Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Фитохимическое и технологическое исследование листьев осины обыкновенной

На правах рукописи

005019389

Лобанова Ирина Юрьевна

ФИТОХИМИЧЕСКОЕ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИСТЬЕВ ОСИНЫ ОБЫКНОВЕННОЙ

14.04.01 - технология получения лекарств 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

2 В ДПР Ш

Пермь-2012

005019389

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Алтайский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (г. Барнаул)

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Турецкова Вера Феопеновна

Официальные оппоненты:

Вдовина Галина Петровна, доктор фармацевтических наук, профессор, ЗАО "Медисорб", г. Пермь, директор по науке

Бубенчикова Валентина Николаевна доктор фармацевтических наук, профессор, Курский государственный медицинский университет, заведующая кафедрой фармакогнозии и ботаники

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита диссертации состоится «15» мая 2012 г. в 13' 00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.068.01 при ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России по адресу: 614990, г. Пермь, ул. Полевая, 2. Тел./факс (342) 233-55-01.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздравсоцразвития России (614070, г. Пермь, ул. Крупской, 46).

Дата размещения объявления о защите диссертации на сайте Министерства

образования и науки Российской Федерации http://www.rnon.gov.ru «_»

апреля 2012 г. и на сайте ПГФА http://www.pfa.ru «_» апреля 2012 г.

Автореферат разослан «13» апреля 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.068.01 кандидат фармацевтических наук, доцент

И.А. Липатникова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Осина обыкновенная Populus trémula L., относящаяся к семейству ивовых (Salicaceae), род тополь (Populus), является одним из интересных растительных источников биологически активных веществ (БАВ) фенольного характера, имеющим широкий ареал произрастания (европейская часть России, Сибирь, Дальний Восток и т.д.) и, следовательно, большие сырьевые запасы.

Ранее на кафедре фармацевтической технологии АГМУ было установлено, что доминирующее место среди БАВ гидрофильного характера коры осины обыкновенной занимают простые фенольные соединения и, прежде всего, фенологликозиды - производные салицина (салицин, популин, саликортин), а также фенолокислоты (п-кумаровая и феруловая кислоты) и их эфиры. При изучении полифенольных соединений в коре осины обыкновенной впервые установлено наличие флавонолов - рутина, гиперозида и кверцетина. Кроме того, были обнаружены дубильные вещества с преобладанием гидролизуемой группы (Турецкова В.Ф. с соавт., 2001).

В совместных исследованиях кафедры фармацевтической технологии АГМУ (г. Барнаул), НИИ фармакологии РАМН (г. Томск) и ЗАО «Алтайвитамины» (г. Бийск) на основе БАВ гидрофильной фракции коры осины был разработан оригинальный суммарный экстракционный противоязвенный препарат «Экорсин» в виде таблегированной лекарственной формы (Турецкова В.Ф. с соавт., 1996). В последующих работах сотрудников кафедры фармацевтической технологии совместно с кафедрой фармакологии АГМУ было доказано, что экстракт коры осины сухой и входящие в его состав простые фенольные соединения обладают в разной степени выраженной противовоспалительной активностью (Рассыпнова С.С. с соавт., 2010).

Не менее перспективным сырьевым источником перечисленных БАВ являются листья осины, которые ежегодно в значительных количествах накапливаются в качестве неиспользуемых отходов в процессе санитарной вырубки осины. По данным литературы, в основном зарубежных авторов, листья осины содержат аналогичные коре классы фенольных соединений: фенологликозиды (салицин, тремулацин, салицилоилтремулоидин, популин, тремулоидин, саликортин), фенолокислоты (п-кумаровая, кофейная, феруловая, коричная, галловая, хлорогеновая), флавоноиды (кверцетин, кемпферол, изорамнетин, лютеолин, рутин, кверцитрин), дубильные вещества (Растительные ресурсы СССР, 1986; Бородша Н.В., 2007; BateSmith Е.Е., 1962 и др.). Кроме того, листья осины достаточно широко используются в народной медицине России, европейских стран и Китая в виде настоев и настоек при ревматизме, подагре, хроническом воспалении мочевого пузыря, желудочных заболеваниях, геморрое, фурункулезе и др. (Кьосев П.А., 2002).

Следует отметить, что в настоящее время в литературе отсутствует информация об изучении состава БАВ листьев осины обыкновенной,

произрастающей в Сибирском регионе, а также разработке и валидации методик количественного определения указанных групп БАВ в данном виде сырья.

Все вышеизложенное свидетельствует об актуальности проведения комплексных фитохимических исследований листьев осины обыкновенной, необходимости разработки технологии фитопрепаратов на их основе и обоснования применения в медицинской практике.

Целью исследования является проведение целенаправленных исследований по изучению химического состава биологически активных веществ гидрофильной фракции листьев осины обыкновенной, заготовленных на территории Западной Сибири, и разработке на их основе лекарственного препарата противовоспалительного действия.

В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи:

1. Провести комплексное изучение химического состава БАВ гидрофильной фракции листьев осины обыкновенной и выбрать оптимальный срок заготовки сырья.

2. Разработать методики анализа и предложить показатели качества листьев осины обыкновенной.

3. Разработать рациональную технологию экстракта листьев осины сухого и провести его стандартизацию.

4. Изучить острую токсичность, противовоспалительную и антиоксидантную активности экстракционного препарата.

5. Теоретически и экспериментально обосновать состав и оптимальную технологию капсулированной лекарственной формы на основе разработанного экстракционного препарата, а также провести оценку ее качества.

6. Определить сроки годности сырья, сухого экстракта, капсулированной лекарственной формы и составить проекты нормативной документации на них.

Научная иовизна работы. Впервые проведено углубленное комплексное изучение химического состава БАВ гидрофильной фракции (фла-воноиды, фенологликозиды, фенолокислоты, дубильные вещества, полисахариды) листьев осины обыкновенной, заготовленных на территории Западной Сибири.

Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена рациональная технология сухого экстракта методом многоступенчатого противо-точного экстрагирования с последующим сгущением и вакуумной сушкой.

Приоритет разработанной технологии подтверждается решением о выдаче патента на изобретение - форма №01 ИЗ-2011, заявка №2011112184/15 «Способ получения средства, обладающего противовоспалительным действием», авторов Турецковой В.Ф., Лобановой И.Ю., Зверева Я.Ф., Лампатова В.В.

Изучены технологические свойства экстракта, выбран оптимальный состав и разработана технология капсулированной лекарственной формы на

основе изучаемого экстракта, обеспечивающие высокие показатели фармацевтической доступности.

Разработаны методики качественного обнаружения (методы ТСХ, ВЭЖХ, спектроскопии) и количественного определения (спектрофотомет-рия) простых и сложных фенольных соединений данного вида сырья, экстракта и капсул на его основе, проведена их вапидация.

Доказана безвредность экстракта листьев осины сухого и выявлена противовоспалительная (на моделях острого и хронического воспаления) и антиоксидантная (in vitro) активности.

Практическая значимость работы и внедрение результатов исследования. На основании проведенных экспериментов из листьев осины обыкновенной, имеющей большие сырьевые запасы, создан эффективный стабильный экстракционный препарат, обладающий противовоспалительной активностью, на основе которого разработаны состав и технология капсул «Элоскап».

