Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Функциональная морфология нейтрофильных гранулоцитов

-Г Ой

1 и РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

'Л

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИИ ИНСТИТУТ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи

МАЗИНГ Юрий Андреевич

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЯ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ

14.00.23 — гистология, цитология, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1993

С '

Работа выполнена в НИИ экспериментальной медицины Российской АМН в отделах патологической анатомии, общей патологии и патологической физиологии.

Директор института: академик Б. И. Ткаченко Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Б. М. Ариэль, доктор биологических наук А. Г. Булычев, доктор биологических наук А. И. Неворотнн

Ведущее учреждение: Санкт-Петербургский государственный университет.

Защита состоится « » . . . 1993 г. в . . часов

на заседании специализированного совета Д.001.23.03. при НИИ экспериментальной медицины РАМН (197376, С.-Петербург, ул. акад. Павлова, 12).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ экспериментальной медицины РАМН.

у

Автореферат диссертации разослан « ...» . . . 1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

£. С. Петрова

- г -

обнля характеристика работы. актуальность проблени.

Нач.шая с основополагагашс работ И. И. Мечникова, к пентраль-ному звену песпсциФической зашиты организма относят осуществление Фагоцитарной фупкии» микро- и накроФагами 1Адо А. Л.. 1961; Пигаревский В. Е.. 1970; • Войно-Ясенсшсий Н. В. .1981; Наянский А.И.. 1990). Всегда первыми в очаге повреждения появляются нейг-рофилыше гранулоциты. которые активно стинулируют привлечение других клеток (ионопитов. лимфоцитов. эоэиноФилов. базоФилов). Однако только последнее десятилетие ознаменовалось бурным развитием исследований Фагоцитов как одного из эФФекторных звеньев иммунитета. Сформировались представления, рассматривающие ноно-I! полинуклеарпые клетки не только как улаляюаие чужеродный материал. но и в качестве диффузной эндокринной систены. в том числе стресс-лимитируюией (Корнева Е. А.. Ихинек Э. К., 19йь; Наянский А.Н., Наянский Д. Н.. ¡9ьл Яковлев г. н. и др.. 1990).

НейтроФилы - удивительно быстро обповлястчяся. быстро реа-гируюшая на любые изменения в организме система клеток. Идет чрезвычайно интенсивный процесс образования нейтрофильных грапу-лопитов (ИГ) - у человека за сутки на 1 кг веса тела возникает около 1 нлрд клеток. При различных Физиологических и натолсги-ческия процессах резко меняются количество НГ. их фун"Ционалыше свойства, иорфологические и биохимические характеристики, они содержат большое количество биологически активных вешеств. которые в течение секунд попадают в кровоток. Поэтому изучение особенностей функционирования этой одной из самых мобильных систем организма при различных Физиологических и патологических процессах. становления ее в онтогенезе, становится особенно актуальным для современных мелнко-биологических исследований.

Новын направлением в развитии исследования о Фагоцитах стало изучение функциональной морфологии и биохимии антимикробных катиошшх белков нептрофилышх гранулошггов шигаревский В. Е.. 1963. 1907.1990; Кокряков В. II.. 198d). Антимикробные катиошше белки (ABB) занимают одно из ведущих мест в осяяествлении и регуляции неспецифических зашитних реакций организма, к пин относятся белки, нолекулм которых обладают суммарный полохптелышм зарядом и выгааешшм антимикробным действием. Кроне того они способны играть роль медиатора воспаления, фактора нроштаемости.

стимулятора метаболический процессов и слухить источником песпе-иифических опсопинор при Фагоцитозе (Ашмарин И. П. и др. , 1977; Ннгаревский D. Е.. »970, 1963: Klobanoff S. J.. Clar-K R. X. ■ 1970: Gabay J. E. et al. 1969: Lehrer R. I., nanz T.. 1990; SPlt2naael J.К., 19°0). внесте с тен широко известна способность нейтро-Филыплх глянулопитов при ряде заболеваний повреждать ткани организма хозяина. Патогенетические механизмы в этик случаях оказываются достаточно разнообразными и среди пих далеко не последнее место принадлежит катиошгам белкам (Henson P.M., Johnston R. В., 1907: Weiss s. J., 1909: ZeoK-Karp G. et al., 1990).

Уяе в начале века обоснована необходимость опенки состава клеточнчх элементов крови для клипических делей, сохранившая свое значение до настоящего времени. Никробные зндо- и экзоток-си|ш, бактерения и септицемия, стгессор:ше реакшш. любые шиш интоксикаций способ.ш нарушить мнелопоэз и принести к выбросу из костного мозга п кровь функционально неполноценных ИГ. Введение В. Внллиигон (V. Scliil Une) и медицинскую практику предложенного H. I). Усковии (1090) метода лейкограмм привело в свое время к кардинальный изменениям о практической деятельности лабораторий всего мира. Сегодня без метода лейкограмм не обходится пи одно нсяишшское или биологическое исследование, связанное с изучением клеток крови. Однако как диагностическая, так и особенно прогностическая значимость клинического анализа кропи за последние десятилетия супественно измешшась. Принципиальные открытия в иннуполопш ликтуот необходимость привести анализ крови в соответствие с современным уровнен зиамш. Делаются попытки разработать расширенные варианта дейкогранны начала века - иммуног-рашш (Лебедев К. л.. Поняюша Н. Л ,1990). Такой подход представляется опрагдашшм и перспективных» но полноценная ю^унограмма пе нохет сушествовать без включения в нее детальных методов оценки функциональной активности Фагоцитов, что и является предметом настояиего исследования.

ИКЛЬ И ЗАДАЧИ НССЛЕДОВАЗГНЯ.

Целью настоящей работы стало изучение нейтроФильных грану-лошггое. разработка нетодов и способов их морфологического анализа на основе выявления антимикробных клтиоикы? белков как критерия опеики уровня неспедиФической резистентности организна человека и JMBOTEUX. предполагалось решить след mitte задачи:

- ч -

1. Шработать методический подход и практические рекомендации для опепки функциональной активности пей-грофилышх граьуло-Ш1ТОВ на основе цитохимического анализа антимикробных катн-онлих белков.

2. Определить эффективность лнзосонально-катионного теста в качестве критерия опенки уровни неслепиФической резистентности организна при ралличных видах патологии.

3. Изучить особенности становления антимикробной функции нейт-рофильных граиулопитов в раннем постнатальном развитии млекопитающих.

4. Исследовать реакции нейтроФилышх граиулопитов после воздействии на организм экстремальных Факторов виешпей среды

5. Показать роль нейтроФильпых гранулонитов в Осуществлении за шит1шк функций накроФагов.

НАУЧНАЯ H0DH3HA И ПРАКТИЧЕСКАЯ ПЫШОСТЬ ДИССЕРТАЦИИ.

На основании комплексного экспериментального И клипико-ла-бораторного исследования, выполненного при использовании морфологических, иммунологических и микробиологических методов, обосновано представление об антиникроб1Гых катионных белках нейтроФилышх граиулопитов как одном из универсальных механизмов осуществления защитных реакций организма. Обнаруженный у новороа-дешшх млекопитающих транзиторный дефицит антимикробных белкоп нейтрофильных гганулопитов мояит слуди-м, одной из ведущих при ии снижения их резистентности к инфекпии.

В ходе сравнительного цитохимического анализа нейтроФилышх граиулоцитов при ряде инфекционных заболеваний и стрессорных реакций установлены закономерности изменения антимикробного потс-ff пиала нейтроФилышх гганулопитов, кото rue открывают новие перспективы для контроля за адаптивными возможностями человека. Сги мулиргаиее действие антимикробных катионных белков нейтроФилышх гранулоаитов на макрофаги в рамках концепции о резорбтитгой плеточной резистентности позволяют сформулировать принципиально новый подкол в разработке препаратов, способных купировать инФек-пиошше процессы, вызываемые внутриклеточными паразитами.

Установлено яплгние аномального гранулогепеэа при радиоактивном поражении организна,которое является основой для попого способа вняплешн случаев контакта с радиоактивными веществами, особенно при игг>г>л1.гшх долах воздействия. Рапрлботка методов

опенки функциональной активности нейтроФилов является приоритет ныи исследованием, позволивши созлать комплекс способов (защищенных Ч ангорскими свидетельствами} оценки уровля сопротивляемости организма и осуществить развитиг нового раздела лабораторной /и агностики - клинической цитохимии антимикробных катиопньх Оелков. Сирокля клиническая апробация и внедрение в недииинску» практику лизосональпо-катиоиного теста потволиют качестпепно изменить тактику лечебно-профилактических мероприятий.

лгп'опликя РЛСОТ».

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на 7 и 8 Всесоюзных съездах патологоанатомов (1963. 1900); ц всссоюэ.чон съезде патофизиологов (1959); 1 Всесоюзной иммунологическом съезде (1909): 3 национальной коштессе по болезням органов дыхания (1992!; 9th and 10th Internatlonl Бутсрэз. of the РгоЫешз wf Listeriosis (1986.1900): 3 и ч всесоюзных конференциях по патологии клетки (1962,1907): 3 Всесоюзном симпозиуме "Структура и функция лизосом" (1966); заседаниях Лен. научного общества патологоанатомов (1979. 1965. 1986. 1967. 1969. 1990). Лен. общества иммунологов (1991).

пуп/шлпии.

Материалы дисссмтапии изложены в 55 публикациях, в том числе; 17 статей в научных журналах. 4 авторских свидетельства.

структура диссертации.

Робота состоит из пиедения. обзора литературы, изложения материалов и методов, результатов исследования и их обсуждения, заключении, выполов и списка литературы. Во впедении обоснована актуальность работы, сформулированы ноль и задачи исследования, отражены научная новизна, теоретическая и практическая значимость получешплс результатов. В первых трех раздела» дан обзор современных представлений о строении и функциональной актинности нейтрофилькых гранулопитов, роли антимикробных белкой н осуществлении защитных реакций организма, иоелглуюаше 5 разделов посвитены результатам собственных исследований, при обсуждении которых представлен сравнительный анализ полученных результатов и литературных данных, показана 1юль AKR в осушествлении Фагоцитами защитных реакций, обоснована попнохность и необходимость

использования разработанного методического подхода в оценке функциональной активное ги нейтроФилов. Диссертация изложена на 216 страницах, иллюстрирована таблицами и 19 рисунками, библиография содержит 526 источников.

На запиту выносятся следующие положения:

Антимикробные катионные белки отражают состояние меАтро-Филышх гранулопитов. а их цитохимическая опенка может служить одним из показателей уровня цеспециФической резистентности организма.

В раннем . постнатальнон развитии млекопитающих существует транзиторный дефицит антимикробных катионных белков в нейтро-Филышх гранулош1тах.

Развитие стресс-реакции приводит к повышению уровня антимикробных катионных белков за счет увеличения их содержания в НПО- отрицательных гранулах пейтрсФилов крови.

Радиоактивное воздействие на организм обуславливает появление в нейтрофилах периферической креви аномальных гранул.

Лнзосомалько катиопный тест является надежным методом выявления антимикробных катиошшх белкоз. позволяющим охарактеризовать сопротивляемость организма человека и животных. одним из наиболее эффективных методов оцешеи функциональной активности нейтрофилышн грянуло пито в.

ОБЪЕКТ H НЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В настояпей работе обследовано 515 детей и 222 взрослых, жителей и пациентов клиник г. Санкт-Петербурга с различными Формами патологии и клинически здоровые люди, не болевшие в течете последнего несяпа: 105 мужчин и '12 жекшины вне берененности. 10 берененных леншш и 20 родильниц, 145 детей обоего пола различного возраста, а также 84 мужчины и женщины, имевшие контакт с радиоактивными вешествани.

забор крови производился всегда в утреннее время до еды из пальяа. у новорояденнык детей из мочкч уха, используя одноразовые стерильные скарификаторы. При проведении соответствуют« клинических проаедур использовали лабор крови из вены, чтобы не прибегать к яополнителышн воздействиям па больных.

Эксперименты Лнполненн на слипая,исключение составили опыты,

связанные с определением функциональной активности НГ по время ппстнагального развития, когда использовались оба пола животных. Всего в огытах было изучено 76 беспородных белых крыс, 63 крысы лилии "Август", 20 крыс л;шии "Wlstar" весои 120-100 г. 70 морских свинок кассой 250-300 г. 25 кроликов породы "Пигааилла" кассой 2,5-3,0 кг. кроме того использовано потомство 10 беспородный (47 крысят) и 15 линии "Wlstar" (70 крысят) беременных санок крыс, 17 санок кролика псроды "Шшпилла" (135 крольчат), родив-иикся в пашен виварии. Обследованы также 34 клинически здоровых теленка и 10 коров.

Гивотные были получены из питомника РАНИ "Рапполово" и использованы а опытах после 1-2 недельного карантина. Уход и все процедуры осуществлялись в соответствии с норнами и правилами охранения с лабораторными животными.

Кровь для анализа забирали в утренние часы у кроликов и морских свинок из вен уха. у крыс - из хвостовой вены. Костный нозг для анализа забирали после умерщвления животных из трубчатых костей задних конечностей.

Экспериментальный листерноз вызывали в/в введением микроорганизмов в дозе ю'/кг веса тела кролика (опыты проведены в ме-пиачискон университете г. Печ (Венгрия) совместно с проф. В. Рамо-вичен (В. Ralovlch). всего использовапо 32 животных обоего пола.

ЛИЗОСОНА/1ЫЮ-КАТИОНИЦИ ТЕСТ. (Пигаревсккй В. Е. . На3инг Ю. А. . 1987) Спиртовой раствор красителя прочного зеленого (color Indes 42053) готовили ua нетаноловом буфере трис-соляпая кислота с конечной величиной pH в. 1 - д. 2. Для выявления клеточных ядер и никребов необходима локраска препаратов ядершм красителем. Наи-дучиие результаты получены нами при использования азуров.которые отличается друг от друга главным образом по содержанию в ник аэура А, окраска которым дает безупречные результаты (0.25* водный раствор), При применении 1х водных растворов азуров хороший результат достигается не во всех случаях: ряд партий этих красителей. выпушенных как отечественными, так и зарубежными Фирмами, обладают кислой реакцией и несовместимы с окраской препаратов прочным зеленым. Рекомендуется pH водного раствора ядерное кра сители в случае необходимости доводить трис до 7,0 - 7.1.

