Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фитохимическое и фармакологическое изучение растений рода фиалка

АВТОРЕФЕРАТ
Фитохимическое и фармакологическое изучение растений рода фиалка - тема автореферата по медицине
Бубенчиков, Роман Александрович Купавна 2002 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.00.25
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Фитохимическое и фармакологическое изучение растений рода фиалка

На правах рукописи

г-г;:- од

2 в ж

Бубенчиков Роман Александрович

ФИТОХИМИЧЕСКОЕ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ РАСТЕНИЙ РОДА ФИАЛКА

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология 15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Купавна - 2002

г

Работа выполнена в Курском государственном медицинском университете.

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор М.В. Покровский

Научный консультант: кандидат медицинских наук,

доцент Л.В. Силина

Официальные оппоненты: доктор химических наук,

профессор С .Я. Скачилова

доктор медицинских наук, профессор А.Г. Муляр

Ведущая организация - Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова

Защита состоится " 28 " мая 2002 г. в 10 30 часов

на заседании диссертационного совета Д 217.004.01 во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ (ВНЦ БАВ) по адресу: Московская область, Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ

Автореферат разослан1

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор Л.В. Корольченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Применение лекарственных растений и препаратов из них для лечения и профилактики различных заболеваний в настоящее время занимает все большее место в клинической практике. Из общего арсенала лекарственных средств 1/3 препаратов растительного происхождения (Соколов, Замотаев, 1990). Преимущества применения фитопрепаратов очевидны и обусловлены многими достоинствами, в числе которых широкий спектр фармакологического действия, низкая токсичность, редко проявляемые побочные эффекты и редкое наличие противопоказаний. Пополнение арсенала лекарственных препаратов растительного происхождения остается как и прежде актуальной задачей, так как спрос на них удовлетворяется меньше чем на 50%. Одним из путей увеличения количества фитопрепаратов является широкое изучение спектра действия фармакопейных лекарственных растений и близких к ним видов. В настоящее время лекарственные растения и их препараты применяются по 1-2 показателям, хотя многие из них могут найти более широкое применение. С этой точки зрения большой интерес представляют растения рода фиалка.

Растения рода фиалка широко применяются в народной медицине как отхаркивающие, мочегонные, седативные средства, они находят применение для лечения желудочных и кожных заболеваний (Растительные ресурсы, 1985; Машковский, 2000). В научной же медицине используются только трава фиалки трехцветной и полевой в качестве отхаркивающего средства. Внедрение других видов рода фиалка в медицину, а так же расширение фармакологического спектра действия фиалок трехцветной и полевой значительно расширит сырьевую базу сырья фиалки.

Растения рода фиалка содержат фенольные соединения и полисахариды, обладающие разносторонней биологической активностью (Барабой, 1976; Растительные ..., 1985). В связи с этим представляло интерес изучить химический состав растений рода фиалка, широко распространенных в областях Центральной России, а также установить возможность применения в научной медицине фиалки душистой и комплексов биологически активных соединений, полученных из фиалки трехцветной, фиалки полевой и фиалки душистой.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящего исследования явилось фитохимическое и фармакологическое изучение растений рода фиалка и их фигокомплексов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- проведение фитохимического исследования фиалки трехцветной, фиалки полевой, фиалки душистой;

количественная оценка биологически активных соединений;

- индивидуальное выделение основных компонентов и изучение их структуры;

- разработка методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы полисахаридов с целью включения их в проект ФСП "Фиалки душистой трава"; исследование острой токсичности водных извлечений фиалки душистой и комплексов биологически активных веществ, полученных из фиалки трехцветной, фиалки душистой, фиалки полевой;

- изучение местно-раздражающего действия фиалки душистой; сравнительное исследование отхаркивающего действия; изучение противовоспалительного действия;

- изучение анальгезирующего действия;

- изучение жаропонижающего действия; изучение антиоксидантной активности;

- изучение антибактериальной активности; ' - изучение ранозаживляющего действия.

Научная новизна. Проведено комплексное фитохимическое изучение травы фиалки трехцветной, фиалки полевой, фиалки душистой и корней фиалки душистой.

Фенольные соединения изученных растений представлены 12 соединениями, из которых 7 выделено в индивидуальном состоянии и установлена их химическая структура. Кумарин, скополетин, хлорогеновая кислота в исследуемых видах фиалки изучены впервые; С-гликозиды флавонов: витексин и виценин в фиалке полевой и фиалке душистой изучены впервые.

Впервые выделены и изучены водорастворимые полисахаридные комплексы (ВРПС) из травы фиалки полевой и фиалки душистой и корней фиалки душистой. ВРПС представлены нейтральными (арабиноза, глюкоза, галактоза, рамноза, ксилоза) и кислыми (галактуроновая и глюкуроновая кислоты) сахарами; определено их количественное содержание. Разработан способ получения суммы полисахаридов, обладающей противовоспалительной активностью из травы фиалки душистой; направлена заявка на патент, получена приоритетная справка №2001107310.

Впервые выделены и исследованы пектиновые вещества травы фиалки полевой и фиалки душистой и корней фиалки душистой. Определен их качественный и количественный моноса-харидный состав. Проведен анализ функциональных групп пектина.

Впервые разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов в траве фиалки полевой и фиалки душистой, суммы полисахаридов в траве фиалки душистой.

Установлено, что настой травы и отвар корней фиалки душистой, а также исследуемые комплексы полисахаридов и полифенолов, полученные из растений рода фиалка, относятся к классу практически нетоксичных. 1Л55о в испытанном диапазоне доз не установлена.

Впервые установлено, что изучаемые виды фиалок и комплексы БАВ, полученных из них, обладают широким спектром фармакологической активности, оказывая наряду с отхаркивающим, противовоспалительное, капилляроукрепляющее, анальгезирующее, жаропонижающее, антиоксидантное, антимикробное и стимулирующее регенерацию действие. По отхаркивающей активности трава и корень фиалки душистой не уступают фармакопейным видам - траве фиалки трехцветной и траве фиалки полевой.

Показано, что водные извлечения фиалок (настои и отвары) в сочетании с присыпками обладают выраженной фармакотерапевгической эффективностью при раневых повреждениях, способствуя заживлению их в более ранние сроки.

Проведен скрининг на наличие антиоксидантной активности изученных растений. Выявлены соединения, проявляющие антиоксидантную активность - флавоноиды, кумарины, окси-коричные кислоты. Установлено, что полифенольный комплекс фиалки душистой оказывает ингибиругощее влияние на параметры Ре2+ - индуцированной хемилюминесценции.

Практическая значимость. Разработанные методики определения суммы флавоноидов и полисахаридов включены в проект ФСП "Фиалки душистой трава". Новые сведения о спектре действия фиалки трехцветной и фиалки полевой расширят общие представления о возможных областях применения этих растений.

Полученные в'результате исследований данные о фармакологических свойствах фиалки душистой позволяют рекомендовать ее для использования в научной медицине наряду с офи-цинальными'видами фиалкой трехцветной и фиалкой полевой в качестве отхаркивающего, противовоспалительного, ранозаживляющего средства.