По результатам исследований разработаны проекты ФСП: «Листья осины обыкновенной», «Экстракт листьев осины сухой», «Элоскап капсулы 0,5» и лабораторные регламенты на производство экстракта листьев осины сухого и капсул «Элоскап» 0,5.

В ООО «АлтайДар» (г. Барнаул) проведена апробация предлагаемых технологий получения экстракта листьев осины сухого и «Элоскап капсул 0,5» (акты апробации от 26.10.11 г.). Материалы диссертационной работы внедрены в учебный процесс на следующих кафедрах ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития Российской Федерации: фармацевтической технологии, фармацевтической химии с курсами органической и токсикологической химии, фармакогнозии и ботаники (акты внедрения от 07.10.11 г.).

Апробация работы. Основные положения исследований доложены и обсуждены на X, XI, XII научно-практических конференциях молодых ученых «Молодежь - Барнаулу» (г. Барнаул, 2008, 2009, 2010); межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 30-летию фармацевтического факультета ГОУ ВПО «КемГМА Росздрава», «Фармацевтическая наука и практика: достижения и перспективы» (Кемерово, 2009); 64-й, 65-й, 66-й региональной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (г. Пятигорск, 2009, 2010, 2011); межрегиональной научно-практической конференции «35 лет фармацевтическому факультету АГМУ: итоги и перспективы» (Барнаул, 2010); межрегиональной научной конференции с международным участием, посвященной 70-летию фармацевтического факультета СибГМУ (г. Томск, 2011); II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Ученые Урала и Сибири - развитию отечественной фармации: от синтеза до инновационных лекарственных средств», посвященной 300-летию М.В. Ломоносова (г. Новосибирск, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 16 работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Личное участие автора в получении результатов, изложенных в диссертации, заключается в том, что он является основным исполнителем исследований, автором написания публикаций по теме диссертации и всех глав диссертации. При выполнении работы автор освоил и самостоятельно выполнил все методики исследования, провел обработку данных с использованием современных статистических методов.

Связь задач исследований с проблемным планом. Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России (номер государственной регистрации 01200600351). Тема утверждена на заседании научно-координационного совета ГОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития Российской Федерации (протокол № 9 от 20.11.2008 г.).

Положения, выносимые на защиту:

- результаты фитохимического изучения гидрофильной фракции БАВ листьев осины обыкновенной;

- данные по изучению технологических свойств изучаемого сырья и технологических факторов, влияющих на процесс извлечения фенольных соединений;

- итоги исследований по выбору рациональной технологии экстракта листьев осины сухого и его стандартизации;

- результаты изучения острой токсичности, противовоспалительной и антиоксидантной активности in vitro экстракта листьев осины сухого;

- данные по изучению технологических свойств экстракта, выбору оптимального состава, технологии и стандартизации капсул «Элоскап»;

- экспериментальные данные по изучению стабильности листьев осины обыкновенной, экстракта листьев осины сухого и капсул «Элоскап».

Автор выражает благодарность сотрудникам кафедры фармакологии ГБОУ ВПО «АГМУ» Минздравсоцразвития РФ; д-ру мед. наук, профессору Я.Ф. Звереву; д-ру биол. наук, профессору В.В. Лампатову; канд. мед. наук, ассистенту кафедры О.С. Талалаевой за помощь в проведении фармакологических исследований разработанного экстракционного препарата.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 183 страницах машинописного текста, содержит 60 таблиц, 24 рисунка, 17 приложений и список литературы, включающий 157 литературных источника, в том числе 28 на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность темы, определены основные цели и задачи, показана научная новизна и практическая значимость работы, представлены основные положения, выносимые на защиту.

Первая глава содержит обзор отечественной и зарубежной литературы, отражающий современное состояние исследований в области фитохимического изучения, фармакологических свойств и применения в медицинской

практике осины обыкновенной. Кроме того, представлены данные, свидетельствующие о значении растительных лекарственных средств в лечении воспалительных заболеваний.

Вторая глава посвящена описанию объектов исследования, а также методам исследования, используемым в фитохимических, технологических, биофармацевтических и фармакологических экспериментах.

В третьей главе приведены результаты комплексного изучения химического состава БАВ гидрофильной фракции листьев осины обыкновенной и выбора оптимального срока заготовки сырья.

В четвертой главе приведены результаты исследований по определению технологических параметров листьев осины обыкновенной, выбору рациональной технологии экстракта листьев осины сухого и его стандартизации, а также разработке технологической схемы получения. Изложены результаты фармакологического изучения безвредности экстракта листьев осины сухого, а также его противовоспалительной и антиоксидантной активностей.

В пятую главу включены результаты разработки и исследования капсу-лированной лекарственной формы с экстрактом листьев осины сухим.

В приложении представлены результаты изучения микробиологической чистоты, сроков годности листьев осины обыкновенной, экстракта листьев осины сухого и капсул «Элоскап», проекты ФСП, лабораторные регламенты, основные документы, подтверждающие внедрение результатов диссертационной работы.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Объекты и методы исследования

Объектами исследования служили 5 серий листьев осины обыкновенной (Populus trémula L.), семейство ивовых (Salicaceae), род тополь (Populus). Заготовку сырья осуществляли после окончания плодоношения в летний период (2008-2010 гг.) в различных районах Алтайского края и Новосибирской области.

Изучение химического состава БАВ гидрофильной фракции листьев осины обыкновенной проводилось с помощью общепринятых качественных реакций, методов тонкослойной (ТСХ) и высокоэффективной жидкостной (ВЭЖХ) хроматографий. Исследования проводили в сравнении со стандартными образцами (СО) фенольных соединений: кверцетина, кемпферола, кверцитрина, рутина (Sigma-Aldrich, Германия), изорамнетина, лютеолина, гиперозида (Sigma-Aldrich, США), мирицетина (Sigma-Aldrich, Франция); салицина, тремулацина («Fluka», Германия); п-кумаровой, феруловой, коричной, кофейной, хлорогеновой кислот (Sigma-Aldrich, США). Выделение суммы фенольных соединений осуществляли с применением метода адсорбционной колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте (фракция 50160 цт, «Fluka», Германия) по методике, используемой ранее при выделении

фенольных соединений коры осины (Турецкова В.Ф. с соавт., 2001). Для исследования физико-химических и технологических свойств растительного сырья, экстракта и капсулируемых смесей использовали стандартные методики.

Определение острой токсичности экстракта листьев осины сухого выполняли согласно «Методическим указаниям по изучению общетоксического действия фармакологических веществ» (Хабриев Р.У., 2005). Фармакологические исследования проводились совместно с кафедрой фармакологии Алтайского государственного медицинского университета и включали в себя изучение противовоспалительной активности на моделях острого и хронического воспаления, а также антиоксидантной активности in vitro.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием программ Statistica 6.1 и Microsoft Excel. Результаты фитохимических и технологических исследований (Р = 95%) обрабатывали при помощи /-критерия Стьюдента по стандартным методикам ГФ XI; данные фармакологических исследований - с использованием параметрического í-критерия Стьюдента и непараметрического U-критерий Манна—Уитни. Достоверными считали различия при достигнутом уровне значимости р<0,05.