Для исследований пригодны только тонкие и равпонеряые мазки. приготовленные на чистых ттателыю обезжиренных стеклах.

Правильно прнготовяешгш! назок крови розового цвета, просвечивает. крап его !шеет характерные нитчатое разводы и выступи. Толь ко в таких назках клетки полностью распластаны на поверхности стекла, хороио различима их цитоплазма, Препараты-отпечатки не должны содержать «убыточного количества кровн. должай бить топкими и иметь бледно-розовый или серий пвет. ' Окраску проводили в стеклянной посуде, прикрытой крышкой для предотвращения испарения метанола и изменения свойств спиртового раствора красителя.

ШЯП/1ЕНИЕ ННЕДОПЕРОКСЯЛАЗН (И. Г. Дафрана и соавт.. 1979) Активность миелопероксидазы (НПО) в нейтроФилах оценивали используя в качестве окисляемого субстрата орто-днанизидин.

АКТИВНОСТЬ ЭИАОГЕННОП ПЕРИКПСЛ ВОДОРОДА (роговин В. В. и др. . 1977) Фиксированные в снеси абсолютный спирт - Формалин мазки крови шшубировалн с раствором диаминобензшйша 60 минут при 35" С. Ядра до крал) тали азуром.

UCT-TECT (Gif ford R. II. .llalawista S. E. . 1970)

Показатели НСТ-теста определяли в нашей модификации, К монослою Фагоцитов добавляли опсопиэировашшй комплементом зинозан и О, 02Z раствор шггросинего тетразолия. продолжительность пробы 30 минут при 37еС (30°С у кроликов). Высушенные препараты Фиксировали ацетоном и окрашивали саФрашпюн.

ФАГОИИТОЗ

Фагошггарну» активность клеток определяли используя в качестве тест-микроба суточную культуру StaPhilococcus epidermldis, штамм 9198. Иикробило культуру опсонизировали 10Z аутологичной сывороткой и разводили стерилышм Физиологическим раствором из расчета 10 микробных клеток па одш! фагоцит, продолжительность пробы 1 час при 37°С (кролики 38®С). Фагоциты отмывали от внеклеточло расположенных микробных клеток, готовили мазки и окрашивали прочным зеленый - азурон. иэ препаратах определяли показатели Фагоцитарной активности (ФЧ и ФИ) и завершенности Фагоцитоза (КБА2).

ЛЕЖОГРАННА

Для определения клеточного состава мазки крови или препараты-отпечатки окрашивали по Най-Ргьмвальлу или красителем Wit' Kind

(WittPKind D. .Eretschmer V., 1987). Обпее v тело лейкоцитов определяли в камере Горяевл.

очаг асептического госпллгаия.

Асептическое воспаление вызывали нн/трибгчешиниым введением 0. 3 х крахмала на Физиологическом растворе. Бреши/» полость промывали средой 199 с добавлением гепарина до конечной концентрации 1 ИЕ/ нл и полученные клетки центрифугировали в течение 15 нинут при 200-250 с, к осадку добавляли равные ооьеиы среды Р!'Н1 ¡МО с добавлением глу танина и рассевдли по чапкзи Петри с концентрацией 1x10е кл/ил. Помешенные в чашки Петри макроФагк иикубпювлли 1 час в среде углекислого газа (5х> при 37*с, после чего трехкратным промыванием культурллыюй средой удаляли не прикрепившиеся клетки. Полученный монослой использовали в эксперименте.

диагностичг-гкнл очаг поспаленйя.

Для определения показателей секреторной активности ПГ и изучения динамики воспалительной реакции использовали модифицированную пани методику "кожного окна" но Ребуку (Пигаревскяй В. Е. .Мазинг Ю. А.. 19Я0). В стерильных условиях ча коже передней поверхности предплечья скальпелем наносили два никроскариФиката (с целью удаления рогового слоя кожи). НикроскариФикаты закрывали фрагментами предметных стекол (25x35 м) с шипованными краями. Через '1 и 24 часа с текла снижали, подсушивала на воздухе и окрашивали их внесте с мазками крови тех яе больных прочным зеленый -13УРОМ (/¡КТ). В препаратах определяли процентное соотношении 11Г и накроФагов, а также пх содержать АКБ в нейтрофилах.

оклучегик.

Облучение хинотиых производилось от внешнего источника в дозах от о, г до 6,4 Гр и при ингаляции радионуклида в специальной ка-нере в дозе С, 05-0, 25 Гр. В качестве источника рентгеновского излучения использован аппарат РУН-17 (напряжение на трубке - 200 кВ, сила тока -15 кА, иоишость лозы 0,5 Гр/мим) . Облучение крови УФ-лучани с длиной волны 25'1 ин производили и аппарате "Изольда" стандартной терапевтической лозой, рекомендованной инструкцией для лечения рзз/тчгшх заболгваний.

- 10 -

электромокикроскопнческпе йсследойашя.

Материал Фиксировали в 2. 5* растворе глютаральдегида в течение 1,5 часов при ч*С. После промывки в 0.111 кокадилатнон буфере исследуемые образоы помешали в IX раствор четыгехокиси осиия на 1-1,5 часа при комнатной температуре. Фиксаторы ~~ го-

товили па О. 2Н кокадилатнон буфере (pH =7.3.-7,4). Срезы получали па ультраникротоме Ш? Швеция), контрастировали нитратом сшпша и просматривали с помошью микроскопа зив-юол (СССР).

гистологические: исследования.

Кусочки органов Фиксировали в цейтральнон Фориалипе по Лилли и заливали в парафин. Приготовлешше после обычной проводки парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином, азур-эозином, по Хочкиссу, Лейшнану-Ронановскону и Грану. Часть материала запорашивалась d жшисои азоте и использовалась для приготовления кри-сстатииг срезов. Гистологические срезы изготовлены на санном иикротоне Reichert (Германия) или замораживающем иикротоне Crlocat (США). Анализ препаратов и их Фотодокументацня произведет с помошью светооптического микроскопа Axiotnat (Гернаиия) и лш1шесдептцого микроскопа ЛК.ЧАН И2 (Россия).

■ Все результата исследований обработали с использованием параметрической <t-критерий стьюдента) и непаранетрической (критерий Уилкипсопа-Ианиа-Уитни) статистики. В работе использованы методы корреляционного и кластерного анализа, расчеты произведены с использованием програнны электронных таблиц Quattro иа компьютере типа IEM-P.C.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

1 1. ВЫЯВЛЕНИЕ Л1ГПШИКР0НШХ КАТПОШШ БЕЛКОВ (7Ж(Г). 1.1 лизосональпо-катиопный тест.

Возможно определение трех показателей: суинарпое содержание АКБ в Iслетке, аномальные гранулы (ЛГ> и судьба бактерий в очаге воспалений, все они ногут быть определены на одном и тон же препарате. При опенке результатов цитохимического выявления АКБ наиболее эффективно полуколичественпое определение содержания ка-тионпых белков п5*тем расчета питохиничсского коэффициента (ПК).

Применяемое иногда определение процента клеток, давших пологи тельную реакцию па катиошше белки, снижает эффективность оценки. Установлено, что при падении уровня внутриклеточного содержания катиошшх белкой, доля клеток с отрицательной реакцией на них может не меняться, давая ложно положителыгнй результат. Получении t нами результата при оеследовании периферической кропи у людей различного возраста (таблица 1) показали.что максимальное содержание катаониых белкоо в НГ крови обнаруживае- :я у детей до года и в во:>расте 1-3 лот, минимальное - у поворошенных детей. Аномальные гранул». Сочетание прочного зеленого с азуром обеспечивает выявление в пейтроФильцыг грапулонитах крови человек АГ. лаюоик отрицательную реакцию па катиошше белки и окрапиваюшихся в синий цвет азуром. Определяют процентную дол» нейтрофнлов с АГ (AM) при подсчете 100 клеток в казке крови и. одновременно, среднее число гранул па клетку (АН). В периферической крови 76 клинически здоровых людей только 0,0 J0.17 '/■ НГ содержали АГ. их число составило 0.4 !0.00.

ТАВЛКНЛ 1. Показатели лизосомалысо-катионного теста у практически здоровых людей (ЦК. X t га).

Возрастная Число ПК группа обследованных Доверительный интервал (Р<0.001)

Новорожденные

(1-5 дней) 30 1.24 !0, 022 I. 10 - 1,30

1 лень 23 «. 15 »0. 031 1. 00 - 1,22

5 дней 23 1. 24 Ю. 029 1. 17 - 1.31

1-12 несяпев 22 1. 69 to. 030 1. 77 - 2.01

1 - 3 года за 1.96 10. 032 !. 05 - 2.07

4-12 лет 38 1.74 ?0. 019 1. 67 - 1, в!

20-30 лет, мужчины (6 1.58 10, 013 I. 53 - 1.63

жешшиы 22 1.58 »0. 032 1. 46 1.70

__________.....___...___ _ _ ----- ------ ---------- — • -------------------

Сиенка апттопжробпой активпости катиоппых белков. В препаратах-отпечатках с попер.чностн pan и воспалительных очагов определяют жизнеспособные (окрашиваются в синий цвет) н мертвые (окрашиваются в эелепый цвет) ншсробы. Определив число жизнеспособных и мертвых, расположенных внеклеточно и Фагоцитированных микробов, рассчитывают коэффициент внеклеточной аптимикробноп активпости катионных белков (КВД1) и внутриклеточной антимикробной шстнв-пости (КЕЛ2). Последпий. в сущности. является показателем завершенности Фагоцитоза бактерий НГ в очаге воспаления. Коэффициент антимикробной активности определяют по Формуле:

а

КБЛ t .....— х 100 г

а + б

где а - рырахенпое в условных или абсолюпшх единицах число бактерий, окрасившихся в эелепый цвет; б - вырахепное в тех хе еяи-нллах число бактерий, окрасивптигся в сшшй цвет. Подсчеты проводятся па 10 полей зрения при 900-1000 кратной увеличении микроскопа. обязательно использование хелтого или орапяевого светофильтра. Параллельно возможно определение показателей активности (ФЧ) и интенсивности Фагоцитоза (ФИ).

Обсуздая вопрос о специфичности цитохимической реакшш. ле-яашей в основе /¡XT. следует отметить, что в диапазоне рн от о, 1 до 0,2 катиошше белки оказываются единственными биополимерами, способными реагировать с аииошшни красителяш!, к которым относится прочный зеленый (Вевгдипская Е. А. и др.. 1976). В модель-пых системах било установлено, что только в строго контролируемых условиях мохво добиться стехиометричвостн связывапия этого красителя, причем интенсивность реакшш возрастала при обьедине-ппп нескольких белков, папрннер гистона и лизоцина (Cohn П. S.. 1973). Позднее удалось показать строгую стехнонетричпость окра-шгоалия гастоноа прочней зеленым при рн о, 1 (Рокогпт Е. et ai.. 1977). весь опыт палей работы свидетельствует об отсутствии нес-пепяФической окраски структур, не содержания катионпые белки. Сопоставление полукояич^ственпого я цитоФотонетрического способов оцепкп шггохшшческпх реакций нг крови дает почти полное совпадение результатов (лешсяйВ.в,. 1979; Козппен Г.и. и др., 1986). коэффштепт варпадип воспроизводимости в серии при дито-Фотонетрическоя определешга интенсивности окраски АКБ составил 5.4 z (яяенко Л. В.' и др. , 1909).

1.2 нетодшса окраски алтинюсробпых катиошшх белков па гистологических срезах.

Наилучшие результаты сохранения АКБ получены при использовании в качестве Фиксатора 2. 5 х раствора гдггарового альдегида в 0,1 н фосфатном буфере ЗСрепсепа (рН 7,4). продолжительность Фиксации кусочка обьеком г-3 ни при С 10-12 часов с максимально полным затек удаленней глутаральдегида. Лучше всего использовать 4.5* раствор сахарозы в о, 1 н фосфатном бу4«ре (рн т.4), продолжительность промызки пе менее 3 часов. ДепараФиннровашше срезы толшинсй не более 5 нки после промывания в дистиллированной воде погружаются па 20 иипут в раствор прочного зеленого, ополаскиваются и переносятся в водный раствор азура па 1-2 тшу-ты. Окрашенные срезы заключаются в канадский бальзам или полис-тирол. Гранулы нейтрофилов и эозиноФнлов. гранулы клеток Паллета. бактерии, подвергшиеся действию АКБ, окрашшаются в оттенки зеленого дветг различной интенсивности. Ядра клеток и хизпеспо-собные бактерии приобретают оттенки синего и Фиолетового цвета. Выявление катиопных белков в полутонких срезах. Псследуекый материал фиксируют в 2. растворе глутаральдегида в о. 1 и какоди-яатнои буфере (рН 7.3). доФиксируют в I* растворе чстырехокиси осиия. затеи заливают в аралднт. На прикрепленные к ареднетноиу стеклу полутонкие срезы наносят гаствор прочного зеленого.стекла нагревают до 60-7(3*с а течение 6-8 секунд и ©хлахдают при кок-натлой температуре 2-3 кинута, процедуру повторяют 5-6 раз. Препарате докрашивэют раствором азура. высушивают и рассматривают о световом микроскопе.

Имиунофлуориспентное выявление АКБ. Для заявления НПО н яакто-Фергина были использованы иннунше сыворотки, приготовленные совместно с в. н. Кокрякошм. Фиксированный в глутаровон альдегиде и залитый в нараФил материал использовали для последукшей обработки по непрямому методу Еупса. После »дакубашш с иниунпой сывороткой во влажной камере в течение 40 нинут при ЗТ°С срезы отмывали в трех порциях физиологического раствора иа фосфатном буфере (рН 7.2-7.4) н высушивали. На парафиновых срезах из биоптатов слизистой оболочки лелудка и двенадцатиперстной кишки человека НПО и лактоФеррин выявлялись с высокой интенсивностью свечения а НГ и глобуляР1Шх лейкоцитах. идентичные результата были получены в параллельно приготовленных криостатных срезах.