Внедрение в практику. Разработан и подготовлен к рассмотрению (совместно с ЗАО "Фирма "Здоровье") проект фармакопейной статьи предприятия "Фиалки душистой трава".

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- методика количественного определения суммы флавоноидов в траве фиалки душистой (Акты внедрения в учебный процесс кафедр фармакогнозии: №61 от 22.06.2000 г. Алтайского государственного медицинского университета, № 27 от 20.03.2001 г. Пятигорской государственной фармацевтической академии);

- "Метод лечения эрозивно-язвенных дефектов кожи настоями в сочетании с присыпками, изготовленными из растений фиалка полевая и фиалка трехцветная" (Акт внедрения в поликлинику ОККВД г. Курска, кафедра дерматовенерологии КГМУ, № 55 от 05.04.2001 г.).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на итоговых научных конференциях молодых ученых и студентов "Актуальные проблемы медицины и фармации" (Курск, 1999 и 2000); на итоговой научной сессии КГМУ "Актуальные вопросы медицинской на уки и фармации" (Курск,2000); на научно-практической конференции, посвященной 80-летию фармацевтической службы Самарской области, Самарского государственного медицинского университета и Самарского аптечного склада (Самара, 1999); на научной конференции " Флора и растительность северной лесостепи" (Тула, 2000); на VIII Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2001), на научно-практической конференции "Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики", посвященной 35-летию фармацевтического факультета (Курск, 2001).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических и медицинских наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 01200103118).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 18 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 212 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (5 глав), выводов, списка литературы и приложения, В тексте содержится 37 таблиц, 18 рисунков. Список цитируемой литературы включает 219 источников, из них 47 - на иностранных языках.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования служили корни и трава фиалки душистой, трава фиалки полевой и трава фиалки трехцветной, заготовленные в течение 1998-2000 годов в Курской области в различные фазы вегетации. Для фармакологических исследований использовали настои из травы фиалки трехцветной, фиалки полевой и фиалки душистой, отвар из корней фиалки душистой, которые готовили по ГФ XI издания в соотношении 1:10 и 1:5, а также отдельные фракции, полученные из исследуемых растений (полифенольпые комплексы, полисахаридные комплексы, пектиновые вещества). Для идентификации в сырье основных групп биологически активных веществ применяли известные качественные реакции и хроматографические исследова-

ния. Хроматографические исследования проводили методами восходящей и нисходящей хроматографии на бумаге "Р^кгак", тонкослойной хроматографией на пластинках " ЙНиГо]". Для количественного анализа биологически активных веществ использовали общепринятые методики, регламентированные соответствующими статьями ГФ XI.

Выделение фенольных соединений осуществляли 70% ацетоном.

Для разделения суммы веществ на индивидуальные компоненты были использованы методы избирательной жидкостной экстракции, дробной кристаллизации, препаративной бумажной и колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте и силикагеле.

Для установления структуры выделенных соединений использовали традиционные химические, а также инструментальные методы анализа.

Для количественного определения флавоноидов использовали спектрофотометрический метод, основанный на реакции комплексообразования с алюминия хлоридом. Количественное определение полисахаридов проводили гравиметрическим методом [ГФ -XI].

Фармакологические исследования выполнены на 506 беспородных мышах обоего пола массой 18-20 г, 326 белых беспородных крысах обоего пола массой 180-220 г, 22 кроликах массой 2,0-2,5 кг, 100 лягушках, содержащихся в стандартных условиях вивария Курского государственного медицинского университета.

Острую токсичность оценивали по методике В.М. Штабского (Штабский, 1980).

Оценку отхаркивающего действия проводили на модели изучения моторной функции мерцательного эпителия лягушки по методике В.В. Гацура (Гацура, 1974; Гребнева, Лесиовская ..., 1999). В качестве препарата сравнения использовали мукалтин и настой травы алтея лекарственного.

Для оценки противовоспалительной активности определяли их влияние на разные стадии процесса воспаления. В качестве экссудативного воспаления использовали методику образования воспалительного отека лапы мышей вследствие субплантарного введения формалина. Оценку влияния на образование фиброзно-грануляционной ткани осуществляли путем имплантации стерильных ватных шариков под кожу спины белых крыс (Методические рекомендации ..., 2000).

Влияние на сосудистую проницаемость определяли при моделировании локальной воспалительной реакции с помощью ксилола (Ойвин, 1962). В качестве препарата сравнения использовали настой цветков календулы (Машковский, 2000).

Анальгезирующую активность оценивали по торможению болевой реакции при термическом воздействии. Учет болевой реакции на температурный раздражитель проводили с помощью хронометрии, засекая время от начала термического раздражения до момента выпрыгивания животных из цилиндра (Сернов, 2000). Препаратом сравнения служил анальгин в дозе 100 мг/кг.

Жаропонижающее действие изучали на модели гипертермического синдрома, вызванного введением пирогенала, с последующим измерением температуры с помощью термометра (Сернов, .2000). В качестве препарата сравнения использовали ацетилсалициловую кислоту в дозе 100 мг/кг.

Для обнаружения веществ, обладающих антиоксидантной активностью была использована хроматография в тонком слое сорбента, позволяющая установить в составе растительных экстрактов таких соединений (Максимов, 1985).

Определение уровня Ре+2 - индуцированной хемилюминесценции проводили на приборе биохемилюминометр БХЛ-06 по общепринятому методу (Бодоев, 1999).

Изучение антимикробной активности проводили методом культивирования микробов на питательную среду с добавлением исследуемых препаратов в сравнении с контролем (Бандю-коваидр., 1990).

Ранозаживляющее действие изучали на модели плоскостной кожно-мышечной раны на белых мышах обоего пола массой 18-20 г. (Барнаулов, 1981). Плоскостную кожно-мышечную рану воспроизводили под гексеналовым наркозом путем иссечения в области спины мышей кожно-фасциального лоскута площадью 100 мм2 на предварительно выстриженных участках кожи (Бодоев, 1999). Лечение ран осуществляли ежедневно. В опытных группах раневые поверхности обрабатывали настоем или отваром (1:10), а через 15-20 минут присыпали мелким порошком из исследуемого растения. В качестве препарата сравнения использовали настой цветков календулы (1:10) в сочетании с присыпкой. Гистологические исследования проводили на 1, 3, 7, 14, 21, 24, 30 сутки. Для патоморфологического исследования участки раны с прилегающими неповрежденными тканями фиксировали в 10% растворе формалина. Депарафиниро-ванные гистологические срезы, полученные на санном микротоме, окрашивали гематоксилин-эозином (Волкова, Елецкий, 1982). Цитологическое исследование ран проводили методом "раневых отпечатков". Полученные в ходе экспериментов данные статистически обработаны общепринятыми методами для малой выборки с определением средней величины (М) и средней арифметической ошибки (т). Достоверность результатов оценивалась с применением критерия Стьюдента (Беленький, 1963; Сернов, 2000 ). Различие считали достоверным при вероятности 95% (Р 2 0.05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение качественного состава, выделение основных групп биологически активных веществ, химическое изучение фснолышх соединений и полисахаридов

При фотохимическом изучении проводили качественное и количественное определение основных групп биологически активных веществ.