2. Изучение химического состава гидрофильной фракции биологически активных веществ листьев осины обыкновенной

С помощью общепринятых качественных реакций в листьях осины обнаружены такие группы соединений, как флавоноиды (цианидиновая проба, реакции с растворами свинца ацетата, натрия гидроксида, алюминия хлорида, железа хлорида (III) и реактивом Вильсона), фенологликозиды и феноло-кислоты (диазореактив, железа хлорида раствор 2%, меди сульфата раствор 10%), дубильные вещества конденсированной и гидролизуемой групп (квасцов железоаммонийных раствор 1%, средней соли ацетата свинца раствор 10% в присутствии уксусной кислоты 10%, бромная вода, натрия нитрит в присутствии хлористоводородной кислоты 0,1 н), полисахариды (спирт этиловый 95%).

Флавоноиды. Исследование состава флавоноидов 40% спиртовых извлечений из листьев осины обыкновенной и их гидролизатов (хлороводородной кислоты раствор 10% в спирте этиловом 40%) методом ТСХ проводили на пластинках «Sorbfil ПТСХ-П-В» соответственно в системах растворителей бутанол: уксусная кислота: вода (4:1:5) и бутанол: уксусная кислота: вода (4:1:2), при этом в листьях осины было выявлено пять флавоноидных соединений, два из которых по величине Rf и цвету флюоресценции соответствовали аналогичным показателям СО флавонолов гиперозида (пятно с Rf = 0,68) и рутина (пятно с Rf = 0,61). В гидролизате спиртовых извлечений показано наличие четырех флавоноидных соединений, одно из которых по величине Rf и цвету флюоресценции соответствовали аналогичным показателях СО гиперозида (Rf = 0,68), одно одновременно - СО кверцетина, кемп-

ферола и мирицетина (ЯГ = 0,79) и два - не идентифицированные флавонои-ды (ЯГ =0,50; 0,73).

Для получения более полной информации о составе флавоноидов, содержащихся в листьях осины обыкновенной, дальнейшее исследование их качественного состава проводили методом ВЭЖХ на хроматографе Мили-хром А-02. Подвижная фаза: А - 0,01% водный раствор трифторуксусной кислоты (ТФУК); В - 100% ацетонитрил. Скорость подачи элюента 100 мкл/мин, объем пробы - 2 мкл, температура колонки 35°С; градиент 5-55% элюента Б. Идентификация соединений осуществлялась по времени удерживания и характеру УФ-спектров, снятых в процессе хроматографирования (табл. 1).

Таблица 1

Хроматографические и спектроскопические характеристики

флавоноидов листьев осины обыкновенной_

№ пика Время удерживания, мин. Максимумы поглощения, нм Заключение

Спиртовое извлечение (спирт этиловый 40%)

1 8,35 215,240 пл., 325 хлорогеновая кислота

2 9,42 200, 260-263, 355 фенолыюе соединение

3 10,17 201,325 фенолокислота

4 11,91 195,255, 355 гликозид или эфир флавонола или флавона

5** 13,90 204,255, 355 рутин

15,11 204, 256, 355 гиперозид

7 16,24 204, 257,350 кверцитрин

8* 16,58 194,265, 350 гликозид или эфир флавонола или флавона

Гидролизат спиртового извлечения

6** 15,11 204,256,355 гиперозид

8 16,58 194,265,350 гликозид или эфир флавонола или флавона

9* 18,48 207,254,360 мирицетин

10 19,82 205,263,355 агликоц или моногли-козид флавонола или флавона

11»*** 21,12 202,255, >360 кверцетин

12* 24,18 197,265, >360 кемпферол

Стандартные образцы

Мирицетин 18,48 207,254,360

Кверцетин 21,47 202,255, >360

Кемпферол 24,58 197,265, >360

Рупш 13,90 204,255,355

Гиперозид 15,11 204, 256, 355

Кверцитрин 16,24 204,257,350

Примечание, относительная величина наиболее выраженных пиков показана увеличением количества*.

Анализируя данные проведенных исследований (табл. 1), можно сделать вывод о том, что в спиртовом извлечении листьев осины присутствуют пять флавоноидов в форме гликозидов, три из которых по времени удерживания и характеру УФ-спектра в сравнении с аналогичными показателями СО идентифицированы как гиперозид, рутин и кверцитрин. Следует отметать, что гиперозид в данном сырье нами был обнаружен впервые. Гидролиз приводит к появлению четырех новых соединений в форме агликонов флавоноидов, три из которых по вышеуказанным показателям идентифицированы как мирицетин, кверцетин и кемпферол.

Фенологликозиды. Исследование фенологликозидов нативного водного извлечения из листьев осины методом ТСХ проводили на пластинках «Sorbfil ПТСХ-П-В» в системе растворителей этилацетат: п-ксилол: муравьиная кислота: вода (35:1:2:2) в сравнении с растворами СО салицина и тремулацина. В водном извлечении было установлено наличие восьми фенологликозидов, в том числе четырех фенологликозидов - производных салицина, приобретающих розовое окрашивание после обработки серной кислоты раствором 4% в спирте этиловом 95%, среди которых по величине Rf и характеру окрашивания в сравнении с аналогичными показателями СО пятно с Rf = 0,25 соответствует салицину, а пятно с Rf = 0,74 - тремулацину.

Изучение фенологликозидов вышеуказанного водного извлечения методом ВЭЖХ проводили на хроматографе Милихром А-02. Подвижная фаза: А - 0,01% водный раствор трифторуксусной кислоты (ТФУК); В -100% ацетонитрил, градиент 5-55% элюента Б. Идентификацию соединений осуществляли по времени удерживания и характеру УФ-спектров, снятых в процессе хроматографирования, при этом было выявлено наличие восьми фенологликозидов, в том числе салицина (т=8,35 мин; - 212, 268 нм) и тремулацина (т=23,78 мин; - 194, 222, 272 нм), обнаруженных ранее в сырье методом ТСХ.

Фенолокислоты. Для изучения состава фенолокислот листьев осины обыкновенной методом ВЭЖХ на хроматографе «Милихром А-02» был получен «реэкстракт» спиртового извлечения при рН=2 (этилацетат: диэтиловый эфир (1:1)) с последующим удалением органических растворителей и растворении в спирте этиловом 40%.

Анализ времен удерживания, характера УФ-спектров и спектральных соотношений позволяет сделать заключение о том, что в составе эфирно-этилацетатного реэкстракга присутствуют четыре фенолокислоты и/или их эфиры, среди которых идентифицированы хлорогеновая кислота (т=8,96 мин; Хпах- 215, 240 пл., 325 нм) и эфиры п-кумаровой (т= 10,34 мин; Х^я - 230, 302 пл., 312 нм), феруловой (т=11,04 мин; ^ - 240, 325 нм) и коричной (т=11,58 мин; Хпа, - 235,315 нм) кислот.