- 11 -

1. 3 Совместное выявление катиотшх белков и НПО.

Для определения активности ниелопероксилазы используется орто-днаниэидин,а АКБ - прочный зеленый. Иазки крови и препара-та-отпечатки Фиксируют в спиртовом растворе Формалина, время Фиксации пе более 10-15 сек. Приготовление растворов красителей пе отличается от описашюго в "Материалах и методах". Препараты окрашивают па НПО, промывают 1-2 минуты в проточной воде и поне-шают па 2-3 нинуты я буфер Гоморн (трис-ИС1) с рн 8,1-0,2 для восстановления способности АКБ реагировать с раствором прочного зеленого. Мазок помешают в раствор прочного зеленого на 20 минут. После окраски нредметное стекло споласкивают водой и высушивают. Не содержащие НПО гранулы окрашиваются прочным зеленым, па Фопе коричневых и зеленых гранул хорошо контурнруются пеокра-пешше клеточные ядра. Предложенная методика позволяет выявлять два типа азуроФильпых гранул НГ человека и ряда лабораторных хи-ьотных.подтверждает даппые других авторов о неоднородности популяции грапул. Установленные различия могут отображать не рас ¡срытые закономерности в дифференпировке клеток миелоидного ростка.

1.1. Совместное выявление катиопных белков и дипидов.

В 40 ил 0.0511 трнс-ПС! буфера (рН 3,15) растворяют 0,1 г прочпого зелепого. а в бо нл изопропилоногоспирта - о,25 г жирового красного о, растворы сливают и доводят рн до 0.15. Криостат-пые срезы, назки 1срови или препараты-отпечатки окрашивают в растворе прочпого зелепого - жирового красного о в течение 30 шшп\ затем споласкивают в двух сненах дистиллированной воды. Ядра докрашивают азуром или генатоксшшнон в течение 1-2 шшут. При использовании предлагаеного способа структуры, содержащие АКБ, окрапиваются в зеленый пвет, а лншиш - в ярко-краспнй. Ядра клеток теипо-снпего цвета па фопе бледно-голубой шггоплазиы. Новая способ цитохимического анализа бропхнапышх с!швов позволил разделить макрофага па дво субпопуляшш, параллельно определяя обпее содерганпе в ши АКБ. При репндивиругаен бронхите г детей иного ниже уровепь АКБ альвеолярных макрофагах и гг из бронхиального сныва, непыге число накрофагов п ПГ. содержащих мелкие лтшдные гранулы, по пеизнетшн остается относительное количество накрофагов с крупными лппндныни грапулани.

г. АНТИМИКРОБНЫЕ КАТНОННЫЕ БЕЛКИ НЕИТРОФИЛЬШХ ГРАНУ/ЮЦПТОВ В РЛНШ21 ПОСТНАТАЛЬНОН РАЗВИТИИ.

Обследование 23 клинически здоровых новорожденных детей, родившихся от практически здоровых матерей после Физиологически протекавшей берененности. показало значительный дефицит АКБ в НГ крови (таблица 2). В первый день жизни ИГ новорожденных детей содержат только 64 к уровня АКБ и только половину НПО. ситуация практически не меняется на 5 депь после рождения ребенка. Но к концу первого месяца жизни показатели ЛКТ резко возрастают, столь же быстро растет активность НПО.

ТАБЛИЦА 2. Уровень антинякробгшх катиопиых белков НГ крови в раннем постнатальнон развитии детей (ЦК. X i ш).

Показатели 1 день 5 дней 5 лет

Л8Т 1. 15 iO. 031 1. 24 Ю. 029 1.79 Ю. 021

НПО 0. 93 to. 027 0. 99 Ю. 026 1. вз 10. 026

У новорожденных кроликов в первые .7 дней жизни НПО практически отсутствует в гранулодитах. отмечается также некоторый дефицит АКБ. который сохраняется на 14 сутки после рождения (Р<0.05). Показатели НПО в возрасте 14 и 21 суток возрастают, но составляют только половину от уровня половозрелых животнш. Окончательно потенциал НПО-систекы формируется у кроликов к месячному возрасту. Ны не обнаружили различий нехду новорожденными а взрослыми животными в фагоцитарной активности НГ перитонеаль-пого экссудата по отношению к микробным клеткам St. epldenaldls. по показатели завершенности Фагоцитоза 7-дневных кроликов оказались в 2,5 раза ниже. Лишь в возрасте 21 дня они начинают увеличиваться (Р<0.05) н достигают уровня половозрелых животных па 56 день после рождения.

Аналогичный наблюдавшемуся у кроликов низкий уровень АКБ нейтроФилов крови мы обнаружили г телят. Некоторое снижение показателей /ШТ сохраняется в возрасте 1-2 месяцев (Р<0.025). ¿ дефицит НПО выявляется даже у 3-4 месячных телят <Р<0,005).

При изучении беспородных белых крыс оказалось, что НГ новорожденных животных содержат только половину АКБ, наблюдается

- «б -

практически следовая активность НПО и эндогенной перекиси водорода. Трапэиторный дефицит ЛЕВ сохраняется у крысят в течение первого несяда жизни как по показателям АКТ, так и активности 1ШО. Содержание АКБ в нейтроФилах крови у 10-15 дневных животных сше уровня новорожденных (Р<0.01). по ниже такового у взрослых крлс (Р<0. 01H5J. В первые 10 дней жизни сохраняется практически полное отсутствие реакции на НПО у большинства клеток. На 20 день активность ее резко возрастает и к 45 дню почти достигает уровня половозрелых животных, для крыс VIstar (таблица 3) в ран-пен постнатальном развитии обнаружены те же закономерности становления системы IIP крови и костного мозга - содержание АКБ и НПО шшинально з нейтроФилах новорожденных и максимально у взрослых животных. Сопоставлении содержания АКБ в клетках крови п костного мозга показывает, что показатели ЛКТ и НПО костномозговых пейтроФилов лишь с месячного возраста превышают таковые НГ /срови. V взрослых содержание АКБ НГ костного мозга всегда су-пественно больше уровня клеток периферической крови.

Таким образом у новорожденных нлекошгтаюших - детей, телят, кроликов, крыс о течепие первого месяца жизни существует транзи-торный дефицит АКБ в ИГ периферической крови, в этот период жизни покидахпие костпып мозг НГ сохраняют практически весь обьен АКБ. Отсутствовало снижение Фагоцитарной активности НГ у пово-,рожденных кроликов, однако Фагоцитоз носил незавершенный характер. Активность 1ШО пейтроФилов практически отсутствует у новорожденных кроликов, на порядок ниже у новорожденных крысят, у новорожденных детей и телят составляет половину от уровня взрослых. Проведенное параллельно биохимическое определение содержания катиогпшх белков полностью подтвердили полученные нами цитохимические данные (Пигаревскнй В. Е. и др.. 1909).

Переходя из костного мозга в кровяное русло НГ за счет дег-ранулятш специфических грапул теряют часть своих АКБ. Биологический смысл данного явления поспт двоякий характер - с одной стороны поддерживается определенный уровень АКБ в сыворотке крови, с другой - Формируется репепторный аппарат НГ.который у клеток костного мозга находится в латентном состоянии па мембране специфических гранул (Bainton D. F4. . 1980). На примере постнаталь-пого развития крыс ножно убедиться, что различие по содержанию АКБ нему клетками крови и костного мозга возникает лить в конпе первого месяца яйэни (таблица 3). Отсутствие секреции АКБ может

свидетельствовать о меньшей числе репепторов на поверхности нейиюфилоп. следствием чего и может быть неспособность усиления ♦агоиитарной активности при повышении микробной нагрузки.

Таблица 3. Уровень антимикробных катионных белков нейтро-♦ильнык грапулоцитоо в раннем постнатальнон развитии крыс иха1аг (ПК. х 1 и; ЛЕТ - показатели лизосонально-катиопного теста. НПО - показатели активности миелоперокс^азы)

Возраст -од-во КРОВЬ коспши иозг

животных животных ЛЕТ НПО лкт НПО

12-10 10 0. 75 0. 32 0.70 0. 20

часоп !0. 002 10.010 10.061 Ю. 023

3 Ш1Я 5 0. 0. 34 0.05 0. 32

10. 073 Ю. 013 10. 034 10. 025

7 дней 5 о. оа 0. 45 0.02 0. 42

10. 076 Ю. 016 10. 030 10. 027

14 /шей 10 0. 90 0. 71 1.05 0. 69

10. 073 10.017 1С. 041 10. 035

20 иней 10 1.04 1.43 1. 10 1.29

10. 039 «0. 058 10. 031 10. 077

30 дней 7 1. 02 1.70 1. 25 2.01

10. 028 10. 047 10.041 10. 039

дней 7 1. 20 2. СО 1.39 2. 30

10. 031 10. 025 10. 030 10. 044

Полово- 20 1.27 2. 16 1. 54 2. 52

зрелые 10.019 Ю. 020 10.023 10. 031

3. АЛТИКНКРОИШЕ КАТИОШШЕ БЕЛКИ НЕИТРОФН/1ЫШХ ГРАИУЛОНИТОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ФАКТОРОВ ФИЗИЧЕСКОЙ И ХИНИЧЕСКОЙ ПРИРОДЫ.

3. 1 Эмопионально-болевой стресс.

Сразу после прекращения стт*ессориог\> воздействия уровень АКБ в клетках костного коэга существенно снижен (Р<0.01) по сравнении с контрольными животными (таблица 4). Через в часов отмечается его относительное увеличение, но не постигавшее исходных показателей (Р<о,оч>. На сроке 12 часов содержа пне А КГ, в

ТАБЛИЦА Ч. Показатели яизосомально-катиошюго теста в динамике развития эмоционально-болевого стресса у к рис (ПК; X ! т).

Срок после 'й:сяо Периферичес- Костный

воздействия животных кая хсровь мозг

Коптролышс

хивотпые 7 0. 90 10. 0-17 0. 95 10. 032

сразу после

стресса 0 0. 00 го. 015 0. 71 10. 025

6 часов 9 1. 03 ю. 034 0. 82 10. 02%

12 часов 3 1. 08 10. ого 0. 92 10. 019

24 часа 7 1.03 10. 090 1. 02 10. 022

40 часов 0 0. 03 10. 115 0. 05 10. 024

90 часов 7 0. 83 ю. 041 0. 70 10. 015

пейтроФлпах костного нозга восстававливалось и до ловца перши суток находилось в пределах значений, установленных для интагспшз зсркс. однако спустя '13 часов ни вновь обнаружили снижение их уровня (Р<0.05), которое несколько усугубилось в конце периода наблюдения па сроке 90 часов (Р<0.01).

В периферической крови содержание АКБ в 11Г начинает возрастать поело окончания стресса, по существенно увеличивается только через б часов (Р<0,001). .Через 1г часов показатели ЛКТ крови сикаются практически до уровня контрольной группы геивопшх. к исходу первых суток после стресса содержите АКБ достигает максимальных значений. затем падает, оставаясь тем не иенее достоверно ешо коптроля вплоть до окончания эксперимента. Аномальные гранулы (АГ) в ИГ стопи и костного нозга отсутствовали, за исключением 1 зивотцого в контрольной группе п 1 - в экспериментальной. при воспроизведении той же модели стресса у кроликов наблюдались сходные с крысани изиепепня показателей лейкограммы и содерзапие лз^»- гранул в псевдоэозипоФилах крови, апоналыше

гранулы мы не обнаружили, содержание НПО* гранул в псевдозозино Филах крови кроликов оставалось практически неизменным во все сроки наблюдения после окончания стрессорного воздействия.

таким образон во врекя развития стресс-реакции происходит снижение содержания АКБ в иейтроФилах крови, которое затеи восстанавливается, а к началу стадии резистентности оказывается выше исходного уровня. Аналогичные изменения наблюдаются в клеткагг костномозгового резерва, однако к началу стадии Резистентности уровень АКБ. наоборот, ниже исходного уровня. Описанные выше изменения не за »агивают НПО-содержаших гранул.

В эксперименте с энодионально-болевыи стрессом воспроизведена общеизвестная схема раяпей стрессорной реакции с соответствующим аериодон мобилизации клеточных резервов (Горизонтов П. Д. и др., 1964). появление в периферической крови НГ с высоким содержанием акб в постстрессорный период вероятно связано с экстренным выбросом клеток костномозгового резервного пула, на это указывает резкое увеличение относительного и абсолютного содержания гракулоцито». Снижение хе уровня акб d оставшихся зрелыз нг костного мозга можно объяснить интенсивной их секрецией для обеспечения ускоренного выхода клеток из костиого мозга, поскольку показано, что выброс катиопных белков повидает проницаемость эндотелия сосудов (Пигаревский В. Е., 1983; Lehrer Е. I.. Ganz т. .1990). Это te обстоятельство по всей видимости лежит в основе повторного спада содержания АКБ через 48 часов после окончания стрессорного воздействия, когда наблюдается наиболее интенсивные процессы репопуляшш динФоидшд: органов' еуеодяепмл из костного мозга клеткаки (Фролов Б.А.. АФошша С.И.. 1983). снижение уровня акб в результате стресса по всей видимости зависит от силы воздействия, при соке, развнвахаенея через 24 часа после политравны. НГ практически не содержат АКБ и о дальнейшей показатели лкт достигают половины от уровня норкы лишь к 3-4 длю травматической болезни (Худайбереиов Г. С. и др. . 1981). Показано снижение показателей лкт при интенсивной Физической нагрузке у кроликов (Шшкарев С. Н.. 1983) и людей (Прияткия С. а. ,1985).

3. с Влияние высоких широт Европейского Заполярья.