При проведении качественного анализа на различные группы природных соединений в траве и корнях изучаемых фиалок обнаружены полисахариды, фенольные соединения (кумари-ны, флавоноиды, оксикоричные кислоты, дубильные вещества), азотсодержащие соединения (аминокислоты, азотистые основания), каротиноиды, сапонины, эфирное масло.

При количественном определении установлено, что содержание суммы азотистых оснований в исследованных видах составляет 0,17-0,43% (в том числе холина - 0,10-0,24%); аскорбиновой кислоты 0,06-0,12%, суммы свободных органических кислот - 2,76-3,48%; тритерпено-вых сапонинов - 0,010-0,038%; дубильных веществ 1,82-5,73%; каротиноидов 0,85-20,65 мг%; эфирного масла 0,14-0,28%.

Исследован аминокислотный состав изучаемых растений и проведено его количественное определение. Аминокислоты представлены аспарагиновой и глутаминовой кислотами, ала-нином, аргинином, валином, гистидином, глицином, лейцином, лизином, метионином, тирозином, треонином, серином. Установлено, что суммарное содержание свободных аминокислот колеблется от 5,08 до 6,80 мг%. Наибольшее суммарное содержание свободных аминокислот обнаружено в траве фиалки полевой - 24,39%.

Проведено изучение минерального состава исследуемых растений с использованием элементного и спектрального анализа. Результаты показывают, что все исследуемые виды содержат медь, серебро, висмут, олово, молибден, барий, кобальт, никель, марганец, титан, ванадий, хром, железо, галлий, фосфор, литий, бериллий, иттрий, иттербий, цирконий, ниобий, скандий, бор, калий, натрий, кальций, магний, алюминий, кремний.

Качественный состав фенольных соединений анализировали с применением хроматографии на бумаге и в тонких слоях сорбента и ряда диагностических реактивов. Всего в исследуемых образцах обнаружено 12 веществ фенольной природы, из них 2 кумарина, 5 флавоно-идных соединений, 5 производных оксикоричных кислот.

Выделение фенольных соединений осуществляли 70%-ным ацетоном. Для разделения суммы веществ на индивидуальные компоненты нами были использованы методы избирательной жидкостной экстракции, дробной кристаллизации, препаративной бумажной и колоночной хроматографии на полиамидном сорбенте и силикагеле (рис. 1).

В итоге проведенных исследований выделено в индивидуальном состоянии 7 веществ фенольной природы (3 флавоноидных соединения, 2 кумарина, 2 оксикоричные кислоты).

Структуру фенольных соединений устанавливали, применяя химические и физико-химические методы анализа. На основании качественных реакций, хроматографического исследования, данных УФ-, ИК- спектров вещества 3.01, 3.02 охарактеризованы как кумарины, вещества 3.03, 3.04 - как фенолкарбоновые кислоты, 3.08, 3.10, 3.11 - как флавоноиды, основные физико-химические свойства которых представлены в таблице 1.

С целью комплексного исследования растений шрот растительного сырья после выделения фенольных соединений использовали для выделения водорастворимых полисахаридных комплексов и пектиновых веществ. Водорастворимые полисахаридные комплексы экстрагировали горячей водой при нагревании, осаждали трехкратным количеством этилового спирта, отфильтровывали, промывали органическими растворителями, высушивали. Выход их составил: из травы фиалки трехцветной, фиалки полевой и фиалки душистой 10,0%, 5,8%, 10,5% соответственно, а из корней фиалки душистой - 10,2% от массы сухого сырья. После выделения полисахаридов из шрота выделяли пектиновые вещества путем экстракции смесью 0,5%-ных растворов щавелевой кислоты и оксалата аммония (1:1) с последующим упариванием и осаждением пятикратным объемом этилового спирта. Выход их составил: из травы фиалки трехцветной, . фиалки полевой и фиалки душистой - 12,8%, 9,0%, 23,0% соответственно, из корней фиалки -9,9%.

Качественный состав водорастворимых полисахаридных комплексов и пектиновых веществ устанавливали после гидролиза серной кислотой (1 моль/л). Хроматографически в гид-ролизатах водорастворимых полисахаридных комплексов обнаружили 7 веществ моносахарид-ного характера: арабинозу, галактозу, глюкозу, ксилозу, рамнозу, галакгуроновую и глюкуро-новую кислоты. Количественное определение моносахаридов проводили денситометрически после хроматографии в тонком слое сорбента гидролизата ПС (система растворителей: н.бутанол - уксусная кислота - вода 3:1:1). Установлено, что основными по содержанию были галактуроновая кислота, глюкоза, галактоза в траве фиалки трехцветной и душистой; галакту-роновая кислота, галактоза и арабиноза в траве фиалки полевой; галактуроновая кислота, глюкоза и арабиноза в корнях фиалки душистой.

Рис. 1. Схема выделения основных действующих веществ травы фиалки полевой.

Физико-химические свойства веществ, выделенных из растений рода фиалка

Но- Молекулярная Окраска веществ в УФ - свете

мер Общая формула до про- после проявления Величинам

веще- Название вещества 'I™, °с явления Парами спиртовым раствором

ства масса аммиака раствором КаОН циркония хлорокиси

3.01 Кумарин (бензо-а-пирон) С9Щ02 67-68 146,89 - - зеленоватая - 0,93В

3.02. Скополетин (6-метокси,7-оксикумарин) СюЙФ, 204-205 196,60 голубая ярко- голубая ярко- голубая 0,6Ш, 0.85А, 0,50Г

3.03 Кофейная (3,4-диоксикоричная) кислота С9Н804 193-195 184,30 светло-голубая ярко- голубая ярко- голубая голубая 0,46В, 0,56Г, 0,82А

3.04 Хлорогеновая (5-0-кофеил-0-хинная) кислота С,бН]509 203-205 353,08 голубая зеленовато-голубая зеленовато-голубая голубая 0,72В, 0,63Г

3.08 Витексин (8-С-р-В-глюкопиранозид апигенина) ОиНгоО, 0 263-265 432,20 темная желто-зеленая желтая желтая 0,34Б

3.10 Рутин (кверцетин-З-О-Р-О-глюкопиранозидо-( 1 —>6)-0- С27Н30О, 188-190 610,52 темно-бурая оранжевая желто-оранжевая желтая 0.68А, 0.55Г

а-Ь-рамнопиранозид) 6 232-234 594,0 0.61Г,

3.11 Виценин темная желто- желтая желтая

(8-С-р-[)-глюкопирапозид- С27Н30О1 зеленая 0,42Е

6-С-Р- глюкопиранозид

апигенина) 5

Примечание: системы растворителей: А - н. бутанол-уксусная кислота - вода (4:1:2);

Б - 30% раствор уксусной кислоты; В - 2% раствор уксусной кислоты; Е - 5% раствор уксусной кислоты Г - 15% раствор уксусной кислоты; Д - хлороформ-формамид;

Моносахаридный состав пектиновых веществ представлен галактуроновой кислотой и нейтральными сахарами: галактозой, арабинозой, рамнозой. Количественный аиализ показал, что основу пектиновых веществ составляет галактуроновая кислота (до 79,36%). Выделенные пектиновые вещества характеризуются содержанием свободных карбоксильных групп (5,128,17), метоксилированных карбоксильных групп (4,67 - 6,54), метоксильных групп (3,22 - 4,51) и невысокой (Х<50%) степенью этерификации.