Для выделения суммы фенольных соединений из листьев осины использовали известную методику с применением метода адсорбционной колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте (Турецкова В.Ф., 2001). Простые фенольные соединения элюировали с колонки водой, после

чего флавоноиды - спиртом этиловым 40%. На основе водного элюата получали сумму простых фенольных соединений, на основе спиртового -сумму флавоноидов. Изучение состава выделенных фенольных соединений осуществляли методом ВЭЖХ (рис. 1).

Рис. 1. Хроматограммы выделенных сумм флавоноидов (А) и простых фенольных соединений (Б) листьев осины обыкновенной

А Б

2 - рутин; 3 - гиперозид; I - салицин; 7 - эфир п-кумаровой

4 - кверцитрин кислоты; 9 - рутин;

10 - гиперозид; 15 - тремулацин

На хроматограмме выделенной суммы флавоноидов (рис. 1А) выявлено наличие пяти флавоноидов, обнаруженных ранее в сырье. Тождественность аналитических сигналов позволяет идентифицировать три из них как гиперозид, рутин и кверцитрин. На хроматограмме суммы простых фенольных соединений (рис. 1Б) обнаружено пятнадцать пиков, из которых по характеру УФ-спектров семь соединений отнесены к фенологликозидам, в том числе салицин и тремулацин, три - к производным фенолокислот, три - к флавоноидам и два - к фенольным соединениям, возможно являющимся ассоциированными производными фенологликозидов и фенолокислот. Обнаружение остаточных количеств флавоноидов в данной фракции, на наш взгляд, обусловлено их гликозидной формой. Учитывая невозможность окончательного разделения флавоноидов и простых фенольных соединений, была получена объединенная фракция, которая в дальнейшем использовалась для проведения фармакологических исследований.

Количественное содержание основных групп БАБ гидрофильной фракции листьев осины обыкновенной. Для определения количественного содержания флавоноидов в листьях осины был использован метод дифференциальной спектрофотометрии, в основе которого лежит реакция комплексообразования флавоноидов с алюминия хлоридом. Целесообразность использования данного метода подтверждается характером дифференциалыюго спектра с максимумом поглощения при длине волны 412 им, что характерно для хелатов флавоноидных

соединений и, в частности, для флавонола гиперозида, содержащегося в

Рис. 2. УФ-спектры комплексов флавоноидов спиртового извлечения (спирт этиловый 40%) из листьев осины и СО гиперозида с алюминия хлоридом: 1 - флавоноиды спиртового извлечения; 2 - СО гиперозида

В результате проведенных исследований были выбраны оптимальный способ и время получения извлечения - 3 часа на магнитной мешалке; время протекания реакции комплексообразования - 30 минут; количество алюминия хлорида раствора 2% в спирте этиловом 40% - 2 мл и количество гексаметилентетрамина водного раствора 5% - 3 мл, а также определен удельный показатель поглощения гиперозида при длине волны 412 нм - 327,38±7,58. Экспериментальным путем установлены параметры линейности (коэффициент корреляции 0,9991), повторяемости (И^Ю = 3,84%), воспроизводимости (ЯЭО = 4,00%) и правильности (критерий приемлемости = 99,31%) указанной методики, что говорит о возможности ее использования для стандартизации листьев осины обыкновенной.

В связи с близостью качественного и количественного состава фенологликозидов в коре и листьях осины их количественное содержание определяли методом прямой спектрофотометрии по методике, разработанной на кафедре фармацевтической технологии для коры осины обыкновенной, с предварительной очисткой водного раствора листьев осины от сложных фенольных соединений, при длине волны 268 нм в пересчете на салицин. Количественное содержание фенолокислот определяли широко используемым для определения данной группы БАВ методом прямой спектрофотометрии в пересчете на хлорогеновую кислоту (Бородша Н.В., 2004). При этом были проведены дополнительные исследования по выбору оптимального экстрагента (спирт этиловый 40%), аналитической длины волны (325 нм), режима экстрагирования (3 часа на магнитной мешалке), подобраны необходимые разведения и определен удельный показатель поглощения хлорогеновой кислоты (517,66±10,46).

Целесообразность использования данных методов подтверждается характером УФ-спектра очищенного водного извлечения из листьев осины (Х=267±1нм) и УФ-спектра 40% спиртового извлечения листьев осины

(>.=267±1нм; А.=322±4нм) соответственно (рис. 3, 4), а также результатами проведенной нами вапидационной оценки, согласно которой методики обладают соответственно линейностью (коэффициенты корреляции 0,99913 и 0,99953), повторяемостью (ЯБО = 3,75% и 3,99%), промежуточной прецизионностью (ИЖ = 6,92% и 4,92%) и правильностью (критерий приемлемости = 99,25% и 99,50%).

£ О .Б «

ЧА

250 300 250 400 450 500 Шаи«|елд№ (пт]

Рис. 3. УФ-спектр очищенного водного извлечения из листьев осины обыкновенной

Рис. 4. УФ-спектр 40% спиртового извлечения листьев осины обыкновенной

Для количественного определения дубильных веществ (суммы легкоокисляемых веществ) и полисахаридов были использованы стандартные методики - перманганатометрический метод согласно ГФ XI изд. и гравиметрический метод, после осаждения данных соединений спиртом этиловым 95% соответственно. Результаты исследований по количественному определению основных групп БАВ листьев осины представлены в табл. 2.

Таблица 2

Количественное содержание основных групп биологически активных и

сопутствующих веществ в листьях осины

№ серии Содержание ФЛ (в пересчете на гиперозид), % Содержание ФГ (в пересчете на салицин), % Содержание ФК (в пересчете на хлорогеновую кислоту), % Содержание дубильных (легкоокисляемых) веществ, % Содержание полисахаридов, %

1 1,19 ±0,05 3,67±0,06 1,50±0,06 2,71±0,12 3,29±0,15

2 2,10 ±0,05 4,40±0,08 2,46±0,09 4,98±0,12 3,53±0,07

3 1,02±0,05 3,79±0,14 1,36±0,06 2,35±0,09 2,68±0,09

4 1,54±0,05 5,64±0,18 2,32±0,07 4,91±0,14 2,48±0,05

5 0,97±0,04 4,28±0,15 1,06±0,05 4,95±0,22 5,52±0,14

Из данных, представленных в табл. 2, видно, что содержание флаво-ноидов в листьях осины обыкновенной в пересчете на гипсрозид в различных сериях сырья варьирует от 0,97±0,04% до 2,10±0,05%; фенологликози-дов в пересчете на салицин - от 3,67±0,06% до 5,64±0,18%: фенолокислот в

пересчете на хлорогеновую кислоту - от 1,06±0,05% до 2,46±0,09%; дубильных веществ (легкоокисляемых веществ) - от 2,35±0,09% до 4,98±0,12%, полисахаридов - от 2,48±0,05% до 5,52±0,14%.