ны обследовали практически здоровых иухчин в возрасте 18-24 лет. среди них 50 человек родились и постоянно проживали в средних широтах (Прибалтика), а 60 жителей средних ойрот находились

о условиях Заполярья 6 месяцев (20 человек). 1.5 года (22 человека) и 2.5 года (18 человек). Показатели ЛКТ у постояипо проживающих в средних сиротах соответствовали данным, приведешшм в таблице 1. после полугодового пребывания в условиях Крайнего Севера стпествепно снижались показатели ЛКТ и в 2 раза - НСТ-теста (таблица 5). Результаты нашего определения НСТ-теста противоречат дашши ЛИ.Иаянского и соавт. (1980). которые не обнаружили различий через 6-12 месяцев проживания в этих условиях при постановке спонтанного варианта, однако обнаружили значительное сш&ение показателей стимулированного НСТ-теста. Не исключено,

ТАБ/ЗШЛ 5. Показатели фушшионалыюй активности ИТ периферической Крови у нузчнн в высоких широтах Европейского Севера (ХИп).

Едшатические условия прохивашш ЛКТ исг-тест

у. нг с (О питохиническиа реакцией показатель акпшп.

прибалтшса. постоянно Заполярье б нес. 1.5 года 2.5 года 1.55 10,058 1.23 10.063 » 1.33 10.031 « 1.51 10.048 13 10.06 0.22 10,062 6 10.08 »» 0.08 10.002 # 9 Ю. 10 » 0. 14 10. 009 «• 10 10.07 0. 19 10,021

Достоверность различий (Г) по сравнению с показателями, получешплш в Прибалтике: « <0,05; •* <0,01; # <0,001

что снявяеппые различия могут быть обусловлены песколько большей чувствительностью напей модификации НСТ-теста. через 1,5 года 2ИЗШ1 в пысокпх шшотая сохраняются сушественяо более низкое содержание АКБ в пейтроФплах крови, наблюдается тенденция (Р<0,05) к увеяичеш!» показателей НСТ-теста. Нормализация показателей функциональной шс-пятос-ч иг наступает лппь через г 5 года после пребывания жителей средних пирот а условиях Заполярья.

3.3 влияние иатокснкашш ФосФороргаяическиии соединепияни.

Часто при бытовых отравлениях хлорофосом, вопреки успешпоя антидотпоа терапий, у бодьпнх возникают пнфекдяошше осложнения,

преимуиественно со сторона бропхолегочной системы. Коало прелве яоздггь. что обусловлено это снижением уровня сеспешФической резистентности организма пострадавшего. Еызвацпая т норсккх свинок: легкая степень иптоксшсапш хлорофосом пе оказывала сушгствгшю-го влияния на уровень акб в нг крови и костного иозга в течение первых 60 минут» по появлялись АГ. На 5 и ю сутки после введепия яда показатели /ЕТ снижались до 1.7310.023 (Р<0,001) и 1.6В 10,020 соответственно (исходный уровень 1,94 Í0,0.т). Резко возрастало количество АГ. на ю сутки их содержали. составило 22 11,7Z; i, 4. Ак ивность НПО сниз,илась на ззх, а уровень эндогенной перекиси водорода на ztj- но .сравнении с нсходлыш! показателями.

При средне« степени интоксикации белых крис содержание ЛЕК в нейтроФилах практически не изменялось в первые часы, но через 3 часа появлялось множество НГ с аномальными граяглаян (20 клеток содержавших в среднем 1.3 гранулы). К исходу первых суток после 1штоксш<ации уровень АКБ падал па 35 и от исходного уровня ,(0,96 10.026) до 0.02 10,031. на 3 сутки до 0,51 10,034 (на 47Х) и на 7 сутки до 0.36 ю.ооз (на 63*). к концу першх суток отмечалось снижение числа АГ. но все se inr оставалось достаточно иного. Из 7 сутки после отрагшеши белил крыс jlhoposocoh в 9 11,1 у. НГ периферической крови содержали в средне» 1.6 гранулы. Показатели активности НПО пейтросилов к 3 супсаг: снизились па 32К, а эндогенной а ?екнсн водорода к 7 еггкан на 34Х от исходного уровня. Уже через 5 шшгг после введения хлорофоса крисан в НГ костного иозга содержание АКБ падает с 1.20 Ю. 029 до О. £3 to,oi'i (Р<0.oí). Л дальнейпен показатели /кт продолжали снижаться и па 7 сутки составили 0.65 Ю, 017.

TaiaiH образом при отравлениях хлорофосом наблюдается сшае-пие показателей /ЕТ в гранулогштах icpowi и костного иозга. причем Bi'ii средней степени иятокеккашя! оно еосит Солее шражешцй zapairrcp. Ухе через час после отравлешш обпарпзшдятся АГ. зео-торне затем присутствуют-в клетках кроьл по крайней нере в течение ю суток.

3. Ч Воздействие ультрафиолетового облучения п

гкдрокшакического удара.

Ультрафиолетовое облучение клеток крови в различных дозах не приводит к изменению содержания АКБ н НЛО в пейтрофилах. Однако после аутотрансфузия показатели /ИТ н активность НПО резко

снияается. Чтобы вылепить, опосредованы ли эти изменения уровня АКБ и активности ШО в нейтрофнлах телят оргаиизменными реакциями или зе они являются следствием пряного воздействия на кровь. были определены показатели катионных белкой после смешивания облученной и интактной крови в соотношении 1:10. Через 1 час после инкубации сиеси содержание АКБ снизалось па. 1/5. активность raw не изменялась. Однако, если использовали кровь, полученную при проведении второго сеанса через 3 суток после первого, происходило снижение активности как АКБ (на 1/3), так и НПО (на 1/5).

Следугшя серия опытов ставила своей задачей выяснение роли , отдельных фракций крови в изменении уровпя АКБ в яейтроФилах. Оказалось, что после снепшшшя с интактной кровью (0.82 Ю.037) облученной ультрафиолетом плазмы, плазмы с тромбоцитами, эритроцитов с лейкопитани (по без плазмы) во всех случаях происходит существенное снижение (Р<0.05) показателей лкт, которые соответственно составили 0,67 i 0,012 (82Х от уровня интактной кроки); 0,69 10,029 (8W; О, ВЗ JO, 038 (77Z).

Другим примером непосредственного влияния па нг служат им-.пульсшге динамические воздействия, которые вляются одиин из экстремальных природных н антропогенных Факторов окружавшей среды. Показатели /1ST определяли в опытах in vivo (крысы) и in vitro (клетки кропя чглозека и крысы). кровь заключали в эластичные резиновые обеаочхя и подвергали импульсивному воздействию избыточного давления в о, 70 атм. гшзотных Фиксировали и подвергали 1-й 5-кратяону воздействию с интервалом Ю0-200 мс. Контролем служили образцы, которые подвергали тем асе манипуляциям, по без воздействия, и. крысы, не подвергавшиеся баротравме.

Оказалось, что воздействие In vitro призодндо к заметному снижению содерзалия АКБ d пейтрофилах (Рис. 1 i.несмотря на низкий исходный уровень, так как использовалась консервированная донорская кровь, частота ударной волны не играла роли. У крас, которые подверглись однократному избыточному давлению, было зарегистрировано максимальное снижение показателей, одпако после 5-кратного воздействия га не обнаружили суиествешше изнепепий в показателях ЛКТ.

3.5 влляпие иопизируюпей радиашш.

Крысы были разбита на 10 групп по б животных, каждая группа подвергнута различным дозам облучения путем введения радиопукли-да в легкие, впейшнн облучением и смешанные варианта, гивотные

были обследованы до и после облучения, а также па сроках от 5 часов до 100 суток после окончания возг.ействая. В каждом случае

1007.

50-

человек 1п vlt.ro

крыса In vivo

в

Рис. 1. Влияние импульсных гидродинамических воздействий на уровень катиошшх белков в нейтроФилах. По вертикальной оси - цитохимический коэффициент (в и от контроля). ЮОХ уровень: человек -1.05Ю.015: крыса -1. 31Ю,030. * Р<0.05 а -контроль; б -однократное; в -пятикратное воздействие

сравнение показателей производилось только с исходным уровнен своей группы. Во всем диапазоне использованных наш: доз облучения происходило существенное увеличение показателей /ИТ в первые IV с у то 1с Ври дозах до 0,4 № начиная с 36 суток наблюдения содержание АКБ в НГ крови возвращалось ;с исходному уровню. При облучении большими дозами уровень АКБ нормализовался только через 50 - 100 суток. Наибольшие из использованных нами доз дала несколько иные результата, при смешанном воздействии инкорпорированного в легкие источника радиоактивности о.5-2.5 гр и внешнем облучением в лозе 1.6 Гр показатели лкт спигахись через 3 часа (Р<о.05). далее нормализовались и оставались на исходном уровне. Внешнее облучение в дозе 6,4 Гр приводило к снижению содержания АКБ на 1-7 сутки (Р соответственно <0.005; <0,01; <0,0125). после чего показатели ЛКТ возвращались к исходному уровню.

при смешанной облучении в первых четырех группах яивотных АГ появлялись с 1 по 7 с тки наблюдения, достигая максимума по

активности (A4) и ттепсивпости(АИ) процесса на 50 сутки после воздействия. При впеппеи облучении дозой О, 2 Гр АГ появлялись через 3 часа, с иакскнуном по А", на 50 сутки (р<о, 0005). и АИ -•на 14 сутки (Р<о. 0005). в дозе 0.4 Гр различия по A4 и АН достоверны с 3 суток (Р<0.0025. максим/н па 7-36 слта». в группах с дозани облучения 1.6 и 3.2 Гр ухе в первые су-пси появляются АГ с высокой концентрацией на одну метку, максимальная активность и интенсивность процесса наблюдается па 14-36 супси. к концу периода наблюдения (100 суток) АГ ло-прегснему обнаруживаются в НГ периферической крови. Наиболее интенсивный процесс аномального гранулогенеза бш выявлен при дозе внешнего облучения в 6, 4 Гр. Через 3 часа после радиоактивного воздепств1м A4 пыже исходного уровня (Р<0,0025). показатель АН о 9 раз превыиает исходный. Лаксгиуи процесса приходится на срок от 3 до 50 суток, через too суток посла облучения различия по сравнению с исходные уровнен данной группы сохраняются (АЧ.Р<0.05; ли, Р<0.0025).

Подученные результата проверены при внешен облучения 60 норских свинок в дозах от 0,25 до 1,0 Гр. После'облучения дозой 0,25 Гр отсутствует снижение уровня АКБ в нейтрофилах крови, по появляются первые АГ. При увеличении дозы до о, 5 Гр показателя /КТ спигаются (Р<0.05), возрастает число клеток содоржаших АГ. •После радиоактивного воздействия э дозе 0,75 Гр наблюдались проявления острой лучевой реакции, значительно снизалось содержание ASB (Р<0,001). до вх клеток обпаруяшали в своей цитоплазме АГ. Увеличение доза облучения до 1 Гр приводило к резкому сшиегаго показателей ЛКТ и появлепиэ в периферической герови большого количества НГ с АГ. К соаалепиа. полученные в эксперименте данные нашли подтверждение при обследовании лиц, шчшинавпие участке в ликвидации последствий авария па Чернобыльской лэс. и находив-пихся по долгу сдуабы в зоне загрязнения. Практически у всех обследованных обнаружены в НГ кроен аномальные гранулы, наличие которых сохранялось и через 2-3 года после выполнения работ.

Результаты обследования язодей показывают, что при небольших дозах лучевой нагрузки сопротивляемость организма не с питается, иогет лазе несколько возрастать. Особенно четко это видно в эксперименте на крысах, когда зо всем диапазоне доз содержание АКБ росло к исходу первых суток после облучения. Лишь очень большая для этих радлорезистентных агаопшг доза в б,'i Гр приводила к падению ig уровня, снижение нохсазате^ггх /КТ у корских свилок

также обнаружено при большой для этих радиочувствительных животных дозе в 1 Гр (Хнельшгакий о. к. и др. .1989).

Особый интерес представляют АГ, появление которых нохет служить индикаторон очень незначительных радиационных воздействий. Биологический эффект кратковременного воздействия радиационного или хинического Фактора ножет проявляться через десятки лет. в ряде случаев для его выявления требуется жизнь песколысих поколений, природа возникновения этих гранул остается абсолютно неясной, тем не ненее можно предположить, что АГ являются следствием неполной пострешшкативной репарации. Неполноценность внутриклеточной регарации, возникающая после облучения, является достаточно распространенный и существенным Фактором, . приводящим к нарушению взаимодействия между функционально различными структурами в реализации отдаленной патологии (Носкалев Ю. И. .1991). Это предположение подтверждается обнаруженным паки Фактом наличия АГ у людей через 30 лет после облучения в результате аварии, а также результатами обследования группы "ликвидаторов".

В основе механизна образования АГ может лежать изменение дшшдпого компонента ненбралы. развивающееся, например, при ак-тивапии перекиспого окисления липидов и эндогенного ФосФолшшд-пого гидролиза (Дворецкий А. И. и др. .1990). моделью такого пару-пения ножет служить действие натрий-водородного ионофора нопеп-сина. приводяшее к ингибировашаа процессинга НПО и ее аккумуляции во внутриклеточных депо, с нарушением процесса гралулогенеза и образованием в итоге гигантских гранул (Рагт1еу к. Т. е1 а1.. 1988). Другим может 01сазаться вариант, подобный наблюдаемому у ннелоидной линии клеток НЬ-бО. при ультраструктурном анализе установлено образование НПО* гранул шшуя аппарат Гольджи. путен штенсивного слияния везикул. В итоге грапулы оказываются набиты мембранами и больше напоминают аУтоФагические вшсуолн (Ва1п-Чоп В. Р.. 1988).. При оотаске прочпнн зеленый - азурон тахахе гранулы будут синего цвета,, воспршимаясь как аноналыше.

одна1со полученные пани в эксперименте данные, показавшие в^ люжность обнаружения АГ уае через, час после воздействия, а также наличие (г при скарлатине, ожоговой болезни и отравлениях пе позволяют признать этот процесс только результатом ошибок гранулогенеза. Присутствует второй путь аномального гранулогене-за в результате пряного действия на НГ токсических продуктов.при этой нельзя исключить резкую потерю в части гранул АКБ. пряный

следствием которого будет отчетливое бззофильпое окрапивалие за счет наличия в 1танулах больного количества сульфа'лгрованпых ну-кополисагарлдов. Такая «ггулци.» мблюдлетсл в развгшагегияся пго-киелопитах костпого иозга (Dunn и. а . Spicer s. s. ,1969). в из-сестпом с ж с л о подобное происходит с клетхани больных синдромом ЧдднакХигаии,которые в процессе созревания теряют значительные количества двух акб - эдастазы и катепсииа g (TaKeuchl к.н. et al.. 1967),а затем обнаруживают базофилыше гранулы в цитоплазме.