Действующими веществами растений рода фиалка являются флавоноидные соединения и полисахариды. Это послужило предпосылкой к разработке методик количественного определения основных групп действующих веществ. Для количественного определения флавоноидов разработана методика спектрофотометрического определения с применением реакции комплек-сообразования с алюминия хлоридом в среде 70% этанола. Образующийся окрашенный комплекс имеет максимум поглощения при 410 нм. При изучении условий экстракции определено, что максимально флавоноиды извлекаются из сырья кипящим 70%-ным этиловым спиртом через 45 минут при соотношении сырье-растворитель 1:100, Учитывая то, что флавоноиды в изучаемых фиалках содержатся в форме монозидов, биозидов, дигликозидов, с преобладанием биозидов и дигликозидов, расчет содержания суммы флавоноидов вели в пересчете на ругин-стандарт. Установлено, что в траве фиалки трехцветной содержится 2,19-4,15% суммы флавоноидов, в траве фиалки полевой - 2,21-4,10%, в траве фиалки душистой 1,15-3,21%.

Для количественного определения суммы полисахаридов использовали гравиметрический метод, основанный на экстракции полисахаридов из сырья с последующим осаждением их 95% этанолом. Определены оптимальные условия извлечения и осаждения полисахаридов: степень измельчения сырья - 2мм, экстрагент - вода, нагревание в течение 30 мин, трехкратная экстракция, соотношение сырья и экстрагента 1:10, 4-кратное количество 95% этанола по отношению к извлечению. Установлено, что содержание суммы полисахаридов в траве фиалки душистой колеблется от 10.5 до 14.5%. На основании полученных данных установлена норма содержания суммы полисахаридов, не менее 10%. Методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы полисахаридов и нормы их содержания введены в проект ФСП "Фиалки душистой трава".

Изучение фармакологической активности.

На первом этапе фармакологических исследований были выполнены эксперименты по изучению острой токсичности водных извлечений из травы и корней фиалки душистой, а также полисахаридных и полифенольных комплексов, полученных из исследуемых фиалок. Изучение острой токсичности показало, что введение мышам водных извлечений в дозе до 9000 мг/кг массы тела в пересчете на сухое сырье и полисахаридных и полифенольных комплексов в дозах 300 мг/кг не приводило к гибели животных, что позволяет считать их нетоксичными в испытанном диапазоне доз. 1ЛЭ50 в опытах не установлена. Это позволяет варьировать дозами в широких пределах. У водных извлечений фиалки душистой установлено также отсутствие ме-стно-раздражающего действия по отношению к коже и слизистой носа.

Исследование фармакологической активности изучаемых фиалок включало определение отхаркивающего, противовоспалительного, капилляроукрепляющего, анальгезирукицего, жаропонижающего, антиоксидантного, антимикробного и ранозаживляющего действия.

О наличии отхаркивающих свойств судили по величине коэффициента ускорения движения ресничек мерцательного эпителия пищевода лягушки. Установлено, что настои, отвары,

полисахаридные комплексы из травы исследуемых растений и корней фиалки душистой повышают двигательную активность мерцательного эпителия, следовательно обладают отхаркивающими сзойствами. Наиболее выраженное отхаркивающее действие наблюдается у полиса-харидных комплексов изученных растений, увеличение двигательной активности колеблется от 31,55% у полисахаридного комплекса травы фиалки трехцветной до 35,41% у полисахаридного комплекса корня фиалки душистой и оно по силе действия сходно с препаратами алтея. Настой травы фиалки душистой по силе отхаркивающего действия (увеличение двигательной активности на 25,40%) не уступает настоям травы официнальных видов фиалки трехцветной и фиалки полевой (увеличение двигательной активности на 20,38% и 24,11% соответственно) (таблица 2).

Таблица 2

Влияние исследуемых препаратов на двигательную активность мерцательного эпителия (п=б, Р<95%)

Исследуемое растение, Препарат Коэффициент ускорения Увеличение двигательной активности, %

Фиалка трехцветная (трава)

- настой 0,80+0,03 20,38±1,30*

- полисахариды 0,68±0,02 31,55-1,58*

Фиалка полевая (трава)

- настой 0,76±0,09 24,11 ±0,27*

- полисахариды 0,67±0,02 32,70+1,60*

Фиалка душистая (трава)

- настой 0,74+0,02 25,40+0,44*

- полисахариды 0,68±0,01 32,10±0,19*

Фиалка душистая (корень)

отвар 0,72+0,01 26,70+1,78*

полисахариды 0,65±0,06 35,41±2,22*

- полифенольный комплекс

Алтей лекарственный (трава)

- настой 0,66±0,02 35,28+2,98*

Мухалтин 0,62±0,01 38,33+1,35*

Примечание: * - различие по сравнению с контролем статистически достоверны при Р<0.05; п - количество лягушек в группе.

Установлено, что водные извлечения и полисахаридные комплексы изучаемых фиалок оказывают противовоспалительное действие, способствуя уменьшению выраженности воспалительной реакции на разных ее фазах. Показано, что испытуемые препараты угнетали степень развития отека конечности белых мышей при асептическом воспалении, вызванном введением формалина (рис.2). Из данных, приведенных на рис. 2, видно, что максимальное уменьшение величины отека лапы по сравнению с контролем отмечается при действии полисахаридных комплексов в дозе 100 мг/кг, а также у настоя травы и отвара корней фиалки душистой; уменьшая отек лапы мышей от 20.5% у полисахаридного комплекса травы фиалки полевой до 51.3% у отвара корней фиалки душистой по сравнению с показателями животных контрольной группы. При этом их антиэкссудативная активность превосходит таковую или сопоставима с препаратом сравнения - настоем цветков календулы (рис. 2). Увеличение доз полисахаридных комплексов не приводит к приросту регистрирующего эффекта.

еличина 11 гека, % 9080 70 бОБО-40 30 20-| 10 о

К Ф.Т(т) Ф.П(т) Ф.Д(т) Ф.Д(к) К (ц)

Примечание: К - контроль: ФП (т) - фиалка полевая (трава): ФД - фиалка душистая (трава): Ф.Д (к)-фиалка душистая (корень); К (ц)- календула (цветки). * - достоверные изменения по отношению к контролю.

Рис. 2 Влияние изучаемых препаратов на формалиновый отек лап мышей; полисахаридные и полифенольные комплексы в дозе 100 мг/кг.

