Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Функционально-биохимическая характеристика и экспериментальная фармакотерапия поражений печени, вызванных противовоспалительными нестероидными средствами

п

МИНИСТЕРСТВО ЗДМБ002РАНЕШН РСХ?

2-3 ШЖВСКИЗ ОРДЕНА ртта Г0СЭД4РСШЕШЙ МЗДШШЯШЙ ИНСТИТУТ М. Я.Й.ЛИРОГСВД.

Иа правах рукописи

КМНГК Клана Вадврдвваа ТОК 6Г6.35-002-0ЭЭ-02:615,275.0X5.4] -085.2/.

16РАШЕЕ0СПШ. И ЭЙСПЕВЫЕЕШГЕШЯ $АША201ВРАШН ДОРМШИЙ ДЕШЕВИ. ТШНАНШГ ПЕШВаВОСЯШШШСНЬШ ШСТШЩДЕЬЫИ СРВДЛВАШ

14.00.2? — фаряаЕсшлзы

Двтарефэраг взссартацш на содскаята ученой степени яандиллда мяли ци нидд науя

Москва - 1990

Работа вшолнеяа в Тернополъсхоы медицинском институте

Иа/чньй руководитель - Зас-аугеЕЕкЗ .работник высшей шксищ УССР, доктор кедащнеких наук, профессор Н.П.Сканун.

Научный консультант - Лауреат Государственной враглив УССр, доктор (ЗнологЕчесЕШС наук, профессор С.А.Сморчок

Официальные оппоненты:

Члаа-коррегзоЕдеЕт АИН СССР, доктор ыедацзшешх наук, лрофессор П.В.Сергеев; , ■

докгор медаяшеетх наук, профессор ?.Д.Се2$ула. Ведуиаз: органпзащг - ЦЩЗ - ШИШ!

Защита состоится " ' 1990 г. в_

часов г.а гаездангн саещадиЗЕрованного Совета С К. 084-1405) 2ШГОШ

¿дрес: Шаеквс, 1Г7437, ул. Островгтянова I а.

С диссергацсей иззно ознакомился в библиотеке днеггаута

- АьтсрвфсрЕТ разоалан " " 19Э0 т.

Уче£Ы& секретарь саецкушвщюв&нвого Совета

к.м.в., доцент

В.Т.САВЗШЗЗА.

; ! оаря ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОШ

Актуальность проблемы. Болезни печени и желчных путей занимают веяное место в структуре заболеваемости населения. Химизация народного хозяйства и быта, широкое, порой бесконтрольное, использование лекарственных препаратов ведут н возрастанию частота токсических и медикаментозных поражений печени (Ю.В.Бони-тенко, А.А.Брук, 1976; Г.И.Бурчинскнй, 1978; С.Д.Подымоза, 1984). Поэтому изучение патогенеза медикаментозных поражений печени, изыскание новых и усовершенствование существующих методов фармакотерапии таких поражения остается актуальной проблемой современной гепатодогии.

До 20? больных, получапгрсс медикаментозные средства, имеют различные гепатотоксические осложнения, причем 1% - угрожапцке жизни (А.С.Лопатин, 1976). К препаратам, обладающим гепатоток-сическим действием, относятся некоторые противовоспалительные нестероидкыв средства (ПНС), в частности, кндометацин, бутадиен, кислота ацетилсалициловая (гепеск зс а1. » 1967; Кагзау, ЭсЬа-, 1967; Вега^Ьэ1а аХ. , 1977;ВаЬапу, Раазаута , 1984; Зохепзеп , 1985). Тем не менее, зти прейараты часто назначаются врачами в связи с их эффективностью при различных по этиологии, ыорфологии и патофизиологии воспалительных состояниях (С.А.Са-ратиков, Т.П.Дргацегг, 1982).

Многие аспекты патогенеза гепатотоксичности противовоспалительных нестероидных средств не совсем ясны. В частности, противоречив и малоизучен вопрос о влиянии их на процесс переписного окисления липидов (ПОЛ) в печени, нарушение которого играет важную роль в развитии жировой дистрофии органа (З.Пладер и соавг., 1970;-А.$.Блюгер, А.Я.Майоре, 1977; В.В.Шманько, 1987),

как и возможность применения антиоксидантов для профилактики и лечения таких поражений печени, а именно: токоферола ацетата, эссекциале, биофлавоноидных препаратов - флакумина, легахона в Др.

По данным ряда авторов на фармакодинамику, фарыакоккнетиху г. токсичность лекарств и ядов существенное влияние оказывает биологические риткы (Я.И.Несторович, И.Ю.Высоцкий, 1981; Н.П.Скакун и соагт., 1981; 0.В.Давидович, 1984; Ев1пЬ«св в* а1., 1981).

Следовательно, наряду с изучением патогенетических механизмов поражения печени, раскрывавших новые возможности фармакотерапии, не менее важное значение приобретает изучение особенностей течения заболеваний пзчени л действия лекарственных препаратов в определенное время года.

Исходя из этого, мы поставили перед собой цель вскрыть . сущность поражений печени кндометациноы, бутадиеном, ацетилсалициловой кислотой, охарактеризовав сравнительную и сезонную гепатотоксичнссть этих ИКС и, основываясь на полученных результатах, разработать эффективную профилактику'и фармакотерапию поражений печени, вызванных етшга средствами.

В соответствии с поставленной целью бьеш определены саеду-хцие основные эадачи исследования:

- изучить сущность поражения печени, вызванного индомета-дином, бутедионом, ацетилсалициловой кислотой, по данньм сдай- -гев со стороны активности некоторых клеточных ферментов", желчеобразования, синтеза белка, ГОЛ и ультраезруктуры гепатоцитов;

- сравнить гепатотоксичность указанных препаратов;

- изучить зависимость гегш то токсического аффекта ЛНС от сезонных биоритмов и дозы препарата;

- осуществить поиск эффективных средств профилактики и лечения поражений печени, вызванных наиболее гепатотоксичным представителем этой группы лекарств - индометацином.