Зависимость содержания БАВ от фаз вегетации и места произрастания. Учитывая тот факт, что качественный состав БАВ растительного сырья зависит от множества факторов, в том числе от места и времени заготовки, была проведена серия экспериментов по определению содержания флавоноидов и фенологликозидов в листьях осины, заготовленных в различных районах Алтайского края и Новосибирской области. Полученные данные свидетельствуют о том, что нет резких различий в содержании указанных веществ в листьях осины различных районов заготовки. Изучение динамики накопления флавоноидов и фенологликозидов в листьях осины обыкновенной в зависимости от срока заготовки (май - октябрь), позволило установить, что качественный состав исследуемых групп БАВ листьев осины за данный период практически идентичен. Заготовку листьев осины обыкновенной возможно проводить в течение всего летнего периода, так как, несмотря на некоторые колебания в содержании указанных групп фенольных соединений, их содержание в сырье достаточно высоко (флавоноидов от 0,99±0,04% до 1,35±0,0б%, фенологликозидов от 4,33±0,09% до 5,57±0,10%).

Вышеприведенные исследования по изучению химического состава гидрофильной фракции листьев осины обыкновенной были использованы для выбора показателей качества и методик анализа при стандартизации изучаемого сырья и составления проекта ФСП «Листья осины обыкновенной». Стандартизацию листьев осины обыкновенной проводили на 5 сериях сырья, согласно ОСТу 91 500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» по следующим показателям: описание, подлинность, потеря в массе при высушивании (не более 10%), содержание основных биологически активных веществ (флавоноидов - не менее 0,9% и фенологликозидов - не менее 3%), зола общая, зола нерастворимая в хлористоводородной кислоты растворе 10%, допустимые примеси, микробиологическая чистота (категория 4Б). Установлено, что предварительный срок годности в условиях естественного хранения для листьев осины обыкновенной составляет 2 года.

3. Разработка технологии, стандартизация, изучение острой токсичности и специфической активности экстракта листьев осины сухого

Разработка технологии. Решение вопроса по разработке ресурсосберегающей технологии экстракта листьев осины сухого было начато с выбора - оптимального экстрагента, которым в результате

исследований был выбран спирт этиловый 40%, т.к. он обеспечивает максимальное извлечение экстрактивных веществ и фенолокислот по сравнению с водой, спиртом этиловым 20% и 70%; извлекает большее количество флавоноидов по сравнению с водой и спиртом этиловым 20%, одинаковое количество флавоноидов со спиртом этиловым 70%, и по сравнению с последним обеспечивает меньший расход ценного экстрагента.

В качестве параметров сравнительной характеристики процесса экстрагирования фенольных соединений из листьев осины были применены время наступления равновесного состояния в системе «сырье-экстрагент» и коэффициент вымывания. Кроме того, были определены основные технологические свойства и параметры процесса (насыпная масса, коэффициент поглощения сырьем экстрагента, ёмкость диффузора и соотношение «сырье: экстрагент») (табл. 3).

Таблица 3

Техпологические свойства сырья и параметры технологического

процесса

Параметр Измельченность сырья, мм

5-10 10-15 15-20

1. Время наступления равновесного состояния, час

1.1. по флавоноидам 10 22 22

1.2. по фенологликозидам 12 22 более 24

2. Коэффициент вымывания

2.1. по флавоноидам 0,6 0,32 0,23

2.2. по фенологликозидам 0,25 0,16 0,10

3. Скорость свободного слива извлечений, мл/сек 1,04 1,02 0,98

4. Насыпная масса, г/см"1 0,101 0,068 0,053

5.Коэффициент поглощения сырьем экстрагента (К„), см3/ г 1,9 - -

6. Ёмкость диффузора см3 (на 100 г листьев осины) 1390 - -

7. Соотношение «сырье: экстрагент» 1:4 - -

Примечание: «-» показатель не определялся

Из данных, приведенных в табл. 3, видно, что оптимальными технологическими параметрами обладает сырье измельченностыо 5-10 мм: время настаивания - 12 часов; коэффициент вымывания по флавоноидам -0,6; коэффициент вымывания по фенологликозидам - 0,25; коэффициент поглощения сырьем экстрагента — 1,9 см3/г; насыпная масса сырья - 0,101 г/см3; оптимальное соотношение «сырье: экстрагент» - 1:4 и ёмкость диффузора -1390 см3 на 100 г листьев осины.

С учетом выбранных значений технологических факторов, влияющих на процесс извлечения БАВ гидрофильного характера, и расчетов тео-

ретической эффективности экстрагирования была разработана оптимальная технология получения экстракта листьев осины сухого методом многоступенчатого противоточного экстрагирования с законченным циклом в батарее из 5 перколяторов с последующим сгущением и вакуумной сушкой, который обеспечивает значительный выход по флавоноидам (до 86,05%), фенологликозидам (до 83,65%) и экстрактивным веществам (до 87,41%).

Стандартизация экстракта листьев осины сухого была проведена на 5 сериях экстракта, полученных по разработанной технологии, согласно ОСТу 91 500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». Все серии экстракта по показателям: описание, потеря в массе при высушивании, тяжелые металлы, микробиологическая чистота (категория 4Б) - соответствовали предъявляемым требованиям. Для определения подлинности экстракта были изучены следующие параметры: характер УФ-спектра раствора экстракта в спирте этиловом 40%, качественный состав флавоноидов (ВЭЖХ) и фенологликозидов (метод ТСХ). Характер УФ-спектра и состав основных групп БАВ изучаемого экстракта были аналогичны исходному сырью. В качестве методов количественного определения флавоноидов и фенологликозидов в экстракте были предложены методики, аналогичные методикам определения данных групп фе-нольных соединений в листьях осины, при этом стадия извлечения БАВ была заменена на стадию растворения точной навески экстракта в соответствующем растворителе (спирт этиловый 40% при анализе флавоноидов, вода — фенологликозидов). Рациональность использования данных методик количественного определения флавоноидов и фенологликозидов при анализе экстракта листьев осины сухого была подтверждена данными определения повторяемости (сходимости) результатов ({^Б = 2,19% и 4,10% соответственно). Содержание флавоноидов в изучаемых экстрактах достигало 6,89±0,14%, фенологликозидов - 22,84±0,99%. Установлено, что предварительный срок годности в условиях естественного хранения для экстракта листьев осины сухого составляет 1,5 года.

Полученные результаты положены в основу составления проекта ФСП «Экстракт листьев осины сухой» и лабораторного регламента на получение экстракта листьев осины сухого.

Необходимыми этапами разработки нового лекарственного средства, обладающего противовоспалительным действием, является определение не только его специфической, но и возможной антиоксидантной активности, а также изучение его безвредности.

Определение острой токсичности экстракта листьев осины сухого проводили на 40 белых крысах линии Х^аг (массой 160-230 г) и 40 белых мышах (массой 20-25 г). Животные были разделены на 4 группы. В качестве объектов исследования использовали экстракт листьев осины сухой в четырех дозировках (2500 мг/кг, 5000 мг/кг, 7500 мг/кг, 10000 мг/кг). Об-

щая продолжительность наблюдения за животными после введения исследуемого препарата составила 14 дней. По результатам исследований экспериментальный препарат отнесен к IV классу опасности (малоопасные вещества), т.к. гибели животных в исследуемых дозировках не наблюдалось.