Исследование влияния изучаемых препаратов на пролиферативный компонент воспаления выявило, что водные извлечения (настои и отвары), а также полисахаридные комплексы в дозе 200 мг/кг оказывают умеренное влияние на образование фиброзно-грануляционной ткани, сопоставимое, а иногда и превышающее таковое у препарата сравнения - настоя цветков календулы. При этом наиболее выраженная антипролиферативная активность отмечена при введении настоя травы и отвара корней фиалки душистой. В этом случае процесс развития гранулемы угнетается на 11,б и 12,1 % соответственно.

При изучении влияния исследуемых препаратов на проницаемость капилляров установлено, что при их введении увеличивается латентный период появления пятен окрашивания по сравнению с контролем, а также уменьшается их диаметр. Максимальный эффект независимо от количества препарата отмечается спустя час после его введения (рис. 3).

10.0 9.0 8.0 7.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0

Латентный период появления пятен окрашивания через 60 минут после введения препарата, млн.

50 100 200 Ф.Т. (т)

50 100 200 Ф.П. (т)

50 100 200 50 100 200 Ф.Д. (г)

50 100 200 Ф.Д.(к)

К(ц)

Примечание: К - контроль; Ф.Т. (т)-фиалка трехцветная (трава);; Ф.П. (т)-фиалка полевая (трава); Ф.Д. (т)-фиалка душистая (трава); Ф.Д. (к)-фиалка душистая (корень); К (ц)- календула (цветки).

контроль настои, отвар полисахаридныи комплекс

* - достоверные изменения по отношению к контролю.

полис юнольныи комплекс

Рис. 3 Влияние нечаемых препаратов растений рода фиалка на проницаемость капилляров у кроликов (Р < 0.05, п=10)

($+$#+$)+$)+$)+$)+$#+$#+$)+$)($)($)(&#

Наибольшее удлинение времени появления петехий наблюдается при действии исследуемых полисахаридов в дозе 100 мг/кг, а также настоя травы фиалки полевой, отвара корня фиалки душистой, вызывая увеличение латентного периода появления пятен окрашивания с 101,1% у настоя травы фиалки трехцветной до 160,1% у полисахаридного комплекса травы фиалки душистой. При этом диаметр пятен окрашивания уменьшается с 33,9% у полисахаридного комплекса травы фиалки полевой до 45,4% у отвара корня фиалки душистой. Наблюдаемые в этих случаях эффекты сопоставимы с препаратом сравнения настоем цветков календулы или превышают его (р < 0.05).

Наличие обезболивающей активности определяли по времени удерживания подопытных животных на поверхности пластинки, нагретой до 55°С. Все исследуемые препараты увеличивали латентный период болевой реакции. Анальгин повышал данный показатель на 68%. У контрольных животных укорачивался латентный период болевой реакции по сравнению с первым тестированием. Несмотря на это все тестируемые препараты оказывали обезболивающее действие. Статистически достоверные эффекты наблюдались у настоя травы фиалки трехцветной и травы фиалки душистой, полисахаридных комплексов травы фиалки трехцветной в дозах 100 и 200 мг/кг, полисахаридного и полифенольного комплексов травы фиалки душистой в дозах 50мг/кг.

В ходе оценки жаропонижающих свойств исходная температура тела у крыс контрольной и опытной групп были в среднем одинаковые. Через 16 часов после внутримышечного введения пирогенала произошло повышение температуры в среднем на 1.1°С (табл, 3). Далее через 30 минут после введения исследуемых препаратов в контрольной группе животных изменения температуры тела не наблюдалось; при введении же исследуемых препаратов температура тела снижалась; еще большее понижение ее наблюдалось через 2 часа. Анализ полученных данных показал, что полисахаридные и лолифенольные комплексы травы исследуемых растений оказывают значительный гипотермический эффект у крыс с пирогеналовой лихорадкой, вызывая снижение температуры тела от 0.6 до 1.8°С. Максимальное снижение температуры тела вызывают полисахаридные комплексы травы изучаемых фиалок в дозах 50 мг/кг. Водные же извлечения (настои, отвары ) и полисахаридные комплексы корня фиалки душистой оказывают незначительное антипирогенное действие.

При изучении растительных экстрактов, полученных из травы и корней исследуемых фиалок на наличие веществ, обладающих антиоксидантной активностью, установлено наличие в траве среднеполярных и полярных компонентов, а в корнях среднеполярных и низкополярных соединений, занимающих на хроматограммах позиции флавоноидов и их гликозидов, кумари-нов, оксикоричных кислот, обладающих антиоксидантной активностью.

Исследование влияния полифенольного комплекса травы фиалки душистой на параметры Fei+- индуцированной хемилюминисценции (ХЛ) показало, что испытуемый комплекс оказывал ингибирующее влияние на кинетику XJI, о чем свидетельствует снижение свечения модельной системы на 64% в дозе 1 мг/мл. При этом был обнаружен дозозависимый эффект: антиокислительная активность исследуемого комплекса повышалась с увеличением дозы.

Изучение антимикробной и ранозаживляющей активности

Антибактериальные свойства исследуемых препаратов изучали in vitro в отношении Staphylococcus aureus 209, Staphylococcus "Жаев", Staphylococcus albus, Escherichia coli,

Влияние исследуемых препаратов из растений рода фиалка

Исследуемое растение, препарат (п=5) Доза Рехтальная температура в °С, М ± т

Исходный -уровень После введения

Пирогенала Исследуемых препаратов

через 30 мин Через 2 часа

Ф. трехцв. (тр.)

- настой: опыт. 1 г/кг 37.4+0.18 38.510.20* 38.410.32 37.910.25у

Komp. 37.4Ю.09 38.810.12* 38.710.11 38.6+0.07

-ПС: опыт. 50 37.510.06 38.610.09* 38.0Ю.15У 37.410.14у

Komp. мг/кг 37.510.04 38.610.08* .3.8.810.13 38.710.09

-ПС: ОПЬГГ. 100 37.3±0.11 38.210.14* 37.910.11' 37.2l0.17y

Контр. мг/кг 37.3±0.07 38.210.07* '38.5+0.07 38.410.07

-ПС. ОПЫТ. 200 З7.б±0.16 38.810.15* 38.310.19у 37.8+0.23у

Контр. мг/кг 37.6±0.27 38.810.09* 39.110.13 ,39.0+0.09

Ф. полевая, (тр.)

- настой: ОПЫТ. 1 г/кг 37.4±0.05 38.610.10* 38.510.17у 38.1l0.15y

Контр. 37.4±0.11 38.610.16* 39.210.10 39.010.15

-ПС: опыт. 50 37.7±0.11 38.910.12* 37.3l0.07y 37.310.16у

Контр. мг/кг 37.7±0.06 38.910.13* 39.210.07 39.110.06

-ПС: опыт. 100 36.9±0.17 38.610.22* 38.1l0.13y 37.5Ю.17У

Контр. мг/кг 36.9+0.10 38.610.07* 38.9+0.15 38.7+0.13

-ПС: опыт. 200 36,4±0.08 37.910.07* 36.7Ю.09У 36.810,15у

Контр. мг/кг 36.4±0.09 37.9+0.07* 38.110.07 38.010.11

Ф. душистая, (тр.)