Научная новизна исследований. Установлено, что в патогенезе поражений печени, вызванных ГШС, важную роль играет усиление ПОЯ, нарушение мембран гепатоцитов, ослабление антиоксидант-ной защиты организма, угнетение желчеобразования. Показано, что изучаемые ПНС визызеш однотипное поражение печени, что индоме-тацин токсичнее бутадиена, а бугадион - ацетилсалициловой кислоты.

Впервые определена зависимость гепатотоксотноста ПНС от сезона года. Показано, что неблагоприятное влияние ШС на печень наиболее выражено в осенне-зимний период.

• Наш установлено^ что в зависимости от дозы индрметацина изменяется характер воздействия его на печень: от гепатопротея-ториого к гепатотохсгяескоыу. На фоне поргнёния печени классическим цитодитическии ядоы СС14, индометацин, используемый в дозе I иг/кг, выступает в роли ингибитора, а в дозе 5 иг/кг - з ролп индуктора ПОЛ некбран гепатоцитов.

Выявлено, что флакудаа, легалон, токоферола ацетат и эссен-цн&яо, применяемые раздельно, уменьшают гепатотоксическсе действие ПНС, а сочетание двух посдедаиг препаратов, тем более их использование с кислотой аскорбиновой практически; предупреждает его. При этом на фоне ингибирования ПОЛ и активации антаскси-дантной системы организма нормализуется активность клеточных ферментов, восстанавливается яелчеобразовательная функция печени, улучшается ультраструктура гепатоцитов.

Д'раятичесг.ая значимость работы. Полученные »кгагерименталь-ньге даяние расширяли существуйте представления о механизме ш-. врекдаищвго действия юздометацнна, бутадиена и ацетилсалициловой югслота на печень, too дозволяет разработать эффективные меры предуцреждения такого осложнения фармакотерапии. В результате проведенные исследование рекомендуется расширить показания к приненению токоферола ацетате, ассенциале, легалонаи флавдми-ка, сочетания витамина £ с »ссенциале ж тем более с ккслотоб аежарбяновоа в качестве эффективных средств профилактики я раннего лечения поражении -печени, вкзваяивх ПНС. Полученныё зкепе-рнманталыше данные о сезонных особенностях гедатотоксичности ШС могут послужить основой дав назначения агях препаратов юд прккрктием гепатолротекторов в наиболее опасные сезоны года.

На зщвту выносятся следящие основные соложения:

2. Интенсификация ПОД - ватное авеио патогенеза поражения пегсаяи ШС.

Е. Гехштотокскчесгнй еффект индзиатацкна, бутадвона в аце-таясающижовой кислоты одастипеа, во варажен и разно! мере.

3. Доза йндоаетацнна определяет характер ei-o воздействия ва печень, л частности, на состояние ШШ мембран гепатоцятов г . условиях «ытоксикагрш организма Cd4. - ■

4. Спряжения печени ШС в различные сезоны года проявляю^ га/в неодинаковое степени.

5. полированное праиемение растительных биофхавонождрв (флахумииа я жегвлона), токоферола ацетата, ессенцкале, а тахжё сочетание дцух последних препарвтов, тем более юс применение с кислотой аскорбиновой, является дффектввшм способом лрофгаак-тнки м лечения порижений печени, вызванных ЯНС.

Апробация -работы. Материалы диссертации доложены на областной научно® конференарга "Нов1 методи д1агвостжк», жЦуванк*3

профГлактинн* (Терноподь, май, 1989); научной конференции молода* ученых Тернопольсного медицинского института (1989); совместном заседании кафедр фармакологии, гистологии, биологическое и биооргвяической химии, патологическое и нормальной физиологии, биологии и микробиологии Тернололъского медицинского института (1969).

Публикации, По теме диссертации опубляковггга б работ.

Объем работы. Диссертация изложена на 2.19 страницах машшо-писи (основной текст -139 с*) и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав собственных исследования, обсуждения полученных результатов, выводов; практических рекомендаций и указателя литературы. Работа иллюстрирована 53 таблицами и 62 рисунками. Указатель литературы содеркит 520 источников, в тол числе отечественных -161.

содананиЕ ршет

Материал и методы исследования. Работа выполнена на белых крысах-самках массой тела Г40-2Ю г. Средний возраст животных 5 месяцев. Введение исследуемых воцегств животным проводилось в середине осени, зимы, весны и лета в одно и то же время суток (с 5 до 15 часов). йивотных содержали при обычной температуре и влажности, на стандартном рационе вивария, в условиях естественной смены света и тьмы.

При изучении сравнительной гетатотоксичности, а также сезонных особенностей токсического воздействия препараты вводили в следукщих дозах: бутадаон - из расчета 0,05 г/кг, кислоту ацетилсалициловую - 0,03 и 1,0 г/кг, индрметацин - 0,01 и 0,02 г/кг массы тела животного ( Belanger et al. > 19®; Pula Pallada Лапая , 1985; 2anata Siaosuka et al. , 1985). При изучении

воздействий кндометацина на гепатотоксичностъ препарат вводкли из расчета 0,001 г/кг к 0,005 г/кг в виде взвеси на кразогальном клейстере в келудок. СС1д вводили падахшо в 50% рас творе в масле по 4 ш/кг массы тела еиботного ежедневно в течение 4 дней (Б.И.Девшин, 1973; А.Н.Яудрин и соавт., 1982). Токоферола ацетат (виташк Е), ессенциале, флакумин и легален исполь зовали в дозе 0,03 г/кг (А.А.Аноненко и соавт., 1986; Н.П.Ска-гун и соавт., 1937; Н.П.Скакун, Н.В.Степанова, 1986 Э.Л.Орген-берг, СДТатеегдинова, 3984), кислоту аскорбиновую - 0,01 г/кг (О.Н.Воскресенский, 1987; iicCay Peul , 1905). Эффективность 8тих препаратов и их сочетаний изучено на ыодеди поражения печени индоыетацшом. Гепатопротекторы вводили внутриаелудочно ежедневно, в течение 5 дней, первые три дня - одновременно с индоиетацкноы. О состоянии печек» судкгк через 24 часа после заключительного введения препаратов и поврендащих агентов.