Изучение противовоспалительной активности экстракта листьев осины сухого и входящей в его состав суммы фенольных соединений на моделях острого и хронического воспаления проводили на белых крысах обоего пола линии Vistar (массой 150-200 г), которые били разделены на 6 групп. В качестве объектов исследования использовали экстракт листьев осины сухой в трех дозировках (100 мг/кг, 150 мг/кг, 180 мг/кг) и выделенную сумму фенольных соединений (7,5 мг/кг). Препаратом сравнения была выбрана ацетилсалициловая кислота (100 мг/кг).

На модели острого воспаления экстракт листьев осины сухой во всех исследуемых дозах проявил противовоспалительную активность, однако при использовании дозы 180 мг/кг к концу периода наблюдения (через 4 часа после введения флогистика) отмечался более существенный эффект, равный 35%, который можно охарактеризовать как выраженное противовоспалительное действие. Сходную противовоспалительную активность на уровне 22-27% даже в минимальных дозах (7,5 мг/кг) проявила сумма фенольных соединений. Полученный эффект превышал антифлогистическую активность ацетилсалициловой кислоты, взятую в дозе 100 мг/кг.

На модели хронического воспаления противовоспалительная активность экстракта подтвердилась. При этом, наибольший эффект проявился в отношении подавления процесса пролиферации, что выразилось в значительном снижении сухой массы образовавшейся гранулемы по сравнению с данным показателем контрольной группы на 22-25% при использовании экстракта в различных дозах. Наибольшую степень достоверности по указанному показателю продемонстрировал экстракт в дозе 180 мг/кг (р<0,01). Аналогичные результаты были получены при применении суммы фенольных соединений, которая обусловила снижение сухой массы гранулемы на 24,8% (р<0,01).

Антиоксидантная активность. Влияние экстракта листьев осины сухого на процессы свободно-радикального окисления оценивалось нами in vitro по способности препарата активировать или ингибировать железо-аскорбат индуцированное окисление Твина 80 с последующим фотоколориметрическим определением продуктов окисления.

Полученные данные свидетельствуют о том, что биологически активные вещества изучаемого экстракта способны подавлять процессы свободно-радикального окисления, моделируемые in vitro, что подтверждают высокие показатели общей антиоксидантной активности (67,0±1,1%). Низкие показатели прооксидантной активности (25,1±1,7%) указывают на то,

что данный экстракт не обладает способностью прямо индуцировать пере-кисное окисление липидов клеточных мембран.

4. Разработка технологии и стандартизация капсул с экстрактом листьев осины сухим

Одной из перспективных лекарственных форм для сухих экстракционных препаратов из растительного сырья являются твердые капсулы, которые обеспечивают высокую биологическую доступность, защиту экстракта от влияния факторов внешней среды, а также при необходимости маскируют его вкус и запах, в связи с чем нами для экстракта листьев осины сухого была выбрана данная лекарственная форма.

Для разработки рациональной технологии препарата в виде твердых желатиновых капсул были изучены такие технологические свойства экстракта листьев осины сухого, как сыпучесть, насыпная масса, потеря в массе при высушивании, гигроскопичность (табл. 4).

Таблица 4

Технологические свойства экстракта листьев осины сухого

Серия экстракта Сыпучесть, г/сек Угол естественного откоса, градусы Насыпная масса, г/см3 Потеря в массе при высушивании, % Гигроскопичность, %

1 8Д7±0,30 38,8±1,04 0,833±0,001 3,62±0,12 30,60±0,37

2 6,25±0,19 36,6*0,68 0,814±0,006 4,51±0,04 29,37±1Д4

3 6,75±0,09 38,8±1,04 0,839±0,009 3,27±0,09 31,06±0,28

4 6,90±0,29 40,2±1,04 0,834±0,001 4,35±0,13 30,44±0,87

5 8,08±0,25 40,3± 1,04 0,833±0,002 4,56±0,14 28,94±0,42

Изучение технологических свойств экстракта листьев осины сухого (табл. 4) показало, что он обладает хорошей сыпучестью (от 6,25±0,19 г/сек до 8,17±0,30 г/сек); большой насыпной массой (от 0,814±0,006 г/см3 до 0,839±0,009 г/см3); невысокой влажностью (потеря в массе при высушивании от 3,27±0,09% до 4,56±0,14%) и достаточно высокой гигроскопичностью (до 31,06±0,28%).

Анализ технологических свойств исследуемого экстракта позволил предположить возможность изготовления твердых желатиновых капсул с крышечкой с добавлением вспомогательных веществ, снижающих отсыреваемость и не ухудшающих других технологических свойств экстракта. В связи с этим были изучены основные технологические свойства вспомогательных веществ, наиболее доступных и распространенных при изготовлении капсул, разработано и получено 3 прописи с включением магния оксида, лактозы и кальция карбоната, обладающих наименьшей гигроскопичностью (табл. 5).

Полученные данные свидетельствуют о том, что во всех случаях уменьшаются гшроскопичность и отсыреваемость, увеличивается или незначительно уменьшается насыпная масса, но при этом снижается сыпучесть порошкообразного материала. Сопоставление значений по последнему показателю позволило сделать заключение о том, что наиболее рационально - изготавливать капсулы по прописи №1, так данная пропись обеспечивает наименьшее снижение сыпучести по отношению к данному показателю экстракта.

Таблица 5

Сравнительная оценка технологических свойств экстракта листьев

осины сухого и исследуемых прописей

Объект исследования Сыпучесть, г/сек Насыпная масса, г/см3 Потеря в массе при высушивании, % Гигроскопичность, % Отсыреваемость, %

Экстракт 8,08±0,25 0,833±0,002 4,56±0,14 28,94±0,42 10,06±0,13

Пропись N2 1 экстракт 0,5 лактоза 0,07 7,79±0,02 0,976±0,001 4,08±0,02 15,61±0,04 3,31±0,01

Пропись №2 экстракт 0,5 лактоза 0,05 магния оксид 0,02 6,48±0,01 0,983±0,001 4,19±0,01 15,26±0,01 3,29±0,02

Пропись №3 экстракт 0,5 кальция карбонат 0,07 5,97±0,02 0,996±0,002 4,01±0,01 15,06±0,01 3,26±0,01

Подбор размера твердых желатиновых капсул для выбранной прописи осуществляли исходя из средней вместимости капсулы по таблице в ГФ XI, т. 2, с. 144, статья «Капсулы». Расчеты показали, что для капсулирования терапевтической дозы экстракта листьев осины сухого по прописи №1 необходимо использовать капсулы 0 номера.

Стандартизацию капсул на 5 сериях проводили согласно ГФ XI, т. 2, статья «Капсулы» и ОСТу 91 500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» по показателям: описание, подлинность, средняя масса, растворение, однородность дозирования, количественное определение, микробиологическая чистота. В основу определения подлинности (методы ТСХ - фенологликозиды и ВЭЖХ - флавоноиды) и количественного содержания флавоноидов (дифференциальная спектрофо-тометрия) были положены методики, используемые для стандартизации экстракта (табл. 6).