- настой: опыт. 1 г/кг ' 37.4±0.01 38.810.14* 38.5±0.19у 38.1+0.13у

Контр. 37.4+0.13 38.8+0.07* 39.2+0.11 39.010.16

-ПС: опыт. 50 37.4+0.16 38.310.18* 37.110.06' 37.110.15у

Komp. мг/кг 37.4±0.П 38.310,15* 38.6+0.08 38.410.40

-ПС: опыт. 100 37.2+0.17 38.010.14* 37.510.14у 37.2+0.21у

Контр. мг/кг 37.2+0.12 38.0+0.07*. 38.410.10 38.2+0.10

-ПС: опыт. 200 36.7±0.14 37.710.05* 36.410.14у 36.610.13'

Контр. мг/кг 36.7+0.15 37.510.07* 37.6+0.13 37.5+0.11

-ПФ: опыт. 50 37.2±0.И 38.510.15* 37.4Ю.08У 37.210:17у

контр. мг/кг 37.2±0.13 38.5+0.09* 38.5+0.12 38.110.11

-ПФ: опыт. 100 37.6+0.11 38.2+0.10* 38.0+0,031 , 37.5+0.11у

контр. мг/кг 37.6±0.12 38.210.09* 38.2+0.05' 38.310.07

-ПФ: опыт. 200 37.7Ю.08 38.210.10* 37.9+0.08у 37.610.06у

ко щр. мг/кг 37.6+0.11 38.2+0.12* 38.2+0.09 38.2+0.08

Ф. душистая, (кор.) ■ ■. ■

- отвар: опыт. 1 г/кг 37.1±0.14 38.5+0.10* 38.210.175 37.110.135

контр. 37.1+0.04 38.510.07* 38.8+0.10 38.710,13

-ПС: опыт. 50 37.3+0.15 38.7+0.12* 38.5+0.09у 37.2+0.07у

контр. мг/кг 37.3±0.14 38.710.14* 39.110.17 38.910.07

-ПС: опыт. 100 37.5+0.09 38.5+0.18* 38.3+0.17у 38.0+0.14у

контр. мг/кг 37.5+0.14 38.510.13* 38.9+0.07 38.8+0.07

-ПС: опыт. 200 37.5+0.14 38.810.14* 38.6 ±0.13' 38.1±0.13у

контр. мг/кг 37.5+0.10 38.8Ю.07* 39.210.16 38.9+0.10

Аспирин опыт. 100 37,010.11 38.010.15* 37.6+0.131 36.710.09'

контр. мг/кг 37,0+0.07 38.010.07* 37.910.09 38.3+0.10

Примечание: *- различия достоверны по сравнению с исходным уровнем;

у - различия достоверны по сравнению с контролем (при Р < 0,05); п - количество крыс в группе.

Mycobacterium smegmatis, Candida, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Bacillus subtilis. Настои и отвары готовили по ГФ-XI в соотношении 1:10, из пектиновых и полифенольных веществ готовили 1% водные растворы, которые в дальнейшем использовали для приготовления из них различных разведений в стерильном и остуженном до 50°С питательном агаре. Содержимое после перемешивания заливали в стерильные чашки Петри и оставляли при комнатной температуре. После застывания агара чашки делили на сектора. Каждый сектор засевали штриховым методом взвесью суточных культур, содержащей 100 млн микробных тел в 1 мл, в количестве 1 ушка бактериологической петли. Контролем являлись посевы тех же бактерий на питательные среды, не содержащие испытуемых препаратов. Посевы инкубировали в термостате при температуре +37°С. Результаты эксперимента учитывали через 24 часа и 48 часов (для грибов рода Candida). При этом регистрировали рост колоний микроорганизмов (сильный, слабый) или его отсутствие. В результате анализа полученных данных оказалось, что наиболее активными являются водные извлечения. Наибольшая чувствительность к настоям травы исследуемых видов фиалок отмечена у Mycobacterium smegmatis (в разведении 1:100), Candida (1:40), Proteus vulgaris (1:100), к настоям травы фиалки полевой и трехцветной - дополнительно у Staphylococcus Жаев (1:40), St. albus (1:40), Pseudomonas aeruginosa (1:40; 1:100), к настоям травы фиалки душистой - дополнительно у Escherichia coli (1:40), Bacillus subtilis (1:40). К отвару корня фиалки душистой наибольшая чувствительность отмечена у Staphylococcus albus (1:100), Mycobacterium smegmatis (1:100), Candida (1:40), Proteus vulgaris (1:100), Bacillus subtilis (1:40). Пектиновые вещества наиболее активны были в отношении Mycobacterium smegmatis.

Ранозаживляющее действие изучали на модели плоскостной кожно-мышечной раны. Животным опытных групп сразу после операции раневую поверхность смачивали настоем или отваром и через 15-20 минут присыпали порошком из исследуемого растения . Операцию проводили ежедневно. У мышей контрольной группы раневую поверхность смачивали дистиллированной водой и наносили тальк. В качестве препарата сравнения использовали настой цветков календулы в сочетании с присыпкой. Животные всех групп находились в стандартных условиях вивария. С целью оценки динамики заживления ран ежедневно определяли площадь раневой поверхности. Полученные данные представлены в таблице 4.

Как следует из данных табл. 4, применение водных извлечений фиалок в сочетании с присыпками оказывают выраженное ранозаживляющее действие, способствуя заживлению ран у мышей в более ранние сроки. На 7 сутки эксперимента при использовании настоя травы фиалки полевой и отвара корня фиалки душистой площадь повреждения была меньше на 13,5% и 10,0% соответственно по сравнению с контролем. Далее, на 14 и 21 сутки эксперимента установили, что у всех животных опытных групп площадь раневого повреждения была достоверно меньше, чем у мышей контрольной группы.

На 24 сутки использования водных извлечений фиалок и календулы отмечалось полное закрытие раневого дефекта, тогда как у мышей контрольной группы оставался процент незажившей раневой поверхности. Таким образом, применение водных извлечений в сочетании с присыпками существенно (примерно на 1 неделю) сокращает время полного заживления ран по сравнению с контролем.

Цитологическое исследование показало, что на 3 сутки в "раневых отпечатках" животных контрольной группы было большое количество нейтрофильных лейкоцитов, при этом в "раневых отпечатках" животных опытных групп количество деструктивных форм лейкоцитов было в среднем на 20% меньше, чем в контроле. На 7 сутки эксперимента в "раневых отпечат

Изучение ранозаживляющего действия растений рода фиалка.