Лелчеобраэоватедьную фунхцю пачейя тучали по ыетодаке Н.Б.Скакуна и А.II.О (I9S7). В гегдоа опыте учитавалн ско-

рость секрецяк Еедчи, содержание в неЯ пегчнш: етслот, голесте- . рина г билирубина. Определение концентрации общего, прююго л непрямого Сил!Г|убина проводили по методу jenàraasii £ Glegbora (1926) .s модифины^ш Б.П. Скакуна (2956), яелчныг ни слот » холе-' сгерика - по Л.Л.Громаиевской п соавт. (1976)* Определялась такге активность аланинамииотрансферази (AIT), аспартатаыиао-трансферазь! (АСТ) и щелочной фосфатазы в сыворотке крова соответственно по методу Baitman л ïrauiel (1957) в Бевао? в со-авт. (1945), как Ла+-АТвазы и кисло)} фосфатазы (КС) s го-

ногенатаэс печени по Б.Т.Колбу в В.С.Камданикову {1962) в Бодшсхоз^у (2982) соответственно.

О состоянии перекасного окисления отпадов (ПОЛ) судив по содерканюо диеновых кошлгат (ДЮ я ыалонового 'дкальдегида (ВДА)

в гоыогенатах печени и крови, определяемых по методу Плэйер (i960), а 'такле интенсивности перекисьобразования в крови, .то-торуп определяли ПО ЗЬоскз И Doraanty (1977).

Об активности антиохсидангкой еистетда организма судили по уровня восстановленного глутаткска, активности супероксиддасму-' тазы, пэроксидазкой активности ■крови, показатели которых определяли соответственно по методу 31=аа (1959), S.S.Дубининой (1983) и Т.Попову и Л.Нейховсяой (1971). Определение содоргшц:я обцего белка проводила в сыворотке биуретовкм методой (А.А.По-кровскй, 1969).

Электрокнсмикросхошческие исследования печени проводки по Укети (1975).

Полученные в опытах цифровые величины подвергались /«тематическому анализу методом вариационной, статистики с использованием параметрического fr-критерия Стыздента (Ä.U.Беленький, 1963). Коэффициент корреляции ( г) определяли с помсцьл программы на ютсро-ЗЕМ "Электроника B3-2I" (Л.М.5ранцевич, 1979). Для оценки характера, взаимодействия препаратов был применен метод Уэбба ' (1966). " ' .

Результаты исследования и их обсуждение. Результаты напих исследований показали, что трехкратное введение индометацша, бу-тадаона или кислоты ацетилсалициловой в гедатотоксаческих дозах приводит я поразеняз печени. Оно характеризуется повшениеы активности аыинотрансфераз, щелочной и кислой фосфатаз, угнетением К*-На+- AT5a3ijf усилением свободаорадикального окисления липидов в печени, ослаблением антиоксидантнсй защиты организма, нарушением функционального состояния органа, как и значительным ухудшением ультраструктуры гепатоцитов. При введении ПНС угнетается интенсивность Желчеотделения, что тагехе отмечали ВаЪалу, Реззауге (1984), снижается содержание холатов, холестерина -и билирубина в ней, на-

рушается процесс конъюгации билирубина с гдййуроновой кислотой, уменьшается уровень общего белка в крови. При этом уменьшение уровня белка и угнетение желчеобразования происходило на фоне ус» ления ПОЯ. О взаимосвязи изменения желчеобразования и ЛОЛ свидетельствует наличие корреляционной зависимости между этими процессами . На наш взгляд, важную роль в указанных изменениях, как и в латогенезе поражения печени ВНС играет инициация свободнорадикаль кого окисления мембранных жипидов с последующим повреждением мембран гепатоцитов, что, очевидно, и приводит к нарушению ее функционального состояния.

Нами установлено, что поражение печени ШС во многом сходно с гепатотоксическим действием СС1_,, а С.11.Николаев (1983) на модели поражения печени четыреххлористым углеродом доказал существование зависимо с те ыевду процессов геггееобразования и накопления продуктов П01 е печени: угнетение его происходит на фоне усиления ПОЛ. Свидетельством активации свободнорадикального процесса в печени при введения ПНС в гепатотокоическкг дозах слугат увеличение содержания продуктов ПОЛ, ястоцещге фонде восстановленного глута-ткона, падение активности таких фериентов «нтиоксиданткой зациты, ивж СОД н пероксидазы, что ранее отмечали в своих исследованиях •. ü.C.üe^kseh, С.В.Васильев (1935), Basaaaor* и соавт. (1985), Parola taurísá® соавт. CI986). Очевидно, плгенскфккация E0I ШС является следствием их специфического действия на различные биохимические процессы. Так, нестероидным антифлогистикам свойственно Енгябкровать энергообразование цутем разобщения окислительного фоб форшшрования и угнетения гликолиза (Й.ПЛ^йцус, 1985; шл-ьеОмшае , I96B; Таааеу et al. , 1975; Eoajati et al. , 1985). Подтверждением тему служат выявленные олектронномнкроскопические изменения митохондрий у животных, который еводили ПНС, проявляющиеся набуханием органелл, дросветлением матрикса, повреждением их крист,