Основные показатели качества капсул «Элоскап»

Таблица б

Номер серии Описание Подлинность Количественное содержание, г Распада-емость, мин Растворение, %

ВЭЖХ (флавоноиды) ТСХ (фенологликози-ды) Флавоноиды

1 Твердые капсулы № 0, цилиндрической формы, состоящие из белого корпуса и крышечки зеленого цвета, с гладкой поверхностью, без запаха, без вкуса. Содержимое капсул: порошок светло-коричневого цвета, своеобразного запаха и горьковато-сладкого вкуса. 1. Не менее 5 пиков соединений, относящихся к классу флавоноидов. По времени удерживания и характеру УФ-спектра пик ст= 13,90 и ^„ = 204, 255,355 нм должен соответствовать аналогичным показателям СО рутина, а пик с т = 15,32 и Я™* = 204, 256,355 - СО гиперозида. 2.Не менее четырех пятен с розовым окрашиванием после обработки серной кислоты раствором 4% в спирте этиловом 95%. По величине КГ пятно №6 должно соответствовать СО салицина, пятно №8 должно соответствовать СО тремулацина. 0,0231±0,0006 5,2±0,4 99,16±0,56

2 то же то же то же 0,0331±0,0008 3,9±0,4 99,13±0,78

3 то же то же то же 0,0201±0,0002 4,2±0,3 98,23±0,48

4 то же то же то же 0,0318±0,0003 3,6±0,3 99,20±0,89

5 то же то же то же 0,0211±0,0002 4,7±0,5 99,86±0,67

Рис. 5. Технологическая схема получения капсул «Элоскап»

Данные, приведенные в табл. 6, свидетельствуют о том, что капсулы с экстрактом листьев осины сухим соответствуют всем требованиям, предъявляемым к капсулам ГФ XI изд. Показатели высокой фармацевтической доступности (распадаемость - 5,2±0,4 мин, растворение - 99,86±0,б7%) исследуемого экспериментального препарата подтверждают рациональность выбора капсул в виде лекарственной формы для экстракта листьев осины сухого.

Результатом наших исследований явилась разработка технологической схемы получения капсул «Элоскап», содержащая все традиционные этапы изготовления капсул (рис. 5). Результаты вышеприведённых исследований по стандартизации капсул на основе экстракта листьев осины сухого были положены в основу разработки проекта ФСП «Элоскап капсулы 0,5» и лабораторного регламента на производство капсул «Элоскап». Установлено, что предварительный срок годности в условиях естественного хранения для капсул «Элоскап» составляет 1 год.

Общие выводы

1. В результате целенаправленного фотохимического изучения состава БАВ гидрофильной фракции листьев осины обыкновенной, заготовленных в регионе Западной Сибири, выявлено наличие пяти гликозидов флавоноидов - производных кверцетина (гиперозид, рутин и кверцитрин), кемпферола и мирицетина; восьми фенологликозидов, в том числе салицина и тремулацина; а также хлорогеновой кислоты и эфиров п-кумаровой, феруловой и коричной кислот. С применением метода адсорбционной колоночной хроматографии из листьев осины выделена сумма фенольных соединений, в состав которой входят все вышеуказанные БАВ. Показано, что в изучаемом сырье присутствуют дубильные вещества конденсированной и гидролизуемой групп и полисахариды.

2. Предлагаемые спектрофотометрические методики определения количественного содержания флавоноидов, фенологликозидов и фенолокислот в листьях осины обыкновенной могут быть рекомендованы для их стандартизации и/или анализа, т.к. обладают соответственно линейностью (коэффициенты корреляции 0,9991, 0,99913 и 0,99953); повторяемостью (ЯББ = 3,84%, 3,75% и 3,99%); промежуточной прецизионностью (ИЗО = 4,00%, 6,92% и 4,92%) и правильностью (критерий приемлемости = 99,31%, 99,25% и 99,50%).

3. Доминирующее место среди БАВ гидрофильного характера листьев осины обыкновенной принадлежит фенологликозидам, содержание которых в сырье достигает 5,64±0,18% (в пересчете на салицин). Содержание флавоноидов и фенолокислот также достаточно высоко и колеблется от 0,97±0,04% до 2,10±0,05% (в пересчете на гиперозид) и от 1,06±0,05% до 2,46±0,09% (в пересчете на хлорогеновую кислоту) соответственно. Содержание дубильных веществ (суммы легкоокисляемых веществ) в

изучаемом сырье варьирует от 2,35±0,09% до 4,98±0,12%, полисахаридов -от 2,48±0,05% до 5,52±0,14%.

4. Результаты проведенных экспериментов позволяют рекомендовать к использованию в качестве лекарственного средства листья осины обыкновенной различных регионов Сибири, заготовленные в течение всего летнего периода, так как, несмотря на некоторые колебания в содержании указанных групп фенольных соединений, их содержание в сырье достаточно высоко (флавоноидов от 0,99±0,04% до 1,35±0,06%, фенологликозидов от 4,33±0,09% до 5,57±0,10%).

5. Комплекс экспериментальных исследований и теоретических расчетов позволил выявить оптимальные значения технологических факторов и параметры технологического процесса получения экстракта листьев осины сухого с применением метода многоступенчатого противоточного экстрагирования с законченным циклом в батарее из 5 перколяторов с последующим сгущением и вакуумной сушкой, обеспечивающего выход по фла-воноидам до 86,05%, фенологликозидам до 83,65% и экстрактивным веществам до 87,41%.

6. Результаты исследований по определению острой токсичности свидетельствуют о том, что экстракт листьев осины сухой относится к IV классу опасности (малоопасные вещества) согласно ГОСТу 12.1.007-76. На моделях острого и хронического воспаления выявлена противовоспалительная активность экстракта листьев осины сухого и доказан вклад суммы фенольных соединений, выделенной из листьев осины, в проявление указанного вида действия изучаемого экстракционного препарата. Биологически активные вещества изучаемого экстракта способны подавлять процессы свободно-радикального окисления, моделируемые in vitro, о чем свидетельствуют высокие показатели общей антиоксидантной активности.

7. В результате комплекса проведенных технологических, биофармацевтических и микробиологических исследований выбран оптимальный состав и технология капсул «Элоскап» с высокими показателями фармацевтической доступности (распадаемость - 4,32±0,79 мин; растворение -99,12±0,72%).

8. Проведена стандартизация, предложены показатели качества и методики анализа фенольных соединений для листьев осины обыкновенной, экстракта листьев осины сухого и капсул «Элоскап», которые положены в основу соответствующих проектов ФСП «Листья осины обыкновенной», «Экстракт листьев осины сухой» и «Элоскап капсулы 0,5». При изучении стабильности всех исследуемых показателей качества в условиях естественного хранения определен предварительный срок годности для листьев осины обыкновенной - 2 года, для экстракта листьев осины сухого -1,5 года и капсул «Элоскап» - 1 год.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Лобанова, И.Ю. Изучение флавоноидов листьев осины обыкновенной с применением гидролиза и метода ВЭЖХ / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова, Л.Е. Кудрикова // Актуальные проблемы фармакологии и фармации: ежегодный сборник научных и методических работ преподавателей, молодых ученых и студентов фармацевтического факультета. - Вып. VI. -г. Барнаул, 2009. - С. 125-129.