Группа животных Исходные данные 3 день 7 день 14 день 21 день 24 день

мм % мм % мм % мм % мм % мм %

1. Контроль 127,0+4,72 100,0 106,4+8, 52 16,2 53,8+5,82 57,6 23,6±5,07 81,4 6,0+0,01 95,2 0,5+0,01 99,6

2. Календула цветки 110,7±4,35* 100,0 75,7+5,75* 31,6 46,1+6,93 58,3 6,6+2,26* 94,0 0,8+0,01 99,3 100,0

3. Фиалка полевая трава 96,7±6,91* 100,0 41,2+4,20* 57,4 27,9±5,15* 71,1 5,1+1,68* 94,0 1,3+0,72* 98,6 100,0

4. Фиалка душистая трава 97,8±7,17* 100,0 74,8+1,87* 23,5 51,1+5,99 47,7 7,9±1,45* 91,9 0,4+0,24* 99,5 100,0

5. Фиалка душистая корень 915+5,77* 100,0 56,0±4,37* 38,7 29,6+4,86* 67,6 7,2+2,37* 92,1 0,5±0,28* 99,4 100,0

Примечание: * отмечены значения, достоверно отличающиеся от данных контрольной группы (р<0,05; п = 20)

ках" у мышей опытных групп отмечалось в среднем в 2 раза большее количество полибластов макрофагов. На 14 сутки на цитограммах животных опытных групп наблюдались фибробласты и эпителий, тогда как у животных контрольной группы они были в единичном количестве.

Эффект лечения подтвержден также гистологическим изучением парафиновых срезов кожи и подкожной клетчатки. Морфологическое исследование ран животных контрольных групп на 21 сутки наблюдения показало заполнение раны грануляционной тканью, зрелость которой повышалась от середины раны к ее краям, при этом раневой дефект не был полностью эпителизирован. У животных на фоне использования водных извлечений фиалок в гистологических препаратах отмечалась зрелая грануляционная ткань, завершение процесса эпителиза-ции в ране и формирование рубцовой ткани (рис. 4).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что исследуемые извлечения в сочетании с присыпками обладают выраженной фармакотерапевтической эффективностью при раневых повреждениях кожи. Об этом свидетельствует заживление ран в более ранние сроки, а также более полноценная структурная организация новообразовательной ткани по сравнению с контролем.

Результаты исследования влияния полифенольного комплекса на кинетику Ре2+-индуцированной ХЛ свидетельствуют о наличие у него выраженного антиокислительного действия. Как известно, метод хемилюминисцентного анализа позволяет с большей точностью определять интенсивность протекания свободнорадикальных реакций в биологических системах, а также оценить эффективность работы системы ангиоксидантной защиты организма и антирадикальную активность фармакологических средств (Сергеев с соавт., 1992).

Установленная антиокислительная активность полифенольного комплекса является чрезвычайно важной для объяснения молекулярных механизмов ранозаживляющего действия, потому что в основе патогенеза раневых повреждений лежит образование активных форм кислорода и индукция под их влиянием свободно-радикальных реакций, являющихся молекулярным механизмом деструкции мембранных структур клеток (Коган с соавт., 1992). Можно полагать, что ранозаживляющее действие исследуемых извлечений связано с наличием в их составе полифенольного комплекса, обладающего антиокислительной и мембраностимулирующей активностью. В основе ангирадикального действия фенольных соединений, содержащихся в исследуемых извлечениях, видимо, лежит непосредственная реакция ингибитора с образующимися свободными радикалами, поскольку для молекулярной структуры флавоноидных соединений, входящих в состав этих извлечений, как и для классических антиоксидантов типа а-токоферола, характерно наличие ароматических колец с ОН-группами, являющимися акцепторами электронов.

Свидетельством мембраностабилизирующей активности исследуемых извлечений являются также полученные данные об уменьшении сосудистой проницаемости. Можно полагать, что капилляроукрепляюшая активность исследуемых извлечений связана с их способностью блокировать высвобождение гистамина из тучных клеток, поскольку гистамин, являясь "медиатором расширения" микрососудов (Чернух, 1979), способствует усилению экссудации при воспалении. Вероятно, капилляроукрепляющая активность исследуемых извлечений связана с наличием в их составе флавоноидных соединений, в частности, рутина..

Из данных литературы известно, что механизм сосудоукрепляющего действия рутина заключается в его способности ингибировать гиалуронидазу - фермент, осуществляющий гид-

ролиз гиалуроновой кислоты и нарушающей ее связь с белками и тем самым повышающе! проницаемость эндотелия сосудов [Бодоев, 1999].

Кроме того, в реализации ранозаживляющего действия исследуемых фиалок важное зна чение имеет также наличие у них антибактериальной активности, что способствует предотвра щению инфицирования ран и развития гнойного процесса. Это документируется отсутствие» размножающихся микробов на поверхности раневых дефектов в сравнении с контролем, гд< имеются множественные колонии микробов впервые 7 суток наблюдений (рис. 4), а также на личием антибактериальной активности у водных извлечений фиалок.

Рис. 4 Морфологические изменения в коже мышей после экспериментальной травмы

I - Контрольная группа: А - Большое количество микробных колоний в поверхностных отделах кожной раны на 3 сутки; Б - Небольшой поверхностный дермальный рубец на 24 сутки.

II - Лечение водными извлечениями и присылками изучаемых фиалок. А - формирование грануляционной ткани на 7 сутки; Б - зрелая оформленная соединительная ткань на 24 сутки.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные данные свидетельствуют о том, что исследуемые виды фиалок обладают широким спектром фармакологической активности, оказывая отхаркивающее, противовоспалительное, капилляроукрепляющее, анальгезирующее, антипирогенное, антиоксидантное, антибактериальное и стимулирующее регенерацию действие.

Полученные в результате фитохимических и фармакологических исследований растений рода фиалка данные позволяют рекомендовать фиалку душистую в качестве отхаркивающего и противовоспалительного средства наряду с официнальными видами: фиалкой полевой и фиалкой трехцветной.

Исследование водных извлечений изучаемых фиалок в сочетании с присыпками показало, что они оказывают выраженное ранозаживляющее действие при повреждениях кожи, предотвращая инфицирование ран и способствуя их заживлению в более ранние сроки.

Полученные данные по изучению ранозаживляющей активности позволяют рекомендовать применение водных извлечений фиалок в виде аппликаций в качестве средства, предупреждающего инфицирование и ускоряющего заживление ран в стационаре и амбулатории.

ВЫВОДЫ

1. Проведено комплексное фитохимическое изучение надземных органов фиалки трехцветной, фиалки полевой и фиалки душистой и подземных органов фиалки душистой с выделением и установлением структуры фенольных соединений я полисахаридов.

В исследуемых видах фиалки кумарин, скополетин, хлорогеновая кислота изучены впервые; С-гликозиды флавонов: витексин и виценин в фиалке полевой и фиалке душистой изучены впервые.

Впервые выделены и изучены водорастворимые полисахаридные комплексы и пектиновые вещества фиалки полевой и фиалки душистой; определен их качественный и количественный состав.

2. Разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов в траве фиалки полевой и фиалки душистой и суммы полисахаридов в траве фиалки душистой, установлены нормы их содержания.