что, по данным К.С.Митина (IS67), свидетельствует о нарушении энергообмена в клетках. Вследствие этого возникает дефицит макроэргов и снижается активность АТФаэ (Eiriyaaa et al., 1983; Prenzol • 1983), что сопровождается повреждением К^-Иа^-насоса ( íreazcl. 1988), нарушением На+-Са^+ обмена ( Jenaings efe ai, 1975) и избыточным накоплением Са*^" внутри гепатоцитов. Это, в свое очередь, призодит к усилению ?в2+-эависимого НАДЗ.Н^ ПОЛ с последующим повреждением клеток (Cherra ofr аЛ,, 1981). К тому же, дадометацин, бутадаон и кислота ацетилсалициловая, являясь ингибитором цитохроыа-450, тормозят реакцию гидроксилирования (Baienger, IS85; Sato, 1975) и способствует: в гепатотоксических дозах активации в НДЩ.Р^ зависимой редокс цеш реакций. ПОЛ (Htigsaaow et al., 1986¡Parola Haorlzio efe al ISB6). Очевидно, это связано с антагонизмом реакций гидроксилирования и ПОЛ в шкросоыах печени (А.И.Арчаков, 1975). Усилении ПОЛ способствует такие- свойство ПНС в больших дозах истощать запасы восстановленного глутатиона (И.ЗЛещкзен, С.В.Васильев, 1985). При объяснении выявленных нарушений желчеобразования следует клеть в виду, что процесс этот является знергозависшым (А.С.Сарагиков, Н.П.Скакун, 1977), а ШС способствуют истощении запасов энергии и, следовательно, развитии холестаза. йце одной ейо причиной при введении ШС может быть подавление синтеза простагландинов (Р.А.Йванченкова, 1987). Выявленное нами уменьшение содержания желчных кислот, по всей вероятности, происходят вследствие разобщения ШС процессов гидроксилирования ( Kata,1269; Зе langer et al •, 1985). В своп очередь, угнетение синтеза ходaros влечет за собой торможение интенсивности секреции желчи, ее холатозависимой фракции.

Введение ПНС приводит к уменьшению уровня общего белна крови, что электронноыикроскошчески проявляется резким расширением, вакуолизацией и фрагментацией канальцев зернистой эндоплаз-матктеской сети. Уменьшение уровня общего белка в крови, оче-вдцяо., можно объяснить сгособностьв ПНС тормозить процесс энерго-

■tû

образования (А.Ш ЛещинскнЯ, 1970), к тоиу ке они уменьааат синтез ДНК и РНК и торкозят вкяачение аминокислот в белки ( паласу „ 1975). По шеиш Б.И.Злгнойко (1981, 1985), угнетение синтеза белка в печени обусловлено такие поступлением ингнбирувцих ве-цеств кз повревдекных лизосоы. Возможно, в этой роли, в данном случае, выступает КЭ, екхизность которой была вовшена при введении нами ПНС в гедатотоксических дозах. Причину этого явления, как считает Т.Л.Баец и соавт. (i960), следует искать в изменении структуры лмосоы и «арупении целостности их ыембран, которая наблюдалась наш на цикрофотоrpsiasi:. ■

По данным И.С.Пурванецккне (1975), On-eniue , Sicotera, (1986), ПНС в геп&тотоксическиг дозах способны дестабилизировать мембраны лмзосом с посладукцгй активацией ферментов втих органелл. Л.ВЛценко и Т.К.Терецанхо (IS73) считав*, что повреждение дкзо-сэиалыах ые^бран является реаевцзш фактором, обусл&вливаициы по-вшение сютивносгх кислоП йесфатазы. Выгод лпзосоиалшых ферментов sa прад&ггы органелл ьгдзт ж усугублению патологического процесса ■ (А.АЛокро^сккй, В.АЛУгелькн, 1976; Н.т/. Еоголсдов, IS79)..

Поргг;шиа ne-oiiii, Еыззшгюе кндз^гтецинои, бутадиеном, аце-тнлеаыщиловой кислотоИ, в kczuX опытах цротекало на фоне роста . активности AIT, ICI и в сыьоротке крови. Эти даккыз согласуется с иыещюгися б литераторе сообщениями о регистрации гшхерфер-ыенгемиБ связи с хтрло-ох указанных средств ( Qprien, Bagij-, 1985; ьогепБел , 1935). ÍIüsetc« основания полагать, что наблодаеаое на-ira увеличение активно сяи'ыашотрансфераз свидетельствует о развитии цитолитическэго процесса в печени, так как увеличение активности AJGX .является весьма чувствитеяы&ьг показателен цитолиза ге-патоцигов (Г.Н.Нолылова, З.В.Вицуле, 1978; А.б.&шгер, И.Н.Новицкий, 1984; Л.Й.Хаэанов,. 1986).

Согласно современным представлениям нарушение структуры и

функции клеточных мембран обусловлено активацией ПОЛ (Е.В.Владимиров, А.И.Арчаков, 1972; О.Н.Воскресенский, 1974). Очевидно, продукты ПОЛ и свободные В*, накапливаясь в больших концентрациях в крови и тканях, повреждают не только фосфолипидныЛ бислой мембран. Будучи высокотоксичными соединениями, они способны вызывать дена-турацш» белков и окисление сухьфгидркльных групп ферментов, что приводит к тяжелым внутриклеточным энзимопатиям а глубоким нару-пенкям обмена веществ (Ю.А.Владимиров, А.И.Арчаков, 1972; Е.Б.Бур-лакова, 1975, 1580; П.Богач а соавт., 1981).,

Мы впервые обнаружит, что использование изучаемых ПНС в эквимолекулярных дозах не одинаково сказывается на состоянии печени. Наибольший токсический эффект присущ индоыегацину, несколько меньпе он выракен у бутадиояа и минимален у ацетилсалициловой кислоты.