2. Лобанова, И.Ю. Влияние вида экстрагента на состав извлечений из листьев осины обыкновенной / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова // Молодежь Барнаулу: материалы X городской НПК молодых ученых (17-21 ноября 2008 г.): в 2 т. / отв. Ред. Б.А. Черниченко. - Барнаул: Изд-во Алт.ун-та, 2009.-Т.2.-С. 95-96.

3. Лобанова, И.Ю. Изучение состава фенольных соединений водных извлечений из листьев осины обыкновенной / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова, Л.Е. Кудрикова // Медицина в Кузбассе: Рецензируемый научно-практический журнал. - Кемерово, 2009. - №7. - С. 54-56.

4. Турецкова, В.Ф. Изучение качественного состава флавоноидов листьев осины обыкЕювенной методом ВЭЖХ / В.Ф. Турецкова, И.Ю. Лобанова, Л.Е. Кудрикова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2009.-Вып. 64.-С. 115-116.

5. Лобанова, И.Ю. Выбор оптимальных параметров факторов, влияющих на процесс извлечения биологически активных веществ из листьев осины обыкновенной / И.Ю. Лобанова // Молодежь Барнаулу: материалы XI городской НПК молодых ученых (17-20 ноября 2009 г.): в 2 т. / отв. Ред. Б.А. Черниченко. - Барнаул: Изд-во Алт.ун-та, 2010. - Т.2. - С. 119-120.

6. Ильина, Е.И. Изучение состава фенольных соединений экстракта листьев осины обыкновенной сухого / Е.И. Ильина, В.Ф. Турецкова, И.Ю. Лобанова // Актуальные проблемы фармакологии и фармации: ежегодный сборник научных и методических работ преподавателей, молодых ученых и студентов фармацевтического факультета. - Вып. VII. - г. Барнаул, 2010. -С. 74-81.

7. Лобанова, И.Ю. Совершенствование методики количественного определения флавоноидов в листьях осины обыкновенной / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова // Актуальные проблемы фармакологии и фармации: ежегодный сборник научных и методических работ преподавателей, молодых ученых и студентов фармацевтического факультета. - Вып. VII. - г. Барнаул, 2010. - С. 110-116.

8. Турецкова, В.Ф. Изучение состава фенолокислот листьев осины обыкновенной / В.Ф. Турецкова, И.Ю. Лобанова// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч. тр. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2010. - Вып. 65. - С. 131-133.

9. Лобанова, И.Ю. Изучение состава основных биологически активных веществ гидрофильной фракции листьев осины обыкновенной / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова // 35 лет фармацевтическому факультету АГМУ: итоги и перспективы. Материалы научно-практической конференции, посвященной 35-летию фармацевтического факультета. - Барнаул, 2010. - С. 82-88.

10. Лобанова, И.Ю. Изучение динамики накопления флавоноидов в листьях осины обыкновенной / И.Ю. Лобанова // Молодежь - Барнаулу: материалы медицинского раздела XII городской НПК молодых ученых / 17-22 ноября 2010 г. - Барнаул: Изд-во ГОУ ВПО «АГМУ», 2011. - С. 50-53.

11. Лобанова, И.Ю. Разработка технологии капсул «Элоскап» с экстрактом листьев осины сухим / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова // Вестник ГТГФА.- 2011,-№7.-С. 118-121.

12. Лобанова, И.Ю. Выделение и изучение состава флавоноидов листьев осины обыкновенной / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова // Химия растительного сырья. - 2011. - №2. - С. 117-122.

13. Лобанова, И.Ю. Микроскопическое изучение листьев осины обыкновенной (Populus trémula L.) / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова, Т.В. Гербер // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб.науч. тр. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2011. - Вып. 66. -С. 140-143.

14. Лобанова, И.Ю. Исследования по стандартизации и изучению стабильности экстракта листьев осины сухого / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова // Актуальные вопросы фармацевтической науки и образования. Материалы Межрегиональной научной конференции с международным участием, посвященной 70-летию фармацевтического факультета СибГМУ / 7-8 сентября 2011 г. - Томск: Изд-во «Печатная мануфактура», 2011. - С. 96100.

15. Турецкова, В.Ф. Осина обыкновенная как перспективный источник получения препаратов противоязвенного и противовоспалительного действия / В.Ф. Турецкова, С.С. Рассыпнова, И.Ю. Лобанова, Н.М. Талыкова // Бюллетень сибирской медицины. -2011.- №5. - С. 106-111.

16. Лобанова, И.Ю. Фенольные соединения листьев осины обыкновенной как основа создания препарата противовоспалительного действия / И.Ю. Лобанова // Вестник уральской медицинской науки. -2011.-№3/1.-С. 67-68.

Лобанова Ирина Юрьевна (Россия)

Фотохимическое и технологическое исследование листьев осины обыкновенной

Проведено комплексное фотохимическое изучение состава биологически активных веществ гидрофильной фракции листьев осины обыкновенной, заготовленных в регионе Западной Сибири. Выбран срок заготовки изучаемого вида сырья. Определены оптимальные значения технологических факторов и параметры технологического процесса получения экстракта листьев осины сухого с применением метода многоступенчатого противоточного экстрагирования с последующим сгущением и вакуумной сушкой. Выявлена противовоспалительная активность экстракта листьев осины сухого, доказан вклад суммы фенольных соединений, выделенной из листьев осины, в проявление указанного вида действия изучаемого экстракционного препарата, а также определена его антиоксидантная активность in vitro. В результате комплекса проведенных технологических, биофармацевтических и микробиологических исследований выбран оптимальный состав и технология капсул «Элоскап» с высокими показателями фармацевтической доступности. Проведена стандартизация, предложены показатели качества и методики анализа фенольных соединений для листьев осины обыкновенной, экстракта листьев осины сухого и капсул «Элоскап» и определены их сроки годности.

Lobanova lrina (Russia)

Phytochemical and technological research of leaves of the Populus tremula

The comprehensive phytochemical study of the composition of biologically active substances of hydrophilic гидрофильной fraction of leaves of aspen ordinary (Populus tremula L.), procured in the region of Western Siberia has been conducted. The optimal term of preparation of the studied kind of raw materials has been chosen. The optimal values of technological factors and parameters of the technological process of receipt of the dry extract of leaves of Populus tremula L. with application multistage counterflow extraction with the subsequent condensation and vacuum drying have been determined. Anti-inflammatory effect of the dry extract of leaves of Populus tremula L. has been determined. The contribution of the sum phenolic compounds selected from leaves of Populus tremula L. to the specified kind of effect of the studied extract has been proved. Antioxidant activity of the extract has been determined in the experiments in vitro. The optimal composition and technology of the reception of the capsules ef Eloskap with high indicators of pharmaceutical availability has been chosen as a result of a complex of the conducted technological, biopharmaceuticals and microbiological studies. The Standardization of leaves of Populus tremula L., the dry extract of leaves of Populus tremula L. and capsules Eloskap has been conducted, and the indicators of quality and technique of their analysis have been offered.

Подписано в печать 11.04.2012 г.

Формат 60х90/16. Бумага офсеггная. Печать ризографическая.

Гарнитура Тайме Нью Роман. Тираж 100 экз. Объем 1,0 п. л. Заказ № 46 Алтайский государственный медицинский университет г. Барнаул, пр. Ленина, 40