Разработанные методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы полисахаридов включены в проект ФСП "Фиалки душистой трава".

3. Водные извлечения фиалки душистой в дозе до 9000 мг/кг, полисахаридные комплексы и полифенольные комплексы в дозе 300 мг/кг не обладают острой токсичностью. ЫЗзо в испытанном диапазоне доз не установлена.

4. Выявлено выраженное отхаркивающее действие водных извлечений, полисахаридных и полифенольных комплексов фиалки трехцветной, фиалки полевой и фиалки душистой. Показано, что трава и корень фиалки душистой по отхаркивающему действию не уступают офици-нальным видам - траве фиалки трехцветной и траве фиалки полевой.

5. Установлено противовоспалительное действие исследуемых растений, проявляющееся в угнетении стадий экссудации и пролиферации, влиянии на проницаемость капилляров и сочетающееся с наличием у них обезболивающей, жаропонижающей, антимикробной активности.

6. Впервые установлена антиоксидантная активность полифенольного комплекса травы фиалки душистой.

7. На модели плоскостной раны установлено, что водные извлечения исследуемых фиалок в сочетании с присыпками сухой измельченной травы фиалок обладают выраженной рано-заживляющей активностью, обусловленной снижением микробной обсемененности ран, стимулированием роста грануляционной ткани, ускорением эпителизации и сроков заживления раневых поверхностей.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы;

1. Бубенчикова В.Н., Кочкаров В.И., Дроздова ИЛ, Воротынцева НИ., Бубенчиков P.A., Гвоздиков В.В. Углеводы некоторых лекарственных растений // Современные тенденции развития фармации. - Самара, 1999. - С. 98-99.

2. Бубенчиков P.A., Бубенчикова В.Н. Фитотерапия алллергодерматозов // Актуальные проблемы медицины и фармации / Материалы 64-й итоговой конференции молодых ученых и студентов. - Курск: КГМУ, 1999. - С. 278-279.

3. Бубенчиков P.A., Печенин О.Д. Антибактериальная активность извлечений из фиалки душистой // Актуальные проблемы медицины и фармации / Материалы 65-й итоговой конференции молодых ученых и студентов. - Курск: КГМУ, 2000. - С. 11-12.

4. Бубенчиков P.A., Хасси Дрисс. Полисахариды и пектиновые вещества фиалки душистой // Актуальные проблемы медицины и фармации / Материалы 65-й итоговой конференции молодых ученых и студентов. - Курск: КГМУ, 2000. - С. 310-311.

5. Бубенчикова В Н., Дроздова И.Л., Кочкаров В.И., Бубенчиков P.A. Антиоксидантная активность некоторых представителей родов просвирник и фиалка // Актуальные проблемы медицины и фармации / Сборник научных трудов, посвященный 65-летию КГМУ. -Курск: КШУ, 2000. - С. 359-360.

6. Бубенчиков A.A., Гримальская С И., Кочкаров В.И., Бубенчиков P.A. Качественная оценка лекарственных растений Курской области // Флора и растительность северной лесостепи / Материалы научной конференции. - Тула, 2000. - С. 52-53.

7. Бубенчикова В.Н., Дроздова И.Л, Воротынцева Н.И., Печенин О.Д., Бубенчиков P.A., Гончаров Н.Ф., Кочкаров В, И. Фармакологическая активность некоторых представителей родов земляника, просвирник, фиалка, шток-роза // Актуальные проблемы теории и практики фармации / Сборник научных статей, посвященный 25-летиюАГМУ. - Барнаул, 2000. - С. 228-229.

8. Покровский М.В., Бубенчиков P.A., Дроздова И.Л. Противовоспалительная активность растений рода фиалка // Человек и его здоровье / Сборник научных работ. Вып. 3. - Курск, 2000. - С. 333-334.

9. Бубенчиков P.A. Фотохимическое изучение фиалки душистой - 26 -// Человек и его здоровье / Сборник научных работ. Вып. 3. -Курск, 2000. - С. 335-336,

10. Бубенчикова В.Н., Дроздова И.Л., Покровский М.В., Бубенчиков P.A., Печенин О.Д., Кочкаров В.И. Отхаркивающая и антимикробная активность некоторых представителей флоры Центрального Черноземья // VIII Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" / Тезисы докладов. - Москва, 2001. - С. 550.

П.Покровский М.В., Силина Л.В., Бубенчиков P.A., КочкаровВ.И. Оценка фармакологической активности фиалки душистой // VIII Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" / Тезисы докладов. - Москва, 2001. - С. 605.

12. Бубенчикова В.Н., Дроздова И.Л., Бубенчиков Р.А, Кочкаров В.И., Воротынцева Н.И., Гончаров Н.Ф. Растения родов мальва, шток-роза, фиалка, земляника - перспективный источник лекарственных средств // МП Российский национальный конгресс "Человек и лекарство" / Тезисы докладов. - Москва, 2001. - С. 685-686.

13. Бубенчиков P.A. Аминокислотный состав растений рода фиалка // Актуальные проблемы медицины и фармации / Материалы 66-й итоговой конференции студентов и молодых ученых. - Курск, 2001. -С. 303-304.

14. Бубенчиков P.A. Изучение ранозаживляющего действия фиалки душистой // Актуальные проблемы медицины и фармации / Материалы 6б-й итоговой конференции студентов и молодых ученых. - Курск, 2001. - С. 304-305.

15. Бубенчиков P.A., Воротынцева Н.И., Дроздова И.Л. Фенолкарбоновые кислоты представителей родов мальва, земляника, фиалка// Актуальные проблемы медицины и фармации / Материалы 66-й итоговой конференции студентов и молодых ученых. - Курск, 2001. - С. 305-306.

16. Бубенчиков P.A. Минеральный состав растений рода фиалка// Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики / Материалы научной конференции, посвященной 35-летию фармацевтического факультета Курского государственного медицинского университета. - Курск: КГМУ, 2001. - С. 198-199.

17. Покровский М.В., Бубенчиков P.A., Дроздова И.Л., Кочкаров В.И. Влияние растений рода фиалка на проницаемость капилляров кожи при воспалении II Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики / Материалы научной конференции, посвященной 35-летию фармацевтического факультета Курского государственного медицинского университета. - Курск: КГМУ, 2001. - С. 261-262.

18. Бубенчиков P.A., Дроздова И.Л., Гончаров Н.Ф. Изучение пектиновых веществ растений рода фиалка и шток-роза // Актуальные проблемы медицины и фармации. I Сборник научных трудов. - Курск: КГМУ, 2001. - С. 47-48.

Автор выражает искреннюю благодарность: • доктору химических наук, профессору, академику инженерной академии Украины Василию Ивановичу Литвиненко за консультативную помощь при выполнении настоящей работы.

Сдано в набор 19.04.2002 г. Подписано в печать 19.04.2002 г. Формат 60x84 1/16. Бумага Lomond. Объем 1,0 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Заказ № 57.

Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3 Лицензия ЛР 020862 от 30.04.99 г.