4. результата применения лязосояально-катпонного теста в кллгежо-я2лп!сст1пескои практике

1. 1 Заболевания бронголегочпой системы.

Обследовало 34 ребенка в возрасте 4-14 лет. (14 - xpoiiичес-гсая пневмония. 7 -муковнсяидоз, 4 -синдром Хартагеп >ра. 9 -атонический обструтгпшнып бронхит) о обострении и 71 рсбслкг, г которых на основании юняшко-рентгенэ-бронхологического исследования установили диагноз рещцшвируший бронхит. Показатели АКТ при хронической ппевнонии с обострением иронического бронхита сшсгени более чей в 2 раза (0,76 го, 030) по сравнению практичсс-iai здороашш летыгл этого возраста, бактерицидная активность НГ а бропхиальпыз сиывах низкая (КЕМ = 29ü.2X; КБА2=7М,Ш. После аятшпого .течения клнпичеосая ремиссия наступила у 5 детей, показатели /НТ у ев и ссе 4 больных в периоде клинической Ремиссии состаспли 1.13 i 0,041. Багете ркцидна я активность нейтроФилов су-гсестсендо (Р«0,001) возросла (КБМ = 55 11.У/.; КВА2 = 51 и.гх).

Па основ? комплексного анализа клияпко-лаеораторныз датплг у больных редеттурутстз! бронхитом были выделены три Фазы течения болезни: обострегте. вялотгкупее обострение я клиническая рениссля. В стадии обострения показатели ЛХТ составили только ззх от уровля клппческл з.югошй детей того ге возраста (0,61 10,029), па препаратах-отпечатках бронхиальных asínоа выявлен азстгошый Фагоцитоз ипкробнш: меток, по эффективность воздействия па них Ж оказалась :срапле низкой (КБЛ2 = 5 i о,гх), тодысо 1/5 часть внеклеточно расположенных нлгсрсбоз окг.'ишаяась в зеленый «шет (ККА1 =16 10,ох), вялотекущее обострение такая сопровогда-лось значительным, яо 61 х от nop¡ai (1,0610.042). сшкедиен содег-аапня АКБ в иг периферической кропя. по опо било данного гиге. .

чек при обострении процесса (Р<0.0005). Возрастали и показатели бактерицидной активности АКБ (КБА1 = 49 $1,1»; КНА2 = 32 SO. 9*>, отличаясь от полученных в острой фазе заболевания (Р<0.001)'.

С началом клинической ремиссии был выявлен самый высокий уровень АКБ (1.41J0.040). но все же значительно ниже. чен у клинически здоровых детей этого возраста (Р<0.01). Показатели бактерицидной активпости в очаге воспаления достигали у некоторых больных 00-100'/. в средней также были максимальными (КБЛ1 - 50 И,ох; КЕА2 = 42 ti, 97.). однако в период стойкой клинической ремиссии значения лкт значительно нихе. чем в ее начале (1.09 Ю.ОЗЗ: Р<0,001) и мало отличаются от таковых у сольных детей ври вядотекушен обострении (Р>0.05). Воспалительный процесс в легких практически отсутствует и мы не смогли определить показатели бактерицидной активности НГ.

На всех стадиях течения рецидивирующего бронхита обнаруживались макрофаги. Если в Фазу обострения основную массу воспалительного экссудата составляли НГ. то при вялотекушен обострении относительное.количество макрофагов возрастало более чем в два раза, с началом клинической ремиссии они составляли не менее 1/3 общего числа клеток бронхиального ошва. Ны постоянно обнаруживали макрофаги, фагоцитировавшие гранулы, части цитоплазкы пейт-рофилов. Нередко внутри макрофага можно наблюдать целиком погло-пешше НГ. при ультрэструктурпон исследовании в Фагосоиах макрофагов были обнаружены микробные клетки и неоднородный по структуре и электронной плотности иатериал. среди которого выявлялись крупные осмиоФилыше включения, похожие па гранулы пейтрофилоа Фагоцитированные микробные клетки претерпевали изменения. которые можно было рассматривать как следствие антимикробного действия АКБ гранудоцитов. поскольку взаимодействие НГ и макрофагов в процессе развитая воспалительной реакции представляет большой интерес» этот вопрос будет специально рассмотрен в разделе 5.

При обследовании детей в возрасте до 3 лет. больных острым бронхитом (72). острой пневмонией (157) и ОРВП (35), особо рассматривалась группа.02 детей с острой пневмонией, поступивших на отделение реанимации, клиническая тяжесть их состояния была обусловлена синптонами дыхательной недостаточности! интоксикации. нейротоксикоза. недостаточности кровообращения. В начальный период ОРВИ с явлениями бронхита снижение уровня АКБ в НГ крови

невелико. При поступлении в стационар показатели ЛЕТ составляли 1.Т9 »0.031. что все re существенно mate показателей Физиологической nopioi (Р<0,001). дальнейшее развитие патологического процесса приводило к снижению показателей ЛХТ уже до 1.37Ю,033 в острый период. ' на Фоне проводимой терапии показатели возрастали и* перед выпиской достигали уровня порки (t.8i to, 042; Г>0,05). в случае осложненного течения этого заболевания у детей первого года жизни нормализация показателей лкт к моменту выписки отсутствовала. . При остром бронхите в нонент поступления детей п стационар содержание АКБ в НГ составляло 1,6310,023 (йчх от уровня клинически здоровых детей). По мере развития заболевания оно продолжало снижаться, достигая минимальной величины на 5-6 день болезни (1.51 J0.031). Тепденаия к нормализации показателей ЛЕТ отсутствовала (в нонент выписки 1.51 !0.029). хотя по общепринятая критериям их состояние спепивалось как клиническое выздоровление. V 10 детей па 2-3 день заболевания уда;ось определить показатели бактерицидной активности, АКБ эффективно подавляли ппеклеточно распояогеннго микрофлору (КБА1г7Ш0, г;:). Фа го янтарная активность НГ оказалась в пределах 2-6*. Фагоаитоз носил о основнон завериешшй характер (KSA2 * 58 i и.ЗХ).

V детей с очаговой бронхопневмонией а остром периоде отме-•чалось выразенное снижение содержания АКБ в нейтрофнлах крови до •0.81 t 0.072 (42* от уровня нормы). При сегиентарпой бронхопневмонии этот показатель стсгал с я з меньшей степени (1.27 to, 059) якнь до 66* от уровня контрольной группы детей. В пгопессе лечения происходило значительно улучиение состояния больных, но к нонепту сыписки показателя Л5Т оставались низкими, у больных очаговой бронхопневмонией 1.32[to.051. сегиептарной бронхопневмонией - 1.61 to.оча (р<о.cod.

Пз 157 обследованных паки детей у 45 развились осложнения (деструкция легких, плеврит). а у 17 - несмотря на интенсивную терапию заболевание закончилось летальным исходом. При тяжелом течении пневмонии за 2-3 суток до летального нехода содержание АЗК п нейтрофидах крови находилось в пределах от О до 0,17 (в среднем О. 10Ю.Oil),а перед развитием осложнений никогда не превышало 0.48 (в средней 0.33 !0,022). У детей поступавши в таком хе тяжелой состоянии, но обладавши более высоким уроснен АКБ (свы-ве 0,48; в среднем 1.15*0.047) заболевание всегда протекало без осложнений, спустя год после скончания лечения ны смогли изучить

катакпез 25 детей, переболевших пневмонией и обследованных во время лечения в стационаре. Перед выпиской у 6 из пих по1сазатели ЛКТ крови приближалось к порме (1.80 Ю. 062), умеренное снижение их было отмечено у О больных (1,53 !0,042). у 11 детей обнаружены очень низкие значения лхт и, 16 !0.023). При изучении историй болезни первых двух групп не найдены какие-либо особенности течения вневношш и последующих бропхолегочпых заболевалий. В последней большинство лечилось по поводу очаговой пневмонии, - у О детей развились осложнения, они чаше болели ОРЗ.

4. 2 Гпотше хирургические заболевания.

Обследовано 25 больных, находившихся па лечении по поводу эипне>м плевры. При поступлении пациентов в стационар содержание АКБ в НГ периферической крови составило 0,57 10,052 (36/. от нормы). в экссудате только о. 33 ю, 091. при клиническом улучшетш после 2-3 нрошвапий полости показатели ЛКТ гранулоаитов периферической крови возрастали более чей в 2 раза (до 1,2610,053) и в 3 раза - у нг плеврального экссудата (1,01 10,034). Накануне выписки уровень АКБ нейтроФилов крови достигал пор.чы (1,5410,070; Р>0.05). V 3 больных, несмотря на нровошшу» терапко. состояние прогрессивно ухудяалось па Фоне снижения показателей ЛКТ, которые за 2- 3 дня до летального исхода в клетках экссудата оказались равными О, а в ИГ крови составили 0,13; 0,16; 0,17.

Эффективным оказалось использование ЛКТ в диламзше лечения стойких остаточных полостей, образующихся после плевмоэктоиий из-за гангрены и гангренозных абсцессов легких. Обычно ,у таких больных санация- полости продолжается до полной ее облитерашш или получения не менее трех отрицательных результатов бактериологического исследования экссудата, снижения числа лейкоцитов в ней до уровня периферической крови. Но столь тшггельное обследование больного все же пе гарантирует надежности результатов и сукественпо удлиняет сроки лечешга. Было решено попытаться изменить тактшгу лечепия. на основе оценки потенциальных возможностей бактерицидных систем НГ. используя в ¡сачестве критерия ЛКТ. Превышение уровня АКБ 1.30 в НГ экссудата, что соответствует врактическу порнальнону их содержанию в тканевых пейтрофилах. позволяло считать инфекционный процесс завершенным. По достижению этих показателей ЛКТ у 3 вольных была применена антибактери-• альная Фибргашая пломбировка полости, а у 5 больных прекращена

санация полости без развития н нагноения экссудата. Лнбулаторпое наблюдение этих пациентов в течение 1-3 несядеп показало отсутствие каких-либо признаков рспилипа инФекшш.

Ян»екциотшй эндокардит является весьма тяжелим заболеп.иш-ем и частым осложнением естественного течения ряда ориобретешшя врожденных пороков сердца. Продолжительная безуспешная консервативная терапия сопровождается прогрессиропанисн деструктивные изменений внутрисердечных аплтоиических образований, что обусловливает развитие гемодинанических нарушений и необходимость их оперативной коррекции. Обследовано 36 больных инфекционным эндокардитом, которым была произведена оперативная санация камер сердца с устранением внутрисердечного очага ииФекшш. V 30 пациентов наблюдалось нормальное течение послеоперационного периода, а у б - гнойные осложнения (нагноение послеоперационной раны, у одпого больного - септическая пневноиия).

Снижение показателей /ит по сравнению с нормальными зарегистрировано п обеих группах больных (р < 0,05). v пациентов без осложнений уровень ли? нейтроФилов крови не изменялся в послеоперационном периоде. При развитии же осложнений показателя лкт сушественно снижались па 3 сутки после операции (Р < 0,001), на 5-е сутки у них появились первые клииические признаки раэоития гнойного воспаления, причем у больного Н. было обнаружено наиболее выраженное снижение уровня АКБ (0.82). Именно у этого больного па б сутки развилась септическая пневмония,в то время как у остальных 5 больных этой группы течение послеоперационного процесса осложнилось только нагноением операционной раны.

Своевременно начатое комплексное зтиотроиное лечение (анти бяотикотералия» трансфузиоияая терапия, нестлое применение антисептических средств позволило сравнительно быстро ликвидировать патологический очаг, что нашло отражение в положительной динамике показателей /ИТ. которые уже на 7-е послеоперационные сутки существенно возрастали (Р<0,01). К И суткам уровень АКБ в нейт-роФилах крови был еие выше, по однако оставался выше, чем у клинически здоровых людей (Р<0.05). Таким образон. у пациентов с нормально протекавшим послеоперационным периодом, начиная с 5-7 суток отмечается некоторое увеличение показателей /ИТ. На Фоне максимального снижения содержания АКБ в иейтроФнльпих гранулопи-тах периферической кгови к 3 длю после операции развирались гнойные ослолпе1гия, клинически проявлявшиеся только 2 суток

спустя, причем наиболее низкое значение показателей лкт в эти сроки было зарегистрировано у больного с наиболее тяжелым осложнением - септической пневмонией.

До начала курса терапии тималином у 10 больных с хроническими пиодермитами содержание АКБ в НГ крови значительно снижено и составило той от порны. Гранулошггы очага воспаления обладали невысокой Фагоцитарной активность» при достаточно высокой интенсивности Фагоцитоза, что усугублялось практически полным отсутствием бактерицидной активности АКБ. с началом лечения тималинон росли содержание АКБ в пейтроФилах крови (Р<0.01) и Фагооитарпая активность НГ в очаге воспаления. Снижалась интенсивность Фагоцитоза. но зато его завершенность возрастала более чей в 3 раза. Эти изменения сопровождались несомненными клиническими улучшениями - на дне язвы Формировались сочные граиуляшт. сокращалось количество гнойного отделяемого, начиналась эпителизапия. через

5 дней после окончания лечения уровень показатели ЛКТ достигали нормы. Фагоцитарная активность НГ возрастала почти в 3 раза, а завершенность Фагоцитоза - в 7 раз. Многократно возрастала и внеклеточная бактерицидная активность АКБ. но все же она оставалась на относительно пизкон уровне.