Доза индометацина определяет характер его воздействия на процесс свободнорадшсального огаслешш липидов. 'Эта исследования проводились нами на модели поражения печени СС1д. Оказалось, что введение одновременно с индог1етгцияоы в дозе I иг/кг не приводит к столь шраяенньы изиенекияи гепатоцитон, как при изолированном действии При этом в иеньяей иере страдает ее годчеобразователььая ¿¡дикция.. Более активно происходит выделение зселчи с высокие содерх&нием ее основных ингредиентов. Повышается таете уровень общего белка в крови. Все это происходит на фене менее интенсивного ПОЖ, что подтверждается более- низ ними показателями и ДС, увеличением уровня' восстановленного глутатнона и активности $ерлентов антионсидантной защиты. Электронномикро-скогогчески наблюдается стабилизация мембран органелл, улучшаются ядерно-цитоплазнаткческие взаимоотношения.

Очевидно, вэянуэ роль в обнаруженном изменении гепатотоксич-

ности СС14 играет способность ивдометацина влиять на метаболизм этого яда. Известно, что токсичность СС14 проявляется в процессе его биотрансформации до активных метаболитов с участием ЦР-450 С КиМс, Азйегз. 1980; ЕоеисЬ! вt а1. . 1982; ущ18 » 1980). Об этом свидетельствует резкое повыпение токсичности СС1^ на фоне фенобарбитала - ивдуктора ЦР-450 и, напротив, снижение ее у животных содеркал?ихся на безбелховэй диете а у новорожденных крысят, у которых содержание ЦР-450 снижено ( ЫогвЬаИ, ЕсЬвап » 1971). А.Й.Арчаков (1975) считает, что животные, в печени которых содержа ние ЦР-450 снижено, проявляют низкую чувствительность к Ста-

новится понятии, почему на фоне кндоиетедина, ингибитора ЦР-45Э ( БеЗ-ешгев et а1. , 1985; Zatй а!. , 1964), используемого в дозе I ет/кг, гелаготоксичность в наших опытах снижалась.

Важен и тот факт, что индоматацш в малых дозах угнетает

р.

■трансмекбранный приток к депонирование ионов Са внутри клетки (А.С.Саратиков, Т.П.Пржцеп, 1932), в то время как активируя

ПСЛ (А.&.Блвгер, А.9. №ь£оре, 1978; ие31ир11с1о еъ в!.. 1978; ОПпвеса еЪ а1. , 1982; ЛцгисМ еЬ е2 . . 3932;. 2980),

л.

«ь-зывает повреждение Са -насоса с аоследующим накоплением в тканк яече.чи Са^"®" ( КекоаЫхи ог а1 , 1533). Очевидно, в уменьшении ге-латотсксического еффекта больное значение имеет аитирадих&ль-ная влггивкэгть кндоиетвцина, испэдьэуекого в средних тереаевткче-ских дозах (А.С.Ссратиков, Т.П.Пркцеп, 1932; ХМ.Насырэв, 1986).

В нагих опытех совместное использование и ицдоыетедина в дозе I гт/кг не вызывало столь резкой активации КЗ, которое на* блгдыось при сведении одного лииь СС1д. При, этом на электрошой 1;икрэфотограине' меньзим било количество вторичных лиэосом, мембраны которых были не так сильно повреждены. По-вндеагоыу, это связано со способностью индокетацииа в ыальк дозах стабилизировать мембраны лизосои, уменьшать их проницаемость, что служит причиной тормо-

С.Э.Шноля (1965), может объяснять ритм "биологических часов", тем более, что колебания тиоловнх групп в kjJobh совпадает с таковкми в печени (Н.П.Скакун, И.Ю.Высоцкий, 1982, 1988).

Важная роль в поддержании концентраций свободных радикалов на стационарном и безопасной для клетки уровне принадлежит ООД, которая дезактивирует супероксидные анионы. Наименьшее значение отмечено веской (С.Н.Суплотов, Э.К.Барнова, IS66), что немаловажно при объяснении факта наибольшего уровня ВДА в этот сезон.

Активность АЛТ и ACT сыворотки кроги у здоровых животных такие била неодинакова в различное время года. Отмечалось увеличение ее весной и летоы. Максимальную активность еминотрансфераз в летний сезон отмечали Н.И.Ларичева и соавт. (1984). В свою очередь активность Щ9 била самой высокой в зимний период года.

В зависимости от сезона года у здоровых белых кркс-самок изменялись и количественшге показатели, характеризующие желчеобра-йовательнув функции печенн. .В частности, интенсивность секреции велчи была минимальной осеньв, достигая максимального уровня в весенне-летний период. Аналогичная закономерность отмечалась к со стороны секреция желчньх кислот а билирубина. Уровень холестерина в желчи был минимальным зимой, возрастал осеньв, особенно веской и летоы, Н.А.Агадханян (IS67) отмечал, что.згаэЯ уровень холестерина в крови максимален, а, следовательно, s это время года уменьшается до миниыуиа его содержание в яелчи.

Таким образец, .как показали результаты и ал кг опытов, повышение желчеобразования весной и летом у здоровые животных происходило при сравнительно более высокой, чем осенью и зшой, интенсивности ПОЛ в печени, активности аминотрансфераз, но при более низком уровне восстановленного глутатиэна, что согласуется с данными И.В.Высоцкого и Н.П.Скакуна (1982). На зависимость желчетока от времени года указывает в своей работе С.У.Горшкова и И.Т.Курцнч

(1967). Они связывают' высокий уровень секреции желчи летом и низкий зиной - с действием температурного фактора. Б.Е.Есипенко и соавт. (1983) на основании аналогичных результатов своих опытов считают, что это явление обусловлено интенсификацией обмена веществ в печени и значительным увеличением секреции желчных кисло: летом.

Нами установлено, что уровень общего белка в сыворотке крови был минимален в осенне-зимний период, увеличиваясь весной и особенно летом, что совпадает с данными В.М.Иережинског&г <=(1962).

