в печени мышей линий С57В1/6 и СВА.

4. Провести сравнительное исследование морфо-функциональных параметров различных звеньев системы мононуклеарных фагоцитов при использовании комплекса «декстран+противогрибковый препарат амфотерицин В» в динамике развития Candida а/бгсаш'-индуцированного гранулематозного воспаления у мышей разных линии.

Научная новизна. Впервые выявлены межлинейные особенности развития Candida а/&/ат?-индуцированного гранулематозного воспаления в печени, характеризующиеся большей интенсивностью и выраженностью гранулёмогенеза в печени мышей линии С57В1/6, чем у СВА.

Впервые выявлено различие клеточного состава Candida albicans— индуцированной гранулемы в печени животных разных линий: относительное содержание эпителиоидных клеток в гранулеме печени мышей С57В1/6 достоверно выше, а макрофагов - ниже, чем у мышей СВА.

Установлено, что особенности реакции фагоцитирующих клеток при Candida а/Ысага-индуцированном гранулематозном воспалении в печени мышей линии С57В1/6 в отличие от мышей линии СВА определяют повышение числа нейтрофильных гранулоцитов в периферической крови и в очаге воспаления с увеличением их функциональной активности и количества костномозговых клеток.

Впервые показано, что модифицированный вариант амфотерицина В быстрее приводит к «диссоциации» Candida а/б/саид-индуцированных гранулем, чем препарат амфотерицин В. В результате оценки морфометрических параметров Candida а/бгсаия-индуцированных гранулем и реакции фагоцитирующих клеток периферической крови, перитонеальной полости и костного мозга впервые показан высокий противовоспалительный эффект модифицированного амфотерицина В, особенно при его использовании у мышей линии С57В1/6.

Научно-практическая значимость работы. Знание морфо-функциональных особенностей развития Candida albicans— индуцированного гранулематозного воспаления расширяет понимание роли фагоцитирующих клеток и генетических факторов в механизмах и вариантности проявления гранулёматоза микотической природы.

Выявленные изменения функционального состояния фагоцитирующих клеток и морфометрических параметров гранулем при Candida albicans— индуцированном гранулематозном воспалении позволили проиллюстрировать эффективность модифицированного варианта амфотерицина В.

Результаты исследования используются в лекционном курсе и при проведении практических занятий на кафедрах патологической физиологии и патологической анатомии Новосибирской государственной медицинской академии ФАСР и 3 РФ.

Положения, выносимые на защиту:

1. Вариантность проявления степени выраженности Candida albicans— индуцированного гранулёматоза в печени, количество и клеточный состав гранулём при спонтанном развитии и лечении амфотерицином В и его модифицированным вариантом зависит от генотипа животных.

2. Реакция фагоцитирующих клеток периферической крови, перитоне-альной полости и костного мозга и изменение их окислительно-метаболической функции в динамике развития Candida albicans— индуцированного гранулематозного воспаления отличаются у мышей разных линий.

3. В отличие от амфотерицина В его модифицированный лизосомо-тропный вариант на иммуномодулирующей матрице обеспечивает более динамичную «диссоциацию» гранулём при Candida albicans-индуцированном гранулематозном воспалении.

выводы

1. Течение Candida а/Ысшгу-индуцированного гранулематозного воспаления в печени мышей носит волнообразный характер. Во все периоды эксперимента численная плотность и размеры гранулём в печени мышей линии С57В1/6 достоверно превышали эти показатели у мышей СВА.

2. Обнаружены межлинейные различия клеточного состава гранулем, количества клеток центрального и периферических звеньев системы моно-нуклеарных фагоцитов в динамике Candida albicans—индуцированного гранулематозного воспаления: а) Относительное содержание макрофагов в составе Candida albicans— индуцированных гранулем в печени мышей линии С57В1/6 было достоверно ниже, а эпителиоидных клеток и нейтрофилов — выше, чем у мышей линии СВА. б) Реакция фагоцитирующих клеток в динамике развития Candida al-Ыш/гу-индуцированных гранулем в печени мышей линии С57В1/6 по сравнению с СВА характеризуется достоверным увеличением общего числа клеток периферической крови, костного мозга и перитонеальной полости.

3. Функциональное состояние фагоцитирующих клеток крови, костного мозга и перитонеальной полости в динамике Candida albicans-индуцированных гранулем в печени мышей линии С57В1/6, по хемилюми-несцентному ответу, характеризуется достоверным снижением, на ранних сроках (10 сут), с последующим увеличением данного показателя, начиная с 28 сут наблюдения. У мышей СВА хемилюминесцентный ответ этих клеток постепенно повышается, достоверно превышая контрольные значения на 28 и 56 сут после индукции Candida а/&гс<ту-гранулем.

4. Применение модифицированного амфотерицина В приводит к «диссоциации» Candida albicans—индуцированных гранулем в печени мышей раньше, чем при использовании только амфотерицина В. Эффективность модифицированного амфотерицина В была выше у мышей линии С57В1/6.

5. Быстрая «диссоциация» Candida д/Ысд/гу-индуцированных гранулем в печени мышей при применении модифицированного амфотерицина В сопровождается нормализацией числа и функционального состояния нейтрофильных гранулоцитов, фагоцитов костного мозга и перитонеальной полости, чем при использовании амфотерицина В.