4. 3 Инфекционные заболевания

эшшенический подъем ненингококковой инфекции, начавшийся в Ленинграде с 1970 года, до сих пор отличается высокой заболеваемость». V детей гнойные менингиты отличаются особой тяжестью течения. частотой летальных исходов (при отдельных нозологических Формах - до 00%). органическим характером поражений центральной нервной системы у многих переболевших. Определение прогноза в первые дни заболевания является сложной задачей, связанной с вирулентностью и жизнеспособностью возбудителя, иммунной резистентностью организма, нреморбилныии особенностями нервной системы ребенка. характером интенсивной терапии, которая в каждой случае должна быть направленной и носить индивидуальный характер. Последнее с неизбежностью приводит к потребности в быстрых и легко выполнимых диагностических тестов, которые позволяли бы судить

06 особенностях течения и возможного исхода гнойного менингита.

Применение ЛЕТ для анализа ликвора больных показало, что динамика показателей бактерицидной активности НГ на 1-2 и 3-4 сутки заболевания с высокой степенью достоверности говорят об

исходе гнойного неинипгга у детей. Всего било обследовано 09 детей. поступивших па лечение в лнии детских инфекций. Из 'капли ликвора. полученного с диагностическими целями, готовили мазок, который окрашивали прочими зеленым - азурон А и определяли КПА2. При исследовании ликвора было обпаружепо высокое содержание аяс в нейтрофилах. как правило, бол.:" высокое, чем в !1Г периферической крови. Показатели лнт пейтроФилов кропи прк поступлетш п стационар колебались от 1.43 до !.8б <1,73 ♦ о, 024) и нормализовались в зависимости от эффективности применяемой терапии па 14-21 день заболевания. В мазках ликвора па 1-2 сутки Фагоцитар-пая активность нг была высокой (ФП = 67-73*). по уже на 2-3 сутки падала в 3 раза (ФП =до ¿1'*). опенка показателей эаиепзетюс-та Фагоцитоза (КБА2) показала. что любое. даже незначительное снижение этого показателя, свидетельствует о неблагоприятном прогнозе течения заболевания (таблица б».

ТАБ/ЕТДА б. завершенность Фагоцитоза нейтроФштьных г'ранулопитов ликвора у больных нешшгококковой кнфекцкей (X I т).

Динамика Число Показатели КЕА2 прогноз Исход

КБА2 больных 1-2 сутки 3-4 СУТКИ

увеличение ¡выздоров-

более чен 55 ш1п 1.4 9,6 благо- ление без

в 3 раза саг 9.6 33, 8 приятный осложнений

увеличение выздоров-

кспее чем 19 □1п 1.0 2.6 сомни- ление. ос-

в 3 раза пах 7.4 12.6 тельный ложнения

уиенызение 14 П1П 0,0 0.4 неблаго- летальный

пах 7.4 2.0 приятна

данный способ использования УНТ позволил с высокой точностью прогнозировать как благоприятный, так и неблагоприятный исход. При сомнительном прогпозе предпршшна лся ряд дополнительных реанимационных мероприятий, направленных на максимальное ваведе-пие гнойного ликвора из субарахноидального пространства'и стшу-ляпию зашгпшх систем организма (Черных II Д. и др. .1968). В результате интенсивной терапии больные выздоровели,по в 30* случаев отнечаны остаточные расстройства неврологического характера.

Специфический процесс у всех больных туберкулезом отличался двусторонний поражением легочной ткани. Бактериовыделение зарегистрировано у всех больных. В зависимости от длительности заболевания больных разделили па следующие группы:

1-ю: 12 больных с впервые выявленным инФильтративным туберкулезом легких, длительность заболевания до года.

2-ю: 12 больных инФильтративным и фиброзно-каверпозным туберкулезом с длительностью заболевания от года до б лет.

3-ю: ю больных Фиброзпо-кавернозным туберкулезом легких с продолжительностью заболевания более б лет.

4-ю: 0 впервые выячпешгых больных, у которых специфический процесс в легких трактовался как Фиброзно-каверпозиый туберкулез. развившийся на Фоне отсутствия лечения.

3-ю: 5 больных Фиброзпо-кавернозным туберкулезом с давностью от 3 до 20 лет при прогрессирующем течении процесса.

Комплексное этиопатогепетическое лечение в 1-4 группах позволило достигнуть положительная клинико-рептгепо-лабораторной динамиш! специфических изменений в легких, однако у больных 5 группы процесс пеукдонпо прогрессировал. Показатели ЛКТ оказались несколько ниже нормы в 1 группе и в вределах Физиологической нормы у больных 2 группы. Содержание АКБ во 3 и 4 группах оказалось существенно выше показателей лкт клинически здоровых людей (Р<0,01). При прогрессирующем течении туберкулезного процесса мы наблюдали снижение уровня АКБ в нейтрофилах крови по сравнепию с нормой <Р<0,05). Выявлено наличие высокой активности 1ШО у всех больных 1-4 группы, но в 5 группе она оказалась ниже показателей доноров <Р<0.05). Таким образом при длительно теку-пем хроническом туберкулезном процессе в легких наблюдается превышение показателей ЛКТ уровня практически здоровых лиц.

4.4 ожоговая болезнь

в первые трое суток развития ожоговой болезни у больных происходит снижение показателей лкт па 30-40*, более выраженное у глубокообожжепых (р<0,01). в первой группе (легкая ожоговая травма) содержание дев нейтроФилов крови составило 1.07 ю,069. во второй группе (плошадь глубокого ожога более 20*) 0.62 ю,060 и в третьей группе (тяжелая травма,осложнившаяся сепсисом) -0.9610,009. при легком ожоге уровень акб возрастал только на

го-зо eran до 1.36 10.099 (Р<о,001). Позже 30 суток после травмы обследовать больных этой группы кн пе смогли, в связи с окончанием их стационарного лечения. При тяжелой ожоговой травме наблюдалась подобная 1 группе больных динамика изменения показателей /ИТ. по па белее низком уровне. К Р.0-30 дню содержание АКБ 'достигало в КГ периферической крови значения 1.20 so. 050, а перед выпиской на 40-50 день практически не отличалось от нормы (1.5? Ю.011; г>0,05). Если тяжелая ожоговая травма закапчивалась летальным исходом, то па 4-10 день иг уровень в нойтроФилах продолжая снижаться и составлял 40* от нормы (о, 63 ¡о. 062). За трое суток до гибели отмечались еше более низкие показатели (0.42 í 0,141). но вплоть до летального исхода содержание АКБ оставалось относительно высоким (около зох поркы). После отторжения струпа появляется возможность оценивать показатели бактерицидной актив-пости АКБ. В первый момент у легко и тяжело обожжетшх эффективность внеклеточного и внутриклеточного бактершш. по го действия АКБ находилась в пределах 0-14*. Но уже через о-ш в первой группе больпых опа значительпо возрастала (КЕА1- 55 t3.8X: КБА2= 45 13.91). н то время как во второй группе оставалась на низком уровне (КБА1= 1712,1?:; КБА2= iOii.3%). lia 15-20 день после отторжения струпа различия мегду группэни сохранялись <P<o.ooi!. После оноговой травгс! происходит снижение содержания АКБ а НГ кропи до уровня 60-70* от пормы. восстановление показателей начинается пе ранее чем через 20 дней. В очаге поражения после отторжения струпа Фагоплтоз посит пезавервенный характер вне зависимости от тяжести ожога, по вторичшiti дефект бактерицидной активности НГ быстрее восстанавливается у легко обожжепых.

4. 5 Гастродуодепалыше заболевания

1!атерналон для исследований послужили биоптата. взятые с диагностической цель» во преия Фиброгзстродуодепоскошш из луковицы двенадцатиперстной кпзкн. антральпого отдела п memert трети желудка. Показатели лиг определены г 10 больных хрошггескии гастрнтон, 15 - язвенной болезпьо с локализацией язвы в двенадцатиперстной юшке п 7 30 - кпегагческой болезнь» органов пплева-репия. обусловленной коипрессионпш стенозом чревного ствола. Контрольную группу составили 9 человек, с отсутствие:! патологических изменений п желудке и двенадцатиперстной гспгке, доказан-пш| реитгенолопгчесют. эндоскопически и лзбораторйо.

Показатели лкт контрольной группы имели сходные значения в клетках эпителия тела желудка и луковицы двенадцатиперстной кишки. но оказались существенно ниже в антральном отделе желудка (Г <0, 001). Среди клеток эпителия и слизи встречались немногочисленные иикробы (в осповнои кокки). Показатели бактерицидной активности АКБ колебались в пределах максимальных величин, их среднее значение составило 8612. чу.. v больных хроническим гастритом нрн Фнброгастроскошш отек и гиперемия отмечались в антральном отделе желудка, здесь же выявлено значительное снижение уровня АКБ в эпителии <Р<0,001). В препаратах-отпечатках ант-рального отдела желучка наблюдались скопления НГ. микроорганизмы и их колонии. Преобладали жизнеспособные бактерии (кокки, палочки), окрашивавшиеся в синий цвет азурои. Показатели бактерицидной активности АКБ в 2 раза ниже.чем в контрольной группе. V больных •с язвенной болезнью выявлено резкое снижение уровня АКБ в эпителии слизистой оболочки двенадцатиперстной юшки и антрального отдела желудка. В покровном эпителии слизистой оболочки тела желудка спижение уровня АКБ по сравнению с контролем оказалось незначительным (Р>о,05). Снижение содержания АКБ в эпителии слизистой двенадцатиперстной юшки найдено при шемической болезни органов пищеварения (Р<0,01), обусловленной компрессионным стенозом чревного ствола. В клетках эпителия слизистой желудка сш1-жение уровня АКБ отсутствовало. Показатели бактерицидной активности АКБ были близки к норме (79 «4.0Х). Таким образом наиболее враженное снижение уровня катиошшх белков и их бактерицидной активности проявляется в тех отделах гастродуоденальной системы, где наблюдаются наиболее выраженные морфологические изменения.

Приведенные выше результаты наших исследований, а также применение лкт другими авторами при различных инфекционных (псевдотуберкулез, скарлатина, дизентерия, сальмонеллез, менингиты. вирусный гепатит), ипФекпиопно-аллергических (ревматизм, ревнато-идпый артрит. гломерулонеФрит. рассеянный склероз, пиелонефрит), ниелопролиферативных заболеваниях, бронхолегочной патологии показали его высокую эффективность как одного из показателей уровня резистентности организма (Назинг ю. А.. 1980,1990,1991). Обнаружено снижение содержания АКБ у больных со злокачественными новообразованиями легких, желудка, прямой кишки; хирургическое удаление опухолей приводило к нормализации показателей (Бережная н. и. и др., 1984! черлапцева н. В. и др. , 1909).

Вероятно слпествуют два взгиапта снижения показателей лкт. Первый связап с воздействием токсических пепестп пепосредстаешю па НГ. Это могут быть зкзо- и эпяотокстш иикробоп, экзогенные яды, интоксикации вследствие массовой гибели клеток оргтшизиа. Действие токсически:: вепеств моа^сыть опосредовано центральной йершюй систеиой через слохлга цепь нейромедиатортах взаимодействий. Примерок такой регуляции содеряання АКБ в нейтгоФилах гсро-пи служит снижение НПО» прянул псевдоэозиноФклоп кролика после электрического рачдразения сп>У1ггуш головного мозга Ьосиз соеги1ецз (Сергаж Т. П. . Непединов И. Г. . 1991). Итогом является выброс нейтрофилаин АКБ. крайним выражением такого процесса яп-ляется полная потеря клетками АКБ. наблглапаапсч при политравне.

Второй вариант предполагает воздействие тех же веаеств на клетки тсостпого мозга. По всей видимости в процессе грапу.югене-за на стадии прашелошгта и гшелопита упаковывается меиьшее количество АКБ из-за сниженного пк синтеза. Е выведу о дефицита синтеза лактоФерршга при вирусных инфекциях пришли после его выявления в нейтрофилах иниупопероксидазнын методом ?Ватез В. П. 01 а1.. 1900). Более всего данный париант вероятен пт>н яроничес-гз! и вплотекуилх заболеваниях. г:о в подавлявшем же большинстве случаев несомненно действуют оба механизма снижения ЛЗТ. особня-• кои стоят данные о повышении содержания АКБ иеГггроФилов крови у больных туберкулезом легких, а тагае при алкогольпс>й интоксюса-пни кгыс (Иартыпова Н. А. .1993). Аналогичные результаты мы наблюдали у о кугчпз при острой нетанодьном отраплегаш. когда через 2 суток показатели ЛХТ возросли до 1. 93-2.07. Иохно предположить, что в этих случаях нарупается процесс секреции АКБ при переходе НГ из костного мозга в кровь, как это имеет несто у новорожденных. Тогда стойкое превышение показателей Физиологической порку следует относить к неблагоЕшиятлии прогностичесгост признакам,

5. ВЭАИИОДЕШ7ГБЯЯ НЕПТРОСПЛЬЛЫХ ГРЛ1С/1СШГТОП Л КЛКРО?АГОВ В ОЧАГЕ ПОСПАЛИ ПШ.

Э. I Стинуляпетя Флнотюнальной активности макрофагов в процессе развития воспалительной реакции. После одпого часа иикубапил контрольные (резидентных) макрофагов с суточной культурой зпнлернаяьного стафилококка четвертая часть клеток крпсслоя еодегзала кютобн, десятая часть их

давала положительную реакцию в НСТ-тесте. Ни ни разу не обнаруживали нахрофаги. содержавшие Фагоцитированные остатки НГ или их гранулы. ИакроФаги, выделенные из очага асептического воспаления на 2 сутки, содержали в оитоплазне определенное количество компонентов НГ. Это водтверждается наличием в их цитоплазме гранулярного материала, даюшего положительную реакцию на акб и НПО (таблица б), повышался Фагоцитарный индекс <Р<0,05). почти в 2

таблица 6. функциональная активность перитонеалышх макрофагов в динамике асептического воспаления (X 1 ш).