По наяшм данным сезонные биологические ритмы оказывают суще-^ ствектае влияние на гепатотокеичность ПНС. Под влиянием токсическ доз индоыетацина, бутадиона и ацетилсалициловой кислоты наибольший рост ДК и МДА в печени, активности ашнотрансфераз и Щ5 в сыворотке крови отмечается осенью и зимой, в меньшей мере - Ееской и летом..Накопление продуктов ПОЛ осенью и зимой сопровождается соответственно более резким падением уровня восстановленного'глу-татиона. Определяемые нами стационарные уровни ДК и МДА зависят • от соотношения процессов образования и распада продуктов ПОЛ, которые регулируются антяоксидантной системой, неотъемлемой компонентами которой являются селен и витамин Е. Содержание последнего в печени и плазме крови претерпевает значительные сезонные колебания, будучи максимальным летом и весной (А.Д.Абраров к соавт., 1979; Н.В.Паранич, 1984; ЫоуНа вг а1. » 1980), что, очевидно, влияет на проявление гепатотоксичности ПЕС. Наблюдаемый н&\;и высокий уровень ДК и МДА при индоаетапинэвом поражении печени осенью и зимой, сравнительно с другими сезонами, свидетельствует, по-видиыоау, о более интенсивном распаде перекисей з осенне-зимний период, в то время как весной и летом этот процесс ыенее активен. О.К.Воскресенский-и- В.А.Гуманов (1982) относят зимне-весенний период к возможньы факторам срыва ангшхсздшгной защиты.

П.П.Голиков п Л. П. Гол юге з (1933) показали, что цаяежтльная фотнвовоспалительная активность ПНС проявляется в весенне-летний 1ериод, что азторы связызазт с поЕшенноЯ функциональней активного коры надпочечников в это время года; С другой стороны, и ток-:йчность ШС была минимальной весной и летом. Еозыозно, это свя->ано с тем, что летом уровень ЦР-430 максимален (П.И.Лутшенко, 1.И.Супко, 1980), а именно он приникает растив в метаболизме ПНС. ]оэтоау увеличенное содержание его в гепатоцитах, очевидно, нормализует процессы метаболизма, как я ПОД в печени.

Наиболее выраженное торможение секреции желчи, синтеза и секреции желчных кислот п билирубина, особенно его неконьвгирован-ий фракции, екскреции холестерлш, такае происходит осеньа и эн-¿ой. Весной и летом зта изменения выражены в меньсей степени. Очевидно, имеет значение н тот факт, что энергообеспечение процесса *елчеобразования з наибольшей мере страдает н осенне-зимний период, яеньае весной а летом (Н.Г.Дершо и соавт., 1935).

Нами установлено, что использование биофлавоноидкых препаратов (флаяузгкиа и легалона) в качестве ггпатозеЕзганнх средств, при порет ежи печени нндоиетацкноы, является оправданным и эффективный. Их введение предотвращает значительною активацию азгинотранс-фераэ, КЭ, как и угнетение К*- Яа+-АТ$азы. В иеньзей мерз усиливается ПОЛ мембранных липздов. Эти положительные сдвиги происходят на фоне нормализации содержания в печени восстановленного глутатиона, активации ферментов антиоксядантной зениты. Наряду с этим при введении как флакутлма, так я легалона, в неньпей мере тормозится желчеобразование. Более интенсивна секреция желчи. Увеличивается содержание желчных кислот, холестерина и билирубина в ней, то есть достоверно менее выражено нарушение ее химического состава по сравнении с нелечеными животными. Положительная дкна-м:ка функционально-биохимических показателей состояния печени со-

гласовывается с улучшением морфологической картины гепатоцитов.

Как следует из результатов наших исследований, при поражениз печени индоиетацнном фдакумкн по своей эффективности практически не уступает известному ыембранопротектору легалону. •

По-видимому, ведущим звеном в многостороннем гепатопротек-торном действии растительных флавоноидов является их актиоксидант ная активность. Это четко проявляется в нашем случае, когда введе ние индометацина в гепатотоксической дозе приводит к активации ПОД. Защита биофдавоноидами осуществляется за счет наличия в их структуре подвижного водорода, который используется организмом для ликвидации свободных радикалов - инициаторов ПОЛ (Е.А.Владимиров, А.И.Арчаков, 19724 В.А.Барабой, 1976). При отом образуются семихинонные радикалы с малым запасом анергии, которые не в состоянии продолжать свободаорадшсадьнкй цепной процесс. Под влиянием флавоноидных препаратов мы наблюдали уменьшение количества продуктов ПОЛ, стабилизацию мембран гепатоцитов и их органелД, что согласуется с данными H.M.Eauen et al. (1973) и E,Schiewer efc. al.,(I975). Возможно, антиоксидантный эффект легалона связан так-

■ р

же с его способностью подавлять 5е + -асксрбат зависимое-. ПОЛ, в' связи с ингибкцией кс^ангиноксидазц (М.И.Приваденко и соавг., 1981),

Выявленное наш увеличение содераания восстановленного глу-татиона, активация ферментов антиоксидантной защиты, очевидно, связано со свойством биофлавоноидов восстанавливать тиодовые группы белков, ферментов, как и глутатиона (В.А.Барабой, 1984), тем семьи повышать защиту печени от окислительных процессов ( Valea— zuela et aim, 1985). Кроме того, биофлавоноиды являются перено-

I '

счикаш водорода в дыхательной цепи (М.Н.Запрометов, 1974), стимулируют ряд важных ферментативных реакций, в том числе тканевое дыхание и окислительное фосфорилирование (Е.й.шамрай, А.Н.Алферов,

1971), в частности, угнетаемые индоыетациноы.