Срою] изучения во спапите-льпой ре-акшш НакроФаги (X) с положительной реакцией па фагоцитарная шел юность ИСТ-тест

АКБ НПО ФЧ ФП

контроль 0 0 25 11. 3 3 10. 1 10 20.08

г сутки 34 11.0 21 10.9 49 11. 1* 4 10. 14) 31 11. 1«

3 сутки го 11.1» 19 11.3 34 11. 1» 4 10. 9« 24 11. 2»

4 сутки 16 11.4» 14.511.0» 30 11. 2« 3 10. 1 19 И. за

5 сутки 10 ю.в» & 10. 3» 20 П. 3 2 Ю. 15 14 11.1»

Достоверность различий (Р) по сравнению с контролен (макрофаги с положительной реакцией на АКБ и НПО по сравнению со г сутками): « < 0,05: « < 0,01; « < 0.001

раза увеличивался процент фагоцитирующих клеток <?<0.001). Параллельно в 3 раза возрастало число макрофагов. даюших положительную реакцию в нст-тесте (Р<о.001).

V клеток, взятых из брюшной полости на 3 сутки после введения крахмала, наблюдалось некоторое снижение показателей активности. Меньшее число макрофагов давало положительную реакцию на АКБ (Р<0.05), . уменьшалась Фагоцитарная активность. Однако по своей функциональной активности все они.по-прежнему нанного пре-

вытали контрольный этювеиь, Выделенные на ч и 5 сутки после пве-дения крахнала маююфаги демонстрировали дальнейшие супесшенное снижение показателей активности. На 5 сутки проги 1т Флгонитирую-вих и НСТ-позитишгых клеток приблизился :с контрольным чнлченипм. а интенсивность Фагоцитоза - (ФИ) микробных к.! о то к стафилококка оказалась лаже ниже, чей у резидентных макроФагса (р < 0,01).

Таким образом появление в цитоплазме перитоноалышх макроФагов асептического очага воспаления продуктов ИГ* сопровождается повышением их функциональной активности. Наибольшей активностью обладают 2-х суточние макрофаги, что соответствует максимальному содержанию в их цитоплазме компонентов НГ. По мзге разкшгия воспалительной реакпии происходит неребарипание вешрстп из НГ и, соответственно, снижение показателей активности, которые к 3 суткам после начала воспалительной реакции приближаются к значениям резидентных клеток.

5. 2 Диагностический очаг воспаления (ЛОВ) как метод изучения

взаимодействия нейтрофилышх грапулонитсв и макрофагов.

v всех практически здоровых лиц (мужчин и женнин) выявлена строгая последовательность смены клеточных реакций лов. Спустя 4 часа после повреждения преобладают НГ с четко и«раже;тымк ceг-• кентировэтшми ядрами, зернистой цитоплазмой, клеточной обопоч-кой, без признаков дегенерат«. Встречаются единичные эозино-Филыше и базоФилыше гранулопиты. доля макрофагов не прет лпает 5-7*. все клетки лежат раздельно, границы их четкие. Через 24 часа картина сушествегаго меняется, в лрепарате-отпечатке содержатся преинушествешю макрофаги (70 -вою - крушше клетки с круглыми или овалышми ядрами, в цитоплазпе которых заметны включения и Фаготгшроганные НГ. клетки лежат пластами, в-.ншы признаки клеточной деструклии: разрушенные клеточные менбрапм, шоснотические ядра, клеточный детрит, расположенные внеклеточпо грапулы нейтроФилов. В условиях физиологической нормы пологие различия в динамике развития воспалительной речкоии отсутствуют. Динамика а^ептичоского воспаления п ДОВ и содержание АКБ в пейт-рофилах периферической крови стабильны на всех Фазах менструального цикла. Показатели АКТ нейтрофилсв. мигрирующих в ДОВ не отличаются от значений клеток периферической кропи, следовательно они имеют нулевую секреторную активность.

Цитологическая карт-иа пргпаратов-отпечаткои ДОВ при бере-

ценности не отличается от таковой у небереиенных женщин: через 4 часа представлены преимущественно нг. а через 24 часа - накроФаги. По сравнению со'здоровыни мужчинами н пеберенешшми женщинами уровень АКБ в иейтроФилах крови во время беременности существенно выше (р<0,05). С 1 и 2 триместрах показатели ЛКТ крови стабилыш. цесколько возрастают в 3 триместре (Р< 0.05).

- В первые сутки после родов соотношение макрофагов и ИГ в ДОБ остается таким же. как у беремешшх жегалил. Содержание АКБ сохраняется на уровне, характерной для беремешшх женшин, но с 5 суток наблюдается тенденция к их снижению. Секреторная активность пейтрофилов дов в первые сутки после родов сохраняется на уровне беремешшх. но затем быстро снижается и к 5 суткам оказывается уже вдвое меньше, чен сразу после родов.

Усилении метаболической и Фагошггарпой активности макрофагов. эндоцитировашшх НГ или продукты их распада, свидетельствуют о возможности оперативного изменения катиошшни белками их функциональной активности макрофагов в конкретном месте и периоде времени. Полученные в настоящем исследовании результаты,вместе с даштми других авторов, подтверждают гипотезу В. Е. Пнгаренекого (1976. 1992) и позволяют говорить о концепции резорбтшшой резистентности моноцитов/макрофагов. Проведенное в рамках ее обоснования изучение процесса кооперации НГ и макрофагов ДОВ у женщин позволило разработать способ опенки секреторной активности гралулошггов. с его помошью установлено, что в состоянии Физиологической нормы при переходе из кровяного русла в ткани нейтрофилыше грапулошпы секретируют катношше белки только у женшин иа фоне беременности.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Реакции Фагоцитов занимают одно из ведущих мест в регуляции структурного гонеостаза, являясь непременный компонентом развития зашит'ных решений, на дестабилизирующие воздействия внешней среды,обеспечивая основной уровень запиты организма от повреждений. изучение антимикробных катиошшх белков НГ позволяет прийти к заключению, что наряду с опсонинани, хемоатрактантани. цитокипами они многократно усиливают эффективность защитных функций Фагоцитов. Принципиальная новизна современных взглядов о механизме антимикробного действия пейтрофилов состоит в обосновании ведущей роли особой группы белков, обязательным Физико-химическим

свойством которых является суннарпый положительный (катиониий) заряд молекулы. Впервые на уровпе целостного организма нам удалось показать изменения содержания АКБ нейтроФилов в зависимости от характера внешнего воздействия.

Особенностью пагтояией рабои являлась ее постоянная сопря-жёппость с биох1гническинн исследованиями, пропояииииинся группой В. Н. Кокрякопа под руководством проф. а Е. Пигарепского. Полученные результаты позволяют одпозначно утверждать о паличтш транзнтор-пого дефицита АКБ у новорожденных млекопитающих в качестве одной из причин их повышенной воспгиинчипостн к инфекции. Удалось показа?». насколько иогут быть распнрепы возможности иимуногракки за счет нетолов изучения функциональной активности ИТ. Разработанные методические подходы определения АКБ позволили оценивать потенциальные возможности вызедиих в кровяное руслс нг; эффективность их работы в очаге воспаления; способность к сскренин АКБ при переходе из костного ноэга в кровь и из кров а выполняйте барьерную футами» ткани. Явление апонального грзпглогенеза. обнаруженное и при небольших дозах лучевого воздействия. стало основой для нового способа выявления контактов человека с радиоактивными загряэпенняии, создания нового нетода определеш<я биологического эквивалента дозы радиационного порахепия.

Совокупность проведенных к пастояпему времени исследований по вза)п<олойствию НГ и моногоггов/макроФагов позволяет наи говорить о концепции резорбтнпной клеточной резистентности, суть которой состоит в способности кигрируваей части мононуклеарных Фагоцитов приобретать принципиально новые свойства за счет резорбции (эядоцитоза, сегрегации) антимикробных катиошшх белков. в перспективе эта концепция является одной из основ для разработки нового класса лекарственных препаратов, которые могли бы разре-пнть проблему терапии таФекшгй. вызываемых внутршелеточными паразитами. выполненное исследование дает возможность констатировать, что аитишосробпые катпошше белки в полной мере отражают функциональную полноценность системы пейтрофилышя граиупошттсв. их определение позволяет осуществлять контроль за возраепшки. Физиологическими и патологичесгаши изиененияни пейтроФпдов. Разработка способов и методов, позволяющих изучать функциональную иорфолопзэ нейтроФилов, оказывается сегодня о длин из стержпевых направлений исследований, раскиртяих возможности современного кдннкко-лабораторного апализа.

оиводи

1. Разработай ряд морфологических нетодов выявлегая антимикробных катиоикых белк в нейтроФилышх гранулодитои:

а) диагностический очаг воспаления - с целью оценки секреторной активности нг?йтроФильных грэнулоцитов

б) окраска катионных белков на гистологических срезах - для выявления их в различных тканях

в> иннунофйуорисцентное вичаление - для ош>едедения содержания отделышх аытимикробных белков г' совместное гиявление катионных белков и миелопероксидазы д) совместное выявление катионных белков и липидов - для анализа функциональных популяций макрофагов и нейтрофилов в легких

■ В. Проведена критическая оиенка лиэосонадыю-катиошшгв тест« и вынслеиы его ноше возможности. Показано, что дашшй тест является надежным методой клинико-лабораторного анализа, позволявшим оценивать в количественной выражении уровень неспеци-♦ической резистентности организма человека и животных. Его показатели могут служить критерием оценки эффективности проводимой терапии, выявления трупп риска* к развитию заболеваний. вызываемых условно-патогенными микроорганизмами.

3. Заболевания инфекционной природы приводят к снижению показателей лизосокальио-катиошюго теста в зависимости от тяжести течения болезни. Установлено, что падение показателей более чем на 50Х от уровня возрастной нормы свидетельствует о развитии гнойных осложнений, а снижение более чем на 90Х предполагает высокую вероятность летального исхода. Трапзиторный дефицит антимикробных катионных белков нейтроФилышх грануло-шггов является одной из причин неустойчивости новорожденных детей к инФекдии. Аналогичная ситуация выявлена в эксперименте у животных.

4. Однократное стрессорное воздействие приводит к повышению уровня антимикробных катиопных белков нейтрофильных грануло-питов периферической крови, однако антиникробный потенциал клеток резервного пула костного мозга оказывается ниже исходного.

- чг -

3. Показана голь антимикробных катиотшх белков нрйтроФильных грапулопитэв при острой воздействие па оргапизн ряда повгеж-яаюстих агентов, отравление фосфорорганическими соелинеииями вызывает дефицит антимикробны* белков, япляшийся одной из велппнх причин развития на эт::? Фоне воспалительных игопес-

»

соп. Радиоактивное воздействие приводит к появлению в пеятро-Фильных гранулошггах аномальных гранул, которые могут служить ютдикаторон облучепия.

О. Установлено, что при адаптации жителей средних пирот к условиям Крайнего Севера происходит угнетение антимикробного потенциала иечтрофильных грапулопигов. причсн показатели содержания катнонлых белкой пейтрофнлоп периферической крови более года не достигают Физиологическом норку.

Т. Изучение в молельной системе асептическогг очага воспаления позволило прол.?нопстриропат1 взаимодействие нейтроФилышх гранулопитов и макрофагов. Захват перитонеальныни макрофагами структур нейтроФилышх грапулояитон, содержащих антимикробные катнонпые белки, в течение днух суток стимулирует их метаболическую и Фагоцитарную активность.

о. 1Гл основании полученных яатшх предстлвлепа коипеппия о том, что содержание катиошппг белков прежде всего являетсг отражением функциональной актнвпости клетки. позволяет пенивать полноценность ее антимикробпого потенциала, контролировать Физиологические и патологические изменении системы нейтро-фкпьных грапулошггов. Прп этои состояние системы пейтроФиль-пых грапулоцитов ивляется однии из важнейших показателей уропия псспениФнческоя резистентности организма.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛЮРВАШШХ ПО ГЕНЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. лизинг Ю. А. Лизосоналыю-катиоиный тест как критерий оценки уровня неспепифической резистентности организна. // В сб. : Цитохимические и биохимические исследования в эксперименте и клинике. - Нальчик. - 197У. - С. 19-20.

2. Пигаревский В. Е., Назинг Ю. А.. Фокина И. Я. Лизосомалыю-кати-оиний тест и результаты его применения в экспериментальной и клинической практике-. //В сб. : Тканевая биология. -Тарту. 1900. - С. lt!3-126.

3. Пигаревский В. Е.. Назинг Ю. А. К нетодике применения лизосо-мально-катионного теста в лабораторной диагностической практике. //Лаб. дело. - 19Й1. - N10. - С. 579-582.

4. Назинг Ю. А.. Старосельская И. Я. Катиониые белки нейтроФилоци-тов при бронхолегочной патологии детей. // Е сб. : Вопр. иммуно логии и молекулярной биологии (тез. докл. ). - Нальчик. 1981. -Т. 2. - С. 64-65.

5. Кою'якои В. Н. . Ротова Г. Н.. Назинг Ю. А. НорФобиохинические основы функциональной активности нейтроФилов млекопитающих. //В сб. :Норфофункшюналыше аспекты неспепифической резистентности и демиелинизируютих заболеваний. - Л. -1981.- С. 31-45.

6. Пигаревский В. Е. . Назинг Ю. А.. Кокряков В. Н. Методика совместного выявления вероксилазы и катиенных белков в граг/лоцитах крови человека. //Лаб. дело.-19ß2. - H 5. -С. 263-265.

7. Икряена К. Ф. . Пигаревский Ч. Е.. Богданова А. В. . Назинг Ю. А., Гаврилоьа H. Н. . Данилова Н. А. Некоторые показатели неспециФической резистентности у детей с рсцидинирумпим бронхитом. // Вопр. охраны материнства и детства. - 1962. - Н 4. - С. 9-13.

0. Богданова А. В.. Назинг Ю. А.. Натушкина H. Н. Некоторые особенности несцедифической резистентности у детей с рецидивирующими и другими хроническини бронхолегочными заболеваниями. // В сб: Этиология и патогенез инФек. процесса при острых и хронических восп. заболеваниях легких. - Л. - 1902. - С. 39-42.

9. Пигаревский В. Е.. Кокряков В. Н.. назинг Ю. л. Цитохимия фер-нентных и неферменгных катиоиных белков нейтроФилонитов в норме и патологии. // 3-я Всес. конф. по натол. клетки, Носква, 19-21 01<Т. <982. тез. докл. - Н. - 1982. - С. 140-141.