Лечение флакумином и легалоном индоЬетациновых пораяений пе-гени приводит к увеличении содержания общего белка в крови. Это, очевидно, связано со свойством бнофлавоноидов стимулировать син-геэ нуклеиновых кислот и белков (И.Ы.Приваленко и соавт., 1981; Зуи-ЬЬупеката et а1., 19В?| БолпелМсЫаг еЪ а1., 1982).

Свойство легалона стабилизировать лизосоиальные мембраны [М.М.Приваленко и соавт., 1961), оказывая ыодулиругсцее действие и синтез фосфолипидов (Браатц, 1981; ВсЬг1етег et а1. • 1973), >чевидно, приводит к сниаешш активности КЗ и нормализации уль-рраструктуры лизосом, что отчетливо отмечалось в напих опытах.

Улучшение показателей аелчеобразования при использовании Бакунина и легалона связано такве с их свойством стабилизировать Шхательные, окислительные процессы (Е.О.ЕамраЯ, А.Н.Алферов, 1&71), активировать АТйазы (В.А.Барабой, 1976), угнетенные индэ-[етациноа. Биофлавоноидные препараты, ингибируя ПОЛ в ЭПР, иорма-[кзуэт утилизации холестерина, в том числе ее главное звено, на-увееггое ШС - гидрокскдирование холестерина в желчные кислоты Б^Е.Ескпенко и соавт., 1935; Ц.Ы.Бриваденко и соавт., 1931). 1озиогно, этим объясняется выявленное на1£Я увеличение содеркакия годатов в велчн.

Л,ля лечения поражений печени, вызванных индоыетациноы, наюз ¡спольэ о вались также ■токоферола ацетат, вссенциале, кх сочетание, :аж и совместное введение с кислотой аскорбиновой. Результаты пытов показали, что лечение этими средствами оказалось более эффективным, чем бисфлавоноидами.

Гепатозащитное действие токоферола ацетата обусловлено его ногосторонниы положительным эффектом на различные звенья биохими-есккх процессов в организме. Являясь важным компонентом антиокси-днтной системы (А.й.Нуравлев, А^И.Еуравлева, 1975; О.Н.Воскре-

сенский, В.¿.Туманов, IS82), он проявляет выраженное антирада-кальное действие. Как акцептор ц донатор Еодорода (В.З.Цазгутов 1931) он, взаимодействуя с радикалами, прорывает цепь свободно-радикального окисления (Й.А.Владошров, А.И.Арчаков, 1972). Ста бклизаиия мембран гепатоцитов происходит Tasse sa счет сьязывшв продуктов гидролиза фосфзлипидов витамином Е, образующихся под влиянием фосфолипазы А.

В условиях поражения пачени нндоыетацнноы, валящегося inirs биторок ЦР-450 (EoLacgar , 1985), применение витамина Е оказалос аффективный ецэ и потопу, что последний продупрездает уменьшение уровня ЦР-450 и в ыикросоыах при патологии, сопрововдазцейся stî ки явлениям;! (О.Г.Грек, 1987). Возаохно, 1ывет значение способность токоферола ацетата контролировать биосинтез и взакыопреврг щзнкя убихииона (Г.В.Донченхо, 1975; И.В.Кузиенко к со авт., 1986 поЕьшать содержание А13 и едениннуклеотидов в печени крыс (Л.А.Е дкндина, 1964; Л.Н.Кузнедова и соавт., 1974). Препараты витамина обладав-! также умеренным ходерзтическим и холатоста-улирутцяа действием (Я.М.Несторович, 1977). Вероятна, с поыоцью Еьиеизло-кенных механизмов лохно объяснить, выявленное нами угнетение ПОЛ1, стабилизация мембран^гепатоцитов, норыализацио желчеобразования у кркс, пораженных индометацийоы, которые в качестве Течения получали токоферола ацетат. Иы предполагаем, что установленное нам: увеличение уровня "общего белка происходит за счет способности токоферола ацетата стимулировать синтез нуклеопротеидов и тормозить одновременно действие ферментов, расцепляющих белки (П.И.Шилов, Т.Н.Яковлев, 1974), if тому ке, одновременное использование токоферола с ПНС приводит к усилению их антифлогистического действия и улучшает течение заболевания у крыс с адьювантньы артритом ( WoilnSf зг, Haausgh. , 1973).

В гепатозащитнои механизме эссенциале, который ярко прояв-

23 -пу-

ляется на модели поражения печени индометациком, на наш взгляд, решающая роль принадлежит его заместительному эффекту. Эссенциале активирует также окислительное фосфорилирование, способствуя синтезу АТ05. Кроме того, высокая эффективность эссенциале связана с входящими в его состав витаминами В^, оказнвапцими разнообразное положительное действие на печень,(С.Д.Подыиова, 1984).

Исходя из вышеизложенного, становится понятным, почему соче-танное использование токоферола ацетата и эссенциале было более аффективным, чем их гаолироввшоег^иценение. По-видиксму, в условиях активации ПОД индометвцшкаГ, токоферола ¡ацетат ингибирует ПОЛ, поддерживает необходимый уровень ЦР-450, нормализует процессы дыхания и окислительного фосфорилирования, а, следовательно, энергообразования и "синтеза. В то же время, эссенциале, благодаря своему заместительному эффекту, восстанавливает повреяденные мембраны гепатоцитов. Наши теоретические размышления подтверждаются электронными аикрофотогракмаш, на кото рас ыорфофункциональкая картина гепатоцитов у крыс, получавших оба препарата, лучше, чей ври изолированном применении токоферола ацетата и эссенциале.