10. Пигаревский В. Е., Назинг Ю. А.. Кокряков В. Н. Аноналыше гранулы нейтрофил дитов крови человек (методика выявления и диагностическое значение). / Лаб.дело. - 1983. - Н6. - С 3-5.

11. Алферов Б. П..Пигаревский В. Е..Ильина И. А. .Назинг Ю, А. Неспо-пифические Факторы зашиты при остгчх пневнониях у детей раннего возраста.//Вопр. окр. материнства и детства. -1983. • Кб. - С. 36-40.

12. Кокряков В. Н.. Назннг В. А. . рстппл Г. ». Антимикробная активность катисшшх белкоп полиморфноядерннх лейкоцитов при воспалении. //Всес. съезд патологоанатомов YTI. Тез. докл. - Ташкент. -

• 1983. - С. 175-178.

13. Назинг Ю. Л., Хелепииа Л. А. . Данилова H. Y функциональная активность нейтроФилов при рецидипнрукхисм бронхите. // В кн. . Рецидив, бронхит у детей и подростков. - Л. I9ß'l. - С. 37 40.

14. Богданова А. В. .Осидак Л. В.. Назинг Ю. л. .Хеленипа л. Л.. Онучин H.A. Некоторые особенности неспепифической резистентности и иммунологической реактивности у детей с острый бронхитом. //В кн. : Профилактика гриппа и других ОРЗ у детей. - л. - 19С4. - С. 101-105.

15. Лишенко В. В., Назинг Ю. А. Опенка и прогнозирование течения неспецифической энпиены плевры с помошыэ лизосомалыю-катионного теста. // В кп. : Общие и частные вопр. онконорФологии. - Л. :Ноди-

гшнг. - 1985. - С. 00-82.

16. Пигаревский П. К. , назинг Ю. А., Селиверстова П. Г. Методика окраски лизосональнкх катиошшх белков в гистологических nai.Типовых срезах биоитатов. //Арх. патол. -!9йб. nun. 7. -С. 2-04.

17. Пигаревский В. П., Назинг R. А.. Селинерсторл п. Г. Выяпление кати онш»х белков и пероксидазн ría полутотсих сгезлх. // дп.ч. патол. - 1986. - вып. 7. - с. 77-80.

10. Пигаревский В. Е. ■ Кудгеватых II. П. .Назинг Ю. А. . Кокряков В. И. Лиэосомалыго-катиоштый тест при гастгопголоплльпих злооленанних. // Лаб. дсло. - 1986. - h 7. - с. 397-401.

19. Гританин В. А. , Королек А. Н. . Качан Н. А. ■ Назинг Г. А.. Пигаревский В. Е.. Поляков II. Э. Влияние острой интоксикации хлорофосом на ьлктерипилные сиетеки гейтрс^члл в эксперименте. // В сб. :Частные гоир. онкокорфол. - л. гНединннл. - 1986. -с. 09 71.

20. Нартова И. В. .Назинг К.1. А. функциональная активность пептроФи-лов при охоговой болезни по лашпж лизосомально-катиопного 'геста. //В сб. ¡Частные попр. онкокорфол. -п. ¡Редипина. -1986. - С. ОТ-бу.

21. F-Пина H.A.. Глиыш S.U., Назинг Ю. Л. . Добровольская H.A. Исследование устойчивости организма к ннФекции в акушерской практике. // В сб. : Частные вопр. онкоиорфог.. - л. : недипима. -1985. - С. lOO-lOJ.

¿2. Филиппов В. К.. Назинг С. А.. Фролов G Л. Катионные белга» нейтроФилытых гранулопитов крови и костного мозг; при эмопио-налыю-бо. овен стрессе у крыс. // В сб. : Частные boiip. oiikopop-фол. - Л.: нелипшм. - 1986. - С. 109-112.

23. Пигаревский :. Е. .Назинг !.. А. .Кокряков В. I!..Селиверстова В. Г.. Лашиюва Н. А.. Алешина Г. Н. Клиническая морфология лизосом иейтроФильных гранулопитов. // 3 Псе с. снмл. "Структура и функция лизосон" ГбШМГИ. - 1936. - С. 15

24. Ralovich в. s., Kol-j-yaKov V. H.. Hazme Уч. A. .Kotova G, н.. Pu i-revsKli V. E. Data to the reilstance acainst I.. monocytonenes infection. //Proc. 9th Inter n. Sytop. of the Probiens of Listeriosis.

.- Hantes. - 1986. - P. 177-102.

25. Плстлленкоп В. Л. . Рришанин В. А.. Нлзичг ю. А. ИнОРматищюсть тестон иммунологического контроля лги лечение ткнллином больных пиелонефритами. //Военно-нед. ж. -1987.-Я П. - С. 20-30.

26. Пигапопский В. к. . Назинг Ч А. лизосомально-катиошгый тест (методическое письмо). - Л. - 1907. - 13с.

27. Пнгаревсгагй В. Е., назинг О. А.. Кокряков в. Н.. Сухопова Н. А.. Селиверстова В. Г.. Алешина Р. Н. эндогешше Факторы риска к развитии аутоинФекдношшх заболеваний в рлшем постнаталы/ом развитии. //В сб. :4acTiiue вопр. ошсокорФ. -Л. :Иедипипа. -1987. -С. i19-121. 20. Пигаревский В. Е.. назинг Ю. А.. Кокряков В. Н. Нолекуляр"ая патология прониелоиитагного грапулогенела при нейттюФильном мисло-поэзе у нлекошгтзкпих к г'»лопска. // IY Всес. ко"Ф. по патол. клетки. Тез. докл. - H. - 1907. - с. 164.

29. Пигаревский В. Е.. Назинг П. А. Метод опенки лизосомной секреторной активности нейтрофильмых гранулопитов с поиоыьг» диагностического очага воспаления. //Арх. патол.-i988. - вып. 7. - С. 91-94.

30. Скорипа И. Л.. Назинг Ю.А., Самойлова к. Л. ■ пигаревский В. Е. Влияние Уф-излучешт и аутотрапсфузии УФ-облученной крови на со дерзание кчтиошшх белков в иеитроФилыгах гранулошггах теля г. // Цитология. - 196J. - II 5. - С. 616-622,

31. Наз1шг D. А.. Кокряков В. Н. Экспериментальные модели резорр-тквной клеточной резистентности. И В сб. : Обшие и ' частные вопр. воспаления н иммупитета. -Л. :Недшнта. -1908. -С. 66 60.

32. Пигаревский В. Б.. Кокряков П. Н.. Назинг Г. А. . Селиверстова В. Г. . Алешина Г-Н. Наследственные и всзгастные дефициты антимикробных систем нейтроФилышх ггапулогштов. // В сб. : Клиническая морфоло

i-ия нейтроФилышх гранулоцитоь. - Л.: Наука. - 1988. - С. 76-86.

33. Назинг Ю. А. Результаты применения лизосонально-катионного теста в клинической практике, //в сб.: Клиническая морфология нейтроФилышх гранулоцитов. - л. : Наука. -1988.-С. 102-137.

34. нагтв Уи.А.. Danilova н. л, KoKrraKov V. N.. Sellverstova Y.G.. PiearevsKll V. Е. .Voros s. .Kercnyi H., Ralovich я Hematoloeical reactions of rabbits infected l. v.with Listeria strains of different virulence. // 10th Intern, srmp. on Listeriosis. Pecs. Huneary. 1988. Ab3tr. . p. 61.

35. Кучеренко А. л.. Селезнев И. с.. назмнг ю. А. Применение лизо-сомально-катиошюго теста при прогнозировании послеоперационных гнойных осложнений у больных инфекционным эндокардитом. //Вести, хирургии. -1989. - НИ. - С. 101-103.

36. Рязанов Е. Н.. Филатов A. I: . Зыбина н. н.. назинг с. А.. Алексеев г. с.. соловьев п. и влияние иннульсных гидродинамических воздействий на клетки крови in vitro и in vl/о. // Вюля экспе-рин. оиол. нед. . 1989. Н 12. с. 604 -606.

37. Берс jhh в. И. . Позняк А. л.. Иазинг ю. А. Состояние антимикробных систен неитро^нльных гранулопитов у молодых лиц в процессе их адаптации в Заполярье. //В сб: Патонорфол. опухолей и Фоновых заболеваний. - л.: Медицина. - 1989. - С. 87-89.

38. Назинг Ю. А.. Данилова Н. А. Реэорбтивная клеточная резистентность. //В сб. ¡Моделирование и клиническая характеристика Фагоцитарны' реакций. - Горький. - 1989. - С. 103-109.

39. Пи аревск- й В. Е.. Кокряков В. Н.. Назинг Ю. А.. Селиверстова В. Г. Возрастные иммуьодеФидиты системы пейтрофилыых гранулопитов. //В сб. : Коделирован..е и клиническая характеристика фагоцитарных реакций. - Горький. - 1989. - С. 103-109.

40. Пигарсвский В. Е. . НазИнг Ю. А.. Кокряков В. л. Возрастные имну-нодефициты системы нейтроФильных гранулоцитов. // YB Всес. съезд патологоанатомов. Тбилиси. 1909. Тез. докл. - Н. - 1989. - С. 232-233.

41. Алферов В. П.. Пигаревский Ь. Е.. Назинг Ю. А.. Ильина И. Я. Ли-зосонально-катионный тест в экспресс-диагностике пневнений у детей раннего возраста. // YH Всес. съезд патологоанатомов. Тбилиси, 1989. Тез. докл. • Н. - 1989. - С. 7-8.

42. Пигагевский В. Е.. Кокряков В. Н.. Назинг Ю. А.. Селиверстова В. Г.. Данилова Н. а. . Ыамоаа О. В. Биологическая роль катионных белков иейг*>оФилышх гранулоцитов пр воспалении. //IV Всес. съезд патофизиолог в, Кишинев. 1989. - Н. - 1969. -т. 2. - С. 451.

43. Назинг Ю. А. .Пигаревскй В. Е. .Данилова Н. А. .Селиверстова В. Г. Транзиторный дефицит антимикробных катиошшх белков у новорожденных. // I Всес. иммунологический съезд. Тез. докл. - Н. -1989. -Т. 2. -С. 237.

44. Кучеренко А. Л. Назинг Ю. А.. Селезнев Н. С.. Романчук А. В. Применение ¿.изосональио-катиошкич} теста в ранней диагностике послеоперационных гнойных осложнений у больных инфекционным эндокардитом. // В сб: Актуальные вопр. совершенств, диагностики и лечения. Тез. докл.. Л.: 1989. с. 70-71.

45. Hazins Yu. А.. Danilova Н. А. . KoKryaKov V. Н, Seilverstova V.G.. PiearevsKll V.E. .Varos S. .Kerenyl H. .Ralovich B. Haeraatoloaica. reactions of rabbits infected intravenously with Listeria strains of different virulence. //Acta Hcrobioioeica Hunearica.

- 1990. - vol.37, H I. - P. 135-144.

46. Пигаревский в. E. .Назинг Ю. А. .Кокряков В. Н. Возрастные иммунодефицита системы нейтрофкльных гранулоцитов. // арк. натол, 1990. - ВЫП. 6-С. 43-46.

47. Назинг Ю. А. функциональная морфология катиошшх белков ли.ю-сом нейтроФильных гганулопитов. //Вопр, мгл. химии. - 1990. -,н 6.

- С. 8-11.

'10. Костяков я. II, Данилов^ и. л.. Ляогагпа г. II., Новшсова II. С.. Панова о. В., Кузьмин В. о. Катиотше белки поптрофяльшя прануло-ггтов при Фагоцитозе и воспалешс!. ' // В еб: проблеиы иелиадлш и биологии сегодня и завтра. тез. докл. коп?. 100-летп» института.. Л., 1990.. С. 178-101.

49. Наз!П1Г ю. л. нейтроФильгше грапулогагш и система запита хозяина. // АРХ. патол. - 1991. - вып. 9. - С. 70-73.

50. Лгапюпл С. Л.. Алешина Г. И., Б-кагова т. В., Доценко Е. к., Журавлев А. В.. Назютг С. А. Новое в к.'лшико-лабораториоя оценке активности лосналителького процесса при острой пневмонии у летей. //3 национальный конгресс по болезням органов дпзагохя. - С. -Пб. - 1992. - тезисы N 112.

51. Пигаревския В. Е.. Кокряков В. Н.. Пазит' П. А. Яатиотше белки и неспепнФнческгя резистентность. II : Медицина. - 1993. - в печати.

ИЗОБРЕТЕНИЯ.

1. Краситель для выявления катиошшз белков. // Авт. спндетельст-ео СССР. - 1934. - Н 1163715. (Соавт, Пигаревский В. Е., Зельцер Г. л. , Данилова Н. А. )

2. Способ прогнозирования развития осле:шетШ при острых пневмониях у детей. // лит. свидетельство СССР. - 1986. - II 1251872. (Соавт. Пигаревсгай В. Е., Алферов В. П., Ильина И. Я. )

3. Способ прогнозирования исхода лечения гнойных менингитов у детги. //"вт. свидетельство СССР, Н 1490454. -1989. - Бил. П29. (Соавт. Сорокина и. и., Пнгаревский В. Е., Черных Я. Д. )

4.

- Григаш В.А.. Черни С.И., Пнгаревский В.Е., Короля fl.fi,, Назкнг И. А., ■йккеев Г. И. Способ Енйвленяя лиц, швергшся радвдюишу облуче-. нив. //Авг, свидетельство. -N 1760593, - 1S92.

РА1П1011АЛИЗЛТ0РСК1Щ ПГЕД/ГОЗНШЯ.

1. Способ опенки и прогнозирования течения неспецифической энпи-емч плеши с поиояью лизосоналыю-катионпого теста. // ВЛедА им. С. н. Кирова. - 1905. - Я2045/3. (Соавт. Лишенко В. в.)

2. Методика использования лизосомальио- катиоппого теста при лечении ран. // ВИедА и: . С. Н. Кирова. - 1906. - Н1314/4. (Соавт. Лишенко В. В. )

.Ъп. ßtMWjaC. ¿ff 7