Наилучший результат был нами получен при лечении животных, пораженных индоиетацнном, сочетанием из трех препаратов: токоферола ацетата, эссенциале в кислоты аскорбиновой. Последней присуща способность стабилизировать" клеточные мембраны, снижая их проницаемость (Е.П.Гордтская, 1988). На целесообразность же соче-гаяного использования витамина £ и С указывает ИсСау р.в. (1985). Следствием обрата реакций свободкорадагйльного окисления токофе-хша ацетатом ( Дгатеу 1985; Зсгакик & ей. ", 1985) является образование токофероло-радикалов (токоферонов) (О.Н.Воскресенский, .987), которые, накашиваясь Ь больших количествах, могут способствовать интенсификации ГШ (р.А.Владаыиров, А.И.Арчаков, 1972). аскорбиновая кислота может вз агаго действовать с радикальными про из-

токоферола ацетата и регенерировать кг вз восстановиенна Ентааша Е (О.Н.Еоскресекскяй, 1£87; ИсСз? РааХе > 1985). Счевидзл, ескср&ыогая кислота усиливает свойство икамааа Е тор г^гулъ 1—1, как и его воздействие на другие баахшическже процес с^, т. 7сиу же одновременное использование зссеацаахе с целью вое стг^влення меьбран гепатецатов приводит к Еыражешам повлв-сдвигам состояния печени при шракевни ее вцдометацином.

ВЫВОДЫ

1. Противовоспалительные нестерсшдаке средства (яндсметацин, бутадиен и кислота ацетилсалициловая) в токсических дозах вызывает однотипное пораженке печени, пршшляпцееся псвьззенгЕМ активности амыотрансфзраз, щелочной фосфатазн, усилением перекхеного скисзекш: лкпвдов, укеньаенхеи уровня восстановленного гаутатионг протекавшее на фоне деструктивно измененных мембран гепатоцнтов, а тале угнетением желчеобразования. - : ■

2. Гепатотоксичность противовоспалительных нестероидныг средств проявляется в неодинаковой мере: она максимальна у индо-матацина и книналька у кислоты ацетилсалициловой.

3. Характер проявления гепатотропных свойств индоыетацина

определяется дозой: в средйегерапевгкчесхкх дозах он оказывает "

в

гесатопротекторное и антиэяендантное действие, а яредедьнодопу-стикых - повреждает печень и инициирует перекисное окисление ли-пкдов.

4. На генатотоксичности противовоспалительных-нестерондных средств отрезаются сезонные биоритга: осенью и эиыой она визе, весной и особенно летом - нете. ■

5. Антиоксиданты (токоферола ацетат, эссенциале, кислота аскорбиновая, растительные фдавоноиды) ограничивают проявление ге-патотоксических эффектов ШС. Гепатопротекторная активность этих

грепаратав возрвстает при сочетеяясм влглнти.

í

ершзшзйз ееккецйщи

Результаты проведенных исследования, а такте анализ данных [итераторе поэкяявт сделать схедугср!е практические рексыендгпгт::

1. Те* иг в патогенезе порагенкй печеня проттаоэсспалятегь-аи средствам вегцуи роль играет иятеаеяфякацкя ПЕС, целесосб-«зно дхя профешетагн в лечения их еспсльзовать препараты, círs-taxxpre нницжядавияад я гепетспротегтсрЕЛДи сгс^стваея, в чггг-юста у^'-у '"т, гссенщяие, тото^ерма aperar.

2. Дхя ^»»^»имиткш я лечения поражения гечжя ШС на*бсхее елесообрвзяо сочетгняое применение тскфероха ацетата с зссенгг-ле, а также совместное использование этих двух средств с югсла-ой асЕорбянсво!.

3. В связи с гея, что в осенне-весекяиЯ период обострения оллятеновых заболевания токсичность ШС возрастает, пелесообргз-о назначать эти средства под прикрытием антиохсидантоз.

Результаты жсследованиЯ гнедрены в лечебяуг» практику Терно-ольской городской больницы 3 1, Подволочисксй а Зезе^ицкой ЦРБ ернопольской области,.а такге использованы при чтенни лекционно-о курса я проведении практических занятий на хефедрг бгрнзхалэ-ви Тернопольеаого нудицищгцл'о института.

СШСШ РАБОТ, СШУЕШСЗАЕЕНХ ПО Т2Н

1. Вдмянги явгвторис яекарствекна¿средств нз пзреЕ-глзпе Еисление »»ддн пря порвежж sstses нзр^-ум. .т-я // Ргт— Г&тканстая конференция кагсдзх ученыг-ие^жп о гзяуЕЕьнзг гз— эосем гастроэнтерологии (Днепрствтргасх, ноябрь IS? r. ï — эспетровск, I9Q7. - С- 18-19.

2. Эффективность растительных флизонсидад препзратоз при

поражения печени противовоспалительными нестероидными средствами // П Республиканская конференция по медицинской ботанике. Тезисы докладов (Киев, . 1988 г.)- - Киев, 1967. - С. 361-362.

3. Роль перекисного окисления лишдов в патогенезе поражен и; печени нестероидньан "противовоспалительными средствами // У1 Все-союзный'-съезд фармакологов" "Фармакология я научно-технический прогресс". Тезисы докладов"'(Ташсент, 25-27 октября 1988 г.) -Ташкент, 1988Г- С."Т70-17Г.

'Роя1г"'вврвкйвюго "окисления лшшдов в <|арыакодинамике и токсичности нес-герогднкх протиЕОБОСпалительных средств // Биоан-тиоксидаит. Тезисы Ш.Всесоюзной конференции (Москва, май 19о9' г.") - Черноголовка, К8Э. - Т. П. - С. 254.

' "'■" 5'. Зункциональное состояние печени и перекисное окисление аииядов:пра порахегаиГёе. индоыетедином // Фармакология^ токсикология. - 1969. - »6. - С. 81-82. . !

6. 1ор1вняльна гепатотоксичнХсть чогарихлористого вуглеца та Гндокетацкну // ОСласна наукова кок^еренпХя "Нов1 ыетсда д1а- • гностики, л1кування I проф1лактики" СТернолЬль, 30 травня 1989 р.) - ?ерноп1ль, 1989. - С.. 62-63.